JPH05504409A

JPH05504409A - 疾病の診断および治療

Info

Publication number: JPH05504409A
Application number: JP91505037A
Authority: JP
Inventors: アーバン，ジェームス　エル．; ザラー，デニス　エム．; フッド，ルロイ　イー．; ビール，スティーブンス　エス．; コンキャノン，パトリック
Original assignee: カリフォルニアインスティチュートオブテクノロジー
Priority date: 1989-12-29
Filing date: 1990-12-31
Publication date: 1993-07-08
Also published as: EP0506893A1; EP0506893A4; WO1991009623A1; AU7347091A; CA2072356A1; AU660606B2; KR920703095A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

疾病の診断および治療本件は、米国特許出願番号第０７１５１７，３８０号、１９９０年５月１日出願、の一部継続出願であり、同出願はさらに米国特許出願番号第０７／４５９，０６５号、１９８９年１２月２９日出願、の一部継続出願である。第０７／４５９，０６５号は、米国特許出願番号第０７／２２９，２８８号、１９８８年８月５日出願、の一部継続出願であり、同出願はさらに米国特許出願番号第０７／１７６．７０６号、１９８８年４月１日出願、の一部継続出願で、これはさらに米国特許出願番号第０６／７２６，５０２号、１９８５年４月２４日出願、現在米国特許第４，８８６゜７４３号の一部継続出願である。これにより、上記出願はいずれも、その全体が、参照により編入される。本編に記載する発明は、米国保健福祉省、国立衛生研究所からの補助金のもとて行われた研究の進行中に成された。米国政府は本発明に於て一定の権利を存する。技術分野本発明は、疾病の素因、発病、および進行を診断する方法に関する。また、本発明は、疾病を治療する方法に関する。さらに本発明は、このような疾病の診断および治療に有用な試薬に関する。背景技術ヒトＴ細胞レセプターβ鎖（ＴＣＲβ）遺伝子座は、β鎖をコ−卜する最初のｃＤＮＡのクローニング（Ｙａｎａｇｉ　Ｙ、ら、（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ　３０８．　１４５−１４９；　Ｈｅｄｒｉｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ　３０８．　１４９−１５２）以来、大々的に研究が進められてきた。この遺伝子座は、定常（Ｃ）領域遺伝子セグメントとともに、体細胞再構成に関わる可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）、および重合（Ｊ）遺伝子セグメントを含有する遺伝子複合体であり、Ｔ細胞レセプターのβ鎖をコードする（Ｃｈｉｅｎら、（１９８４）　Ｎａｔｕｒｅ　３０９．３２２−３２６）　ａ　ｉｎ　５ｉｔｕ　ハイブリッド形成によると、ＴＣＲβ遺伝子座は７ｑ３５に存在する（　ｌ５ｏｂｅら、（１９８５）　５ｃｉｅｎｃｅ　２２８．５８０　）　、現在の推定によれば、この複合体は６００ｋｂ以上におよび、７０から８０の可変部セグメントを含有する（　Ｃｏｎｃａｎｎｏｎら、（１９８６）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ。Ａ、　８３．６５９８−６６０２；　Ｔｉｌｌｉｎｇｈａｓｔら、　（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３３．８７９−８８３；　Ｋｉｍｕｒａら、（１９８７）　Ｅｕｒ、Ｊ、［ｍｍｕｎｏｌ、１７．　３７５−３８３＋　Ｌａｉら、（１９８８）　Ｎａｔｕｒｅ　３３１．５４３−５４６）　。これらのＶ領域遺伝子は、二つの縦列にならんだ領域に隣接し、この三領域はいずれも６または７個のＪ領域遺伝子セグメントからなるクラスターによって隔てられた一つのＤ遺伝子および一つのＣ遺伝子セグメントを包含する（Ｔｕｎｎａｃｌｉｆｆｅ　ら、（１９８５）　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、１３．　６６５１−６６６１；　Ｔｏｙｏｎａｇａ　ら、　（１９８５）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８２．　８６２４−８６２８）。Ｖ、　Ｄ、およびＪ遺伝子セグメントのＤＮＡをうまく再配列した後、翻訳されたβ鎖ポリペプチドとＴ細胞レセプターα鎖とを対とし、Ｔ細胞表面で発現させることかできる（Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇらの総説、（１９８６）　Ａｎｎｕ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４．５２９−５９１）。次にＴ細胞レセプターは、自己主要組織適合性分子との関係に於て、抗原認識に作用する（Ｄｅｍｂｉｃら、（＋９８６）　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｔｏｄａｙ　７゜３０８）。不適当な免疫調節は自己免疫を助長するので、Ｔ細胞による抗原および主要組織適合性分子の相互認識は特異的でなければならず、慎重に制御されなければならない。Ｔ細胞は、免疫系に於けるエフェクターメカニズムの分化と調節に枢要な役割を担う（Ｐａｕｌら、（１９７７）　５ｃｉｅｎｃｅ　１９５．１２９３−１３００）。いくつかの研究機関が、自己免疫、アレルギー、およびある種の免疫不全のような、不適当な免疫調節か存在すると思われる疾病の研究を行い、このような疾病の病因にＴ細胞を結びつけている。正常および疾病集団に於けるαおよび β鎖の生殖系列ＤＮＡ多型の研究によって、最近このような理論が検証された（Ｋｕｍａｒらの総説、（１９８９）　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　［ｍｍｕｎｏｌ、　７．６５７−６８２）　ｏ特異的なＴＣＲβ制限断片長多型（ＲＦＬＰ）と、インスリン依存性糖尿病（Ｈｏｏｖｅｒら、（１９８６）　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂ、　Ｓｙｍｐ、　Ｑｕａｎｔ、　Ｂｉｏｌ、５１．　８０３−８０８；　Ｍｉｌｗａｒｄら、（１９８７）　Ｃ１１ｎ、Ｅｘｐ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、７０゜１５２−１５７；　Ｉｔｏら、（１９８８）　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　３７．　１６３３−１６３６）　、グレーゲス病（Ｄｅｍａｉｎｅら、（１９８７）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏ、　ａｎｄ　Ｍｅｔａｂ、　６５．６４３−６４６；　Ｉｔｏら、（１９８９）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　Ｍｅｔａｂ、６９．　１００−１０４）　、膜性腎症（Ｄｅｍａｉｎｅら、（１９８８）　Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ　２７．１９−２３）　、およびリウマチ様関節炎（Ｇａｏら、（１９８８）　Ａｍ、　Ｊ、　Ｍｅｄ。８５、１４−１６）　、との間に正の相関が報告されている。このような正の相関はいずれも、集団間のＴＣＲβ　ＲＦＬＰ頻度の比較に基づいている。上記研究の各々に於て、ＲＦＬＰは、β鎖に関わる二つのＣ遺伝子セグメントのうちの一つと相関することが明らかになった。ある研究機関は、■領域遺伝子に連結しているＲＦＬＰと自己免疫性甲状腺機能低下症との相関を、正常集団よりむしろ疾病集団と比較して報告している（　Ｗｅｅ　ｔｍａｎら、（１９８７）　Ｈｕｍａｎ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　２０．１６７−１７２）。この結論の妥当性、およびこの結論と、正常集団または甲状腺機能低下症のリスクのある集団に於ける上記相関の検出との関連性は疑わしい。 α−可変またはα一定常鎖セグメントのいずれかに連結しているＲＦＬＰと、多発硬化症（ＭＳ）に対する罹病感受性との間の相関も報告されている（ＭａｒｔｅｌＩ　Ｎ、ら、（１９８７）　Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ、　Ｓｃ。Ｐａｒｉｓ　ｔ、　３０４．５ｅｒｉｅｓ　ＩＩｌ、　ｎｏ、　５．１０５−１１０）。また、この研究機関は、ＭＳ患者のＴＣＡＲのβ鎖におけるＲＦＬＰの可能性を調へたが、対照検体と疾病検体との間に相関関係は見いだされなかった。開裂されて可変および定常部プローブを生じる同一のα−１ＪｌｃＤＮＡプローブを用いた、ヒトＴ細胞レセプターα鎖のＲＦＬＰに関する相互に独立した研究に基づいて、上記α鎖ＲＦＬＰは可変部よりも定常部に連結されると考えられる。Ｈｏｏｖｅｒら、（＋９８５）　Ｊ、　ＥＸｐ、　Ｍｅｄ、１６２．　１０８７−１０９２参照。別の研究機関は、同様の実験を、様々な制限エンドヌクレアーゼおよびＭａｒｔｅｌｌらが使用したのと見かけ上回−のＴＣＲβプローブを用いて行った（Ｏｋｓｅｎｂｅｒｇ、　Ｊ、　Ｒ，ら、（１９８８）　Ｈｕｍａｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　２２．１１１−１２１）　、この研究機関は、ＭＳと対照グループの間で、ＴＣＡＲ遺伝子に関する冬型の頻度に、有意な相違が見られないことを報告した。最近、ある研究機関は、様々なＲＦＬＰによって定義される、ＭＳ患者に於けるＴ細胞レセプターβ鎖ハブロタイブを報告した（Ｃｉｕｌｌａら、（１９８８）　Ａｎｎ、　Ｎ、　Ｙ、　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、５４０．　２７１−２７６）。報告によれば、二つのハブロタイブは、調へたＭＳグループにおいて、過度に代表される傾向かあった。しかしなから、著者は、その結果は統計的に有意ではないと結論付けた。ＭＳの病因は不明ではあるか（ＭｃＦａｒｌｉｎら、（１９８２）　Ｎ、　Ｅｎｇｌ。Ｊ、　Ｍｅｄ、　３０７．１１８３−１１８８および１２４６−１２５１）　、環境的要因（Ｃ。ｏｋら、（１９８０）　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ　３０（２）、８０−９１；　Ｋｕｒｔｚｋｅ　（１９８０）　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ　３０．６ｌ−７９）と、遺伝的要因（Ｓｐｉｅｌｍａｎら、（１９８２）　Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ、　Ｒｅｖ、４．　４５−６５；　ＭｃＦａｒｌａｎｄら、（１９８４）　’Ａｎｎ、　ＮＹ　Ａｃｄ、Ｓｃｉ、４３６、　１１８−１２４；　Ｅｂｅｒｓら、　（１９８６）　Ｎ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、３１５．　１６３８−１６４２）の両者が関与し、さらに免疫機構が病因に関係すると考えられる。家系に関する研究（Ｓｐｉｅｌｍａｎら、＜１９８２）上記）、特に双子に関する研究（ＭｃＦａｒｌａｎｄら、（１９８４）上記；　ＥｂｅｒＳら、（１９８６）上記）は、２個またはそれ以上の遺伝子がＭＳに対する罹病感受性に関与するという仮説に帰着した。以前の遺伝的研究は、Ｔ　ＩＪンパ球によって外来抗原とともに認識されるＨＬＡ分子をコードする遺伝子に集中していた（　Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇらの総説、（１９８６）　Ａｎｎｕ。Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４．５２９−５９１）　ｏさらに近年になると、この認識過程に関わるＴ細胞抗原レセプター（ＴＣＡＲ）分子の定義およびこれらの構造をコードする遺伝子に関して、かなりの進歩がみられた（Ｓｉｍら、（１９８４）　Ｎａｔｕｒｅ　３１２．７７１−７７５；　Ｙａｎａｇｉら、（１９８４）　Ｎａｔｕｒｅ　３０８．　１４５−１４９；　Ｉｋｕｔａら、（１９８５）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８２．　７７０１−７７０５；　Ｙｏｓｈｉｋａｉ　ら、（１９８５）　Ｎａｔｕｒｅ　３１６゜８３７−８４０；　Ｃｏｎｃａｎｎｏｎ　ら、（１９８６）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ。Ａ、８３．　６５９８−６６０２；　Ｋｉｍｕｒａら、（１９８６）　Ｊ、Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、１６４．　７３９−７５０；　Ｋｉｍｕｒａら、（１９８７）　Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１７．　３７５−３８３；　Ｔｉｌｔｉｎｇｈａｓ　ｔら、（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３３．　８７９−８８３＋　Ｂｅａｌｌら、（１９８７）　Ｊ、［ｍｍｕｎｏｌ、１３９．　１３２０−１３２５　）　。ＴＣＲ遺伝子は、ＭＳや他の免疫関与の疾患への罹病感受性に寄与する遺伝的要因の候補となり得る。実験的脱髄疾患とＴＣＰ遺伝子との相関を確認した動物での研究から、このような可能性か支持されている。例えば、慢性−再発性実験的脳を髄炎（ＥＡＥ　）　（Ｍｏｋｈｔａｒｉａｎら、（１９８４）　Ｎａｔｕｒｅ　３０９．３５６−３５８）　、およびサイラーのネズミ科脳を髄炎ウィルス（ＴＭＥＶ）による脱髄疾患（Ｌｉｐｔｏｎ　（１９７５）　Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎ、１１．　１１４７−１１５５；　Ｍｅｌｖｏｌｄ　ら、（１９８７）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏ！、　１３８．１４２９−１４３３）を、ＴＣＲのＶβ遺伝子を約５０％欠失したＳＪＬマウスに誘発することかできる（　Ｂｅｈ　ｌｋｅら、（１９８５）　５ｃｉｅｎｃｅ　２２９．　５６６−５７０；　Ｂｅｈｌｋｅら、（１９８６）　Ｐｒｏｃ。Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｌｌ、Ｓ、Ａ、　８３．７６７−７７１ＨＬａｉら、Ｃ１９８７）上記）。さらに、ＴＭＥＶ誘発脱髄疾患に対する特異的な罹病感受性は、ＴＣＲの定常部遺伝子の近傍にマツプされていた（Ｍｅｌｖｏｌｄら、（１９８７）上記）。遺伝的背景および環境的要因、あるいはウィルスかＭＳの病因に関わっていると考えられている（Ｓｐｉｅｌｍａｎら、（１９８２）上記。ＭａＦａｒｌａｎｄら、（１９８４）上記；　Ｅｂｅｒｓら、（１９８６）上記）。ＭＳの病因への有意な遺伝的関与は、二卵性双生児よりも一卵性双生児に於て一致度が高いことを示す双子の研究によって支持された（ＭＣＦａｒｉａｎｄら、（１９８４）　上記：　Ｅｂｅｒｓら、（＋９８６）　上記）。しかしながら、−卵性双生児に於ける一致度が１００％よりもかなり低いため、この疾病は完全には遺伝的に支配されているわけではない。白人ＭＳ集団でＤＲ２の発現か増加するか、このことは、ＨＬＡ複合体をコードする遺伝子に、ある遺伝的要素か存在する可能性を示す（Ｔｉｗａｒｉら、（１９８０）　Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　１９８０　Ｐ、　Ｔｅｒａｓｋｉ編、ＵＣＬＡ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｔｙｐｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｌｏｓ　Ａｎｇｅｌｅｓ、　ＣＡ、　６８７−６９２；　Ｂａｔｃｈｅｌｏｒ　（１９７８）　Ｂｒｉ、　Ｍｅｄ、　Ｂｕｌｌ、　３４．２７９−２８４）。別のＭＳ感受性遺伝子の存在が当然のこととして仮定され、さらに最近、ＴＣＰ遺伝子に於ける遺伝的変異かＭＳの病因に一定の役割を演することか示唆された（　Ｇｏｏｄｍａｎら、（１９８７）　ＣｕｒｒｅｎｔＮｅｕｒｏｌｏｇｙ、　Ｓ、　Ｈ，Ａｐｐｅ１編、Ｙｅａｒ　Ｂｏｏｋ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ。Ｃｈｉｃａｇｏ、　ＩＬ、　９ｌ−１２７）。上記の参照文献は、本件の出願日に先立ってそれらをもっばら開示するために提示されるのであって、先行の発明や早く提出された出願に基づく優先権によって、本発明者か上記の開示に先んじる権利はないとの承認として、本文中の何物も解釈されるへきでない。上述に基づいて、ＭＳのような疾病を診断し治療するための方法および試薬の必要性が存在することは明白である。したがって、多発硬化症のような疾病に対する素因を診断するための方法および試薬を提供することが本発明の目的である。さらに、このような疾病の発症および進行を診断するための方法および試薬を提供することも本発明の目的である。なおその上に、疾病治療のための方法および試薬を提供することも本発明の目的である。発明の要約上述の目的にしたがって、本発明は疾病に対する素因を診断するための方法を包含する。このような方法は、ヒトなとの動物からＤＮＡ被験試料を得て、その試料中に疾病に関する感受性遺伝子と相関性のある標的ＤＮＡ配列を検出することを包含する。標的ＤＮＡ配列は、Ｔ細胞抗原レセプターβ鎖の可変部をコートするゲノムＤＮＡ配列の内部またはそのきわめて近傍に含有されるＤＮＡ配列を含んでなる。本発明の特別の実施態様に於て、標的ＤＮＡ配列は、Ｔ細胞抗原レセプターβ鎖の−またはそれ以上のＶβセグメントに連結している制限断片長多型（ＲＦＬＰ）を含んてなる。このようなＲＦＬＰの検出は、疾病に関する第一の感受性遺伝子が個体のゲノムに存在することを示す。Ｔ細胞抗原レセプター鎖に関わる第一の標的ＤＮＡ配列の検出は、異なるＴ細胞抗原レセプター鎖の可変部に関わる第二の標的ＤＮＡ配列の検出と組み合わせて行うことができる。さらに、このような標的ＤＮＡ配列の検出は、例えばβおよびα鎖ハブロタイブを明示するかも知れないか、その個体の特定の疾病に関する素因をよりよく示すものとして、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ハブロタイブの決定と組み合わせて行うことかできる。本発明は、また、疾病の発病を診断し、その経過を追跡する方法を包含する。このような方法は、ヒトなどの動物からＴ細胞核酸試料を得て、そのような試料中に、疾病と相関する標的核酸配列を検出することを包含する。Ｔ細胞抗原レセプターの可変部をコードする再配列されたゲノムＤＮＡ配列の内部またはそのきわめて近傍に含まれるＤＮＡ配列に対応するＤＮＡまたはＲＮＡから、第一の標的核酸配列か形成される。二のような可変部はＴ細胞抗原レセプターのαおよびβ 可変部を包含する。特定のＴ細胞抗原レセプター鎖の特異的可変部または遺伝子セグメントに関する第一の標的核酸配列の検出は、同じ疾病に関連する第二の標的核酸配列の検出と組み合わせて行うことかできる。この第二の標的核酸配列も、別のＴ細胞抗原レセプター鎖の特異的可変部または遺伝子セグメントをコードする再配列されたゲノムＤＮＡ配列の内部またはそのきわめて近傍に含まれるＤＮＡ配列に対応するＲＮＡまたはＤＮＡから形成される。また、疾病の発病を診断し、その経過を追跡する方法は、ヒトなどの動物からＴ細胞抗原レセプターを含有する適当な試料を得て、疾病と相関する第一の標的ポリペプチド配列をそのようなＴ細胞レセプター試料中に検出することを包含する。このポリペプチド配列はＴ細胞抗原レセプターの可変部内に含まれる。このような可変部は、Ｔ細胞抗原レセプターのαおよびβ可変部を包含する。上記方法に関してと同様に、第一の標的ポリペプチド配列のこのような検出は、やはりその疾病と相関する第二の標的ポリペプチド配列の検出と組み合わせることができ、ここにおいて、第二のポリペプチド配列は、疾病と相関する別のＴ細胞抗原レセプターの特異的可変部を含んでなる。疾病と相関する標的核酸およびポリペプチド配列は、例えば、特異的αおよびβ 可変部またはセグメントを包含するが、その検出は、疾病の発病または経過の更なる指標として、個体のＭＭＣ発現の決定と組み合わせて行うことかできる。また本発明は、疾病を治療するための方法および試薬を包含する。このような方法に於て、疾病は、特異的可変部をＴ細胞クローンのＴ細胞レセプターに含有する少なくとも一つのＴ細胞クローンと相関する。この方法は、Ｔ細胞レセプターの特異的可変部と反応する少なくとも一種の抗体を用いて、ヒトなとの病んだ動物を治療することを包含する。さらに、本発明は、Ｔ細胞クローンのＴ細胞レセプター内に特異的可変部または特異的可変セグメントを含有する、少なくとも一種のＴ細胞クローンと相関する疾病を、検出し治療するための抗体を包含する。図面の簡単な説明図１はＢＩＯ，ＰＬマウス中の四つの型のミニリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）Ｔ−細胞レセプターの略図である。これらの型はα及びβＴ−細胞レセしター鎖の組み合わせに基いて形成される。バーは左側にα鎖そして右側にβ鎖を育するＴ−細胞レセプターへテロダイマーを表す。夫々のバー以外の数は、夫々の変化を暗号化する完全遺伝子を構成する可変（Ｖ）遺伝子セグメント及びジョイニング（Ｊ）遺伝子セグメント（上部でＶ、下部でＪ）を示す（β鎖に関する多様性遺伝子セグメントは示されていない）。異なる陰影を有する円は抗原の微細な特異性の異なるプロフィールを有するＴ−細胞を表す。夫々の型の下の数は夫々のカテゴリーに属することか測定されたＴ−細胞の合計数及び％を示す。図２はヒトβ鎖ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を同定する。ヌクレオチド配列か決定されたクローンか左側に示される。ＰＬと称されるクローンか末梢リンパ球ｃＤＮＡライブラリーから誘導された。樹立Ｔ−細胞系から誘導されたその他のクローンがＶβＹＴ３５以外の細胞系の名称で標識され、これはＭＯＬＴ−３細胞系（Ｅｙａｎａｇｉ（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ３０８、１４５−１４９）から誘導される。クローンＡＴＬ２１（ｌｋｕｔａら、（＋９８５）Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　８２７７０１−７７０５）はゲノム配列がら誘導され、そしてイントロンかこのアラインメント中で修正された。ＰＬ２．１３、ＰＬ３．９及びＰＬ、　５．１０　＋、：相同の付加的な生殖系列ｖβ遺伝子セグメントか発表されたが、ここでは示されていない（Ｉｋｕｒａ。上記の文献）。これらの配列は、図３のように、順序Ｖβ１−■β１５て列記される。図３はネズミ及びヒトの■β遺伝子のアミノ酸配列である。ヒト（ｈ）及びネズミ（ｍ）のＶβ遺伝子セグメントヌクレオチド配列が翻訳され、並べられてアミノ酸レベルで相同性を最大にした。７５％のレベルで保存されたアミノ酸が星印により示されている。Ｖβ２．１及び■β２．２はリーダー配列のみを異にし、それ故この比較では同一であることが明らかである。アミノ酸は１文字コードにより同定される。図４はＴ−細胞レセブター■β遺伝子セグメントサブファミリーｌ〜１４に関する最も普通の制限パターンを示すサザンプロット分析である。二つの異なるダイジェストが夫々のサブファミリーに関して示されている。垂直の線は個々のサブファミリー内の遺伝子セグメントの推定数を示す。幾つかの場合には、サブファミリーのサイズの推定が、示されていない付加的なハイブリダイゼーションデータに基いてなされた。サブファミリーＶβ１２及び■β１３はヌクレオチド配列データにより示されるように共通の員を共有することか明らかである。図５は多形のＶβ及びＣβ対立遺伝子の分離を示す。夫々の染色体は夫々上部から下部への順序で■β８、■β１１及びＣβ遺伝子座で検出された対立遺伝子を示す。図示された染色体の下の数は被験体同定のためである。図６はヒトの■β８及び■β１１遺伝子座にある対立遺伝子の間の連鎖不平衡を示す。サザンプロットは夫々の遺伝子座に於けるホモ接合体及びヘテロ接合体の両方に関するハイブリダイゼーションパターンを示す。対立遺伝子頻度が左側に示されている。フラグメントサイズが右側に示されている。■β８、■β１１及びＣβ遺伝子座で遺伝子型を決定することにより生じた５２の無関係の個体の集団中のハブロタイブの分布が、その図の下部に示されている。予想されるハブロタイブの分布か対立遺伝子頻度から計算された。図７は不ズミ■β遺伝子座に関する制限酵素地図を示す。図８ＡはＭＶＰペプチドｌ−９８Ａｃに特異的な７０のハイブリドーマから誘導されたＴＣＲαｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す。図８Ｂは図８Ａからの二つの異なる■α配列の翻訳されたタンパク質配列を示す。図９はＭＢＰペプチド１−９ＮＡＣに特異的なＴ−細胞による■β８鎖の細胞表面発現並びにＦ２３．１抗体のｉ、　ｐ、注射に続くｖβ８とリンパ球の生体内排除を示す。パネルＡ−Ｃで、Ｔ、　ＰＬ１７２．１０及びＰＬ２１２．６並びにＴ、クローン２Ｃ６が、フローサイトメトリの定量的な蛍光を使用してＴ−細胞表面発現に関して分析された。Ｔ−細胞が全てフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）と接合されたヤギ抗マウ１ｇＧ１：より２３．１（抗Ｖβ８）またｆｔ５００．Ａ、Ａ２（７）モ／　クローナル抗体で染色された。ＰＬ１７２．１０細胞及び２Ｃ６Ｔ、細胞のみか表面■β８鎖を発現する（ＰＬ２１２．６細胞は■β１３遺伝子セグメントを発現する）。バックグラウンド蛍光（Ｂｋｇｒｄ）はＦＩＴＣ抗体単独による染色を表す。夫々のプロットは２０．０００個の細胞の分析を表す。図９のパネルＤ及びＥては、ＢＩＯ，ＰＬマウスか５００μｇのプロティンＡ精製Ｆ２３．１抗体及び０．５ｍｌの通常の生理食塩水でｉ、　ｐ、注射された。牌臓細胞か注射（Ｄ）の０時間後、２４時間後及び７２時間後に取り出され、そして注射（Ｅ）の５日後及び７日後に取り出された。その後、それらはナイロンウールに通され、Ｆ２３．