JPH04500384A

JPH04500384A - 酵素洗剤組成物

Info

Publication number: JPH04500384A
Application number: JP50895390A
Authority: JP
Inventors: カステレイン，エリツク; エフモント，マールテン・ロベルト; ハーヘルカンプ，ヨハン; マルツフ，ヨン・ダヒト; ムーレン，アルノルダス・テオドルス・アントニウス
Original assignee: ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシヤープ
Priority date: 1989-06-26
Filing date: 1990-06-26
Publication date: 1992-01-23
Also published as: EP0405902A1; WO1991000335A1; BR9006832A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】酸素洗剤組成物本発明は、酸素洗剤組成物、特に突然変異ズブチリシンプロテアーゼを含有する組成物に係わる。先行出願の国際特許出願箱１１０８９７０６２７９号（但し未公開）は、突然変異ズブチリシン系プロテアーゼと、洗濯組成物におけるそれらの使用とを開示している０本発明は特に、特許出願箱ＷＯ８９１０６２７９号に記載のごとき突然変異プロテアーゼを配合した新規の洗剤組成物に係わる。

特定の実施態様においては本発明は更に、リパーゼと組み合わせた改質プロテアーゼの使用に係わる。

従来の技術ズブチリシンプロテアーゼ及びそれらを含有する洗剤組成物、特に洗濯洗剤は公知であり、広く使用されている。

更にリパーゼも公知であり、洗剤及び洗浄組成物の成分として使用されている。

多数の特許明細書及び他の文書が、そのうちの幾つかは洗剤及び洗浄用途に適しているとされているズブチリシンプロテアーゼを含む種々の突然変異加水分解酵素を記載している。かかる特許の例としては、欧州特許ＥＰ第０１３０７５６号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、欧州特許ＥＰ第０２１４４３５号（Ｈｅｎｋｅｌ）、国際特許−〇第８７１０４４６１号（＾Ｈｅｎ）、国際特許１１１Ｏ第８７１０５０５０　（Ｇｅｎｅｘ）、欧州特許ＥＰ第８７３０３７６１号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、欧州特許ＥＰ第０２６０１０５号（Ｇｅｎｅｎｅｏｒ）、国際特許− 〇第８８１０８０２８号（ＣｅｎｅＸ）、国ｔａＵ許−〇第８８１０６６２４号（に１ｓｔ−ｂｒｏｃａｄｅｓ）、国際特許１１１Ｏ第８８１０７５７８号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）及び国際特許−０第８８１０８０３３号（＾［ｅｎ）を挙げるにとができる。　Ｔｈｏｍａｓら（Ｎａｔｕｒｅ、３Ｉ８（１９８５）３７５ −６）は、ズブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’における酵素の１１１１依存性を変更する突然変異を記載している。

先行出願の国際特許用［ｉ［０第８９１０６２７９号〈但し未公開）は、本発明に適用される突然変異ズブチリシン系プロテアーゼを開示しており、所定の洗濯条件下でのそ力らの試験について記載している。

発明の詳細本発明は、突然変異ズブチリシンプロテアーゼを含有する酵素洗剤組成物であって、該プロテアーゼが位置６、９．１１．１２．１９．２５．３６．３１．３８．５３．５４．５５，５６，５７，５８，５９，６７．７１，８９゜１１１、１１５．１２０．１２１．１２２　、１２４　、１２８．１３１．１４０．１５３　、１５４　、１５６．１５８．１５９゜１６０、１６１．１６２　、１６：ｌ　、　１６４　、１６５．１６６、１６８．１７０．１７２　、１７５．１８０．１８２　、１８６゜１．８７．１９］、、　１９４　、１９５．１９９　、２１８　、２１９．２２６．２〕４．２３５，２３６．２’３）　、　２：１８　、Q４１゜２６０．２６１，２６２，２６５，２６８，２７５゜の１力所以上に、対応する親プロテアーゼに対して置換、挿入または欠失によって変更されなアミノｒＩ！ｉ残基を含んでおり、洗剤組成物の残りの部分が、ａ）　リン酸塩ビルダー、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面′活性剤、アク１、ｌル系または等価の（ｅｑｕｉｖ’ａｌｅｎｔ）ポリマー、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、アミノ含有漂白剤活性化物質、シリケートまたは他の構造形成体、用途に所望のｐＨに調整するためのアルカリ及び中性無機塩を含有する粉末洗剤と１．て調製されるか、ｂ）　ゼオライトビルダー、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、アクリル系または等価のポリマー、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、アミン含有漂白剤活性化物質、シリケートまたは他の構造形成体（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｎｔ）、用途に所望のｐＨに調整するだめのアルカリ及び中性無機塩を含有する粉末洗剤として調製されるか、Ｃ）アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、保湿剤、有機酸、カセイアルカリを含有し、ｐＨが９〜１０の値に調整された水性洗剤液として調製されるか、ｄ）実質的に直鎖状アルコキシル化第−級アルコールからなる非イオン性液体界面活性剤、トリアセチン、三リン酸すｌ・リウム、カセイアルカリ、過ホウ酸−水和物漂白剤前駆体及び第三級アミン漂白剤活性化物質を含有し、ｐＨが９へ−１０の値に調整された非水性洗剤液として調製されるか、ｅ）　アニオン性界面活性剤及びアルコキシル化の程度がそれぞれ約７及び約３の非イオン性界面活性剤の混合物、少量のまたは実質的にゼロの中性無機塩、リン酸塩ビルダー、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、第三級アミン漂白剤活性化物質、ケイ酸ナトリウム、微量成分並びに水分を含有する、最低でも６００．／ｌの嵩密度を有する顆粒の形態の粉末洗剤として調製されるか、ｆ）アニオン性界面活性剤及びアルコキシル化の程度がそれぞれ約７及び約３の非イオン性界面活性剤の混合物、少量のまたは実質的にゼロの中性無機塩、ゼオライトビルダー、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、第三級アミン漂白剤活性化物質、ケイ酸ナトリウム、微量成分及び水分を含有する、最低でも６００ｇ／ｌの嵩密度を有する顆粒の形態の粉末洗剤として調製されるか、ｇ）アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、アクリル系ポリマー、脂肪酸石鹸、炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、クレー粒子、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、第三級アミン漂白剤活性化物質、ケイ酸ナトリウム、微量成分及び水分を含有する粉末洗剤として調製されるか、ｈ）オルトリン酸で中和し、プロテアーゼと混合し、更にギ酸ナトリウム、ホウ砂、プロピレングリコール及び硫酸ナトリウムと混合し、次いで石鹸生産ラインにおいて圧縮した（ｐｌｏｄｄｅｄ）、タロウ油及びヤシ油の全鹸化（ｐａｎ−ｓａｐ。

