SU1734020A1

SU1734020A1 - Способ определени адгезивности тромбоцитов

Info

Publication number: SU1734020A1
Application number: SU894772000A
Authority: SU
Inventors: Александр Яковлевич Смоляницкий; Леонид Прокофьевич Истранов; Гурий Александрович Якунин; Рубен Карапетович Абоянц; Елена Викторовна Истранова; Сергей Николаевич Осипов
Original assignee: 1-Й Московский Медицинский Институт Им.И.М.Сеченова
Priority date: 1989-11-27
Filing date: 1989-11-27
Publication date: 1992-05-15

Abstract

Изобретение относитс к медицине и может быть использовано дл определени адгезивности тромбоцитов путем подсчета относительного количества их в плазме до и после пропускани еэ через коллагеновый пористый материал, содержащий в своем составе 0,5-0,25% аденозиндифосфорный кислоты. Различи в индексе адгезивности здоровых и больи ых людей позвол ет определить их функциональную неполноценность , а также длет объективную величину активности различных антиагрегантов и лекарственных средств. Способ позвол ет определ ть адгезивность тромбоцитов в тромбоцитопенической плазме в услови х клиники, не прибега к их выделению и концентрированию . Способ позвол ет дифференцировать активные и неактивные тромбоциты при vx. дефиците в случае тром- боцитопении.

Description

(Л

С

Изобретение относитс к медицине, в частности к способам оценки функциональной активности тромбоцитов, и может примен тьс дл диагностики функциональной патологии тромбоцитов, а также дл контрол за действием лекарств, вли ющих на функциональную активность тромбоциточ,

Известен способ определени адгезив- ности тромбоцитов в услови х клиники , за- ключающийс в подсчете количества тромбоцитов в цитратной до и после пропускани ее через попихлорвиниловую трубку, заполненную мелкими стекл нными шариками. Расчет индекса адгезивности тромбоцитов представл ет собой выраженное в процентах отношение количества тромбоцитов, задержавшихс на стелл н- ных шариках к исходному количеству тромбоцитов в крови.

Дл осуществлени этого теста нужно 2 мл цитарной крови и инфузионный насос, обеспечивающий непрерывное равномерное продвижение исследуемой крови по ко- лонке со стекл нными шариками. Недостатком спосс&д вл етс также и то, что при пропускании интактной тромбоци- тарной плазмы через колонку со стекл нными шариками прилипани тромбоцитов не происходит.

Целью изобретени вл етс повышение чувствительности, упрощение и ускорение способа, з также возможность определени адгезивности тромбоцитов в плазме.

Следует отметить, что обеспечение возможности исследовани тромбоцитарной плазмы вл етс значительным достижением , поскольку при этом возможна стандартизаци количества тромбоцитов в

ч

CJ

о ю :о

исследуемом образец, что повышает достоверность определени путем разделени тромбоцитарной плазмы человека его же быстротромбоцитарной плазмой до стандартного количества, например, 100000 или 200000 тромбоцитов в 1 мкл и устран етс возможное вли ние других клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов), на адгезивность тромбоцитов,

Указанна цель достигаетс тем, что в качестве материала, с которым взаимодействуют тромбоциты, сохран ющие хот бы минимальную способность к адгезии, используют коллагеновый материал, содержащий АДФ (аденозиндифосфорна кислота), при соотношении коллаген-АДФ (мас.%), (99,5-99,75) - (0,5-0,25).

Способ осуществл ют следующим образом .

Из коллагенового материала вырезают цилиндрический кусочек толщиной 5-7 мм и диаметром 5-7 мм, который вставл ют в пластиковый наконечник стандартной автоматической лабораторной пипетки на 200-500 мл и опускают его в пластиковую пробирку соответствующих размеров (дл сбора профильтрованной плазмы). После этого из исследуемой тромбоцитарной плазмы берут пробу дл подсчета исходного количества тромбоцитов, а затем 200-400 мкл тромбоцитарной плазмы внос т в наконечник с коллагеновым материалом, после чего наконечник присоедин ют к пипетке и нажатием колпачка пропускают плазму через коллагеновую губку. Пропущенную плазму встр хивают и отбирают от нее пробу дл подсчета количества тромбоцитов. По результатам подсчета тромбоцитов в плазме до и после прохождени ее через коллагеновый материал, рассчитывают как обычно ин- деке адгезивности тромбоцитов,

Дл целей диагностики и контрол за действием ингибиторов адгезивно-агрега- ционной функции тромбоцитов используют коллагеновый материал, который в норме задерживает не менее 30% тромбоцитов, содержащихс в плазме. Такие свойства присущи коллагеновому материалу, приготовленному из раствора коллагена в сочета- нии с АДФ при соотношении коллаген-АДФ, равном (мас.%); (99,5-99,75)- (0,5-0,25).

