JPH045243A

JPH045243A - う蝕ワクチン組成物

Info

Publication number: JPH045243A
Application number: JP2103665A
Authority: JP
Inventors: Hirotaka Oota; 博崇太田; Koji Shibuya; 耕司渋谷
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 1990-04-19
Filing date: 1990-04-19
Publication date: 1992-01-09
Anticipated expiration: 2013-12-24
Also published as: JP2841229B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、う蝕ワクチン組成物に関する。

従３１Ｅ（７）１支４ミュータンスレンサ球菌（ｍｕｔａ’ｎ５Ｓｔｒｅρｔ
ｏｃｏｃｃｉ）は、ヒトや動物におけろう蝕の最も重要
な病原菌である。同菌は、ＤＮＡの性状等に基づき６菌
種に分類され、そのうちヒドロ腔内から分離されるのは
鎧ｙ囮±遼匹肥（以下Ｓ、と略す）ｃｒｉｃｅｔｕｓ　
（血清型ａ）、Ｓｏｍｕｔａｎｓ（血清型且、！および
工）、Ｓ、５ｏｂｒｉｎｕｓ（血清型”　、　ｊｆ−）
である。ミュータンスレンサ球菌は、その表層に血清型
特異多糖抗原、リボタイコ酸、タンパク抗原など、さま
ざまな抗原性を有する物質をもっている。

これらの菌体表層物質の中で特に分子量１８万〜２２万
のタンパク抗原は、ミュータンスレンサ球菌中の各菌種
である程度の共通抗原性を示す物質であり、さまざまな
名前で呼ばれている。

本明細書では、このタンパク抗原をＰＡ　（Ｐｒｏｔｅ
ｉｎＡｎｔｉｇｅｎ）と呼ぶ。

このＰＡに相当するミュータンスレンサ球菌のタンパク
質抗原は、現在う蝕予防ワクチンとして最も注目されて
おり、特表昭５６−５０１３６４号公報には、特定の性
能を示す抗原１／ｉｆをう蝕ワクチンとして使用するこ
とが報告されている。

また、特開昭５８−１６４５１８号公報には、ストレプ
トコツカス属微生物の菌体の表層またはその抽出物を抗
原とした虫歯予防用ワクチンが開示されている。

以上のように、タンパク抗原ＰＡをう蝕予防ワクチンと
して使用することは従来から知られていたが、従来はこ
のワクチンを注射または経口投与により使用していた。

しかしながら、経皮、経内、静脈等による注射免疫の場
合には、局所における炎症の可能性があり、機能障害を
起こす恐れもある。また、注射は、苦痛を伴うことから
、特につ蝕発生に重要期となる幼児や児童の場合には問
題となり、また、投与箇所、例えば耳下腺近傍などでは
投与に対する抵抗感もある。さらに、注射投与では、唾
液中の抗体価が上昇し難いという欠点もあった。

経口投与の場合には、胃で消化される可能性があり、ま
た、免疫寛容を起こして抗原に対する応答性がなくなり
易いという問題があった。

さらに、経口免疫では抗体価が上がり難いという欠点が
あった。また、鼻粘膜から物質を吸収させる方法もある
が、鼻粘膜から高分子物質を吸収させることは難しく、
その限界はペプチドの吸収の場合、大きくても分子量１
万前後と考えられていた。

が　　しようとする本発明は、タンパク抗原ＰＡを効率よく簡単に体内に吸
収させるワクチン組成物を提供するものである。

本発明は、また、タンパク抗原ＰＡ投与後の抗体価を効
率よく上昇させ、従来は難しかった経口ワクチンおよび
経鼻ワクチンにおいてもワクチン効果を十分に発揮せし
めるワクチン組成物を提供するものである。

見回ムｌ炭本発明のう蝕予防ワクチン組成物は、ミュータンスレン
サ球菌の菌体表層または菌体外タンパク抗原を含み、さ
らに、胆汁酸またはその誘導体、もしくはそれらの塩（
以下、胆汁酸化合物と総称する）を含有することを特徴
とする。

本発明は、また、上記う蝕ワクチン組成物に、さらにコ
レラトキシンＢサブユニットおよび／または界面活性剤
を配合したことを特徴とする。

以下１本発明についてさらに詳細に説明する。

タンパク抗原ＰＡは、前述のようにミュータンスレンサ
球菌の菌体表層または菌体外産生物から得ることができ
る。また、遺伝子の組換え体によっても、タンパク抗原
ＰＡを得ることができる。このようなＰＡは、遺伝子組
換え体由来のＰＡであることを示すために、ｒＰＡ（ｒ
ｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＰＡ）と呼ぶ。

