JPH05249106A - 比色試験系において生物学的物質の干渉を抑えるためにポリマー−銅錯体を使用した分析方法 - Google Patents
比色試験系において生物学的物質の干渉を抑えるためにポリマー−銅錯体を使用した分析方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 血液試料中の分析対象物を測定する比色検定
において、血液試料中の生物学的物質、例えばヘモグロ
ビンおよびビリルビンの干渉を減少させる方法を提供す
る。 【構成】 銅および多重ペンダントカルボキシル基を有
するポリマーから調製される水不溶性錯体を生物学的物
質と結合させ、水性溶液から除去可能にする。
において、血液試料中の生物学的物質、例えばヘモグロ
ビンおよびビリルビンの干渉を減少させる方法を提供す
る。 【構成】 銅および多重ペンダントカルボキシル基を有
するポリマーから調製される水不溶性錯体を生物学的物
質と結合させ、水性溶液から除去可能にする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血液試料中の予め決め
られた分析対象物の比色検定において、血液試料中の生
物学的物質による干渉を減少させることに関する。
られた分析対象物の比色検定において、血液試料中の生
物学的物質による干渉を減少させることに関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】血液
試料中のある種の成分は、予め決められた濃度範囲外で
存在することが見出されると、潜在的な病理状態を示す
が、このような成分の迅速な測定のために、臨床分析者
が利用できる種々の試験具および方法が存在する。
試料中のある種の成分は、予め決められた濃度範囲外で
存在することが見出されると、潜在的な病理状態を示す
が、このような成分の迅速な測定のために、臨床分析者
が利用できる種々の試験具および方法が存在する。
【０００３】グルコース、ラクテート、尿酸およびエタ
ノールのような分析対象物に関する血液の分析におい
て、試験中の全血試料を、赤血球を沈殿させることによ
り血漿に還元するか、または血液を凝固させることによ
り血清に還元することは常法である。いずれの場合に
も、試料を調製する際に細心の注意をしなければ、赤血
球の一部分が溶解し、それにより生物学的不純物、例え
ば、ヘモグロビンおよびヘモグロビンから由来したビリ
ルビンを血液試料中に放出する。
ノールのような分析対象物に関する血液の分析におい
て、試験中の全血試料を、赤血球を沈殿させることによ
り血漿に還元するか、または血液を凝固させることによ
り血清に還元することは常法である。いずれの場合に
も、試料を調製する際に細心の注意をしなければ、赤血
球の一部分が溶解し、それにより生物学的不純物、例え
ば、ヘモグロビンおよびヘモグロビンから由来したビリ
ルビンを血液試料中に放出する。
【０００４】予め決められた分析対象物に関する血液試
料の分析においては、典型的に酸化的試薬系を用いる。
この酸化的試薬系では、予め決められた分析対象物、例
えばグルコースにしたがって選択したオキシダーゼが酸
素の存在下で分析対象物と反応し、過酸化水素を提供す
る。この過酸化水素が、過酸化活性物質の存在下で、好
適な酸化還元指示薬を酸化して、それを酸化された有色
形態に変換し、この色強度を視覚的にまたは計器によっ
て測定することにより、血液試料中の分析対象物の濃度
を定量的に測定することができる。
料の分析においては、典型的に酸化的試薬系を用いる。
この酸化的試薬系では、予め決められた分析対象物、例
えばグルコースにしたがって選択したオキシダーゼが酸
素の存在下で分析対象物と反応し、過酸化水素を提供す
る。この過酸化水素が、過酸化活性物質の存在下で、好
適な酸化還元指示薬を酸化して、それを酸化された有色
形態に変換し、この色強度を視覚的にまたは計器によっ
て測定することにより、血液試料中の分析対象物の濃度
を定量的に測定することができる。
【０００５】上記の酸化的系に加えて、本発明は、以下
の等式によって示される還元的系との組み合わせで用い
ることもできる。この等式では、グルコースが目的の分
析対象物であり、ＡＴＰはアデノシン３燐酸を表わし、
ＡＤＰはアデノシン２燐酸を表わし、ＮＡＤはニコチン
アミド−アデニンジヌクレオチドを表わし、ＮＡＤＨは
ＮＡＤの還元形態を表わし、そして、ＮＢＴはニトロブ
ルーテトラゾリウムを表わす：
の等式によって示される還元的系との組み合わせで用い
ることもできる。この等式では、グルコースが目的の分
析対象物であり、ＡＴＰはアデノシン３燐酸を表わし、
ＡＤＰはアデノシン２燐酸を表わし、ＮＡＤはニコチン
アミド−アデニンジヌクレオチドを表わし、ＮＡＤＨは
ＮＡＤの還元形態を表わし、そして、ＮＢＴはニトロブ
ルーテトラゾリウムを表わす：
【０００６】 ヘキソキナーゼ グルコース＋ＡＴＰーーーーーーー＞グルコース−６−ホスフェート＋ＡＤＰ グルコース−６−ホスフェート グルコース−６−ホスフェート＋ＮＡＤーーーーーーーーーーーーーー＞ デヒドロゲナーゼ ６−ホスホグルコネート＋ＮＡＤＨ ジアフォラーゼ ＮＡＤＨ＋ＮＢＴーーーーーーーーー＞フォルマザン（有色）
