JPH0443959A - 蛋白質の除去方法 - Google Patents
蛋白質の除去方法Info
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- JPH0443959A JPH0443959A JP14977990A JP14977990A JPH0443959A JP H0443959 A JPH0443959 A JP H0443959A JP 14977990 A JP14977990 A JP 14977990A JP 14977990 A JP14977990 A JP 14977990A JP H0443959 A JPH0443959 A JP H0443959A
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、クロマトグラフィーでの分離分析の時に使用
される、多孔質セラミックス蛋白質吸着体を用いる蛋白
質の除去方法に関する。
される、多孔質セラミックス蛋白質吸着体を用いる蛋白
質の除去方法に関する。
尿、血液又は動植物体は多くの蛋白質を含んでいるが、
これらの中の蛋白質以外の目的物質（例えばカテコール
アミン、ビタミン類、薬物等）を感度よく測定するため
には、必ず前処理操作として除蛋白を行う必要がある。
これらの中の蛋白質以外の目的物質（例えばカテコール
アミン、ビタミン類、薬物等）を感度よく測定するため
には、必ず前処理操作として除蛋白を行う必要がある。
（従来の技術及び発明が解決しようとする課ＩＮ）蛋白
質を吸着除去する目的で、従来用いられているシリカ系
材料は水により加水分解が起き、またアルカリに耐性が
ないため再生使用ができない不都合があった。またポリ
スチレン系材料は蛋白質を吸着するが、多くの目的物質
も吸着されやすくロスが生ずるので都合が悪い。
質を吸着除去する目的で、従来用いられているシリカ系
材料は水により加水分解が起き、またアルカリに耐性が
ないため再生使用ができない不都合があった。またポリ
スチレン系材料は蛋白質を吸着するが、多くの目的物質
も吸着されやすくロスが生ずるので都合が悪い。
このような欠点を解決するためには、蛋白吸着能が優れ
、且つ耐アルカリ性の材料であることが望まれる。
、且つ耐アルカリ性の材料であることが望まれる。
（ｌ１題を解決するための手段）
本発明者らは鋭意研究の結果、耐アルカリ性に優れ、且
つ蛋白吸着能力が優れた特定の構造のセラミックス多孔
体を用いることによって、本発明に到達した。
つ蛋白吸着能力が優れた特定の構造のセラミックス多孔
体を用いることによって、本発明に到達した。
本発明は、平均粒径１〜１００Ｆ及び平均細孔径２０〜
４０００人の粒状多孔体であるチクニア（Ｔｉｅｓ）又
はジルコニア（ＺｒＯ，）を主体とするセラミックス蛋
白質吸着体に被処理液を接触させることを特徴とする蛋
白質除去方法である。また上記チタニア又はジルコニア
の上記粒状多孔体に、１〜５０重量％のアルミナ、酸化
スズ、酸化、亜鉛、酸化銅、酸化クロム、酸化ニッケル
、酸化アンチモン、酸化イツトリウム、シリカ及び酸化
第二鉄より選択した金属酸化物を含むものであってもよ
い。
４０００人の粒状多孔体であるチクニア（Ｔｉｅｓ）又
はジルコニア（ＺｒＯ，）を主体とするセラミックス蛋
白質吸着体に被処理液を接触させることを特徴とする蛋
白質除去方法である。また上記チタニア又はジルコニア
の上記粒状多孔体に、１〜５０重量％のアルミナ、酸化
スズ、酸化、亜鉛、酸化銅、酸化クロム、酸化ニッケル
、酸化アンチモン、酸化イツトリウム、シリカ及び酸化
第二鉄より選択した金属酸化物を含むものであってもよ
い。
本発明で用いるセラミックス多孔体は、水や有機溶媒に
より膨潤、収縮せず、耐圧性があり、変形することなく
カラム内での体積が一定であるという利点を有する。
より膨潤、収縮せず、耐圧性があり、変形することなく
カラム内での体積が一定であるという利点を有する。
吸着体の平均粒径は、ＩＦ未満ではカラムに充填した時
に圧力が高くなり過ぎ、１００Ｆを超えると充填効率が
悪く、蛋白質の高速吸着能が不十分となるので、良好な
蛋白質吸着能力を得る平均粒径は１〜１００ｐであり、
特に３〜５０Ｆ＋ｗである。平均粒径の測定法は、本発
明に於いてはレーザー回折式粒度分布測定装置（堀場製
作所）を使用した。
に圧力が高くなり過ぎ、１００Ｆを超えると充填効率が
悪く、蛋白質の高速吸着能が不十分となるので、良好な
