JPH05504351A - Ｌ―α―グリセリルホスホリル―Ｄ―ミオイノシトール及びその塩の調製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 し−α−グリセリルホスホリル−Ｄ−ミオイノシトール及びその塩の調製方法 本発明はＬ−α−グリセリルホスホリル−〇−ミオイノシトール及びその塩を粗 または部分精製リン脂質より調製する方法に関する。

Ｌ−α−グリセリルホスホリル−Ｄ−ミオイノシトール（ＧＰＩ）およびその薬 学的に許容される塩の調製方法はこれまで開示されていなかった。

ブラウン（Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、、　３７７４．１９５９）及びプロッカ ロンＵ、　ＡＩｌ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、、　２５９１．１９５９）は純粋な ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）をアシル化することによりシクロヘキシル アンモニウム塩としてＧＰｒを得ている。この物質は商業的に入手することがで きないし、工業的に実施することができないような困難な工程によってしか得ら れない。

ラフアジ（Ｊ、　ＡＩｌ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　３７１３．１９６０＞は 粗とうもろこしリン脂質をアシル化してシクロヘキシルアンモニウム塩としてＧ ＰＩを得ている。しかし濃度勾配溶出により強塩基性イオン交換樹脂を用いて精 製を行っているが、得られたシクロヘキシルアンモニウム塩は純粋ではなく、精 製を行うために繰り返し再結晶を行わなければならなかった。

純度の高くないＰＩを出発物質として純粋なＧＰＴを得ることが困難であること はホースロンによって証明されている（Ｂｉ。

ｃｈｅＩｌ、　Ｊ、、　１９５．１９５９）。ホースロンはバリュウム塩として ＧＰＩを単離しているが、蟻酸アンモニウムとテトラホウ酸ナトリウム混合物の 濃度勾配溶出による強塩基性イオン交換樹脂によるクロマトグラフィーと精製Ｐ Ｉを用いた場合にのみ純粋なＧＰｒが得られるとの興味深い知験を得ている。

本発明は、一般式（１）で示されるＧＰＩのフリーの酸及びその塩を簡単でかつ 経済的な工程で、粗または部分精製リン脂質より調製する方法を提供する。

（ＧＰＩ−）ｎ　Ｘ”　（Ｉ　） 但しＧＰＩはグリセリルホスホリルミオイノシトールアニオンであり、 χはＮａ、　Ｃａ、　Ｍｇ、　ＡＩ、　Ｚｎ、　ＮＨａであり、ｎは１ないし３ の整数である。

本方法の特徴は特に、蟻酸や酢酸のような有機酸の希釈水溶液を用いて、弱塩基 性樹脂で粗ＧＰＩを精製する所に存在する。まず初めにＧＰＩよりも弱酸性の不 純物［Ｌ−α−グリセリルホスホリルエタノールアミン（ＧＰＥ）、Ｎ−アシル ＧＰＥ等］　は有機酸の希釈水溶液で樹脂から溶出され、ＧＰＩは溶出されない 。

次いで純粋なＧＰＩがより高い濃度の有機酸水溶液で溶出され、ＧＰＩよりも強 酸性の不純物［Ｌ−α−グリセリルホスホリルセリン（ＧＰＳ）　、グリセロリ ン酸等の不純物］　は溶出されない、これらの不純物は有機酸水溶液では溶出さ れないが食塩水溶液を用いた場合にのみ溶出することができる。

強塩基性樹脂を用いた場合は、ＧＰＨの完全な排出は非常に困難なことであり、 特に、有機酸水溶液で樹脂を洗浄してＧＰＩを回収することができないため、こ の単純な精製を達成することができない。実際、この場合には食塩水溶液が用い られるが、酸性不純物からＧＰＩを分離するため厄介なりロマトグラフィー操作 を使う必要がある。

本発明方法は以下に要約することができる。

粗または部分精製リン脂質混合物のアルコール（好適には、メタノールもしくは エタノール）懸濁液をアルカリ金属アルコキシド（好適には、ナトリウムまたは カリウムメトキシド、メトキシド、ターシャリーブトキンド）を用いて処理する 。