【０００７】この系によって生じるフォルマザンの色強
度は、系中のグルコース濃度に正比例する。
度は、系中のグルコース濃度に正比例する。
【０００８】このような試験が必要な感度を有するため
には、形成された色の強度の測定への干渉を回避するた
めに、試験中の血液スペシメンが試験条件下で実際的で
あるようにほとんど無色であることが必須である。した
がって、赤血球の溶解および結果として起こる生物学的
物質、例えば、ヘモグロビンおよびビリルビンの放出
は、それらの分光光度計的手段によるスペシメンの反射
率の読み取りとの干渉のために、これらの比色測定に関
して問題となる。
には、形成された色の強度の測定への干渉を回避するた
めに、試験中の血液スペシメンが試験条件下で実際的で
あるようにほとんど無色であることが必須である。した
がって、赤血球の溶解および結果として起こる生物学的
物質、例えば、ヘモグロビンおよびビリルビンの放出
は、それらの分光光度計的手段によるスペシメンの反射
率の読み取りとの干渉のために、これらの比色測定に関
して問題となる。
【０００９】Cancer Res., 47(14), 3624-6 (1987)に見
られる記事において、 Anderson etal.は、ヒト血清α
−フェトプロテインおよびアルブミンを、Ｃｏ+2、Ｎｉ
+2、Ｃｕ+2またはＺｎ+2で荷電された固定化イミノジ酢
酸でクロマトグラフしたことを報告した。両タンパク質
は、Ｃｕ+2に結合し、イミダゾールを用いたアフィニテ
ィー溶出（エルーション）で部分的に再溶解された。
られる記事において、 Anderson etal.は、ヒト血清α
−フェトプロテインおよびアルブミンを、Ｃｏ+2、Ｎｉ
+2、Ｃｕ+2またはＺｎ+2で荷電された固定化イミノジ酢
酸でクロマトグラフしたことを報告した。両タンパク質
は、Ｃｕ+2に結合し、イミダゾールを用いたアフィニテ
ィー溶出（エルーション）で部分的に再溶解された。
【００１０】Berk et al.は、 Biomed. Appln. Immobil
ized Enzymes & Proteins, Vol. 1, Pp. 297-317 にお
いて、アルブミン−アガロースゲル上でのアフィニティ
−競合クロマトグラフィーによって、ビリルビンを血液
から除去し得ることを報告した。
ized Enzymes & Proteins, Vol. 1, Pp. 297-317 にお
いて、アルブミン−アガロースゲル上でのアフィニティ
−競合クロマトグラフィーによって、ビリルビンを血液
から除去し得ることを報告した。
【００１１】血清または血漿試料からヘモグロビンおよ
び／またはビリルビンのような外来性の生物学的物質の
除去のための新規の方法を提供することが、本発明の一
つの目的である。
び／またはビリルビンのような外来性の生物学的物質の
除去のための新規の方法を提供することが、本発明の一
つの目的である。
【００１２】血液試料を、その中に含有される種々の分
析対象物の比色分析に、より供し易くする方法を提供す
ることは、さらなる目的である。
析対象物の比色分析に、より供し易くする方法を提供す
ることは、さらなる目的である。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明は、適当な試薬系
の利用によって酸化還元指示薬を酸化または還元させ
て、分析対象物に対する有色応答を提供する比色試験に
よって、血清または血漿を分析する改良された方法であ
る。本発明は、多重ペンダントカルボキシル基を有する
高分子物質の不溶性銅錯体に血液試料を接触させ、血液
試料中の潜在的に干渉性の生物学的物質との、固体／液
体分離技術によってそこから除去し得る不溶性反応生成
物を形成させることに関する。
の利用によって酸化還元指示薬を酸化または還元させ
て、分析対象物に対する有色応答を提供する比色試験に
よって、血清または血漿を分析する改良された方法であ
る。本発明は、多重ペンダントカルボキシル基を有する
高分子物質の不溶性銅錯体に血液試料を接触させ、血液
試料中の潜在的に干渉性の生物学的物質との、固体／液
体分離技術によってそこから除去し得る不溶性反応生成
物を形成させることに関する。
【００１４】本発明は、血液または血漿からの有色干渉
物の除去のための方法に向けられている。本方法は、Ｃ
ｕ++が多重ペンダントカルボキシル基を有するポリマー
と錯体を形成する能力に関するものであり、この錯体
は、次いで血液試料中に存在するヘモグロビンおよびビ
リルビンのような生物学的物質と不溶性組み合わせを形
成する能力を有し、それによりそれらの除去を促進す
る。
物の除去のための方法に向けられている。本方法は、Ｃ
ｕ++が多重ペンダントカルボキシル基を有するポリマー
と錯体を形成する能力に関するものであり、この錯体
は、次いで血液試料中に存在するヘモグロビンおよびビ
リルビンのような生物学的物質と不溶性組み合わせを形
