JPH05500216A

JPH05500216A - 新規な医療用途

Info

Publication number: JPH05500216A
Application number: JP2512956A
Authority: JP
Inventors: ローセン，アンデルス
Original assignee: アクチエボラゲツト・アストラ
Priority date: 1989-09-12
Filing date: 1990-09-10
Publication date: 1993-01-21
Also published as: DD298056A5; AU641942B2; HUT62932A; IE903233A1; AU6433690A; GR1001151B; SE8903003D0; HU9200821D0; FI921058A0; EP0489113A1; WO1991004320A1; PT95284A; CA2065454A1; GR900100679A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】新規な医療用途発明の技術分野本発明は患者自身の細胞傷害性細胞により認識される表面構造を発現する癌細胞に対して応答性のあるリンパ球の反応性を増強する方法を含む、８９２８球白血病およびある種の他の悪性疾患の治療に対する新しい手法（ストラティジー）に関する。かかる癌の例は悪性黒色腫および結腸癌である。

Ｗｏ　８８１０６８９１から、Ｂ細胞生長因子およびこれらに類似した抗体がある種の悪性障害における分化誘導に使用できることは知られている。我々はここに、このような分化誘導に対するチオレドキシン系統（ｆａｍｆｌｙ）に属する酵素例えばＭＰ６セルライン由来チオレドキシン（１ｌＰ６／τｒｘ）の使用を記載する。該酵素は単独であるいは補助因子（コファクター）との併用で用いられる。

本発明の一般的概要および導入部癌細胞はコントロールされない増殖によって特徴付けられる。しばらく前から、これらの細胞を非増殖状態に分化するよう誘導することにより増殖を抑制できるという考えが存在している。ビタミンやインターフェロンなどの分化誘導剤を用いた臨床実験も様々な白血病に対して行われている。しかしながら、このような実験は規定の受容体構造とのみ反応する、より特異的な増殖および分化因子を用いて行われたことはない。本発明はかかる特異的因子を単独であるいは支援剤との併用により癌治療に用いることを提案するものである。

正常細胞から癌細胞への発達は多段階過程である。悪性形質転換（＋ａｌｉｇｎａｎｔ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）中に一部の細胞タイプ、例えば一部のＢリンパ球（文献１）は規定の増殖因子に対する受容体の発現能を獲得しそして増殖または熟成によってこれらに応答する。腫瘍細胞はこのようにして、特異的な表面受容体セットにより特徴付けられる特異的分化段階に“凍結”される。しかしながらこのブロックは反転不可というわけではない。我々はここにチオレドキシン系統に属す酵素および標的構造に結合するモノクローナル抗体を含む同じ活性部位Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含有するチオレドキシンのアナローブを単独または補助因子と共に、それ以上分裂しない最終分化細胞（終局細胞（ｅｎｄ　ｃｅｌｌ））の誘導に用いる方法を提供する。

前記酵素および補助因子が記載される。臨床治療の手法はＢ細胞リン８球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）に対して例示されるが、それらは増殖能の傷害および形質細胞様（ｐｌａｓｍａｃｙ−ｔｏｉｄ）形態の発現（表面マーカー、細胞質免疫グロブリンおよび小胞体により判定）に現れる（成熟度のより高い段階への）さらなる分化に誘導された。

休止Ｂ細胞に対して、最終形質細胞熟成を可能にするためには、抗原−免疫グロブリン（Ｉｇ）相互作用により誘出される初期活性化信号に一連の精細に連間した（ｆｉｎｅｌｙ　ｔｕｎｅｄ）受容体−リガント信号および他の免疫能細胞との細胞−細胞相互作用が続かなければならない（１）。ヒトＢ細胞において増殖および分化コントロール信号の伝達に関与する受容体に対するいくつかのリガンドが規定され、遺伝子はクローン化されている。これらにはインターロイキン１（ＩＬ−１）〜インターロイキン６（ＩＬ−６）、低分子量Ｂ細胞増殖因子（ＬＭＷ−ＢＣＧＦ）、５ＣＤ２３、リンホトキシン（ＬＴ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）が包含される（１．２）。

分化療法の概念の把握には正常細胞の発達の仕方を理解することが重要である。

骨髄においては、様々な機能的に専門化した細胞タイプが多能性幹細胞の分化（コミットメント）の結果として発達する。この分化は様々な細胞系統（Ｂ細胞系統、Ｔ細胞系統、ミニロイド系統）の前駆体を生じる。引き続いてのかかる単一分化性細胞から終局細胞への表現型変化は熟成（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）または最終分化（ｔｅｒ菖１ｎａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）と呼ばれる。

休止段階からのヒトＢ細胞の活性化（これは更なる分化および熟成および最終段階につながる）は少なくとも二段階を通して進行する。

１）活性化段階。ここでは細胞は活性化因子にさらされる。Ｂ細胞系列に対してはこれらは次のとおりである：抗原；抗免疫グロブリン（抗−イディオタイプ）：インターロイキン１．２および３およびそれらの下位成分（ｓｕｂ−ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）、インターロイキン４　（ＩＬ−４）、およびＩＬ−４受容体に対する抗体：　Ｃ３ｄ−受容体（ＣＤ１１ｃ）に作用する試薬例えば重合補体３ｄまたはＣ３ｄ受容体に対する抗体（抗−ｇｌ）　１４０）　；抗−ｇｐ３５（ＣＤ２０）。フォルボール（Ｐｈｏｒｂｏｌ）エステル例えばＴＰＡまたはＰＭ＾は、強力な反応能誘導剤としてイン・ビトロで実験的に用いられているがこれらは有毒であるかまたは臨床用途とは両立しないためモデルとして役立ち得るにすぎない。フォルボールエステルはプロティンキナーゼＣ（ＰＫＣ）に作用しそしてそれらの機能上生物学的活性剤に類似している。その他の重要な反応能誘導剤は次のとおりである：固相プロティンーＡ；不活化黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　Ａｕｒｅｕｓ）ＣｏｗａｎＩ（ＳＡＣ）　、アメリカヤマゴボウマイトジェン（Ｐｆｌｌ）　、非形質転換性または不活化エプスタイン− バーウィルス（ＥＢＶ）（非形質転換株Ｐ３ＢＲ１またはＵＶ−不活化ウィルスから得られる）リポポリサッカライド（ＬＰＳ）。