蛋白質吸着能力を得る平均粒径は１〜１００ｐであり、
特に３〜５０Ｆ＋ｗである。平均粒径の測定法は、本発
明に於いてはレーザー回折式粒度分布測定装置（堀場製
作所）を使用した。
吸着体の平均細孔径は、２０人未満では吸着しようとす
る蛋白質が細孔内に侵入できず吸着能が劣り、また平均
細孔径が４０００人より大きいと細孔容積が一般に低下
するので、良好な蛋白質吸着能力を得る平均細孔径は２
０〜４０００人であり、特に１００〜３０００人である
。細孔径の測定法は、本発明に於いては水銀圧入法を採
用した。
る蛋白質が細孔内に侵入できず吸着能が劣り、また平均
細孔径が４０００人より大きいと細孔容積が一般に低下
するので、良好な蛋白質吸着能力を得る平均細孔径は２
０〜４０００人であり、特に１００〜３０００人である
。細孔径の測定法は、本発明に於いては水銀圧入法を採
用した。
吸着体の形状は粒状多孔体、又は該粒状多孔体を板状等
任意の形状に成形加工したフィルターでも可能である。
任意の形状に成形加工したフィルターでも可能である。
本発明に適した多孔体の代表例としては、チタニア又は
ジルコニアに、さらにアルミナ、シリカ、酸化スズ、酸
化亜鉛、酸化銅、酸化ニッケル、酸化クロム、酸化アン
チモン、酸化イツトリウム及び酸化第二鉄より選択した
金属酸化物との混合物があげられるが、これらに限定さ
れるものではない。
ジルコニアに、さらにアルミナ、シリカ、酸化スズ、酸
化亜鉛、酸化銅、酸化ニッケル、酸化クロム、酸化アン
チモン、酸化イツトリウム及び酸化第二鉄より選択した
金属酸化物との混合物があげられるが、これらに限定さ
れるものではない。
一般的な蛋白質除去操作法としては、試験体の血液、尿
等をそのまま被処理液とするか、または水、アルコール
、アセトン、Ｍ衝液等で希釈したものを用いることがで
きる。 ｐＨを調整する場合、酸性物質（フェノール、
カテコール等）の場合にはｐＨ１〜３、塩基性物質（ア
ミジノ基）の場合にはｐＨ１０〜１２にするのがよい。
等をそのまま被処理液とするか、または水、アルコール
、アセトン、Ｍ衝液等で希釈したものを用いることがで
きる。 ｐＨを調整する場合、酸性物質（フェノール、
カテコール等）の場合にはｐＨ１〜３、塩基性物質（ア
ミジノ基）の場合にはｐＨ１０〜１２にするのがよい。
処理温度は０℃〜６０℃、好ましくは１０”Ｃ〜４０℃
、−量的には室温でよい。
、−量的には室温でよい。
本発明の粒状多孔体に被処理液を接触させる方法として
は１本発明の粒状多孔体を円筒状の容器に充填したカラ
ム、又は粒状多孔体を板状又は薄層に成形したフィルタ
ーを通す方法がある。あるいは容器内で粒状多孔体と攪
拌処理してもよい。
は１本発明の粒状多孔体を円筒状の容器に充填したカラ
ム、又は粒状多孔体を板状又は薄層に成形したフィルタ
ーを通す方法がある。あるいは容器内で粒状多孔体と攪
拌処理してもよい。
カラムに充填して使用する場合は、オンラインで分析用
カラムに接続して被処理液中の蛋白質を除去してから、
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に直接注入す
ることができる。またこのカラムはアルカリ溶液を流す
ことにより容易に蛋白質を脱着して再生使用が可能であ
る。板状に成形加工したもの又は薄層にしたフィルター
は、圧力をかけるか又は真空で引く等の方法によって使
用し、被処理液中の蛋白質を除去してからＨＰＬＣに注
入すれば、蛋白質の妨害がなく測定が可能である。
カラムに接続して被処理液中の蛋白質を除去してから、
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に直接注入す
ることができる。またこのカラムはアルカリ溶液を流す
ことにより容易に蛋白質を脱着して再生使用が可能であ
る。板状に成形加工したもの又は薄層にしたフィルター
は、圧力をかけるか又は真空で引く等の方法によって使
用し、被処理液中の蛋白質を除去してからＨＰＬＣに注
入すれば、蛋白質の妨害がなく測定が可能である。
（実施例）
以下に実施例を示し、本発明を更に具体的に説明する。
実施例１
水溶液中の蛋白質の除去効果を確認するため、以下の実
験を行った。即ち、チタニア（触媒化成工業■製、平均
粒径８Ｐ、平均細孔径３００人）を内径４ｍｍのクロマ
トカラムに２８．５ｍｇつめて、０．０２５％卵白アル
ブミン水洟液２．５−を通過させたが、卵白アルブミン