ｎ１ｆｉｅｄ）混合物をベースとする石鹸を含有する棒状洗剤（石鹸）として調製される、ことを特徴とする組成物を提供する。

本発明の洗剤組成物は、公知の組成物と比較して向上された性能及び／または酵素安定性を含む長所を与え得る。

本明細書中、本発明に従って使用されるズブチリシンプロテアーゼにおける突然変異の主体であるアミノ酸配列番号位置の参照は、後述のズブチリシンＢＰＮ’ の配列におけるアミノ酸残基及びそれらの番号を参照して表わす、更に本発明は、他のズブチリシンプロテアーゼの改質変種も含んでいる０本明細書において参照する番号の突然変異部位をかかる他のプロテアーゼに適用するために、参照番号の数字部分は、ズブチリシンＢＰＮ’との相同性が最大であるという意味で、かかる他の類似ズブチリシンプロテアーゼの対応する位置に対する参照番号でもあると理解されたい、このような対応位置は、ＢＰＮ’の遺伝子のものまたは他の参照配列と比較して、かかる他のプロテアーゼの遺伝子に見掛は上の欠失または挿入がある故に、他のプロテアーゼの鎖に沿って数め相違があり得る２アミノ酸の欠失または不在は”＊”で表わし、ＢＰＮ’に対する挿入は、その位置番号に英字の小文字を添えて表わすものとする。