２）進行段階。活性化段階は様々な進行信号に対する受容体を誘導する。例えば：　ＩＬ−２；　Ｂ細胞増殖因子■またはＴＲＦ　（今はＩＬ５と呼ばれる）：低分子量ＢＣＧＦ（１２ＫＢＣＧＦ）　；　Ｎａｓ＋ａ１ｗａ誘導６０Ｋ　ＢＣＧＦ　；　ＣＤ２３　（Ｉｇｌｌ＋、ＩｇＤ十細胞のＢ細胞面で発現されたｐ４５タンパク質）に対する抗体、ＣＤ４０　（主としてＢ細胞および膀胱癌細胞上に存在するほか頚癌または肺癌細胞上にも存在するｐ５０抗原に対するＦｃＥ受容体２　（ＦｃＥＲ２）抗体、さらにはＩＬ−６（以前Ｂ細胞分化因子（ＢＣＤＦ）と呼ばれた）。以下のリストは本明細書および請求の範囲に用いられる略語の簡単な説明でありＣＤＦ：Ｂ細胞分化因子ＢＣＧＦ：Ｂ細胞増殖因子Ｂ−ＣＬＬ：Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病ＢＳＦ：　Ｂ細胞刺激因子Ｃ３ｄ　：　補体因子Ｃ３の下位成分ＣＤ２３：Ｂリンパ球系統の細胞上で発現されるｐ４５タンノ々り質ＣＤ４０：Ｂ細胞および膀胱癌細胞上で発現されるｐ５０タンパク質ＥＢＶ　：　エプスタイン−バーウィルスｇｐ１４０　：　Ｃ３ｄ−受容体機能を有する１４０に分子量の糖タンパク質ＩｇＤ　二　免疫グロブリンクラスＤＩｇｌｉ　：　免疫グロブリンクラスＭＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ− ４、ＩＬ−５：インターロイキン１．２．３．４．５ＬＰＳ　：　リポポリサッカライドＭｏ１ｔ４　：　Ｔリンパ腫由来細胞系統ｐ４５：　４５に分子量膜タンパク質ＰＩ＾：　４−フォルボール１２−ミリステート１３−アセテートＰＷＩＩ　：　アメリカヤマゴボウマイトジェンＳＡＣ：　黄色ブドウ球菌Ｃｏｗａｎ　Ｉ固相プロティンＡ：マトリックス（例えば５ｅｐｈａｒｏｓｅ）に結合したプロティンＡＴＰＡ　：　腫瘍促進剤ＴＲＦ：　Ｔ細胞置換因子Ｔ−Ｔハイブリドーマ：二つの異なるＴ細胞間の体細胞ハイブリッドＴＮＦ　：　腫瘍壊死因子ＭＰ６／Ｔｒｘ　：　ＩＦ６　Ｔ−Ｔハイブリドーマセルラインにより産生されるチオレドキシン系統の酵素本発明の詳細な説明ヒトＣＤ４”Ｔ細胞ハイブリドーマ（ＩＦ５）により分泌される１２　ｋＤａ　Ｂ細胞刺激因子（ＢＳＦ）はすでに正常および悪性ヒトＢリンパ球の増殖を助長することが示されている。

我々は今般このリンホカインを精製し、それをヒトチオレドキシン系統の一員であると同定しそして１ｌＰ６／Ｔｒｘと名付けた。チオレドキシンは、（ｙｓ− Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを介してチオール−ジスルフィド相互交換反応およびネットのタンパク質ジスルフィド還元を触媒する十分に確認されている酵素である。我々は生物学的活性をモニターするための標的細胞として正常末梢血または扁桃Ｂリンパ球を用いた。しかしながら、Ｂタイプの慢性リンパ球性白血病（Ｂ− ＣＬＬ）由来のＢ細胞、Ｂリンパ芽球様セルライン、モノクローナルＢ細胞は特に優れた標的細胞であった。何故なら、それらは最適以下の細胞培養条件下にテストした場合に、イン・ビトロでのサイトカイン誘導増殖および分化に１ＩＰ６／Ｔｒｘを要求したからであった。

予め活性化された細胞は、１ｌＰ６／Ｔｒｘを添加した場合にのみ組換えまたは天然りガント：インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４　（ＩＬ −４）、低分子量ＢＣＧＦ（ＬＭＷ−ＢＣＧＦ）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ− α）、または抗−ＣＤ４０に応答して増殖した。チオレドキシンに対する抗体はこの効果をブロックした。これらの結果から細胞外チオレドキシンは受容体−リガント相互作用およびその後の正常Ｂ細胞活性化およびＢ−ＣＬＬ白血病誘発における信号変換に関係する調節事象に重要な役割を担っていることがわかる。

本発明は、下記の補助因子およびチオレドキシンに対して敏感な哺乳動物および人間におけるかかる悪性形質転換細胞を治療するための新しい方法に関する。この方法は治療的に十分な量のチオレドキシンを投与することを特徴としている。

必要に応じて、前記酵素は、悪性形質転換細胞を該酵素に対して敏感となるよう誘導できる補助因子による予備治療期間の後に投与される。かかる補助因子の例は下記第１表に示される。酵素チオレドキシンの投与は補助因子と同時に行いうるものと予測される。

本明細書および請求の範囲に用いられる“チオレドキシン”という用語は、チオレドキシン酵素系統および活性部位Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むチオレドキシンのアナローブ、特に）ｌＰ６セルライン由来チオレドキシンを含むものと理解される。

より詳細には、本発明による新しい治療方法は、幹細胞障害、造血系悪性腫瘍、例えば白血病、Ｂ細胞白血病およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病、および補助因子受容体を発現しそしてチオレドキシンに応答するその他の腫瘍に適用することができる。例えばＣＤ４０抗原を発現する膀胱癌は記載の方法により治療し得る。チオレドキシンおよび第１表に列挙した補助因子はそれ自体知られた物質である。しかしながらそれらはあらゆる場合について治療上の有用性を有するものと知られているわけではない。

適切な補助因子の選択は、本発明の臨界的パラメーターではない。熟練作業者が、第１表に列挙された特定の補助因子がチオレドキシンと相乗的に作用するかどうかを確定できるようにする実験方法を利用することができる。しかしながら、ＩＬ−２を補助因子として用いるのが好ましい。さらにＩＬ−４およびＴＮＦ− αも好ましい補助因子として挙げることができる。

本発明はもう一つの側面において、動物および人間における悪性形質転換細胞の治療に用いるための、特にチオレドキシンに敏感なかかる悪性形質転換細胞に用いるためのチオレドキシンに関する。さらにこの側面におい発達させるように悪性形質転換細胞を誘導できる前述の如き補助因子による予備治療期間の後にチオレドキシンを投与する。本発明のもう一つの側面は、悪性腫瘍治療薬の調製へのチオレドキシンの使用に関する。かかる医薬は前述の如き補助因子より成っていてもよい。チオレドキシンおよび第１表に例示された補助因子は当該技術において知られているが、チオレドキシンを含む、あるいはチオレドキシンと第１表による補助因子との組合せにより成る薬学的調製物は新規であり、またそれ自体本発明のもう一つの側面を表す。

