JPH05194265A - 組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 - Google Patents
組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物Info
- Publication number
- JPH05194265A JPH05194265A JP4286908A JP28690892A JPH05194265A JP H05194265 A JPH05194265 A JP H05194265A JP 4286908 A JP4286908 A JP 4286908A JP 28690892 A JP28690892 A JP 28690892A JP H05194265 A JPH05194265 A JP H05194265A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- modified
- plasminogen activator
- sucrose
- tissue plasminogen
- citric acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 クエン酸またはその塩及びショ糖を含有する
ことを特徴とする組織プラスミノーゲン活性化因子もし
くは改変型組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成
物。 【効果】 組織プラスミノーゲン活性化因子および改変
型組織プラスミノーゲン活性化因子が著しく安定化さ
れ，臨床上使用しうるこれらの製剤として有用である。
ことを特徴とする組織プラスミノーゲン活性化因子もし
くは改変型組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成
物。 【効果】 組織プラスミノーゲン活性化因子および改変
型組織プラスミノーゲン活性化因子が著しく安定化さ
れ，臨床上使用しうるこれらの製剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は，組織プラスミノーゲン
活性化因子（以下ｔ−ＰＡと略称する）または改変型組
織プラスミノーゲン活性化因子（以下改変型ｔ−ＰＡと
略称する）を含有する組成物に関する。更に詳しくは，
ｔ−ＰＡまたは改変型ｔ−ＰＡにクエン酸またはその塩
及びショ糖を添加してなることを特徴とする，溶解性及
び安定性の高められた組成物に関する。
活性化因子（以下ｔ−ＰＡと略称する）または改変型組
織プラスミノーゲン活性化因子（以下改変型ｔ−ＰＡと
略称する）を含有する組成物に関する。更に詳しくは，
ｔ−ＰＡまたは改変型ｔ−ＰＡにクエン酸またはその塩
及びショ糖を添加してなることを特徴とする，溶解性及
び安定性の高められた組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】ｔ−ＰＡは，フィブリン親和性を有し，
フィブリンと結合したプラスミノーゲンを活性化し極め
て効率的に血栓を溶解するので，ストレプトキナーゼや
ウロキナーゼに代わる，出血傾向などの副作用の少い血
栓溶解剤として注目されている。更に近年このｔ−ＰＡ
の構造を遺伝子工学的手法を用いて改変した改変型ｔ−
ＰＡの研究も盛んに行われており，ｔ−ＰＡに比べｉｎ
ｖｉｖｏにおける血中半減期が延長されることにより
生物学的活性の高められた，優れた改変型分子が見い出
されている。
フィブリンと結合したプラスミノーゲンを活性化し極め
て効率的に血栓を溶解するので，ストレプトキナーゼや
ウロキナーゼに代わる，出血傾向などの副作用の少い血
栓溶解剤として注目されている。更に近年このｔ−ＰＡ
の構造を遺伝子工学的手法を用いて改変した改変型ｔ−
ＰＡの研究も盛んに行われており，ｔ−ＰＡに比べｉｎ
ｖｉｖｏにおける血中半減期が延長されることにより
生物学的活性の高められた，優れた改変型分子が見い出
されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ｔ−ＰＡ及び改変型ｔ
−ＰＡはいずれも水に対して難溶な糖タンパク質であ
り，この性質が，水に溶解して投与する注射剤等として
の製剤化を極めて困難なものにしている。また糖タンパ
ク質は一般に熱に対して不安定であり，ｔ−ＰＡ及び改
変型ｔ−ＰＡもまた例外ではない。このような物質を医
薬品として開発するためには安定化の技術が不可欠であ
る。ｔ−ＰＡおよび改変型ｔ−ＰＡの可溶化，安定化に
関しては種々の検討がなされている。例えば，特開昭６
２−１６４６３２では，アルギニウムイオン含有バッフ
ァーを含み，塩素イオン濃度が約０．３Ｍ以下であるｔ
−ＰＡ医薬組成物が開示されている。特開昭５８−６５
２１８ではアルブミンを含有するｔ−ＰＡの安定化方法
が開示されている。
−ＰＡはいずれも水に対して難溶な糖タンパク質であ
り，この性質が，水に溶解して投与する注射剤等として
の製剤化を極めて困難なものにしている。また糖タンパ
ク質は一般に熱に対して不安定であり，ｔ−ＰＡ及び改
変型ｔ−ＰＡもまた例外ではない。このような物質を医
薬品として開発するためには安定化の技術が不可欠であ
る。ｔ−ＰＡおよび改変型ｔ−ＰＡの可溶化，安定化に
関しては種々の検討がなされている。例えば，特開昭６
２−１６４６３２では，アルギニウムイオン含有バッフ
ァーを含み，塩素イオン濃度が約０．３Ｍ以下であるｔ
−ＰＡ医薬組成物が開示されている。特開昭５８−６５
２１８ではアルブミンを含有するｔ−ＰＡの安定化方法
が開示されている。
【０００４】また，特表平４−５０３６８０では少なく
とも０．２Ｍのクエン酸，アスコルビン酸，２−オキソ
グルタル酸，フマール酸，トリス，ＥＤＴＡの群から選
択される物質を含有することによるｔ−ＰＡ及び改変型
