JPH05130898A - 全血サンプル中のフイブリノーゲンの定量 - Google Patents
全血サンプル中のフイブリノーゲンの定量Info
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- JPH05130898A JPH05130898A JP3169706A JP16970691A JPH05130898A JP H05130898 A JPH05130898 A JP H05130898A JP 3169706 A JP3169706 A JP 3169706A JP 16970691 A JP16970691 A JP 16970691A JP H05130898 A JPH05130898 A JP H05130898A
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
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- G01N15/042—Investigating sedimentation of particle suspensions by centrifuging and investigating centrifugates
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】遠心分離血液サンプル中のフィブリノーゲン含
量を迅速かつ正確に、可視的に測定する方法を提供す
る。 【構成】血漿フィブリノーゲン含量の定量がサンプリン
グチューブ２内に含まれる抗凝固処理全血のサンプルに
ついて行われる。チューブ２は透明な遠心分離チューブ
で、サンプル構成層を延長するフロート４を含有する。
血液サンプルをフロート含有チューブ内で遠心分離し、
様々な細胞成分の測定を行う。遠心分離されたサンプル
をついで加熱し、再び遠心分離して沈殿フィブリノーゲ
ンを生成させ、血漿層１６内のバフィーコートバンド１
４から離れたフロート４の頂部上に層を形成させる。次
に、フィブリノーゲンバンド１８の厚さを測定すると、
血液サンプルのフィブリノーゲン含量の定量が、予め検
量した装置によって可能となる。
量を迅速かつ正確に、可視的に測定する方法を提供す
る。 【構成】血漿フィブリノーゲン含量の定量がサンプリン
グチューブ２内に含まれる抗凝固処理全血のサンプルに
ついて行われる。チューブ２は透明な遠心分離チューブ
で、サンプル構成層を延長するフロート４を含有する。
血液サンプルをフロート含有チューブ内で遠心分離し、
様々な細胞成分の測定を行う。遠心分離されたサンプル
をついで加熱し、再び遠心分離して沈殿フィブリノーゲ
ンを生成させ、血漿層１６内のバフィーコートバンド１
４から離れたフロート４の頂部上に層を形成させる。次
に、フィブリノーゲンバンド１８の厚さを測定すると、
血液サンプルのフィブリノーゲン含量の定量が、予め検
量した装置によって可能となる。
Description
【０００１】本発明は、血液サンプル中の血液フィブリ
ノーゲン含量の定量操作に関する。さらに詳しくは、本
発明は、遠心分離血液サンプル中のフィブリノーゲン含
量を迅速かつ正確に、可視的に測定する操作に関する。
ノーゲン含量の定量操作に関する。さらに詳しくは、本
発明は、遠心分離血液サンプル中のフィブリノーゲン含
量を迅速かつ正確に、可視的に測定する操作に関する。
【０００２】フィブリノーゲンは、適切な血液凝固に必
要な、主要の血漿蛋白質である。血液中に存在するフィ
ブリノーゲン量は、血液が血餅を形成する能力に直接比
例する。血液中のフィブリノーゲンは、血餅形成時にフ
ィブリンに変形し、したがって、フィブリノーゲンの欠
乏は、不適切なフィブリン形成および不適切な血液凝固
を生じることになる。
要な、主要の血漿蛋白質である。血液中に存在するフィ
ブリノーゲン量は、血液が血餅を形成する能力に直接比
例する。血液中のフィブリノーゲンは、血餅形成時にフ
ィブリンに変形し、したがって、フィブリノーゲンの欠
乏は、不適切なフィブリン形成および不適切な血液凝固
を生じることになる。
【０００３】血漿中のフィブリノーゲンのレベルの不足
は、たとえば肝不全によるフィブリノーゲン産生低下に
より、または先天性低フィブリノーゲン血症によって生
じることがある。播種性血管内凝固のような病的現象で
も、血餅形成に利用できるフィブリノーゲンの消費が正
常時よりも著しく上昇する。当然ながら、過度の出血に
よってもフィブリノーゲンの欠乏が起こりうる。
は、たとえば肝不全によるフィブリノーゲン産生低下に
より、または先天性低フィブリノーゲン血症によって生
じることがある。播種性血管内凝固のような病的現象で
も、血餅形成に利用できるフィブリノーゲンの消費が正
常時よりも著しく上昇する。当然ながら、過度の出血に
よってもフィブリノーゲンの欠乏が起こりうる。
【０００４】血液中の過剰のフィブリノーゲンも、一般
的には炎症症状に関連した異常状態である。血中の高フ
ィブリノーゲン含量は、望ましくない血液凝固亢進状態
の素因を与える。フィブリノーゲンのレベルの有意な上
昇は妊婦にも認められる。