ＩＬ−２による治療に鋭敏な悪性腫瘍例えば悪性黒色腫は、適切には補助因子との組合せによるチオレドキシン治療に適した標的になると予測される。

さらに細胞性免疫（Ｔ細胞およびＮＫ細胞）は所望により前述の如き補助因子との組合せによるチオレドキシン治療により強化され得ると予測される。

臨床プラクチスにおいて、チオレドキシン、補助因子またはそれらの組合せは、癌治療薬の既知の投与方法と同様の方法で投与される。したがって投与は、注入または筋肉内沈着（ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ）によって行うのが好ましい。

チオレドキシンおよび／または補助因子の投与量は広い範囲にわたって変化し、また疾病の軽重および患者の年令および状態など様々な状況に依存することになろう。

用量間隔の一例としては、天然のチオレドキシン血清または血漿レベルの約２〜約ｌＯＯ倍にあたる血清または血漿レベルのチオレドキシンを与える用量を挙げることができる。

以下の第１表は使用可能な補助因子を例示するリストである。Ｅの表示は、その補助因子が主として実験的なものであり、診断目的に用い得ることを示している。Ｃという表示はその補助因子が臨床に用いられることを示Ｅ　フォルボールエステル例えばＴＰＡＥ　抗原Ｃ抗−免疫グロブリン（抗−イディオタイプ）Ｃインターロイキン１およびその下位成分Ｃインターロイキン２およびその下位成分Ｃインターロイキン３およびその下位成分Ｃインターロイキン４（ＢＳＦＩ）Ｃ抗−ＩＬ４−受容体抗体Ｅ　アメリカヤマゴボウマイトジェンＥ　リポポリサッカライドＥ　非形質転換または不活化エプスタイン−バーウィルスＣＣ３ｄ受容体（ＣＤ１１ｃ）反応剤Ｃ′および抗受容体（ｇｐ１４０）抗体Ｃ抗−ｇｐ３５（ＣＤ２０）Ｅ　ＳＡＣ，不活化黄色ブドウ球菌Ｃｏｗａｎ　ＩＥ　固相プロティンＡＣインターフェロン（α、βおよびγ）Ｃビタミン（特にビタミンＡ、Ｄ）および生物学的活性誘導体ＣロイコトリエンＢ４ＣＴＮＦ−α 本発明に用いる酵素チオレドキシンはヒト起源であるのが好ましい。それはＣｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ活性部位を介してチオール−ジスルフィド相互交換反応およびネットのタンパク質ジスルフィド還元を触媒する酵素である。ヒトチオレドキシンはヒトリンパ球起源であるのが好ましいがその他の起源を用いることもできる。しかしながら、哺乳動物を含む動物のチオレドキシン、例えば大腸菌から得られる原核生物チオレドキシンおよび遺伝子工学による発現ベクターにより生産されるチオレドキシンを用いることも本発明の範囲に包含される。チオール−オキシドレダクターゼとしても知られるチオレドキシンは、レドックス活性ジスルフィドを有する遍在する１２　ｋＤａタンパク質であり（３）、それは通常ＮＡＤＰ■およびフラボプロティンチオレドキシンレダクターゼにより還元される。

還元型チオレドキシンは、ＤＮＡ合成のためのデオキシリボヌクレオチドを作る重要酵素であるリボヌクレオチドレダクターゼに対する水素供与体である。さらにチオレドキシンは、制御事象に関与しく３）、例えば植物細胞の葉緑体における光合成酵素の光依存性活性化（４）およびステロイド結合状態へのグルココルチコイド受容体の活性化（５）に関与する。チオレドキシンはジチオトレイトール（ＤＴＴ）よりも約１０３倍速い速度でタンパク質ジスルフィドを還元するチオールレドックスコントロールによって酵素活性を調節する（３）。哺乳動物チオレドキシンは単離されそして特徴付けられている（３．６）。その分布については免疫組織化学的方法により研究され、そしてチオレドキシンはタンパク質分泌に関連しまた一部膜関連であることが示された（６）。最近、ヒトチオレドキシン遺伝子がＷｏｌｌｉａｎらによってクローン化された（７）。その遺伝子は活性化リンパ球では発現したが休止リンパ球では発現しなかった。もともと、チオレドキシンは、エプスタイン−バーウィルス含有Ｂセルラインに由来するＩＬ −１様因子であると報告された（７）。Ｔａｇａｙａおよび共同研究者（８）は、成人Ｔ細胞白血病（ＩＩＴＬＶ−１）由来因子（＾ＤＦ）とも呼ばれるＩＬ− ２−受容体／Ｔａｃ−誘導因子はｃ−ＤＮＡクローンの分析からチオレドキシンに類似しているかそれと同じものであることを示した。

本発明は、チオレドキシン系統の酵素に新しい生物学的機能を与え、そしてそのリンパ球活性化における役割を拡大するものである。

臨床状態の標的細胞臨床状態の標的細胞は、チオレドキシンに対する結合部位を発現しそしてこれに応答するように誘導され得るすべての悪性細胞を含む、分化によりチオレドキシン特に１ｉＰ６／Ｔｒｘに応答するすべての悪性形質転換細胞である。

かかる誘導は第１表に記載の補助因子または他の手段により行うことができる。

実験的証明１１Ｐ６は我々（６）によってすでに単離されそしてクローン化されたＣＤ４” Ｔヘルパー細胞ハイブリドーマである。

１ａＰ６クローンは、Ｂ−タイプ慢性リンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）の正常な（９，１０）および悪性の（１１）予め活性化されたＢ細胞において増殖およびＩｇｌｉ／ＩｇＧ分泌を誘導するＢ細胞刺激因子（ＢＳＦ−ＩＰ６）を１２〜１４　ｋＤａとして本質的に分泌する。ＩＬ−２受容体発現もＢＳＦ−ＭＰ６により高められた（１２）。

Ｋ１５ｈｉＩＩｏｔｏおよびＢａｎｊｏらは、ＭＰ６細胞からのｍＲＮＡはＩＬ −１α、ＩＬ−１β、ＬＬ−４、ＩＬ−５またはＩＬ−６に対するｃＤＮ＾ＤＮＡクローンれともハイブリダイズしないことを実証した（１２）。様々な細胞アッセイを用いて、ＭＰ６上清はＬＩｉＷ−ＢＣＧＦ、　ＴＮＦ−α、および−β 、ＩＦＮ−α、−β、−丁、顆粒状−単球コロニー刺激因子（ＧトＣ５Ｆ）　、ＩＬ−１，ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−６の活性を欠いていることが示された（９）。