１抗体及びＦＩＴＣと接合されたヤギ抗マウスＩｇＧで染色され、そして蛍光フローサイトメトリにより分析された。夫々のプロットは２０．０００個の細胞の分析を表す。図１Ｏは抗ＴＣＲモノクローナル抗体によるＭＢＰ応答の抑制を示す。図１１はＥＡＥマウスの生体内抗体注射に続く■β８．２Ｔ−細胞のダウンモジュレーションを示すヒストグラムである。図１２はＭＢＰに対するＥＡＥマウスの応答に関する生体内モノクローナル抗体処理の効果を示す。図１３はＥＡＥを有する場合及びＥＡＥを育しない場合のＭＢＰに対する応答及びモノクローナル抗体で処理されたマウスの比較を示す。図１４はＥＡＥマウスのＭＢＰ誘発麻痺の反転を生じる抗■βモノクローナル抗体による処理を示す。図１５は１００の正常な個体と比較した３８のコーカサスの無関係のＭＳ患者の対立遺伝子頻度を示す。夫々の遺伝子座に於けるハイブリダイゼーションパターンがホモ接合体及びヘテロ接合体の両方に関してサザンプロットにより示される。対立遺伝子頻度か夫々のパターンの左側に示され、フラグメントサイズか右側に示される。ＭＳ患者の対立遺伝子頻度か最初に示され、続いて括弧中の正常な個体について測定された対立遺伝子頻度が示される。アステリスク（ネ）は不変バンドを示す。詳細な説明Ｔ−細胞は、免疫系を伴うヒトの疾患、例えば、自己免疫疾患に重要な役割を果たす。自己免疫疾患では、Ｔ−細胞は生体それ自体を異物として正しく認識しない原因的物質として作用すると考えられる。Ｔ−細胞の作用は、Ｔ−細胞表面に存在する細胞抗原レセプターによる抗原認識により媒介される。これらのＴ−細胞抗原レセブタ−（ＴＣＡＲＸ　ＬばしばＴ−細胞レセプターまたはＴＣＲとも称される）は夫々異なる型のＴ−細胞クローンに対して特異的であり、特別な細胞系を特異的に同定するのに使用し得る。本発明は、特定の■β遺伝子セグメントに連鎖された成る制限断片長子型（ＲＦＬＰ）が多発硬化症の少なくとも一つの推定感受性遺伝子と連鎖不均衡であるという発見に一部基くものである。また、本発明は、ＴＣＡＲのα鎖及びβ鎖の両方中に特定の可変部を含むＴ−細胞のクローナル集団が多発硬化症のマウスモデル系中に存在するという発見に一部基くものである。図１を参照のこと。このマウスモデル系では、ネズミ実験脳を髄炎（ＥＡＥ）に関連するＴ−細胞のクローナル集団のＴＣＡＲ中の特別なＶβセグメントに特異的なモノクローナル抗体による治療はその疾患の発生率を減少した。この研究は１９８８年８月８日に出願された係属中の米国特許出願第２２９、２８８号明細書に更に詳しく記載されており、この特許は特に参考として本明細書に含まれる。また、本発明は、その疾患で同定されたその他のＴ−細胞クローンのＴＣＡＲ中に含まれた異なるＶβセグメントに特異的な第二のモノクローナル抗体にょるＥＡＥの治療かＥＡＥの誘発に対する殆と完全な保護をもたらすという発見に基くものである。また、この治療は病気の動物で麻痺の著しい反転を生じた。以上に加えて、本発明は、多発硬化症感受性遺伝子が■β１１に対して動原体のヒトゲノム中に配置され、そして同様にＶβ８と■β１１の間に配置されるという発見に基くものである。Ｖβ８とＶβ１１の間に少なくとも６個のＴＣＡＲＶ β遺伝子がある（Ｌａｉら、（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３１．５４３−５４６）ので、この染色体領域中でＶβセグメントを暗号化する遺伝子は多発硬化症感受性遺伝子であると判明されると考えられる。マウスのＥＡＥに於ける特定のＴ −細胞可変部を含むクローナルニー細胞の発見及びヒトのＶβ遺伝子座中の多発硬化症感受性遺伝子の局在化に関する上記の発見が与えられたとすると、多発硬化症の如き疾患はまた特定のＴＣＡＲを含むＴ−細胞のクローナル集団により一部ひき起こされると考えられる。モノクローナル抗体の投与によるマウスのＥＡＥを防止することの成功と、多重抗体がＥＡＥで冒されたマウスに投与される場合に観察される麻痺のかなりの反転が与えられたとすると、同様の試薬がヒトのようなその他の動物の疾患を診断し、治療するのに使用し得ると考えられる。Ｔ−細胞を伴うあらゆる疾患がＴＣＡＲＣＡ相関関係を同定するのに研究し得る。次に、これらの相関関係は診断法、治療法または疾患監視法に使用し得る。関係がある疾患は、自己免疫疾患、腫瘍性疾患、感染症、過敏症、移植及び移植片対宿主疾患、及び変性神経系疾患を含むが、これらに限定されない。自己免疫疾患は、関節炎、例えば、慢性関節リウマチ、■型糖尿病、若年型糖尿病、多発硬化症、甲状腺炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、シエーグレン症候群、バセドウ病、アジラン病、グツドバスチャー症候群、強皮症、皮膚筋炎、粘液水腫、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、及び自己免疫性溶血性貧血を含むが、これらに限定されない。腫瘍性疾患は、リンパ増殖性疾患、例えば、白血病、リンパ腫、非ホジキン（Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ）リンパ腫、及びホジキンリンパ腫、並びに癌、例えば、胸、結腸、肺、肝臓、膵臓、等の癌を含むか、これらに限定されない。感染症はＨＩＶ　、　ＨＳＶ　、ＥＢＶ、ＣＭＶの如きウィルスによりひき起こされるウィルス感染症、インフルエンザ、Ａ型、Ｂ型、またはＣ型肝炎；酵母カンジダ属によりひき起こされるような真菌性感染症：住血吸虫、糸状虫、線虫、旋毛虫または原生動物によりひき起こされるような寄生虫感染症、例えば、トリパノゾーマがひき起こす睡眠障害、マラリア原虫かひき起こすマラリアまたはリーシュマニアがひき起こすリーシュマニア症；及びマイコバクテリウム、コリネバクテリウム、またはブドウ球菌によりひき起こされるような細菌感染症を含むが、これらに限定されない。過敏症は、アレルギーを生じるアレルゲンとの接触の如きＩｆ過敏症、グツドバスチャー症候群、重症筋無力症、及び自己免疫性溶血性貧血に存在するようなＩＩ型過敏症、並びにらい病、結核、サルコイド−シス及び住血吸虫症で発現されるようなＩＶ梨過敏症を含むが、これらに限定されない。変性神経系疾患は、多発硬化症及びアルツハイマー病を含むが、これらに限定されない。本明細書に使用される“疾患°は、Ｔ−細胞クローナル集団により少なくとも一部媒介される免疫疾患である。このような疾患は、免疫系を含む動物を冒すことができる。重要な好ましい動物は、勿論、ヒトである。その他の好ましい動物は、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ及びネズミの種の如き家畜を含む。このようなその他の種の疾患はヒトに同定される疾患に似ていることかあり、または特別な種もしくは種の群について特異的に特徴づけられることがある。こうして、疾患を診断し、治療する本発明の方法及び試薬は医学分野及び獣医学分野に有益である。抗体または核酸の如きＴ−細胞抗原レセプター特異的試薬は、本明細書では疾患を診断し、治療し、そして監視するのに使用される。この方法の第一工程は特定のＴＣＡＲの存在を症状と相関させることである。この相関は疾患に関係する細胞のサブセットに於ける特別なＴＣＡＲの発現を伴うことがあり、または個体により受け継がれているＴＣＡＲ遺伝子の分析及びその個体を特別な疾患にかかりやすくすることに対するそれらの関係の分析を伴うことかある。このような相関か一旦行われると、それは患者のその症状を検出または診断するのに使用される。ＴＣＡＲ試薬は、それらが同定するＴ−細胞の作用を特異的に変調するそれらの能力に於いて、その症状を治療するのに更に使用し得る。また、それらは種々の毒素と接合されて標的Ｔ−細胞を更に変調し得る。加えて、特別な疾患の治療により、またはその後に、ＴＣＡＲ試薬はその疾患の治療を監視するのに使用されてその治療か可動であり、そして疾患が緩解期にあるか否かを決定し、または患者が症状の再現でもって再発したか否かを決定し、または患者が安定な疾患のない状態にあるか否かを決定する。監視期間中に、ＴＣＡＲ試薬は疾患の存在または不在を示すのに診断上有益であるだけてなく、その疾患を治療するのに治療上有益である。ＴＣＡＲに基く疾患の診断本明細書に記載されたヒトまたはその他の動物の疾患の診断は特定のＴＣＡＲと夫々の疾患の相関を必要とする。この相関は本明細書に記載された方法及び試薬により決定される。疾患の診断、治療及び監視は、疾患に関係する試料中のＴＣＡＲを適当な基準試料と比較することにより決定される疾患相関に基くものである。疾患相関及びその結果得られる臨床操作は異なる試料中で発現されたＴＣＡＲの定量的な相違に基くだけでなく定性的な相違に基くことがある。こうして、治療の経過中に逐次得られる試料中の相関ＴＣＡＲの値の相対的な変化か重要である。その一連の夫々の時点の絶対値が同様に重要である。臨床上のセツティングに於いて、種々の操作及びＴＣＡＲ試薬を使用して疾患の診断が行われる。このような診断は、ユニのものを指定するためのビオチン、放射能標識、蛍光標識、または金属イオンの如き検出できる部分て標識されているＴＣＡＲの特定の試薬の使用を伴う。これらの試薬は核酸プローブまたは抗体を含み、種々の臨床操作に使用でき、これらの操作は造影分析、ＲＦＬＰ分析、ＰＣＲ分析、蛍光サイトメトリ、蛍光顛微鏡法、！ｎ　５ｉｔＵハイブリツド形成法、核磁気共鳴分析、ＥＬ［ＳＡ分析、等を含むか、これらに限定されない。診断操作は生体外または生体内で行うことかできる。診断キットか診断を行うのに有益である。このようなキットは、分析に適した検出可能なマーカーとカップリングされた必要なＴＣＡＲ試薬、適当な標準物質、固相成分、例えば、ＩＩ微鏡スライド、マイクロタイタ皿、またはビーズ、必要により、その他の活性成分、例えば、検出に有益な酵素及び基質、等を含む。複数のＴＣＡＲ試薬か診断を行うのに必要とされる場合には、キットは夫々のこのような試薬、例えば、一種以上のＭＨＣ、ＶαまたはＶβ特定試薬を含む。ＴＣＡＲに基く疾患の治療ヒトまたは動物のＴＣＡＲに基く疾患の治療は、疾患に関与するＴ−細胞サブセットのみが特異的に変調される場合に最も有効である。また、更に大きなＴ−細胞サブセットの治療が有効であるが、非疾患の特定のＴ −細胞を同様に変調するという潜在的な欠点を有する。実際に、疾患を媒介する１個以上のＴ−細胞クローンにより使用されるものに共通な可変部配列を育する正常なＴ−細胞のサブセットを変調することが必要であり得る。ＴＣＡＲ試薬に基く有効な免疫療法は、疾患特異的Ｔ−細胞の切除もしくは欠失、または特定のＴ−細胞の誘導増殖を伴う。こうして、幾つかの疾患では、その疾患を生じるＴ−細胞の有害な集団を除去することが望ましい。その他の場合には、これらのＴ−細胞か疾患を治療し、またはそれを抑制するのに有益である場合に、Ｔ−細胞の疾患に関係するサブ集団（ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）を特異的に刺激して増殖させることか望ましいことがある。夫々の場合、ＴＣＡＲ試薬、例えば、特別なＴＣＡＲに特異的な抗体の投与量は、細胞が正しく刺激され、またはその他に除去のために正しく標的とされるように、当業界で知られている試験管内の技術により前もって決められるべきである。治療の方法は急性または慢性の治療条件を伴い得る。これは、順に、一時の巨丸剤投与、連続投与または反復投与を伴う治療養生法をもたらす。投与形態は、腹腔内注射、筋肉内注射または静脈内注射により適用される注射形態、徐放性形態、例えば、パッチで移植形態で、またはその他のコロイド形態で送出されるものを含むが、これらに限定されない。試薬それ自体は、例えば、種々の糖、緩衝液または試薬の安定性もしくは半減期を延ばす安定性を生じる化合物と組み合わされたヒト抗体（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）のように適当に製剤化される必要がある。半減期を増大するため、試薬は最初に変性されてそれに複合化される炭水化物の量を増加または減少することかでき、またはそれをポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の如き試薬と複合化することかてきる。最後に、適当な緩衝剤、塩及びｐＨ中に治療試薬を含む製薬組成物か必要とされる。ＴＣＡＲに基く疾患の治療または進行の監視疾患を診断または治療するのに使用される同試薬がまた疾患の治療の有効性を監視し、または緩解期、再発期または安定期の段階中の疾患の進行を監視するのに使用し得る。例えば、関節炎の場合、初期の疾患相関は、一種以上の関節炎Ｔ−細胞クローンにより発現されるＴＣＡＲに関して行われる。次に、この相関に基く一種以上のＴＣＡＲ試薬がこの関節炎を診断し、それを治療するのに使用し得る。更に、治療過程中に、関節炎細胞が排除されているので、一種以上のＴＣＡＲ試薬は関節炎細胞サブセットの排除の程度を、全ての細胞か消滅し、その疾患が緩解期にある点まて追跡するのに使用し得る。緩解期後に、一種以上のＴＣＡＲ試薬は関節炎細胞の再現について試験するのに定期的に使用し得る。こうして、患者は定期的に再診されて、個体が安定な緩解期にあるのか、再発し再度治療される必要があるのか、または急性疾患の再燃をうけているのかを決定する。こうして、またＴＣＡＲ試薬は組み合わされた診断、治療操作に有益である。Ｔ−細胞抗原レセプターと疾患の相関疾患に関係するＴ−細胞の診断、治療及び監視は、特定のＴＣＡＲと症状の相関に依存する。無限のスペクトルのＴ−細胞か生体中に存在し、これらの細胞は同様に無限のスペクトルの疾患に関係する抗原を認識するのに関与する。この認識の特異性は、特定のＴＣＡＲと疾患抗原の相互作用により達成される。こうして、ＴＣＡＲそれ自体の多様性かまた非常に高い。この多様性は、ＴＣＡＲ生殖系列セグメントの多重度、これらの異なるセグメントの組み合わせジョイニング、連結セグメントの部位に於ける接合部可撓性及びＮ−領域多様性、及び異なる翻訳読み取り枠または多重り領域セグメントの使用（１９８５年４月２４日に出願された米国特許出願第７２６．５０２号、現在の米国特許第４．８８６．７４３号）により生じる。所定の疾患相関は、本明細書に更に詳しく記載されるように、これらの種々のＴＣＡＲのどれが疾患を指示するのかを同定することにより決定される。好適な試料ＴＣＡＲと異なる症状の相関を検出し、または疾患を診断し、もしくは疾患治療を監視するのに使用し得る多くの異なる許容できる試料がある。疾患に応じて、これらの疾患特異的試料は、末梢血、関節液、胸膜液またはを髄液からの細胞を含むだけでなく、組織、溝膜、皮膚外傷または神経系の成分を浸潤した細胞を含む。このような浸潤細胞は組織部分中で直接研究でき、またはその他に組織から拡散させ、そして直接に研究でき、または組織培養液中て増加させることかできる。疾患に於ける免疫系細胞の区画化の量に応じて、成る種の試料かその他の試料よりも良好である。例えば、清勝を実際に湿潤した細胞は、慢性関節リウマチに特異的なＴＣＡＲを分析しようとする場合に、末梢血中に存在する細胞の全集団よりも好ましい。しかしながら、その他の疾患では、末梢血またはを髄液が選択される試料である。疾患の素因の相関及び診断は、受は継かれたＴＣＡＲ遺伝子の制限断片長子Ｗ（ＲＦＬＰ）を使用して行うことかできる。ゲノムＤＮＡを含むＤＮＡ被験試料が、この分析に使用し得る。しかしなから、ＤＮＡ被験試料かかなりの量のＴ−細胞を含まない場合には、その分析は多少複雑にされる。これは、Ｔ−細胞中に観察される転位ＴＣＡＲ遺伝子か異なるＴＣＡＲ対立遺伝子の存在または不在の分析を複雑にするという事実による。ＲＦＬＰ分析に関して、選択される試料は末梢血Ｂ細胞または繊維芽細胞である。疾患相関を同定し、または疾患を診断、治療もしくは監視するために、付加的な試料かまた有益である。これらは、比較値を得るのに使用し得る試料を含む。一つのこのような比較試料は、関係する疾患を有しない正常な個体から採取された同様の試料である。正常な個体の試料は、病気の叡者の試料中のＴＣＡＲの相対的な増加または減少の目安として使用し得る。その他の有益な試料は、疾患の開始前または治療の開始の前に同患者から採取された試料を含む。慢性関節リウマチ患者に関して、例えば、安定期間中に同患者から採取された試料は、急性の再燃期間中に採取された試料と比較するための値を得るのに極めて有益である。同様に、例えば、関節炎患者の疾患の治療の効能を監視する場合には、治療か開始する前、治療中、並びに緩解期及び再発期中に同患者から採取された試料か全て有益である。これらの経過（ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ）試料または一連の試料が、関係するＴＣＡＲマーカー中に観察される変化の量を示すのに使用し得る。自己免疫ＴＣＡＲＣＡ相関を同定するための方法本明細書に記載されたＴＣＡＲ試薬のいずれかか、疾患の診断及び予後に有益な疾患相関を同定するのに使用し得る。疾患相関は二つのカテゴリーに大別される。第一のカテゴリーは成る種のＴＣＡＲの発現と成る種の疾患の存在の間の相関を伴う。第二のカテゴリーは、受は継がれた実際のＴＣＡＲ遺伝子かその個体に素因を与えて発病させることができるか否かを決定するために、個体のゲノムＤＮＡ中の遺伝ＴＣＡＲの分析に基く予後を伴う。後者の場合、疾患それ自体は未だ顕在化されていなかったかもしれず、そして疾患と相関するＴＣＡＲが未だ発現されていなかったかもしれない。下記の方法は、ＴＣＡＲ試薬と疾患の相関が行い得る方法の幾つかを説明する。その他の方法は当業者により知られている。１、ＴＣＡＲｓの発現に基づく疾病の相互関係正常な個体において、特有のＴＣＡＲへテロダイマーを発現する各々のＴ細胞の多様な集団がある。これらの細胞は、主要組織適合抗原との複合体として存在する同起源の疾病特異的抗原と接触する迄、活性化されない。抗原が一端確認されると、Ｔ細胞は活性化し、クローン的に拡張して、それぞれ同一のＴＣＡＲを発現するＴ細胞のサブセットを生ずる。このＴＣＡＲは、疾病特異的Ｔ細胞サブセットを確認するための特徴である。１以上の、但し限られた数のＴ細胞か疾病特異的抗原により活性化されると、複数のクローンが拡張し、Ｔ細胞のオリゴクローンのサブセットを生ずる。オリゴクローンのサブセットは依然として限られた数のＴＣＡＲｓを発現するのみてあり、二のＴＣＡＲｓは次に、オリゴクローンのサブセットを確認するために使用することかできる。疾病との相関を確認するために有用な手法は、試料中における他のすへてのＴ細胞の存在下において、疾病特異的Ｔ細胞のサブセット又はオリゴクローナルサブセットを検出することか可能でなければならない。使用することのできる手法のいくつかを以下に記載する。ａ）ＣＤＮＡライブラリーこの手法のために、試料中てＲＮＡかＴ細胞から分離され、相補的ＤＮＡ　（ｃＤＮＡ）を合成するために使用され、ｃＤＮＡは次いでライブラリーを製造するためにバクテリア細胞中ヘクローン化された。ライブラリーは、発現されたのと概ね同じ割合で試料中に発現されるＴＣＡＲｓの完全なセントを表わしている。ＴＣＡＲｃＤＮＡｓの配列を決定すること又は既知のＴＣＡＲプローブへそれらを対合させることによるライブラリー中のクローンの分析は、例えば、とのＴＣＡＲｓが最も頻繁に発現されたのかを示している。これは、同じＴＣＡＲをそれぞれ発現する、細胞の疾病拡張（ｅｘｐａｎｄｅｄ）サブセットの特徴的な指標である。ＣＤＮＡライブラリーの１つの利点は、疾病との相関性における意義を決定するために、圧倒的に発現されたＴＣＡＲｓにより発現される各々の■、Ｄ、Ｊ及びＣ領域を分析することか可能なことである。ＣＤＮＡライブラリーを製造する代わりに、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）においてＴＣＡＲ特異的プライマーを使用することにより、主にＴＣＡＲｓを増幅することか可能である（Ｍｕｌｌｉｓら、米国特許第４．６８３．１９５号）。この方法の一例として、疾病特異的試料から得られたＲＮＡ５を最初にｃＤＮＡを合成するために使用した。ｃＤＮＡは次いでＰＣＲによりＴＣＡＲ特異的プライマーで増幅させて、高度にＴＣＡＲに富んだＤＮＡ５を製造する。次に、これらのＤＮＡ５の配列か決定され又はラベルされ、−団の既知のＴＣＡＲ遺伝子でスポットされたニトロセルロースフィルターをプローブするために使用された。どちらの場合でも、最も豊富に同定されたＴＣＡＲ配列又は遺伝子は、Ｔ細胞のオリゴクローナル又は疾病特異的サブセットの指標であると考えられる。その代わりに、Ｌｏｈε、Ｙ、らにより記載された方法、サイエンス２４３巻、２１７〜２２０頁、　（１９８９）と類似の方法である片側だけの（ｏｎｅ　５ｉｄｅｄ）　Ｐ　ＣＲ法を使用できる。ｃ　）　Ｉｎ　５ｉｔｕハイブリッド形成疾病試料自体は、ｉｎ　５ｉｔｕハイブリツド形成により直接分析できる。この方法において、それぞれ個々のＴ細胞内で発現されるＴＣＡＲＲＮＡは、これらの細胞をＴＣＡＲ特異的遺伝子プローブに対合させることにより検出され得る。一般的には、試料は複数の試料に分割され、次いで、−団のＴＣＡＲ遺伝子でプローブされる。この−団は、Ｖ、ＪＤＪ、又はＣ領域特異的プローブを含むことができる。もし細胞が特定のＴＣＡＲＲＮＡを発現するならば、相応のＴＣＡＲ遺伝子プローブに対合させたとき陽性として検出されるであろう。ｄ）サザン分析ゲノムＤＮＡは疾病試料から調製することができ、ＴＣＡＲ遺伝子プローブの一団を使用するサザン分析により分析し得る。各々のプローブは、試料の各々のＴ細胞において再配列していない及び再配列した（ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ）　Ｔ　ＣＡ　Ｒ遺伝子を検出するであろう。非疾病状態のＴ細胞の多くは極めて低いパーセントで存在するであろうから、これらのＴ細胞に相応する再配列した帯は余りに弱く、サザン法により上記バックグラウンドを見ることはできないであろう。しかしながら、拡張した疾病Ｔ細胞サブセット又はオリゴクローナルサブセットに対しては、再配列したＴＣＡＲ５は高レベルに存在し、再配列していない帯とは区別される帯として検出可能である。ｅ）流動細胞計測法抗ＴＣＡＲ抗体は、疾病特異的Ｔ細胞試料の特異的ＴＣＡＲｓの発現についてスクリーンするために使用され得る。抗体は生細胞の完全ＴＣＡＲと直接反応できるが、又は細胞は変成ＴＣＡＲと反応性の抗体が使用し得るようにエタノール又は他の適当な試薬で予備処理できる。試料は複数の部分に分割され、各部分は１つの抗体又は１つの抗体プールを有する流れにより分析される。試料中の細胞の最大の部分と反応する抗体は、疾病特異的細胞を表わすと考えられる。同じ一団の抗体を使用するとき、試料は、又、蛍光細胞計測法の代わりに蛍光顛微鏡によっても分析できる。２、ＴＣＡＲハブロタイブの遺伝に基づく疾病の相関関係ＴＣＡＲは多重遺伝子族として遺伝する。各々のＴＣＡＲ遺伝子に対して、１個の対立遺伝子は母系がら遺伝し、１個の対立遺伝子は父系から遺伝するであろう。各ＴＣＡＲ遺伝子に対して遺伝した対立遺伝子の差異は制限断片長条ｕ（ＲＦＬＰｓ）により定義され得る。これらのうちの幾つかは記述されている（係属中の米国特許出願、出願番号０７／１７６、７０６．１９８５年４　月２４日出願’）。ＴＣＡＲハブロタイブは、個々のゲノムＤＮＡ中でどの対立遺伝子（又はＲＦＬＰｓ）が観察されるかを確認することにより、それぞれの個人に対して定義され得る。これは好ましくは、ササン法によりなされ、この場合、個々のゲノムＤＮＡは当該ＲＦＬＰを定義することが知られている種々の制限酵素で消化され、次いて、−団のＴＣＡＲ遺伝子プローブに対合される。ＲＦＬＰの原因である制限酵素部位の周辺のＤＮＡ配列がわかれば、次に、その部位の周辺のフランキング配列に対応してオリゴヌクレオチドか合成でき、ＰＣＲ法を使用できる。次に、疾病相関は、ＴＣＡＲｓ　（又はＴＣＡＲ遺伝子ハブロタイブ）に対する特定のＲＦＬＰｓの遺伝が、疾病の存在していない患者よりも疾病を発病している患者において、一層頻繁に生じているか否かを決定することにより形成される。ＴＣＡＲ遺伝子のハブロタイブは家族の世代を通して追跡され、感染した個人と非感染の個人の間で相関か形成されるので、この種の分析においては家族の研究は特に育用である。この分析から、ＴＣＡＲハブロタイブを示す疾病を個人が遺伝しているということに基づいて、その疾病を確実には発病していないが、その疾病を発病する素因かあるということを予測することかできる。疾病相関にとっては、ＴＣＡＲｓの可変部を含むＲＦＬＰは定常部を含むものよりも好ましい。抗原と相互作用を有し、それゆえ、疾病特異的であるものか、ＴＣＡＲｓの可変部である。大部分のＴ細胞により使用されるＴＣＡＲｓにはわずかに２個のβ定常部と１個の定常部かある。遺伝したＴＣＡＲ対立遺伝子に基づく疾病の相関は、また、結合部を有するそれらの断片又は適当な抗ＴＣＡＲ抗体を使用することにより確認できる。こうして、もし抗体が特定の遺伝した対立遺伝子に特有なエピトープと反応するならば、この抗体はその対立遺伝子の存在又は不存在を検出するために使用され得る。疾病の素因の診断疾病は、部分的には遺伝しつる遺伝子的素因と関連する病因を有するという本発明の局面において、当該疾病に対する少くとも１つの推定上の“感受性遺伝子” か当該病気になるおそれのある動物には存在し得る。かかる感受性遺伝子は、これに限定されないか、ＴＣＡＲのα及び／又はβ鎖の可変部をコードするＴ細胞レセプター遺伝子を含む。ヒトのＴ細胞レセプターのβ−鎖にあるかかる可変部には、Ｖβ遺伝子セグメント、Ｊβ遺伝子セグメント及びＤβ遺伝子セグメントが含まれる。ヒトのＴＣＡＲα−鎖の場合には、かかる可変遺伝子は、Ｖα遺伝子セグメント及びＪα遺伝子セグメントをコードするものを含む。このＶ、Ｊ又はＤ遺伝子セグメントは、正常の又は異常な遺伝子を含み得る。それゆえ、例えば、Ｖβ遺伝子セグメントは、それか集団中に見い出されたとき、そのヌクレオチド及びアミノ酸配列にほとんど又は全く変動かないという場合、正常であり得る。二の場合、かかる“正常な”遺伝子の遺伝は、疾病に対する素因の指標であるハブロタイブを生じ得るかもしれない。他の場合には、異常な遺伝子セグメント、即ち、個人の間で実質的な対立遺伝子変動が存在するものは、“異常な”遺伝子セグメントの遺伝は疾病に対する素因を生ずるハブロタイブの特徴である。特定の疾病に対する感受性遺伝子が確認されない場合でさえも、かかる疾病に対する素因はかかる感受性遺伝子と関連するｌ又は複数の“標的ＤＮＡ配列”の遺伝を分析することにより検出できる。かかる標的ＤＮＡ配列は、典型的には、ＴＣＡＲｓ又はα−鎖の可変部をコードするゲノムＤＮＡ配列内又はそれに物理的にきわめて近接して含まれる。標的ＤＮＡ配列は、それぞれか感受性遺伝子と連鎖不平衡にあることが示されるならば、それは感受性遺伝子と相関する。同様に、標的ＤＮＡ配列は、それがＴＣＡＲ鎖の可変部又はセグメントをコードするＤＮＡ配列と連鎖不平衡にあるならば、それは可変部に極めて近接している。