ズブチリシンＢＰＮ’は以下の配列を有する（Ｈｅｌｌｓら、＜１９８３）。

Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、１１．７９１１〜７９２５　＠照）：Ｎｏ：　１　１０ ★−自−☆−貴−貞−＊−自−Ａ−Ｑ−５−＊−Ｖ−Ｐ−”／−Ｇ−Ｖ−５−Ｑ −ニーに一嚢−＊−会−自−＊　−Ａ−Ｐ−７％　−Ｎｏ　：　２０　３０　４０Ｌ−Ｈ−５−Ｑ−Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｇ−５−Ｎ−Ｖ−に−Ｖ−Ａ−Ｖ−ニーＤ−５− Ｇ−ニーＤ−５−５−Ｈ−Ｐ−Ｄ−Ｌ−★−Ｎｏ：　５０　６０ −−に−Ｖ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−５−Ｍ−Ｖ−Ｐ−５−Ｅ−Ｔ−Ｎ−Ｐ−Ｆ−僑− ＊−Ｑ−Ｄ−Ｎ−Ｎ−５−Ｈ−Ｇ−Ｔ−Ｈ−Ｖ−Ｎｏ：　７０　８０　９０Ａ−Ｇ−Ｔ−Ｖ−Ａ−Ａ−Ｌ−＊−Ｎ−Ｎ−５−１−Ｇ−Ｖ−Ｌ−Ｇ−Ｖ−Ａ− Ｐ−５−Ａ−５−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｖ−に−Ｖ−Ｎｏ：　１００　、　１１０　１２ＯＬ−Ｇ−八−Ｄ−Ｇ−５−Ｇ−Ｑ−Ｙ−５−Ｗ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｇ−ニーＥ−Ｗ− ＊−Ａ−Ｉ−Ａ−六−Ｎ−Ｎ−Ｍ−Ｄ−会−ＮＱ：　ｌ］ｏ　１４００−會−自−金−ｖ−ニーＮ−Ｍ−Ｓ−Ｌ−Ｇ−Ｇ−Ｐ−５−Ｇ−５−Ａ−Ａ− Ｌ−に−Ａ−Ａ−Ｖ−Ｄ−に−Ａ−Ｖ−Ａ−Ｎｏ：　１５０　１６０　１７０Ｓ−Ｇ−Ｖ−Ｖ−Ｖ−Ｖ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｎ−Ｅ−Ｇ−Ｔ−５−Ｇ−５−５− ５−Ｔ−Ｖ−Ｇ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−に−Ｙ−Ｐ−Ｎｏ：　１８０　１９０　２０Ｏ５−Ｖ−１−Ａ−Ｖ−Ｇ−Ａ−Ｖ−Ｄ−５−Ｓ−Ｎ−Ｑ−Ｒ−八−５−Ｆ−５− ５−Ｖ−Ｇ−Ｐ−Ｅ−Ｌ−Ｄ−Ｖ−Ｍ−Ａ−Ｎｏ：　２１０　２２０ｐ−Ｇ−■＋５−■−Ｑ−５−Ｔ　Ｌ−！’　Ｇ−Ｎ−＊−Ｋ・−金−Ｙ−Ｇ− Ａ・−Ｙ−Ｎ−Ｇ−Ｔ−５−Ｍ−Ａ−５−Ｐ　−Ｈ−Ｎｏ：　２：１０　２４０　２５０Ｖ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｌ−ニーＬ−５−に−Ｈ−Ｐ−Ｎ−Ｗ−Ｔ−Ｎ−Ｔ− Ｑ−Ｖ−Ｒ−５−５−Ｌ−Ｅ−Ｎ−Ｔ−Ｔ−Ｎａ：　２６０　２７０　２７５Ｔ−に−Ｌ−Ｇ−Ｄ−５−Ｆ−Ｙ−Ｙ−愉−Ｇ−に−Ｇ−Ｌ−■−Ｎ−Ｖ−Ｑ− Ａ−Ａ−Ａ−Ｑズブチリシン３０９は以下の配列を有する（特許出願１’ＣＴ／Ｄに８８１０ＯＯ０２＝ＷＯ８９１０６２７９、参照）三Ｎｏ：　２０　３０　４０Ａ−Ｈ−Ｎ−Ｒ−Ｇ−Ｌ−Ｔ−Ｇ−５−Ｇ−Ｖ−に−Ｖ−Ａ−Ｖ−Ｌ−Ｄ−Ｔ− Ｇ−ニー貴−５−Ｔ−Ｈ−Ｐ−Ｄ−Ｌ−＊−Ｎｏ：　５０　６０＊−Ｎ−Ｉ−Ｒ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｓ−Ｆ−Ｖ−Ｐ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−貴−５−Ｔ−＊− 嚢−Ｑ−Ｄ−Ｇ−Ｎ−Ｇ−Ｈ−Ｇ−Ｔ−Ｈ−Ｖ−Ｎｏ：　７０　８０　９０Ａ−Ｇ−Ｔ−■−Ａ−Ａ−Ｌ−＊−Ｎ−Ｎ−５−１−に−Ｖ−Ｌ−Ｇ−Ｖ−Ａ− Ｐ−５−Ａ−Ｅ−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｖ−に−Ｖ−Ｎｏ：　Ｚｏｏ　ｎｏ　１２０Ｌ−Ｇ−Ａ−５−Ｇ−５−Ｇ−９−Ｖ−５−５−ニーＡ−Ｑ−Ｇ−Ｌ−Ｅ−Ｗ− ＊−へ−Ｇ−Ｎ−自−Ｎ−Ｇ−Ｍ−Ｈ−貴−ＮＯ：　ｌコ０　１４０＊−嚢−＊−貴−Ｖ−Ａ−Ｎ−Ｌ−５−Ｌ−Ｇ−５−Ｐ−５−Ｐ−５−Ａ−Ｔ− Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ａ−Ｖ−Ｎ−５−Ａ−Ｔ−５−Ｎｏ：　１５０　１６０　１７０Ｒ−Ｇ−Ｖ−Ｌ−Ｖ−Ｖ−Ａ−Ａ−５−Ｇ−Ｎ−５−Ｇ−Ａ−嚢−Ｇ−５−ニーＳ−嚢−査−＊−Ｙ−Ｐ−Ａ−Ｒ−Ｙ−Ａ−Ｎｏ：　１８０　１９０　２ｏ。

