JPH05268993A - 脂質含有藻類の識別方法 - Google Patents
脂質含有藻類の識別方法Info
- Publication number
- JPH05268993A JPH05268993A JP6175691A JP6175691A JPH05268993A JP H05268993 A JPH05268993 A JP H05268993A JP 6175691 A JP6175691 A JP 6175691A JP 6175691 A JP6175691 A JP 6175691A JP H05268993 A JPH05268993 A JP H05268993A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- algae
- lipid
- fluorescence
- alga
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 自然界に存在する藻類より、脂質を含有する
藻類を識別する方法に関する。 【構成】 藻類にナイルレッド、ナイルブルー、５−
（Ｎ−ヘキサデカノイル）アミノエオシン又は５−（Ｎ
−ヘキサデカノイル）−アミノフルオレセインを接触さ
せ、藻類に結合した蛍光色素を励起するのに必要な波長
の光を照射し、発する蛍光を測定する脂質含有藻類の識
別方法。
藻類を識別する方法に関する。 【構成】 藻類にナイルレッド、ナイルブルー、５−
（Ｎ−ヘキサデカノイル）アミノエオシン又は５−（Ｎ
−ヘキサデカノイル）−アミノフルオレセインを接触さ
せ、藻類に結合した蛍光色素を励起するのに必要な波長
の光を照射し、発する蛍光を測定する脂質含有藻類の識
別方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は脂質を含有する藻株を識
別する方法において、特に目的とする脂質高含有株を多
数の藻株の中から迅速に識別する際に適用される。
別する方法において、特に目的とする脂質高含有株を多
数の藻株の中から迅速に識別する際に適用される。
【０００２】
【従来の技術】藻類は炭酸ガスを原料とし光をエネルギ
ー源として各種有機物を合成するが、脂質もそのひとつ
であり燃料など代替エネルギーとして着目している。こ
のためには、目的とする脂質を高濃度に含有する藻株を
海洋、湖、河川等の自然界から探索、分離することが必
要である。従来、藻株の探索、分離を行うには、寒天培
地などで数週間〜数カ月培養して生成したコロニーをさ
らにジャーファーメンター（容積数リットル〜数十リッ
トル）などで１週間以上かけて培養し、大量の菌体を
得、この菌体を破砕し各種分離操作を経て目的物質を精
製したものを、脂質については重量法のような物理化学
的手法やガスクロマトグラフィーのような機器分析によ
り測定を行っている。このため、目的藻株の探索、分離
には多大の時間と労力を要していた。
ー源として各種有機物を合成するが、脂質もそのひとつ
であり燃料など代替エネルギーとして着目している。こ
のためには、目的とする脂質を高濃度に含有する藻株を
海洋、湖、河川等の自然界から探索、分離することが必
要である。従来、藻株の探索、分離を行うには、寒天培
地などで数週間〜数カ月培養して生成したコロニーをさ
らにジャーファーメンター（容積数リットル〜数十リッ
トル）などで１週間以上かけて培養し、大量の菌体を
得、この菌体を破砕し各種分離操作を経て目的物質を精
製したものを、脂質については重量法のような物理化学
的手法やガスクロマトグラフィーのような機器分析によ
り測定を行っている。このため、目的藻株の探索、分離
には多大の時間と労力を要していた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来法では目的藻株の
探索には藻株の大量培養、分離、精製が必要不可欠であ
り、多大の時間と労力が必要であった。
探索には藻株の大量培養、分離、精製が必要不可欠であ
り、多大の時間と労力が必要であった。
【０００４】本発明は上記技術水準に鑑み、この多大な