的には炎症症状に関連した異常状態である。血中の高フ
ィブリノーゲン含量は、望ましくない血液凝固亢進状態
の素因を与える。フィブリノーゲンのレベルの有意な上
昇は妊婦にも認められる。
【０００５】血中のフィブリノーゲン濃度の上昇は、心
脈管系疾患の危険因子であることも確定している。
脈管系疾患の危険因子であることも確定している。
【０００６】以上のことから、血中のフィブリノーゲン
レベルのモニタリングが患者の健常状態の判定に有用な
操作であることは明白であり、これは異常な身体状態の
予備的指標のための手段として使用できる。すなわち、
血中フィブリノーゲン含量の分析は、正常者の健康診断
または身体検査において、早期の警告指標として用いら
れる有用な操作である。
レベルのモニタリングが患者の健常状態の判定に有用な
操作であることは明白であり、これは異常な身体状態の
予備的指標のための手段として使用できる。すなわち、
血中フィブリノーゲン含量の分析は、正常者の健康診断
または身体検査において、早期の警告指標として用いら
れる有用な操作である。
【０００７】血漿フィブリノーゲンの定量的な測定には
いくつかの方法がある。現在使用されている方法は、血
漿が赤血球から完全に分離されていることを要求し、し
かも次に、分離された血漿中でフィブリノーゲンをフィ
ブリンに変換することが必要である。ついで、フィブリ
ンは、重量測定、比濁分析、または化学分析によって定
量される。先行技術としては、免疫学的および化学／物
理的沈殿による血漿中フィブリノーゲンの定量法も開示
されている。
いくつかの方法がある。現在使用されている方法は、血
漿が赤血球から完全に分離されていることを要求し、し
かも次に、分離された血漿中でフィブリノーゲンをフィ
ブリンに変換することが必要である。ついで、フィブリ
ンは、重量測定、比濁分析、または化学分析によって定
量される。先行技術としては、免疫学的および化学／物
理的沈殿による血漿中フィブリノーゲンの定量法も開示
されている。
【０００８】１９７１年Ｍｉｌｌａｒによって報告され
た方法は、遠心分離された血漿分画中の熱沈殿フィブリ
ノーゲンバンドを測定するものである。Ｍｉｌｌａｒの
文献に記載されたこのフィブリノーゲンの熱沈殿は、他
の研究者、たとえばＦｒｅｄｅｒｉｃｑ（１８７７）、
Ｓｃｈｕｌｚ（１９５５）、Ｇｏｏｄｗｉｎ（１９６
５）およびＬｏｗら（１９６７）によっても報告されて
いる。血漿を血液サンプルの残部から分離したのち、血
漿をミクロヘマトクリットチューブ中に吸引し、この中
で、水浴中５６℃の温度に３分間加熱する。加熱サンプ
ルを次に遠心分離して、フィブリンの沈殿バンドを血漿
中に形成させる。ついで、サンプル中のフィブリノーゲ
ンの量を、フィブリンバンドの長さを最初の血漿カラム
の長さで除して決定する。この方法は、パックされた沈
殿フィブリノーゲンの容量百分率をそのままフィブリノ
ーゲン濃度に変換するもので、パックされたフィブリン
の血漿１００ml中のml容量が、血液１００ml中のmg数で
表示した血液サンプル中フィブリノーゲン濃度ほぼ1.０
％に相当するとの仮定に基づくものである。上述の操作
を用いれば、加熱、遠心分離後の上清の血漿中には、フ
ィブリノーゲンは残らない。他の正常血漿蛋白質がこの
加熱工程で沈殿しないことも確認されている。
た方法は、遠心分離された血漿分画中の熱沈殿フィブリ
ノーゲンバンドを測定するものである。Ｍｉｌｌａｒの
文献に記載されたこのフィブリノーゲンの熱沈殿は、他
の研究者、たとえばＦｒｅｄｅｒｉｃｑ（１８７７）、
Ｓｃｈｕｌｚ（１９５５）、Ｇｏｏｄｗｉｎ（１９６
５）およびＬｏｗら（１９６７）によっても報告されて
いる。血漿を血液サンプルの残部から分離したのち、血
漿をミクロヘマトクリットチューブ中に吸引し、この中
で、水浴中５６℃の温度に３分間加熱する。加熱サンプ
ルを次に遠心分離して、フィブリンの沈殿バンドを血漿
中に形成させる。ついで、サンプル中のフィブリノーゲ
ンの量を、フィブリンバンドの長さを最初の血漿カラム
の長さで除して決定する。この方法は、パックされた沈
殿フィブリノーゲンの容量百分率をそのままフィブリノ
ーゲン濃度に変換するもので、パックされたフィブリン
の血漿１００ml中のml容量が、血液１００ml中のmg数で
表示した血液サンプル中フィブリノーゲン濃度ほぼ1.０
％に相当するとの仮定に基づくものである。上述の操作
を用いれば、加熱、遠心分離後の上清の血漿中には、フ
ィブリノーゲンは残らない。他の正常血漿蛋白質がこの
加熱工程で沈殿しないことも確認されている。
【０００９】血液サンプル中のフィブリノーゲンを定量
する上述の操作は、上に引用し以下に説明するＬｏｗら
の操作を除いて、すべて、血漿を他の血液成分から単離
できるように全血サンプルを前処理し、ついで他の血液
成分から分離しなければならないので、かなり複雑で、
時間がかかる。分離された血漿は、さらに処理および分
析を行うために、ついで他の容器に移す必要がある。フ
ィブリノーゲン測定の全試験プロトコールの複雑さか
ら、この分析は、臨床検査実験室で行うべきことが指図
され、医院で実施するのは適当でない。