反応終了後、不溶性残渣を濾過し、反応溶液中に再び懸濁させ、この懸濁液を鉱 酸（好適には、塩酸、硫酸、リン酸）もしくは有機酸（好適には、蟻酸、酢酸、 プロピオン酸等）を用いて、中性もしくは弱酸性（ｐＨ４−７）にｐＨを調整す る。次いで、再度濾過する。粗ＧＰＩ　ＮａまたはＧＰＩ　Ｋ（使用したアルコ キシドに由来）を含有する固形物を、水に懸濁しく水／固形物比はν／鰐で好適 には１−２とし）、次いで懸濁液にアルコールを添加する（好適には、メタノー ル、エタノール、イソプロパーノールのいずれかを水を用いておよその容量比Ｖ ／νで１．５＝３）、濾過を行い、沈澱は懸濁液を調製したと同様の加水アルコ ール混合液で洗浄する。得られた水和アルコール抽出物からアルコールを蒸発さ せ、次いで水溶液は、最初に酸性型にした陽イオン樹脂に流下させる０次いで弱 酸型樹脂（好適には、ハイドロオキサイド、アセテート、ホルメート型にした） を通す。樹脂は最初に水で洗浄し、ついで１−３χＷ／Ｖの濃度にした有機酸水 溶液（好ましくはギ酸、酢酸、プロピオン酸）で洗浄する。その後精製ＧＰＩは ５−１０χ−／Ｖ濃度に調製した上述の有Ｑ！ｉ酸水溶液で樹脂を洗浄して回収 する。上記１゜χ−／Ｖ　ｆｉ度より′ａ縮したＧＰＩ　４１ｉ物を得るため、 回収溶液は減圧下で少量に濃縮する１次いでＧＰＩを半固形で回収するため、ア セトン中にａｌｌ動物注ぐ、上清の水を静かに容器を傾けて除き、沈澱はアルコ ール（好適には、メタノール、エタノール、イソプロパツール）中に移し、固形 酸ＧＰＩを単離する。

一般式（Ｉ）の塩は、所望の塩に対応する金属の炭酸塩、炭酸水素化物、オキサ イド、ハイドロオキサイドで、得られた酸ＧＰＩの水溶液を処理し、その後溶液 を濃縮し、最後にアルコール（望ましくはメタノール、エタノール、イソプロパ ツール）で沈澱物として得ることができる。

１　：　ＧＰＩの＝　１ 脱オレイン化大豆レシチン（１，２２ｋｇ）をナトリウムメトキシド（６０ｇ） を含むメタノール（４，５１）に懸濁した溶液を室温で４時間攪拌した。残渣（ 乾燥物の６００ｇに相当量）を濾過し、メタノール０．５１で２回洗浄し、次い でメタノール１．３１に再度懸濁した。木酢Ｍ（およそ５４ｍ１）でｐＨ４，５ に調整した。残渣は再度濾過し、メタノール３００ｍ１で２回、濾過物を洗浄し 、次いで真空下で４０°Ｃで乾燥し、約１０χのＧＰＩ　Ｎａを含有する乾燥物 ４００ｇを得た。

残渣は８００１ｍｌの水に懸濁させ、この混合物に、メタノール１．６１を緩や かに加え、３０分間攪拌した。濾過後、メタノール／水、２：１の混合液３００ ｍ１で２回フィルター上の残渣を洗浄した。水和アルコール溶液は集め、メタノ ールを減圧下で蒸発させ、水溶液は脱色のため、活性炭１０ｇとケイソウ±Ｌｏ ｇの混合物で２回処理を行った。溶液は濾過し、そしてＩＲ−１２０Ｈ樹脂３０ 抛ｌに通し、樹脂は６００ｍ　ｌ　の水で洗浄した。得られた？８液はＩＲ−９ ３０）！樹脂２００ｍ１に通し、最初に樹脂を水で洗浄した０次いで３χＷ／Ｖ 酢酸水溶液で不純物が完全に溶出してこなくなるまで洗浄した（Ｔ、Ｌ、Ｃ１で 確認する）、樹脂はＧＰＩを完全に回収するまで８χ−／Ｖ酢酸水溶液で洗浄し た。溶液は真空下で濃縮（約３００ｍ１まで）した、ついで攪拌しながらアセト ン４１中に注いだ。混合溶液は６時間室温で攪拌し、その後上清の水を静かに容 器を傾けて除いた。エタノール６００ｍ　ｌを添加し、混合液は室温で５時間撹 拌し、その後上清の水を静かに容器を傾けて除いた。エタノール３００ｍ１　を さらに添加し、室温で１８時間混合液を攪拌し、生成物を濾過し、エタノールで 洗浄し、無水リン酸上に１き、３０゛ｃで減圧下で乾燥した。ＧＰｌ　３１ｇを 得た。