成する能力を有し、それによりそれらの除去を促進す
る。
【００１５】本発明に有用なポリマーを含有するカルボ
キシル様基は、錯体を形成していない状態では一般に水
溶性であるが、しかし、銅錯体に変換されると、生成物
は事実上水に不溶性である。好適なカルボキシル様基ポ
リマーとしては、水性溶液中で可溶性銅塩、例えば硫酸
第二銅と接触すると、銅イオンと水不溶性錯体を形成し
得るポリマーが挙げられる。カルボキシル基密度、即ち
ポリマー骨格中の炭素原子数に対するカルボキシル基の
比率は重大ではなく、典型的には１：９〜９：１の範囲
内であり、好ましくは１：３〜３：１の範囲内であろ
う。理想的には、この比率は約１：１であって、溶解性
特性、およびその銅錯体に変換された際の潜在干渉性生
物学的物質に対するアフィニティの最良の組み合わせを
提供するであろう。したがって、好適なポリマーは、一
般式：
キシル様基は、錯体を形成していない状態では一般に水
溶性であるが、しかし、銅錯体に変換されると、生成物
は事実上水に不溶性である。好適なカルボキシル様基ポ
リマーとしては、水性溶液中で可溶性銅塩、例えば硫酸
第二銅と接触すると、銅イオンと水不溶性錯体を形成し
得るポリマーが挙げられる。カルボキシル基密度、即ち
ポリマー骨格中の炭素原子数に対するカルボキシル基の
比率は重大ではなく、典型的には１：９〜９：１の範囲
内であり、好ましくは１：３〜３：１の範囲内であろ
う。理想的には、この比率は約１：１であって、溶解性
特性、およびその銅錯体に変換された際の潜在干渉性生
物学的物質に対するアフィニティの最良の組み合わせを
提供するであろう。したがって、好適なポリマーは、一
般式：
【００１６】
【化５】
【００１７】（式中、ｎ1 は０〜３、ｎ2 は０〜３、ｎ
3 は０〜３、但し、ｎ1 、ｎ2 およびｎ3 の少なくとも
１つは０ではない；ｎ4 、ｎ5 、ｎ6 、ｎ7 およびｎ8
は０〜６；Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 およびＲ5 はＨ、Ｏ
Ｈ、１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基、
3 は０〜３、但し、ｎ1 、ｎ2 およびｎ3 の少なくとも
１つは０ではない；ｎ4 、ｎ5 、ｎ6 、ｎ7 およびｎ8
は０〜６；Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 およびＲ5 はＨ、Ｏ
Ｈ、１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基、
【００１８】
【化６】
【００１９】または−ＮＨＲ11であって、Ｒ11は１〜６
個の炭素原子を有する低級アルキル；Ｒ6 、Ｒ7 、Ｒ
8 、Ｒ9 およびＲ10はＨ、カルボキシル基、ＯＨ、スル
ホン酸基、イミダゾリル基またはピリジル基、但し、Ｒ
6 、Ｒ7 、Ｒ8 、Ｒ9 およびＲ10の少なくとも１つ、好
ましくは２または３のこれらの部分はカルボキシル基を
示す；そして、Ｘ1 、Ｘ2 、Ｘ3 は単結合、−Ｏ−、−
ＮＲ12、
個の炭素原子を有する低級アルキル；Ｒ6 、Ｒ7 、Ｒ
8 、Ｒ9 およびＲ10はＨ、カルボキシル基、ＯＨ、スル
ホン酸基、イミダゾリル基またはピリジル基、但し、Ｒ
6 、Ｒ7 、Ｒ8 、Ｒ9 およびＲ10の少なくとも１つ、好
ましくは２または３のこれらの部分はカルボキシル基を
示す；そして、Ｘ1 、Ｘ2 、Ｘ3 は単結合、−Ｏ−、−
ＮＲ12、
【００２０】
【化７】
【００２１】または
【化８】
【００２２】であって、Ｒ12はＨまたは１〜６個の炭素
原子を有する低級アルキルである）で示されるポリマー
から選択し得る。
原子を有する低級アルキルである）で示されるポリマー
から選択し得る。
【００２３】重合の程度、即ち、上記の式におけるｍの
値は、水性溶液中で銅イオンと接触するとポリマー−銅
錯体を形成する範囲内であれば、重大ではない。典型的
には、重合の程度は、約１０〜約６００であり、好まし
い重合の程度は、約４０〜約１３０である。
値は、水性溶液中で銅イオンと接触するとポリマー−銅
錯体を形成する範囲内であれば、重大ではない。典型的
には、重合の程度は、約１０〜約６００であり、好まし
い重合の程度は、約４０〜約１３０である。
【００２４】スルホン酸基、イミダゾリル基およびピリ
ジル基は、存在すれば、銅との錯体形成以前の水性溶液
中のポリマーの溶解性特性を強化する。このような強化
された溶解性は、カルボキシル基密度が上述した密度範
囲の下限よりの密度であるポリマーを錯体調製に用いる
場合には、必要であり得る。さらに、ポリマー骨格にお
いてカルボキシレートの炭素原子に対する必要な比率を
提供するのであれば、カルボキシル様誘導体ポリマー、
例えば無水マレイン酸／スチレンコポリマーを用い得
る。
ジル基は、存在すれば、銅との錯体形成以前の水性溶液
中のポリマーの溶解性特性を強化する。このような強化
された溶解性は、カルボキシル基密度が上述した密度範
囲の下限よりの密度であるポリマーを錯体調製に用いる