する上述の操作は、上に引用し以下に説明するＬｏｗら
の操作を除いて、すべて、血漿を他の血液成分から単離
できるように全血サンプルを前処理し、ついで他の血液
成分から分離しなければならないので、かなり複雑で、
時間がかかる。分離された血漿は、さらに処理および分
析を行うために、ついで他の容器に移す必要がある。フ
ィブリノーゲン測定の全試験プロトコールの複雑さか
ら、この分析は、臨床検査実験室で行うべきことが指図
され、医院で実施するのは適当でない。
【００１０】Ｌｏｗら（１９６７）の方法は、血液の形
成成分を血漿から分離する予備工程を回避し、沈殿した
フィブリノーゲンを、パックされた赤血球の頂部に同じ
く沈積するバフィーコートから分離しない。Ｌｏｗらの
方法は、Ｍｉｌｌａｒの記載と同様、血液サンプルを含
有するミクロヘマトクリットチューブを遠心分離したの
ち５６℃に３分間加熱する。次にチューブを、１２，０
００Ｇで３分間、遠心分離機で再び回転させ、熱沈殿フ
ィブリノーゲンを、同様に着色したバフィーコートの頂
部に直接沈積させるものである。
成成分を血漿から分離する予備工程を回避し、沈殿した
フィブリノーゲンを、パックされた赤血球の頂部に同じ
く沈積するバフィーコートから分離しない。Ｌｏｗらの
方法は、Ｍｉｌｌａｒの記載と同様、血液サンプルを含
有するミクロヘマトクリットチューブを遠心分離したの
ち５６℃に３分間加熱する。次にチューブを、１２，０
００Ｇで３分間、遠心分離機で再び回転させ、熱沈殿フ
ィブリノーゲンを、同様に着色したバフィーコートの頂
部に直接沈積させるものである。
【００１１】本発明は、とくに白血球数の測定用として
従来技術に開示されている血液サンプルチューブおよび
フロートを使用し、簡単な遠心分離プロトコールによ
り、血液サンプルのフィブリノーゲン含量を定量する方
法に関する。用いられる装置一式および一般的な細胞数
測定操作は、米国特許第４，０２７，６６０号（１９７
７年６月７日登録）、第４，０７７，３９６号（１９７
８年３月７日登録）、第４，０８２，０８５号（１９７
８年４月４日登録）、および第４，１３７，７５５号
（１９７９年２月６日登録）に開示されている。これら
の開示はすべてその全文を本明細書にとくに導入する。
血液および他のサンプルの他の分析を実施するためにチ
ューブおよびフロートの装置一式を使用する他の多数の
特許が本発明者らによって取得されている。
従来技術に開示されている血液サンプルチューブおよび
フロートを使用し、簡単な遠心分離プロトコールによ
り、血液サンプルのフィブリノーゲン含量を定量する方
法に関する。用いられる装置一式および一般的な細胞数
測定操作は、米国特許第４，０２７，６６０号（１９７
７年６月７日登録）、第４，０７７，３９６号（１９７
８年３月７日登録）、第４，０８２，０８５号（１９７
８年４月４日登録）、および第４，１３７，７５５号
（１９７９年２月６日登録）に開示されている。これら
の開示はすべてその全文を本明細書にとくに導入する。
血液および他のサンプルの他の分析を実施するためにチ
ューブおよびフロートの装置一式を使用する他の多数の
特許が本発明者らによって取得されている。
【００１２】本発明の方法は、血液サンプルを入れる透
明なチューブ、たとえば毛細管等を使用する。プラスチ
ックのフロートがチューブ内に配置され、血液サンプル
はフロートを含有するチューブ中に導入される。チュー
ブの内壁には細胞層増強染料をコーティングする。血液
サンプルは上述の先行技術に記載されているように遠心
分離して、白血球、ヘマトクリットおよび血小板数を読
み取る。最初の遠心分離、ついで細胞数の確認ののち、
サンプルを約５６℃の温度に約５分間加熱する。これに
よって血漿中にフィブリノーゲンの沈殿が生じ、ついで
次の遠心分離工程でフィブリノーゲンの沈殿がフロート
の頂部に沈積される。フロートの頂部はバフィーコート
の頂部から識別可能な距離だけ外れているので、フィブ
リノーゲン層はバフィーコートから明瞭に識別可能であ
る。フロートとチューブ内径の間の環状の空間は十分に
狭く、沈殿したフィブリノーゲン成分がそこに止まるこ
とは防止できる。したがって、フィブリノーゲンのバン
ドは明瞭に識別され、またその軸方向の長さは、米国特
許第４，２０９，２２６号（１９８０年６月２４日登
録）および第４，５５８，９４７号（１９８５年１２月
１７日登録）に開示された一般的な形態の適宜改良され
た装置で、正確に測定することができる。装置／マイク
ロプロセッサーソフトウェアは、フィブリノーゲン層の
軸方向の長さを血液サンプル中のフィブリノーゲンの定
量的測定値に変換できるように改変するだけでよい。
明なチューブ、たとえば毛細管等を使用する。プラスチ
ックのフロートがチューブ内に配置され、血液サンプル
はフロートを含有するチューブ中に導入される。チュー
ブの内壁には細胞層増強染料をコーティングする。血液
サンプルは上述の先行技術に記載されているように遠心
分離して、白血球、ヘマトクリットおよび血小板数を読
み取る。最初の遠心分離、ついで細胞数の確認ののち、
サンプルを約５６℃の温度に約５分間加熱する。これに
よって血漿中にフィブリノーゲンの沈殿が生じ、ついで
