JPH0452554A

JPH0452554A - 血清中の環状アミノ酸アミン類とセロトニン、およびコレステロールの簡易、迅速ガスクロマトグラフ分析法

Info

Publication number: JPH0452554A
Application number: JP2162208A
Authority: JP
Inventors: Ichiro Yoshihara; 吉原　一郎
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1990-06-20
Filing date: 1990-06-20
Publication date: 1992-02-20

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、環状アミノ酸アミン類が、タンパク質の大腸
内腐敗分解産物の主要物質のひとつである点と、血中の
ヒスタミン、セロトニン、およびコレステロールは、ス
トレスとの関連が注目されてきている物質である点の両
面から、食品および薬品関連産業とともに、生化学的診
断にも利用可能なものである。

（従来の技術）本発明が分析対象とする５物質については、体液や組織
を対象として生化学の分野で、それぞれ個別に分析方法
が定められている。

すなわち、チラミン、ヒスタミン、トリプタミン、およ
びセロトニンでは、ダンシルクロリド、Ｏ−フタルアル
デヒド、ニンヒドリンなどを反応させて螢光物質を生成
させ、螢光分析する方法が主流となっているが、液体ま
たは薄層クロマトグラフィーによる分離操作の組み込み
が必要とされる場合が多く、かなり手数がかかる。また
血清中のコレステロールは、殆んどいわゆる酵素法によ
り、特異な酵素の作用で生ずる過酸化水素を、比色法か
螢光法によって分析する方法がとられている。

（発明が解決しようとする課題）環状アミノ酸アミン類は、大腸内腐敗分解産物の主要物
質のひとつであることから、生体にとって好ましくない
これらの物質の生成、吸収と、血液中含量の関連を調べ
ることを直接の目的として、チラミン、ヒスタミン、お
よびトリプタミンを、同時に簡易迅速に分析できるよう
にぜんとしたのが、本発明の第１の課題であるが、血清
中の環状アミノ酸アミン類の同時迅速分析法として、他
の目的にも広く使用できるものである。

ヒスタミンは、ストレス負荷によって体内生成が増加す
ることが知られており、いわゆる生理活性アミンのひと
つとされているが、セロトニンも同様である。さらに血
液中のコレステロールも、ストレスによって増加する傾
向のあることが知られてきている。このように、ストレ
スとの関連が知られてきている物質として、ヒスタミン
を除く２物質を、充てん剤の異なる別のカラムにより同
時迅速分析ができるようにし、血清中のこれら３物質の
消長と、ストレスの関連を追求するための有力な手段を
提供せんとしたのが、本発明の第２の課題である。

（課題を解決するための手段、方法）詳細は（実施例）に記したが、前項の課題を解決するた
めの本発明の概要は、次の通りである。血清に硫酸アン
モニウム粉末を加えて飽和状態としたのち、フリーザー
に一夜放置し、解凍後遠心分離して硫酸アンモニウム飽
和除タンパク質血清を得る。これに同容の純水を加え、
生ずる沈でんを遠心分離して除去し、上清に１／１０容
の高純度二硫化炭素を加え、ミキサーで５分間振とうし
て遠心分離し、分析対象５物質の二硫化炭素抽出液を得
、これをそのままガスクロマトグラフ分析の供試液とす
る。この供試液２μＱを５Ｅ−３０１０％の充てん剤の
２２０℃のカラムに注入することによりチラミン、ヒス
タミン、およびトリプタミンを同時に分析する。また供
試液３μＱを５Ｅ−３０２％の充てん剤の２２０℃のカ
ラムに注入することによりセロトニン、およびコレステ
ロールを同時に分析する。この場合、最高純度の二硫化
炭素を使用しても、ヒスタミンと殆んど同じ保持時間の
ごく少量の不純物のピークが現われ、その除去が不可能
であるため、ヒスタミンの場合に限り盲験値の控除が不
可欠となる。

（実施例）繁殖用雌豚の血清を試料とした本発明の実施例を、図も
使用して詳説する。

血清的３ｍＱをＩｏｎ　Ｑの共栓遠心法でん管にとり、
１ｍＱ当り　０．８ｇの硫酸アンモニウムの粉末を加え
、ミキサーでよく混じたのちフリーザーに入れ、−夜装
置する。室温で解凍したのち４．５０Ｏｒ　ｐ　ｍで５
分間遠心分離し、談判白色の硫酸アンモニウム飽和除タ
ンパク質血清を採取し、同容の純水を加えて生ずる白色
性でんを、４．０００ｒ　ｐ　ｍで５分間遠心分離して
除く、上層の微黄色透明液を１０ｍ　Ｑの共栓遠心法で
ん管にとり、予め抗酸化剤としてＢＨＴ　（Ｂｕｔｙｌ
ａｔｅｄ　　Ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ　）Ｈた高純度の二硫化炭素溶液を１／１０容加え、ミキサー
で５分間はげしく振とうしたのち、直ちに円錐底の１０
ｍ　Ｑの共栓遠心法でん管に移し、４．０００　ｒ　ｐ
　ｒｎで５分間遠心分＾」し、下層の二硫化炭素を分析
用供試液とする。

