JPH05213756A - 抗インフルエンザ剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 インフルエンザウイルスに対して有効な、し
かも毒性の少い医薬品を提供する。 【構成】 一般式（Ｉ）で表わされる化合物の１種又は
２種以上を有効成分として含有して成る抗インフルエン
ザ剤。 （式中、Ｒ_１はアミノ基、水酸基又はメルカプト基であ
り、またＲ_２は水素原子、水酸基又はメルカプト基であ
る）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗インフルエンザ剤に関
する。

【０００２】

【従来の技術】従来、プリンのアナログ（類縁体）であ
る４−ヒドロキシピラゾロ（３，４−ｄ）ピリミジン
（通称アロプリノール：以下「ＡＰ」と略す）が痛風及
び高尿酸血症の治療剤として公知である。

【０００３】また、プリンのアナログであるピラゾロ
（３，４−ｄ）ピリミジンの４，６−置換体としての４
−アミノ−６−ハイドロオキシピラゾロ（３，４−ｄ）
ピリミジン（以下「ＡＨＰＰ」と略す）、４−ハイドロ
オキシ−６−メルカプトピラゾロ（３，４−ｄ）ピリミ
ジン（以下「６ＭＨＰＰ」と略す）、４−メルカプト−
６−ハイドロオキシピラゾロ（３，４−ｄ）ピリミジン
（以下「４ＭＨＰＰ」と略す）、４，６−ジハイドロオ
キシピラゾロ（３，４−ｄ）ピリミジン（通称アロキサ
ンチン：以下「ＡＸ」と略す）、４，６−ジメルカプト
ピラゾロ（３，４−ｄ）ピリミジン（以下「ＤＭＨＰ
Ｐ」と略す）は、プリン代謝に関してキサンチンオキシ
ダーゼ（Israel J.Chem., ６（５），７８７−９６，１
９６８：J.Biol.Chem., ２４５（１１），２８３７−４
４，１９７０）、キサンチンデヒドロゲナーゼ（Yokoha
ma Med.Bull., ２９（１−４），５３−８，１９７８）
およびトリプトフアンピロロラーゼ（Life Sci.,８（１
６），８４３−５１，１９６９）等の酵素活性を阻害す
る効果が見出されている。

【０００４】オルトミクソウイルス科に属するインフル
エンザウイルスは、流行性感冒とも呼ばれるインフルエ
ンザの病原体であって、急性の感染性呼吸器疾患を起こ
す。現在このウイルスに対する種々のタイプのワクチン
が開発されており、化学療法剤としてはアマンタジンが
知られている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】インフルエンザウイル
スは内部蛋白の抗原性の違いにより、Ａ，Ｂ，Ｃの３つ
の型に分類されるが流行性の高いものはＡ型である。Ａ
型はさらに、表面に存在するヘムアグルチニンとノイラ
ミニダーゼの抗原性に基づいて、亜型に分けられてい
る。１０から４０年毎に新しい亜型を持つウイルスが突
然出現し、世界を席捲する大流行を起こすことから、数
種のワクチンを用意しなければならない。しかもどのタ
イプが流行するかを事前に予知することは難しく、ウイ
ルスの変異速度は速く表面蛋白も時間とともに変わり、
さらに卵アレルギーの人にはワクチンが使用できないな
どの欠点があった。アマンタジンは強い中枢性の副作用
があるため患者の病歴を充分注意して投与する必要があ
り、さらにインフルエンザウイルスと正常細胞との融合
を抑制すると考えられているが、臨床上の有効性が非常
に低い等いくつかの欠点があった。

【０００６】本発明の目的は毒性の少ない抗インフルエ
ンザ剤を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、研究の結
果、ＡＰＰ、ＡＨＰＰ、ＡＭＰＰ、ＡＰ、ＡＸ、６ＭＨ
ＰＰ、４ＭＰＰ、４ＭＨＰＰ、ＤＭＨＰＰを含有する組
成物が抗インフルエンザ剤として有効であることを見出
し、本発明を完成するに至った。

【０００８】したがって、本発明は、一般式（Ｉ）

【０００９】

【化２】

【００１０】（式中、Ｒ₁ はアミノ基、水酸基又はメル
カプト基であり、またＲ₂ は水素原子、水酸基又はメル
カプト基である）

【００１１】で表わされる化合物の１種または２種以上
を有効成分として含有して成る抗インフルエンザ剤であ
る。

【００１２】ＡＨＰＰの化学合成は３−アミノ−４−シ
アノピラゾールと尿素との反応により、ＡＰは３−アミ
ノ−４−ピラゾロカルボキサミドとホルムアミドとの反
応により、４ＭＨＰＰはＡＸと五硫化リンとの反応によ
り、６ＭＨＰＰは３−アミノ−４−ピラゾロカルボキサ
ミドとチオ尿素との反応により、ＤＭＨＰＰは、３−ア
ミノ−４−シアノピラゾールと二硫化炭素との反応によ
り、ＡＸは３−アミノ−４−ピラゾロカルボキサミドと
尿素との反応によりそれぞれ行なうことができる（J. A
m. Chem. Soc.,７８．Feb.２０，７８４−７９０，１９
５６）。