場合には、必要であり得る。さらに、ポリマー骨格にお
いてカルボキシレートの炭素原子に対する必要な比率を
提供するのであれば、カルボキシル様誘導体ポリマー、
例えば無水マレイン酸／スチレンコポリマーを用い得
る。
【００２５】より具体的には、好ましいポリマーは、以
下のものを含む：
下のものを含む：
【００２６】（１）ポリアクリル酸
【００２７】
【化９】
【００２８】（２）ポリアスパラギン酸
【００２９】
【化１０】
【００３０】（３）ポリグルタミン酸
【００３１】
【化１１】
【００３２】最も好ましいポリカルボキシル様ポリマー
は、GAF Corporation が製造するGantrez （登録商標）
の加水分解形態である、ポリ（メチルビニルエーテル／
マレイン酸）である：
は、GAF Corporation が製造するGantrez （登録商標）
の加水分解形態である、ポリ（メチルビニルエーテル／
マレイン酸）である：
【００３３】（４）
【００３４】
【化１２】
【００３５】このカルボン酸ポリマーは、好適な銅イオ
ン源、例えば硫酸銅と水性溶液中で接触することによっ
て、銅と錯体を形成する。この手順において、ポリマー
／銅錯体は水性媒体から沈殿し、濾過または同様の手段
によって回収される。
ン源、例えば硫酸銅と水性溶液中で接触することによっ
て、銅と錯体を形成する。この手順において、ポリマー
／銅錯体は水性媒体から沈殿し、濾過または同様の手段
によって回収される。
【００３６】多重カルボキシル基を有する可溶性ポリマ
ーは、銅と錯体形成すると事実上水に不溶性になる。そ
のことが、このようなポリマーを、血清または血漿から
生物学的物質を一掃するための理想的な候補にする。こ
れは、ポリマー−銅錯体／生物学的物質の組み合わせ
は、遠心およびデカンテーション、あるいは濾過のよう
な標準的固体／液体分離技術によって、血清または血漿
から容易に分離し得るためである。
ーは、銅と錯体形成すると事実上水に不溶性になる。そ
のことが、このようなポリマーを、血清または血漿から
生物学的物質を一掃するための理想的な候補にする。こ
れは、ポリマー−銅錯体／生物学的物質の組み合わせ
は、遠心およびデカンテーション、あるいは濾過のよう
な標準的固体／液体分離技術によって、血清または血漿
から容易に分離し得るためである。
【００３７】本発明を実施する好ましい方法において
は、ポリマー−銅錯体を濾紙のような濾過具中に染み込
ませて、血清または血漿をその濾紙を通して通過させ、
そこで生物学的物質、特にヘモグロビンおよびビリルビ
ンがフィルター結合錯体にくっついて、血液試料から効
率的に除去される。
は、ポリマー−銅錯体を濾紙のような濾過具中に染み込
ませて、血清または血漿をその濾紙を通して通過させ、
そこで生物学的物質、特にヘモグロビンおよびビリルビ
ンがフィルター結合錯体にくっついて、血液試料から効
率的に除去される。
【００３８】錯体を直接血液試料に添加する別の手順
も、うまく働く。この態様においては、ポリマー−銅錯
体および生物学的物質の不溶性反応生成物を、遠心およ
びデカンテーション、あるいは濾過によって血液試料か
ら除去する。
も、うまく働く。この態様においては、ポリマー−銅錯
体および生物学的物質の不溶性反応生成物を、遠心およ
びデカンテーション、あるいは濾過によって血液試料か
ら除去する。
【００３９】典型的には、ポリマー−銅錯体は、約０．
２〜約２０％（w/v ）、好ましくは約０．５〜約１０％
の量で血液試料と混合する。この濃度は、もちろん、一
掃するべき生物学的物質の量および銅で誘導可能なポリ
マー骨格上のカルボキシル基の濃度によって変わるであ
ろう。Gantrez を用いて調製した好ましい銅錯体は、望
ましいレベルの精製を達成するためには、約０．７〜約
７％（w/v ）の量で血清または血漿と混合する。
２〜約２０％（w/v ）、好ましくは約０．５〜約１０％
の量で血液試料と混合する。この濃度は、もちろん、一
掃するべき生物学的物質の量および銅で誘導可能なポリ
マー骨格上のカルボキシル基の濃度によって変わるであ
ろう。Gantrez を用いて調製した好ましい銅錯体は、望
ましいレベルの精製を達成するためには、約０．７〜約
７％（w/v ）の量で血清または血漿と混合する。
【００４０】我々は、本発明がどのように働くかに関す
るいかなる特定の説にも束縛されることは望まないが、
ヘモグロビンおよびビリルビンが、そのカルボン酸およ
び／またはアミノ基と前述のポリマー−銅錯体との相互
作用によって結合すると信じている。
るいかなる特定の説にも束縛されることは望まないが、
ヘモグロビンおよびビリルビンが、そのカルボン酸およ
び／またはアミノ基と前述のポリマー−銅錯体との相互
作用によって結合すると信じている。
【００４１】
【実施例】本発明の実施方法を、以下の実施例によって
さらに説明する。
さらに説明する。
【００４２】実施例１ Gantrez 酸／Ｃｕ++錯体を以下のように調製した。約
１．７g （０．１Ｍ）のGantrez Ｓ−９５を、完全に溶