Ｎ−Ａ−Ｍ−Ａ−Ｖ−Ｇ−八−Ｔ−Ｄ−Ｑ−Ｎ−Ｎ−Ｎ−Ｒ−Ａ−５−Ｆ−５− Ｑ−Ｙ−Ｇ−Ａ−Ｇ−Ｌ−Ｄ（−Ｖ−Ａ−Ｎｏ：　２１０　２２０Ｐ−Ｇ−Ｖ−Ｎ−Ｖ−Ｑ−５−Ｔ−Ｙ−Ｐ−Ｇ−５−六−Ｔ−会−Ｙ−Ａ−５− Ｌ−Ｎ−Ｇ−Ｔ−５−Ｍ−Ａ−Ｔ−Ｐ−Ｈ−Ｎｏ：　２３０　２４０　２５０Ｖ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ａ−Ｌ−Ｖ−に−Ｑ−に−Ｎ−Ｐ−５−Ｗ−５−Ｎ−Ｖ− Ｑ−ニーＲ−Ｎ−Ｈ−Ｌ−に−Ｎ−Ｔ−Ａ−Ｎｏ：　２６０　２７０　２７５Ｔ−５−Ｌ−Ｇ−５−Ｔ−Ｎ−Ｌ−Ｙ−自−Ｇ−５−Ｇ−Ｌ−Ｖ−Ｎ−Ａ−Ｅ− Ａ−Ａ−Ｔ−Ｒ上記配列において、個々の文字コードは以下の省略記号に従うアミノ酸残基を表わす。

＾　＝　＾ｌａ　＝　アラニンＶ　＝　Ｖａｌ　＝　バリンＬ　＝　Ｌｅｕ　＝　ロイシンＩ　＝　ｌｉｅ　＝　インロイシンＰ　＝Ｐｒｏ　＝　プロリンＦ　＝　Ｐｈｅ　−フェニルアラニン鰐　＝　Ｔｒｐ　＝　トリプトファンＮ　＝　Ｎｅｔ　＝　メチオニンＧ　＝　Ｇｌ、＝　グリシンＳ　＝　Ｓｅｒ　＝　セリンＴ　−Ｔｈｒ　＝　トレオニンＣ＝　Ｃｙｇ　＝　システィンＹ　−Ｔｙｒ　＝　チロシンＮ　＝　＾ｓｎ　＝＝　アスパラギンＱ　＝　Ｃｌｎ　＝　グルタミンＤ　＝　＾ｓｐ　＝　アスパラギン酸Ｅ　＝　Ｇｌｕ　＝　グルタミン酸Ｋ　＝　Ｌｙｓ　＝　リシンＲ＝　＾ｒｇ　＝　アルギニンＨ＝　Ｈｉｓ　＝　ヒスデシン驚くべきことには、プロテアーゼのリパーゼとの相容性は、プロテアーゼのｐ＋にも影響されるし、プロテアーゼの活性部位に対して電荷が局在する位置にも影響されることが判った。即ち、負の電荷を導入または正の電荷を除去すると、等電点ｐｘの低下を生じ、プロテアーゼのリパーゼとの相容性を向上することができ、この種の突然変異を活性部位により近いところで生起すると、１０テアーゼのリパーゼとの相客性をより大きく向上することができる。

等電点ｐｒとは、（場合によっては金属イオンまたは他のイオンが結合した）酵素分子が中性、即ち静電電荷の総和がゼロとなるｐＨ値のことである。

等電点は便宜的には、当該酵素における種々の荷電残基におけるｐＨ値を使用し、反復適用（ｉｔｅｒａｔｉｏｎ）によって酵素分子の実効電荷がゼロとなるｐＨ値を見つけることによりおおよそ計算される。

酵素を含む溶液を等電点電気泳動または滴定することにより、ｐｉを実験的に決定することもできる。更に、荷電残基における種々のｎＫ値を滴定【−よって実験的に決定する二ともできる。

ｐｉが変更された突然変異プロテアーゼは、それらを含有する洗剤組成物を記載及び特許請求している同時係属出願（優先権主張は１９８９年６月２６日出願の英国特許ＵＫ第８９１４６０４．７号）に記載されており、対応する突然変異プロテアーゼ自体は、同時係属出願　（優先権主張は１９８９年６月２６日出願のデンマーク特許ＤＫ第３１６９／８９号）に記載及び特許請求されている。

洗剤組成物のある実施態様においては突然変異ズブチリシンプロテアーゼは、活性部位の約２０人以内、例えば位置６．３６〜３８．５３〜５９．８９．１２８．１３１．１５６．１５８〜１６ｏ、１６２〜１６４．１６６．１７０．１８２．１８６．１９５及び／または２１８の１力所以上に、対応する親プロテアーゼに対して置換、欠失または隣位挿入することにより変更されたアミノ酸残基を含む。

ズブチリシンプロテアーゼの構造及びアミノ酸番号配列についての詳細情報は、先行出願の国際特許出願−〇第８９７０６２７９号及び同時係属出願−−＜優先権主張は１９８９年６月２６日出願の英国特許出願ＵＫ第８９１４６０４．７号）に与えられている。

突然′Ｒ１！プロテアーゼ生産の技術は、国際特許１ＩＩＯ第８９１０６２７９号（この特許明細書は参照により本明細書の一部を構成するものとする）に記載されており、更に適用可能なかかる方法は、上述の同時係属比ｍ＜これも参照により本明細書の一部を構成するものとする）に与えられている。