図ＩＡおよびＩＢに示される実験において我々はＢ−ＣＬＬ患者に由来するモノクローナル細胞を用いた。このクローン（Ｋ８３）は、１２−０−テトラデカノイル−フォルボール１３−アセテート（ＴＰＡ）または黄色ブドウ球菌ＣｏｖａｎＩ　（ＳＡＣ）により活性化された際に、補助刺激信号に依存して分化または分化とそれに続く増殖が行われるよう誘導可能なＧ０停止（ａｒｒｅｓｔｅｄ）　Ｂ細胞である。Ｉ８３細胞は抗原によりトリガーされる信号を模するためＳＡＣにより２日間、あるいは最適下用量のＴＰＡ　（１，６Ｘ　１０−７Ｍ）により１時間、予め活性化した。それらの細胞は組換えまたは天然、Ｂ−リンホトロピック（Ｂ−１ｙ＋５ｐｈｏｔｒｏｐｉｃ）リンホカインｒＩＬ−１β、ｒＩＬ −２、ｒＩＬ−４、ｒＩＬ−６、ｒＴＮＦ　ａ、ＬＭＷ−ＢＣＧＦ。

ｒＩＦＮ−γ、抗−ＣＤ４０、またはそれらの組合せに対して応答しなかった。

しかしながら、５ＡＣ−活性化細胞はＢＳＦ−ＭＰ６を添加するとリンホカインｒＩＬ−２、ｒ−ＴＮＦａ、Ｌｌｉｆ−ＢＣＧＦに対し応答した（図ＩＡ）。ＴＰＡは細胞を細胞周期に移すプロティンキナーゼＣを直接活性化する非生理学的信号を与える点でＳＡＣおよびＴＰＡの信号経路は異なっている。図ＩＢは、ＴＰＡ活性化細胞がＢＳＦ−１１Ｐ６単独に応答したこと、またＢＳＦ−１１Ｐ６といくつかの異なるＢリンホカインとの組合せはそれ以上ＤＮＡ合成を増加させなかったことを示している。例外は有意な増加を示したＩＬ−４およびＴＮＦ− αである。このことは、ＴＮＦ−αが、ヒトＢ細胞のオートクライン（ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）増殖因子であるという最近の知見（１４）に符号し、また我々は一連の実験で、ＴＰＡ活性化細胞におけるＤＮＡ合成の誘導およびＩｇＭ分泌に対してＩＬ−４がＢＳＦ−１１Ｐ６との強い相乗作用を示すことを既に示しである（１１）。

ヒトチオレドキシンに対する極めて特異的なラジオイムノアッセイ（１３０図２）は、ＢＳＦ−１１Ｐ６因子がチオレドキシンと同類（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）であり、あるいは前述の如きチオレドキシンのアナローブであることを明らかにしている。

２４時間調整培地１１Ｐ６の無血清培地は３４ｎｙ／ｍｌのチオレドキシンを含有した。生物学的活性はＩ３３　Ｂ−ＣＬＬクローンまたは正常扁桃Ｂ細胞を用いてモニターされ、またゲル濾過実験において１２　ｋＤａ領域に限定された。

哺乳動物チオレドキシンは、空気酸化の後、不活化および凝集を招く構造外の（ｅｘｔｒａ　５ｔｒｕｃｔｕｒａｌ）分子内ジスルフィド結合を形成する（６）。精製操作および貯蔵中に、ＢＳＦ−ＭＰ６の調製物も大気中の０２によって容易に酸化されその結果活性が失われてしまった。この事実を認識したときから、我々は培養期間中最適下用量の０．１μ蓋β−メルカプトエタノールを用いてＢ −ＣＬＬ活性化実験を行い始めた。しかしながらより高濃度のβ−メルカプトエタノール（５０〜２０ｈＭ）はそれ自体でＤＮＡ合成増加を促進した。イン・ビトロでのチオールおよびジスルフィドによる白血病細胞の増殖刺激はよ（知られた現象である（２２）。図３は、ＤＴＴと共にインキュベートされた後、８ケ月経過した不活性ＢＳＦ−ＭＰ６調製物の生物学的活性が全面的に再構成されることを実証している。ＢＳＦ−１１Ｐ６が還元により復活され得るという所見はチオレドキシンの典型的な特徴の一つである（６）。サンプル（＋４℃で保存された無血清、滅菌状態の２４時間調整培地）を３７℃で３０分間２園１１ＤＴＴで還元してから■ＰＬｃゲル濾過にかけた。１２　ｋＤ’ａ領域においてほぼすべての生物学的活性が回収された。

ラジオイムノアッセイおよび再構成実験から、チオレドキシンと同類であるかまたは前述の如きチオレドキシンのアナローブであるとの証明が得られたので我々はただちに別の給源に由来するチオレドキシンが生物学的アッセイにおいてＢＳＦ−ＭＰ６と置換し得るかどうかについての実証を行った。胎盤に由来する均一（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ）なヒトチオレドキシン（１３）を０．５ｘｌＯ−’ Ｍ〜０．５ＸＩ−０−”Ｍの濃度でテストしたところ、下は０．５Ｘ１０−’Ｍまで生物学的活性を示した。

テスト結果を下記第２表に示す。

Ｂ−ＣＬＬ細胞は５ＡＣＩ　：　１０００００およびＩＬ−２１０Ｕ／露ｌで前処理された。７２時間のインキュベーション期間のうち最後の１８時間にわたり３Ｈ−Ｔｈｙが添加された。第２表にみるとおり、チオレドキシンは高活性であった。

第　２　表ヒト胎盤チオレドキシンによるＢ−ＣＬＬ細胞の刺激チオレドキシン　ＤＮＡ−合成（Ｍ　）　３Ｈ−チミジン取込み０、５　Ｘ　１０−”　６３２７対照培地　１２４０このＴ−ヘルパー細胞由来チオレドキシンの生化学的特徴付けは、５ｅｐｈａｒｏｓｅ結合ヒツジ抗−チオレドキシン抗体を用いた免疫収着（イムノソーベント）アフィニティクロマトグラフィーをｔｌＰＬｃ−ゲル濾過と組み合わせて行った。この方法により図４にみるとおり高度精製チオレドキシンが得られた。出発材料は２４時間無血清培地とした。５ＤＳ−ＰＡＧＥゲル挿入図は、このアフィニティー精製物質の純度および分子量を確認するものである。

Ｂ細胞分化の理解にはＢ−ＣＬＬのクローナル悪性腫瘍が極めて有用なモデルであることが分かっている（１１）。イン・ビボでのＢ−ＣＬＬの低増殖能は、一部、オートロガス非Ｂ細胞により生産される増殖因子の欠乏の結果であるかもしれない。ＢＳＦ−１１Ｐ６／チオレドキシンはここに提示された証拠によれば欠如しているリンクの一つである。