【００１３】本発明の抗インフルエンザ剤は、その有効
且つ低毒性量を含有する組成物の形で用いることが出来
る。本発明の抗インフルエンザ剤は経口投与製剤、注射
用薬剤またはエアゾール噴霧剤等の形で用いることが出
来る。

【００１４】経口投与製剤の形態としては、例えば、錠
剤、顆粒剤、丸剤、シロップ剤、トローチ剤、ドロップ
剤など任意である。これらは、通常の製剤法に準じて、
賦形剤、安定剤、保存剤、緩衝剤などの添加剤を加えて
製造することができる。

【００１５】経口投与製剤として用いられる場合、患者
の年齢、体重、疾患の程度により異なるが、成人一人当
り、１００〜９０００ｍｇを１日数回に分けて適用する
のが好ましい。

【００１６】注射剤の場合、皮下注、筋肉内注、静脈内
注のいずれでもよい。注射剤の製造は、常法に従って行
うことができる。注射剤において、本発明の薬剤の含有
量について特に制限はないが、薬剤含有量が０．００１
〜０．０１％（ｗ／ｗ）となるのが好ましい。

【００１７】本発明の薬剤を例えば凍結乾燥粉末として
アンプルまたはバイアルに密閉し、他方、溶解液用のア
ンプルまたはバイアルを用意して、いわゆるキットとな
し、両者を用時に一体となして注射剤とすることもでき
る。

【００１８】エアゾール噴霧剤は、常法に従い、適当な
プロペラントを用いて製造することができる。

【００１９】

【発明の効果】本発明の抗インフルエンザ剤は、流行性
の最も高いＡ型インフルエンザウイルスに対して効果を
示し、毒性の少ない医薬品とすることができる。

【００２０】

【実施例】次に製造例、実施例、実験例及び参考例を挙
げて本発明を更に具体的に説明する。ただし、本発明は
これらのみに限定されるものではない。文中、百分率は
重量％を表わす。

【００２１】製造例１〔ＡＨＰＰの合成〕 ３．４ｇの８５％ヒドラジンハイドレイトに、２．５ｇ
のエトオキシメチレンマロノニトリルを少量ずつ加え
た。反応液を冷水で冷した後、さらに、２．５ｇのエト
オキシメチレンマロノニトリルを少量ずつ加えた。９０
〜１００℃で１時間加熱し、固体の反応生成物を得た。
水３．３ｍｌを加え、４℃で１２時間放置後、濾過し、
次いで水１．５ｍｌで洗浄し黄褐色の固形物（乾燥重量
３．０ｇ）を得た。得られた固形物を水６．０ｍｌを用
いて再結晶し、２．５４ｇの３−アミノ−４−シアノピ
ラゾールを得た。

【００２２】ＵＶ（λｍａｘ）：ｐＨ７：２３０ｎｍ

【００２３】融点：１７５℃

【００２４】ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇ）：〔Ｍ−Ｈ〕^- １
０７

【００２５】１．０８ｇの３−アミノ−４−シアノピラ
ゾールと２．１６ｇの尿素とを混合し、２００℃で２０
分間加熱した。生じた固体に３３ｍｌの２Ｎ水酸化ナト
リウム溶液を加えて溶解し、活性炭を加え、９０〜１０
０℃で１０分間加熱後、活性炭を濾別した。濾液に氷酢
酸６ｍｌを加え、生じた沈澱を濾別して１．３２ｇの結
晶を得た。この結晶０．６ｇにホルムアマイド／ジメチ
ルホルムアミド（２／１容量／容量）混液の１５ｍｌを
加え、加熱、超音波処理後、遠心分離処理し、沈殿物を
さらにホルムアミドで洗浄後、アセトンで３回洗浄し、
０．６ｇのＡＨＰＰを得た。

【００２６】ＵＶ（λｍａｘ）：ｐＨ１１ ２７０ｎｍ
ｐＨ１ ２５０ｎｍ

【００２７】融点：３２０℃

【００２８】 元素分析： 炭 素 水 素 窒 素 理論値 ３９．８０ ３．３０ ４６．４０ 実測値 ３８．６０ ３．２７ ４４．７５ ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇ）：〔Ｍ−Ｈ〕^- １４９