本発明の範囲にある特定の洗剤組成物においてプロテアーゼは、ズブチリシンＢＰＮ’、ズブチリシンアミローザソ力ロリテイクス（ａ−ｙｌｏ−ｓａｅｅｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ズブチリシン１６８、ズブチリシンメシンチコベブチダーゼ（曽ｅｓｉｎｔｉｅｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、ズブチリシンカルスベルブ（Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ）、ズブチリシンＤＹ、ズブチリシン３０９、ズブチリシン１４７、ズブチリシンサーミターゼ（ｔｈｅｒｌｌｌｉｔａｓｅ）、及びプロテイナーゼＫｔたはアクアリシン（ｌｑｌｌｌｙｓｉｎ）から選択される親酵素の突然変異を表わし得る。

特定の実施Ｒ様においてはプロテアーゼは、上述の省略記号によるアミノ酸残基の表示と配列位１の表示とによって表される突然変異：　６−ｔｙｒ、６７−ｇｌｕ、６７−ａｓｐ、６８−ｃｙｓ、６８−ｓｅｔ、７１−ｇｌｕ、１８８−ａｌａ、１７０−Ｌｙｒ、１７５−ｉｉｅ、２１９−ｓｅｔ、２７５−ｇｌｕ、１９−Ｈ１ｙ＋２１９−ｃｙｓ、１５３−ａｌａ＋２１８−ｓｅｔの任意のものを含むように改質された親酵素を表わし得る。

別の例によるとプロテアーゼの突然変異は３６．５６．１５９．１６４〜１６６位のいずれかにおける１個以上のアミノ酸残基の挿入により構成され得る。

本発明に関連して使用される好適な突然変異体の具体例を以下に挙げ、略号と対応させる。

Ｓ１＝に１．９５ＥＳ３＝　Ｒ１７０ＹＳ４＝　Ｇ１９５Ｅ＋Ｒ１７０ＹＳ１２＝　に１９５Ｅ＋　Ｒ１７０Ｙ＋　Ｋ２５１ＥＳ１９＝　Ｇ１９５Ｅ＋　Ｒ１７０Ｙ＋　［１１２０Ｄ＋　Ｋ２３５ＬＳ２０＝　Ｇ１９５Ｅ＋　Ｒ１７０Ｙ＋旧２０Ｄ＋　Ｋ２３５Ｌ＋　Ｋ２５１ＥＣ２＝　ＤＩ２０ＫＣ３＝Ｄ１４０ＫＣ４＝　ＤＩ２０Ｋ　十Ｄ１４ＫＣ６＝　ＤＩ２０に＋　Ｋ２７０ＤＣＢ＝０１７２ＫＣ１０＝　ＤＩ４に＋　ＤＩ２０に＋ＤＩ４０に＋　０１７２Ｋ。

Ｓ系列突然変異体は好ましくは親ズブチリシンとしてズブチリシン３０９に基づく。Ｃ突然変異体は好ましくはズブチリシンＢＰＮ’　／ズブチリシンＣａｒｉｓｂｅｒｇに基づく。

特定の態様によると、本発明は本発明のプロテアーゼを含有し且つ以下の特徴を有する酵素洗剤に係る９界面活性剤０．４〜０．８ｇ／ｌに対応する割合で使用した場合に９以下の洗濯液ｐＨを与えるように調製された酵素洗剤組成物。

界面活性剤０．４〜０゜８ｇ／ｌに対応する割合で使用した場合に８．５以上の洗濯液ｐＨを与えるように調製された酵素洗剤組成物。

界面活性剤０．４〜０．８＆＃！に対応する割合で使用した場合に０．０３以下、例えば０．０２以下、例えば０．０１以下の洗濯液イオン強度を与えるように調製された酵素洗剤組成物。

界面活性剤０．４〜０．８ｔｐ／１に対応する割合で使用した場合に０．０１以上、例えば０．０２以上の洗濯液イオン強度を与えるように調製された酵素洗剤組成物。

以下、非限定的な実施例により本発明を説明する。

Ｋ凰■］リン酸塩ビルダーを含有する本発明の−Ｂ様に従う洗剤粉末として、界面活性剤合計的１６％、アニオン界面活性剤的９％、非イオン界面活性剤的６％、リン酸塩含有ビルグー的２０％、アクリル又は等価のポリマー約３．５％、過ホウ酸塩漂白剤前駆物責約６〜１８％、アミ７／含有漂白活性剤約２％、ケイ酸塩又は他の構造形成体的３．５％、酵素約８グリシン単位／ｍｇ、使用時に所望のｐｉｆに調整するためのアルカリ、中性無機塩及び酵素（各酵素的０．５％）を含有する洗剤粉末を調製した。

アニオン界面活性剤はドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム６％と硫酸第一アルキル３％との混合物である。非イオン界面活性剤は１モル当たり７個のエトキシレート残基を有する約ＣＩ３〜Ｃ１５第一アルコールのエトキシレートである。