時間と労力を必要とする培養・抽出・精製操作を行うこ
となく、短時間で迅速に藻類を識別して脂質含有藻類を
自然界から獲得する方法を提供しようとするものであ
る。
時間と労力を必要とする培養・抽出・精製操作を行うこ
となく、短時間で迅速に藻類を識別して脂質含有藻類を
自然界から獲得する方法を提供しようとするものであ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者等は培養、抽
出、精製操作を行うことなく目的藻株を獲得することを
可能とするため脂質に選択的に結合する蛍光物質に着目
し、蛍光物質について実験、検討した結果、下図に示し
た骨格をもつ化合物が藻類に含有する脂質に対し選択的
に結合することを確認した。さらに、これらの化合物の
結合した藻株に、励起光を照射することにより、藻株が
蛍光を発し、この蛍光強度より脂質高含有株を短時間で
識別、分離できることを確認し、本発明を完成させるに
至った。
出、精製操作を行うことなく目的藻株を獲得することを
可能とするため脂質に選択的に結合する蛍光物質に着目
し、蛍光物質について実験、検討した結果、下図に示し
た骨格をもつ化合物が藻類に含有する脂質に対し選択的
に結合することを確認した。さらに、これらの化合物の
結合した藻株に、励起光を照射することにより、藻株が
蛍光を発し、この蛍光強度より脂質高含有株を短時間で
識別、分離できることを確認し、本発明を完成させるに
至った。
【化１】
【化２】
【０００６】すなわち、本発明は （１）藻類に蛍光色素であるナイルレッドまたはナイル
ブルーを接触させ、藻類に結合した蛍光色素を励起する
のに必要な波長の光を照射し、発する蛍光を測定するこ
とを特徴とする脂質含有藻類の識別方法。
ブルーを接触させ、藻類に結合した蛍光色素を励起する
のに必要な波長の光を照射し、発する蛍光を測定するこ
とを特徴とする脂質含有藻類の識別方法。
【０００７】（２）藻類に蛍光色素である５−（Ｎ−ヘ
キサデカノイル）アミノエオシンまたは５−（Ｎ−ヘキ
サデカノイル）−アミノフルオレセインを接触させ、藻
類に結合した蛍光色素を励起するのに必要な波長の光を
照射し、発する蛍光を測定することを特徴とする脂質含
有藻類の識別方法。である。
キサデカノイル）アミノエオシンまたは５−（Ｎ−ヘキ
サデカノイル）−アミノフルオレセインを接触させ、藻
類に結合した蛍光色素を励起するのに必要な波長の光を
照射し、発する蛍光を測定することを特徴とする脂質含
有藻類の識別方法。である。
【０００８】
【作用】上記骨格をもつ化合物を藻類に作用させ、その
化合物を励起するのに必要な波長の光を照射すると、脂
質高含有株は強い蛍光を発し、脂質を含まない藻株はほ
とんど蛍光を発しないことを下記化合物 ナイルレッド（ＮＩＬＥ ＲＥＤ） （以
下、ＮＩＲと略す） ナイルブレー（ＮＩＬＥ ＢＬＵＥ） （以
下、ＮＩＢと略す） ５−（Ｎ−ヘキサデカノイル）−アミノエオシン
〔５−（Ｎ−ＨＥＸＡＤＥＣＡＮＯＹＬ）−ＡＭＩＮＯ
ＥＯＳＩＮ〕 （以下、ＨＡＥと略す） ５−（Ｎ−ヘキサデカノイル）−アミノフルオレセ
イン〔５−（Ｎ−ＨＥＸＡＤＥＣＡＮＯＹＬ）−ＡＭＩ
ＮＯＦＬＵＯＲＥＳＣＥＩＮ〕 （以下、ＨＡＦと略
す） を用いて実験を行い、上記化合物およびは脂質と結
合したときのみ蛍光を発すること、上記化合物および
は脂質と結合すると蛍光が増強することが確認でき、
目的達成のために望ましい物質であることを確認した。
化合物を励起するのに必要な波長の光を照射すると、脂
質高含有株は強い蛍光を発し、脂質を含まない藻株はほ
とんど蛍光を発しないことを下記化合物 ナイルレッド（ＮＩＬＥ ＲＥＤ） （以
下、ＮＩＲと略す） ナイルブレー（ＮＩＬＥ ＢＬＵＥ） （以
下、ＮＩＢと略す） ５−（Ｎ−ヘキサデカノイル）−アミノエオシン
〔５−（Ｎ−ＨＥＸＡＤＥＣＡＮＯＹＬ）−ＡＭＩＮＯ
ＥＯＳＩＮ〕 （以下、ＨＡＥと略す） ５−（Ｎ−ヘキサデカノイル）−アミノフルオレセ
イン〔５−（Ｎ−ＨＥＸＡＤＥＣＡＮＯＹＬ）−ＡＭＩ
ＮＯＦＬＵＯＲＥＳＣＥＩＮ〕 （以下、ＨＡＦと略