ｔ−ＰＡの可溶化方法が記載されている。しかし，これ
らの種々の組成物は，すべての改変型ｔ−ＰＡを可溶化
し，かつ安定化するのに適しているとはいえない。ま
た，改変型ｔ−ＰＡの中には，天然型ｔ−ＰＡの安定化
効果のある製剤処方でも，天然型ｔ−ＰＡほどは安定化
されないものがあり，これらを安定化しかつ可溶化する
製剤処方が望まれている。さらに，注射剤として用いる
ことが可能な浸透圧比であり，凍結乾燥品としても用い
ることができる処方が望まれている。本発明の目的は，
溶解性の低い糖タンパク質であるｔ−ＰＡ及び改変型ｔ
−ＰＡ組成物を医薬品として使用しえる濃度の溶液と
し，かつこれらの物質の安定化された医薬品製剤を提供
することにある。
とも０．２Ｍのクエン酸，アスコルビン酸，２−オキソ
グルタル酸，フマール酸，トリス，ＥＤＴＡの群から選
択される物質を含有することによるｔ−ＰＡ及び改変型
ｔ−ＰＡの可溶化方法が記載されている。しかし，これ
らの種々の組成物は，すべての改変型ｔ−ＰＡを可溶化
し，かつ安定化するのに適しているとはいえない。ま
た，改変型ｔ−ＰＡの中には，天然型ｔ−ＰＡの安定化
効果のある製剤処方でも，天然型ｔ−ＰＡほどは安定化
されないものがあり，これらを安定化しかつ可溶化する
製剤処方が望まれている。さらに，注射剤として用いる
ことが可能な浸透圧比であり，凍結乾燥品としても用い
ることができる処方が望まれている。本発明の目的は，
溶解性の低い糖タンパク質であるｔ−ＰＡ及び改変型ｔ
−ＰＡ組成物を医薬品として使用しえる濃度の溶液と
し，かつこれらの物質の安定化された医薬品製剤を提供
することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは，ｔ−ＰＡ
ならびに改変型ｔ−ＰＡについて，これらの物質を安定
に保つ中性ｐＨの領域で溶解度を高める可溶化剤の検討
を行った。その結果，クエン酸塩がｔ−ＰＡ及び改変型
ｔ−ＰＡの溶解度を高める作用を有することが明らかと
なった。しかしながらこの溶液を凍結し，−８０℃で保
存した後融解したところ，繊維状の不溶物が生じた。こ
の現象を凍結時塩の濃度が上昇することによる部分的な
変性によるものではないかと考え，凍結保護剤として糖
類を添加し凍結保存した。その結果，ショ糖，乳糖など
の糖類を添加した溶液では凍結融解を繰り返しても不溶
物を生じず，また力価の低下も見られなかった。
ならびに改変型ｔ−ＰＡについて，これらの物質を安定
に保つ中性ｐＨの領域で溶解度を高める可溶化剤の検討
を行った。その結果，クエン酸塩がｔ−ＰＡ及び改変型
ｔ−ＰＡの溶解度を高める作用を有することが明らかと
なった。しかしながらこの溶液を凍結し，−８０℃で保
存した後融解したところ，繊維状の不溶物が生じた。こ
の現象を凍結時塩の濃度が上昇することによる部分的な
変性によるものではないかと考え，凍結保護剤として糖
類を添加し凍結保存した。その結果，ショ糖，乳糖など
の糖類を添加した溶液では凍結融解を繰り返しても不溶
物を生じず，また力価の低下も見られなかった。
【０００６】次にｔ−ＰＡならびに改変型ｔ−ＰＡの凍
結乾燥品の安定化について，糖類，タンパク質を中心に
様々な物質を用い検討を行った。その結果，先に凍結保
護剤として効果を明らかにしたショ糖が凍結乾燥品とし
た場合にもこれらのｔ−ＰＡ類を著しく安定化すること
を見出した。さらに意外なことには，ｔ−ＰＡの安定化
剤として知られているアルブミンを添加すると可溶化効
果が下がるにもかかわらず，クエン酸塩による可溶化効
果は安定化剤であるショ糖の添加により高められている
ことが示され，この組合せの一層の有用性が明らかとな
り，こうして本発明を完成させるに至った。以下に，本
発明の組成物につき詳述する。
結乾燥品の安定化について，糖類，タンパク質を中心に
様々な物質を用い検討を行った。その結果，先に凍結保
護剤として効果を明らかにしたショ糖が凍結乾燥品とし
た場合にもこれらのｔ−ＰＡ類を著しく安定化すること
を見出した。さらに意外なことには，ｔ−ＰＡの安定化
剤として知られているアルブミンを添加すると可溶化効
果が下がるにもかかわらず，クエン酸塩による可溶化効
果は安定化剤であるショ糖の添加により高められている
ことが示され，この組合せの一層の有用性が明らかとな
り，こうして本発明を完成させるに至った。以下に，本
発明の組成物につき詳述する。
【０００７】本発明に於てｔ−ＰＡとは，ヒト由来の天
然型ｔ−ＰＡの他，遺伝子工学的手法により得られたｔ
−ＰＡをも含む。また改変型ｔ−ＰＡは，ｔ−ＰＡを改
良しあるいはｔ−ＰＡの有する生物学的活性などを高め
たものであって，本発明の安定化効果を達成するもので
あればいずれの改変型ｔ−ＰＡであってもよい。このよ
うな改変型ｔ−ＰＡとしては，本出願人の出願に係わる
特開平２−１６７０７６，特願平１−３１９４３８など
に示された改変型ｔ−ＰＡなどが挙げられるが，これら
に限定されるものではない。
然型ｔ−ＰＡの他，遺伝子工学的手法により得られたｔ
−ＰＡをも含む。また改変型ｔ−ＰＡは，ｔ−ＰＡを改
良しあるいはｔ−ＰＡの有する生物学的活性などを高め
たものであって，本発明の安定化効果を達成するもので
あればいずれの改変型ｔ−ＰＡであってもよい。このよ
うな改変型ｔ−ＰＡとしては，本出願人の出願に係わる
特開平２−１６７０７６，特願平１−３１９４３８など
に示された改変型ｔ−ＰＡなどが挙げられるが，これら
に限定されるものではない。
【０００８】すなわち，本発明の改変型ｔ−ＰＡには
ｔ−ＰＡのＦ領域及びＧ領域が欠落し，１８３位のＧｌ
ｙ，１８６位のＳｅｒがそれぞれＳｅｒ及びＴｈｒに置
換された改変型ｔ−ＰＡ，ｔ−ＰＡのＦ領域及びＧ領
域が欠落し，１１９位のＳｅｒがＭｅｔに置換された改
変型ｔ−ＰＡ，ｔ−ＰＡのＦ領域及びＧ領域及びＫ２
領域が欠落し，１１９位のＳｅｒがＭｅｔに置換された
改変型ｔ−ＰＡや，ｔ−ＰＡの８４位のＣｙｓがＳｅ