Ｃ，Ｈ＋ｑＯｘＰ　（Ｍ、讐、−３３４，２３）計夏イ直　Ｃ＝３２．３４χ　 Ｈ＝５．７３χ実測値Ｃ＝３２．１９χ　Ｈ＝５．８３に’）Ｉ−ＮＭＩＩ　（ ＤｚＯ）：　δｐｐｍ：　３．２０−３．７５　（６Ｈ，濡）；　３．７５−４ ．１０　（４１，ｍ）；４．２０　（ＩＨ，ｍ）　； Ｍａｓｓ： ３３３・［Ｍ−１１：　２５９＝　［（Ｍ−１）−Ｃ３Ｈ，Ｏ□］；２４１・［ （Ｍ−１）　−Ｃ２Ｈ，Ｏ□−１（，０１；１６３＝　［ＣＪｌ　＋Ｏｓｌ α。−−１７，３６（ｃ・２水中） ■、ｐ、　１４５÷１５０’Ｃ（分解）２：ＧＰＩシクロヘキシルアンモニウム ｄのＵ精製酸ＧＰＩ（実施例１で得た）１５ｇを１５抛ｌの水に溶解した溶液に 、シクロヘキシルアミンを添加し、ｐＨ８に調整した。次いで約３０ＩＩＩまで ４縮し、さらにエタノール約２００ｍ１を加え希特表千５−５０４３５１　（３ ） 釈した。濾過後得られた沈澱をエタノール中で再結晶させそして無水リン酸上４ ０℃で真空下で乾燥させた。　ＧＰＩ　シクロヘキシルアンモニウム塩１４．５ ｇを得た。

Ｃ＋５ＨｚｚＯ＋＋Ｐ　（Ｍ、Ｗ、−４３３，４）計算値Ｃ＝４１．５７χ　Ｈ −７，４４χ　Ｎ・３．２３χ実測値Ｃ−４１，６１１Ｈ−７，４２７，Ｎ−３ ，２０χ’Ｈ−ＮＭＲ（０，０）　δｐｐｍ：　１．００−１．２０　（ｍ；　 ４Ｈ；　シクロヘキシル）；Ｌ、３３−１．４８　（＠；　２Ｈ；　シクロヘキ シル）；　１．４Ｂ−１，６０（ｍ；　２）ｉ；シクｏヘキシ／Ｌｚ）；　１． ６７−１．８０　（ａ＋；　２Ｈ；　シクロヘキシル）；２．８０−３．００　 （ｒａ；　ＣＨ−１０）；　３．０８　（ｄｄ：　ＣＨ−５；　Ｊｓ−４−Ｊｓ −ｈ−９，３８２）；３．２９　（ｄｄ；　ＣＭ−３；　Ｊ＋−ｘ−２，７０） ［ｚ；　Ｊｚ−４”９．３０　）ｌｚ）；　３．３４−３．４４Ｃａａ：　ＣＨ −４＋　ＣＨｚ−９）；　３．５０　（ｄｄ；　ＣＭ−６；　Ｊｂ−ｓ−Ｊｈ− ＋＠９．３０　Ｈｚ）；３．６０−３．７８　（ｍ；　ＣＨ−１＋　ＣＬ８　＋ 　ＣＨｚ−７）；　４．００　（ｄｄ；　ＣＨ−２；　Ｊｚ−ｘ−Ｊ、−、−２ ，７０）；　４．６０　（ｓ；　Ｄｌｌｏ）；”Ｃ−ＮＭＲ（０２０）　（ｆｕ ｌｌｙ　ｄｅｃｏｕｐｌｅｄ）：δｐｐＩＩ：　２６．１９　（ｓ；　Ｃ−１２ ＋Ｃ−１４）；　２６．６８　（ｓ；　Ｃ−１３）；　３２．７２　（ｓ；　Ｃ −１１＋Ｃ４５）；　５２．７４（Ｓ；　Ｃ−１０）；　６４．４３　（ｓ；　 Ｃ−９）；　６８．７０　（ｄ；　Ｃ−７；　ＪＣ−０−Ｐ＝５．７２Ｈｚ）； 　７３．０２　（ｄ；　Ｃ−８）；　７３．１０　（ｓ：　Ｃ−３）；　７３． ６５　（ｍ；　Ｃ−２＋Ｃ−６）ニア４．５８　（ｓ；　Ｃ−４）；　ｐｐｎ＋ 　７６．３２　（ｓ、Ｃ−５）；　７８．６０　（ｄ、Ｃ−１；　ＪＣ−０−Ｐ ＝５．９　Ｈｚ）； α。＝　１３．２　（ｃ−２，０９水中）３　：　（ＧＰＩ）　ｚＣａのｉ１１ 精製酸ＧＰＩ（実施例１で得た）１５ｇを１５０ｍ１の水にｉ８解した溶液に炭 酸カルシウムを添加しｐＨ５，５に調整した。この混合液を濾過、次いでこの溶 液を真空下で約３０ｍ１までｆＡ縮し、さらにメタノール約１５０ｍ１中に攪拌 しながら入れた。室温で１時間攪拌した後、濾過して得られた沈澱をメタノール で洗浄した。そして４０°Ｃで真空下で乾燥させた。純粋な（ＧＰＩ）ｚＣａ　 （殆ど水に不溶解性の固体）１５ｇを得た。