解するまで１００mlの脱イオン水と混合した。Gantrez
Ｓ−９５は、ポリ（ビニルエーテル／無水マレイン酸）
であるGantrez の加水分解形態である。次に、硫酸第二
銅溶液（０．１M ）を、Gantrez 酸溶液に激しく撹拌し
ながらゆっくり添加した。３０分間の混合後、青い沈殿
が溶液から分離した。この沈殿を濾過によって集め、非
結合第二銅イオンを除去するために、濾過物が無色にな
るまで徹底的に脱イオン水で洗浄した。この溶液を乾燥
して、青いGantrez 酸−銅錯体を得た。
１．７g （０．１Ｍ）のGantrez Ｓ−９５を、完全に溶
解するまで１００mlの脱イオン水と混合した。Gantrez
Ｓ−９５は、ポリ（ビニルエーテル／無水マレイン酸）
であるGantrez の加水分解形態である。次に、硫酸第二
銅溶液（０．１M ）を、Gantrez 酸溶液に激しく撹拌し
ながらゆっくり添加した。３０分間の混合後、青い沈殿
が溶液から分離した。この沈殿を濾過によって集め、非
結合第二銅イオンを除去するために、濾過物が無色にな
るまで徹底的に脱イオン水で洗浄した。この溶液を乾燥
して、青いGantrez 酸−銅錯体を得た。
【００４３】この錯体の、液体検定においておよび固相
においてヘモグロビンおよびビリルビン分離を起こす有
効性を、液体および濾紙フォーマットの両方を用いた結
果を得ること、およびこれらの試験結果を錯体を用いな
い同一のフォーマットを用いて得た結果と比較すること
によって測定した。
においてヘモグロビンおよびビリルビン分離を起こす有
効性を、液体および濾紙フォーマットの両方を用いた結
果を得ること、およびこれらの試験結果を錯体を用いな
い同一のフォーマットを用いて得た結果と比較すること
によって測定した。
【００４４】液体検定−ヘモグロビン：０、１０、２
０、３０、５０および７０mgのGantrez 酸−銅錯体を含
む６本の試験管を、７８０μg のヘモグロビンおよび
１．３mlまでの蒸留水と混合した。各試験管を１分間振
とうし、遠心した。上清溶液を分離し、Beckman 分光光
度計を用いて５６０nm（ヘモグロビンに関する最大吸収
波長）で吸光度を測定した。錯体を含有しないブランク
試料を対照として用いた。この実験の結果を表１に示
す。
０、３０、５０および７０mgのGantrez 酸−銅錯体を含
む６本の試験管を、７８０μg のヘモグロビンおよび
１．３mlまでの蒸留水と混合した。各試験管を１分間振
とうし、遠心した。上清溶液を分離し、Beckman 分光光
度計を用いて５６０nm（ヘモグロビンに関する最大吸収
波長）で吸光度を測定した。錯体を含有しないブランク
試料を対照として用いた。この実験の結果を表１に示
す。
【００４５】 表１ 錯体 吸光度（５６０nm） 減少（％） なし ０．２９２９ −− １０mg ０．１６８０ ４３．００ ２０mg ０．１３７７ ５３．００ ３０mg ０．１２８２ ５６．００ ５０mg ０．０８９１ ６９．５９ ７０mg ０．０６４０ ７８．５０
【００４６】液体検定−ビリルビン：０、１０、２２．
８、３５．７、４６．５、６０．８、７１．８および８
４mgのGantrez 酸−銅錯体を含む血清試験管を、１０μ
g の複合ビリルビンおよび１．３mlまでの蒸留水と混合
した。各試験管を１分間振とうし、遠心した。上清溶液
を分離し、４５６nmでの吸光度測定値を取った。対照試
料は、錯体を全く添加しないビリルビンを用いた。この
実験の結果を表２に示す。
８、３５．７、４６．５、６０．８、７１．８および８
４mgのGantrez 酸−銅錯体を含む血清試験管を、１０μ
g の複合ビリルビンおよび１．３mlまでの蒸留水と混合
した。各試験管を１分間振とうし、遠心した。上清溶液
を分離し、４５６nmでの吸光度測定値を取った。対照試
料は、錯体を全く添加しないビリルビンを用いた。この
実験の結果を表２に示す。
【００４７】 表２ 錯体 吸光度（４５６nm） 減少（％） 対照 ０．６１９８ −− １０mg ０．３３３６ ４６．００ ２２．８mg ０．３４９１ ４４．００ ３５．７mg ０．３５０２ ４４．００ ４６．５mg ０．３０８７ ５０．００ ６０．８mg ０．２９７８ ５２．００ ７１．８mg ０．２９６７ ５２．００ ８４．０mg ０．２２８７ ５５．００
【００４８】表１および表２から、ポリマー／Ｃｕ錯体
は、水性媒体からヘモグロビンおよびビリルビンの両方
を除去するのに有効であると決定され得る。
は、水性媒体からヘモグロビンおよびビリルビンの両方
を除去するのに有効であると決定され得る。
【００４９】実施例２ この実験においては、Gantrez −酸銅錯体を吸収性担体
マトリックス、即ち濾紙に適用した。最初に、濾紙片
に、０．２５M のGantrez 酸溶液からGantrez 酸を含浸
した。５０℃で１０分間乾燥後、マトリックスを０．１
２５M の硫酸第二銅を含有する第二の溶液で含浸し、再
度５０℃で１０分間乾燥した。錯体処理マトリックス
を、０．２×０．２インチ幅のリボン状に切り、二層堆
積フォーマットに配列して試薬パッドを得た。ヘモグロ