連鎖不平衡は当該分野の当業者によく知られた方法及び本明細書に記載されるようにして決定される。ある疾病においては、１以上の感受性遺伝子が特定の疾病の原因となるかもしれない。この場合、第２の感受性遺伝子と相関するｌ又は複数の第２の標的ＤＮＡ配列は、また、その疾病に対する個人の素因の指示として検出できる。加えて、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ハブロタイブは、特定の疾病に対する素因の他の指標を提供しうる。例えば、ある集団において、多発硬化症を患う個人の約８０％は、ＤＲ２”のＭＨＣハブロタイブを育す例えば、第１の感受性遺伝子に相関するＴ細胞レセプターβ−鎖の可変部内における、第１の標的ＤＮＡ配列の存在は、この疾病に対する動物の素因の指標となるβ−鎖ハプロタイプを特徴とする特定の疾病に対する第２の感受性遺伝子かまた特定の疾病の病因の一部として定義されるとき、即ち、Ｔ細胞レセプターα−鎖可変部遺伝子座内に感受性遺伝子か存在するとき、α−鎖ハプロタイプはその疾病に対する素因の他の指標として、第２の標的ＤＮＡ配列により特徴づけられる。もちろん、素因は特定の疾病か発病することの完全な指標として考えられるべきではないということか理解されなければならない。むしろ、かかる測定はその疾病を発病する個人の危険性を確認する。こうして個人はＭＳに対する素因の指標となるハブロタイブを育することか可能であるか、疾病の開始に必要な他の環境的因子、例えばウィルス感染等にさらされない限り、かかる病気の症状を発しないかもしれない。疾病に対する素因の診断が望ましいとき、好適なりＮＡ被験試料は個々の動物からのゲノムＤＮＡである。感受性遺伝子と関係する標的ＤＮＡ配列か、α又はβ 鎖のようなＴ細胞抗原レセプター鎖の可変部のセグメントをコードする構造部の外側にあるとき、これは特に好ましい。この場合、標的ＤＮＡ配列は、特定の制限エンドヌクレアーゼによって認識されるＤＮＡ配列をコードし又は破壊する特有の配列を含み得る。この場合、標的ＤＮＡ配列は、相応の制限エンドヌクレアーゼてゲノムＤＮＡを消化することにより検出される。その後、消化されたゲノム材料は大きさに基ろいて電気泳動法により分離され、感受性遺伝子に相関する制限エンドヌクレアーゼの開裂個所かゲノムＤＮＡ内に存在するがどうかを決定するために、ラベルされたオリゴヌクレオチド、例えば、ラベルされたＶβ又はＶα　ｃＤＮＡでプローブしうる。あるいは、ＲＦＬＰをコードする標的ＤＮＡ配列の存在又は不存在は、オリゴヌクレオチドリガーゼ　アッセイ法を使用して検出しつる。Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ　Ｕ　ら、　（１９８８）　５ｃｉｅｎｃｅ　２４１．　１０７７〜１０８０　；Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ　Ｕら、（１９８８）　５ｃｉｅｎｃｅ　２４２．　２２９〜３４７゜ＲＦＬＰｓをコードする標的ＤＮＡ配列以外の配列も使用しうる。例えば、可変部に極めて隣接する特有の配列は、感受性遺伝子による連鎖不平衡に存在し得る。その配列かＲＦＬＰをコードしない限り、その特有の配列はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によりゲノムＤＮＡ中で検出しつる（サカイら、　（１９８６）　Ｎａｔｕｒｅ３２９、１６６）。この方法において、標的ＤＮＡを特徴とする特有のＤＮＡ配列の各々の末端もしくはその近傍に位置するそれぞれ対向するストランドに相補的な２個のオリゴヌクレオチドブライマーは、標的ＤＮＡ配列を指数関数的に合成するためにＤＮＡポリメラーゼと関連して使用される。この増幅された標的ＤＮＡ配列は、その後、相応にラベルされたプローブで検出される。この基本的なＰＣＲ法に対する多数の変形か当業者によりなされており、この変形されたＰＣＲ法は本明細嘗て定義されるように標的ＤＮＡ配列を検出するために容易に適用され得る。ある場合には、標的ＤＮＡ配列は特定の疾病に対する感受性遺伝子内に含まれ得る。この場合、感受性遺伝子のすべて、又は一部の配列は知られているであろう。この感受性遺伝子が他のゲノム配列から十分に配列上の分岐進化を有する限り、これは通常のハイブリット形成法により検出しうる。また、感受性遺伝子内に含まれる標的配列を検出するために、上述のＰＣＲ法か使用できる。さらに、感受性遺伝子それ自体がＲＦＬＰをコードする限り、感受性遺伝子の存在は、その遺伝子又はＲＦＬＰに結合した他の遺伝子配列に対する相応のプローブを使用するＲＦＬＰ分析により検出あるいは確認することかできる。多くの場合、感受性遺伝子に関連する標的配列はβ又はαＴＣＡ、Ｒポリペプチド鎖の可変部をコードするｌ又は複数の遺伝子セグメントに関連している。この場合であってかつ、標的配列かＲＦＬＰより成るときは、その可変部遺伝子セグメントに対する相応のプローブは、相応の制限エンドヌクレアーゼと関連して使用しつる。例えば、Ｖβ遺伝子セグメントの種々のサブファミリーの場合には、 ■βサブファミリーに対する一団のｃＤＮＡブローグメントに対しては、■αサブファミリーに対するｃＤＮＡプロ本発明の特定の態様において、Ｖβ遺伝子セグメントの１５のサブファミリーと関連する特異的ＲＦＬＰｓが、このＲＦＬＰｓとヒトの多発硬化症に対する素因の間で相関の存在の可熱を決定するために使用された。実施例においてより詳細に記述されるように、これらのＲＦＬＰｓと推定上の多発硬化症感受性遺伝子との間の相関を検出するために、ＶＢ２及びＶＢｌｌに関連するＲＦＬＰｓにより定義された種々のハブロタイブか使用された。これらのＲＦＬＰｓとＭＳの間で測定された連鎖不平衡の程度に基づいて、この推定上のＭＳ感受性遺伝子かヒトゲノムの遺伝子セグメントＶβ８とＶＢｌｌの間に存在することか確認された。感受性遺伝子は今後完全に特徴付けられなければならないか、ＭＳの発病及び進行を仲介するＴ細胞クローンのＴ細胞抗原レセプターで使用されるのは■β遺伝子セグメントであると信じられる。このように、■又は複数のこれらのＲＦＬＰｓの存在の指標となるハブロタイブを有する個人の確認は、その個人における多発硬化症感受性遺伝子の存在のしるしを提供する。前に述へたとおり、複数の遺伝子成分かＭＳを生じさせる疑いがある。二の点に関して、Ｔ細胞のレセプターはＭＨＣ分子との関連で抗原を確認するα及びβ− 鎖を含むから、その他の遺伝子成分はＴ細胞レセプター−α−鎖をコードするＭＨＣ遺伝子座及び／又は可変部遺伝子座に存在するかもしれない。本発明の第２の態様において、Ｖの１６遺伝子セグメント内又はこれに極めて近接する部位のＲＦＬＰは、このＲＦＬＰとＭＳの間の連鎖不平衡に基づいて、ＭＳに対する感受性と相関性を有する。推定上の第２のＭＳ感受性遺伝子は、それゆえ鎖可変部遺伝子の遺伝子座内に存在する。このように、ＭＳに対する素因としてβ−鎖ハプロタイプを特徴づけることに加えて、α鎖ハブロタイブもまた、それ自体で又はＭＳを進展させることに対する個人の増大する危険性の徴候と組み合わさって、成る個人について特徴付けされ得る。本発明の他の態様において、疾病の始まりの診断又は進行のモニターリングか提供される。この態様において、被験試料はＴ細胞核酸試料又はＴ細胞ポリペプチド被験試料のいずれかを含む。ここで使用されているように、“Ｔ細胞核酸被験試料”はＴ細胞から再配列されたゲノムＤＮＡに対応するＤＮＡ又はＲＮＡを含む。この再配列されたゲノムＤＮＡは、ＴＣＡＲＲＮＡ５及びポリペプチドを製造するために分化したＴ細胞集団により使用されるα−鎖とβ−鎖をコードする。Ｔ細胞核酸被験試料は典型的には、Ｔ細胞を含有する相応の組織又は液体試料である。かかる試料中のＴ細胞は、必要ならば、Ｔ細胞集団に存在する核酸の分析を促進するために、当業者に既知の標準的方法によりさらに精製しうる。このＴ細胞核酸試料は、個人に存在する多数のＴ細胞クローンにより使用されるα及びβ　ＴＣＡＲ部をコードする再配列されたゲノムＤＮＡを含有する。これは、疾病の開始又は進行の診断を可能とするＴ細胞集団内のＴ細胞レセプターα及び／又はβ−鎖のいずれかの特異的可変部をコードする疾病と相関する特定の核酸配列を検出することである。Ｖ、Ｄ又はＪセグメントか疾病と相関したＴ細胞のみならず、他のＴ細胞により使用される状態においては、疾病を仲介するＴ細胞により使用される種々の可変部セグメント間の相関を決定することにより、疾病を仲介するＴ細胞の検出か可能である。例えは、マウスのＥＡＥの場合には、種々のＴ細胞クローンに関してＴＣＡＲの特異的Ｖα、Ｊα及びＶβ、ＪβセグメントかＥＡＥと相関することか決定されている。図１は、４種のＴ細胞レセプター即ちＥＡＥに感染したＢＩＯ，ＰＬマウスの模式図である。明らかのように、α−鎖において、Ｖα２，３及びＶα４．２はそれぞれＪα３９遺伝子セグメントと関連している。こうして、Ｖα２．３／Ｊα３９及びＶα４．２／Ｊα３９によりコードされたＶＪ部に相当するプローブてＴ細胞から抽出されたｍＲＮＡのノサン分析は、マウスにおけるＥＡＥの原因となる４個のＴ細胞クローンのうちの２個の存在の検出のために使用できる。同様の分析は、β−鎖を定義する種々のセグメントに対して行うことができる。加えて、ＥＡＥ特異的Ｔ細胞クローンは、これらのクローンのＴＣＡＲｓの特異的Ｖα及びＶβ可変部の発現を検出することにより、一層正確に検出し得る。類推的に、特定の可変部セグメントが特定の疾病の原因となる各々のＴ細胞集団に対して確認されれば、他の疾病も同様にして診断できる。加えて、特定の疾病を仲介するｌ又は複数のＴ細胞クローン内に含まれる再配列されたゲノムＤＮＡは、再配列により生成されたＲＦＬＰ、又は未分化ＤＮＡからのＲＦＬＰの残りのＲＦＬＰを含むことかできる。かかる場合において、Ｔ細胞核酸試料中におけるＴ細胞可変部と相関した標的配列としてのかがるＲＦＬＰの検出は、Ｔ細胞介在疾病の始まり又は進行を診断のために使用しうる。Ｔ細胞介在疾病の始まり又は進行の診断は、また、Ｔ細胞抗原レセプター被験試料を分析することにより実施され得る。ここで使用されるように、“Ｔ細胞抗原レセプター被験試料”は、Ｔ細胞を含有する動物からの試料である。Ｔ細胞核酸を分析するためのこれらの被験試料に関して、Ｔ細胞を含有する試料は、Ｔ細胞を富化させるために当業者に既知の標準的な方法により処理され得る。さらに、精製され、又は部分的に精製されたＴ細胞抗原レセプターを得るために、被験試料又はＴ細胞に富んだ試料は、相応の界面活性剤で処理され、かつ、当該分野で良く知られた方法で精製できる。疾病と相関するＴＣＡＲｉｌの可変部を含む第１の標的ポリペプチド配列かα及び／又はβ鎖内の特異的可変部によって存在するか否かを決定するために、Ｔｍ１ｔａ抗原レセプター被験試料か分析される。本明細嘗て使用されているように、Ｔ細胞抗原レセプターポリペプチド鎖の可変部内の特別の可変部又はセグメントが同一の疾病にかかっている集団又は亜集団内で共通して見い出されるならば、第１の標的ポリペプチド配列はこの疾病と“相関関係”にあ己。加えて、特定の疾病と相関しており、異なったＴＣＡＲｉＪｌにおいて特異的可変部又はセグメントを含んでいる、同様な第２の標的ポリペプチド配列は、その疾病の始まり及び進行を検出するために使用され得る。このため、例えば、図１に示されているように、マウスのＥＡＥに関連するＢＩＯ，ＰＬＴ細胞は、ＴＣＡＲ部及びβ−鎖の限られたレバトリーを示す。こうして、かかる動物においては、ＥＡＥの始まり及び進行は、例えば、Ｖα２，３、Ｖα４．２、ＶＢ２．２及び／又はＶＢ１３をアッセイすることによりモニターされる。かかる検出は、典型的には可変部の特定のセグメントに対するモノクローン化抗体でなされ、この疾病の原因であるＴ細胞レセプターの可変部に関連した特定のＪα、Ｊβ及びＤβ遺伝子セグメントに向けられた抗体も含まれる。これらの疾病の始まり及び進行は、Ｔ細胞核酸又はポリペプチド試料を分析するためにここに記載した方法により検出できることか理解されるべきである。例えば、ある疾病は、ウィルス、細菌及び寄生虫を含む種々の病原のような環境下にさらされることに基づいて獲得されることか想定される。このような場合には、この疾病に対する遺伝子素因はないかもしれない。しかしなから、このような状態は、外来抗原への免疫応答を仲介することに加えて、応答を仲介するＴ細胞の１又は複数のクローン集団を製造するための特定の抗原への予言しつるＴｍ胞応答を排除しない。診断のための試薬及び疾病の治療本発明の他の態様において、ＴＣＡＲ部に１又は複数の特定の可変部又はセグメントを含むＴ細胞のクローン集団により特性化される、疾病を診断し又は治療するための試薬が提供されろ。この試薬は、診断のための核酸プローブ及び診断と治療のための抗体を含む。この抗体はポリクローナル抗体を含みつるが、好適にはこの疾病と相関する特異的可変部又はセグメントと反応性であるモノクローナル抗体である。上述のように診断的アッセイで使用されるとき、抗体は典型的には特定のＴＣＡＲとの結合か検出可能であるようにラベルされる。この抗体もまた特定のＴＣＡＲを疾病と相関させるために使用できる。ポリクローナル又はモノクローナル抗体は、当該分野で既知の方法により製造できるが、抗体の特性はそれを製造するために使用される免疫原及びスクリーニング法に依存する。疾病を治療するために使用されるとき、特定のＴ細胞抗原レセプターセグメントは変形しない形態で又は当該分野で良く知られた手段により核種又は毒素と複合体形成させてから使用でき、標的にされたＴ細胞に複合化された物質をブリバーするために使用できる。例えば、Ｆ　２３．　ｌ抗体は、Ｂｕｍｏｌ（１９８３）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。Ｓｃｉ、　８０．５２９の方法により、リシンのような毒素に複合体形成させ得る。簡単に説明すると、Ｖβ８のような所望のＴ細胞レセプターセグメントと反応性のモノクローナル抗体は、慣用で良く知られた方法により製造される。抗体は精製され、ＰＢＳ中で過剰の（６モル１モル）のＮ−スクシンイミジル　３− （２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ファルマシア、ウプサラ、スウェーデン）と混合した。室温で３０分インキュベーションした後、溶液をＰＢＳに対して透析した。変成した抗体は、ジフテリア毒素Ａ鎖のような相応の毒素と複合体化される。リシンＡのような他の毒素も使用できる。ジフテリア毒素Ａ鎖は、Ｂｕｍｏ　１の上掲書に詳細に記載されているようにして分離される。変成された抗体は、過剰の（３モル１モル）の弱毒化ジフテリア毒素Ａ＠（全容積の１０％）と混合し、４°Ｃで３６時間反応させ、そしてセファデックスＧ−２００上でクロマトグラフィーにより濃縮した。生成物は、セファデックス０２００カラム（＋、　Ｏｘ　１００ｃｍ）に適用し、ＰＢＳで平衡にし、溶出させた。毒素と複合した抗体は、好適には腹腔内投与により、４０ｕｇの精製した抗体複合体として、又は、患者の体重、疾病のひとさ及びその他の要素に基づいて相当であると決定された量で動物に投与される。注射は、好適には、約三日毎の間隔て繰り返される。 ■、核酸使用される方法に基づいて、ＴＣＡＲｓをコードするＤＮＡ又はＲＮＡ配列は、疾病の素因又は始まりを診断するために使用され得る。ＴＣＡＲｓの発見以来、この多重遺伝子族の遺伝子の多くか同定され、クローン化され、そして、配列決定された。ＴＣＡＲへテロダイマーを作成するために混合される、５０−１００　Ｖβｓ、２ＤβＳ、１３Ｊβ５１２ＣβＳ、オーバー１ｏｏｖαｓ１オーバー５０Ｊαｓ１及びＩＣα遺伝子セグメントが存在することが正確に判断されている。加えて、Ｔ細胞のスモールクラスにより使用されるＴＣＡＲｓのγ及びδ鎖の可変及び定常部をコードする遺伝子セグメントも既知である。これらの配列のいずれが、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はＲＮＡのいずれも、疾病との相関を決定し、素因を診断し、疾病の始まり又は進行を診断するために使用し得る。加えて、合成りＮＡｓ又はＲＮＡ５は当該分野で既知の方法により製造でき、完全遺伝子又はＲＮＡ配列の一部に相応する核酸配列を製造しうる。これらの合成配列は、Ｖ、Ｄ、Ｊ又はＣ遺伝子セグメントのいずれかの組み合わせの全部又は一部に相当する配列、類オリゴヌクレオチド配列、完全遺伝子配列のいずれかであり得る。２、抗体ポリクローナル又はモノクローナル抗体のいずれも、当該分野で既知の方法により製造できる。しかしながら、抗体の特性はそれを製造するために使用される免疫原及びスクリーニング方法に依存するであろう。ａ）免疫原抗体を製造するために、動物は種々のＴＣＡＲ含有試料で免疫することかできる。これらは、（１＋ＴＣＡＲの一部に相当するペプチド配列（米国継続出願、願番第７２６．５２０．１９８５．４月２４日出願及び願番第１７６．７０６．１９８８年４月１日出願）　、　（２１その表面て特有のＴＣＡＲヘテロダイマー、即ち（α、β又はγ、δ）を発現する全Ｔ細胞、（３）免疫沈降のような良く知られた方法によりＴ細胞から精製したＴＣＡＲポリペプチド、（４）限定されるものではないか、イースト、真核、又は原核細胞を含む発現系から製造された組換え的に発現され、そして精製されるＴＣＡＲ蛋白、及び（５）細胞か当該特定ＴＣＡＲ遺伝子でトランスフェクトされ、可溶型又は膜結合型でトランスフェクトした遺伝子を発現するものである、全細胞又はそれにより製造されたＴＣＡＲを、含む。ｂ）スクリーニング法最終の抗体の特徴は、それを得るために使用されるスクリーニング法に依存している。もし、スクリーニング法か変成蛋白を認識する抗体のみを確認することを意図したものであれば、このスクリーニング法で選択される生成抗体は一般には生細胞に存在する完全ＴＣＡＲポリペプチドとは反応し得ないであろう。もし抗体か診断方法のために使用されるべきものであるならば、変成したＴＣＡＲ蛋白を検出することに依存した診断方法が選択る場合には、これは差異を生ずるかもしれないし、又は、何らの差違も生じないかもしれない。しかしながら、もし抗体か治療上有効でなければならないならば、抗体は患者の免疫系Ｔ細胞に存在する完全ＴＣＡＲを認識することが重要である。異なる抗−ＴＣＡＲ抗体を発現するハイブリトーマ細胞をスクリーンするために使用され得るスクリーニング法には、（１）酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬ　Ｉ　ＳＡ）　、（２＋流動細胞計測法（Ｆ　Ｌ　ＯＷ）　、（３）免疫沈降、及び（４）細胞表面のＣＤ３抗原（Ｔ細胞表面に存在するＴＣＡＲ−ＣＤ３複合体の一部）をコモンユレートオフする能力が含まれる。コモジュレーションと流動スクリーニング法は、これらの方法の固有の特性のため、生細胞にある完全ＴＣＡＲを認識し得る抗体を選択する場合において好適である。免疫沈降を同定するために好ましい。１）ＥＬＴＳＡ　スクリーニングアッセイ抗−ＴＣＡＲ抗体をスクリーンするために使用され得るＥＬＴＳＡの多数の異なるフォーマットが、当業者により示され得る。これらには、限定されるものではないが、固相に結合した又は固相に結合した抗体により結合された、精製され、合成されあるいは組換え的に発現されたＴＣＡＲポリペプチドを含むフォーマット、又は、固相に結合しているか又は固相に結合した抗体により結合された全Ｔ細胞あるいはＴ細胞リゼイト膜調製物の使用を含むフォーマットが含まれる。ハイブリドーマ上清の試料は、これらの２つのフォーマットのいずれかにより反応させ、次いて、例えば、視覚的に確認できる酵素基質を複合したヤギの抗マウス免疫グロブリンとインキュベーションされる。２）流動スクリーニングアッセイハイブリドーマを産生ずる抗体の上溝は、当業者に知られている多くの異なった方法においてＦＬＯＷによりスクリーンされ得る。１つのスクリーニング法は、表面において良く知られたＴＣＡＲｓを発現する一団のＴ細胞への可能性のある抗体の結合を含む。一般には、完全ＴＣＡＲと反応する抗体はこの分析法で検出されるが、Ｔ細胞はエタノールで僅かに固定され、この場合、変成ＴＣＡＲポリペプチドと反応する抗体が確認できる。ＦＬＯＷアッセイは、また、Ｔ細胞に存在するＴＣＡＲに対する既知の抗体の結合力と競合させる能力により可能性のある抗体をスクリーンするフす−マットとなり得る。３）免疫沈降スクリーニングアッセイもしスクリーンされる抗体か完全ＴＣＡＲと反応しないならは、その抗体は、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法又はウェスタンプロット分析により分析された既知のＴＣＡＲを免疫沈降させるその能力によりスクリーンされ得る。ハイブリトーマ細胞の上清はプールされ、次いで、この方法によりスクリーンされ得る。このアッセイを使用すれば、抗−ＴＣＡＲ抗体か認識しているＴＣＡＲへテロダイマーの鎖を確認することかできる。４）ＣＤ３抗原のコモジュレーションによるスクリーニングＴＣＡＲは一般には、ＣＤ３？Ｉ合体の鎖との複合体としてＴ細胞の表面に存在する。抗体がこのＴＣＡＲ：　ＣＤ３ｍ合体に結合するとき、この複合体は次にＴ細胞内に取り込まれ、細胞表面から消失する。このため、もしＴ細胞かＴＣＡＲに特異的な抗体と反応し、複合体か取り込まれるならば、抗−ＣＤ３特異的抗体とのその後の反応は、ＦＬＯＷ分析によるＣＤ３産生細胞の実質的な検出を生じないであろう。このコモジュレーションスクリーニング法は、Ｔ細胞表面で完全ＴＣＡＲと相互作用しうる抗体を検出するので、異常を治療するためのＴＣＡＲ治療用試藁に対する最も有用な特性を育する抗−ＴＣＡＲ抗体の選択のために好ましい。５）付加的なスクリーニングアッセイ培養時に増殖するためにＴ細胞に既知のＴＣＡＲｓを発現させる既知の特異性又は能力をもつ抗−ＴＣＡＲ抗体との競合に基づくような、多くの付加的なスクリーニングアッセイは当業者に既知である。Ｃ）抗−ＴＣＡＲ抗体の分子特性ＴＣＡＲヘテロダイマーは、Ｖβ、Ｄβ、Ｊβ及びＣβ遺伝子セグメントから成るｂｍサブユニット及びＶα、Ｊα及びＣα遺伝子セグメントから成るα−鎖を含む。ＴＣＡＲに対する抗体は、ｂ鎖又はａｉｌ領域のいずれかにおいてエピトープを認識する二とかでき、加えて、成るα−鎖及び成るβ−鎖配列から成る組み合わせエピトープも認識しつる。エピトープはいずれかの鎖から直線状に伸展するアミノ酸から構成することかでき、または、エピトープのアミノ酸がレセプター配列の異なる部分から集められるコンホメーション配列から生ずることかできる。ＴＣＡＲ特異的抗体は、次のように細分類され得る。幾つかの抗体は、２．３の可能な細分類を命名するのに特異的な抗−Ｃβ、抗−Ｖβ、抗−Ｊβ、抗−ＤＪ β、抗−■α、抗−Ｊα、又は抗−Ｃａであろう。加えて、■領域抗体は、さらに、例えば、抗−Ｖαｌ特異的又は抗−Ｖβ８特異的抗体のような、Ｖα又はＶ βのサブファミリーの各々に対して特異的な抗−■領域抗体に分けることかできる。これらのサブファミリー特異的抗体は、さらに、例えば、抗−Ｖβ８．１特異的抗体のように、各々のサブファミリーの個々のメンバーのみを認識する抗体にさらに細分類され得る。抗−Ｖα２Ｊα２．３特異的抗体のような、ＴＣＡＲの共有領域と反応する抗体も、また製造することかできる。同様なアプローチかγ及びδサブユニットを含むＴＣＡＲｓに対する抗体を特性化するために使用できる。Ｄ）抗−ＴＣＡＲ抗体の機能的特性ＴＣＡＲ特異的抗体は、また、抗−イディオタイプ、抗−クロノタイプ、抗−メジャーフレームワーク、又は抗−マイナーフレームワーク抗体として分類され得る。二の分類は、抗体か反応する分子部位に基づくというよりは、抗体の機能的特性に基つくものである。歴史的に、抗−イディオタイプ抗体は、抗体の“イディオタイプ”部と反応する抗体能力、即ち、池のレセプターからそれを特異的にするレセプター部により分類されている。これは、抗原と相互作用をもつイムノグロブリンのへテロダイマーの領域である、イムノグロブリンのイディオタイプ領域に類似している。抗−クロックイブ抗体は、個々のＴ細胞クローンにあるＴＣＡＲとのみ反応するので、このように定義される。抗−メジャーフレームワーク抗体は、例えば、すべての産生ＴＣＡＲｓを認識するそれらの能力により区別され、これは抗−Ｃａ領域抗体にあてはまるであろう。抗−マイナーフレームワーク抗体は、Ｔ細胞のサブセットと反応し、その結果、抗−メジャーフレームワーク抗体により検出されるＴ細胞の全集団をサブセットにさらに分割するために使用され得る。これらのサブセットは、次に、抗−イディオタイプ抗体によりさらに細分され得る。診断又は治療薬として有用な抗体は、これらの型のあらゆるＴＣＡＲ特異的抗体から構成することかできるか、いくつかの型はそれらか使用される状況に依存して、成る型のものか他のものよりも一層有効であることか期待される。例えば、抗−クロックイブ抗体は単一のＴ細胞クローンの過剰増殖により特徴づけられる疾病状態において治療のために使用される。しかしながら、抗−クロノタイプ試薬は唯一のＴ細胞クローンではないものから生ずるのではなく、少数の異なるクローンから生ずる疾病を治療するためには好ましい試薬ではない。加えて、抗− クロノタイプ試薬は、一般に、−人の患者にのみ有効である治療プロトコールに対して有用である。その結果、同じ疾病状態にある複数の患者に存在する少数の疾病特異的クローン（しかし、恐らくはヘテロＭＨＣ抗原）と反応する抗−■領域特異的又は抗−マイナーフレームワーク特異的試薬は、好適な治療薬である。この抗体は、個々の患者ではなくて、患者のサブグループ全体を治療するために使用される。ＴＣＡＲｓにおいて使用される種々のサブユニット鎖の種々の領域に対する一定数の遺伝子セグメントか存在するから、これらのセグメントのそれぞれによりコードされたポリペプチドに特異的な抗体の限られたレバトリーか生成され、そして診断及び／又は治療のために使用し得る。抗体の選択は、第一義的に、特定の疾病と相関するＴＣＡＲにより使用される遺伝子セグメントに依存する。かかる抗体の使用は、しかしなから、この遺伝子セグメントによりコードされるペプチドを使用すると、正常のＴＣＡＲ８との交差反応を生じうる。診断アッセイにおいて、疾病に相関するＴ細胞クローンは比較的に高濃度で存在するから、この交差反応性はアッセイの正確さの妨げにはならない。抗体療法において、この交差結合は正常のＴ細胞のいくつかを涸渇させる。しかしながら、この涸渇は、Ｔ細胞の小さなサブ−集団のみか影響されるのであろうから、患者の免疫系を傷つけることは考えられないずれのＴＣＡＲ特異的抗体も、変成ＴＣＡＲポリペプチド又は生細胞中に存在しているとおりの非変成ポリペプチドを認識する能力によって特徴付けられる。使用される診断方法に依存していずれの型の抗体も有用であるか、治療上有効である抗体については、それらは患者の免疫系を通じて循環する細胞に存在する完全な、非変成レセプターと好適に反応する。ｅ）イソタイプの特性り述の特性に加えて、イソタイプの抗−ＴＣＡＲ特異的抗体も重要である。異なる臨床適用に対して、特異的イソタイプの抗体は、１の異なるイソタイプよりも好適であり得る。