ｒに置換された改変型ｔ−ＰＡなども包含される。本発
明は天然型に比べ安定性が低い改変型ｔ−ＰＡに特に適
している。
ｔ−ＰＡのＦ領域及びＧ領域が欠落し，１８３位のＧｌ
ｙ，１８６位のＳｅｒがそれぞれＳｅｒ及びＴｈｒに置
換された改変型ｔ−ＰＡ，ｔ−ＰＡのＦ領域及びＧ領
域が欠落し，１１９位のＳｅｒがＭｅｔに置換された改
変型ｔ−ＰＡ，ｔ−ＰＡのＦ領域及びＧ領域及びＫ２
領域が欠落し，１１９位のＳｅｒがＭｅｔに置換された
改変型ｔ−ＰＡや，ｔ−ＰＡの８４位のＣｙｓがＳｅ
ｒに置換された改変型ｔ−ＰＡなども包含される。本発
明は天然型に比べ安定性が低い改変型ｔ−ＰＡに特に適
している。
【０００９】本発明の組成物は，ｔ−ＰＡまたは改変型
ｔ−ＰＡ，クエン酸またはその塩及びショ糖を配合する
ことにより調整され，通常滅菌下これを水（注射用水）
に溶解してｔ−ＰＡまたは改変型ｔ−ＰＡの液剤あるい
はこれをさらに凍結乾燥などの手段により乾燥して用時
溶解型製剤とする。ここに，ｔ−ＰＡまたは改変型ｔ−
ＰＡの濃度は少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ以上であ
り，一方クエン酸またはその塩の濃度は０．０５〜０．
４Ｍ，好ましくは０．０５〜０．２Ｍ，凍結乾燥品とす
る場合は好ましくは０．０５〜０．１５Ｍ，ショ糖の濃
度は溶液の場合には５〜１０％，凍結乾燥品とする場合
には約５％である。
ｔ−ＰＡ，クエン酸またはその塩及びショ糖を配合する
ことにより調整され，通常滅菌下これを水（注射用水）
に溶解してｔ−ＰＡまたは改変型ｔ−ＰＡの液剤あるい
はこれをさらに凍結乾燥などの手段により乾燥して用時
溶解型製剤とする。ここに，ｔ−ＰＡまたは改変型ｔ−
ＰＡの濃度は少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ以上であ
り，一方クエン酸またはその塩の濃度は０．０５〜０．
４Ｍ，好ましくは０．０５〜０．２Ｍ，凍結乾燥品とす
る場合は好ましくは０．０５〜０．１５Ｍ，ショ糖の濃
度は溶液の場合には５〜１０％，凍結乾燥品とする場合
には約５％である。
【００１０】本発明の組成物には，医薬製剤化において
通常使用される添加剤を随意配合することができる。ま
た，用時溶解型の製剤とするときは，溶解液に緩衝剤等
の添加剤を加えることも可能である。必要により添加さ
れる添加剤としては，塩化ナトリウム，塩化カリウム，
リン酸一水素ナトリウム，リン酸二水素ナトリウムなど
の無機塩類の電解質などで構成される等張化剤，ポリオ
キシエチレンソルビタンモノステアレートやポリオキシ
エチレンソルビタンモノパルミテートなどのポリオキシ
エチレンソルビタン脂肪酸エステル，ソルビタンモノス
テアレート，ソルビタンセスキオレートなどのソルビタ
ン脂肪酸エステル，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油，
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物などの
界面活性化剤，セルロース，メチルセルロース，エチル
セルロース，ヒドロキシメチルセルロース，ヒドロキシ
エチルセルロース，ヒドロキシプロピルセルロース，ヒ
ドロキシメチルエチルセルロースなどの賦形剤などが挙
げられる。
通常使用される添加剤を随意配合することができる。ま
た，用時溶解型の製剤とするときは，溶解液に緩衝剤等
の添加剤を加えることも可能である。必要により添加さ
れる添加剤としては，塩化ナトリウム，塩化カリウム，
リン酸一水素ナトリウム，リン酸二水素ナトリウムなど
の無機塩類の電解質などで構成される等張化剤，ポリオ
キシエチレンソルビタンモノステアレートやポリオキシ
エチレンソルビタンモノパルミテートなどのポリオキシ
エチレンソルビタン脂肪酸エステル，ソルビタンモノス
テアレート，ソルビタンセスキオレートなどのソルビタ
ン脂肪酸エステル，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油，
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物などの
界面活性化剤，セルロース，メチルセルロース，エチル
セルロース，ヒドロキシメチルセルロース，ヒドロキシ
エチルセルロース，ヒドロキシプロピルセルロース，ヒ
ドロキシメチルエチルセルロースなどの賦形剤などが挙
げられる。
【００１１】これらの添加剤は適宜選択され，同種のも
のが２種以上含まれていてもよい。また，本発明組成物
を用時溶解型製剤とするときは溶解液の方に可溶化剤な
どを加えたり，溶解液を緩衝液とすることもできる。ま
た，本発明組成物の浸透圧比は，静脈注射剤として用い
ることが可能な範囲である。
のが２種以上含まれていてもよい。また，本発明組成物
を用時溶解型製剤とするときは溶解液の方に可溶化剤な
どを加えたり，溶解液を緩衝液とすることもできる。ま
た，本発明組成物の浸透圧比は，静脈注射剤として用い
ることが可能な範囲である。
【００１２】
【実施例】次に，本発明の実施例をあげて本発明を具体
的に説明する。実施例及び実験例中，改変型ｔ−ＰＡ
は，Ｋ１領域を欠失し，２７５位のＡｒｇをＧｌｕに変
えたｔ−ＰＡ（特開平２−１６７０７６）を用いた。
的に説明する。実施例及び実験例中，改変型ｔ−ＰＡ
は，Ｋ１領域を欠失し，２７５位のＡｒｇをＧｌｕに変
えたｔ−ＰＡ（特開平２−１６７０７６）を用いた。
【００１３】実施例１ 改変型ｔ−ＰＡを１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む，１０
％ショ糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエ
ン酸ナトリウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調