ビン溶液を試験パッドの上層にピペッティングすること
によって、マトリックスGantrez −酸銅錯体を種々の濃
度の水性ヘモグロビンと接触させた。
マトリックス、即ち濾紙に適用した。最初に、濾紙片
に、０．２５M のGantrez 酸溶液からGantrez 酸を含浸
した。５０℃で１０分間乾燥後、マトリックスを０．１
２５M の硫酸第二銅を含有する第二の溶液で含浸し、再
度５０℃で１０分間乾燥した。錯体処理マトリックス
を、０．２×０．２インチ幅のリボン状に切り、二層堆
積フォーマットに配列して試薬パッドを得た。ヘモグロ
ビン溶液を試験パッドの上層にピペッティングすること
によって、マトリックスGantrez −酸銅錯体を種々の濃
度の水性ヘモグロビンと接触させた。
【００５０】この実験の結果を表３に示す。
【００５１】 表３ ヘモグロビン ヘモグロビン試料 ヘモグロビン濃度（mg/dL) Ｋ／Ｓ ＋錯体 Ｋ／Ｓ 減少 （％） ０ ０．０７５３ ０．０７５３ −− １０ ０．１１１７ ０．０８１２ ８４．００ ２５０ ０．１４８５ ０．０８６１ ８５．２５ ５００ ０．２５２９ ０．１３８０ ６４．７０ １０００ ０．４１５３ ０．２６３９ ４４．５３ ２０００ ０．７８２６ ０．６５４６ １８．１０
【００５２】ここで、Ｋ／Ｓ値は、反射率データ（Ｒ）
を発色団濃度に比例する関数（Ｋ／Ｓ）に変換するため
の等式： Ｋ／Ｓ＝（１−Ｒ）2 ／２Ｒ から求めた。
を発色団濃度に比例する関数（Ｋ／Ｓ）に変換するため
の等式： Ｋ／Ｓ＝（１−Ｒ）2 ／２Ｒ から求めた。
【００５３】この実施例の目的のために、第一の上層パ
ッドに浸透し、下層パッドに入ったヘモグロビンの量の
みを反射率値が示すように、下層パッドは試薬を何も含
有しなかった。実際には、下層パッドは、血液試料中の
予め決められた分析対象物に接触すると色変化を提供す
るように、前述したタイプの試薬／酵素系で含浸し得
る。表３のデータは、本発明の系を用いることによっ
て、分析対象物の比色測定に対するヘモグロビンの干渉
が大幅に減少することを立証する。
ッドに浸透し、下層パッドに入ったヘモグロビンの量の
みを反射率値が示すように、下層パッドは試薬を何も含
有しなかった。実際には、下層パッドは、血液試料中の
予め決められた分析対象物に接触すると色変化を提供す
るように、前述したタイプの試薬／酵素系で含浸し得
る。表３のデータは、本発明の系を用いることによっ
て、分析対象物の比色測定に対するヘモグロビンの干渉
が大幅に減少することを立証する。
【００５４】この実験は、種々の分析対象物に関する一
工程比色分析のための堆積試験具をどのように調製し得
るかを説明する。このような試験具は、試薬層と、その
上に位置し、そこを通って血清または血漿が通過するよ
うな、ポリマー−銅錯体で含浸した吸収性物質の濾過層
とを包含するであろう。この堆積系は、場合によっては
赤血球除去のための濾過層を錯体含有層の上に有しても
よく、透明ポリエステルストリップのような透明支持体
に固定してもよい。この透明支持体を通して、試薬層に
達する前に血液からヘモグロビンまたはビリルビンが効
率的に除去され、それらによる干渉が減少した状態で、
血液と試薬層中の成分との反応を見ることができる。
工程比色分析のための堆積試験具をどのように調製し得
るかを説明する。このような試験具は、試薬層と、その
上に位置し、そこを通って血清または血漿が通過するよ
うな、ポリマー−銅錯体で含浸した吸収性物質の濾過層
とを包含するであろう。この堆積系は、場合によっては
赤血球除去のための濾過層を錯体含有層の上に有しても
よく、透明ポリエステルストリップのような透明支持体
に固定してもよい。この透明支持体を通して、試薬層に
達する前に血液からヘモグロビンまたはビリルビンが効
率的に除去され、それらによる干渉が減少した状態で、
血液と試薬層中の成分との反応を見ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 メイタク・テレサ・イップ アメリカ合衆国、インデイアナ州、46516、 エルクハート、イースト・ジャクソン・ブ ールバード 2220
Claims (17)
- 【請求項１】 酸化還元指示薬が還元または酸化されて
有色生成物を提供し、その強度が予め決められた分析対
象物の濃度に比例する比色試験によって血清または血漿
を分析する方法において、銅および多重ペンダントカル
ボキシル基を有するポリマーから調製される水不溶性錯
体であって、血液中の潜在的に干渉性の生物学的物質と
選択的に結合して血液試料中のそのような物質を不溶性
にする錯体を添加することを特徴とする方法。 - 【請求項２】 該生物学的物質が、ヘモグロビンまたは
ビリルビンである、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 該ポリマーが、式： 【化１】 （式中、ｎ1 は０〜３、ｎ2 は０〜３、ｎ3 は０〜３、
但し、ｎ1 、ｎ2 およびｎ3 の少なくとも１つは０では