例えば、ＩｇＧ２ａイソタイプは細網内皮系細胞のＦｃレセプターと反応し、他のイソタイプのものよりは、より簡単に循環から除かれ、牌臓に隔離される。標的細胞と反応するかかる抗体は、活性な疾病部位から標的細胞を一１効率的に除去させることかできる。加えて、あるイソタイプ（ＩｇＧ２ａのような）は、他のものよりも抗体依存性細胞の細胞毒性反応においてより効率的である。一般に、ＩｇＧイソタイプの抗体は、より強力な結合親和性を育するから、１ｇＭイソタイプのものよりも好ましい。所望のイソタイプの抗体は、当該イソタイプを選択するために企図されるＥＬＩＳＡアッセイにより潜在的抗体をスクリー二：／グすることにより選択され得る。例えば、もしＩｇＧイソタイプの抗体を選択することか望ましいならば、ヤギの抗−マウスＩｇＧ　ＦＣ特異的抗体て固相をコーティングすることができる。成るイノタイプの抗体か与えられると、そのイソタイプを異なるイソタイプに転換することもできる。この転換を達成するための多くの方法か当業者に知られている。例えば、イソタイプの転換は、あらゆるイソタイプのクラスを含むヤギの抗−マウス抗体でコーティングされた磁気ビーズ（スーパー常磁性酸化鉄粒子、アドバンストマグネチック社から購入したＢｉｏｍａｇビーズ）を使用して、当該イソタイプを繰り返し選択することによりなし得る。イソタイプをＩｇＧ　１からＩｇＧ２ａに転換する際に、例えば、コーティングされた磁気ビーズのＩｇＧ２結合部位は、当初、ＩｇＧ２ａイソタイプの不適切な抗体でブロックされている。異なるイソタイプの抗体を産生ずるすべての細胞は、次いでビーズに結合され、磁気的に除かれ、［ｇＧ２ａイソタイプを産生ずる細胞に富んだものを生ずる。これらの細胞は次いで希釈を限定してクローン化することかでき、そして、市販のＥＬＩＳＡアッセイにおける抗−イツタイブ試薬を使用してＩｇＧ２ａ産生クローンか同定できる。ｆ）抗体のヒト適用化抗体は、限定されるものではないか、ウサギ、マウス及びラットを含む多くの異なった動物宿主で産生ずることかできる。これらの抗体がヒトにおいて治療上使用されるとき、それらは外来のものとして異なる程度に認識され、免疫応答が患者で生ずる。この問題を解決するための一つの方法は、抗体処理に加えて患者の免疫を抑制することである。他の方法は、マウスの可変部領域とヒトの定常部領域を結合するキメラ抗体分子を産生ずることである。かかるキメラは、非キメラ抗体よりも一層弱くマークされた免疫応答を生ずる。その他の手法は、抗体の“ ヒト適用化（ｈｕｍａｎｉｚｅ）”をするための組換えＤＮＡ手法を使用することである。このヒト適用化抗体は、抗原認識部位のために必要とされる高頻度可変領域を保持しているか、可変領域のフレームワーク領域を含む他の全ての領域はヒト起源のものである。これらのヒト適用化抗体は、それらか免疫応答の効果を最小にする点て免疫治療にとって好ましい。これは付随する免疫抑制を低下させ、そして、例えば、慢性疾患の状態又は繰り返し抗体治療を要する状態において、増大した長期間の有効性をもたらす。ｇ）抗体フラグメント及び複合体疹断又は疾病の免疫療法において全抗−ＴＣＡＲ抗体を使用する二とに加えて、抗体フラグメントも使用し得る。Ｆ　（ａｂ’　）２、Ｆａｂ　又はＦａｂフラグメントのようなフラグメントは、ペプシン又はパパインのような酵素及び当分野で日常知られている還元剤により製造することができる。これらのフラグメントは、親分子に存在する抗原結合領域を保持する。これらの型の分子も、可変部領域か結合され、単鎖ポリペプチドとして発現される組換え手法により製造することかできる。抗体分子又はそれらのフラグメントも免疫複合体として製造できる。抗体部分に加えて、これらの複合体は、毒素、細胞毒性化合物又は命名しうる二、三の核種であってもよい他の活性基を有する（継続米国特許出願、　０７／２２９゜２２８号、　１９８８年８月５日出願）。抗体は１、二のように、関係する特異的疾病部位に対する活性毒素又は細胞毒性化合物を標的にするために使用され得る。疾病の治療免疫系を含む疾病の治療の１つのレベルは、シフ０スポリンＡのような免疫抑制薬剤で全体の系をモジュレートする二とである。しかしながら、この型の治療は系における現実の欠損に特異的でなく、細胞毒性の問題及び長期間の有効性の問題か生ずる。Ｔ細胞は多くの異なるＴ細胞が介在する疾病において影響するか、他のレベルの治療は全Ｔ細胞集団をモジュレートすることを含む。これは広範囲の免疫抑制療法よりも一層特異的であるけれとも、これは依然として、Ｔ細胞の疾病サブセットの心身に有害な作用の消失とともにＴ細胞の役に立つ機能をも消失する非特異的療法である。この梨の療法は、同種移植拒否の治療において、全てのＴ細胞に存在するＣＤ３／Ｔ３複合体と相互作用を有する、○ ＫＴ３抗体の使用により示される。ここで好ましい免疫療法は、実質的に疾病に関連するＴ細胞のみに影響し、他のいかなるＴ細胞にも影響しないものである。疾病特異的Ｔ細胞は、特異的ＴＣＡＲｓの発現により確認される。こうして、種々のレベルの免疫療法は、全Ｔ細胞集団を疾病に関連するＴＣＡＲｓの発現により疾病関連のＴ細胞のサブセットに細分することにより発展させることができる。抗一定常部ＴＣＡＲｓに基づく免疫療法は、抗−ＣＤ３免疫療法よりも特異的なものではない。なぜならば、いずれの療法もＴ細胞の全集団に影響するからである。しかしながら、抗−可変ＴＣＡＲサブファミリー試薬（例えば、抗−Ｖｃｅ）に基づく免疫療法は、ＴＣＡＲ可変部サブファミリーを発現するＴ細胞のサブセットのみを標的とし、結果として、より特異的である。この特定のＶβ遺伝子セグメントを発現するＴ細胞のみが影響されるので、全Ｔ細胞集団をＶβ１８．１のような特定のＶ領域遺伝子を発現するものにさらに細分することにより、一層の特異性が得られる。付加的な特異性は、他のＶ、Ｄ、ＪＳＤＪ、ＶＪ等の特異的免疫療法を使用することにより得られる。このように、好適な免疫療法は、実質的に疾病に関連するＴ細胞のサブセットのみに影響し、疾病と関連しないＴ細胞及びその機能を損なわないものである。それ程好ましいものではないが、患者の免疫系が傷つけられないならば、疾病には関連しないＴ細胞に悪い影響を与える免疫療法も許容しうる。免疫療法についてここで行なった議論は、抗体を使用する好適な診断方法及び抗体を使用する疾病の治療及び進行をモニターするために企図された方法にも適用される。最も特異的な疾病の診断、治療及びモニター法を発展させるために、Ｔ細胞の集団を疾病に特異的であるものに細分することが必要である。これは、ＴＣＡＲの発現を分析し、どれか疾病に関係するのかを検出することによりなされる。これを行う好ましい方法は、ＴＣＡＲ発現マトリックスを発展させることによるものである。マトリックスにおける最初の要素は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）を含む。多くのＴ細胞仲介疾病は、成る種のＭＨＣ分子の発現と相関する。このため、疾病は異なるＭＨＣ分子を発現するサブセットに細分することかできる。マトリックスの次のレベルは、とのβ鎖可変部ＴＣＡＲ５か異なるＭＭＣサブグループで発現されるのかを決定することである。このことにより、それぞれのＭＨＣサブグループを他の区分にさらに細分することがおこなわれる。マトリックスにおける次のレベルは、どのα−鎖可変部ＴＣＡＲｓか発現されているかを決定することである。ＶＪ、Ｖβ及びＭＨＣの組み合わせは、（ＭＨＣ＋Ｖαβ）グループの一層の細分化を生ずる。特異的り及び／又はＪ　ＴＣＡＲ遺伝子セグメントの発現を分析すれば、さらに一層の細分かなされる。疾病相関はいずれのレベルのマトリックスにおいてもなし得るが、より多くレベルか分析されればされる程、相関はより特異的となるであろう。診断、治療及びモニター戦略はマトリックスのいずれのレベルにおいても発展させ得るか、再び繰り返すと、多くのレベルを使用する程、より特異的な方法か生ずる。マトリックス内に余りに多くの異なるレベルを設けると、細分の究極の程度は単一の個人レベルにおいて有効であるにすぎない相関を確認することになり、唯一の個人にとってのみ利益のある治療法を生ずるという不都合かある。このため、マトリックスの中間レベルが、疾病と完全に十分な相関を生じ、そして、その疾病を有する種々のサブグループの患者を診断し、治療し、又はモニターする際に依然として有効であることが確認される。以下に実施例として述べるが、発明の範囲を限定するものとして考えられるべきではない。実施例１ヒトＴ細胞しセプターＶβ遺伝子冬型本実施例ではヒトゲノムのＶβ断片に関する種々の制限断片長条型（ＲＦＬＰｓ）の同定を述べる。本実施例に記載された内容のいくつかは、１９８８年４月１日に出願された米国特許出願ＮｃＬ１７６７０６及びＣｏｎｃａｎｎｏｎ　ｅｔ　ａｌ、（１９８７）　Ｊ、　ＥＸｐ、　Ｍｅｄ　１６５．　ｐ、１１３０−１１４０に記載されており、これらは、参照文献に含まれている。ＤＮＡ標品高分子量ＤＮＡは近親結婚の子孫に由来しクラスエ及びクラス■のＭＨＣ抗原かホモ接合の（Ｇａｔｔｉ　ａｔ　ｅｌ、（１９７９）　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ１３．３５）　３０のリンパ芽細胞セルライン（ＬＧノリーズ）から単離された。６９の付加的な独立した個体のリンパ芽腫セルライン由来のＤＮＡ標品は、パリに本部を置く遺伝子マツピングの為の国際機関であるＣ　Ｅ　Ｐ　Ｈ（Ｃｅｎｔｒｅ　ｐｏｕｒ　Ｌ’　Ｅｔｕｄｅ　ｄｕ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ＋ｓｍｅＨｕｍａｉｎ）の好意により供給された。いくつかの付加的なセルライン及びいくつかの組織標品に由来するＤＮＡも調へられた。Ｃβ遺伝子の再配列はこれらいずれのＤＮＡ標品においても見出されサブファミリーＶβｌからＶβ１４のヒト■β遺伝子断片の一部列）及び図３　（アミノ酸配列）に示されたものに対応するサブクローンから単離された。サブファミリー５および７に関しては２つの異なるサブファミリーメンバーに対応するプローブか用いられた。Ｖβ特異的配列を含有するゲル精製されたインサートはα−［”Ｐ］三リン酸を用いたランダムブライミング（Ｆｅｉｎｂｅｒｇ、　ｅｔ　ａｌ。（１９８４）　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１３７．　ｐ、２２６）によって５ＸｌＯ’から１×１０’ｃｐｍ／μｇまでラベルされそれ以上精製されることなく用いられた。ササンプロットゲノムＤＮＡの制限酵素による切断は酵素製造業者か特定する条件のもとで行われた。セルラインからのＤＮＡの場合には、ｌμｇの反応混合液か付加的なｌμ ｇのλＤＮＡと同時に切断する能力をテストすることによって、反応か完全に行なわれたかとうかをモニターした。５−１ＯμｇのＤＮＡかトランスファーされたゲルのル−ンあたりにロードされた。プロッティングはＧａｔｔｉナイロン膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、　ＣＡ）に対して行われた。それぞれのバッチのハイブリダイゼーションか直接比較できるようにすへてのＶβ遺伝子のハイブリダイゼーションの際、同一のプロッティングがなされた。あるプロッティングは、２０プロ一ブ以上のハイブリダイゼーションに有用であった。ハイブリダイゼーションは１２−１５時間３７°Ｃで、５０％ホルムアミド、５　Ｘ５ＳＣ（ＩＸＳＳＣは０．１５Ｍ　ＮａＣ１１０，０１５Ｍクエン酸ナトリウム）０゜０２Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６，７１００ｕｇ／［１１１剪断変性鮭精子ＤＮＡＰ、０．５％脱脂粉乳、１０％デキストラン硫酸、１％ＳＤＳ、１ −２　ｎｇ／ｍｌプローブからなる反応液中で行われた。フィルターは２ＸＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳ中６０°Ｃで洗浄された後、１２〜１２０時間Ｋｏｄａｋ　ＸＡＲ−５Ｘ線フィルムに露出された。以後のバッチのハイブリダイゼーションに供する為、プローブは室温で１５分間０．０ＩＸＳＳＣで２度洗浄することにより除去された。ヒトＶβ遺伝子断片サブファミリーの相対長ヒトＴ細胞抗原しセプターＶβ遺伝子サブファミリーＶβ１からＶβ１４までのそれぞれを表わすプローブは、１００の無関係個体由来のジャームラインＤＮＡにハイブリダイズされた。これらの個体（ＬＧシリーズセルライン）のうち３０に関して４つの異なった制限酵素を用いてこのハイブリダイゼーション分析か行なわれた。非近文系のヒト集団の多型によってもたらされる解釈の問題かなくなるので、これはより正確に種々のＶβ遺伝子断片サブファミリーの長さの測定を可能とする。図４に示されるように１４のＶβサブファミリーは少なくとも４８のＶβ遺伝子断片を含有する。数は小さく、もっとも大きなものは７つのメンバーを含んでいるか、マウスと異なり、いくつかは単一メンバーから成っていた。一般には、Ｗｉｌｓｏｎ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ、（１９８８）　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　１０１ｐ、　１４９−１７２を参照。ＣＤＮＡライブラリー中の■β遺伝子発現の統計学的分析によれば、発現されたヒト■β遺伝子レパートリ−は９５％の信頼性で≦５９の遺伝子であると概算されている（Ｃｏｎｃａｎｎｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８６）Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８３．６５９８）。ハイブリダイゼーションによりユニで同定された４８の遺伝子はこの数に近似しているか、１ｋｕｔａ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８５）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８２．７７０１に記載された■β６サブフアミリーの３つの追加のメンバー、およびサブファミリーＶβ１５、■β１６、■β１７およびＶ β１８に含まれるメンバー（合計で少なくとも８つのメンバー）（Ｔｉｌｌｉｎｇｈａｓｔ　ｅｔツム中の■β遺伝子の総数は発現遺伝子の統計学的分析により概算された数を越えると思われる。ハイブリダイゼーションにより検出された■ β遺伝子セグメントの一部は、生産的に再配列され得ないか、または成熟Ｔ細胞の集団中で転写されない偽遺伝子に相当するだろう　（Ｓｉｕ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８６）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　Ｉ６４．１６００）。かくして、これらの遺伝子セグメントは末梢リンパ球由来のｃＤＮＡライブラリー中に現れないだろう。 ■β遺伝子セグメントと関連した多型Ｖβ遺伝子セグメントと関連した多型の量をさらに評価するために、４種の異なる制限酵素で消化した３ｏの細胞系の各々からのＤＮＡを、■βｌないしＶβ１４遺伝子セグメントサブファミリーのそれぞれのプローブにハイブリダイズさせた。表Ｉはこのパネル内の個体間の多型的差異を検出したプローブ／酵素の組合わせを示す。これらの多型は分析に用いた制限酵素に特異的であり、異なる個体からのＤＮＡでは反復パターンが観察された。このような多型性は試験した１４の■β遺伝子セグメントサブファミリーのうち１２と関連することか判明した。（本頁以下余白）表１ヒト■β遺伝子セグメントサブファミリー中の多型の発生＋　ブフＴ　Ｅ　リ−Ｅｃｏ　Ｒｘ　Ｂａｎ　ＨＩ　Ｈｉｎｄ　エエＸ　Ｂｇｌエエ（＋）　３０の無関係の個体からのＤＮＡを４種の異なる制限酵素で消化し、１４の■β遺伝子セグメントサブファミリーを表すプローブでプロットしたときに多型を検出したプローブ／酵素の組合わせ。 ■β３とＶβ６サブフアミリー中の多型は、本文に記載するように、単一の細胞系ＬＧ−２２とＬＧ−４１に特異的である。（−）多型を検出できなかったプローブ／酵素の組合わせ。数種の異なる酵素の多望制限部位がいくつかのプローブにより検出された（例えば、Ｈｉｎｄ　ＩＩＩおよびＢｇｌ　ＩＩを育する■β２．Ｂａｍ　ＨＩ　、　Ｈｉｎｄ　ＩＩＩおよびＢｇｌ　ＩＩを有する■β８；　ＢａｍＨｌおよびＢｇｌ　＋＋を有するＶＩ３１１；　Ｂａｎ　ＨＩおよびＨｉｎ、ｄ　Ｉｌｌを有する■β１２）。３つの多型性はこのパネル内で相対的に共通した対立遺伝子に関係していた。大抵の■βプローブの場合、１つの主要なハイブリダイゼーションパターンか第二のパターンを示す少数の個体にだけ観察された。小さいパネルではこれらの変異型かめったにないために、多くの場合、二対立遺伝子多型を規定するのに必要な最低３つのハイブリダイゼーションパターン（すなわち、ＡＡ、ＡＳおよびＢＢ）を観察すること、またはあまり一般的でないこれらの多型の分離を証明するための情報を与えるファミリーを見つけ出すことは難しいと分かった。これらの多型性に関して、冬型性■β遺伝子セグメントサブファミリーのそれぞれについて観察された種々のハイブリダイゼーションパターンの頻度を表ＩＩに示す。（本頁以下余白）二種類のプローブ／酵素結合体（Ｖ　８　／Ｂａｍ　Ｈｌ及び■β１２．’ＢａｍＨ＋）か同し多型Ｂａｍ旧部位を検知するように思われる。ＶＢ２及び■β１１プローブの両者にハイブリダイズするコスミドクローンのその後の制限マツピングは、これらのプローブか単−多型ＢａｍＨ１制限部位の側面にあるＶβ遺伝子にハイブリダイズすることを二つの多型であって、各遺伝子座（ＶＢ２　／　ＢａｍＨＴ及びＶβ１１／　ＢａｍＨＩ　）の二つの対立遺伝子の分離と一致する最小限の三つのハイブリダイゼーションパターンを示すものを分離のために試験した。ＶＢ２及びＶβ１１プローブか多数の三世代ファミリー（その１つは図５に示す）からのＲａｍＨｌ−消化ゲノムＤＮＡ　と配列的にハイブリッドした。このゲノム領域からのマーカーの情報提供能を高めるために、このファミリーからのＢｇｌＩＩ−消トした）多型の分離を、また試験した。Ｖβ８プローブは、それをＶＢ２．２遺伝子セグメントを含む３．３ｋｂの不変のバンド及びＶＢ２．１遺伝子セグメントを含む２３又は２．Ｏｋｂの多型バントて強力（Ｉ　Ｘ　５ＳＣ１０，１％ＳＤＳ、６５°Ｃ）に洗浄したとき、二つまたは三つのバンドとハイブリダイズした。１００個の無関係個体の分析において、２３−ｋｂ対立遺伝子が頻度４６．４％、２．０−ｋｂ対立遺伝子か頻度５３．５％で生じた。Ｖβ１１プローブは、　１００個の無関係個体における＋２ｋｂの不変バンドと２５ｋｂおよび／または２０ｋｂの多型バンドにハイブリダイズした。２５− ｋｂ対立遺伝子か頻度４７．４％、２Ｏｋｂ対立遺伝子か頻度５２．６％で生じた。Ｃβプローブは、同じパネルの個体でｌ０ｋｂまたは９．Ｏｋｂのバンドにハイブリダイズした。１ｏｋｂ対立遺伝子は、頻度５５．９％、９ｋｂ対立遺伝子は頻度４４．１％で生じた。このファミリーのダイアグラムおよびＶＢ２．ＶＢ１１及びＣβプローブとのハイブリダイゼーションにより得られた結果は図５に示した。ＶＢ２およびＶβ１１遺伝子来における対立遺伝子間の結合不均衡上記の三つのプローブ、ＶＢ２．　ＶＢ１１のＣβにより創生されたハブロタイブは、次の遺伝子分離のための優れた情報提供マーカーである。なぜならば、各遺伝子座の対立遺伝子は頻度がほぼ等しく、したかって、これは高頻度の異系交配したヒト個体群（こおける理論的に可能な９個のハブロタイブの各々を見出すことか期待てきる。しかしなから、三つの遺伝子座の少なくとも１つと遺伝子形質的に同形な７０個の無関係個体の分析は、ＶＢ２およびＶβ１１遺伝子座におけるある種の対立遺伝子が優先的に会合し、したがって、結合不均衡であることを示している。これら固体のうちの５２は、二重に遺伝子形質的に同形であり、ハブロタイブを割り当てさせられる。図６は、これら三つの遺伝子座での対立遺伝子頻度にもとずく、このサンプ°リングにおける期待されるハブロタイブの分布及び実際に観察された分布の両者を示している。これら観察されたハブロタイブの分布は、これらハブロタイブの方に高度に片よっており、ＶＢ２２，０−ｋｂ対立遺伝子はＶβ１１２５−ｋｂ対立遺伝子と結合し、ＶＢ２２３−ｋｂ対立遺伝子はＶβ１１２０−ｋｂ　と結合しティる　（Ｐｒｏ、　００１）。ＶＢ２及びＶβＩＩ遺伝子遺伝招来る対立遺伝子は、次の事実により証明されるように、強い結合不均衡である。即ちその事実とはＶβ８遺伝子座における２Ｏ −ｋｂ対立遺伝子と遺伝子的に同形である３０個体のうちの２．６（８７％）個体が、また、期待された７（２３％）個体（Ｐ＜０．００１）と比較して、Ｖβ １１遺伝子座における２５−ｋｂ対立遺伝子と遺伝子的に同形であるということである。逆に、Ｖβ８遺伝子来における２３−ｋｂ遺伝子と遺伝子的に同形である２４個体のうち、２２個体（９２％）は、期待された７個体（３０％）（Ｐ＜０．００１）と比較し７て、Ｖβ１１遺伝子座における２Ｏ−ｋｂ対立遺伝子と遺伝子的に同形である。この非ランダム分布は、また、Ｃβ遺伝子座の対立遺伝子に緩慢に影響している。例えば、Ｃβにおける９−ｋｂ対立遺伝子と遺伝子的に同形の個体の１つのみか、期待される５個体の代りに、Ｖβ８遺伝子座の２３ −ｋｂ対立遺伝子と遺伝子的に同形である人々の間で見られ、Ｃβ遺伝子座の９ −ｋｂ対立遺伝子と遺伝子的に同形であるパネルにおいて、１２個体のうち６個体か、期待された３個体とは対照的に、Ｖβ１１遺伝子座の２５−ｋｂ刻立遺伝子と遺伝子的に同形であった。しかしながら、これら後者の数値は統計的には意味かない（０，１＞Ｐ＞０．５）。この不均衡について、いくつかの解釈かある。その第一の解釈は、対立遺伝子の接近した物理的結合の故、または最近の対立遺伝子の発生故に、遺伝子座か遺伝子視点に非常に接近し得たちのである。ユニで、多数の異なった個体群の代表を含む無関係個体群のパネルにおける個体群の変化において、対立遺伝子の頻度が５０％近くであること、及びＬ記代表の間に同じ対立遺伝子か見出されたことは、この結果か恐らく最近の変異に帰すべきてないとする議論を支持するものである。その第２の解釈は結合を起こさせる遺伝子座を含む領域における組み換えの抑制がありうるとするものである。多型Ｖβ遺伝子セグメント対立遺伝子とフランキング遺伝子座における対立遺伝子との間の組み換えと比率の研究か、この可能性を試験することができた。第３の解釈は、他のものよりも成る種のハブロタイブの存在を有利にするいくらかの選択圧かありうるとするものである。予備的結果は、ＶＢ２、ＶＢ１１及びＣβ遺伝子座のすべてが、＜６００ｋｂサイズの制限フラグメントにマツピングするようにみえるが故に、少なくとも第１の解釈か、観察された不均衡において１つの役割を演じていることを示唆している。多くの結合した多型対立遺伝子が試験された３０個体の中で、パネル中低い頻度であったという事実にもがかわらず、２７の異なったハブロタイブが同定された。（本質以下余白）