製した。溶液は澄明であり，凍結融解後も澄明性，力価
（Ｃｌｏｔ Ｌｙｓｉｓ Ａｓｓａｙにより測定）を保
っていた。
％ショ糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエ
ン酸ナトリウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調
製した。溶液は澄明であり，凍結融解後も澄明性，力価
（Ｃｌｏｔ Ｌｙｓｉｓ Ａｓｓａｙにより測定）を保
っていた。
【００１４】実施例２ 改変型ｔ−ＰＡを１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む５％シ
ョ糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．０５，０．１
または０．２Ｍクエン酸ナトリウム水溶液（塩酸でｐＨ
７．２に調整）を調製した。いずれも凍結融解後も澄明
性，力価（Ｃｌｏｔ Ｌｙｓｉｓ Ａｓｓａｙにより測
定）を保っていた。
ョ糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．０５，０．１
または０．２Ｍクエン酸ナトリウム水溶液（塩酸でｐＨ
７．２に調整）を調製した。いずれも凍結融解後も澄明
性，力価（Ｃｌｏｔ Ｌｙｓｉｓ Ａｓｓａｙにより測
定）を保っていた。
【００１５】実施例３ 改変型ｔ−ＰＡを０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む，５％
ショ糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエン
酸ナトリウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調製
し，その液をガラス製バイアルに４ｍｌずつ分注した
後，共和真空技術社製の凍結乾燥機を用いて用時溶解型
の凍結乾燥品を製造した。得られた凍結乾燥品を注射用
水で再溶解したところ，澄明な液となり，力価も保たれ
ていた。
ショ糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエン
酸ナトリウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調製
し，その液をガラス製バイアルに４ｍｌずつ分注した
後，共和真空技術社製の凍結乾燥機を用いて用時溶解型
の凍結乾燥品を製造した。得られた凍結乾燥品を注射用
水で再溶解したところ，澄明な液となり，力価も保たれ
ていた。
【００１６】実施例４ 改変型ｔ−ＰＡを０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む，５％
ショ糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．０５Ｍクエ
ン酸ナトリウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調
製し，実施例３と同様に凍結乾燥品を製造した。得られ
た凍結乾燥品を注射用水で再溶解したところ，澄明な液
となり，力価も保たれていた。
ショ糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．０５Ｍクエ
ン酸ナトリウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調
製し，実施例３と同様に凍結乾燥品を製造した。得られ
た凍結乾燥品を注射用水で再溶解したところ，澄明な液
となり，力価も保たれていた。
【００１７】実施例５ ｔ−ＰＡを０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む，１０％ショ
糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエン酸ナ
トリウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調製し
た。溶液は澄明であり，凍結融解後も澄明性，力価（Ｃ
ｌｏｔ Ｌｙｓｉｓ Ａｓｓａｙにより測定）を保って
いた。
糖及び０．０１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエン酸ナ
トリウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調製し
た。溶液は澄明であり，凍結融解後も澄明性，力価（Ｃ
ｌｏｔ Ｌｙｓｉｓ Ａｓｓａｙにより測定）を保って
いた。
【００１８】実施例６ ｔ−ＰＡを０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む，５％ショ糖
及び０．０１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエン酸ナト
リウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調製した。
溶液は澄明であり，凍結融解後も澄明性，力価（Ｃｌｏ
ｔ ＬｙｓｉｓＡｓｓａｙ により測定）を保ってい
た。
及び０．０１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエン酸ナト
リウム水溶液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調製した。
溶液は澄明であり，凍結融解後も澄明性，力価（Ｃｌｏ
ｔ ＬｙｓｉｓＡｓｓａｙ により測定）を保ってい
た。
【００１９】
【発明の効果】ｔ−ＰＡまたは改変型ｔ−ＰＡ含有組成
物において，可溶化及び安定化を達成するためにクエン
酸またはその塩及びショ糖を使用することにより前記の