Ｃ＋ｅＨユａＯｚ＊ＰｚＣａ（Ｍ、Ｗ、＝７０６．５）計算値Ｃ＝３０．６０χ 　）Ｉ−５，１３χ　Ｃａ−５，６７χ実測値Ｃ，３０，５６Ｘ　１（、＝５． １２χ　Ｃａ−５，５８χ’）Ｉ−Ｎ？Ｉｌｌ　（Ｄ、０）δｐｐｍ：　３．３ ７　（ｄｄ、　ＣＨ−５：　Ｊｓ−４□Ｊｓ−ａ□９．２１　Ｈｚ）；３．５８ 　（ｄｄ、　ＣＨ−３；　Ｊｚ−ｚ＝２．７８８Ｚ；　Ｊｆｆ−＝９．２１　Ｈ ｚ）；　３．６５−３．７５（ｍ；　ＣＨ−４＋　ＣＨｚ−９）；　３．７９　 （ｄｄ、ＣＨ−６；　Ｊｂ−ｓ＝Ｊｂ−＋＝９．２７　Ｈｚ）；３．９０−４． １０　（ｍ；　ＣＨ−１＋　ＣＨ−８＋　ＣＨｚ−７）；　４．３Ｈｄｄ、ＣＨ −２；　Ｊｚ−ｚ＝Ｊｚ−＋−２，７８Ｈｚ）；　４．８０　（ｓ；　ＤＨＯ） ”Ｃ−ＮＭＲ（ＩｈＯ）　（ｆｕｌｌｙ　ｄｅｃｏｕｐｌｅｄ）δｐｐｍ：　６ ９．０３　（ｓ；Ｃ−９）；７３．３４　（ｄ；　Ｃ−７；　Ｊｃ−ｏ−ｐ＝５ ．６　Ｈｚ）；　７７．６０　（ｄ；　Ｃ−８）：　７７．７１（ｓ；　Ｃ−３ ）；　７８．２５　（ｍ；　Ｃ−２＋Ｃ−６）；　７９．１６　（ｓ；　Ｃ−４ ）；　８０．８８　（ｓ；Ｃ−５）；　８３．１３　（ｄ；　Ｃ−１；　Ｊｃ− ｏ−ｐ＝５．９０　）１ｚ）；α−＝　−１５，４６（ｃ＝２．０７　水中）実 施例３に説明したと同様の方法で炭酸マクプシウムまたは炭酸バリウムを用いて 以下の様な（ＧＰＩ）Ｊｇおよび（ＧＰＩ）　、Ｂａをそれぞれ得た。

ＣＩＪｈｈＯｏＰＪｇ　（ＭＪ、＝６９０．７４）計算値Ｃ＝３１．３０χ　Ｈ ＝５．２５χ　Ｍｇ・３．５２χ実測値Ｃ−３１，３５ｍ　１（＝５．２１Ｘ　 Ｍｇ−３，５０２α。・−１５，６８（ｃ・３．１　水中）（＋ｓＨｓｉＯｚｚ ＰＪａ（ＭＪ、　＝　８０３．７８）計算値Ｃ・２６．８９χ　Ｈ−４，５１χ 実測値Ｃ−２６，７４Ｘ　Ｈ＝４．６９ｍα。−−１４，８（ｅ−３，７９水中 ）実施例３に説明したと同様の方法で水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸 化アンモニウム、炭酸水素塩、または炭酸塩を用い溶液のｐＨを４．５−５に調 整して、以下の様なＧＰＩ　Ｎａ。