【実施例２】本実施例はマウスにおけるＥＡＥと相関するＴ細胞のクローン集団で検出されたＴＣＡＲを記載するものである。またＥＡＥを媒介するこれらのＴ細胞のサブ集団を対象としたモノクローナル抗体治療も記載する。この作業は１９８８年８月８Ｂに出願された米国特許出願２２９．２８８号に記載されており、また１ｒｂａｎ等（１９８８）によりＣｅ１１．５４．５５７−５９２により記載されており、各々を参考のために本明細書に組込む。Ｔ細胞生存およびクローンＭＢＰに応答するＴ細胞、をＫｉｍｏｔｏ等（１９８０，Ｊ、　Ｅｘｐ９ＭＥｄ、　１５２．７５９−７７０）の方法に従って完全フロインドアジュバント中に乳濁したＭＢＰ　２００ｕｇを皮下注射した１０日後に、８週齢の８１０．ＰＬマウスの摘出腋窩りンバ節、鼠けいリンパ節、および大動脈傍リンパ節から単離した。ＭＢＰはＳｍ１ｔｈ（＋９６９．．１．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、１６．８３ −９２）の方法を用いてラット脳から調製した。リンパ節細胞を先ずラットＭＢＰ２０ｕｇ／ｍｌを含有する血清非含有ＨＬ−ＩＶｅｎｔｒｅｘ培地中て３　Ｘ　１０’個／ｍＩの濃度て培養した。５日後、応答したＴ細胞芽を、Ｇ１１ｌｉｓ等（１９７８、Ｊ、１ｍｍｕｎｏ１．１２０．２０２７−２０３２）の方法に従って２０％ｇ／ｍｌラットＭＢＰ　、抗原提供細胞（ＡＰＣ）源としての共通遺伝子照射（３０００ｒａｄ）稗！胞２　Ｘ　１０’個／ｍｌ　、およびコンカナバリンＡ刺激ラット牌細胞から得た１０％上澄みを含有する完全培養基中５　Ｘ　１０５個／ｍｌの濃度で培養した。Ｔ細胞は１２〜１４日おきにＭＢＰ、ＡＰＣおよびＣＡＳて定常的に刺激した。クローンは０．３個／ウェルて９６大平底マイクロプレート中、制限希釈により得た。完全培地は、４．５ｇ／ｌグルコース、２ｍＭグルタミン、１１００ｕ／ｍｌストレプトマイシン、１１００ｕ／ｍｌペニシリン、　５　ｘ　１０−’　Ｍ　２−メルカプトエタノールおよび１０％ウシ胎児血清を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏの変性Ｅａｇｌｅ培地とした（ｃＤＭＥＭ）。Ｚａｍｖ　ｉ　１等（１９８５，Ｎａｔｕｒｅ　３１７．３５５−３５８）の方法を用いて、Ｔ細胞か選択的にＥＡＥを誘導する能力を調べた。受容個体であるマウスには、Ｔ細胞の静脈内注射の直前に低線量で照射（３５０ｒａｄ）　シた。Ｚａｍｖ　ｉ　１等（１９８５，上記）に従ってＥＡＥの臨床重症度についてマウスを評価した。ＭＢＰで免疫化したＢＩＯ，ＰＬマウスの殆どのＴ、細胞はＮ末端ペプチド１− ９ＮＡｃに対抗して反応する。Ｍ　Ｂ　Ｐ　（ＢＭＬ−１，１および３）に特異的な３系統のＴ細胞系を完全フロインドアジュバント内に乳濁したラットＭＢＰで免疫化（２００ｕｇ／マウス）したＢＩＯ，ＰＬマウス（群当り３〜４匹）の３つの群から調製した。ＰＬ／Ｊ　Ｈ−２マウスで得られた以前の結果（Ｚａｍｖｉｌ等、　１９８６．　Ｍａｔｕｒｅ　３２４．２５８−２６０）と合致して、系統はアセチル化Ｎ末端ペプチド、１−９ＮＡｃに対して特異的に増殖することか解り、ＭＢＰへのＢＩＯ，ＰＬ応答におけるこのエピトープの免疫優勢が示された。これらのＴ、細胞はまた、その増殖が抗１−Ａｂモノクローナル抗体により特異的にブロックされる（１０−２．１６．０ｉ等、　１９７８．　Ｃｌ１ｎ、　Ｔｏｐ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、［ｍｍｕｎｏｌ。８１、１１５−１２９）ことからも、［Ａｕクラ２１１分子に均一に制限された。Ｔ、系統は、５　Ｘ　１０％個／マウスの低い用量で静脈内投与した場合、１５〜１９日後に弱く照射（３５０Ｒ）　したマウスにおいてＥＡＥを誘導した。Ｔ細胞ハイブリドーマの調製および検定Ｋａｐｐｌｅｒ等（１９８１，Ｈ，Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１５３．１１９８−１２１４）か以前記載したとおり、ＡＫＲ胸腺腫ＢＷ５１４７にＭＢＰ反応性ＢＩＯ，ＰＬヘルパーＴ細胞芽を融合することによりハイブリドーマを作成した。各々マウス３〜４匹から誘導し、融合前２〜８週間週間基養した独立系統のＴ細胞（ＢＭＬ　１．２および３）を含む３回の別個の融合を行なった。ハイブリッドは、Ｚａｍｖ　ｉ　１等（１９８６，Ｎａｔｕｒｅ、　３２４．２５８−２６０）の方法に従って、天然のＭＢＰおよびＢｌ／ＪマウスにおいてＥＡＥを誘導することが予め解っている合成アセチル化Ｎ末端ＭＢＰ誘導体（ｌ− ９ＮＡｃ）の両方に応答して［Ｌ−２を分泌する能力についてスクリーニングした。簡単に説明すると、ｌＯｓ個のハイブリドーマ細胞を、総容量２５０ｕｌ中の１０”　ＢＩＯ，ＰＬ　ＡＰＣおよび連続希釈抗原に添加した。２４時間後、上澄み１００ｕｌをｌｏＯｕｌｃＤＭＥＭ中５　ｘ　１０’　ＩＬ −２依存性ＨＴ−ｗ細胞に移した。更に２４時間後、細胞をウェル当り１ｍＣ１の３Ｈ−チミジンで６時間パルスした。Ｃｐｍチミジン取り込みを３連培養の平均として計算した。反復培養の標準偏差は常に平均の１０％未満であった。この検定で陽性となったハイブリッドを０．２個／ウェルて制限希釈により２回サブクローニングした。多数のＭＢＰ特性Ｔ、ハイブリドーマを３系統の細胞の各々をＡＥＲ胸腺腫に融合することにより作成した（Ｋａｐｐｌｅｒ等、　１９８＋、上記）。３回の独立した融合で得られた合計て７１のＭＢＰ特異性ハイブリドーマを単離し、その大部分（７１Ｔ、細胞中５９個：８３％）かペプチドｌ−９ＮＡｃに特異的に応答することか解り、内３７個を無作為に選択して後述するようにＴ細胞レセプター遺伝子の分析を行なった。各融合には融合前２〜８週間天然ラットＭＢＰ（１００ｕｇ／ｍｌ）の存在下て継代培養した別のＴ細胞系統（ＢＭＬ−１，２および３）を用いた。Ｚａｍｖ　ｉ　Ｉ等（１９８６，上記）による以前の試験結果と合致して、ペプチドｌ−９ＮＡｃを認識できなかった他の１２ハイブリドーマかマウスではなくラットのＭＢＰ上に存在する１つ以上のエピトープに対抗することか解った。このようなエピトープに対抗するＴ細胞はマウスにおいて非脳炎誘発性であることが解っている（Ｚａｍｖｉｌ等、　１９８６．上記）。サザンプロットおよびノーザンプロット１、Ｖα遺伝子Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃ１ｔｙ、　ＣＡ）製３４０型拡散抽出機を用いて、肝臓およびＴ細胞系統、クローンおよびハイブリドーマからサザンプロット分析用のＤＮＡを調製した。制限酵素消化ＤＮＡｌ０マイクログラムを０．７％アガロースゲル上の電気泳動により分離し、ナイロン膜にプロットし、従来の方法を用いてハイブリダイズした（Ｒｅｅｄ等、１９８５．　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅｓ、　１３．７２０７−７２２１）。最終洗浄は２Ｘ　５ＳＣ１０，１％ＮａＤｏｄＳＯｔ中６５°Ｃで３０分間行なった。ノーサンプロット分析用ＲＮＡの調製は、グアニジンチオシアネート中に細胞を再懸濁し、Ｃｈｉｒｇｗｉｎ等（１９７９，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１８．５２９４−５２９９）の方法に従ってＣｓＣ１クッションを通して遠心分離を行なった。ポリ（Ａ）＋ＲＮＡはオリゴ（ｄＴ）セルロースカラム上で選択し、１％アガロースゲル上で１０ｕｇを電気泳動した。プロッティングハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件はサザンプロットの場合と同様とした。上記した遺伝子セグメントの各々のＭＢＰ　ＴＨハアイブリドーマにおける相対的使用を測定するために、更に３６個のＴ。細胞をノーザンプロットおよびササシブ０ツトにより分析した。これらのＴ、細胞のＤＮＡのＣαプローブを用いたササンプロット分析により、Ｖα２遺伝子を発現することかわかった全てのハイブリドーマにおいて、制限酵素Ｈｉｎｄ　ｍによる消化による−３．５ｋｂ、およびＥｃｏ　Ｒ１による消化による−１．７ｋｂの独特の再配列バンドか得られた（データ示さず）。これらのＤＮＡ断片をＶαｃＤＮＡプローブおよびＪα３９オリゴヌクレオチドプローブの両方とハイブリダイズした（データ示さず）。同様にして再配列Ｖα４．２−Ｖα３９遺伝子は、ゲノムプロットをＶαＣＤＮＡプローブおよびＶαオリゴヌクレオチドプローブを用いてプローブした場合に、独特のＨｉｎｄ　ｍ消化による一１４ｋｂバンドおよびＥｃｏＲｌ消化による −０．７ｋｂバンドとして同定された（／？−タ示さず）。ＶαおよびＪα遺伝子セグメントのゲノム配置は知られていないか、Ｖαα発現ハイプリドーマて（Ｖα２．３−Ｊα３０遺伝子か配列するものも含む）かＨｉｎｄ　ｍ制限酵素による消化で同一のサイズのＶ　−Ｊ　ＤＮＡ断片を示すことから（ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩの場合も同様）、全てのこれらのＴ□細胞は同様のＶα２，３およびＪα３９セグメントを使用していることか示唆される。同様の根拠はＶα４発現ハイブリドーマにも適用でき、このため、全てが恐らくは■α４．２およびＪα３９遺伝子セグメントを発現していると結論した。即ち、これらＭＢＰ　Ｔ、ハイブリドーマはＶα２．３またはＶα４．２遺伝子セグメントの何れかをＪ α３９セグメントに転移させたと考えられる。ノーサンプロット分析によれば、これらのＴ細胞は■α２−Ｊα３９またはＶα４−Ｊα３９を約１．７ｋｂのｍＲＮＡとして適切に発現することが示される。ノーザンプロットおよびサザンプロットおよび配列分析の結果の蓄積により、わずか２つのＶαおよび１つのＪα 遺伝子セグメントか、これらの４３ＭＢＰ−特異的Ｔ。細胞における機能Ｔ細胞レセプターをコードすると結論できる（図１）。２、Ｖβ遺伝子３７個の別のＴ、細胞のＶβ遺伝子を、Ｖα遺伝子の場合と同様の方法を用いてサザンプロットおよびノーザンプロットで分析した（結果は示さず）。ノーサンプロット分析によれば合計で２６個のＴ、細胞かＶＢ２およびＪβ２６遺伝子セグメントに対して陽性であることか解った。これらの細胞を制限酵素ＥｃｏＲ［およびＨｉｎｄＩを用いたサザンプロット分析に付したところ、Ｖβ８遺伝子セグメントおよびＪβ遺伝子セグメントクラスターに対するプローブにコハイブリダイズするそれぞれ１．６および９．３ｋｂの共通のＤＮＡバンドか示される（結果は示さず）。これらのＤＮＡバンドはまたＪβ２．６遺伝子セグメントに対するオリゴムクレオチドプローブにコハイブリダイズする（データ示さず）。Ｔ細胞ハイブリダイゼーションの相手であるＢ　Ｗ５１４７はそのＶβ８遺伝子セグメントの３つ全てを欠失しているため、そして、Ｖβ９遺伝子セグメントの全てを含むｃｏｓｍｉｄクローンの詳細な制限地図が入手できるため（Ｃｈｏｕ等、　１９８７．　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＬＩＳＡ　８４．１９９２−１９９６；Ｌａｉ等、　１９８７．　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４．３８４６−３８５０）　、全てのこれらの再配列Ｖβ８バンドはＶＢ２．２遺伝子セグメントを使用していると結論した。例えば、図７の制限酵素地図は１．３ｋｂ　ＨｉｎｄＩＩ［断片上にＶＢ２．１が位置し、同様の９．５ｋｂ　Ｈｉｎｄ　ｍ断片上にＶＢ２．２およびＶＢ２．３遺伝子か位置することを示している。Ｊβ２遺伝子座への再配列は概ね以下の大きさの断片を形成する。ＶＢ２．ｌ、　２−３．５ｋｂ；　ＶＢ２．２．９−１０．５ｋｂ；およびＶＢ２．３．３−４．５ｋｂ０従って、ＶＢ２およびＪβ２遺伝子セグメントを用いた場合のＴＨハイブリドーマの４つ全てにより示される転移９．３ｋｂ　ＨｉｎｄＩＩＩバンド（結果は示さず）は、ＶＢ２．２遺伝子セグメントの使用と合致している。４３個のＴ、細胞の全てをＶＢ８鎖に特異的なモノ′クローナル抗体を用いて蛍光活性化細胞分類機で試験した（Ｆ２３．　ｌ　ｌ　Ｓｔａｅｒｚ等、　１９８５．　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３４．３９９４−４０００）。ＶＢ８鎖は全てのＶβ８再配列Ｔ、細胞の表面では検出できるか、Ｖβ１３転移細胞の表面では検出できないため（データは示さず）、また、これらのＴ、ハイブリドーマのノーサンプロットはＶＢ２およびＪβ２．６のオリゴヌオチドブローブの両方にハイブリダイズするため、ＶＢ２，２遺伝子セグメントはＪβ２．６遺伝子セグメントに生産的に再配列すると結論された。ＶＢ１３−　ＶＢ２．２再記列はサザンプロット分析により、Ｎ７β１３およびＪβ２，２の遺伝子セグメントに対するプローブにコハイブリダイズする２、７ｋｂ　ＨｉｎｄｎＩバントとして同定された（データは示さず）。この２．７ｋｂバンドはノーサ〉・プロット分析によりＶＢ１３およびＪβ２．２遺伝子セグメントを発現する全てのハイブリドーマに存在した。４３個のＭＢＰ特異的Ｔイ細胞は生産的再配列（二おいて２つの■βおよび２つのＪβ遺伝子セグメントのみを使用していると結論された（図１）。１０−ザ２イトメトリー細胞を２　Ｘ　１０’個／ｍｌでリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁し７．５０Ｕ１の一次抗体の入った円錐底の９６穴プレートに５０ｕ　ｌ／ウニ凡て添加した。抗Ｖβ８ネズミモノクローナル抗体Ｆ２３．１（Ｓｔａｅｒｚ等、１９８５．　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３４．３９９４−４０００）およい抗ＣＤ３不ズミモノクローナル抗体５００Ａ、　Ａ２（Ｒｉｃｈｉｅ等、　１９８８．　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１４０．４１１５−４１２２）を１０ｕｇ／ｍｌで用いた。３７°Ｃて３０分間−次抗体とともにインキュベートした後、細胞をＰＢＳて洗浄し、５０ｕｌ／ウエルの１．５０フルオレセインイソチオシアネ−１−（ＦＩＴＣ）コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ中に再懸濁した。２０分間室温でインキュベートした後、細胞をＰＢＳで洗浄し、１％ＦＣ３含有Ｐ　Ｂ　Ｓ　１ｍｌに再懸濁した。蛍光強度の対数を細胞数に関連づけたヒストグラムを、オルト５０Ｈサイトフルオログラフ（５３５ｎｍ緑色バンド通過フィルター、アルゴンレーザー励起４８８ｎｍ）を用いて２　ｘ　１０’個の細胞を分析することにより得た。二重鎖ｃＤＮＡをへｍｅｒｓｈａｍ　ｅＤＮＡ合成システムを用いて６ｕｇのポリＡ＋ＲＮＡから合成した（ＲＰＮ、　＋２５６）。ＡｍｅｒｓｈａｍのｃＤＮＡクローニングシステムを用いて合成ＥｃｏＲＩ　リンカ−を添加し、ラムダｇｔ　１０のＥｃｏＲＩ部位にクローニングすることによりｃＤＮＡライブラリを作成した（ＲＰＮ、　１２５７）。ライブラリには、１−３　Ｘ　１０’の全組換体が含まれ、１１０５ｃｐ／ｍｌの濃度でＣｅ、Ｃβおよび特異的Ｖβ領域プローブを用いてスクリーニングした。最長のｃＤＮＡインサートを有するクローンをＤＮＡ配列決定のためにＭ１３ｍｐ１８のＥｃｏＲ１部位にクローニングした。Ｍ１３ユニバーサル配列決定プライマーまたはＣｅまたはＣβ遺伝子への特異的オリゴヌクレオチドブライマーのいずれかを用いてＳａｎｇｅｒ等（１９７７、Ｐｒｏ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７４．５４６３−５４６７）の方法に従ってジデオキシ配列決定を行なった。全配列は両方の鎖について決定した。１−９ＮＡＣ脳炎誘発性ペプチドに特異的なｌ・つの細胞系統から得た９個のＴ、ハイブリドーマからｃＤＮＡライブラリを作成し、Ｔ細胞レセプターのａ（Ｃｅ）またはｂ（Ｃβ）遺伝子の不変領域に対するプローブを用いてスクリーニングした。１５個のＣｅおよび１５個のＣβのｃＤＮＡクローンを各ライブラリより単離した。（１）　１．Ｏｋｂより長いインサートを所有し、（２）　ＢＷ５１７腫瘍親の再配列へＩαおよび■β遺伝子、Ｖ　ａ　（Ｃｈｉｅｎ等、　１９８４．　Ｎａｔｕｒｅ、　３１２．３ｌ−３５）、ＶＢ１６、　ＶＢ１（Ｂａｒｔｈ等、　１９８５．　Ｎａｔｕｒｅ３１６．１−７）およびＶＢ５（Ｌｅｅ等、＋９８８．　Ｊ、１ｍｍｕｎｉｌ、　１４０．１６６５−１６７５）、に対するプローブにハイブリダイズできないようなりローンの配列を決定した。配列決定し、たインサートは以下のとおり２種類に分類した。（１）恐らくは機能■α またはＶβ領域をコードする、オーブン読み枠内のＶα−ＪαまたはＶβ−Ｄβ ｐ−Ｊべ遺伝子セグメントの参加を含む生産的再配列、および（２）■遺伝子セグメントに伴うこれ等同様の遺伝子セグメントまたは生殖系列３遺伝子セグメントの転写欠損の枠外参加を含む非生産的再配列。７ライブラリから得た生産的ｃＤＮＡ　（ライブラリ当り１〜７クローン）および６ライブラリから得た生産的 βｃＤＮＡ　（ライブラリ当り１〜５クローン）を単離した。分析したクローンの同じ数から単離された全ての生産的クローンは恐らくは生産的再配列を検知するには不十分てあった。７つの生産的Ｖα遺伝子のヌクレオチド配列を図８Ａに示す。結果は、僅か２つのＶα遺伝子セグメント、Ｖα４．２および単一のＪα遺伝子セセグメントα３９のみかこれらＴ、細胞に使用されていることを示している。配列決定したＶαα遺伝子６全全はヌクレオチド段階で同一であった（図８Ａ）。■α２遺伝子セグメントは、２つの別の予め配列決定したＶα２サブファミリーの構成ＩＴＡ３９　（Ｖα２．Ｉ）オよびＴＡ１９　（Ｖ（２２，２）極メチ似テオリ、即ち、それぞれ９３％および９６％似ているため、これを新たに記載し、Ｖ（２２，３と命名する（Ａｒｄｅｎ等、＋９８５．　Ｎａｔｕｒｅ　３１６．７８３−７８７）。配列決定した単一のＶα４遺伝子は前に配列決定されたこのサブファミリーの構成員ＴＡ　（Ｖα４．２）と同一である（Ａｒｄｅｎ等、上記）。サブファミリーはクロスハイブリダイズし、一般的におたがい７５％以上似ている一連のＶ遺伝子セグメントである（Ｃｒｅｗｓ等。１９８１、　Ｃｅ１ｌ　２５．５９−６６）　、図１に示されるＶ（Ｚ２．３おおびｖα４゜２遺伝子の両方で使用されるＪα要素は前に報告されている（ＴＡ　３９　：Ａｒｄｅｎ等、１９８５．上記）。２、Ｖβ遺伝子Ｖα遺伝子について記載した方法を用いてペプチド１−９ＮＡｃに特異的な６個のＴ、ハイブリドーマから得たＶβ遺伝子について行なった。ＤＮＡ配列分析の結果によれば、６個のＶ遺伝子のうち５つか同様のＶＢ２．２およびＪβ２．６遺伝子セグメントを使用しており、６番目のものは、異る遺伝子セグメント■β １３およびＪβ２．２）を使用している（結果は示さず）。Ｖβ８遺伝子の内少なくとも４個は、独特の連結ヌクレオチド配列を有しているため、独特の転移から生じたものであった。５番目は独特の別の再配列を示す別のクローンから誘導された。Ｖβ８特異的モノクローナル抗体ｆ２３．１はＮ末端ＭＢＰベブチ）”１−９ＮＡｃに特異的なＶＢ２．２７Ｈの抗原認識のブロックにおいて極めて効果的であることか解っている（結果は示さず）。このようなデータと合致して、Ｆ２３．　ｌ抗体の添加により、ＭＢＰペプチドｌ−９ＮＡｃおよびｐＭｌ−２０に応答するＶＢ２．２発現ハイブリドーマＰＬ１２７、６およびＰＬ４１４によるインターロイキン−２（［Ｌ−２）放出の実質的に完全な抑制か生じた（≧９８％抑制、表ＩＩＩ）。抗原認識の完全な抑制に要したＦ２３．　ｌ抗体の最小濃度は約３５ｕｇ／ｍｌであり、この濃度では、抑制の水準は刺激抗原の量の３００倍低下に概ね等しかった（データは示さず）。この抑制は、ＶＢ８鎖ではなくＶＢ１３を発現したハイブリドーマＰＬＩ５４およびＰＬ４１３による顛著なｒＬ− ２抑制か示されなかった（≦８％）ことから、ＶＢ８鎖を発現するハイブリドーマに特異的であった（表ＩＩＩ）。更に、Ｖβ８陰性ＭＢＰ特異的ＳＪＬ／ＪＴ細胞ハイブリドーマ５３１７．１により顛著なＩＬ−２抑制は示されなかった。（本質以下余白）表Ｉ１１　（続き）ａ　ＴｏハイブリドーマはラットＢＭＰ注射ＢＩＯ，ＰＬまたはＳＪＩ、／Ｊマウスから単離した。リンパ節細胞は、リン酸塩緩衝食塩水中に溶解し、結核Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｆｖｏ、　Ｄｅｔｒｏｉｔ、　Ｍｌ）　４ｍｇ／ｍｌ添加完全７０インドアジュバント等量に懸濁した５０ｕｇＭＢＰペプチドの皮下注射後１０日に個々のＢｌＯ，ＰＬまたは（ＢＩＯ，ＰＬＸＳＪＬ／Ｊ）ＰＬマウスの腋窩リンパ節および鳳けいリンパ節から単離した。ＢＩＯ，ＰＬマウスにはＮ末端ペプチド１−９ＮＡｃ、　ＰＬマウスにはペプチドｌ−９ＮＡｃ＋　ＳＪＬ／Ｌ（Ｈ −２）ＭＢＰ特異的Ｔ、細胞ｐＭ８７−９８　（Ｋｏｎｏ等、１９８８．　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、新聞発表）により認識されるＣ末端ペプチドを注射した。ｂＴ細胞レセプター遺伝子は表ｒに示すものである。Ｖα２は再配列遺伝子セグメント■アルファ２．３−Ｊα３９、■α４は遺伝子’ｃ：’）’ｊ　ン）Ｖ（Ｚ２．３−Ｊ　α３９、ＶＢ２はＶＢ２．２／Ｊ　Ｆ２．６　、ソしてＶＢ１３はＶβＩ３／Ｊ　２．２に対応する。ハイブリドーマ５ＪＬ７．１の使用する厳密なＴ細胞レセプター遺伝子は不明であるか、Ｖβ８β鎖はＦ２３．１モノクローナル抗体を用いた蛍光フロー血球計算による測定では細胞表面では発現しない。これはＳＪＬ／′ＪマウスゲノムかＶβ８遺伝子の全てを含む既知のＶβ遺伝子の約半分を欠失しているという事実と合致する（Ｂｅｈｌｋｅ等、　１９８６．　Ｍａｔｕｒｅ　３２２．３７９−３８２）。ｃＮ末端ＭＢＰペプチド１−９ＮＡｃおよびｐＭｌ−２０を最終濃度それぞれ１０ｕＭおよび０．２ｕＭで使用し、Ｃ＊端ＭＢＰペプチドはＩＯｕＭの濃度で用いた。精製蛋白誘導体（ＰＰＤ）を１１００ｕ／ｍｌの濃度で使用した。ｄＴ細胞は３５ｕｇ／ｍｌのＦ２３．１抗体（抗Ｖβ８）または３４−５０８３抗体（抗Ｄ’　ＬｉｔｔｏｎＢｉｏｎｅｔｉｃｓ、Ｃｈａｒｌｅｓｔｏｎ、ＳＣ）で抗原添加前３０分処理した。Ｆ２３．　］抗体はＶＢ２鎖を認識する。３４ −５−８Ｓ抗体はＢＩＯ，ＰＬ細胞の発現しないｄハブロタイブのクラス１分子を認識する。ｅ　ハイブリドーマに対するＨＴｄＲ取り込みはハイブリドーマ培養から得た上澄みを移した後ＩＬ−２依存性細胞系統ＨＴ−２の増殖を示した（図６の凡例参照）。リンパ節細胞に対するＨＴｄＲ取り込みは４　Ｘ　１０’　リンパ節細胞および抗原を含有する４日間初期培養の１８時間パルスを示した。各場合につき以下のとおりバックグラウンド計数値を差し引いた。ハイブリドーマ、抗原を添加しない各ハイブリドーマ細胞の培養に対するＣｐｌｎ　；リンパ節細胞、３５ｕｇ／ｍｋ　Ｆ２３、］抗体で処理したＳＪＬ／Ｊ　ＩＪリンパ球培養に対するｃｐｍ　、後者の対照群はＦ２３．　］抗体による増殖の１５％−２５％非特異的抑制に対して補正した（Ｓ、ＩＬ／Ｊ　リンパ球はＶβ８陰性であり、従ってＦ、　２３．　］抗体により特異的な態様では認識されない。ｂ）参照。バックグラウンド値はハイブリドーマでは２６．０００〜３４．０００であり、リンパ節細胞では２．０００〜１３．０００であった。各位は６セツトの３連培養の平均であり、ＳＥＭは平均値の１０％未満であった。各々の場合において、顕著な増殖は対照群のハトチトクロームＣペプチドＤＡＳｐでは起こらなかったため（ｃｐｍ＜２０００．データは示さず）、Ｔ、ハイブリドーマから示されたペプチドへの増殖は抗原特異的であった（Ｗｉｎｏｔｏ等、１９８５．　Ｎａｔｕｒｅ　３２４．６７９−６８２）。ｆ　抗体処理による増殖の％抑制は以下のとおり計算した。 ■００％Ｃ（抗体非存在下ｃｐｍ−抗体存在下ｃｐｍ／抗体非存在下ｃｐｍ）ＭＢＰペプチドｌ−９ＮＡｃに応答してＴ、細胞のほぼ９０％がその表面にＶＢ２鎖を発現したため、ＭＢＰペプチド注射マウスから得たリンパ節細胞の増殖の抑制のためにはＦ２３．　］抗体を用いた。このようなリンパ節細胞はｉｎ　ｖｉｔｒｏでのペプチドによる再刺激５日間の後に照射（３５０Ｒ）ＢＩＯ，ＰＬマウスに注射し返した場合に選択的にＥＡＥを輸送することができる（データは示さず）。ＢＩＯ，ＰＬナウスに精製蛋白誘導体（ＰＰＤ）か完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）中ＭＢＰペプチド１−９ＮＡｃを２ＱＯｕｇ注射し、１ｏ日後、排液したリンパ節を摘出し、Ｆ２３．　］抗体の存在下または非存在下、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養した。表ＩＩＩは４つの異る実験を示す。ＭＢＰペプチド１−９ＮＡｃに応答したＢ１０．ＰＬリンパ球による増殖は、Ｆ２３．　］抗体の添加により実質的に排除された（平均抑制８８％）のに対し、ＰＰＤ対照群抗原に大しては抑制は僅かであった（平均抑制８％）。この抑制の特異性を更に検討するために、ＰＬマウス（Ｂ１０．ＰＬ　Ｘ５ＪＬ／Ｊ）にＭＢＰペプチド１−９ＮＡｃおよび９Ｍ８７−９８を注射した。後者のペプチドはＥＡＥを誘発できるＦｌおよび５ＪＬａ／Ｊ（Ｈ−２”）ＴＨ細胞により特異的に認識される。ＳＪＬ、　Ｊゲノムは、全てのＶβ８遺伝子セグメントを含むＶβ遺伝子セグメントのほぼ５０％を欠失しているため（Ｂｅｈｌｋｅ等、　＋９８６．　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８３．７６７−７７１）、全てのＳＪＬ／Ｊ　Ｔ細胞はＶβ陰性である。ｉｎ　ｖｉｔｒｏで、ＭＢＰて免疫化したマウスより得たＢＩＯ，ＰＬＴ細胞はペプチドｐＭ８７−９８に応答せず、逆にＭＢＰで免疫化したＳ　Ｊ　Ｌ　、／　Ｊマウスから得たＴ細胞はペプチドｌ−９ＮＡｃに応答しない（Ｚａｍｖｉｌ等、　１９８６．　Ｎａｔｕｒｅ　３２４゜２５８−２６０．データは示さず）。表ＩＩ＋は、３つの別個の実験において、Ｆ２３．抗体による培養Ｆｌリンパ節細胞の処理により、１−９ＭＡｃペプチドへの応答はほぼ完全に抑制されたかぐ平均抑制〉１００％）、９Ｍ８７−９８ペプチドへの応答に対する作用は僅かのみてあった（平均抑制御％）ことを示している。Ｆ２３．　］抗体はｉｎ　ｖｉｔｒｏでＶβ８陽性脳炎誘発性Ｔ８細胞の増殖を完全にブロックすると思われたため、この抗体かｉｎ　ｖｉｖｏてＥＡＥの誘導を抑制する能力を検討した。Ｔ細胞のＶβ８陽性サブセットの特異的欠失をｂｌｏ、ＰＬマウスで達成するための条件を確立した。Ｆ２３．　］抗体を約５００ｕｇ腹腔内投与することにより、７２時間以内に牌土、リンパ節、末梢血液および胸腺からＶβ８陽性リンパ球の実質的排除か得られることか解った。図９の下半分は輿望的な実験で得られた代表的なデータを示す。牌細胞をＦ２３．　］抗体の腹腔内注射後の種々の時点て採取し、Ｆ２３゜ｌ抗体およびフルオレセインイソチオシアネート（ＦｆＴＣ）コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧを用いて定量的蛍光フロー血球計数に付した。２４時間以内に個々の細胞におけるＶβ８発現の水準は約５倍減少した（図９Ｄ参照）。７２時間迄に検知可能な■β８陽性牌細胞の数は実質的にゼロとなり（ＦＩＴＣ抗体のみによるバックグラウンド染色とは育意差なし、図９Ｄ）、二の欠乏は注射後７８目よて完全でありつつけた（図９Ｅ）。別の実験において、この欠乏は抗体の投与後４週間まで実質的に完全でありつづけたことか解っている（データは示さず）。同様の欠乏か末梢血液、リンパ節、および胸腺から得られたＴ細胞に対しても認められ、　Ｌ３Ｔ４÷およびＬｙｔ−２＋Ｖβ８陽性Ｔ細胞は同等に影響を受けた（データは示さず）。現時点て、これらの細胞か永久に排除されたか、または、■β９陽性Ｔ細胞レセプターの表面発現を単に一時的に失ったのみか、不明である。このようなＶβ８Ｔ細胞レセプター欠乏マウスかＥＡＥを発症するかどうか調べるために、ＢＩＯ，ＰＬおよび（Ｓ３Ｌ／３　ｘ　ＢＩＯ，ＰＬ）ＦＩマウスを脳炎誘発性Ｍ　Ｂ　Ｐ　１−９ＮＡｃペプチドおよびＢ、　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓて惹起し、７日後にＦ２３．　］抗体を投与した。抗体投与マウス１４匹中８匹のみ（５７％）ＥＡＥを発症したのに対し、食塩水投与対照群マウス１４匹中１３匹（９３％）および対照免疫グロブリン腹水（ＵＰＣＩＯ，Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）を与えアイソタイプ対抗させたマウス５匹中５匹（Ｉ００％）が発症した（データは示さず）。この発生率は、Ｆ２３．１投与群をプールした対照群（１９匹中１８匹、９５％）に対して分析した場合に、育意差を示した。投与群および対照群で、疾患を発症したマウスのＥＡＥの平均最大重症度は差がなかった。即ち、抗体保護をいったん免れると、投与動物と未投与の動物の重症度は等しかった。ＥＡＥを発症したＦ２３．１抗体投与マウスから得た牌細胞の分析によれば、投与により殆どのＶβ８陽性牌細胞か土供給されたことが解った。従って、抗■β抗体の投与にも関わらずＥＡＥを発症したマウスは、Ｍ　Ｂ　Ｐ　ｌ−９ＮＡｃエピトープに対して特異的なＶＢ１３または他の非Ｖβ ８陽性Ｔ８細胞を増大させると考えられる。ＶＢ１３を発現するＴ細胞ＴＣＡＲ抗体投与を実施例３に記載する。（本質以下余白）