問題を解決し，高い安定性を備えた組成物の作製が可能
であることを見出した。本発明による組成物は改変型ｔ
−ＰＡの臨床上使用しうる製剤として有用である。本発
明組成物による改変型ｔ−ＰＡの安定性の向上は以下の
試験法によって確認されたものである。
物において，可溶化及び安定化を達成するためにクエン
酸またはその塩及びショ糖を使用することにより前記の
問題を解決し，高い安定性を備えた組成物の作製が可能
であることを見出した。本発明による組成物は改変型ｔ
−ＰＡの臨床上使用しうる製剤として有用である。本発
明組成物による改変型ｔ−ＰＡの安定性の向上は以下の
試験法によって確認されたものである。
【００２０】実験例１ 改変型ｔ−ＰＡ溶液に０．１Ｍクエン酸ナトリウム，
０．１Ｍコハク酸ナトリウム０．１Ｍ塩化マグネシウ
ム，０．１Ｍトリス，０．１Ｍクレアチニンまたは０．
１Ｍサルチル酸ナトリウムを添加，各種溶液について，
遠心分離，濾過を行い，上清を採取してタンパク質濃度
を測定した。その結果クエン酸ナトリウムの溶液中の改
変型ｔ−ＰＡの溶解度が他の塩溶液に比べて高いことが
明らかとなった（表１）。
０．１Ｍコハク酸ナトリウム０．１Ｍ塩化マグネシウ
ム，０．１Ｍトリス，０．１Ｍクレアチニンまたは０．
１Ｍサルチル酸ナトリウムを添加，各種溶液について，
遠心分離，濾過を行い，上清を採取してタンパク質濃度
を測定した。その結果クエン酸ナトリウムの溶液中の改
変型ｔ−ＰＡの溶解度が他の塩溶液に比べて高いことが
明らかとなった（表１）。
【００２１】
【表１】 各種溶液中の改変型ｔ−ＰＡの溶解度 添加剤 改変型ｔ−ＰＡ溶解度 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ０．１Ｍクエン酸ナトリウム １ ｍｇ／ｍｌ以上 ０．１Ｍコハク酸ナトリウム ０．５８ｍｇ／ｍｌ ０．１Ｍ塩化マグネシウム ０．５０ｍｇ／ｍｌ ０．１Ｍトリス ０．２０ｍｇ／ｍｌ ０．１Ｍクレアチニン ０．２４ｍｇ／ｍｌ ０．１Ｍサリチル酸ナトリウム 測定不能
【００２２】実験例２ 改変型ｔ−ＰＡを１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む０．０
１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエン酸ナトリウム水溶
液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調製し，また，これに
添加剤（５％ショ糖，５％乳糖または０．５ＭＫＣｌ）
を添加した４種の溶液を調製した。これらの溶液を凍結
し−８０℃で保存後融解したところ，０．５ＭＫＣｌを
添加した溶液及び添加剤無添加の溶液では，繊維状の不
溶物が生じたが，ショ糖または乳糖を添加した溶液は澄
明に保たれていた（表２）。
１％ツィーン８０含有０．１Ｍクエン酸ナトリウム水溶
液（塩酸でｐＨ７．２に調整）を調製し，また，これに
添加剤（５％ショ糖，５％乳糖または０．５ＭＫＣｌ）
を添加した４種の溶液を調製した。これらの溶液を凍結
し−８０℃で保存後融解したところ，０．５ＭＫＣｌを
添加した溶液及び添加剤無添加の溶液では，繊維状の不
溶物が生じたが，ショ糖または乳糖を添加した溶液は澄
明に保たれていた（表２）。
【００２３】
【表２】 改変型ｔ−ＰＡのクエン酸ナトリウム溶液における添加剤の効果 添加剤 繊維状不溶物の発生 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ５％ ショ糖 − ５％ 乳糖 − ０．５Ｍ ＫＣｌ ＋＋ 無添加 ＋
【００２４】実験例３ ｔ−ＰＡ及び改変型ｔ−ＰＡをとり調製した各種濃度の
クエン酸ナトリウムの溶液について，遠心分離，濾過を
行い上清を採取してタンパク質濃度を測定した。 各種溶液の組成 改変型ｔ−ＰＡ クエン酸ナトリウム ０．０５，０．１，０．２，０．３Ｍ 塩酸 ｐＨ ｔｏ ７．２ Ｔｗｅｅｎ８０ ０．０１％
クエン酸ナトリウムの溶液について，遠心分離，濾過を
行い上清を採取してタンパク質濃度を測定した。 各種溶液の組成 改変型ｔ−ＰＡ クエン酸ナトリウム ０．０５，０．１，０．２，０．３Ｍ 塩酸 ｐＨ ｔｏ ７．２ Ｔｗｅｅｎ８０ ０．０１％
【００２５】その結果，クエン酸塩は０．０５〜０．３
Ｍの範囲内でｔ−ＰＡ及び改変型ｔ−ＰＡの溶解度を高
める作用を有していることが判明した。
Ｍの範囲内でｔ−ＰＡ及び改変型ｔ−ＰＡの溶解度を高
める作用を有していることが判明した。
【００２６】次いで改変型ｔ−ＰＡをとり調整した下記
処方の溶液について，遠心分離，濾過を行い上清を採取
してタンパク質濃度を測定した。 各種溶液の組成 改変型ｔ−ＰＡ クエン酸ナトリウム ０，０．０５，０．１，０．２，０．３Ｍ ショ糖 ０，５，１０％ 塩酸 ｐＨ ｔｏ ７．２ Ｔｗｅｅｎ８０ ０．０１％
処方の溶液について，遠心分離，濾過を行い上清を採取
してタンパク質濃度を測定した。 各種溶液の組成 改変型ｔ−ＰＡ クエン酸ナトリウム ０，０．０５，０．１，０．２，０．３Ｍ ショ糖 ０，５，１０％ 塩酸 ｐＨ ｔｏ ７．２ Ｔｗｅｅｎ８０ ０．０１％
【００２７】その結果，クエン酸塩は０．０５〜０．３
Ｍの範囲内でｔ−ＰＡ及び改変型ｔ−ＰＡの溶解度を高
める作用を有していることが判明した。またショ糖はク
エン酸塩の改変型ｔ−ＰＡに対する可溶化効果を濃度依
存的に高める作用を有していることが判明した。但しシ
ョ糖単独では可溶化効果は示さなかった（図１）。
Ｍの範囲内でｔ−ＰＡ及び改変型ｔ−ＰＡの溶解度を高
める作用を有していることが判明した。またショ糖はク
エン酸塩の改変型ｔ−ＰＡに対する可溶化効果を濃度依
存的に高める作用を有していることが判明した。但しシ
ョ糖単独では可溶化効果は示さなかった（図１）。
【００２８】実験例４ 実施例３及び下記比較例の凍結乾燥品について種々の温