す） を用いて実験を行い、上記化合物およびは脂質と結
合したときのみ蛍光を発すること、上記化合物および
は脂質と結合すると蛍光が増強することが確認でき、
目的達成のために望ましい物質であることを確認した。
【０００９】上記蛍光物質と脂質は上記化合物の構造中
の大部分を占める疎水性部分のために、水には溶けず、
脂質に溶解するという形で取り込まれ結合するため、上
記化合物が藻体中に含有する脂質と選択的に結合し、励
起光を照射したときに蛍光を発する。したがって、蛍光
顕微鏡等により蛍光量の強い藻株を識別し、これをマニ
ュピレーターやマイクロピペットで吸引することにより
目的藻類を迅速に行うことができる。
の大部分を占める疎水性部分のために、水には溶けず、
脂質に溶解するという形で取り込まれ結合するため、上
記化合物が藻体中に含有する脂質と選択的に結合し、励
起光を照射したときに蛍光を発する。したがって、蛍光
顕微鏡等により蛍光量の強い藻株を識別し、これをマニ
ュピレーターやマイクロピペットで吸引することにより
目的藻類を迅速に行うことができる。
【００１０】
（例１）初めに、蛍光を発する藻株を観察するために使
用した装置構成を図１に示す。図１において、１は細胞
に光を照射するための光源で出力１００Ｗの水銀灯を用
いている。２は水銀灯から出た光を集光するためのコレ
クターレンズ、３は励起フィルターであり、藻株を発光
させるのに必要な波長を選定するためのものである。Ｎ
ＩＲを使用した場合には５１０〜５６０nmの波長領域を
透過する励起フィルターを予備実験結果より選定した。
光源として水銀灯を用いたが、細胞内に蓄積する蛍光物
質を励起させることができればレーザを光源として用い
ることもでき、この場合は励起フィルター３は不要であ
る。４はミラー、５は対物レンズで、この実験では２０
倍のものを使用した。６は顕微鏡の試料台で、この上に
試料を載せたスライドガラスを置き、直接、計測する。
スライドガラスに載せた試料に５１０〜５６０nmの光を
照射すると藻株中の脂質に結合したＮＩＲが発光し、６
０８nmを主波長とする蛍光を発する。吸収フィルター７
により、この近辺の波長を通過させ、レンズ８を介して
カメラ９により発光藻株を撮像する。１０は任意に設定
可能な輝度レベル内に存在する発光藻株の画像を出力す
ることができる画像処理装置で、処理された画像はモニ
ター１２に写し出される。画像処理された信号をパーテ
ィクルカウンター１１と連結すれば、任意の輝度範囲に
ある藻株数を計測することができる。８は接眼レンズに
すれば、藻株の蛍光画像を直接、観察することもでき
る。
用した装置構成を図１に示す。図１において、１は細胞
に光を照射するための光源で出力１００Ｗの水銀灯を用
いている。２は水銀灯から出た光を集光するためのコレ
クターレンズ、３は励起フィルターであり、藻株を発光
させるのに必要な波長を選定するためのものである。Ｎ
ＩＲを使用した場合には５１０〜５６０nmの波長領域を
透過する励起フィルターを予備実験結果より選定した。
光源として水銀灯を用いたが、細胞内に蓄積する蛍光物
質を励起させることができればレーザを光源として用い
ることもでき、この場合は励起フィルター３は不要であ
る。４はミラー、５は対物レンズで、この実験では２０
倍のものを使用した。６は顕微鏡の試料台で、この上に
試料を載せたスライドガラスを置き、直接、計測する。
スライドガラスに載せた試料に５１０〜５６０nmの光を
照射すると藻株中の脂質に結合したＮＩＲが発光し、６
０８nmを主波長とする蛍光を発する。吸収フィルター７
により、この近辺の波長を通過させ、レンズ８を介して
カメラ９により発光藻株を撮像する。１０は任意に設定
可能な輝度レベル内に存在する発光藻株の画像を出力す
ることができる画像処理装置で、処理された画像はモニ
ター１２に写し出される。画像処理された信号をパーテ
ィクルカウンター１１と連結すれば、任意の輝度範囲に
ある藻株数を計測することができる。８は接眼レンズに
すれば、藻株の蛍光画像を直接、観察することもでき
る。