次の遠心分離工程でフィブリノーゲンの沈殿がフロート
の頂部に沈積される。フロートの頂部はバフィーコート
の頂部から識別可能な距離だけ外れているので、フィブ
リノーゲン層はバフィーコートから明瞭に識別可能であ
る。フロートとチューブ内径の間の環状の空間は十分に
狭く、沈殿したフィブリノーゲン成分がそこに止まるこ
とは防止できる。したがって、フィブリノーゲンのバン
ドは明瞭に識別され、またその軸方向の長さは、米国特
許第４，２０９，２２６号（１９８０年６月２４日登
録）および第４，５５８，９４７号（１９８５年１２月
１７日登録）に開示された一般的な形態の適宜改良され
た装置で、正確に測定することができる。装置／マイク
ロプロセッサーソフトウェアは、フィブリノーゲン層の
軸方向の長さを血液サンプル中のフィブリノーゲンの定
量的測定値に変換できるように改変するだけでよい。
【００１３】毛細管チューブを用いた場合の変換式は、
本明細書に開示された毛細管チューブ操作によるサンプ
ルの臨床検査分析と、標準操作により、両者の結果を統
合することによって、確定されている。Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄＣｏｍｐａｎｙから“ＱＢ
Ｃ”毛細管チューブの商品名で販売されている市販の静
脈用毛細管チューブに、血液１１１μｌを充填して使用
した場合の変換式は、
本明細書に開示された毛細管チューブ操作によるサンプ
ルの臨床検査分析と、標準操作により、両者の結果を統
合することによって、確定されている。Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄＣｏｍｐａｎｙから“ＱＢ
Ｃ”毛細管チューブの商品名で販売されている市販の静
脈用毛細管チューブに、血液１１１μｌを充填して使用
した場合の変換式は、
【数２】Ｆq ＝ＫＦl ＋ｂ であり、式中、Ｆq は血中のフィブリノーゲンの量をmg
／dlで表す数であり、Ｆl はフロートの頂部のチューブ
内に認められる沈殿フィブリノーゲンバンドの、０００
５インチの単位で測定した長さであり、Ｋは一定の乗数
であり、ｂはフロートの頂部の形状とチューブの直径に
よって変動する計算可能な定数である。
／dlで表す数であり、Ｆl はフロートの頂部のチューブ
内に認められる沈殿フィブリノーゲンバンドの、０００
５インチの単位で測定した長さであり、Ｋは一定の乗数
であり、ｂはフロートの頂部の形状とチューブの直径に
よって変動する計算可能な定数である。
【００１４】市販の“ＱＢＣ”チューブとフロートを使
用する場合は、定数Ｋは３．４１１であり、ｂは−６
６．７０２になる。チューブおよびフロートとして別の
サイズのものを使用する場合は、簡単な実験によってＫ
およびｂの他の値を容易に確定できる。
用する場合は、定数Ｋは３．４１１であり、ｂは−６
６．７０２になる。チューブおよびフロートとして別の
サイズのものを使用する場合は、簡単な実験によってＫ
およびｂの他の値を容易に確定できる。
【００１５】上述のＫおよびｂの値は、医師によって正
常とみられているヘマトクリット数３０〜４８の範囲
（平均３９．４）の患者からの血液サンプルについて決
定した。異常に高いまたは低いヘマトクリット数を示す
血液サンプルは、それに応じて正常よりも低いまたは高
い血漿含量を示し、この場合には、確実なフィブリノー
ゲンの読みを得るため適当に改変したＫおよびｂ値が必
要になる。
常とみられているヘマトクリット数３０〜４８の範囲
（平均３９．４）の患者からの血液サンプルについて決
定した。異常に高いまたは低いヘマトクリット数を示す
血液サンプルは、それに応じて正常よりも低いまたは高
い血漿含量を示し、この場合には、確実なフィブリノー
ゲンの読みを得るため適当に改変したＫおよびｂ値が必
要になる。
【００１６】したがって、本発明の目的は、血液サンプ
ル中のフィブリノーゲン含量測定のための改良された操
作を提供することにある。
ル中のフィブリノーゲン含量測定のための改良された操
作を提供することにある。
【００１７】本発明の更なる目的は、簡単なサンプルの
遠心分離によって透明なサンプリングチューブ内に容易
に測定可能な沈殿フィブリノーゲン層を生成させる、上
述の特徴をもつ操作を提供することにある。
遠心分離によって透明なサンプリングチューブ内に容易
に測定可能な沈殿フィブリノーゲン層を生成させる、上
述の特徴をもつ操作を提供することにある。
【００１８】本発明の他の目的は、血液サンプル中のフ
ィブリノーゲン含量を、血液サンプルの他の形成要素か
ら分離されてサンプリングチューブ内に沈殿フィブリノ
ーゲンとして層形成させる、上述の特徴をもつ操作を提
供することにある。
ィブリノーゲン含量を、血液サンプルの他の形成要素か
ら分離されてサンプリングチューブ内に沈殿フィブリノ
ーゲンとして層形成させる、上述の特徴をもつ操作を提
供することにある。
【００１９】本発明のさらに他の目的は、サンプリング
チューブ内の沈殿フィブリノーゲン層の軸方向の長さ
が、血液サンプル中のフィブリノーゲン含量の定量値に
比例し、それに変換できる、上述の特徴をもつ操作を提
供することにある。