リン酸塩ビルダーはトリポリリン酸ナトリウムである。ポリマーはポリアクリル酸である。過ホウ酸塩漂白剤前駆物質は四ホウ酸ナトリウム・四水和物又は−水和物である。

活性剤はテトラアセチルエチレンジアミンである。構造形成体はケイ酸ナトリウムである。中性無機塩は硫酸ナトリウムである。酵素は具体例Ｓ１のプロテアーゼである０本実施例の変形によると、酵素はＳ３、Ｓ４、Ｃ２、Ｃ３又はＣ４から選択される。

犬ＪＬｆＬλ ゼオライトビルダーを含有する本発明の１態様による洗剤粉末として、界面活性剤合計的１６％、アニオン界面活性剤的９％、非イオン界面活性剤的６％、ゼオライト含有ビルグー的２０％、アクリル又は等価のポリマー約３．５％、過ホウ酸塩漂白剤前駆物質約６〜１８％、アミノ含有漂白活性剤的２％、ケイ酸塩又は他の構造形成体的３．５％、酵素約８グリシン単位／ｍｇ、使用時に所望のｐｉｆに調整するためのアルカリ、中性無機塩及び酵素（各酵素的０．５％）を含有する洗剤粉末を調製した。

ゼオライトビルダーは＾型ゼオライトである。ポリマーはポリアクリル酸である。過ホウ酸塩漂白剤前駆物質は四ホウ酸ナトリウム・四水和物又は−水和物である。活性剤はテトラアセチルエチレンジアミンである。構造形成体はケイ酸ナトリウムである。中性無機塩は硫酸ナトリウムである。酵素は具体例Ｓ１のプロテアーゼである０本実施例の変形例（ごよると、酵素はＳ３、Ｓ４、Ｃ２、Ｃ３又はＣ４から選択される。

火ＪＬ泗ユ本発明の１態様に従う水性洗剤液として、ドデシルベンゼンスルホン酸１６％、１モル当たりエチレンオキシド７モルを縮合したＣＩ２〜Ｃ１５直鎖第一アル直鎖第一アルコールフンールアミン２％、クエン酸６．５％、キシレンスルホン酸ナトリウム６％、水酸化ナトリウム約４．１％、プロテアーゼ０．５％、微量成分と水１００％までを含有する洗剤液を調製した。

ｐｌｌは９ヘ−１０の値に調整した。酵素は具体例Ｓ２０のプロテアーゼである０本実施例の変形例によると酵素はＳ１９、Ｓ１２、Ｓｌ、Ｓ３及びＳ４から選択される。

１モル当たりエチレンオキシド４．９モルとプロピレンオキシド２．７モルとでアルコキシル化したＣ１３〜Ｃ１５直鎖第一アルコール３８．５％、トリアセチン５％−１二リン酸ナトリウム３０％、ソーダ灰４％、微量のオキソホウ酸塩を含有する過ホウ酸ナトリウム・１水和物１５．５％、ＴＡＥＤ　４％、ＥＤＴ＾０．２５％（ホスホン酸濃度０．１％）、＾ｅｒｏｓｉｌ　Ｏ，６％、ＳＣＭＣ１％及びプロテアーゼ０．６％を使用して本発明の１態様に従う非水性洗剤液を調製した。ｐＨは９〜１０、例えば約９．８の値に調整した。酵素は具体例例Ｓ１、Ｓ３又はＳ４のプロテアーゼである。

Ｋ亀■玉少なくとも６００ｇ／ｌの嵩密度を有する顆粒状であり、界面活性剤約２０重量％（うち約１０％はドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムであり、残余は５ｙｎｐｅｒｏｎｉｃ＾７と５ｙｎｐｅｒｏｎｉｅ＾３との（約５．５％対４．５％）混合物であり、中性無機塩（例えば硫酸ナトリウム）を含まない）、リン酸塩ビルグー的３３％、過ホウ酸ナトリウム・四水和物的１６％、ＴＡＥＤ活性剤約４．５％、ケイ酸ナトリウム約６％、炭酸ナトリウムを含む微量成分的２％、及び水分的１０％を含有する本発明の１態様に従う洗剤粉末を調製した。酵素（各酵素的０．５％）を配合した。プロテアーゼ酵素は具体例Ｓ１の酵素である０本実施例の変形例によると酵素はＳ３、Ｓ４、Ｃ２、Ｃ３又はＣ４から選択される。

え胤■亙少なくとも８００ｇ／ｌの嵩密度を有する顆粒状であり、界面活性剤約２０重量％（うち約９％はドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムであり、残余は５ｙｎｐｅｒｏｎｉｅ＾７とＳｙｎｐｅｒｏｎｉｃ＾３（夫々的５％及び６％）との混合物であり、中性無機塩（例ズばＶｌ酸ナトリウム）を含まない）、ゼオライトビルダー約３０％、過ホウ酸ナトリウム・四水和物的１４％、ＴＡＥＤ活性剤約３６％　炭酸ナトリウトを含む微量代分約９％、　Ｄｅｑｕｅｑｔ２０４７（登録商標）約０．７％、及び水分的１０％を含有する本発明の１態様に従う洗剤粉末を調製した。酵素（各酵素０．５％）を配合した。プロテアーゼ酵素は具体例Ｓｌのプロテアーゼである。本実施例の変形例によると、酵素はＳ３、Ｓ４、Ｃ２、Ｃａ又はＣ４から選択される。