【００１１】次に、上記装置を用いて、上記化合物ＮＩ
Ｒを使用した具体例について述べる。ＮＩＲを作用させ
る藻株として、脂質高生産藻類であるＥＵ株、脂質
低生産藻類であるＣＨ株の２株を使用した。それぞれの
培養細胞を遠心分離により集菌し、リン酸バッファー(
pH：７．０，１／１５mol/ｌ）中に懸濁する。細胞懸濁
液１mlに対し、１０mgのＮＩＲを１mlメタノールに溶か
した液を３０μｌ加え、軽く攪拌した後、２分間室温で
反応させる。反応完成後の液をスライドガラスにとり、
上記観察装置の試料台６に載せ、励起光を照射し画像処
理装置あるいは肉眼によって藻株の蛍光を測定した。そ
の結果、表１に示したように脂質高生産株ＥＵ株は強い
蛍光を発したが、脂質低生産株ＣＨ株は非常に弱い蛍光
しか発しなかった。
Ｒを使用した具体例について述べる。ＮＩＲを作用させ
る藻株として、脂質高生産藻類であるＥＵ株、脂質
低生産藻類であるＣＨ株の２株を使用した。それぞれの
培養細胞を遠心分離により集菌し、リン酸バッファー(
pH：７．０，１／１５mol/ｌ）中に懸濁する。細胞懸濁
液１mlに対し、１０mgのＮＩＲを１mlメタノールに溶か
した液を３０μｌ加え、軽く攪拌した後、２分間室温で
反応させる。反応完成後の液をスライドガラスにとり、
上記観察装置の試料台６に載せ、励起光を照射し画像処
理装置あるいは肉眼によって藻株の蛍光を測定した。そ
の結果、表１に示したように脂質高生産株ＥＵ株は強い
蛍光を発したが、脂質低生産株ＣＨ株は非常に弱い蛍光
しか発しなかった。
【００１２】このことから、蛍光物質ＮＩＲは脂質生産
藻株に選択的に結合し、励起光を当てることによって同
生産株から蛍光を発し、他の株と識別ができることが確
認でき本発明の効果が確認された。また、他の蛍光物質
ＮＩＢについても同様の結果が得られた。
藻株に選択的に結合し、励起光を当てることによって同
生産株から蛍光を発し、他の株と識別ができることが確
認でき本発明の効果が確認された。また、他の蛍光物質
ＮＩＢについても同様の結果が得られた。
【表１】 注）＋＋＋：非常に強い蛍光を発した（＋の約１０倍の
強さ） ＋ ：若干の蛍光が認められた ± ：蛍光をほとんど発しなかった
強さ） ＋ ：若干の蛍光が認められた ± ：蛍光をほとんど発しなかった
【００１３】（例２）例１で述べた装置を用いて、蛍光
物質ＨＡＥを使用した具体例について述べる。ＨＡＥを
作用させる藻株として例１と同様、脂質高生産藻類で
あるＥＵ株、脂質低生産藻類であるＣＨ株の２株を使
用した。それぞれの培養細胞を遠心分離により集菌し、
リン酸バッファー( pH：７．０，１／１５mol/ｌ）中に
懸濁する。細胞懸濁液１mlに対し、１mgのＨＡＥを１ml
メタノールに溶かした液を３０μｌ加え、軽く攪拌した
後、２分間室温で反応させる。反応完成後の液をスライ
ドガラスにとり、上記観察装置の試料台６に載せて励起
光を照射し、画像処理装置あるいは肉眼によって藻株の
蛍光を測定した。その結果、表２に示したように脂質高
生産株ＥＵ株は強い蛍光を発したが、脂質低生産株ＣＨ
株は非常に弱い蛍光しか発しなかった。
物質ＨＡＥを使用した具体例について述べる。ＨＡＥを
作用させる藻株として例１と同様、脂質高生産藻類で
あるＥＵ株、脂質低生産藻類であるＣＨ株の２株を使
用した。それぞれの培養細胞を遠心分離により集菌し、
リン酸バッファー( pH：７．０，１／１５mol/ｌ）中に
懸濁する。細胞懸濁液１mlに対し、１mgのＨＡＥを１ml
メタノールに溶かした液を３０μｌ加え、軽く攪拌した
後、２分間室温で反応させる。反応完成後の液をスライ
ドガラスにとり、上記観察装置の試料台６に載せて励起
光を照射し、画像処理装置あるいは肉眼によって藻株の
蛍光を測定した。その結果、表２に示したように脂質高
生産株ＥＵ株は強い蛍光を発したが、脂質低生産株ＣＨ
株は非常に弱い蛍光しか発しなかった。
【００１４】このことから、蛍光物質ＨＡＥは脂質生産
藻株に選択的に結合し、励起光を当てることによって同
生産株から蛍光を発し、他の株と識別ができることが確
認でき本発明の効果が確認された。また、他の蛍光物質