チューブ内の沈殿フィブリノーゲン層の軸方向の長さ
が、血液サンプル中のフィブリノーゲン含量の定量値に
比例し、それに変換できる、上述の特徴をもつ操作を提
供することにある。
【００２０】本発明のこれらのおよび他の目的および利
点は、本発明の好ましい実施態様についての以下の詳細
な説明を添付図面を参照しながら読めばさらに容易に明
らかになるものと考える。図面（図１）は、フロートを
有するサンプルチューブに、フィブリノーゲン層をフロ
ートの頂部に沈殿させた場合の、立面図である。
点は、本発明の好ましい実施態様についての以下の詳細
な説明を添付図面を参照しながら読めばさらに容易に明
らかになるものと考える。図面（図１）は、フロートを
有するサンプルチューブに、フィブリノーゲン層をフロ
ートの頂部に沈殿させた場合の、立面図である。
【００２１】図面（図１）を参照しながら説明すると、
チューブは番号２で指示され、毛細管のまたはもっと太
い真空の血液サンプリングチューブである。チューブ２
はフロート４を含有し、このフロートはプラスチックで
作られ、遠心分離された赤血球層にそれが浮くような比
重を有する。チューブ２の頂部８は開放されていて、底
部６はプラスチックキャップ１０で閉じられている。前
述のように、チューブ２が真空の血液サンプリングチュ
ーブある場合には、キャップ１０は必要ではなく、その
代わり、一体の閉鎖壁部１１と頂部閉鎖プラグ９が設け
られる。抗凝固処理した血液サンプルをチューブ２内に
導入し、その中で遠心分離する。これによって赤血球は
チューブ２の底部にカラム１２として層を形成し、フロ
ート４は赤血球カラム１２中に止まり、そこに浮かぶ。
赤血球層１２の上部には、白血球および血小板層、また
はバフィーコート、１４が沈積する。バフィーコート１
４の個々の成分も、従来技術によって教示されるよう
に、分離したバンドとして層を形成する。血漿層１６は
バフィーコート１４の上部に位置する。フロート４は、
有意な距離ｄだけバフィーコート１４の上方、血漿層１
６中にまで突出することに注目すべきである。これによ
り、フロート１４の頂部表面５はバフィーコート１４か
ら離れて配置される。
チューブは番号２で指示され、毛細管のまたはもっと太
い真空の血液サンプリングチューブである。チューブ２
はフロート４を含有し、このフロートはプラスチックで
作られ、遠心分離された赤血球層にそれが浮くような比
重を有する。チューブ２の頂部８は開放されていて、底
部６はプラスチックキャップ１０で閉じられている。前
述のように、チューブ２が真空の血液サンプリングチュ
ーブある場合には、キャップ１０は必要ではなく、その
代わり、一体の閉鎖壁部１１と頂部閉鎖プラグ９が設け
られる。抗凝固処理した血液サンプルをチューブ２内に
導入し、その中で遠心分離する。これによって赤血球は
チューブ２の底部にカラム１２として層を形成し、フロ
ート４は赤血球カラム１２中に止まり、そこに浮かぶ。
赤血球層１２の上部には、白血球および血小板層、また
はバフィーコート、１４が沈積する。バフィーコート１
４の個々の成分も、従来技術によって教示されるよう
に、分離したバンドとして層を形成する。血漿層１６は
バフィーコート１４の上部に位置する。フロート４は、
有意な距離ｄだけバフィーコート１４の上方、血漿層１
６中にまで突出することに注目すべきである。これによ
り、フロート１４の頂部表面５はバフィーコート１４か
ら離れて配置される。
【００２２】ヘマトクリット、ヘモグロビン、白血球分
類等、初期の血球の測定を行ったのち、サンプルを、血
漿からフィブリノーゲンが沈殿するのに十分な温度まで
加熱する。サンプルの５６℃での５分間のインキュベー
ションが有効であることが見出されている。ついで、サ
ンプルをチューブ２内で、沈殿したフィブリノーゲンが
フロート４の頂部５にバンド１８として集塊化するのに
十分な時間、もう一度遠心分離する。沈殿したフィブリ
ノーゲンは白色のバンド１８となり、フロート４の頂部
表面５上に安定する。このようにして、フィブリノーゲ
ン層１８はバフィーコート１４から分離して、正確な測
定が可能になる。フロート４とチューブ２の間の環状の
自由空間は、沈殿したフィブリノーゲンが遠心分離時に
環状の自由空間内へ落下しないように十分狭く保持しな
ければならない。既定の血液サンプル容量に対しての特
定のチューブとフロートの組合せにおける自由空間の厚
さは、慣例の実験によって決定することができる。上述
の先行技術に記載されている形の“ＱＢＣ”毛細管チュ
ーブとフロートの組合せを用いる場合には、厚さ３５〜
４５ミクロンの環状の自由空間が有効なことが明らかに
されている。
類等、初期の血球の測定を行ったのち、サンプルを、血
漿からフィブリノーゲンが沈殿するのに十分な温度まで
加熱する。サンプルの５６℃での５分間のインキュベー
ションが有効であることが見出されている。ついで、サ
ンプルをチューブ２内で、沈殿したフィブリノーゲンが
フロート４の頂部５にバンド１８として集塊化するのに
十分な時間、もう一度遠心分離する。沈殿したフィブリ
ノーゲンは白色のバンド１８となり、フロート４の頂部
表面５上に安定する。このようにして、フィブリノーゲ