П р и м е р 1. Диагностика врожденного нарушени функциональной активности тромбоцитов (тромбоцитопатии). Описанным способом со стандартной тромбици- тарной плазмой (200000 тромбоцитов в 1 мкл) определ ют адгезивность тромбоцитов у 10 здоровых людей и больного с врожденным нарушением секреторной реакции

тромбоцитов, установленным на основании тщательных исследований системы гемостаза , включающих определение адгезивности тромбоцитов обычным способом, а также агрегацию тромбоцитов при стимул ции АДФ, коллагеном, адреналином и рис- томицином. У здоровых людей индекс адгезивности колебалс в пределах 35-65% и составил в среднем 50И%, индекс адгезивности у больного составил 8%. Получаемое различие в индекс адгезивности тромбоцитов позвол ет диагностировать их функциональную неполноценность (тром- боцитопати ).

П р и м е р 2. Оценка активности ингибитора функции тромбоцитов. Определ ют адгезивность тромбоцитов в нормальной плазме, содержащей водорастворимый аспирин в концентрации 1 ммоль/л и в нормальной плазме, к которой был добавлен вместо аспирина адекватный объем физиологического раствора NaCI. При исследовании плазмы, содержащей антиагрегат, индекс адгезивности тромбоцитов равн лс 2, в контроле 47%, Различие в индексе адгезивности тромбоцитов дает объективную величину активности ингибитора.

Предлагаемый способ пригоден дл определени адге: ивности тромбоцитов в тромбоцитопенической плазме. Известно, что оценка адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов при тромбоцитопении обычными методами невозможна. При необходимости исследователи прибегают к выделению тромбоцитов из большого объема плазмы посредством центрифугировани или гельфильтрации и последующему их концентрированию посредством ресуспен- дировани в очень небольшом объеме специально приготовленного буферного раствора.

Поскольку эти методы вл тюс очень трудоемкими и дорогосто щими, они практически не примен ютс в клинических услови х и доступны лишь некоторым исследовател м.

Предлагаемый способ дает возможность определ ть адгезивность тромбоцитов в услови х кпиники, не прибега к их выделению и концентрированию. Это достигаетс тем, что подсчет тромбоцитов в тромбоцитопенической плазме до и после пропускани через коллагеновую губку с повышенной тромбоцитзадерживающей способностью ведетс не в обычном объеме плазмы, а в несколько большем объеме плазмы, Например, если обычно плазму дл посчета тромбоцитов в тромбоцитарном счетчике развод т в 3000 раз (3,3 мкл плазмы развод т в 10000 мкл изотона).то при

ромбоцитопении развод т в 500-670 раз 15- 20 мкл плазмы развод т в 10000 мкл изото- на.

П р и м е р 3. Определение адгезивности плазмы при тромбоцитопении. При подсче- 5 те количества тромбоцитов в крови и плазме больного оказалось, что их было меньше 30000 в 1 мкл. Поэтому определить адгезив- ность тромбоцитов известным методом при столь небольшом количестве их практиче- 10 ски невозможно, поскольку количество задерживающихс тромбоцитов находитс в пределах ошибки метода.

Производ т подсчет тромбоцитов в плазме, вз в не 3,3 мкл плазмы, как это 15 делаетс обычно, а 20 мкл. При этом количество тромбоцитов в плазме оказалось равным 194000 в 1 мкл.

Пропускают 200 мкл тромбоцитопени- ческой плазмы больного через коллагено- 20 вую губку и снова подсчитывают количество тромбоцитов в 200 мкл. Аналогичным обра- зом определ ют индекс адгезивности тромбоцитов в 10 пробах нормальной плазмы, предварительно подсчитав количество тром-15 боцитов в тромбоцитарной плазме и затем развед ее быстромбоцитарной плазмой до содержани менее 30000 тромбоцитов в 1 мкл, т.е. определ ют индекс адгезивности тромбоцитов в 10 пробах нормальной плаз- 30 мы с очень низким содержанием тромбоцитов .

Сравнивают индекс адгезивности в норме (при искусственной тромбоцитопении в нормальной плазме), который колебалс в пределах 11-30% и равн лс в среднем 20. 3%, и больного тромбоцитопенией, у которого индекс адгезивности составил 0%. Эти результаты позвол ют диагностировать у больного тромбоцитопеническую тромбо- цитопатию, т.е. наличие у больного не только дефицита, но и дефекта тромбоцитов.

Таким образом, предлагаемый способ заметно повышает чувствительность метода , достаточного дл дифференциации активных и неактивных тромбоцитов при их дефиците.

Claims

Формула изобретени

Способ определени адгезивности тромбоцитов путем фильтрации крови с последующим подсчетом количества тромбоцитов крови, задерживающихс на фильтре, отличающийс тем, что, с целью повышени чувствительности, упрощени и ускорени способа, а также возможности определени адгезивности тромбоцитов в плазме, подсчитывают количество тромбоцитов в цитратной крови или плазме до и после фильтрации через материал, содержащий коллаген дермы и аденозиндифос фат при их соотношении (мас.%); (99,5-99,75) - (0,5-0,25), и рассчитывают в процентах количество тромбоцитов, задерживающихс в материале.