【実施例３】ＴＣＡＲＶＢ２，２およびＶβ１３特異的抗体によるネズミＥＡＥのＢＩＯ，ＰＬ７ウス（６〜ｌＯ週齢）をＪａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　（Ｂａｒ　Ｈａｒｂｏｒ、　ＭＥ）から購入するか、またはＣａ１ｉｆｏｒｎｉａ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙの動物施設で生育させた。ミニリン塩基性蛋白ＭＢＰは前に発表したプロトコール（Ｓｍｉｔｈ、　１９８７．　Ｊ、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、１６．８３−９２）に従ってＰｅｔ−Ｆｒｅｅｚｅ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ（Ｒｏｇｅｒｓ、　ＡＲ）から購入したラットまたはマウスの凍結層から調製した。免疫化ＭＢＰは４ｍｇ／ｍｌ　Ｈ３７Ｒａ添加完全フロイント了シュバント（Ｄｉｆｅ。Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ、　Ｄｅｔｒｏｉｔ、　Ｍｌ）等量で乳化した。マウスの後ろ定容々にＭＢＰ１５０ｕｇを免疫化した。ＥＡＥの誘導のために、マウスにはＭＢＰ免疫免疫化２量（Ｌｉｓｔ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，　Ｉｎｃ．、　Ｃａｍｐｂｅｌｌ，　ＣＡ）　７５ｎｇを静脈内投与した。増殖検定ＭＢＰ免疫免疫化１後ンパ節から単離した（特記した場合を除く）。リンパ節細胞をＶｅｎｔｅｘ　Ｈｌ、−１培地に再懸濁し、９６穴プレートにウェル当り４　ｘ　１０’となるように添加した。ＭＢＰおよび蛋白Ａ精製抗体をテキストに示すとおりに培養物に添加した。全試料は３連とした。４日後、各ウェルにｌｍＣ１の［３Ｈ１チミジンを添加し、ＰＨＤ細胞採取器（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．　Ｉｎｃ．、　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を用いて、更に１６時間培養後に細胞を回収した。ｅｐｍは液体シンチレーションにより測定した。フローサイトメトリー抗Ｖβ８．　２（Ｆ２３．　２）はＭｉｃｈａｅｌ　Ｂｅｖａｎ氏から提供してもらった。抗Ｖβ１３（ＭＲＩ２−４）はＯｓａｍｉ　Ｋａｎａｇａｗａ氏から提供してもらった。抗体は蛋白Ａクロマトグラフィーで精製し、製造者の推奨事項に沿ってＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ．　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ．　ＩＬ）でビオチニル化した。ビオチニル化した抗体を５％ウシ胎児血清および１ｍＭ　Ｈｅｐｅｓを含有するリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に希釈した。１　ｘ　１０’個の細胞を２０分間３７°Ｃて抗体２０ｕｇ／ｍｌで染色した。細胞をＰＢＳて洗浄し、次に１：５ｏ希釈のＦＩＴＣコンジュゲートストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ．　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ．　ＩＬ）５０ｕｌ中に再懸濁した。２０’Ｃ２０分の後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、オルト５０Ｈサイトフルオログラフ（５３５ｎｍ緑色バンド通過フィルター、アルゴンレーザー励起４８８ｎｍ）を用実施例２の３３個の独立したＭＢＰ特異性ＢＩＯＰＬ誘導Ｔハイブリトーマの分析により、ＶＢ２．２およびＶβ１３遺伝子セグメントのみの使用か検知された（図１）。ＭＢＰに応答してこれ等２つのＶ領域遺伝子を発現するＴ細胞の寄与度を測定するために（Ｓｍｉｔｈ。＋９８７，　Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　１６．　８３−９２）、特異的な抗体を用いてＭＢＰ免疫化後のｉｎ　ＶｉｔｒＯ増殖応答をブロックした。使用したモノクローナル抗体はＦ２３．２（ＶＢ２．２特異性；　５ｔａｅｒｚ等、１９８５　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｓｙｓｔｅｍ，　５ｔｒｅｉｌｅｉｎ等，　ｅｄｓ．、　ＣａｍｂｒｉｄｇｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ．　６ｌ−６４）およびＶＢ１２−４　（Ｖβ１３特異性；　０．　Ｋａｎａｇａｗａ氏より提供）であった。これらのモノクローナル抗体の不変領域アイソタイプ分析によればこれらはともにＩｇＧ１／．分類された。ＢＩＯ．　ＰＩ、マウスから得たリンパ節細胞をＭＢＰでｉｎ　ｖｉｖｏてブライミングし、抗Ｖβ抗体またはＩｇＧ１対照抗体（ＭＯＰＣ−３ＩＣ）の存在下、種々の濃度のＭＢＰてｉｎ　ｖｉｔｒｏて再刺激した。増殖応答は団３］チミジン取り込みで測定した。簡単に説明すると、ＭＢＰで１群５匹のＢＩＯ．　ＰＬマウスを免疫化した１０日後、排液リンパ節細胞を摘出し、合わせ、所定の抗体の存在下で種々の濃度のＭＢＰで再刺激した。培養４日後、細胞を団３１チミジンで１６時間パルスした。結果を図１０に示す。各点は平均バックグラウンド値（抗原無し）を差し引いた３連の測定の平均を示す。抗体は蛋白Ａアフィニティークロマトグラフィーで精製し、最終濃度１０ｕｇ／ｍｌ　となるように培養物に添加した。最終抗体濃度Ｊｕｇ／／ｍｌても同様の結果が得られた。同様の結果の実験をもう１回繰り返した。図に示されるとおり、抗Ｖβ８．２および抗Ｖβ１３の両方ともＭＢＰへの応答を部分的にブロックした。刺激に使用したＭＢＰの最高濃度（３ｍＭ）では、％抑制は抗Ｖβ８．２では５９％、抗Ｖβ１３では３４％であった。両抗体を同時に添加した場合、応答の抑制は８５％であった。これらの結果により、ＢＩＯ．　ＰＬマウスにおけるＭＢＰへの応答の大部分はＶＢ２．２およびＶβ１３発現Ｔ発現上りなるものであると結論した。抗Ｖβ抗体のｉｎ　ｖｉν０注射により相当するＶＢ得発現Ｔ細胞の長尻ＴＣＡＲ　Ｖ領域抗体を用いて特異的Ｔ細胞を欠乏させた。Ｔ細胞の欠乏に必要な条件を旨適化するために、種々の濃度の抗Ｖβ８．２および好悪Ｖβ１３をＢＩＯ．　ＰＬマウスの腹腔内に注射した。未精製の腹水中の抗体濃度はＥＬＩＳＡにおいてＩｇＧ１標準物質と比較して測定した。次に抗体を希釈し、更に精製することなく、総量０．　１ｍｌ／マウスの量で注射した。７２時間後、末梢Ｔ細胞をナイロンウール上で精製し、蛍光フロー血球計数器で分析した。細胞をビオチニル化Ｆ２３．　２次いでフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）コンジュゲートストレプトアビジンで染色した。各ヒス１−グラムにつき２　ｘ　１０’個の細胞を計数した。代表的なヒストグラムを図１１に、データの総括を表ＩＶに示す。試験した全濃度につき、抗Ｖβ８、２および抗ＶＩ３１３の両方の注射により、高水準の表面レセプターを発現する相当するＴ細胞の実質的に完全な除去か達成された。（本質以下余白）表■ｖ％　％　％　％抗体　量　ｖ−ｙ　、１ｖ−ｙ　ｌｖｄ抗−ＶＢ２．２０．５００　ｍｑ　２．１　０．２　ＮＤ　ＮＤ抗−ＶＢ２．２０．２５０　ｍｑ　２．１　０．１　０．３　１．９抗−■β８．２０．１２５　ｍｑ　２．７　０．ＯＮＤ　ＮＤ抗− ＶＢ１３　０．２５０ｍｇ　１５　８．３　０．５　０．０抗−ＶＢ１３　０− １２５ｍｇ　ＮＤ　ＮＤ　Ｏ，９０，１ｉｎ　ｖｉｖｏ抗体投与後のＶＢ２．２およびＶβ１３Ｔ細胞の欠乏種々ノ濃度１７）Ｆ２３．２　（ＶＢ２．２特異性）まｔ：　ハＭＲ１２−４（Ｖ　７３１３’ｌ！異性）の何れかを３匹のＢＩＯ，ＰＬマウスの群に注射した。３日後、リンパ節細胞をナイロンウール上で精製し、定量的蛍光フロー血球測定器で分析した。細胞をビオチニル化Ｆ２３．２またはビオチニル化ＭＲ１２−４、次いてＦＩＴＣコンジュゲートストレプトアビジンで染色した。（本質以下余白）表面ＴＣＡＲを低い水準で発現するＴ細胞の少数かｉｎ　ｖｉｖｏ抗体注射後に残存した。実際には、この染色度の低い集団に存在するＴ細胞の比率は抗体投与後に増大するようであった。この増大は、最も低い濃度の抗体（０，１２５ｍｇ）を注射した場合に特に顕著であった。フルオレセインコンジュゲート抗マウス免疫グロブリン試薬を用いた細胞表面染色後にはパックグラウンドを超えた増大はみとめられなかった（データは示さず）。これは、７２時間後は注射抗体の全てかＴ細胞表面から駆逐されることを示している。従って残存する染色度の低いＴ細胞集団かあるのは、残存する注射抗体の拮抗的結合による蛍光分析で用いたビオチニル化抗Ｖ領域抗体の結合か飽和に至らなかったためてはない。抗体投与後の染色度の低いＴ細胞の比率の増大が観察された原因は、予め存在した染色度の低い集団の拡大か、または、以前染色度が高かったＴ細胞上のＴＣＡＲ量の抗体誘導下方変調であろう。抗体注射後４．８および１２週後に検査したマウスは、７２時間後に検査したマウスと同一の染色パターンを示した（データは示さず）。抗体注射１６週後、欠乏Ｔ細胞は再度出現を開始した。即ち、単回の抗■領域抗体投与の後の特異的Ｔ細胞の排除は比較的長期の作用であると考えられる。 ■β８，２およびＶ　／３１３Ｔ細胞のｉｎ　ｖｉｖｏ欠乏が可能であったため、ＭＢＰへの応答に対するこの欠乏の影響を評価した。ＢＩＯ，ＰＬマウスに抗Ｖβ８．２および抗Ｖβ１３２５０ｕｇを単独または組合せて、また、ＩｇＧ１対照抗体とともに投与し、次にＭＢＰでｉｎ　ｖｉｖｏブライミングした。ｌＯ日後排液リンパ節細胞を単離し、種々のブロッキング抗体＜Ｓ終濃度１０ｍｇ／ｍｌ）の存在下ＭＢＰ　（３ｍＭ　ＭＢＰ）てｉｎ　ｖｉｔｒｏ再刺激した。細胞を４日間培養し、次に［３Ｈ］チミジンでパルスした。平均バックグラウンドを差し引いた３連の培養結果を図１２に示す。対照抗体の注射はＭＢＰへの反応性に影響しなかった。抗Ｖβ８．２および抗Ｖ β１３の両方のｉｎ　ｖｉｔｒｏ添加において抑制可能な激しい増殖応答があった。抗ＶＢ得８．２注射はＭＢＰへの反応性を低下させたか、排除しなかった。残存する応答は抗Ｖβ１３て抑制されたか、抗Ｖβ８．３の添加では顕著な妨害は見られなかった。　抗■β１３注射そのものは、Ｍ　Ｂ　Ｐ反２性の顕著な低下をもたらさなかった。しかしなから、応答は抗Ｖβ１３によってはもはや顕著には抑制されず、抗Ｖβ８．２による抑制には感受性を持ち続けた。抗Ｖβ８．２および抗Ｖβ１３の両方の同時注射ては、ＭＢＰ反応性の最も極端な低下がもたらされた。　しかしながら、ＭＢＰに対する微小な増殖応答が残存し、これは抗Ｖβ８．２および抗Ｖβ１３びいずれによっても顕著に抑制されなかった。この残存応答は、優勢な■β８．２および■β１３ＭＢＰ特異性Ｔ細胞の排除の後に増大する非漫勢のＭＢＰ特異性Ｔ細胞によるものと考えられる。抗Ｖβ抗体の注射により起こるＭＢＰへの応答性の大きい低下は、この投与かＥＡＥの誘発の防止に有効であることを示唆している。この投与の効果を評価するために、ＢＩＯ，ＰＬマウスに種々のモノクローナル抗体を投与するか、または、未投与として、その後ＭＢＰで免疫化してＥＡＥの誘発を試みた。これらの実験の結果を表Ｖにまとめる。未投与か、またはＩｇＧ１対照抗体を注射したマウス１７匹中１４匹（８２，４％）かＥＡＥを発症した。この群の動物の平均疾患重症度指数は２．２であった（重症度指数の尺度の説明は表Ｖの凡例参照）。（本質以下余白）表■ １３Ｇ１＝ノドロール　１／／＋　８２．／４　２．２±１４　２．７±１１　９Ｊ±０．６抗　−ＶβＢ、２　５／２０ａ　２５．０工　０．７±１．２ｃ　２．６± ０．５　１１．４土０．５抗−Ｖρ１３　９／１０　９０．０ｍ　２．７±１．４　３．０±１２　９．３±０．７８ＩＯ，ＰＬマウスの群を表示の抗体で処理し、次いて後足にＭＢＰ　１５０７ｔｇて免疫処理した。精製百日咳毒素７５ｎｇを免疫処理後２４時間および４８時間後に静脈注射した。次いて、ＥＡＥの徴候についてマウスを日々観察した。疾病の重症度を５点評任にて評価した。すなわち、〇−正常：ｌ−尾の緊張の消失、２−後肢の弱体化、歩行困難、３−後肢の麻痺、反転困難、４−重症の全身麻痺、５−死亡である。各群の平均重症度を２種類の異なる方法、すなわち（１）群の全動物の最大重症度を平均化することによっておよび（２）群の病気になった動物だけの最大重症度を平均化することによって計算した。等差平均および標準偏差を表記する。１対照群と比較した際、ｐ・０．００００８５゜５対照群と比較した際、ｐ　＝　０．００００１４および抗−■β８．２処理群と比較した際、ｐ　＝　０．０９１　。０対照群と比較した際、ρ＜０．００５゜６対照群と比較した際、ｐ　＜　０．００１および抗−■β８．２処理群と比較した際、ｐ　＜　０．０２５゜ＥＡＥ発生率の比較に関するｐ値は正確な確率試験を使用して計算した。平均重症度の比較に関するｐ値はスチューデント試験を使用して計算した。抗−ＶＢ１３で予備処理した１０匹のマウスのうちの９匹（９０％）は、ＥＡＥを発現した。疾病マウスの症候は、対照マウスに見られるものとまさに同様の重症度であった。従って、抗−ＶＢ１３による予備処理そのものは、ＥＡＥに有効な治療法ではない。このことは、抗−ＶＢ１３がそれ自身を接種したのではＭＢＰに対する全体の応答性を減少しなかったという図１５に示したｉｎ　ｖｉｔｒｏ増殖データと一致している。抗−■β８．２で予備処理した２０匹のマウスのうちの５匹は、ＥＡＥを発現した。この群の動物の平均重症度指数は０．７であった。従って、抗−■β８．２単独の処理は、ＥＡＥに対する非常に著しい保護を導＜　（ｐ＜０．００５）。このことは、■β８ファミリーのメンバーを認識するモノクローナル抗体で予備処理されたＨ−２’マウスにおけるＥＡＥ発生率の減少を示した先の結果（Ａｃｈａ−Ｏｒｂｅａ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８８）並置　５４　、２６３−２７３；　Ｕｒｂａｎ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８８）　Ｃｅ１ｌ　５４．５７７−５９２および実施例２）と一致する。この群における５匹の疾病動物の徴候は、対照マウスに見られるものとまさに同様な重症度であったか若干発症か、遅れていた。抗−ＶＢ１３と抗＝Ｖβ８．２との組み合わせによる予備処理がＥＡＥがらＢＩＯ，ＰＬマウスを保護するのに極めて有効であることが判った。二の抗体の組み合わせで処理された２０匹のマウスのうち１匹（５％）だけか麻痺の徴候を現した。この群の動物の平均重症度指数は０゜１であった。このことは、対照マウス（ｐ＜０．００１）と比較するとＥＡＥに対する非常に著しい保護てあり、そして抗−■β８，２処理マウス（ｐ＜０．０２５）と比較すると著しい保護であった。二重抗体処理にもかかわらず病気の徴候を示した１匹のマウスにおける麻痺は穏やかであり（尾の緊張消失）そして対照マウスと比較して発症か極めておくれでいた（ＭＢＰ免疫処理後平均９．４日（二対して１９日）。この単一の例外におけるＥＡＥの発現に関与するＴ−細胞は、処理によって排除されないＶＢ２，２または■β１３Ｔ−細胞、あるいは未だに特徴付けされていない■β遺伝子として発現する亜優占Ｔ−細胞のいずれかであり得た。この問題を解決するために、この動物から単離されたリンパ節細胞のＭＢＰ−誘導増殖応答性を、ＥＡＥを有する対照動物およびＥＡＥのない二重抗体処理マウスのものと比較した。この実験に使用した排出リンパ節細胞をＭＢＰ免疫化の２１日後に単離した。増殖応答は抗■β８．２および抗■β１３の両方て抑制可能であるＥＡＥを有する対照動物において測定したく図１３を参照のこと）。要するに、８１０．　ＰＬマウスを未処理のままかあるいは抗■β８．２および抗■β１３の両方の接種で処理した。次いてマウスをＭＢＰで免疫処理し、モしてＥ、ＡＨの徴候を示した。免疫処理３週間後、ＥＡＥを育する動物およびＥＡＥのない動物を殺した。排出リンパ節細胞を回収し、そして前述の通りにしてＭＢＰ反応性について検定した。二重抗体処理を受けそして徴候のないマウスにおいてＭＢＰへの応答性か検出されなかった。このことは、ＭＢＰ免疫処理後ｌｏ日に二重抗体処理動物から分離されたリンパ節細胞において検出された若干の増殖応答とは対照的である（図１２）。この応答性における相違は、検定のためのリンパ節細胞の除去の遅延によるものであろう。事実、増殖応答性は、ｌＯ日ロー単離された細胞のものと比較して２１日８に単離された対照動物からの細胞において低かった。ＭＢＰへの応答は、ＥＡＥの徴候を示した１匹の二重抗体処理マウスから単離されたリンパ節細胞に見られた。この応答は、抗Ｖβ８．２または抗■β１３のいずれても抑制不能であった。このことは、このマウスにおけるＥＡＥが■β８．２またはＶＢ１３のいずれも発現しないＭＢＰ−特異性Ｔ−細胞によって引き起こされたのがもじれないことを暗示する。抗−Ｖβ抗体処理がＥＡＥを有する旧０．　ＰＬマウスにおける麻痺を反転二車ゑＥＡＥ徴候の重症度について適合する５匹のＢＩＯ，ＰＬマウスの群を、ＭＢＰ −誘導麻痺の第１の徴候の３日後にｒｇＧ１対照抗体でまたは抗Ｖβ８．２と抗Ｖβ１３との組み合わせにより処理した。次いで、これらの動物を毎日観察し、そして麻痺の重症度を評価した。結果を図１４に示す。ここで線はその日の各群における生存マウスの規定の疾病重症度に対応する。実線は、対照抗体処理群を示し、破線は、抗−■β処理群を示す。２週間の観察期間の間、対照抗体処理動物の全５匹において、疾病徴候は同一のままがあるいは悪化した。これに対して、抗体接種後２ないし７日以内に抗−Ｖβ処理動物において劇的な改善か観察された。重症の後肢麻痺（グレード３）から完全に正常な表現型への反転か５匹の抗−■β処理マウスのうち３匹に見出された。別の抗−■β処理マウスにおいて、はぼ全身麻痺（グレード４）から限定的な尾麻痺（グレードｌ）への反転か観察された。全身麻痺から始まった１匹の抗−Ｖβ処理マウスは、処理３日後に死亡した。これらの結果は、抗■β８．２と抗■β１３との組み合わせによる処理がＢＩＯ，ＰＬマウスにおける麻痺の反転に有効な治療法であるという結論に到達する。考察ＭＢＰ−誘導層を髄炎は、Ｔ−細胞媒介疾病の典型であると考えられる。ヒトにおけるＥＡＥとＭＳとの間の病因における著しい類似性は、ＥＡＥを、研究すべき特に重要なモデル系とする。Ｈ−２’マウスにおけるＭＢＰへの支配的なＴ− 細胞応答は、単−Ｎ−末端決定因子に対し誘導され、そして制限された数のＴＣＡＲＶ−領域を発現するＴ−細胞を必要とする。この例において、我々は、ＭＢＰへの応答に使用されたＴＣＡＲＶβ−領域に特異なモノクローナル抗体の組み合わせによるＴ−細胞のｉｎνｉｖｏ減少かＥＡＥの予防および治療の両方に有効な治療法であることを示した。２種類のアプローチをこの研究に使用してＭＢＰへの応答に関与するＴ−細胞を特徴付けた。第１アプローチにおいて、ＢＩＯ，ＰＬマウスをＭＢＰで免疫処理し、そして応答をＴＣＡＲＶβ−特異性プロ。ッキング抗体の存在下にｉｎ　ＶｉｔｒＯで誘起させた（図１０）。抗−ＶＢ２．２および抗−ＶＢ１３の存在下での応答の実質的に完全な消失は、ＭＢＰに対する主要なＴ−細胞応答かこれらの■−領領域発現する細胞からなることを示している。第２のアプローチにおいて、Ｔ−細胞の特定のサブセットを、Ｖβ−特異性抗体の注射により　ｉｎ　ｖｉｖｏで除去した。次いで、動物をＭＢＰで免疫処理し、そして応答をブロッキング抗体の存在下に再びｉｎ　ｖｉｔｒｏ誘起させた（図１２）。免疫処理に先立つ■β８．２−発現性Ｔ−発現性情−細胞ＭＢＰ応答の低下へ導き、一方■β１３発現性Ｔ−細胞は著しい減少へ導かなかった。このことは、ＶＢ２．２−陽性Ｔ−細胞の存在がＭＢＰへの効率のよいｉｎ　ｖｉｖｏブライミングに必要かつ十分であることを示している。■β８．２および■β １３−発現性Ｔ−細胞の両方の同時消耗は、ＭＢＰ応答の最も劇的な消失を導いたが、少しの増殖応答がなおも観察された。このことは、ＶＢ８．２およびＶＢ１３−発現性Ｔ〜細胞の不在下では、別のＶ−領域を利用する亜優占Ｔ−細胞がＭＢＰ免疫化への応答へと発展することを示抗−■β抗体の単−腹腔内（ｉ、ｐ、）注射は、１２週間まで持続する対応するＶβ遺伝子産物を発現するＴ−細胞の消耗を導いた。使用したモノクローナル抗体がＩｇＧ１アイソタイプのものであったので、Ｔ−細胞排除は、抗体−媒介細胞毒の結果によるものであろう。しかしながら、抗体処理後のにふく染色するＴ−細胞の小集団の出現（図１１）は、細胞表面上のＴＣＡＲのレベルのダウンモジュレーションも役割を果たしていたことを示唆する。注射された■β−特異性抗体か循環系から一掃された後の長期のＴ−細胞枯渇の持続は困った二とである。おそらく、継続したＴＣＡＲ遺伝子再配列か消耗したＴ−細胞のより迅速な補給へ導いたであろう。おそらく、少量の注射された抗体はこれらかＴ−細胞の発生を防げる領域内に隔離されたままであった。先の研究は、特定の■−領領域発現するＴ−細胞の成熟化かこれらの ■−領領域対して特異的なモノクローナル抗体の新生児期注射によってブロックできたことを示している（ＭｃＤｕｆｆｉｅ　ｅｔ　ａｌ、、　（１９８６）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８３．８７２８−８７３２）。別に、Ｖβ−特異性抗体の注射は、特定の■β−領域を発現するＴ− 細胞の発生を抑制する数種の調節ネットワークを設定できている。Ｖβ−特異性抗体の注射によるＨＢｐへの２答を抑制する能力は、ＥＡＥをブロックするためのこの処理の使用の戦略を可能にした。一連の実験において、ＥＡＥの予防に対するこの処理の効力を試験するためにＭＢＰ免疫化に先立って抗体処理を行った（表■）。抗−ＶＢ８．２（Ｆ２３．２）の注射それ自体は、ＥＡＥ発生の著しい減少をもたらした。（８２，４％から２５％）。この知見は、■β８−特異性抗体（Ｆ２３１）または■β３−特異性抗体（ＫＪ１６）での処理後のＥＡＥに対する部分的保護についての先の報告と一致した（、Ａｃｈａ−Ｏｒｂｅａ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８８）同上；Ｕｒｂａｎ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８８）同上および本明細書の実施例２）。Ｆ２３．２の治療への使用は、Ｆ２３．１　またはＫＪ１６のいずれの使用よりも有利である。なぜなら、後者の試薬は、非−ＭＢＰ−特異性Ｔ−細胞のより多量の排除へ導く広範な特異性を有しているからである。理想的な治療用抗体は、クロノタイプ決定因子に反応性であり、そして事実、ＭＢＰ−特異性ラットニー細胞ハイブリドーマに対して誘導された。か＼る抗体はラットをＥＡＥから部分的に保護することか示されている（Ｏｗａｓｈｉ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８８）　Ｊ、　Ｅｘｌｌ、　Ｍｅｄ、１６８　、２１５３−２１６４）。抗−■β８．２と一緒の抗−ＶＢ１３の注射は、ＥＡＥ発生の高められた減少をもたらした。（２５％から５％）。この結果は、動物をＥＡＥがら完全に保護することへの抗−ＶＢ２．２の失敗が、少なくとも部分的にＭＢＰ−反応性■β１３−陽性Ｔ−細胞の連続した存在によるものであることを示す。二重抗体処理を受けた我々の研究における１匹の動物は、尾の麻痺の発生の遅延を表した。稀なＶＢ２．２−陰性、■β１３−陰性、ＭＢＰ特異性のＴ−細胞か場合により広がりそして攻撃を導く可能性かある。この説明は、このマウスから単離された排出リンパ１ｇ細胞が１ｎＶＩｊｒｏでＭＢＰに対して応答できたが、この２答か抗 −■β８．２または抗−ＶＢ１３の添加によってもブロックできなかったという観察と一致する（図１３）。抗−■β処理がＥＡＥの麻痺症状を直ちに逆転できることも示されている（図１４）。この結果は、一度自己免疫Ｔ−細胞が除去されると、ＥＡＥに関連する神経的損傷か直ちに回復できるということを示唆している。加えて、ＥＡＥ疾病状態の維持は、ＭＢＰ−反応性Ｔ−細胞の断続した存在を必要としなければならない。後処理観察の最初の４週間の間、治癒動物のいずれにも再発は観察されなかった。要するに、我々は、Ｖβ−特異性抗体の組み合わせを用いた単一受動免疫処理かＥＡＥの予防および治療に非常に有効な治療法であることを証明した。ヒト疾病へのＴＣＡＲＶ−遺伝子使用の将来の特徴付けか免疫介在の同様な戦略へ導くであろうということを確信する。実施例４慢性進行性多発硬化症を存する患者におけるＴ−細胞レセプターβ鎖遺伝子のジャームライン（ｇｅｒｍｌ　１ｎｅ）レパートリ−被験者慢性進行性サブタイプの臨床的に明確なＭＳの基準を満たした４０おけるＶβ遺伝子セグメントレパートリ−サイズおよび多型性の程度を正常者と比較することであった。研究のこの面では、２８人の患者からのＤＮＡの制限酵素消化物を実施例１およびＣｏｎｃａｎｎｏｎｅｔ　ａＬ　（１９８７）　Ｊ、　ＥＸＧｌ、　Ｍｅｄ　１６５．１１３０−１１４０に先に記載された１００人の無関係の正常個体のパネルからのものと比較した。対照集団＃１と命名されたこれらのランダムに選択された対照のＨＬＡ　／−プロタイプは未知であり、そしてこれらの研究の間にＨＬＡ）Ｘプロタイプは、ＴＣＡＲハブロタイブの分析において重要であることか明らかになった（Ｋａｐｐｌｅｒ　ｅｔ　ａｔ、　（１９８７）　Ｃｅ１ｌ　４９．２６３−２７１）。従って、４３人のＤＲ２“関係の正常個体からなる追加の対照集団を使用した（対照集団＃２）。ＴＣＡＲハブロタイブの分布を評価するために、さらにＸ２人の患者をこの研究に加え、そして非−コーカサス系の患者を３８人のコーカサス系ＭＳ患者の全母集団とするために排除した。８４％かＤＲ２＋である３８人のコーカサス系ＭＳ患者のＴＣＡＲノープロタイプの分布を対照集団＃ｌおよび＃２からなるコーカサス系個体と比較した。ＤＮＡ調製ゲノムＤＮＡはエプスタイン−バーウィルス−形質転換リンパ芽球Ｂ細胞系または患者および対照集団からの静脈血からのバッフイーコートから、既述の通り（Ｂｅａｌｌ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８７）Ｊ、［ｍｍｕｎｏｌ。１３９、１３２０−１３２５；　Ｃｏｎｃａｎｎｏｎ　ｅｔ　ａｌ　（１９８７）同上）調製した。プローブこの検定に使用したｅＤＮＡプローブは、図２および３に記載の通りのＣｏｎｃａｎｎｏｎ等により記載された（Ｃｏｎｃａｎｎｏｎ　ｅｔ　ａｌ　（１９８６）Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＩＳＡ　８３．６５９Ｂ− ６６０２）サブクローンから単離されたヒト■β遺伝子セグメントサブファミリー■β、ないし■β１４のメンバーおよびＢｅａｌｌ　ｅｔ　ａｌ、　（Ｂｅａｌｌ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８７）。同上）により記載された通りに単離されたＣβ特異的プローブに相当した。■β およびＣβ特異性配列を含有するゲル精製された挿入物をランダムブライミング（Ｆｅｉｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８４）　Ａｎａｌ。Ｂｉｏｃｈｅｍ、１３７．２６６−２６７）またはニックトランスレーション（Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ、（１９８２）　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ＭａｎｕａｌＣｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　）Ｉａｒｂｏｒ　Ｌａｂ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、　ＮＹ）のいずれかによりａ−［”ＰＩ　トリホスフェートで５ＸＩＱ”ないし２　ＸＩＯ’　Ｃｐｍ／ｍｇの範囲の比活性に標識した。サザンプロット検定各被験者からのＤＮＡを、酵素製造者か指定した条件を使用してＢａｍ　Ｈ［、Ｂｇｌ　Ｉｌ、、Ｅｃｏ　Ｒ［またはＨｉｎｄ　ＩＩＩで消化した。