ない；ｎ4 、ｎ5 、ｎ6 、ｎ7 およびｎ8 はそれぞれ０
〜６；Ｘ1 、Ｘ2 、Ｘ3 は単結合、−Ｏ−、−ＮＲ12、 【化２】 または 【化３】 であって、Ｒ12はＨまたは１〜６個の炭素原子を有する
低級アルキルを表わし；Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 および
Ｒ5 は、それぞれ、Ｈ、ＯＨ、１〜４個の炭素原子を有
するアルコキシ基、 【化４】 または−ＮＨＲ11であって、Ｒ11は１〜６個の炭素原子
を有する低級アルキルであり、Ｒ6 、Ｒ7 、Ｒ8 、Ｒ9
およびＲ10は、それぞれ、Ｈ、カルボキシル基、ＯＨ、
スルホン酸基、イミダゾリル基またはピリジル基であ
り；但し、Ｒ6 、Ｒ7 、Ｒ8 、Ｒ9 およびＲ10のうち少
なくとも１つはカルボキシル基であり、ｍは重合度であ
る）で示される、請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 Ｒ6 、Ｒ7 、Ｒ8 、Ｒ9 およびＲ10のう
ち、２つ以上がカルボキシル基である、請求項３記載の
方法。 - 【請求項５】 カルボキシル基とポリマー骨格中の炭素
原子数との比が、１：９〜９：１である、請求項４記載
の方法。 - 【請求項６】 該比が、１：３〜約３：１である、請求
項５記載の方法。 - 【請求項７】 該比が、約１：１である、請求項６の方
法。 - 【請求項８】 ｍが、約１０〜約６００である、請求項
３記載の方法。 - 【請求項９】 ｍが、約４０〜約１３０である、請求項
８記載の方法。 - 【請求項１０】 該ポリマーが、ポリアクリル酸、ポリ
アスパラギン酸、ポリグルタミン酸またはポリ（メチル
ビニルエーテル／マレイン酸）である、請求項１記載の
方法。 - 【請求項１１】 該ポリマーが、加水分解されたポリ
（メチルビニルエーテル／マレイン酸）である、請求項
１０記載の方法。 - 【請求項１２】 該錯体を、血液試料の約０．２〜約２
０％(W/V) の量で添加する、請求項１記載の方法。 - 【請求項１３】 該錯体を、約０．５〜約１０％(W/V)
の量で添加する、請求項１２記載の方法。 - 【請求項１４】 該ポリマーが加水分解されたポリ（メ
チルビニルエーテル／マレイン酸）であり、その銅錯体
を血液試料の約０．７〜約１０％(W/V) の量で添加す
る、請求項１記載の方法。 - 【請求項１５】 血液試料の分析における使用に好適な
試験具であって、以下のものを含む試験具： ａ）銅と多重ペンダントカルボキシル基を有するポリマ
ーとの水不溶性錯体であって、ヘモグロビンおよびビリ
ルビンと選択的に結合する錯体をその中に分散した吸収
性マトリックスの第一上層；および ｂ）該第一層との液体コミュニケーション（液体が流通
する関係にある）において、血液中に含有される予め決
められた分析対象物と反応して、該血液試料中の予め決
められた分析対象物の存在または量を示す色変化を提供
する試薬系をその中に分散した吸収性マトリックスを含
む第二下層。 - 【請求項１６】 該ポリマーが、ポリアクリル酸、ポリ
アスパラギン酸、ポリグルタミン酸またはポリ（メチル
ビニルエーテル／マレイン酸）である、請求項１５記載
の試験具。 - 【請求項１７】 血液試料中の１つ以上の分析対象物の
存在または濃度を測定する方法であって、請求項１４記
載の試験具の上層に血液試料を適用し、血液試料を該上
層に浸透させて該下層に流れさせ、該血液試料中に存在
していた可能性のあるヘモグロビンまたはビリルビンに
よる干渉が減少した状態で、視覚的または計器による手
段によって検出し得る試薬／酵素系の色変化を起こさせ
ることを特徴とする含む方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/816,339 US5229296A (en) | 1991-12-30 | 1991-12-30 | Use of polymer-copper complex to control interference of biological substances in colorimetric test systems |
| US816339 | 1991-12-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05249106A true JPH05249106A (ja) | 1993-09-28 |
| JP3256305B2 JP3256305B2 (ja) | 2002-02-12 |
Family
ID=25220321
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP35538192A Expired - Fee Related JP3256305B2 (ja) | 1991-12-30 | 1992-12-21 | 比色試験系において生物学的物質の干渉を抑えるためにポリマー−銅錯体を使用した分析方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5229296A (ja) |