チオレドキシン活性を有するＢＳＦ−ＭＰ６がＴ細胞由来ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＬＭＷ−ＢＣＧＦおよびＴＮＦ−αに対する適性な応答を容易にするとの証拠はＢ−ＣＬＬ細胞の増殖停止についての可能な説明をはじめて提供する。我々の結果の示すように、Ｂ−ＣＬＬ患者におけるＴヘルパーリンパ球のよく知られた調整障害（１５）のためにＢ−ＣＬＬ細胞の活性化に必要なチオレドキシン生産のロスを来しているのかもしれない。あるいはまた、Ｂ−ＣＬＬ細胞自体がオートクラインチオレドキシンについて欠陥があるか、あるいはそのオートクライン生産の起始に、外部から補給されるチオレドキシンの初期用量を必要とするのかもしれない。

チオレドキシンとＢ細胞刺激因子が同一であるという我々によるこの知見は、この酵素についての枢軸的な免疫学的役割を強く示唆している。それは適正な信号変換を容易にし、またこの酵素のよく知られたチオール−ジスルフィド相互交換反応を触媒する機能（３）が動的な三次元の正しい受容体ドツキング事象の生起をおそらく可能にしているのであろうが、正確なメカニズムについての知識を得るには更なる研究が必要である。

Ｂ細胞増殖・分化コントロール信号の研究のための有用なイン・ビトロモデル系はヒトＢ−リンホトロピックヘルペスウイルスエブスタインーバーウイルス（ＥＢＶ）である。何故ならば、それはＢ細胞増殖を担う遺伝子をターン・オンすることにより（１７）増殖および分化を誘導するからである（１６）。しかしながら、Ｂ−ＣＬＬ細胞は、ＥＢＶ　−形質転換の試みに反応しなかったが、この抵抗性についての一つの可能な説明は、Ｂ−ＣＬＬ細胞はＥＢＶ−受容体（ＣＤ２１）の発現が低い上に、このレポートに、そして我々の予備的な免疫蛍光分析により示されるように、チオレドキシン遺伝子発現上も欠陥があるかもしれないという事実にめ得る。細胞性チオレドキシンは最近ヘルペスウィルスシンプレックス−タイプ１にコードされたりボヌクレオチドレダクターゼに対する主な水素供与体であることが示唆されている（１８）。したがってＢ−ＣＬＬ細胞中にチオレドキシンが欠けていればそのような細胞中でのヘルペスウィルスの増殖をすべて有効にブロックし得る。

治療の手法ｌ）悪性細胞がすでにいずれかの千オレ下キシン結合部位を発現している場合にはチオレドキシンだけ、特にＭＰ６／Ｔｒｘを投与すべきである。

２）悪性細胞がいずれかのチオレドキシン結合部位を発現していない場合には、チオレドキシンと第１表の化合物を投与すべきである。これには列記された特定の化合物のいずれもが包含される。

図の説明図ＩＡおよびｌＢ１１Ｐ６はＤＮＡ合成のための信号を誘導する。液体窒素中に凍結保存されたＢ −ＣＬＬクローンＩ８３に由来する細胞を再生させそしてＳＡＣ（図ＩＡ）またはＴＰＡ　（図ＩＢ）を活性化信号として用いてＤＮＡ合成（図ＩＡおよびＩＢ）および免疫グロブリン分泌（データは示さず）へと誘導した。ＳＡＣで増殖および分化を誘導するために、細胞を２日間固定細菌と共にインキュベートし、次いで２５％ＢＳＦ−１１Ｐ６（ｖ／ｖ）と共にまたはそれを用いずに１００　Ｕ　／　冨１の組換えインターロイキンまたは天然Ｂ細胞サイトカインにさらした。

平底９６穴プレートで、１０％新生仔牛血清（Ｇｉｂｃｏ、グラスゴー、英国）、２ｍＭＬ−グルタミン、５０μｇ／鳳ｌゲンタマイシン、１００ＩＵ／菖Ａ’ ペニシリンおよびｌｏｈｇ／曹ｌストレプトマイシンを補給したＲＰＩｉＩ　１６４０培地（ＦＩＯＷ　Ｌａｂｏｒａｔｉｏ−ｒｉｅｓ、エアーシア（＾ｙｓｈｉｒｅ）、英国）中の０．２ｍｌ培養液（４Ｘ　１０Ｓ細胞個／穴）または２＠ｌ培養液（４Ｘ　１０’個／穴）（Ｃｏｓｔａｒ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）として細胞培養を行った。それら細胞は５％ＣＯ７含有空気の雰囲気中、３７℃で６日間培養した。培養期間の最後の２０〜２４時間の間に、１μＣ１（＝　３７ｋＢｑ）　／穴のトリチウム化チミジン（［３Ｈ］ｄＴｈｄ　；比活性６．７Ｃｉ／　ａ＋ｍｏｌ　；　Ｄｕｐｏｎｔ　５ｃａｎｄｉｎａ−ｖｉａ、ストックホルム、スエーデン）の取込みをアッセイしてＤＮＡ合成を測定した。

熱−不活化、ホルマリン固定５ＡＣ−粒子を０．１％の最終濃度で用いた。ＴＰＡ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、セントルイス、ミズーリ州）は１．６Ｘ　１０−’Ｍ濃度で用いた。ＢＳＦ−ＭＰ６は、４００Ｕｇ／ｍｌのＢＳＡ（Ｂｏｅｒｈｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ、マンハイム、西ドイツ）、１２．５μｇ／ｍｌのヒトトランスフェリン（Ｊａｂｉ、ストックホルム、スエーデン）、５０μ麗　β−メルカプトエタノール、２ＩＩＭ　Ｌ−グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシンを補給したｌ５ｃｏｖｅｓ培地中で増殖させたＭＰ６Ｔ細胞ハイブリドーマの無血清２４時間培養液をＹＭ２フィルターを用いたＡｍ１ｃｏｎ装置で濃縮して得た。ｒｌＬ−２は＾ｍｇｅｎ（＾ｍｅｒｓｈａｍ、アマ−ジャム（＾ｍｅｒｓｈａｍ、英国））から購入した。ｒＩＬ−１β（Ｇｅｎｚｙｍｅ、ボストン、マサチューセッツ州）は１０’Ｕ／＊ｇの比活性を有しそして１０Ｕ／■ｌで用いた。ｒＩＬ−４をＧｅｎｚｙｍｅ（ボストン、マサチューセッツ州）から購入しそして１００　Ｕ　／　ｍ　ｌの最終濃度で用いた。