ＨＡＦについても同様の結果が得られた。
藻株に選択的に結合し、励起光を当てることによって同
生産株から蛍光を発し、他の株と識別ができることが確
認でき本発明の効果が確認された。また、他の蛍光物質
ＨＡＦについても同様の結果が得られた。
【表２】
【００１５】
【発明の効果】本発明により従来１カ月以上かかってい
た細胞中の脂質の検出が数時間で行えるようになった。
そのため、藻類の探索・識別に関する効率を大幅に向上
させることができ、非常に高い効果を発揮するものであ
る。
た細胞中の脂質の検出が数時間で行えるようになった。
そのため、藻類の探索・識別に関する効率を大幅に向上
させることができ、非常に高い効果を発揮するものであ
る。
【図１】本発明の実施例における蛍光細胞を検知、計測
する際に使用した装置の概略図。
する際に使用した装置の概略図。
Claims (2)
- 【請求項１】 藻類に蛍光色素であるナイルレッドまた
はナイルブルーを接触させ、藻類に結合した蛍光色素を
励起するのに必要な波長の光を照射し、発する蛍光を測
定することを特徴とする脂質含有藻類の識別方法。 - 【請求項２】 藻類に蛍光色素である５−（Ｎ−ヘキサ
デカノイル）アミノエオシンまたは５−（Ｎ−ヘキサデ
カノイル）−アミノフルオレセインを接触させ、藻類に
結合した蛍光色素を励起するのに必要な波長の光を照射
し、発する蛍光を測定することを特徴とする脂質含有藻
類の識別方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6175691A JPH05268993A (ja) | 1991-03-26 | 1991-03-26 | 脂質含有藻類の識別方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6175691A JPH05268993A (ja) | 1991-03-26 | 1991-03-26 | 脂質含有藻類の識別方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05268993A true JPH05268993A (ja) | 1993-10-19 |
Family
ID=13180321
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6175691A Withdrawn JPH05268993A (ja) | 1991-03-26 | 1991-03-26 | 脂質含有藻類の識別方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05268993A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014141811A1 (ja) * | 2013-03-11 | 2014-09-18 | 栗田工業株式会社 | 微細藻類の脂溶性成分含量の判断方法および微細藻類の培養方法 |
| WO2017098815A1 (ja) * | 2015-12-10 | 2017-06-15 | アズビル株式会社 | 微細藻類のモニタリング装置及び微細藻類のモニタリング方法 |
| WO2017098816A1 (ja) * | 2015-12-10 | 2017-06-15 | アズビル株式会社 | 微細藻類に含まれる脂質の検出装置及び微細藻類に含まれる脂質の検出方法 |
-
1991
- 1991-03-26 JP JP6175691A patent/JPH05268993A/ja not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014141811A1 (ja) * | 2013-03-11 | 2014-09-18 | 栗田工業株式会社 | 微細藻類の脂溶性成分含量の判断方法および微細藻類の培養方法 |
| JP2014174034A (ja) * | 2013-03-11 | 2014-09-22 | Kurita Water Ind Ltd | 微細藻類の脂溶性成分含量の判断方法および微細藻類の培養方法 |