【００２９】製造例２〔ＡＰの合成〕 前記製造例の前段階で製造した３−アミノ−４−シアノ
ピラゾールの５０ｇを微粉末となし、これを１７０ｍｌ
の濃硫酸中に、攪拌しながら、温度を４０℃以下に保っ
て加えた。混合物を、全体が均一な溶液になるまで、室
温中で攪拌した。この溶液を２５０ｇの氷を加えた５０
０ｍｌの冷水中に攪拌しながら加え、冷蔵庫中に一晩保
持した。生じた沈澱を濾別し、乾燥して固形物を得た。
得られた固形物３ｇを５０ｍｌの水に溶解し、アンモニ
ア水でｐＨを９に調整した。３日間放置後、濾過し、黄
褐色の３−アミノ−４−ピラゾロカルボキサミド１．１
ｇ（乾燥重量）を得た。

【００３０】ＵＶ（λｍａｘ）：ｐＨ１１ ２５２ｎｍ

【００３１】融点：１８８℃

【００３２】ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇ）：〔Ｍ−Ｈ〕^- １
２５

【００３３】２５ｇの３−アミノ−４−ピラゾロカルボ
キサミドと２００ｍｌのホルムアミドとを混合し、１９
０℃で４５分間加熱した。溶液を室温程度に冷却した
後、１リットルの冷水中に加え、生じた沈澱を濾別して
４８．０ｇのＡＰを得た。

【００３４】ＵＶ（λｍａｘ）：ｐＨ１１：２６１ｎ
ｍ；ｐＨ１：２５０ｎｍ

【００３５】 元素分析： 炭 素 水 素 窒 素 理論値 ３８．１０ ４．７６ ４４．４０ 実測値 ３８．４０ ４．５５ ４４．１０

【００３６】ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇ）：〔Ｍ−Ｈ〕^- １
３５

【００３７】

【実施例】

実施例１〔錠剤の製造〕 ＡＨＰＰ １００重量部 ラクトース ２３５重量部 澱粉 ５０重量部 ポリビニルピロリドン ５０重量部 ステアリン酸マグネシウム ５重量部

【００３８】本発明の薬剤、ラクトースおよび澱粉を混
合し、ポリビニルピロリドン水溶液で湿式粒状化した。
乾燥し、ふるいにかけた後に、粒状物をステアリン酸マ
グネシウムと混練圧縮し５００ｍｇ／錠の錠剤を得た。

【００３９】実施例２〔懸濁液シロップの製造〕 本発明の薬剤 ０．２５ｇ ソルビトール １．５ｇ グリセロール ０．００５ｇ 分散性セルロース ０．００５ｇ 安息香酸ナトリウム ０．０１０ｍｌ 水 ５リットル

【００４０】ソルビトールとグリセロールとを水３リッ
トルに加え混合した。安息香酸ナトリウムを水に溶解
し、前記の水溶液に加えた。次いでセルロースと本発明
の薬剤とを水溶液に加えて分散させ、容量を調整した。

【００４１】〔実験例〕〔本発明の薬剤の毒性〕 実験例１〔培養細胞に対する細胞毒性〕 １０％ウシ胎児血清と１．６％グルコースとを含むイー
グルＭＥＭ培地で増殖させたヒーラ細胞を２４穴マルチ
トレイ中で２４〜４８時間培養し、単一層を形成させた
後、２４穴のマルチトレイそれぞれに、１μｇ／ｍｌ〜
１ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した本発明の薬剤を含む０．
７％メチルセルロース入りの維持培地（２％ウシ胎児血
清、１．６％グルコース、４倍濃度グルタミンを含むイ
ーグルＭＥＭ培地）を加えて培養を行った。培養４日目
に前記維持培地を抜き、０．２％ニュートラルレッド入
りの維持液を加えて３７℃で１時間保温した後、ニュー
トラルレッド入りの維持液を抜いて５％のホルマリン入
りリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）で３０分間固定した。各
濃度の本発明の薬剤を投与した群のトレイを観察した。
本発明の薬剤を全く加えない対照群の培養状態と本発明
の薬剤投与率とは全く同様の状態を示した。

【００４２】実験例２〔マウスに対する毒性〕 ３週齢の雄ｄｄＹマウスを一群４匹として、５％アラビ
アガム溶液中に懸濁させて本発明の薬剤を、１回投与容
量を２００μｌとして初日から４日間連続して経口投与
した。投与スケジュールは表１に示すように５％アラビ
アガム水溶液のみの投与群を対照群とし、本発明の薬剤
の投与量を１００ｍｇ／ｋｇ／日、２５０ｍｇ／ｋｇ／
日、５００ｍｇ／ｋｇ／日および１０００ｍｇ／ｋｇ／
日とした各群を設けた。マウスは投与初日と８日目の体
重を測定し、外形異常を観察した。結果を表１、表２及
び表３に示す。