本実施例で使用したガスクロマトグラフは、水素炎イオ
ン化検出器装着の定流量型で、その操作条件は下記の通
りである。

（カラム）２．６ｍ　ｍ　−２，０ｍのガラスカラムに、５Ｅ３０
１０％および２％のクロモソーブＷ−ＨＰ（６０〜８０
メツシユ）（温　度）　カラム温度：２２０℃ 注入部温度：２６０℃ 検出器温度：２６０℃ （ガス流量）　窒素：　４４ｍＱ　７ｍ　ｉ　ｎ水素：
　３８ｍＱ　７ｍ　ｉ　ｎ（Ｒａｎｇｅ）　　　８（５ｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙン　　　　　　１　０　　’
（クロマトバック）　　　Ｃ−Ｒ６Ａ前記の供試液２μＱを５Ｅ−３０１０％のカラムに注入
することにより、チラミン分析し、また供試液３μＱを
５Ｅ−３０２％のカラムに注入することにより、セロト
ニ前記の操作条件におけるこれら５物質の保持時間を第
１図に示した。

５Ｅ−３０１０％のカラムに２μＱを注入したときのク
ロマトグラムは第２図の（Ａ）に示したが、チラミンと
トリプタミンは検出されなかったので、（Ｂ）と（Ｃ）
にそれらのクロマトグラムを示した。また二硫化炭素中
に、保持時間がヒスタミンと殆んど同じ不純物が存在す
るため、ヒスタミンについては盲験が不可欠であること
は前記したが、盲験のタロマドグラムを（Ｄ）に示した
。５Ｒ−３０２％のカラムに３μＱを注入したときのタ
ロマドグラムは、第３図に示した。

以上、本発明を具体的に詳述したが、本発明の要旨の範
囲内で種々の変形は可能である。

例えば供試液の調製における除タンパク質の方法、カラ
ムの充てん剤、温度、注入液量などは、適宜選択が可能
である。

（発明の効果）本発明によれば、ガスクロマトグラフの水素炎イオン化
検出器に感作しない二硫化炭素を、硫酸アンモニウム飽
和除タンパク質血清の２倍稀釈液の１／１０容使用する
ことにより、分析対象の５物質の濃縮も兼ねて抽出して
得られる供試液を、２種類の充てん剤のカラムに注入す
ることにより、Ｒａｎｇｅ　　ａｎｄＳｅｎｓｉｔｉｖ
ｉｔｙ　　８Ｘ１０’という実用的には最高の精度で、
微量の対象５物質を正確に、かつ簡易、迅速に分析する
ことが可能となり、（発明が解決しようとする課題）に
記した２つの目的にのみならず、さらに多岐に活用され
得るものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、５Ｒ−３０１０％および２％のカラムを使用
して、前記の操作条件で分析したときの、５物質の保持
時間を示したものである。第２図と第３図では、第１図
に記載した物質名番号のみをそのまま共通して使用し、
物質名は省略して図示しである。第２図の（Ａ）は、繁
殖用雌豚の供試液２μＱを５Ｅ−３０１０％のカラムに
注入したときのクロマトグラムで、この場合にはチラミ
ンとトリプタミンは検出されなかったので、それらめク
ロマトグラムを（Ｂ）と（Ｃ）に、また前記したヒスタ
ミン向は盲験のクロマトグラムを、参考までに（Ｄ）に
示しな。第３図、供試液３ｕＱをＳＥ　　３０　２％のカラムに
注入したときのタロマドグラムである。

Claims

【特許請求の範囲】飼料や食物のタンパク質を構成する環状アミノ酸から、家畜やヒトの体内で生成される環状アミノ
酸アミンであるチラミン、ヒスタミン、トリプタミン、
また必須アミノ酸のトリプトファンから生成されるセロ
トニン、さらにコレステロールを、血清から二硫化炭素
により一括して抽出し、この抽出液を充てん剤の異なる
２種類のカラムに注入し、水素炎イオン化検出器によっ
て簡易、迅速に分析することを特徴とする、血清中の環
状アミノ酸アミン類とセロトニン、およびコレステロー
ルの簡易、迅速ガスクロマトグラフ分析法。