度条件に放置し，安定性を調べた。
度条件に放置し，安定性を調べた。
【００２９】実施例３ 改変型ｔ−ＰＡ ０．５ ｍｇ／ｍｌ クエン酸ナトリウム ０．１ Ｍ ショ糖 ５ ％ ツィーン８０ ０．０１％ 塩酸 ｐＨ ｔｏ ７．２ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ４ｍｌ／Ｖｉａｌ
【００３０】比較例１ 改変型ｔ−ＰＡ ０．５ ｍｇ／ｍｌ クエン酸ナトリウム ０．１ Ｍ 乳糖 ５ ％ ツィーン８０ ０．０１ ％ 塩酸 ｐＨ ｔｏ ７．２ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ４ｍｌ／Ｖｉａｌ
【００３１】比較例２ 改変型ｔ−ＰＡ ０．５ ｍｇ／ｍｌ クエン酸ナトリウム ０．１ Ｍ マルトース ５ ％ ツィーン８０ ０．０１ ％ 塩酸 ｐＨ ｔｏ ７．２ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ４ｍｌ／Ｖｉａｌ
【００３２】比較例３ 改変型ｔ−ＰＡ ０．５ ｍｇ／ｍｌ リン酸Ｎａ塩／２Ｎａ塩 ０．１ Ｍ（ｐＨ ７．２） 塩化ナトリウム ０．９ ％ グリシン １ ％ ツィーン８０ ０．０１ ％ −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− ４ｍｌ／Ｖｉａｌ
【００３３】
【表３】 改変型ｔ−ＰＡ 製剤の安定性 １． 改変型ｔ−ＰＡ ショ糖含有製剤（実施例３） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 放置条件 外観 溶状 力価残存率（％） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− Initial 白色 無色澄明の液 - −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 25°,3M 白色 無色澄明の液 100 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 40°,1M 白色 無色澄明の液 92 3M 白色 無色澄明の液 96 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 50°,1M 白色 無色澄明の液 95 3M 白色 無色澄明の液 92 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− （注：表中，Ｍは月を意味する。以下同様。）
【００３４】 ２． 改変型ｔ−ＰＡ 乳糖含有製剤（比較例１） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 放置条件 外観 溶状 力価残存率（％） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− Initial 白色 無色澄明の液 − −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 25°,3M 白色 無色澄明の液 97 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 40°,1M 白色 無色澄明の液 95 3M 白色 無色澄明の液 76 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 50°,1M 白色 無色澄明の液 87 3M 白色 無色澄明の液 64 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【００３５】 ３． 改変型ｔ−ＰＡ マルトース含有製剤（比較例２） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 放置条件 外観 溶状 力価残存率（％） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− Initial 白色 無色澄明の液 − −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 25°,3M 白色 無色澄明の液 90 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 40°,1M 白色 無色澄明の液 84 3M 白色 無色澄明の液 82 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 50°,1M 白色 無色澄明の液 76 3M 白色 無色澄明の液 72 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【００３６】 ４． 改変型ｔ−ＰＡ グリシン含有製剤（比較例３） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 放置条件 外観 溶状 力価残存率（％） −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− Initial 白色 無色澄明の液 - −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 40°,1M 白色 白濁した液 56 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 50°,1M 白色 白濁した液 35 −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【００３７】この実験例に示されるように，改変型ｔ−
ＰＡにショ糖を添加し凍結乾燥することにより安定性の
高い製剤を作製することが可能であった。その高い安定