| WO2017098815A1 (ja) * | 2015-12-10 | 2017-06-15 | アズビル株式会社 | 微細藻類のモニタリング装置及び微細藻類のモニタリング方法 |
| WO2017098816A1 (ja) * | 2015-12-10 | 2017-06-15 | アズビル株式会社 | 微細藻類に含まれる脂質の検出装置及び微細藻類に含まれる脂質の検出方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tsien et al. | Measurement of cytosolic free Ca2+ in individual small cells using fluorescence microscopy with dual excitation wavelengths | |
| CN107056769A (zh) | 一种l‑半胱氨酸荧光探针及其制备方法 | |
| CN106892947B (zh) | 一种含有(肼基羰基)二茂铁配体的铱配合物及其制备方法和应用 | |
| CN110272734A (zh) | 一种用于no检测的高量子产率碳量子点制备方法及其应用 | |
| Murtaza et al. | Long-lifetime metal–ligand pH probe | |
| CN112813133B (zh) | 一种细胞杀伤效力的检测方法、系统及其应用 | |
| JP2006238779A (ja) | 微生物細胞検出方法 | |
| CN106588966B (zh) | 一种开型过氧化氢荧光探针化合物的制备与应用 | |
| CN108440411A (zh) | 一种甲醛荧光探针及其制备方法和应用 | |
| US20240301342A1 (en) | Cell treatment system, cell treatment method, and learning data creation method | |
| CN108752373B (zh) | 一种基于苯硼酯识别过氧化氢的荧光探针 | |
| JP4911423B2 (ja) | 微生物の計測方法 | |
| CN113466111B (zh) | 一种单细胞分析系统及方法和应用 | |
| JPH05268993A (ja) | 脂質含有藻類の識別方法 | |
| CN111072011B (zh) | 一种线粒体-核仁可逆迁移荧光碳点的制备及在监测细胞活性中的应用 | |
| JP2002340901A (ja) | 特定微生物計量装置 | |
| US7545495B2 (en) | Methods for visualizing crystals and distinguishing crystals from other matter within a biological sample | |
| JPH05268994A (ja) | 蛋白質含有藻類の識別方法 | |
| CN115745899A (zh) | 一种汞（ⅱ）荧光探针、制备方法及其应用 | |
| WO1984004544A1 (en) | Method for measuring the number or methane-producing activity of methane bacteria | |
| JPH05268995A (ja) | 多糖・セルロース含有藻類の識別方法 | |
| JP2010043865A (ja) | 異常型プリオンの検出方法 | |
| JPH10215894A (ja) | 生細胞の検出方法 | |
| CN113402470A (zh) | 一种多通道可逆比色汞离子荧光探针、制备方法与应用 | |
| CN107271673B (zh) | 一种含Eu的多金属氧簇在体外检测人乳头瘤病毒早期致癌蛋白E6中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 19980514 |