さらに、ＰＡの由来を示すために、例えば血清型■のＳ
　、　５ｏｂｒｉｎｕｓから得たＰＡをＰＡｇ、同菌の
遺伝子組み換えＰＡをｒＰＡｇというようにＰＡまたは
ｒＰＡの語尾に由来菌の血清型を付けて呼ぶこともある
。

血清型−９−のＳ、ｍｕｔａｎＳ由来のタンパク抗原で
あるＰＡｃは、菌体表層のタンパク質であるが、培養液
中にも分泌する。よって、ＰＡｃの調製はＳ、ｍｕｔａ
ｎｓの培養後の培養液を用いるのが平易である。例えば
、Ｓ、ｍｕｔａｎｓＡＴＣＣ２５１７５株を、プレイン
ハートインフュージョン培地（８日り社、Ｄｉｆｃｏ社
など）の透析外液で培養後、その培養上清を６０％飽和
硫酸アンモニウムにて塩析し、５０１トリス−塩酸緩衝
液（ＰＩ（７゜５）で溶解、透析する。次いで、この緩
衝液で平衡化したＤＥＡＥ−５ｅｐｈａｃｅｌ　（ファ
ルマシア社製）カラムに本棚品を添加し、０〜０．５Ｍ
のＮ　ａ　Ｃ１濃度勾配溶出を行なうと、ＰＡｃは約０
．２ＭのＮ　ａ　Ｃｌ濃度で溶出する。ＰＡｃ画分をプ
ールして濃縮後、さらに５ｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−６
Ｂによりゲル濾過を行ない、ＰＡｃ溶出画分を分取して
精製ＰＡｃとする。Ｓ、ｒｎｕｔａｎｓＧＳ−５（Ｋ−
３）株［微工研条寄第２４３７号］等のｒＰＡｃを産生
ずる遺伝子組換え株を用いて同様の操作を行なうことに
より、ｒＰＡｃが得られる。他の血清型のミュータンス
レンサ球菌由来のＰＡまたはｒＰＡも同様に調製可能で
ある。

本発明では、この精製ＰＡに胆汁酸化合物を配合し、必
要に応じて防腐剤、保湿剤、粘結剤、アジュバント、吸
収促進剤等を添加して、製剤化する。

１回に投与するワクチン組成物中のＰＡの量は、０．０
０２〜５００ｍｇが好適であり、好ましくは０．０５〜
１００ｍｇである。

使用される胆汁酸としてはエチオビリアン酸、エチオア
ロビリアン酸、エチアン酸、３−ハイドロキシ−ツルー
５α−コラン酸、ツルー５α−コラン酸、デヒドロコー
ル酸、シリアン酸、エチオビリアン酸、Ｉ２−ケトコラ
ン酸、リトコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシ
コール酸、コール酸、コラン酸などが挙げられ、これら
のナトリウム塩、カリウム塩やこれらの誘導体、または
誘導体のナトリウム塩、カリウム塩等も使用できる。胆
汁酸誘導体の中でも、胆汁酸とアミノ酸とのアミド化合
物、または胆汁酸とアミノスルホン酸とのアミド化合物
もしくはそれらのナトリウム塩、カリウム塩は本発明に
好適である。ここで、アミノ酸、アミノスルボン酸の例
としてはグリシン、セリン、アスパラギン、アスパラギ
ン酸、タウリンなどが挙げられる。

胆汁酸化合物は、ワクチン組成物中に０．００２〜２重
量％配合することが好適であり、好ましくは０．６〜１
．５重量％である。

本発明のワクチン組成物の投与量は、点鼻の場合０．０４ｍＱ〜０．６ｍ　Ｑ　／回が好適で
あり、経口の場合０．２〜２００ｒｍ　Ｑ　／回が好適
である。また。

投与回数は、２回以上が好適であり、好ましくは３〜６
回である。

このように点鼻または経口投与することにより、投与が
簡単で大勢の人間を対象とすることができ、苦痛を伴う
こともない。免疫は最低２回の投与が必要なので、簡便
さ及び苦痛の無さは重要である。