性は，安定化剤として乳糖，マルトース，グリシンを用
いた比較例との比較より明らかである。
ＰＡにショ糖を添加し凍結乾燥することにより安定性の
高い製剤を作製することが可能であった。その高い安定
性は，安定化剤として乳糖，マルトース，グリシンを用
いた比較例との比較より明らかである。
【図１】図１はクエン酸ナトリウム及びショ糖を添加し
た際の改変型ｔ−ＰＡの溶解度の変化を示す。
た際の改変型ｔ−ＰＡの溶解度の変化を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 斉藤 勝実 静岡県焼津市三ヶ名368−２ 山之内製薬 株式会社するが寮 (72)発明者 中村 勝利 静岡県焼津市三ヶ名368−２ 山之内製薬 株式会社するが寮 (72)発明者 下川 誠太郎 静岡県焼津市三ヶ名368−２ 山之内製薬 株式会社するが寮
Claims (6)
- 【請求項１】 クエン酸またはその塩及びショ糖を含有
することを特徴とする組織プラスミノーゲン活性化因子
または改変型組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成
物。 - 【請求項２】 ０．０５〜０．２Ｍのクエン酸またはそ
の塩及び５〜１０％のショ糖を含有する組織プラスミノ
ーゲン活性化因子または改変型組織プラスミノーゲン活
性化因子含有組成物。 - 【請求項３】 ０．０５〜０．１５Ｍのクエン酸または
その塩及び５％のショ糖を含有する組織プラスミノーゲ
ン活性化因子または改変型組織プラスミノーゲン活性化
因子含有組成物の凍結乾燥品。 - 【請求項４】 請求項１記載の組成物で，改変型組織プ
ラスミノーゲン活性化因子がＫ１領域を欠失し，２７５
位がＧｌｕである組織プラスミノーゲン活性化因子であ
るもの。 - 【請求項５】 請求項２記載の組成物で，改変型組織プ
ラスミノーゲン活性化因子がＫ１領域を欠失し，２７５
位がＧｌｕである組織プラスミノーゲン活性化因子であ
るもの。 - 【請求項６】 請求項３記載の凍結乾燥品で，改変型組
織プラスミノーゲン活性化因子がＫ１領域を欠失し，２
７５位がＧｌｕである組織プラスミノーゲン活性化因子
であるもの。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4286908A JP2971680B2 (ja) | 1991-10-02 | 1992-09-30 | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28205791 | 1991-10-02 | ||
| JP3-282057 | 1991-10-02 | ||
| JP4286908A JP2971680B2 (ja) | 1991-10-02 | 1992-09-30 | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05194265A true JPH05194265A (ja) | 1993-08-03 |
| JP2971680B2 JP2971680B2 (ja) | 1999-11-08 |
Family
ID=26554452
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4286908A Expired - Lifetime JP2971680B2 (ja) | 1991-10-02 | 1992-09-30 | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2971680B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0827751A3 (en) * | 1996-09-06 | 1999-02-03 | Juridical Foundation, The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Medicinal composition containing tissue plasminogen activator and nicotinamide |
| EP1623723A3 (en) * | 1998-05-22 | 2006-05-10 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Stable gene formulations |
| US7473681B2 (en) | 2000-10-31 | 2009-01-06 | Pharma Mar, S.A. | Kahalalide F |
-
1992
- 1992-09-30 JP JP4286908A patent/JP2971680B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0827751A3 (en) * | 1996-09-06 | 1999-02-03 | Juridical Foundation, The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Medicinal composition containing tissue plasminogen activator and nicotinamide |
| EP1623723A3 (en) * | 1998-05-22 | 2006-05-10 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Stable gene formulations |
| US7473681B2 (en) | 2000-10-31 | 2009-01-06 | Pharma Mar, S.A. | Kahalalide F |