ｒＩＬ６はＤｒ、　Ｋｉｓｈｔｍｏｔｏ　（大阪、日本）から贈与されたもので、１００Ｕ　／　ｍｌで用いた。６　Ｘ　１０’　Ｕ　／　ｍｇの比活性を有する組換えＴＮＦ　ａは１００ｎ（ｙ／ｇ／で用いられ、またＤｒ、Ｇ、Ｒ，Ａｄｏｌｆ（Ｅｈｒｎｓｔ　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ、ウィーン、オーストリア）から贈与されたものであった。ＬＭｆ−ＢＣＧＦはＣｅ１ｌｕｌａｒＰｒｏｄｕｃｔｓ（バ・・Ｉファロー、ニューヨーク州）から購入し、そして１０％Ｖ／Ｖの濃度で用いた。１μｇ　／　諺ＩＩの濃度で用いたモノクローナル抗−ＣＤ４０　（Ｇ２８−５　Ｍａｂ）はＤｒ、　Ｅ　Ｃ１ａｒｋ（シアトル、ワシントン州）から贈与されたものであった。ｒＩＦＮ−７は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ　（サンフランシスコ、カリホルニア州）から得た。それは３　Ｘ　１０’　Ｕ　／　ｍｇの比活性を有し、そして５００Ｕ／冨ｌで用いた。

図２チオレドキシンのラジオイムノアッセイはＢＳＦ−ＭＰ６とチオレドキシンの同一性を示す。

実線は純粋なヒト胎盤チオレドキシンを示す。鎖線はＢＳＦ−１１Ｐ６を示す。

ラジオイムノアッセイは既報（１３）の如く行われた。簡単に説明すれば次のとおりである：　０．　ｂ＋１　（０，２μｍｏｌ）の１２５（−標識ヒト胎盤チオレドキシンを連続希釈された０、１謹ｌの標準ヒトチオレドキシンまたは未知検体（硫酸アンモニウム沈殿により５０倍濃縮されたＭＰ６Ｐ２Ｏ５およびヒトチオレドキシンに対するウサギ抗血清のＩｇＧ画分０．１ｍｌ　（５ｐｇ）と共に３７℃で振盪しながら４時間インキュベートシた。インキュベーション時間の終了時にＱ、　１ｍＡ’の１：５希釈ヒツジ抗−ウサギＩｇＧ抗血清を添加し、そしてインキュベーションを４℃で１６時間続けた。結合放射能（Ｂ）を１００ＯＯＸ　９で３０分間遠心分離し、次いで上清を注意深く除くことにより遊離分（Ｆ）から分離した。放射能はＬＫＢガンマ計数器（Ｂｒｏｍｍａ、スエーデン）を用いてベレットおよび上清画分の両方について測定した。Ｂ／Ｆ比を計算しそして様々な標準チオレドキシン濃度に対してプロットした。競合するヒトチオレドキシンとウサギ抗−ヒトチオレドキシン抗体が共存しない反応を陰性対照として用いた。チオレドキシンの放射性沃素化はクロラミン−Ｔ法により行った（１３）。すべての希釈およびインキュベーションは１璽ｑ／＠ｇのＢＳＡを含有するリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で行った。

図３ＤＴＴを用いた還元によるＢＳＦ−１１Ｐ６の再構成。ＢＳＦ−１１Ｐ６の生物学的活性は前示の如き還元により回収し得た。チオレドキシン発現性Ｔ−ハイブリドーマクローンＭＰ６を、４００ｎｇ　／　ｍ　ｌのＢ５Ａ１１２．５ｇｇ／麿ｌのヒトトランスフェリン、５０μ麗β−メルカプトエタノール、１００μｇ／ｍｌのストレプトアビジンおよび１００　Ｕ　／　ｍ　ｔのペニシリンおよび２ｎ）ＩのＬ−グルタミンを含むｌ５ｃｏｖｅｓ培地で２４時間培養したが、＋４℃で２週間保存後上清の生物学的活性は失われた。

クロマトグラムは２ｄＤＴＴで前処理され、次いで滅菌リン酸緩衝食塩水（ｐｆｌ　７．２）で平衡させた５ｕｐｅｒｏｓｅ−１２ＦＰＬＣゲル濾過カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、ウプサラ、スエーデン）で分離された２００μｌのＭＰ６Ｐ２Ｏ５ＯＤ＊ｅｉ−（フルスケール：Ａ　＝　０．５）で測定されたタンパク質プロフィールを示す。

流速は０．４ｇ！’／分とした。２ｄずつフラクシヨンを集め、そして、クロマトグラムの垂直棒によって示されているように、Ｂ−ＣＬＬ細胞または正常扁桃Ｂ細胞に対する生物学的活性をモニターした。示されている分子量マーカーは牛血清アルブミン（６８Ｋ）およびリボヌクレアーゼＡ（１３，７Ｋ　）であった。

図４抗−チオレドキシンアフィニティーカラムとＨＰＬＣ−ゲル濾過で精製されたＢＳＦ−ＭＰ６に対するクロマトグラム既報（２１）の如くカップリングを行ったヒツジ抗−チオレドキシン５ｅｐｈａｒｏｓｅ−プロティンＡカラム（１，５Ｘ６ｃｍ）よりｐＨ３，０で結合・溶出された物質に対してＩＩＰＬｃ−クロマトグラフィーを行った。ＩＫｌずつフラクションを集めた。平衡緩衝液はＥｌｅ、中で脱気したＰＢＳとした。１２　ｋＤａにおける第一ピークは生物学的活性を含んでいる。第二ビークは塩である。

ＳＯ３−ポリアクリルアミドゲルの挿入図：８〜２５％勾配５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲルゲル（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｐｈａｓｔゲル系）を純度分析に用いた。検体は左から右に向かって次のとおりである：アフィニティーカラム前のＭＰ６無血清上清；アフィニティー精製ＢＳＦ−１１Ｐ６／チオレドキシン：ヒト胎盤チオレドキシン：分子量マーカー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、上から下に向かって＋　９２．５　ｋＤａ。

６７　ｋＤａ、　４５　ｋＤａ、　３０．１　ｋＤａ１２０．１　ｋＤａ、　１４．７　ｋＤａ０文献および注釈１、Ｅ、＾、　Ｃ１ａｒｋ　ａｎｄ　Ｊ、＾、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ、＾ｄｖ、　ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、５２．　１９８９；Ｍ、Ｆ、Ｇｒｅａｖｅｓ、１ｂｉｄ、２３４．　６９７（１９８６）。