| EP (1) | EP0549970A1 (ja) |
| JP (1) | JP3256305B2 (ja) |
| AU (1) | AU655509B2 (ja) |
| CA (1) | CA2083445A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3010699U (ja) * | 1994-10-29 | 1995-05-02 | 株式会社ニッポンジーン | 直接採尿の可能なクロマト式検査装置 |
| US9759651B2 (en) | 2014-12-23 | 2017-09-12 | Magellan Diagnostics, Inc. | Combination optical hemoglobin and electrochemical lead assay |
| WO2017117435A1 (en) * | 2015-12-30 | 2017-07-06 | Magellan Diagnostics, Inc. | Optical bilirubin sensor and assay |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL126573C (ja) * | 1965-08-02 | |||
| US4303408A (en) * | 1980-02-05 | 1981-12-01 | Eastman Kodak Company | Removal of interferents in analytical assays in a two phase interferent-removal zone |
| US4600689A (en) * | 1983-11-21 | 1986-07-15 | Takara Shuzo Co., Ltd. | Novel bilirubin oxidase, its production and use |
| JPS61108400A (ja) * | 1984-10-31 | 1986-05-27 | Amano Pharmaceut Co Ltd | コレステロ−ルの定量法 |
| JPH0249163A (ja) * | 1988-05-20 | 1990-02-19 | Konica Corp | 多層分析素子 |
| US5079140A (en) * | 1989-04-13 | 1992-01-07 | Miles Inc. | Agent for reducing ascorbic acid interference in liquid or dry phase assay systems and method relating thereto |
| IT1233755B (it) * | 1989-09-21 | 1992-04-14 | Diesse Diagnostica | Reattivo per la ricerca e la determinazione della bilirubina nelle urine. |
| US5057435A (en) * | 1990-10-12 | 1991-10-15 | Synermed, Inc. | Reagent and methods for calcium determination |
-
1991
- 1991-12-30 US US07/816,339 patent/US5229296A/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-11-04 AU AU28144/92A patent/AU655509B2/en not_active Ceased
- 1992-11-20 CA CA002083445A patent/CA2083445A1/en not_active Abandoned
- 1992-12-17 EP EP92121474A patent/EP0549970A1/en not_active Withdrawn
- 1992-12-21 JP JP35538192A patent/JP3256305B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-02-09 US US08/015,445 patent/US5281393A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| AU655509B2 (en) | 1994-12-22 |
| CA2083445A1 (en) | 1993-07-01 |
| AU2814492A (en) | 1993-07-01 |
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| EP0549970A1 (en) | 1993-07-07 |
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