| JP2010047601A (ja) * | 2000-10-31 | 2010-03-04 | Pharma Mar Sa | カハラリドｆ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2971680B2 (ja) | 1999-11-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4879104B2 (ja) | 高度に濃縮された、凍結乾燥された、および液体の、因子ｉｘ処方 | |
| RU2100032C1 (ru) | Фармацевтическая композиция, регулирующая гематопоэз | |
| US7803911B2 (en) | Dried blood factor composition comprising trehalose | |
| US7381796B2 (en) | Dried blood factor composition comprising trehalose | |
| US4908205A (en) | Stabilized human tissue plasminogen activator compositions | |
| JP5253501B2 (ja) | 安定化トロンビン組成物 | |
| JPH0672105B2 (ja) | 血栓溶解剤及びその製法 | |
| JPH08245418A (ja) | 安定なトランスグルタミナーゼ製剤およびそれらを製造する方法 | |
| CZ286682B6 (en) | Pharmaceutical preparation containing plasminogen activators and process for preparing thereof | |
| US4866088A (en) | Preparation process for an aqueous pharmaceutical solution of an active principle constituted by an organic acid | |
| JP2003507388A (ja) | 凍結乾燥したケーキの安定化 | |
| JPS638339A (ja) | 非経口投与用医薬組成物 | |
| JPH06321805A (ja) | トロンボモジュリン組成物およびその変性防止方法 | |
| JP2971680B2 (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 | |
| JP2708749B2 (ja) | 修飾型ｔＰＡ含有注射用組成物 | |
| US5366730A (en) | Stabilized compositions having human tissue type plasminogen activator enzymatic activity | |
| KR930008908B1 (ko) | 조직형 플라스미노겐 활성화제 또는 그의 유도체를 함유하는 혈전용해 조성물 | |
| JPH0597703A (ja) | 改変型組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 | |
| US7244824B2 (en) | Dried blood factor composition comprising trehalose | |
| JP4025394B2 (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子医薬組成物 | |
| JPS62123130A (ja) | 水溶性を増加したｔＰＡ含有医薬組成物 | |
| JPH0578259A (ja) | 改変型 ｔ−ＰＡ 含有組成物 | |
| JPH05967A (ja) | 組織プラスミノーゲンアクチベーター含有製剤組成物 | |
| JP2001081040A (ja) | 組織プラスミノーゲンアクティベーター含有組成物 | |
| JPS604718B2 (ja) | 安定なウロキナーゼ組成物およびその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080827 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080827 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090827 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090827 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100827 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110827 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110827 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120827 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120827 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120827 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130827 Year of fee payment: 14 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130827 Year of fee payment: 14 |