ＧＰｒ　ＫおよびＧＰＩ　ＮＨ，をそれぞれ得た。

ＣｑＨ＋ｍＯｔ＋ＰＮａ　（Ｍ、Ｌ＝３５６．２１）計Ｘ［Ｃ＝３０．３５χ　 Ｈ，５，０９χ実測イ直　Ｃ−３０，２８χ　Ｈ＝５．１８χαｏ　＝　１４． ９　（ｃ−３，３水中）ＣＪ＋＊Ｏ＋＋ＰＫａ　（Ｍ、Ｗ、Ｊ６３．３２）計算 値Ｃ−２９，７５Ｘ　Ｈ＝４．９９Ｘ実測値Ｃ・２９．８４χ　Ｈ＝５．０５χ ａｎ　□　１５．１　（ｃ＝２．３　水中）ＣｑＨＩｍＯｘＰＮＨａ　（Ｍ、Ｗ 、＝３５１．２５）計算値Ｃ・３０．７７χ　Ｈ−６，３１χ　Ｎ・３．９８χ 実測値Ｃ・３０．８４χ　Ｈ・６．４５χ　Ｎ＝３．８５χαり・−１６、ｌ　 （ｃ−１，４水中）上記の塩は実施例３に示したように実施例１の酸ＧＰＩの水 溶液を直接処理して得ることが可能である。

４：。＼　１ホスフアチジルイノシトールか゛の（ＧＩ’Ｉ）　Ｍ■週１ 脱オレイン化大豆レシチン（１ｋｇ）をメタノール（２１）に懸濁した溶液を室 温で２時間攪拌し、次いで濾過した。残渣はメタノール８００ｍ１で洗浄し、次 いでメタノールに再度懸濁し、室温で１時間攪拌した。濾過し、残渣をメタノー ル５０抛ｌで洗浄し、ナトリウムメトキシド（４０ｇ）を含むメタノール（２， ５１）に懸濁し、実施例１、実施例３のように処理した。（ＧＰＩ）ｚＭｇ２５ ｇを得た。

５：　リン２　から（ＧＰＩ）　ｚＢａの霊。＋１約ｌＯχＰＩ、１０χｐｓ、 ３０χｐｃ、３０χＰＥを含有したリン脂質５００ｇをナトリウムメトキシド３ ０ｇを含有するメタノール（３１）に懸濁した溶液を実施例１．実施例３に従い 、処理を行い、９．６ｇの（ＧＰ　Ｉ）　Ｊａを得た。本工程の収量は一般的な 粗リン脂質中のＰＩ含有量と顕著に異なっており、含有量の変更を示すものであ る。

要　約　書 水和アルコール溶液で租税アシル化リン脂質の混合物を抽出し、次にコントロー ルされた条件下で弱塩基性樹脂上で溶出することによってＬ−α−グリセリルホ スホリル−Ｄ−ミオイノシトール及びその塩を調製する方法。

国際調査報告

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. １．次の一般式（Ｉ）で示される酸Ｌ−α−グリセリルホスホリル−Ｄ−ミオイ ノシトール及びその塩を粗または部分精製リン脂質の脱アシル化により調製する 方法であって、以下の工程からなる調製方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）但しＧＰＩはグリセリルホスホリルミ オイノシトールアニオンであり、 ＸはＮａ，Ｃａ，Ｍｇ，ＡＩ，Ｚｎ，ＮＨ４であり、ｎは１ないし３の整数であ る。 ａ）水和アルコール混合物よりなる粗脱アシル化混合物の不溶解性残渣からＣＰ ＩＮａまたはＧＰＩＫを抽出する工程。 ｂ）金属イオンを除去した後、得られる粗ＧＰＩを弱塩基性樹脂を用いて精製す る際に、最初に有機酸水溶液で樹脂を洗浄し、ＧＰＩより弱い中性、酸性不純物 を除去し、ついでより濃度の高い有機酸水溶液で樹脂を洗浄し、純ＧＰＩを回収 する工程。
2. ２．工程ａ）において使用するアルコール／水のＶ／Ｖ比が１．５ないし３であ りアルコールがメタノール、エタノール、イソプロパノールである請求項１記載 の方法。
3. ３．工程ｂ）において蟻酸、酢酸またはプロピオン酸を濃度１ないし３％ｗ／ｖ で使用して不純物を除き、次いで蟻酸、酢酸またはプロピオン酸を濃度５ないし １０％ｗ／ｖで使用してＧＰＩを回収する請求項１記載の調製方法。
4. ４．出発物質として粗もしくは部分精製リン脂質を用いるものである請求項１− ３記載の調製方法。
5. ５．固形物としてのグリセルホスホリルミオイノシトールおよびその塩。