【００４３】

【表１】

【００４４】

【表２】

【００４５】

【表３】

【００４６】この表１、表２及び表３から２５０ｍｇ／
ｋｇ／日以下の投与量では、体重減少や外形異常がなく
毒性は認められないことがわかる。投与量を１０００ｍ
ｇ／ｋｇ／日とした群では６日目までに２〜３匹が死亡
し、残り１〜２匹も体毛の逆立ちや震えが観察された。

【００４７】次に治療効果について述べる。

【００４８】本発明においては１９５７年にアジア風邪
と呼ばれて大流行したヒトにおけるＡ型で亜型がＨ₂ Ｎ
₂ のインフルエンザの起因のウイルス（Ａ／Kumamoto/
Ｙ５／６７（Ｈ₂ Ｎ₂ ）型）と同一亜型であるウイルス
をマウスに馴化したものを用いた。インフルエンザは通
常１週間以内の経過で治癒する予後の良い疾患である
が、慢性疾患の患者や高齢者等のうちハイリスク群では
しばしば重篤な肺炎に進展し、死亡の原因になる。本発
明においては、前記Ａ型インフルエンザウイルスをヒト
に自然感染した場合と同様にネブライザーにて鼻や気管
等の上気道粘膜に感染させ、本発明の薬剤を経口投与す
ることにより治療効果を判定した。

【００４９】実験例３〔インフルエンザ感染マウスに対
する治療効果〕 ５週齢の雄ｄｄＹマウス（体重３０〜３４ｇ）を一群１
０匹として前記Ａ型インフルエンザウイルスのＬＤ₅₀の
２倍量をネブライザーにて感染させた。感染後、４，
５，６日目に０．２％カルボキシメチルセルロース溶液
中に懸濁させた本発明の薬剤を、１回投与容量を２００
μｌとして経口投与した。投与群は０．２％カルボキシ
ルメチルセルロース溶液だけの投与の場合を比較対照群
とし、他方本発明の薬剤の１００ｍｇ／ｋｇ溶解群を本
発明群とした。

【００５０】本発明の薬剤による治療効果は、マウスの
感染初日から２０日間までの生死の観察により判定し
た。結果を表４に示す。

【００５１】

【表４】

【００５２】この系で、比較対照群は１２日目で１００
％死亡したのに対して、本発明群の１００ｍｇ／ｋｇ／
日投与した場合では５０％生存しており１１，１２日目
では本発明群に有意な治療効果が見られた。

【００５３】同様な実験を行い、本発明の薬剤がマウス
に対して毒性を示さない２５０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量
以下で、インフルエンザに対する治療効果が確認され
た。

【００５４】〔参考例〕本発明の薬剤の経口投与後の血清中の本発明の薬剤の濃
度の測定 本発明の薬剤の生体内での代謝を観るために、絶食等の
処置を特にしていない８週齢の雄ｄｄＹマウス（体重２
５ｇ）に０．２％カルボキシメチルセルロース溶液１ｍ
ｌ当り２５ｍｇの本発明の薬剤を懸濁させた試験液の２
００μｌを経口投与した。本投与量はマウス当り５ｍｇ
で２００ｍｇ／ｋｇに相当する。

【００５５】投与後、１，３，６，１２および２４時間
後に頸動脈より抗凝固剤を使わずに採血した。血液が血
餅化（クロッティング）後、４℃において２，０００ｒ
ｐｍで５分間遠心分離処理して血漿を得た。血漿を１
０，０００ｒｐｍで１分間遠心分離処理し、得られた上
澄液２４０μｌに対して５０％トリクロロ酢酸６０μｌ
を加えて振動し、さらに１３，０００ｒｐｍで１分間遠
心分離処理した。この上澄液２００μｌに１Ｎ水酸化ナ
トリウム溶液１６２μｌと精製水３８μｌを加えてから
濾紙で濾過した濾液を本発明の薬剤の定量用試料とし
た。

【００５６】本発明の薬剤の定量は核酸測定用（Asahip
ak ＧＳ−３２０Ｈ）のカラムを装着したＨＰＬＣにて
行った。溶離液はDulbecco'sのリン酸緩衝液よりナトリ
ウム、カルシウムおよびマグネシウムを除いたものを１
ｍｇ／分の流速で流しＵＶの２５０ｎｍで検出した。本
条件下では本発明の薬剤の相対保持時間は２６．１〜２
６．３分であった。

【００５７】各３匹のマウスについて、各時間毎におけ
る濃度をプロットし、その平均値を求め、その結果を総
括して表５に示す。

【００５８】

【表５】

【００５９】この表から、経口投与された本発明の薬剤
は、１時間後、血漿に取り込まれ、以後すみやかに代謝
されていることが判る。

【化３】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】 （式中、Ｒ₁ はアミノ基、水酸基又はメルカプト基であ
   り、またＲ₂ は水素原子、水酸基又はメルカプト基であ
   る）で表わされる化合物の１種または２種以上を有効成
   分として含有して成る抗インフルエンザ剤。