２、　＾、Ｏ’Ｇａｒｒａ、Ｓ、　Ｕｍｌａｎｄ、　Ｔ、　ＤｅＦｒａｎｃｅ、　ａｎｄ　Ｊ。

Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｔｏｄａｙ　９．４５　（１９８８）　；　Ｊ、Ｇ。

Ｇｏｒｄｏｎ　ａｎｄ　Ｇ、Ｒ，Ｇｕｙ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｔｏｄａｙ　８．３３９（１９８７）ｆｏｒ　ｒｅｖｉｅｗ　；　ｒＬ−１：　Ｃ，Ｊ、　１ｌａｒｃｈ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ　３１５゜６４１（１９８５）　；　ＩＬ−２：　Ｔ、　Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ　ｅｔ　ａｔ、、　Ｎａｔｕｒｅ　３０２゜３０５（１９８３）　；ＩＬ−４：Ｔ、Ｙａｋｏｔａ　ｅｔ　ａｔ、、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ＾ｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８３．５８９４．　（１９８６）　；ＩＬ−５：　Ｃ，＾ｚｕｎ＋ａ　ｅｔ　ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅｓ、１４゜９１４９（１９８６）　；ＩＬ−６：Ｔ、　Ｈｉｒａｎｏ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ　２３４．７３（１９８６）　；ＬＩＩＷ−ＢＣＧＦ：　Ｓ、　５ｈａｒｔａａ、　Ｓ、　Ｍｅｈｔａ、　Ｊ、　Ｍｏｒｇａｎ、　ａｎｄ　Ａ。

Ｍａｉｚｅｌ、　１ｂｉｄ、　２３５．１４８９（１９８７）　；ＩＦＮ−７：　Ｄ、Ｖ、　Ｇｏｅｄｄｅｌ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ　２ｇ７．４１１゜（１９８０）　。

Ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ（ＴＮＦ−α）　：　Ｐ、　ｊ　Ｇｒａｙ、　Ｎａｔｕｒｅ　３１２．７１２゜（１９８４）　；ＴＮＦ：　Ｔ、　５ｈｉｒａｉ、　Ｈ，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ、　Ｈ，Ｉｔｏ、　Ｃ，Ｗ、Ｔｏｄｄ。

ａｎｄ　Ｂ、　Ｗａｌｌａｃｅ、　Ｎａｔｕｒｅ　３１３．８０３（１９８５）　；　ＴＧＦ−β：Ｒ１Ｄ、　Ｄｅｒｙｎｃｋ　ｅｔ　ａｌ、、　３１６．７０１．　（１９８５）。

３、Ａ、　Ｈｏｌｍｇｒｅｎ、　Ａｎｎ　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５４．２３７（１９８５）　；Ｆ、に、Ｇｌｅａｓｏｎ　ａｎｄ＾、　Ｈｏｌｍｇｒｅｎ、　ＦＥＩＩＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。

Ｒｅｖ、５４．　２７１（１９８８）　；　Ａ、Ｈｏｌｍｇｒｅｎ、Ｉｎ　：　Ｔｈ１ｏｒｅｄｏｘｉｎａｎ　ｇｌｕｔａｒｅｄｏｘｉｎ　ｓｙｓｔｅｍｓ　：　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ。

Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎ１ｎｔｈ　Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅＮｏｂｅｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　１９８５．　（Ｅｄ、Ａ　Ｈｏｌｍｇｒｅｎ）ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ　ｐ、１．（１９８６）；＾、Ｈａ１ｔａｇｒｅｎ、Ｊ　Ｂｉａｌ、Ｃｈｅｌｌ、２５４゜９１１３（１９７９）；Ａ、Ｈｏｌｍｇｒｅｎ、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｗ、２５４゜９６２７（１９７９）。

４、　Ｂ、Ｂ、Ｂｕｃｈａｎａｎ、Ｒ，＾、Ｗｏｌｏｓｉｕｋ、ａｎｄ　Ｐ、Ｓｃｈｕｒｍａｎｎ。

Ｔｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓｃｉ、４．　９３（１９７９）　；　Ａ、ＩＴｏｌｍｇｒｅｎ、Ｂ。

Ｂ、Ｂｕｃｈａｎａｎ、Ｒ，Ａ、Ｗｏｌｏｓｉｕｋ、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、８２．　３５１゜（１，９７７）。

５、Ｊ、Ｆ、Ｇｒｉｐｐｏ、Ａ、Ｂｏｌ＠ｇｒｅｎ　ａｎｄ　Ｗ、Ｂ、Ｐｒａｔｔ、Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｗ、２６０．９３．　（１９８５）；Ｗ、Ｔｉｅｎｒｕｎｇｒｏｊ　ｅｔａｌ、、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｓ、２６２．６９９２．　（１９８７）。

６、　Ｎ、Ｅ、ＥｎｇｓｔｒＱｍ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｗ、２４９．２０５（１９７４）；　Ａ、■ｏｌａ＋ｇｒｅｎ、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｗ、２５２．　４６００（１９７７）；　Ｂ、Ｒｏｚｅｌｌ　ｅｔ　ａｌ、、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ、３８゜７９、（１９８５）。

？、　Ｅ、Ｅ、Ｗｏｌｌｗａｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｓ、２６３゜１５５０６（１９８８）：Ｈ，ｆａｋａｓｕｇｉ　ｅｔ　ａｌ、、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４．８０４（１９８７）。

８、Ｙ、Ｔａｇａｙａ　ｅｔ　ａｌ、、ＥＩＩＢＯＪ、８．　７５７（１９８９）：Ｙ。

Ｔａｇａｙａ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１４０．　２６１４（１９８９）。

９、　Ａ、Ｒｏｓ６ｎ、Ｃ，［１ｇｇ１ａ、Ｒ，Ｓｚｉｇｅｔｉ、Ｂ、Ｋａｌｌｉｎ、ａｎｄＪ、Ｚｅｕｔｈｅｎ、Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　Ｒｅｓ、５．　１８５（１９８６）：Ａ。

Ｒｏｓｇｎ、Ｔ、ＮｏＬＬｌａ、Ｖ、Ｗｅｎｄｅｌ−Ｈａｎｓｅｎ、Ｊ、Ｚｅｕｔｈｅｎ、Ｃ。

Ｙ、Ｌｉｎ　ａｎｄ　Ｔ、Ｂｏｎｊｏ、Ｉｎ　：　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ（Ｅｄ、Ｃ，＾、Ｋ、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｓｃｉ、Ｐｕｂｌ、ｐ。

３１１（１９８８）。

１０、Ｊ、Ｇｏｒｄｏｎ、Ｐ、Ａｒ１ａｎ、＾、Ｒｏｓ６ｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｉｎｔ、Ｊ。

Ｃａｎｃｅｒ　３５．２５１．　１９８５゜１１、Ｍ、Ｃａｒｌｓｓａｎ、Ｐ、　Ｍａｔｓｓｏｎ、Ａ、　Ｒｏｓｉｎ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｌｅｕｋｅｍｉａ　２．　７３４（１９８８）。Ｍ、Ｃａｒｌｓｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｅｕｒ。