ゲルの各レーン当たりＤＮＡ　１０ｕ　ｇを負荷し、Ｚｅｔａ−Ｐｒｏｂｅ（ＢｉｏＲａｄ社）ナイロン膜に移した（Ｒｅｅｄ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８５）　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、１３．７２０７−７２２１）。ハイブリダイゼーションを、３７〜４２℃で５０％ホルムアミド、５　Ｘ５ＳＣ、０，０２Ｍ　燐酸ナトリウム、ｐＨ６，７、ｌｏＯｍｇ／ｌｎｌ剪断変性サケ精子ＤＮＡ　、０．５％　無脂肪粉末乾燥ミルク、１０％デキストラン硫酸、１％ＳＤＳおよびプローブ１〜２ｒ＋ｇ／ｍｌ中で１５〜２４時間行った。フィルターを２ＸＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳで６０°Ｃて洗浄し、そして１８〜７６時間Ｋｏｄａｋ　ＸＡＲ−５フイルムに露光した。沸騰０．０１　Ｘ　ＳＳＣ中で１回当たり１５分間ロッカープラットフォーム上で２回洗浄することによってプローブをプロットから除去した。統計学的分析カイ二乗試験を、患者と対照集団との間の対立遺伝子頻度およびハブロタイブ頻度分布の比較に使用した。ハブロタイブ頻度分布比較において、小さい期待数かカイ二乗試験の精度を低下させないように４種の最も稀なハブロタイブに関するデータを組み合わせた。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正（Ｉｎｇｅｌｆｉｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ、（１９８３）　Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ　ｉｎ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、　ＭａｃＭｉｌｌａｎ、　ＮＹ、　１６０−１７６）を個々のハブロタイブの頻度を比較する試験のｐ値に適用した。全てのカイ二乗計算は、Ｂｉｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　Ｆｉｅｌｄ　５ｔｕｄｉｅｓ　Ｂｒａｎｃｈ、　ＮｌＮＣＤ５゜ＮＩＨによるＭＩＮＩＴＡＢコンピュータープログラムを使用して行った。ＴＣＡＲＶβ遺伝子セグメントレパートリ−サイズ２８人のＭＳ患者からのジャームラインＤＮＡを４種の異なる制限酵素で消化し、そして各々先に特徴付けされたヒトＴ−細胞レセブター■β遺伝子サブファミリーＶβｌないしＶβ１４およびＣβ遺伝子（Ｃ３ＩおよびＣβ２）を表すｃＤＮＡで検索した。得られたオートラジオグラムを、対照母集団＃ｌのものと比較して■βセグメントハイブリダイジングバンドの重複または欠失のいずれかかＭＳ患者母集団に検出されるかどうかを測定した。■またはＣ領域遺伝子ファミリーにより規定された５３個の遺伝子セグメントの欠失は検出されなかった（データ示さず）。ＴＣＡＲＶβ対立遺伝子頻度１４個のヒトＶβ遺伝子セグメントサブファミリーのうちの１２個に関連するＲＥＬＰを実施例１に記載する。はとんどのＶβプローブに関して、１つの頚著なハイブリダイゼーションパターンか観察され、そしてほんの少数の個体は第２のパターンを表した。我々のＭＳ患者において観察されたパターンは、形態および頻度において対照母集団＃ｌて観察されたものと同様であった（データ示さず）。２種類の可変遺伝子プローブ（■β８および■β１１）をＢａｍ　Ｈｌで消化したＤＮＡにハイブリダイズさせ、ＣＢプローブをＢｇｌ　ＩＩで消化しＤＮＡにハイブリダイズさせた。これらのプローブ／酵素組み合わせは、対立遺伝子か正常対照母集団＃１におけるのとほぼ等しい頻度で生じる多型性を検出する（Ｃｏｎｃａｎｎｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８７）同上；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８５）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８２゜３８０４−３８０８）。ＭＳ患者母集団におけるこれらの対立遺伝子の頻度を同一の条件下に分析し、そして対照母集団＃１と著しい相違はなかった（ｐ値は各々０．０８９．０．０７６および０．２０４である、図１５）。ＭＳ母集団におけるこれらの遺伝子座（■β８、■β１１およびＣβ）に関する遺伝子型頻度は、Ｈａｒｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡により予測されたものと著しく相違しなかった。ＴＣＡＲβハブロトタイプ頻度 ■β８、Ｖβ１１およびＣβ対立遺伝子により発生した多型性を情報提供ハブロタイブを規定するため使用した。３８人のコーカサス系のＭＳ患者におけるハブロタイブ頻度を２種の正常母集団のものと比較した。ハブロタイブは、３つの遺伝子座について二重または三重にホモ接合である個体に与えられた。これらの個体は、ＭＳ患者のうちの１８人並びに対照母集団＃ｌおよび＃２からなるコーカサス系個体のうちの６５人からなるハブロタイブに与えられた。ＭＳ患者に見出されたハブロタイブ頻度の分布は、対照母集団のコーカサス系個体に見出されたものと著しく相違した（ｐ＝０．０１２、表■Ｉ）。ＭＳ母集団において、■β ８２３．Ｏｋｂ対立遺伝子、■β１１２０゜Ｏｋｂ対立遺伝子およびＣβ９．　Ｏｋｂ対立遺伝子により規定された通りハブロタイブ２３／２０／９のわずかなオーバー・リプレゼンテーションがあった（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正ｐ＝０．０５５　、相対危険（ＲＲ）＝２．９６）。表Ｖ［ハブロタイブ（Ｎｌ　コロ１コ０定義Ｘ　＝　１２．９１．ｐ−０，０１２（４ｄｆｌｂ１対照母集団＃ｌおよび＃２からのコーカサス系個体５正常母集団とＭＳ患者との間のハブロタイブ頻度分布のカイ二乗分析。４種の稀少ハブロタイブ（２３／２５／１０．２／２０／１０．２３／２５／９および２／２０／９）のデータを、少数の期待細胞数かカイ二乗試験の精度を低下させないように一緒にした。対立遺伝子およびハブロタイブ頻度の分析に使用された３８人のＭＳ患者のうちの３２人は、ＤＲ２＋（８４％ＤＲ＋）であった。ＨＬＡかハブロタイブ頻度における相違に寄与するかどうかを測定するために、３つの比較を対照集団＃２（１００％ＤＲ＋）を用いて行った。先ず、２種類の対照群を比較した。各々の３種の異なるプローブに関する対立遺伝子は、母集団において著しく相違しなかった（■β８、■β１１およびＣβ遺伝子座について各々ｐ値は０，２４．０．７８および０．６０）。ＭＳ患者における知見とは対照的に、これらの対照母集団間のハブロタイブ頻度の分布は著しくは相違していなかった。（ｐ＝ｏ。４８）。第２に、コーカサス系のＭＳ患者のＤＲ＋サブセット（総数３４のハブロタイブ）における２種類の■βおよび１種類のＣβ遺伝子セグメントプローブによって規定されたハブロタイブ頻度を２種類の対照母集団（総数１３０のハブロタイブ）のコーカサス個体における分布と比較した際、著しい相違が見出された（ｐ＝０．００２８　、表Ｖｌ＋　、比較例１）。ＭＳ母集団において、ハブロタイブ２３／２０／９はオーバー・リプレゼントであり（補正ｐ＝０．０２８　、ＲＲ＝３．２６）、そしてハブロタイブ２／２５／１０　（７）頻度は減少した（補正ｐ＝０．０７２　、ＲＲ＝０１７）。第３に、ＤＲＺ＋コーカサス系ＭＳ患者の対照母集団＃２におけるＤＲ２＋コーカサス系母集団との比較は、ハブロタイブ頻度分布において著しい相違を示しくｐ・０．０１５）（表ＶＩＡ、比較例２）、そしてハブロタイブ２／２５／１０の若干のアンダー・リブレゼンテーンヨンを示した（補正ｐ＝０．０５６）。表■ ハブロタイブ（Ｎ）　３４　１コ０　２Ｂ定義比較例１．　ＤＲ２”　ＭＳ対正常者ｂ：　Ｘ２＝１６．１４、ｐ＝ｏ、００２８（４ｄｆ）　’。比較例２．　ＤＲ２”　ＭＳ対正常者’　：Ｘ”＝１２．３４　、ｐ＝ｏ、ｏ１５（４ｄｆ）’。１頻度を括弧内に示した。ゝ対照母集団＃ｌおよび＃２からのコーカサス系個体。０対照母集団＃２からのコーカサス系個体。４４種の稀少ハブロタイブ（２３／２５／１０．２／２０／１０．２３／２５／９および２．／２０／９）のデータを、少数の期待細胞数がカイ２乗試験の精度を低下させないように一緒にした。 ■β８およびＶβ１１遺伝子座において単一および二重相同性に基づくハブロタイブも与えた。３２人のコーカサス系のＤＲ２＋　ＭＳ患者の検定は、これらの被験者のうち２０人か４０ハブロタイブの供与を認める■β８および■β１１遺伝子座について単一または二重にホモであったことを示した。ＭＳ母集団におけるこれらのハブロタイブと１６人のコーカサス系のＤＲ２÷Ｍ正常個体（対照母集団＃２からの総数３２のハブロタイブ）との比較は、ノ１プロタイプ２３．２０（ＲＲ・２゜１４）ノオーバー・リプレゼンテーションおよびハブロタイブ２／２５のアンダー・リプレゼンテーション（補正ｐ＝０．０１３　、ＲＲ＝０．２１）で著しい相違を示した（ｐ＝０．００９）　（表■）。２／２０　６　０　０．１５　０．００Ｘ　−９，４５，Ｐ　−０，００９（２ｄｆ）ｂ６対照母集団＃２からのコーカサス系個体。ゝ正常母集団およびＭＳ母集団の間のハブロタイブ頻度分布のカイ二乗分析。２種の最も稀なハブロタイブ（２３／２５および２／２０）を、少数の期待細胞数がカイ２乗試験の精度を低下させないように一緒にした。遺伝子背景および環境因子、恐らくウィルスがＭＳの病因に包含６、１１８−１２４；　Ｅｂｅｒｓ　ｅｔ　ａｔ、　（１９８６）　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、３１５１６３８−１６４２）。しかしながら、この疾病は、モノ接合ツインにおける一致かかなり１００％より少ないので完全には遺伝子工学的に制御されない。コーカサスＭＳ母集団におけるＤＲ２の発現の増加があり、これは１つの遺伝子要素がＨＬＡ複合体をコード化する遺伝子内にありうることを示す（Ｔｉｗａｒｉ　ら（１９８０）　Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　１９８０．　Ｐ、　Ｔｅｒａｓａｋｉ（纏）、　ＵＣＬＡ　Ｔｉ５ｓｕｅ　ＴｙｐｉｎｇＬａｂｏｒａｔｏｒｙ。付加的なＭＳ感受性遺伝子が存在すると仮定されており、そして最近になってＴＣＡＲ遺伝子における遺伝子変異かＭＳの病因の役割を果たすであろうことか提案されている（Ｇｏｏｄｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、　Ｓ、）１．　Ａｐｌ）ｅｌ（纏）、Ｙｅａｒ　Ｂｏｏｋ　Ｍｅｄｉａｃｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、　９ｌ−１２７）。これに対する支持か脱髄に関する動物モデルから得られている。ＥＡＥ（Ｍｏｋｈｔａｒｉａｎ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８４）　Ｎａｔｕｒｅ　３０９．３５６−３５８）およびＴＭＥＶ−誘導脱髄疾病（Ｌｉｐｔ。ｎ　（１９７５）　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　１ｍｍｕｎ、　ＩＩ、　１１４７− １４３３；　Ｍｅｌｖｏｌｄ　ｅｔ　ａｌＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３８．１４２８−１４３３）の両方が、ＳＪＬ　７ウス中で、即ち、■βジャームライン遺伝子レパートリ−を５０９６欠失した株中に発生した（Ｂｅｈｌｋｅ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８５）　５ｃｉｅｎｃｅ　（Ｗａｓｈ、　ＤＣ）　２２９．５５６ −５７０；Ｂｅｈｌｋｅ　ｅｔ　ａｌ、（１９８６）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８３．７６７−７７１；　Ｌａｉ　ｅｔ　ａｌ、　（＋９８７）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｔｌｓＡ　８４．３８４６−３８５０）。本研究は、いずれのＭＳ患者における、■β座の２０の既知のサブファミリーのうちの１４によって規定された５１の遺伝子セグメント、またはＣβ座の２つのサブセグメントのいずれの欠失または重複製をも見出しえなかった。従って、Ｓ北マウスを脱髄疾病に対してより感受性とするそのＴ−細胞レパートリ−における［穴ＪをＳ北マウスは有するとしても、ＭＳ母集団の■β遺伝子セグメントメンバーの総欠失を見出しえないことは、同様な異常かＭＳ中に存在しないことを暗示する。本研究において、慢性進行性ＭＳ患者における■β８、Ｖβ１１およびＣβＲＦＬＰ対立遺伝子によって規定されるハブロタイブの分布は、正常個体に見出されたものとは異なっていた（表■、■および■）。ハブロタイブ２３／２０／９の有位性およびハブロタイブ２／２５のアンダーリプレゼンテーションかあった。多数の制限酵素およびプローブを使用して、■遺伝子セグメントレパートリーサイズを評価したが、ＴＣＡＲβハブロタイブを規定する先に示した組み合わせだけを対立およびハブロタイブ頻度を測定するのに使用した。ＭＳの伝播は、民族的母集団により異なり（Ｍａｔｔｈｅｗｓ　ｅｔ　ａｌ。（１９８７）　Ｍａ、Ａ１ｂｉｎｒ’ｓ　Ｍｕｌｔｉｐｌｒ　５ｃｌｅｒｏｓｉｓ　Ｗ、　Ｂ、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ　（纒）、　Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ　Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ、　Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ、　Ｌｏｎｄｏｎ、　Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ。ａｎｄ　ＮＹ、　３−２６）　、そして最近になって、ＴＣＡＲアロタイプ（Ｐｏｓｅｔｔｅｔ　ａｌ、　（１９８６）　Ｐｒｏｃ、　ＮａｔＬ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＩＳＡ　８３．７８８８−７８９２）は、民族的群において変化できることが示されている。これらの理由のため、ＭＳおよび対照母集団におけるコーカサス個体におけるＴＣ、ＡＲβハブロタイブ比較した。ＨＬＡ−Ｂ７およびＤＲ２のコーカサスにおけるＭＳへの感受性との関連は、各々３．６６および３．６４（Ｔｉｗａｒｉ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８０）、前記）の相対的危険性（Ｒｅｌａｔｉｖｅ　Ｒ１５ｋ　）を有していると計算されている（Ｓｖｅｊｇａａｒｄ　ｅｔ　ａｔ、　（１９８３）　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｒｅｖ　７０．１９３−２１８）。ＴＣＡＲｂハブロタイブ２３／２０／９の存在かＤＲ２＋個体におけるＭＳへの感受性の増加に寄与したかとうかを測定するために、ノープロタイプ２３／２０．／９の頻度をＤＲ２↓コーカサス系ＭＳ患者とＤＲＺ＋コーカサス正常個体との間で比較した（表■）。３．２６の相対的危険性が得られ、それは、ＤＲ２および２３／２０／９　ＴＣＡＲｂハブロタイブの両方の保有は、ＤＲ２単独で有しているものよりもＭＳを発生する危険率か高いことを示している。このことは、これらの２種の感受性遺伝子か共同して作用することを示唆してあり、を提案し、そして一方がレセプター分子（ＴＣＡＲ）をコード化しそして他方（ＤＲ２）はレセプター分子に対する抗原を表す分子をコード化するということを反映している。ハブロタイブがＭＳ患者のサブセットにだけしか供与できないことは、この相対的危険性の増加はこの研究においてサンプルサイズか小さいことを反映しているのかもしれない。ハブロタイブ頻度の相違は、■β８と■β１１との間をマツピングするＭＳ感受性遺伝子への結合を現している可能性かある。特定の■βハブロタイブがファミリーにおけるＭＳに対する感受性を持って分離するかどうかおよび付加的な遺伝子的相違か■α座において存在するかどうかを測定することは重要である。か＼る相違は、利用可能なＴＣＡＲレパートリ−の抗原結合特異性の構造的変化をもたらし得る。加えて、ＭＳ患者におけるいくつかのＶβ遺伝子の発現の欠如を導＜　（ＴＣＡＲレパートリ−における穴の結果として）規制要素の変化か生じ得る。逆に、一定の遺伝子の異常発現は、自己反応能力を育するＴ−細胞をもたらし得る。これらの■β領域多型性の別の結果は、ＭＳの病因に包含されると仮定されている自己抗原またはウィルスのいずれかへの免疫感受性に関わりを有しているであろう。実施例５ＴＣＡＲのα−鎖に関する可変部遺伝子領域をコード化する遺伝子座も実施例４に与えたのと同様の方法で研究した。この研究において、北ヨーロッパ家系の無関係コーカサス人からの１２０のサンプルおよびＭＳに病む北ヨーロッパ家系の７２人のコーカサス人を、α−鎮座における多発硬化症感受性遺伝子と関連する制限断片長子堅性の検出に関して分析した。この後者のＭＳ疾病群のうち、約３０人の個体は、実施例４に使用したものと同一であった。検出されたＭＳと関連するＲＦＬＰを表した。１．　Ｏｋｂバンドおよび０．７ｋｂバンドに対応する２種の制限酵素を検出した。この研究の結果を表■に示す。（本質以下余白）表■ ＭＳ患者と対照におけろ■α１６／ＩＪｓｐｌ遺伝子型および対立遺伝子頻度全遺伝子型　７９　１２０Ｘ２−　９．３６脅肴（ｄｆ−２）全対立遺伝子　１５Ｂ２４２Ｘ２−　８．１２”（ｄｆ−１１１数字は、ｋｂで示すフラグメントサイズである。上記の通り、著しい相互関係か制限断片長条型性とＭＳとの間に存在する。この結果は、ＭＳ感受性遺伝子か■α座内に位置していることを示している。ここで研究したＭＳ母集団と■β座におけるＭＳ感受性遺伝子と関連する■βＲＦＬＰの検出に関する実施例４のものとの間に重なりかあるので、■β座におけるＭＳ感受性遺伝子およびνα座におけるＭＳ感受性遺伝子の遺伝性かこの疾病への素因に必要である可能性か大きい。特表千５−５０４４０９　（３３）実施例６Ｔ細胞レセプターαおよびβ遺伝子座中のその他の配列多型性あるＴ細胞レセプターハブロタイブが特定の疾病体質と相関しているかどうか決定するために、ヒトＶαおよびＶβ遺伝子座に均一にまたがる約１０の多型性マーカーを同定することか所望される。今日までに、我々はすでに記載されているものに加えて約８Ｖβ遺伝子座マーカーおよび２　Ｖα遺伝子座マーカーを同定している（実施例１および５；　ＣｈａｒｍｌｅＹら、１９９０．　Ｐｒｏｃ、　ＮａｔＬ、　ＡｃｄＳｃｉ、ＵＳＡ　８７：　４８２３−４８２７；　Ｃｏｎｃａｎｎｏｎ　ら、１９９０．　ＡＩＤ、Ｊ、Ｈｕｍ、Ｇｅｎｅｔ、、　４７：　４５−５２参照）。これらはＯＬＡアッセイに変換されている（Ｎｉｃｋｅｒｓｏｎら、１９９０．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８７：８９２３ −８９２７）。これらのマーカーはまたＶαまたはＶβ遺伝子座中に組換えのホットスポットがあるかどうか決定するために用いられる。ヒトＶαおよびＶβ遺伝子座の多型性マーカーか決定されると、我々はハブロタイブ関連の特定の疾病を有する集団をスクリーンすることができる。かかる関連はまた、問題の疾病、例えば彼等の疾病体質、を発病する危険性のある集団をスクリーンするのに使用できる。個人における特定の多型性およびハブロタイブの存在を決定するために多くの異なるアッセイをすることかできるか、好ましいアッセイはＯＬＡである。ＯＬＡアッセイは、現在、１人のテクニシャンにより１日に１２００リゲーシヨンアツセイの割合で行なうことかできる。複数の分析は唾液試料から得られた細胞に行なうことかできる。唾液は、ＰＣＲ技術て５−１０分析を簡単にてきるほど充分以上の細胞を含有している。多くの情報を与える多型性マーカー二対立遺伝子マーカーは本質的には情報を与えるものではない。しかしながら、我々は二対立遺伝子マーカーのクラスターか多くの情報を与え得るという驚くべき発見をしている。例えは、我々はヒトＣα遺伝子、例えば表Ｘ＋参照、の第二イントロン中に４個の二対立遺伝子マーカーを同定している。これらのマーカーは互いに４００塩基対内にあり、さらに驚くことに、それらは互いに部分的連鎖不平衡であるように見える。これは、組換えのホットスポットがこれらのマーカーを分離したか、または遺伝子変換か起こったことを意味している。どちらの場合にせよ、重要なことは、おびただしい数の異なるＣαハブロタイブかヒトの集団中に創られてし・ることである。これらのマーカーのうちほんの３個は、異ジ接合性指数か７０％を越している、すなわち、非常に情報を与えるマーカーである。Ｃβ遺伝子庫の結果はさらに驚くものである、例えば表Ｘ＋参照。ここで我々は７個の二対立遺伝子マーカーを同定しており、これらの多くは互いに部分的連鎖不平衡である。我々かこれらのマーカー３個の組み合わせと、■多型性のとれかとをあわせると、我々は９０−９５％に及ぶ異型接合性を得ることかできる。これはＨＬＡ遺伝子座のそれらと同じくらいよい異型接合性である。これらふたつの観察の重要性は、我々か、ヒトの集団において、ファミリー研究のためにＴ細胞レセプターハブロタイブを独特にマークできることである。魅力的な疑問はこれらの現象かＴ細胞レセプター遺伝子座に独特ものか、またはヒトゲノム中に実際存在しているか、である。我々はこれらの多型性をＯＬＡアッセイに変換することによりＭＨＣ多型注型性析を自動化しようと今試みている。現在、我々はＤＱα遺伝子座の８対立遺伝子に関する仕事を終えて、今はＤＱβ遺伝子座の１１対立遺伝子に関する仕事をしている。我々は全ての主要クラ２１１ヒト多型性のためにＯＬＡアッセイを創ろうと計画している。これらはヒトについての我々のファミリーおよび集団研究において特定の免疫レセプター遺伝子座（αおよびβＴ細胞レセプター遺伝子座およびＭＨＣ遺伝子座〉と特定のヒトの疾病との相関関係を作るのに非常に重要である。これらの多型性は、Ｔ細胞レセプターαおよびβ遺伝子複合体におけるＤＮＡ多型性に関するＤＮＡ配列情報を得るためのより大きな努力の一部として見い出された。詳細には、既知のすへてのヒトＴＣＲαおよびβサブファミリーの遺伝子をＰＣＲを用いて増幅するためにＤＮＡプライマーを合成した（表Ｘ参照）。ＰＣＲプライマーはＧ／Ｃ含有率および融解温度を分析することによりＶまたはＣ遺伝子配列から選択された。かなりＡ／Ｔに富んだプライマーは全＜　Ｇ／Ｃに冨んだそれ（１８ヌクレオチド）よりも一般に長い（約２４ヌクレオチド）。各プライマーは５８−６２ｏＣ範囲内の融解温度を育するように選択した。融解温度はプライマー配列中の各ＧまたはＣ残基に４ｏＣの値そして各ＡまたはＴ残基に２ｏＣの値を与え、与えた値を合計して決定された。特定のプライマーを用いてＰＣＲ増幅増幅−くつかの無関係の人々からのＰＣＲ産物は、続いて変成勾配ゲルで電気泳動した。このゲルは同じ遺伝子の対立遺伝子形態の融解特性変化に基づいてＤＮＡ配列相異の区別を可能にする（Ｍｅｙｅｒｓ　ら、１９８７．　Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　１５５：　５０１−５２７）。このようにして、いくつかのＴＣＰ遺伝子か多型性であることを見い出した。これらは、Ｖα２．Ｖα４．ＩＶβｌＯおよびＶβ１５の遺伝子を包含する。これらの遺伝子の正確な配列多型性は標準配列決定法により現在決定されている。多型性は実施例１に記載されたサザンプロット／ＲＦＬＰ法および複数の人々の同じ遺伝子を配列決定することにより検出し配列多型性の存在を決定する。多型性を検出すると、−集団からの多くの人々をスクリーンして多型性の頻度を決定する。一般に、集団中にあまり頻ばんに起こらない非常に稀な多型性は、複数の多型性マーカーを含有するハブロタイブを定義するのにあまり価値かない、なぜなら有用となる程十分には起こらないからである。型性性遺伝子を同定したあと、続いて、対立遺伝子形態間で異なる特定のＤＮＡ塩基を決定するために各対立遺伝子形態を配列決定する（表ＸＩ参照）。かかる配列情報とともに、どんな個人の対立遺伝子形態の区別も可能にする種々の方法か使用される。我々は、制限酵素消化（もし任意のＤＮＡの変化か、制限部位を変化させた場合、例えばＲＦＬＰ分析、実施例１およびｃｈａｒｍｔｅｙら、　１９９０゜Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃｄ、Ｓｃｉ、ＬＩＳＡ　８７：　４８２３−４８２７；　Ｃｏｎｃａｎｎｏｎら、１９９０゜Ａｍ、　Ｊ、　Ｈｕｍ、　Ｇｅｎｅｔ、、　４７：　４５−５２を参照）オリゴヌクレオチドリガーセ　アッセイ（ＯＬＡ、　Ｎ１ｃｋｅｒｓｏｎら、　１９９０．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８７・８９２３−８９２７）、および人々の遺伝子型を決定する方法として変成勾配ゲルも使用した。この出願の特定の多型性と教示の開示かあれば、他の方法もまた当業者に知られるであろう。これらは、対立遺伝子特定オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）分析およびその他（Ｎｉｃｋｅｒｓｏｎら、　１９９０．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８７：８９２３−８９２７に引用された参照文献７−２１を参照）を包含する。　ＤＲＳＩ８プライマー（表ＸおよびＸＩ）の使用により同定されたＤＮＡ配列は種々のＶ領域遺伝子セグメントて全ヒトコスミッドライブラリーをスクリーンすることにより初めて単離されたコスミッドに含有される非コード領域に由来する。この多型性はＴＣＲ遺伝子複合体中および近くの“無泡“領域に検出される配列多型性の例である。コスミッドの配列情報から、　ＰＣＲプライマーを合成し、複数の無関係の人々から、産物を増幅した。増幅した産物は続いて直配列決定により多型性を調べた。Ｖβ１８多型性は複数の人々のＶβ１８遺伝子を配列決定することにより初めて発見された。これは非常に興味深い多型性である、なぜなら多型性配列はアミノ酸にストップコドンをつくる変化した配列から生じているからである。従って、白人ではこのストップコドンが同型接合の人々の１０−２０％はＶβ１８タンパク産物を発現できない。これは機能を変化させる多型性の一例である。（本質以下余白）表Ｘ変成勾配ゲル電気泳動および／またはＤＮＡ配列分析により多型性を検出するために使用されるＰＣＲプライマーゞ遺伝子　プライマー　プライマー配４１　（５’７５１ら３＋）會“−１″と命名されたプライマーはセンスストランド配列からである。２２′または“−３“と命名されたものはアンチセンスストランド配列からである。本発明の好ましい実施態様を記載したか、種々の改変か開示された実施態様になされることは当業者には明白であり、かかる改変は本発明の範囲内であると意図される。（本文以下余白） −へ　−への−へＨへ ′Ｖ／３１′Ｖ／３２　／３３Ｖ／３４　リ５　シロ　Ｖ、ｇ７ＦＩＧ、４一　− 一　− 浄書（内容に変更なし）ＦＩＧ、６浄書ｆ内容に変更なし）浄書・内容に変更なし）蛍光強度の対数ＦＩＧ、９Ｄ蛍光強度の対数ＦＩＧ、９Ｅ上書′内容に変更なし）Ｆｉｇ、１０ＭＢＰ　１１度（ｕＭ）ぬ壜實浄書（内容に変更なし）ＦＩＧ、１２浄書（内容に変更なし）インビトロｍＡｂＦＩＧ、１３Ｘ　エ、専書′内容に変更なし）要約動物からＴ細胞核酸またはポリペプチド被験試料を得、該被験試料において疾病と関連した第一の標的核酸またはポリペプチド配列を検出することから成る、該疾病の発症を診断するまたは該疾病の経過を追跡するための方法が開示される。第一の標的核酸配列はＴ細胞レセプター鎖の可変部をコードするＤＮＡ配列に相当する。第一の標的ポリペプチド配列はＴ細胞抗原レセプター鎖の可変部に相当する。特定の可変部を含むＴ細胞クローンと関連した疾病にかかった動物を治療するための方法も開示される。この方法はＴ細胞クローンの特定の可変部と反応性の抗体少なくとも１種で動物を治療することから成る。特定の可変部を含むＴ細胞クローン少なくとも１つと関連した疾病を診断または治療するための、該可変部に特異的な抗体も開示される。手続補正書平成　４年　７月１６日