さらに、う蝕予防組成物中にコレラトキシンＢサブユニ
ットおよび／または界面活性剤を添加することにより、
投与後の抗体価を効率よく上昇させることができる。

コレラトキシンＢサブユニットの配合量は、ワクチン組
成物中に１０μｇ　〜５００ｍｇ１０．２ｍ　Ｑが好適
であり、好ましくは、５０　ｐ　ｇ−２００ｍｇ１０．
２ｍ　Ｑである。コレラトキシンＢサブユニットは、配
合するだけでも良いが、ＰＡとコンジュゲートすること
によってワクチン効果が増強される場合もある。

界面活性剤としては、アニオン界面活性剤、カチオン界
面活性剤、ノニオン界面活性剤、両性界面活性剤などが
用いられ、特に、カチオン界面活性剤が好適である。ま
た、これら界面活性剤を併用することもできる。界面活
性剤の配合量は、アニオン界面活性剤およびノニオン界
面活性剤の場合は、０，０１〜１０重量％が好適であり
、好ましくは、０．１〜５重量％である。また、カチオ
ン界面活性剤の場合は、０．００１〜１．０重量％、好
ましくは０．０１〜０．５重量％である。

アニオン界面活性剤としては、高級脂肪酸塩（石けん）
、ラウロイルザルコシネート等のＮ−アシルアミノ酸塩
などのカルボン酸塩；ラウリルサルフェート塩等のアル
キル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルサル
フェート等のアルキルエーテル硫酸塩、脂肪酸モノグリ
セリド硫酸塩などの硫酸エステル塩；アルカンスルホン
酸塩、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム等のスルホ
コハク酸塩、Ｎ−アシルスルホン酸塩、脂肪酸モノグリ
セリドスルホン酸塩、α−スルホ脂肪酸エステル塩など
のスルホン酸塩；アルキルリン酸塩、アルキルエーテル
リン酸塩などが挙げられる。

カチオン界面活性剤としては、塩化ベンゼトニウム、塩
化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウム、クロル
ヘキシジン・グルコネイト、クロルヘキシジン・塩酸塩
等の第４級アンモニウム塩などが挙げられる。

ノニオン界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアル
キルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエ
ーテル（Ｔｒｉｔ、ｏｎ　Ｘ−１００等）、ポリオキシ
エチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタ
ン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｔｉｅｅｎ　８
０等）、ポリオキシエチレン（硬化）ヒマシ油、ポリオ
キシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエ
チレンポリオキシプロピレン共重合体などのノニオン界
面活性剤が挙げられる。

本発明のう蝕予防ワクチン組成物には、さらに、ミョウ
バン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸
アルミニウム、ムラミルジペプチド等のアジュバント；
オレイン酸、ステアリン酸、パルミチン酸等のアジュバ
ント脂溶成分（吸収促進剤）；グリセリン、ソルビット
、キシリット、マンニット、ラフチット、マルチット、
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ　４００．　ＰＥＧ４
０００等）等の保湿剤；ソルビン酸、クロロブタノール
、安息香酸、パラオキシ安息香酸エステル、はう酸、デ
ヒドロ酢酸、チモール等の防腐剤；ポリアクリル酸ナト
リウム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン
、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセル
ロース、ヒドロキシエチルセルロース、カラギーナン、
アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、キサンタンガム
、モンモリロナイト、カオリン、水和シリカ、ケイ酸ア
ルミニウムマグネシウム、ヘクトライトなどの粘結剤を
配合することができる。

さらに、本発明のタンパク抗原ＰＡおよび胆汁酸化合物
を、あるいはこれと界面活性剤、コレラトキシンＢサブ
ユニットとを併用として、哺乳類、鳥類等の生体に投与
し免疫することによって得られた抗体を、う蝕予防の有
効成分として用いることもできる。

見匪例処員本発明のう蝕ワクチン組成物によれば、タンパク抗原Ｐ
Ａと胆汁酸化合物とを併用投与することにより、効率的
に抗体価を上昇させることができ、また、鼻腔内または
経口投与によることができるので、苦痛を伴わず簡便で
ある。

さらに、コレラトキシンＢサブユニットまたは界面活性
剤を配合することにより、いっそう効率的に抗体価を上
昇させることができる。

実施例ＩＰＡｇあるいはＰＡｇ−コレラトキシンＢサブユニット
コンジュゲート、胆汁酸化合物、さらには界面活性剤ま
たはコレラトキシンＢサブユニットを含む混合液を、５
週令のＢＡＬＢ／ｃマウス各群５匹に、２週毎に３回、
鼻腔内投与または経口投与することにより免疫した。３
次免疫の１週間後に血液または唾液を採取し、ＥＬＩＳ
Ａ法によってその抗体価を測定した。投与溶液の組成は
表−１の通りであり、Ｏの付いている物質を含む溶液を
各群に投与した。基剤には、リン酸緩衝生理食塩水（ｐ
Ｈ７，４）を用いた。投与液量は、鼻腔内投与では１０
μρ、経口投与では０．５ｍ１２とした。