は流出せず全て吸着された。卵白アルブミンの確認は、
微量ビユレット法で３１０ｎｍの紫外線吸光度を測定し
て行った。（参考文献 分析化学便覧〕 実施例２ 実施例１と同様にジルコニア（触媒化成工業■製、平均
粒径３−１平均細孔径２００人）を内径４ｍｍのクロマ
ト管に２５．５ｆｆ１ｇつめて、０．０２５％卵白アル
ブミン水溶液２．５−を通過させたが、卵白アルブミン
は流出せず全て吸着された。
験を行った。即ち、チタニア（触媒化成工業■製、平均
粒径８Ｐ、平均細孔径３００人）を内径４ｍｍのクロマ
トカラムに２８．５ｍｇつめて、０．０２５％卵白アル
ブミン水洟液２．５−を通過させたが、卵白アルブミン
は流出せず全て吸着された。卵白アルブミンの確認は、
微量ビユレット法で３１０ｎｍの紫外線吸光度を測定し
て行った。（参考文献 分析化学便覧〕 実施例２ 実施例１と同様にジルコニア（触媒化成工業■製、平均
粒径３−１平均細孔径２００人）を内径４ｍｍのクロマ
ト管に２５．５ｆｆ１ｇつめて、０．０２５％卵白アル
ブミン水溶液２．５−を通過させたが、卵白アルブミン
は流出せず全て吸着された。
実施例３
生体液中の蛋白質の除去効果を確認するため、尿を被処
理液として以下の実験を行った。即ち、チタニア（触媒
化成工業■製、平均粒径８Ｐ、平均細孔径３００人）を
内径４ｍｍ、長さ５０ｍｍのカラムに充填し、ＨＰＬＣ
に接続し、尿を水で５０％希釈したもの１ＯＮを注入し
たところ、蛋白質は吸着され溶出しなかった。蛋白質の
確認はＨＰ Ｌ Ｃ（Ｗａｔｅｒｓ Ｍ −６００、
溶離液：０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，８６）；
１．０−７分、紫外検出器： ＵＶ＝ ２２０ｎｍ）で
モニターした。
理液として以下の実験を行った。即ち、チタニア（触媒
化成工業■製、平均粒径８Ｐ、平均細孔径３００人）を
内径４ｍｍ、長さ５０ｍｍのカラムに充填し、ＨＰＬＣ
に接続し、尿を水で５０％希釈したもの１ＯＮを注入し
たところ、蛋白質は吸着され溶出しなかった。蛋白質の
確認はＨＰ Ｌ Ｃ（Ｗａｔｅｒｓ Ｍ −６００、
溶離液：０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，８６）；
１．０−７分、紫外検出器： ＵＶ＝ ２２０ｎｍ）で
モニターした。
実施例４
実施例３のチタニアをジルコニア（触媒化成工業■製、
平均粒径３Ｐ、平均細孔径２００人）に替えた以外は同
様に行ったところ、蛋白質は吸着され溶出しなかった。
平均粒径３Ｐ、平均細孔径２００人）に替えた以外は同
様に行ったところ、蛋白質は吸着され溶出しなかった。
実施例５
尿中のホモバニリン酸（ＨＶＡ）、バニリルマンデル酸
（ＶＭＡ）、５−ヒドロキシインドール３酢酸（５−Ｈ
ＩＡＡ）の定量は、小児神経痛、高血圧や各種神経疾患
の診断において重要であり、ＨＰＬＣで分離後、電気化
学的に検出して定量する方法が用いられている。この分
野では多数の検体を分析する必要があるので、カラムの
目詰まりを防止するためフィルターに通導して決過後、
ＨＰＬＣに注入するケースが多い、しかし、ＨＰＬＣサ
ンプル用のフィルターでは蛋白質除去が不十分な上、目
的物質によってはしばしば吸着ロスが生ずるなどの問題
がある。
（ＶＭＡ）、５−ヒドロキシインドール３酢酸（５−Ｈ
ＩＡＡ）の定量は、小児神経痛、高血圧や各種神経疾患
の診断において重要であり、ＨＰＬＣで分離後、電気化
学的に検出して定量する方法が用いられている。この分
野では多数の検体を分析する必要があるので、カラムの
目詰まりを防止するためフィルターに通導して決過後、
ＨＰＬＣに注入するケースが多い、しかし、ＨＰＬＣサ
ンプル用のフィルターでは蛋白質除去が不十分な上、目
的物質によってはしばしば吸着ロスが生ずるなどの問題
がある。
ソコテ、尿中のＨＶＡ、ＶＭＡ、５−ＨＩ ＡＡのＨＰ
ＬＣによる定量分析を例にあげ、尿を水で２倍に希釈し
て、その１０１Ｌｌを直接ＨＰＬＣに注入した場合と、
２倍希釈液中の蛋白質を実施例１と同じ操作で吸着除去
後ＨＰＬＣに注入した場合を比較した。その結果、測定
対象物質であるＨＶＡ、ＶＭＡ、５−ＨＩＡＡの定量値
には差が生じなく、本方法により測定対象物質のロスが
なく、蛋白質の除去が可能であることが明らかとなった
。
ＬＣによる定量分析を例にあげ、尿を水で２倍に希釈し
て、その１０１Ｌｌを直接ＨＰＬＣに注入した場合と、