火ＪＬ！！４７ドデシＪレベンゼン′スｌレホン′酸６％、１モル当たりエチレンオキシド７モルと縮合したＣＩ２〜Ｃ１５直鎖アルコール５％、脂肪酸石鹸３％、５ｏｋｏｌａｎ　ＣＰ５ポリマー（登録商標）３％、ゼオライトへ２ｚ％、炭酸ナトリウム１０％、硫酸ナトリウム１７％、クレー粒子８％、過ホウ酸ナトリウム　四水和物１３？６、テトラアセチルエチレンジアミン２％、プロテアーゼ０．５％、微量成分及び水１００％までを含有する本発明の１態様に従う洗剤粉末を調製し、た、ｐＨは９〜１０に調整した。酵素は具体例Ｓ２０のプロテアーゼである０本実施例の変形例によると酵素はＳ１９、Ｓ１２、Ｓ４、Ｓｌ又はＳ３から選択される。

天ｌ自１旦本発明のＩＢａｔに従う洗剤（石鹸）バーを次のようにｍＷした。即ち全鹸化８２％獣脂、１８％ヤシ油をベースとし、０．１５％オルトリン酸で重相し、ブ「２テアーゼ（バー組成物１り当たり約８Ｇｌｌ＞と混合し、ギ酸ナトリウム２％、ホウ砂Ｚ％、プロピレングリコール２９≦及び硫酸すトリウム１％と混合した石鹸を石鹸製造ラインで圧縮した。プロテアーゼ酵素は具体例Ｓ１のプロテアーゼである。本実施例の変形例によると、酵素はＳ３、Ｓ４、Ｃ２、Ｃａ又はＣ４から選択される。

本発明の別の態様によると、構造化された液体洗剤は本発明のプロテアーゼ以外に、例えば非イオン界面活性剤２〜１５％、非イオン及び場合によりアニオン界面活性剤を含む合計界面活性剤５−４０％、リン酸塩含有又は無リン酸塩ビルダー５〜３５％、ポリマー増粘剤（例λば一１ｗ、が１０６を越える架橋アクリルポリマー）０２〜０．８％、ケイ酸すトリウム（例えば中性水ガラス）少なくとも１０％、所望のｐＨ５好ましくは９〜１０又はそれ以上、例えばｐＨ１１以上に調整するだめのアルカリ（例えばカリウム含有アルカリ）を含有し、ナトリウムカチオン対ゲイ酸塩アニオン（遊離シリカとして）の重量比が０７：１未満であり、粘度が０．３〜３０Ｐａ、５（２０℃、２０／秒）である。

例えばこのような洗剤は、１モル当たり約５ＥＯ基及び約２．７ＰＯ基でアルコキシル化したＣ１３〜Ｃ１５アルコーノ［・力）らなる非イオ〉′界面活性剤約５％、シリカ対酸化ナト１ノウムの重量比が３５である中性水ガラス１５〜２３％、ＫＯＨ１３〜１９％、５ＴＰＰ　８〜２３％、炭酸ナトリウムＯ〜１１％、Ｃａｒｂｏｐｏｌ　９４１（ｌ録商標）０．５％を含有し得る。プロテアーゼとして例え（ｆＯ１５％の具体例Ｓ１が配合され得る。

本発明は以上の開示の変形例も可能であり、このような変形例は本明細書、以下の請求の範囲、本明細書１３（こ参考資料とし°Ｃ引用した文献中に記載されて髪する特徴のあらゆる組み合わせ及び下位の組み合わせに及ぶ。