ン層１８はバフィーコート１４から分離して、正確な測
定が可能になる。フロート４とチューブ２の間の環状の
自由空間は、沈殿したフィブリノーゲンが遠心分離時に
環状の自由空間内へ落下しないように十分狭く保持しな
ければならない。既定の血液サンプル容量に対しての特
定のチューブとフロートの組合せにおける自由空間の厚
さは、慣例の実験によって決定することができる。上述
の先行技術に記載されている形の“ＱＢＣ”毛細管チュ
ーブとフロートの組合せを用いる場合には、厚さ３５〜
４５ミクロンの環状の自由空間が有効なことが明らかに
されている。
【００２３】フィブリノーゲン含量は、チューブ内のフ
ィブリノーゲンバンド１８の軸方向の寸法、すなわち長
さを測定することによって決定される。この寸法をつい
で数学的に、フィブリノーゲン含量を表す値に変換す
る。すなわち、バンドの長さが、血液サンプル中のフィ
ブリノーゲン量の指標となる。
ィブリノーゲンバンド１８の軸方向の寸法、すなわち長
さを測定することによって決定される。この寸法をつい
で数学的に、フィブリノーゲン含量を表す値に変換す
る。すなわち、バンドの長さが、血液サンプル中のフィ
ブリノーゲン量の指標となる。
【００２４】フィブリノーゲンのバンドの高さの程度を
正確に測定する能力を著しく上昇させるためには、フィ
ブリノーゲンのバンドをバフィーコートから分離させる
ことが重要である。
正確に測定する能力を著しく上昇させるためには、フィ
ブリノーゲンのバンドをバフィーコートから分離させる
ことが重要である。
【００２５】正常なバフィーコート成分、正常なヘマト
クリット数および正常なフィブリノーゲンレベルを有す
る正常な患者では、拡散していないバフィーコートバン
ドはフィブリノーゲンバンドの高さの約１０％である。
バフィーコート成分が増大し、フィブリノーゲン濃度が
低下している患者では、バフィーコートバンドの高さが
フィブリノーゲンバンドの高さより大きくなることがあ
って、その場合には、バフィーコートのすべてまたは一
部がフィブリノーゲンのバンドの測定値に包含される
と、重大な誤差を生じることになる。
クリット数および正常なフィブリノーゲンレベルを有す
る正常な患者では、拡散していないバフィーコートバン
ドはフィブリノーゲンバンドの高さの約１０％である。
バフィーコート成分が増大し、フィブリノーゲン濃度が
低下している患者では、バフィーコートバンドの高さが
フィブリノーゲンバンドの高さより大きくなることがあ
って、その場合には、バフィーコートのすべてまたは一
部がフィブリノーゲンのバンドの測定値に包含される
と、重大な誤差を生じることになる。
【００２６】フィブリノーゲン層を形成血液成分から分
離するための、フロート以外の手段も、上述の操作に使
用できることを理解すべきである。たとえば、適当な比
重のゲル層がフィブリノーゲン層の形成バフィーコート
からの分離のために使用できた。また、適当な比重のプ
ラスチックビーズをある量使用することも可能であっ
た。
離するための、フロート以外の手段も、上述の操作に使
用できることを理解すべきである。たとえば、適当な比
重のゲル層がフィブリノーゲン層の形成バフィーコート
からの分離のために使用できた。また、適当な比重のプ
ラスチックビーズをある量使用することも可能であっ
た。
【００２７】上述の本発明の様式で測定が可能である限
り、フィブリノーゲンの沈殿には、熱以外の他の手段も
使用できることを理解すべきである。たとえば、フィブ
リノーゲンを不溶性のフィブリンに変換するためには、
血液サンプルにトロンビンおよびカルシウムを添加する
ことも可能であった。
り、フィブリノーゲンの沈殿には、熱以外の他の手段も
使用できることを理解すべきである。たとえば、フィブ
リノーゲンを不溶性のフィブリンに変換するためには、
血液サンプルにトロンビンおよびカルシウムを添加する
ことも可能であった。
【００２８】上述の操作が、血液サンプル中のフィブリ
ノーゲン含量の簡単な、より正確な定量法を提供するも
のであることも容易に理解できるものと考える。Ｂｅｃ
ｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ
から、“ＱＢＣ”の商品名で入手できるチューブ及びフ
ロートの装置一式を使用すれば、医院での操作が可能と
なり、高価な臨床検査室での操作が回避できる。さら
に、試験の結果を迅速に医師および患者が役立てること
ができる。
ノーゲン含量の簡単な、より正確な定量法を提供するも
のであることも容易に理解できるものと考える。Ｂｅｃ
ｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ
から、“ＱＢＣ”の商品名で入手できるチューブ及びフ
ロートの装置一式を使用すれば、医院での操作が可能と
なり、高価な臨床検査室での操作が回避できる。さら
に、試験の結果を迅速に医師および患者が役立てること
ができる。
【００２９】本発明の開示された実施態様には、本発明
の概念から逸脱することなく、多くの変化および改変が
可能であり、本発明は特許請求の範囲の記載以外によっ
て限定されるものではないことを銘記すべきである。