（以下余白）実験結果は、表−２の通りとなった。なお、血中抗体は
１／４００希釈血清を、唾液中杭体は１／２０希釈唾液
を用いて行なった時の、ＥＬＩＳＡのｏＤ値で表した。

以下の各実施例のう蝕ワクチン組成物を調製した。

実施例２グリココール酸ナトリウム　　　　　１．２ｇＰ　Ａ　
ｇ　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ，２５ｇ塩化ナト
リウム　　　　　　　　　　０・８ｇ精製氷　　　　　
　　　　　　　　　残量実施例３グリココール酸ナトリウム塩化ベンゼトニウムコレラトキシンＢサブユニッグリセリンヒドロキシエチルセルロース　Ａ　ｃ精製水実施例４デオキシコール酸ナトリウムグリセリン脂肪酸エステルソルビットメチルセルロースｒ　Ｐ　Ａ　ｃ塩化ベンザルコニウム製水ト１．０　ｇ０．１　ｇ０．０２ｇ０．８　ｇ０．８　ｇＯ，ＯＬｇ量１００　　　ｇ０．８　ｇ０．４　ｇ０．６　ｇ０．６　ｇ０．０２ｇ０．０５ｇ量実施例５タウロコール酸ナトリウムポリオキシエチレン硬化ヒマシ油キシリットヒドロキシメチルセルロースＡｅ安息香酸ミョウバン製氷実施例６ケノデオキシコール酸ナトリウムソルビットコレラトキシンＢサブユニットアラビアゴムｒ　Ｐ　Ａ　ｇムラミルジペプチド製１．５　ｇ０．８　ｇ０．５　ｇ０．８　ｇ０．０１ｇ０．１　ｇ０．０２ｇ残量００　　ｇ１．２　ｇ０．７　ｇ０．０１ｇ０．３　ｇ０．０５ｇ０．０５ｇ量００ｇ実施例７デオキシコール酸カリウムクロルヘキシジングルコネイトグリセリンヒドロキシエチルセルロースＡｄコレラトキシンＢサブユニツ水酸化アルミニウム精製水ト０．３　ｇ０．１　ｇ０．８　ｇ０．５　ｇ０．０８ｇ０．０８ｇ０．１　ｇ残量００　　ｇ（以下余白）実施例８タウロコール酸カリウム塩化ベンゼトニウムグリセリンヒドロキシエチルセルロースＡｆブチルパラベンＨＣＩステアリン酸ミゴウバン水実施例９グリココール酸カリウム　Ａ　ａ塩化カリウムリン酸１カリウム塩化ナトリウムリン酸２ナトリウム・７Ｈ２０精製水０．８　ｇ０．０１ｇ０．８　ｇ０．５　ｇ０．０８ｇ０．１　ｇ０．０５ｇ０．１　ｇ量１００　　　ｇ０．８　ｇ０．０５ｇ０．０２ｇ０．０２ｇ０．８　ｇ０．２２ｇ残量実施例１０デオキシコール酸ナトリウムソジウムラウロイルザルコシネートグリセリン安息香酸実施例１１ケノデオキシコール酸ナトリウムヒドロキシエチルセルロース塩化ベンザルコニウム塩化ナトリウム１ｇ０．５　ｇ０．０５ｇ０．６ｇ

Claims

【特許請求の範囲】１、ミュータンスレンサ球菌の菌体表層または菌体外タ
ンパク抗原を含み、さらに、胆汁酸またはその誘導体、
もしくはそれらの塩を含有することを特徴とするう蝕ワ
クチン組成物。２、上記胆汁酸誘導体が、胆汁酸にアミノ酸またはアミ
ノスルホン酸が結合した物質である請求項２に記載のう
蝕ワクチン組成物。３、さらに、コレラトキシンＢサブユニットおよび／ま
たは界面活性剤を含有する請求項１または２に記載のう
蝕ワクチン組成物。４、鼻腔内投与または経口投与される請求項１〜３のい
ずれか一項に記載のう蝕ワクチン組成物。