国際調資報告国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．突然変異ズブチリシンブロテアーゼを含有する酵素洗剤組成物であって、該ブロテアーゼが、位置：６，９，１１，１２，１９，２５，３６，３７，３８，５３，５４，５５，５６，５７，５８，５９，６７，７１，８９，１１１，１１５，１２０，１２１，１２２，１２４，１２８，１３１，１４０，１５３，１５４，１５６，１５８，１５９，１６０，１６１，１６２，１６３，１６４，１６５，１６６，１６８，１７０，１７２，１７５，１８０，１８２，１８６，１８７，１９１，１９４，１９５，１９９，２１８，２１９，２２６，２３４，２３５，２３６，２３７，２３８，２４１，２６０，２６１，２６２，２６５，２６８，２７５，のうちの１カ所以上に、対応する親ブロテアーゼに対して置換、挿入または欠失によって変更されたアミノ酸残基を含んでおり、該洗剤組成物の残りの部分が、ａ）リン酸塩ビルダー、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、アクリル系または等価のポリマー、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、アミノ含有漂白剤活性化物質、シリケートまたは他の構造形成体、用途に所望のｐＨに調整するためのアルカリ及び中性無機塩を含有する粉末洗剤、ｂ）ゼオライトビルダー、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、アクリル系または等価のポリマー、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、アミノ含有漂白剤活性化物質、シリケートまたは他の構造形成体、用途に所望のｐＨに調整するためのアルカリ及び中性無機塩を含有する粉末洗剤、ｃ）アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、保湿剤、有機酸、カセイアルカリを含有し、ｐＨが９〜１０の値に調整された水性洗剤液、ｄ）実質的に直鎖状アルコキシル化第一級アルコールからなる非イオン性液体界面活性剤、トリアセチン、三リン酸ナトリウム、カセイアルカリ、過ホウ酸塩− 水和物漂白剤前駆体及び第三級アミン漂白剤活性化物質を含有し、ｐＨが９〜１０の値に調整された非水性洗剤液、ｅ）アニオン性界面活性剤及びアルコキシル化の程度がそれぞれ約７及び約３の非イオン性界面活性剤の混合物、少量のまたは実質的にゼロの中性無機塩、リン酸塩ビルダー、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、第三級アミン漂白剤活性化物質、ケイ酸ナトリウム、微量成分及び水分を含有する、最低でも６００ｇ／ｌの嵩密度を有する顆粒の形態の粉末洗剤、ｆ）アニオン性界面活性剤及びアルコキシル化の程度がそれぞれ約７及び約３の非イオン性界面活性剤の混合物、少量のまたは実質的にゼロの中性無機塩、ゼオライトビルダー、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、第三級アミン漂白剤活性化物質、ケイ酸ナトリウム、微量成分及び水分を含有する、最低でも６００ｇ／ｌの嵩密度を有する顆粒の形態の粉末洗剤、ｇ）アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、アクリル系ポリマー、脂肪酸石鹸、炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、クレー粒子、過ホウ酸塩漂白剤前駆体、第三級アミン漂白剤活性化物質、ケイ酸ナトリウム、微量成分及び水分を含有する粉末洗剤、ｈ）オルトリン酸で中和し、プロテアーゼと混合し、更にキ酸ナトリウム、ホウ砂、プロピレングリコール及び硫酸ナトリウムと混合し、次いで石鹸生産ラインにおいて圧縮した、タロウ油及びヤシ油の全鹸化混合物をベースとする石鹸を含有する棒状洗剤（石鹸）、のいずれかであることを特徴とする組成物。
２．前記プロテアーゼが、ズブチリシンＢＰＮ′、ズブチリシンアミロサッカロリティクス（ａｍｙｌｏｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ズブチリシン１６８、ズブチリシンメシンチコペアチダーゼ（ｍｅｓｉｎｔｉｃｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、ズブチリシンカルスベルグ（Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ）、ズブチリシンＤＹ、ズブチリシン３０９、ズブチリシン１４７、ズブチリシンサーミターゼ（ｔｈｅｒｍｉｔａｓｅ）、及びブロテイナーゼＫまたはアクアリシン（ａｑｕａ１ｙｓｉｎ）から選択される親酸素の突然変異を表わす請求項１に記載の洗剤組成物。
３．更に前記プロテアーゼが、親ズブチリシンとしてズブチリシン３０９を基にしていることを特徴とする請求項１または２に記載の洗剤組成物。
４．更に前記ブロテアーゼが、親ズブチリシンとしてズブチリシン１４７を葵にしていることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
５．更に前記ブロテアーゼが、突然変異：（ａ）位置３６、５６、１５９、１６４〜１６６のうちの任意の位置における１つ以上のアミノ酸残基の挿入、（ｂ）突然変異：６−ｔｙｒ、６７−ｇｌｕ、６７−ａｓｐ、６８−ｃｙｓ、６８−ｍｅｔ、７１−ｇｌｕ、１６８−ａｌａ、１７０−ｔｙｒ、１７５−ｉｌｅ、２１９−ｍｅｔ、２７５−ｇｌｕ、１９−ｇｌｙ＋２１９−ｃｙｓ、１５３− ａｌａ＋２１８−ｓｅｒのうちの任意の突然変異の１つ以上を含むことを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
６．該洗剤組成物が、界面清住剤１ｌ当たり０．４〜０．８ｇに対応する割合で使用したときに洗濯液のｐＨが９以下となるように調製されていることを特徴とする請求項１に記載の酵素洗剤組成物。
７．該洗剤組成物が、界面活性剤１ｌ当たり０．４〜０．８ｇに対応する割合で使用したときに洗濯液のイオン強度が０．０３，以下、例えば０．０２以下、例えば０．０１以下となるように調製されていることを特徴とする請求項１に記載の酵素洗剤組成物。
８．該洗剤組成物が、界面活性剤１ｌ当たり０．４〜０．８ｇに対応する割合で使用したときに洗濯液のｐＨが８．５以上となるように調製されていることを特徴とする請求項１に記載の酵素洗剤組成物。
９．該洗剤組成物が、界面活性剤１ｌ当たり０．４〜０．８ｇに対応する割合で使用したときに洗濯液のイオン強度が０．０１以上、例えば０．０２以上となるように調製されていることを特徴とする請求項１に記載の酵素洗剤組成物。