２倍希釈液中の蛋白質を実施例１と同じ操作で吸着除去
後ＨＰＬＣに注入した場合を比較した。その結果、測定
対象物質であるＨＶＡ、ＶＭＡ、５−ＨＩＡＡの定量値
には差が生じなく、本方法により測定対象物質のロスが
なく、蛋白質の除去が可能であることが明らかとなった
。
［高速液体クロマトグラフィーの条件」電気化学検出器
：ＥＣ−８０１０（東ソー製）溶離液：Ｏ，１Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ３，１）／アセトニトリル（１７／３．
ｖ／ｖ ） ： ０． ５＋ａｔ’／分カラム：ＯＤ
Ｓ （４ｘ１５０開）（発明の効果） 本発明によると、以下に示す効果がある。
：ＥＣ−８０１０（東ソー製）溶離液：Ｏ，１Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ３，１）／アセトニトリル（１７／３．
ｖ／ｖ ） ： ０． ５＋ａｔ’／分カラム：ＯＤ
Ｓ （４ｘ１５０開）（発明の効果） 本発明によると、以下に示す効果がある。
１ 蛋白質を効率よく吸着し、生体サンプルの分離分析
に於て、蛋白質の妨害がなく感度よく分析ができる。
に於て、蛋白質の妨害がなく感度よく分析ができる。
２、オンラインで操作でき、前処理操作で蛋白質除去す
る必要がない。
る必要がない。
３、分析後、アルカリ洗浄して再使用が可能である。
４、化学的安定性、機械的強度に優れ、あらゆる組成の
溶媒を使用することができる。
溶媒を使用することができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 平均粒径１〜１００μｍ及び平均細孔径２０〜４０００
Åの微状多孔体であるチタニア （ＴｉＯ＿２）又はジルコニア（ＺｒＯ＿２）を主体と
するセラミックス蛋白質吸着体に被処理液を接触させる
ことを特徴とする蛋白質の除去方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14977990A JPH0443959A (ja) | 1990-06-11 | 1990-06-11 | 蛋白質の除去方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14977990A JPH0443959A (ja) | 1990-06-11 | 1990-06-11 | 蛋白質の除去方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0443959A true JPH0443959A (ja) | 1992-02-13 |
Family
ID=15482540
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14977990A Pending JPH0443959A (ja) | 1990-06-11 | 1990-06-11 | 蛋白質の除去方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0443959A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0643146A (ja) * | 1992-03-26 | 1994-02-18 | Ajinomoto Co Inc | 分析用生体試料中の蛋白質分離除去方法 |
| KR20180005206A (ko) * | 2015-05-11 | 2018-01-15 | 쓰리엠 이노베이티브 프로퍼티즈 컴파니 | 핵산 증폭의 저해를 감소시키는 조성물 |
-
1990
- 1990-06-11 JP JP14977990A patent/JPH0443959A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0643146A (ja) * | 1992-03-26 | 1994-02-18 | Ajinomoto Co Inc | 分析用生体試料中の蛋白質分離除去方法 |
| KR20180005206A (ko) * | 2015-05-11 | 2018-01-15 | 쓰리엠 이노베이티브 프로퍼티즈 컴파니 | 핵산 증폭의 저해를 감소시키는 조성물 |
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