の概念から逸脱することなく、多くの変化および改変が
可能であり、本発明は特許請求の範囲の記載以外によっ
て限定されるものではないことを銘記すべきである。
【図１】本発明のフィブリノーゲンの定量操作に用いら
れる装置の一例の立面図。
れる装置の一例の立面図。
フロントページの続き (71)出願人 591149920 ベクトン デイキンソン アンド カンパ ニー アメリカ合衆国 ニユージヤージー州，フ ランクリン レイクス，ワン ベクトン ドライブ （番地なし） (72)発明者 スチーブン シー． ワードロウ アメリカ合衆国 コネチカツト州，オール ド セイブルツク，ノース コウブ ロー ド 191 (72)発明者 ロバート エイ． レビン アメリカ合衆国 コネチカツト州，ギルフ オード，ピルグリム レーン 31 (72)発明者 アラン エイチ． ハート アメリカ合衆国コネチカツト州ギルフオー ド，ウエーザーリイ トレイル 290
Claims (10)
- 【請求項１】 抗凝固処理した全血のフィブリノーゲン
含量の測定方法において、a)フロートを含有する透明チ
ューブに血液サンプルを取り、b)血液サンプルを遠心分
離してチューブ中の血液の形成成分と血漿成分を分離
し、c)血漿中のフィブリノーゲンをフィブリンまたは沈
殿フィブリノーゲンに変換し、d)血液サンプルを再び遠
心分離してフロートの一端に血漿中フィブリンまたは沈
殿フィブリノーゲン層を形成させ、ついでe)チューブ内
の形成層の長さを測定し、測定された層の長さをフィブ
リノーゲンの量を表す数に変換する各工程からなる方
法。 - 【請求項２】 フロートは、形成層が血液サンプル中に
形成されたいずれの成分とも間隔を置いて配置され、容
易な識別を確実にするのに十分な長さを有する請求項１
に記載の方法。 - 【請求項３】 フロートとチューブのサイズは、チュー
ブとフロートの間のフィブリンまたはフィブリノーゲン
の有意な蓄積を防止できるような相互関係とする請求項
１に記載の方法。 - 【請求項４】 フィブリノーゲンの沈殿フィブリノーゲ
ンへの変換は、チューブ内の血液サンプルの加熱によっ
て行われる、請求項１に記載の方法。 - 【請求項５】 形成層の長さのフィブリノーゲン数への
変換は、式 【数１】Ｆq ＝ＫＦl ＋ｂ （式中、Ｆq はフィブリノーゲンの量を表す数、Ｆl は
形成層の長さの測定値、Ｋは一定の乗数であり、ｂはフ
ロートの末端表面の形状とチューブの直径の関数である
定数を示す）を解くことによって行われる請求項１に記
載の方法。 - 【請求項６】 チューブは毛細管である請求項１に記載
の方法。 - 【請求項７】 チューブは予め空気を抜いた採血管であ
る請求項１に記載の方法。 - 【請求項８】 抗凝固処理した全血のフィブリノーゲン
含量の測定方法において、a)フロートを含有する透明チ
ューブに血液サンプルを取り、b)血液サンプル中のフィ
ブリノーゲンを沈殿させ、c)チューブ中の血液サンプル
を遠心分離して、血液サンプルの形成成分から遠い位置
のフロートの一端に沈殿フィブリノーゲンの層を生じさ
せ、ついでd)沈殿フィブリノーゲン層の長さをフィブリ
ノーゲン数に変換する各工程からなる方法。 - 【請求項９】 体液物質のサンプル中の複合体液物質の
標的成分の量を定量する方法において、a)体液物質のサ
ンプルをフロートを含有する透明チューブに取り、b)チ
ューブ内のサンプルを遠心分離して、フロートの頂部上
に体液物質のすべての他の可視成分と間隔を置いて配置
されたバンドとして標的成分の層を生じさせ、ついでc)
標的成分のバンドの軸方向の長さを測定し、得られた測
定値をサンプル中の標的成分の量の表示に変換する各工
程からなる方法。 - 【請求項１０】 抗凝固処理した全血のフィブリノーゲ
ン含量を測定する方法において、a)血液のサンプルを透
明なチューブに取り、b)血液サンプルを遠心分離してチ
ューブ内の血漿成分から形成成分を分離させ、c)血漿成
分中のフィブリノーゲンを可視形態に変換し、d)血液サ
ンプルを再び遠心分離して、遠心分離された血液サンプ
ル中の形成成分から離れたチューブ内に、血液サンプル
中のフィブリノーゲンの可視形態の層を形成させ、e)チ
ューブ内の形成層の長さを測定し、この測定された層の
長さをフィブリノーゲン量を示す数に変換する各工程か
らなる方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/636,677 US5137832A (en) | 1991-01-02 | 1991-01-02 | Quantification of fibrinogen in whole blood samples contained in a tube using a float to separate materials |
| US636677 | 1991-01-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05130898A true JPH05130898A (ja) | 1993-05-28 |
| JPH0771518B2 JPH0771518B2 (ja) | 1995-08-02 |