Claims

【特許請求の範囲】

１．動物からＤＮＡ被験試料を得、該被験試料中において、疾病のための第一の感受性遺伝子と相関する前もって決定された第一の標的ＤＮＡ配列を検出することを含む該疾病の素因の診断方法において、該第一の標的ＤＮＡ配列が、Ｔ細胞抗原レセプターの鎖の可変部をコードするゲノムＤＮＡ配列の中に含まれるか、又は該ゲノムＤＮＡ配列にごく近接するＤＮＡ配列を含むことからなる、該疾病の素因の診断方法。
２．該Ｔ細胞抗原レセプターの該鎖がα−鎖又はβ−鎖である、請求の範囲第１項記載の方法。
３．該第一の標的配列の存在が、該動物の該疾病の素因の指標となるα又はβ− 鎖ハプロタイプを明示する、請求の範囲第２項記載の方法。
４．該ゲノムＤＮＡ配列が、Ｖβ、Ｄβ及びＪβ遺伝子セグメントからなる群から選ばれるＴ細胞抗原レセプターのβ−鎖の可変部の遺伝子セグメントをコードする、請求の範囲第１項記載の方法。
５．該ゲノムＤＮＡ配列がＴ細胞抗原レセプターのβ−鎖の可変部のＶβ遺伝子セグメントをコードする、請求の範囲第１項記載の方法。
６．該ゲノムＤＮＡ配列が、Ｖα及びＪαセグメントからなる群から選ばれるＴ細胞抗原レセプターのα−鎖の可変部の遺伝子セグメントをコードする、請求の範囲第１項記載の方法。
７．該ゲノムＤＮＡ配列がＴ細胞抗原レセプターのα−鎖の可変部のＶα遺伝子セグメントをコードする、請求の範囲第１項記載の方法。
８．該第一の感受性遺伝子がＶβ遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第１項記載の方法。
９．該第一の感受性遺伝子がＶα遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第１項記載の方法。
１０．該ＤＮＡ被験試料がゲノムＤＮＡに由来する、請求の範囲第１項記載の方法。
１１．該ゲノムＤＮＡ被験試料が再配列されたＴ細胞レセプター遺伝子を実質的に含まない、請求の範囲第１０項記載の方法。
１２．該ゲノム被験ＤＮＡがＴ細胞を実質的に含まない試料から得られる、請求の範囲第１１項記載の方法。
１３．該第一の標的ＤＮＡ配列が制限断片長多型をコードする、請求の範囲第１０項記載の方法。
１４．該動物がヒトであり、該疾病が多発硬化症であり、該制限断片長多型がＶ遺伝子セグメントに連結している、請求の範囲第１３項記載の方法。
１５．該Ｖ遺伝子セグメントが、Ｖβ８とＶβ１１の間の遺伝子セグメントからなる群から選ばれるＶβ遺伝子セグメントである、請求の範囲第１４項記載の方法。
１６．該Ｖβ遺伝子セグメントがＶβ８であり、該制限断片長多型の検出が、該ゲノムＤＮＡをＢａｍＨＩで消化し、該第一の感受性遺伝子が該ヒトに存在するか否かの指標として、Ｖβ８遺伝子セグメントに連結されたＢａｍＨＩ制限部位が該試料中に存在するか否かを決定することを含む、請求の範囲第１５項記載の方法。
１７．該Ｖβ遺伝子セグメントがＶβ１１であり、該制限断片長多型の検出が、該ゲノムＤＮＡをＢａｍＨＩで消化し、該第一の感受性遺伝子が該ヒトに仔在するか否かの指標として、Ｖβ１１遺伝子セグメントに連結されたＢａｍＨＩ制限部位が該試料中に存在するか否かを決定することを含む、請求の範囲第１５項記載の方法。
１８．該Ｖ遺伝子セグメントがＶα１６を含むＶα遺伝子セグメントである、請求の範囲第１４項記載の方法。
１９．該制限断片長多型の検出が、該ゲノムＤＮＡをＭｓｐｌで消化し、該第一の感受性遺伝子が該ヒトに存在するか否かの指標として、Ｖα１６遺伝子セグメントに連結されたＭｓｐｌ制限部位が該試料中に存在するか否かを決定することを含む、請求の範囲第１８項記載の方法。
２０．該動物がヒトであり、該疾病がリウマチ様関節炎、Ｉ型糖尿病、若年性糖尿病、多発硬化症、甲状腺炎、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、グレーヴス病、アジソン病、グッドパスチャー症候群、鞏皮症、皮膚筋炎、粘液水腫、悪性貧血、萎縮性胃炎、及び溶血性貧血からなる群から選ばれる自己免疫疾患である、請求の範囲第１項記載の方法。
２１．該自己免疫疾患が多発硬化症である、請求の範囲第２０項記載の方法。
２２．該第一の感受性遺伝子がＶβ遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第２１項記載の方法。
２３．該第一の感受性遺伝子が遺伝子セグメントＶβ８とＶβ１１の間に仔在する、請求の範囲第２２項記載の方法。
２４．更に、該動物が該疾病の素因の更なる指標として該疾病と相関するＭＨＣハプロタイプを有するか否かを決定することを含む、請求の範囲第３項記載の方法。
２５．該動物がヒトであり、該疾病が多発硬化症であり、該第一の標的ＤＮＡ配列がＶα又はＶβ遺伝子セグメントに連結された制限断片長多型をコードしており、該ＭＨＣハプロタイプがＤＲ２＋である、請求の範囲第２４項記載の方法。
２６．該第一の標的ＤＮＡ配列が、Ｔ細胞抗原レセプターのβ−鎖の可変部をコードするゲノムＤＮＡ配列の中に含まれるか、又は該ゲノムＤＮＡ配列にごく近接しており、該方法が、更に、該被験試料中において、該疾病についての第二の感受性遺伝子と相関する第二の標的ＤＮＡ配列を検出することを含み、該第二の標的ＤＮＡ配列が、Ｔ細胞レセプターのα−鎖の可変部をコードするゲノムＤＮＡ配列の中に含まれるか、又は該ゲノムＤＮＡ配列にごく近接するＤＮＡ配列から成る、請求の範囲第３項記載の方法。
２７．該第一及び該第二の標的核酸配列の仔在が、該疾病への該動物の素因を示すβ−鎖及びα−鎖ハプロタイプを明示する、請求の範囲第２６項記載の方法。
２８．該方法が、更に、該動物が該疾病の素因の更なる指標として該疾病と相関するＭＨＣハプロタイプをも有するか否かを決定することを含む、請求の範囲第２７項記載の方法。
２９．該第一及び該第二の標的ＤＮＡ配列のそれぞれが、それぞれ第一及び第二の制限断片長多型をコードしている、請求の範囲第２６項記載の方法。
３０．該動物がヒトであり、該疾病が多発硬化症であり、該第一の制限断片長多型がＶβセグメントに連結されており、該第二の制限断片長多型がＶαセグメントに連結されている、請求の範囲第２９項記載の方法。
３１．該動物がヒトであり、該疾病が多発硬化症であり、該第一の感受性遺伝子がＶβセグメントを含み、該第二の感受性遺伝子がＶαセグメントを含む、請求の範囲第２６項記載の方法。
３２．動物からＴ細胞核酸被験試料を得、該被験試料中において、疾病と相関する第一の標的核酸配列を検出することを含む該疾病の発症を診断する又は該疾病の経過を追跡するための方法において、該第一の標的核酸配列が、Ｔ細胞抗原レセプター鎖の可変部をコードする転位ゲノムＤＮＡ配列に対応するＤＮＡ又はＲＮＡで形成されることからなる方法。
３３．該Ｔ細胞抗原レセプターの該鎖がα−鎖又はβ−鎖である、請求の範囲第３２項記載の方法。
３４．該転位ゲノムＤＮＡ配列が、Ｖβ、Ｄβ及びＪβセグメントからなる群から選ばれるＴ細胞抗原レセプターのβ−鎖の可変部の遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第３３項記載の方法。
３５．該転位ゲノムＤＮＡ配列がＴ細胞抗原レセプターのβ−鎖の可変部のＶβ 遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第３３項記載の方法。
３６．該ゲノムＤＮＡ配列が、Ｖα及びＪαセグメントからなる群から選ばれるＴ細胞抗原レセプターのα−鎖の可変部の遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第３３項記載の方法。
３７．該ゲノムＤＮＡ配列がＴ細胞抗原レセプターのα−鎖の可変部のＶα遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第３２項記載の方法。
３８．該核酸被験試料がＴ細胞からのＤＮＡ又はＲＮＡを含む、請求の範囲第３２項記載の方法。
３９．該第一の標的核酸配列がＶβ遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第３２項記載の方法。
４０．該第一の標的核酸配列がＶα遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第３２項記載の方法。
４１．該動物がヒトであり、該疾病がリウマチ様関節炎、Ｉ型糖尿病、若年性糖尿病、多発硬化症、甲状腺炎、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、グレーヴス病、アジソン病、グッドパスチャー症候群、鞏皮症、皮膚筋炎、粘液水腫、悪性貧血、萎縮性胃炎、及び溶血性貧血からなる群から選ばれる自己免疫疾患である、請求の範囲第３２項記載の方法。
４２．該自己免疫疾患が多発硬化症である、請求の範囲第４１項記載の方法。
４３．該第一の標的核酸配列がＶβ遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第４２項記載の方法。
４４．該Ｖβ遺伝子セグメントが遺伝子セグメントＶβ８とＶβ１１の間に存在する、請求の範囲第４３項記載の方法。
４５．該第一の標的核酸配列がＶα遺伝子セグメントを含む、請求の範囲第４２項記載の方法。
４６．該第一の標的核酸配列が、Ｔ細胞抗原レセプターのβ−鎖の可変遺伝子セグメントをコードするＤＮＡ配列を含み、該方法が、更に、該Ｔ細胞核酸被験試料中において、該疾病と相関する第二の標的核酸配列を検出することを含み、該第二の標的核酸配列が、Ｔ細胞レセプターのα−鎖の可変遺伝子セグメントを含む転位ゲノムＤＮＡ配列に対応するＤＮＡ又はＲＮＡで形成されている請求の範囲第３３項記載の方法。
４７．該動物がヒトであり、該疾病が多発硬化症であり、該第一及び第二の標的核酸配列が、それぞれβ−鎖及びα−鎖可変部をコードするＤＮＡ配列を含む、請求の範囲第４６項記載の方法。
４８．該動物がヒトであり、該疾病が多発硬化症であり、該第一及び該第二の標的核酸配列が、それぞれＶβ及びＶα遺伝子セグメントをコードするＤＮＡ配列を含む、請求の範囲第４６項記載の方法。
４９．更に、該第一の標的核酸配列の検出を定量し、該値を、相応の基底線Ｔ細胞核酸被験試料中の同一の標的配列の測定値と比較することを含む、請求の範囲第３２項記載の方法。
５０．動物からＴ細胞レセプター被験試料を得、該被験試料中において、Ｔ細胞抗原レセプター鎖の可変部から成る疾病と相関する第一の標的ポリペプチド配列を検出することを含む、該疾病の発症又は経過の診断方法。
５１．該Ｔ細胞抗原レセプター領がα−鎖又はβ−鎖である、請求の範囲第５０項記載の方法。
５２．該第一の標的ポリペプチド配列が、Ｖβ、Ｄβ及びＪβペプチドセグメントからなる群から選ばれるＴ細胞抗原レセプターのβ−鎖の可変部のペプチドセグメントを含む、請求の範囲第５１項記載の方法。
５３．該第一の標的ポリペプチド配列がＴ細胞抗原レセプターのβ−鎖のＶβペプチドセグメントを含む、請求の範囲第５１項記載の方法。
５４．該第一の標的ポリペプチド配列が、Ｖα及びＪαペプチドセグメントからなる群から選ばれるＴ細胞抗原レセプターのα−鎖のペプチドセグメントを含む、請求の範囲第５１項記載の方法。
５５．該第一の標的ポリペプチド配列がＴ細胞抗原レセプターのα−鎖のＶαペプチドセグメントを含む、請求の範囲第５１項記載の方法。
５６．該Ｔ細胞ポリペプチド被験試料が該動物からのＴ細胞を含む、請求の範囲第５０項記載の方法。
５７．該動物がヒトであり、該疾病がリウマチ様関節炎、Ｉ型糖尿病、若年性糖尿病、多発硬化症、甲状腺炎、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、グレーヴス病、アジソン病、グッドパスチャー症候群、鞏皮症、皮膚筋炎、粘液水腫、悪性貧血、萎縮性胃炎、及び溶血性貧血からなる群から選ばれる自己免疫疾患である、請求の範囲第５０項記載の方法。
５８．該疾病が多発硬化症である、請求の範囲第５７項記載の方法。
５９．該第一の標的ポリペプチド配列がＶβペプチドセグメントを含む、請求の範囲第５８項記載の方法。
６０．該Ｖβペプチドセグメントが遺伝子セグメントＶβ８とＶβ１１の間のＤＮＡ配列によりコードされている、請求の範囲第５９項記載の方法。
６１．該第一の標的ポリペプチド配列がＶαペプチドセグメントを含む、請求の範囲第５８項記載の方法。
６２．該第一の標的ポリペプチド配列が、Ｔ細胞抗原レセプターのβ−鎖の可変ペプチドセグメントから成る該方法が、更に、該Ｔ細胞ポリペプチド被験試料中において、Ｔ細胞レセプターのα−鎖の可変ペプチドセグメントを含む、該疾病と相関する第二の標的ポリペプチド配列を検出することを含む、請求の範囲第５７項記載の方法。
６３．該動物がヒトであり、該疾病が多発硬化症であり、該第一及び該第二の標的ポリペプチドが、それぞれＶα及びＶβセグメントを含む、請求の範囲第６２項記載の方法。
６４．更に、該第一の標的ポリペプチド配列の検出を定量し、該値を、相応の基底線Ｔ細胞抗原レセプター被験試料中の同一の標的配列の測定値と比較することを含む、請求の範囲第５０項記載の方法。
６５．Ｔ細胞クローンのＴ細胞抗原レセプターにおける特定の可変部を含む該Ｔ細胞クローンの少なくとも１種と相関する疾病に罹患した動物の治療方法において、該動物を、該特定の可変部と反応する少なくとも１種の抗体で治療することを含む治療方法。
６６．該疾病が、特定の可変セグメントを含むＴ細胞クローンと相関し、該方法が、該動物を、該特定の可変セグメントと反応する少なくとも１種の抗体で治療することを含む、請求の範囲第６５項記載の方法。
６７．該可変セグメントがＶβセグメントを含む、請求の範囲第６６項記載の方法。
６８．該可変セグメントがＶαセグメントを含む、請求の範囲第６６項記載の方法。
６９．該疾病が、異なる可変部を有するＴ細胞レセプターをもつ少なくとも２種のＴ細胞クローンと相関し、該方法が、該動物を、該異なる可変部のそれぞれに特異的な少なくとも２種の抗体で治療することを含む、請求の範囲第６５項記載の方法。
７０．該Ｔ細胞レセプターが異なる可変セグメントを有し、該抗体のそれぞれが該異なる可変セグメントのそれぞれに特異的である、請求の範囲第６９項記載の方法。
７１．該動物がヒトであり、該疾病がリウマチ様関節炎、Ｉ型糖尿病、若年性糖尿病、多発硬化症、甲状腺炎、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、グレーヴス病、アジソン病、グッドパスチャー症候群、鞏皮症、皮膚筋炎、粘液水腫、悪性貧血、萎縮性胃炎、及び溶血性貧血からなる群から選ばれる自己免疫疾患である、請求の範囲第６５項記載の方法。
７２．該疾病が多発硬化症である、請求の範囲第７１項記載の方法。
７３．該抗体がＶβ８とＶβ１１の間のＶβ遺伝子セグメントによりコードされているＶβセグメントに特異的である、請求の範囲第７２項記載の方法。
７４．Ｔ細胞クローンのＴ細胞抗原レセプターにおける特定の可変部を含む該Ｔ細胞クローンと相関する疾病の診断又は治療のための抗体であって、該可変部に特異的である抗体。
７５．前記抗体はＴ細胞抗原レセプターのＶβ領域を含むペプチドに特異的である、請求の範囲第７４項記載の抗体。
７６．前記抗体はＴ細胞抗原レセプターのＪβセグメントを含むペプチドに特異的である、請求の範囲第７４項記載の抗体。
７７．前記抗体はＴ細胞抗原レセプターのＶα領域を含むペプチドに特異的である、請求の範囲第７４項記載の抗体。
７８．前記抗体はＴ細胞抗原レセプターのＪαセグメントを含むペプチドに特異的である、請求の範囲第７４項記載の抗体。
７９．前記抗体はモノクローナル抗体である、請求の範囲第７４項記載の抗体。
８０．第一の抗体はＶβセグメントを含む可変セグメントと反応性であり、第二の抗体はＶαセグメントを含む可変セグメントと反応性である、請求の範囲第７０項記載の方法。
８１．次の配列：（ａ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつヌクレオチドＸを含む；（ｂ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成る；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）に相補的な核酸；［ただしＸはＣで、ＹはＡまたはＧである］より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
８２．次の配列：（ａ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつヌクレオチドＸを含む；（ｂ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成る；（ｃ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成る；および（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）に相補的な核酸；［ただしＸはＧで、ＹはＣまたはＴで、ＺはＧまたはＣである］より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
８３．次の配列：（ａ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつヌクレオチドＸを含む；（ｂ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつヌクレオチドＹを含む；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）に相補的な核酸；［ただしＸはＧで、ＹはＡである］より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
８４．次の配列：（ａ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつヌクレオチドＸを含む；および（ｂ）（ａ）に相補的なヌクレオチド配列；［ただしＸはＴである］より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
８５．次の配列：（ａ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成る；および（ｂ）（ａ）に相補的な核酸；［ただしＸはＴまたはＧである］より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
８６．次の配列：（ａ）およびそのサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成る；および（ｂ）（ａ）に相補的な核酸；［ただしＸはＡまたはＣである］より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
８７．次の配列：（ａ）（ｂ）（ｃ）（ａ）および（ｂ）の核酸をプライマーとして使用するＰＣＲ産物から得られる核酸；（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成る；および（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）に相補的な核酸；より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
８８．前記ヌクレオチド配列は（ａ）（ｂ）（ａ）のサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成る；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）に相補的なヌクレオチド配列；［ただしＸはＴまたはＣである］より成る群から選ばれる、請求の範囲第９６項記載の核酸。
８９．次の配列：（ａ）プライマーＶＡ２−１およびＶＡ２−２を使用するＰＣＲ産物から得られ、Ｖα２配列：を含む核酸、ただし該ＰＣＲ産物は該Ｖα２配列に含まれない多型ヌクレオチド置換を含む；（ｂ）（ａ）のサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつ多型ヌクレオチド置換を含む；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）に相補的なヌクレオチド配列；より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
９０．次の配列：（ａ）プライマーＶＡ４−１およびＶＡ４−２を使用するＰＣＲ産物から得られ、Ｖα４．１配列：を含む核酸、ただし該ＰＣＲ産物は該Ｖα４．１配列に含まれない多型ヌクレオチド置換を含む；（ｂ）（ａ）のサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつ多型ヌクレオチド置換を含む；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）に相補的なヌクレオチド配列；より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
９１．次の配列：（ａ）プライマーＶＢ１０−１およびＶＢ１０−２を使用するＰＣＲ産物から得られ、Ｖβ１０配列：を含む核酸、ただし該ＰＣＲ産物は該Ｖβ１０配列に含まれない多型ヌクレオチド置換を含む；（ｂ）（ａ）のサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつ多型ヌクレオチド置換を含む；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）に相補的なヌクレオチド配列；より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
９２．次の配列：（ａ）プライマーＶＢ１５−１およびＶＢ１５−２を使用するＰＣＲ産物から得られ、Ｖβ１５配列：を含む核酸、ただし該ＰＣＲ産物は該Ｖβ１５配列に含まれない多型ヌクレオチド置換を含む；（ｂ）（ａ）のサブフラグメント、ただし該サブフラグメントは少なくとも約１０個のヌクレオチドから成り、かつ多型ヌクレオチド置換を含む；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）に相補的なヌクレオチド配列；より成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
９３．配列多型を含む請求の範囲第８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１および９２項記載の核酸より成る群から選ばれる核酸配列を検出することから成る、動物由来の核酸試料中の特定の多型対立遺伝子の存在を判定する方法。
９４．前記方法は前記核酸配列を疾病に関連した多型対立遺伝子と比較し、これにより該疾病の素因を診断したり、該疾病の発症を診断したり、該疾病の治療を監視したりする、ことをさらに含む、請求の範囲第９３項記載の方法。
９５．前記核酸試料において、多型ＭＨＣ遺伝子座を含む核酸配列を検出することをさらに含む、請求の範囲第９４項記載の方法。
９６．Ｔ細胞抗原レセプター中の特定の可変部はエキソンに位置する請求の範囲第８１、８２、８３、８４、８９、９０、９１および９２項記載の核酸より成る群から選ばれる核酸によりコードされる可変部を含む、請求の範囲第６５項記載の方法。
９７．前記疾病は腫瘍性疾患、感染症、過敏症、移植、対宿主性移植片病および変性神経系疾患より成る群から選ばれる、請求の範囲第１、３２、５０または６５項記載の方法。
９８．前記疾病は白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、乳癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、膵臓癌；ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、インフルエンザ、Ａ型、Ｂ型またはＣ型肝炎ウイルスにより引き起こされるウイルス感染症；カンジダ属の酵母により引き起こされる真菌感染症；住血吸虫、フィラリア、線虫旋毛虫症、睡眠病を起こす原虫、マラリアを起こすプラスモディウムまたはリーシュマニア症を起こすリーシュマニアにより引き起こされる寄生虫感染症；およびミコバクテリウム、コリネバクテリウムまたはブドウ球菌により引き起こされる細菌感染症；アレルギーへ導くＩ型過敏症、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症および自己免疫溶血性貧血に見られるようなＩＩ型過敏症；らい病、結核、サルコイドーシスおよび住血吸虫症に現れるようなＩＶ型過敏症；ならびにアルツハイマー病より成る群から選ばれる、請求の範囲第９７項記載の方法。
９９．前記疾病と関連した多型ＭＨＣヌクレオチド配列を含む核酸配列を検出することをさらに含む、請求の範囲第３２または５０項記載の方法。
１００．前記疾病と関連したＭＨＣハプロタイプと反応性の抗体少なくとも１種を用いて前記動物を治療することをさらに含む、請求の範囲第６５項記載の方法。