Ｊ、Ｉｉｍｕｎｏｌ、１９，９１３．１９８９゜１２、Ｔ、Ｎｏｍａ、Ｔ、Ｍｉｚｕｔａ、＾、Ｒｏｓｇｎ、Ｔ、Ｈｉｒａｎｏ、Ｔ。

Ｋ１５ｈｉ＋＊ｏｔｏ　ａｎｄ　Ｔ、Ｈｏｎｊｏ、Ｉ＋ｓｍｕｎｏ１．Ｌｅｔｔ、１５，２４９（１９８７）。

１３、Ａ、Ｈｏｌｍｇｒｅｎ　ａｎｄ　１１．　Ｌｕｔｈｍａｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、１７．　４０７１（１９７ｇ）；１４、Ｆ、Ｔ、Ｃｏｒｄｉｎｇｌｅｙ　ｅｔ　ａｌ、、Ｌａｎｃｅｔ　９６９（１９８８）　：　Ｊ。

Ｈ，Ｋｅｈｒｌ、Ａ、Ｍｉｌｌｅｒ　ａｎｄ　＾、Ｓ、Ｆａｕｃｉ、Ｊ、Ｅｘｐ、１ｌｅｄ。

１６６、　７８６（１９８７）　；　Ｄ、Ｆ、Ｊｅｌｉｎｅｋ　ａｎｄ　Ｐ、Ｅ、Ｌｉｐｓｋｙ。

Ｊ、Ｉ＋ｕ＋ｕｎｏ１．　１３９．　２９７０（１９８７）。

１５、Ｎ、Ｃｈｉｏｒａｚｚｉ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２２．　１０８７゜（１９７９）。

１６、Ａ、Ｒｏｓｉｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｎａｔｕｒｅ　２６７．５２（１９７７）；＾。

Ｒｏｓ６ｎ　ａｎｄ　Ｇ、Ｋｌｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ　３０６．　１８９（１９８３）。

１７、Ｊ、　Ｇｏｒｄｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｔｏｄａｙ　１０．　１５３（１９８９）。

１８、Ａ、Ｊ、Ｄａｒｌｉｎｇ、Ｊ、Ｇｅｎ、Ｖｆｒｏｌ、６９．　５１５．　１９８８゜図ＩＡ図ＩＢ［３Ｈ］　チミジン取込ｂ　（ｃｐｍｘｌＯ−’）図３補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成４年３月１１日

Claims

【特許請求の範囲】

１．治療的に有効量のチオレドキシンまたは活性部位Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ− Ｃｙｓを含有するチオレドキシンのアナローダ、特にＭＰ６／Ｔｒｘ、を投与することより成る動物および人間における悪性形質転換細胞の治療方法。
２．チオレドキシンの起源が −動物 −哺乳動物 −人間 −原核生物または −組換え体である請求項１記載の方法。
３．チオレドキシンがヒトリンパ球またはその他のヒト起源のものである請求項１または２記載の方法。
４．悪性形質転換細胞がチオレドキシン結合部位を誘導できる補助因子で予備的に治療されることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
５．補助因子が（ａ）抗−免疫グロブリン（抗−イディオタイプ）（ｂ）インターロイキン１およびその下位成分（ｃ）インターロイキン２およびその下位成分（ｄ）インターロイキン３およびその下位成分（ｅ）インターロイキン４（ＢＳＦ１）（ｆ）抗 −ＩＬ４−受容体抗体（ｇ）Ｃ３ｄ受容体（ＣＤｌｌｃ）反応性Ｃ′剤および抗−受容体（ｇｐ１４０）抗体（ｈ）抗−ｇｐ３５（ＣＤ２０）（ｉ）（α，βおよびγ）インターフェロン（ｊ）ビタミン（ｋ）ロイコトリエンＢ４（ｌ）ＴＮＦ−α より選択される請求項４記載の方法。
６．補助因子がインターロイキン２である請求項５記載の方法。
７．幹細胞障害治療のための請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
８．造血系悪性腫瘍治療のための請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
９．Ｂ細胞白血病治療のための請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
１０．Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病治療のための請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
１１．チオレドキシンまたは請求項１に定義されるようなそのアナローグに対する結合部位／受容体を発現しそしてチオレドキシンまたは請求項１に定義されるようなアナローグに応答する他の腫瘍の治療のための請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
１２．動物および人間の悪性形質転換細胞の治療に用いるためのチオレドキシン。
１３．請求項７、８、９、１０および１１に記載の障害の治療に用いるためのチオレドキシン。
１４．チオレドキシン結合部位を発現するように悪性腫瘍形質転換細胞を誘導できる補助因子と共に請求項１２および１３のいずれかの記載にしたがって用いるためのチオレドキシン。
１５．請求項５の（ａ）〜（１）に列記されたような補助因子と共に請求項１４の記載にしたがって用いるためのチオレドキシン。
１６．所望によりチオレドキシン結合部位を発現するように悪性腫瘍形質転換細胞を誘導できる補助因子と共に治療に用いるためのチオレドキシン。
１７．チオレドキシンまたは活性部位Ｃｙｓ−Ｃｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むチオレドキシンのアナローグを活性成分として含んで成る薬学的組成物。
１８．さらに、チオレドキシンまたは請求項１６に定義されるようなアナローグの結合部位を発現するように悪性形質転換細胞を誘導できる補助因子を含んで成る請求項１７記載の薬学的組成物。
１９．さらに請求項５の（ａ）〜（Ｉ）に列記されたような補助因子を含有する請求項１７記載の薬学的組成物。
２０．補助因子がインターロイキン２である請求項１９記載の薬学的組成物。
２１．動物および人間における悪性形質転換細胞治療薬の調製へのチオレドキシンの使用。
２２．請求項７、８、９、１０および１１に記載の障害の治療薬の調製へのチオレドキシンの使用。
２３．チオレドキシンまたは活性部位Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含有するチオレドキシンのアナローグを所望により請求項５の（ａ）〜（Ｉ）に列記されるような補助因子と共に投与することによる、患者自身の細胞傷害性細胞により認識される表面構造を発現する癌細胞に対し応答性のあるリンパ球の反応性を増強する方法。
２４．請求項１２〜１６のいずれかに記載の如く用いるためのチオレドキシンのＭＰ６／Ｔｒｘ変種。
２５．チオレドキシン成分がＭＰ６／Ｔｒｘである請求項１７〜２０のいずれかに記載の薬学的組成物。
２６．チオレドキシンのＭＰ６／Ｔｒｘ変種の請求項２１または２２記載の使用。