Family
ID=24552889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3169706A Expired - Lifetime JPH0771518B2 (ja) | 1991-01-02 | 1991-07-10 | 全血サンプル中のフィブリノーゲンの定量 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5137832A (ja) |
| EP (1) | EP0494079B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0771518B2 (ja) |
| CN (1) | CN1031771C (ja) |
| AT (1) | ATE150872T1 (ja) |
| AU (1) | AU627119B1 (ja) |
| BR (1) | BR9200008A (ja) |
| CA (1) | CA2042434A1 (ja) |
| DE (1) | DE69218463T2 (ja) |
| DK (1) | DK0494079T3 (ja) |
| ES (1) | ES2099756T3 (ja) |
| FI (1) | FI916013A (ja) |
| GR (1) | GR3023531T3 (ja) |
| NO (1) | NO915135L (ja) |
| RU (1) | RU2079840C1 (ja) |
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| US5506145A (en) * | 1994-12-02 | 1996-04-09 | Bull; Brian S. | Determination of an individual's inflammation index from whole blood fibrinogen and hematocrit or hemoglobin measurements |
| US5585007A (en) | 1994-12-07 | 1996-12-17 | Plasmaseal Corporation | Plasma concentrate and tissue sealant methods and apparatuses for making concentrated plasma and/or tissue sealant |
| GB9804560D0 (en) * | 1998-03-05 | 1998-04-29 | Zynocyte Ltd | Method of measuring erthrocyte sedimentation rate (esr),plasma viscosity and plasma fibrinogen of a blood sample |
| US7947236B2 (en) | 1999-12-03 | 2011-05-24 | Becton, Dickinson And Company | Device for separating components of a fluid sample |
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| US9333445B2 (en) | 2008-07-21 | 2016-05-10 | Becton, Dickinson And Company | Density phase separation device |
| MX2011000799A (es) | 2008-07-21 | 2011-03-01 | Becton Dickinson Co | Dispositivo de separacion de fases por densidad. |
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| US8187475B2 (en) | 2009-03-06 | 2012-05-29 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for producing autologous thrombin |
| US8313954B2 (en) | 2009-04-03 | 2012-11-20 | Biomet Biologics, Llc | All-in-one means of separating blood components |
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| US8591391B2 (en) | 2010-04-12 | 2013-11-26 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for separating a material |
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