JPH04356427A - 免疫賦活剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は免疫賦活剤に関するもの
である。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】従来
からウイルスや細菌感染症、癌の治療に用いられる免疫
賦活剤が種々提案されているが、免疫機構は複雑であり
これらの薬物のみで充分な免疫賦活効果がえられるもの
ではなく、各疾病に対する効果は著効にはいたっていな
い。

【０００３】すなわち、従来の免疫賦活剤は、いずれも
有効性において満足しうるものではなく、免疫賦活作用
を有する副作用の少ない医薬の開発が要望されている。 本発明者は免疫賦活作用を有する物質について鋭意研究
の結果、抗テストステロン抗体が基礎免疫系に賦活的に
働きかけることを見出し、本発明を完成するにいたった
。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は抗テストステロ
ン抗体を有効成分とする免疫賦活剤に関する。

【０００５】

【実施例】本発明において、抗テストステロン抗体は、
通常用いられるどのような方法でえられるものであって
もよく、抗血清およびモノクローナル抗体を含むもので
ある。これらの抗テストステロン抗体は、たとえば、カ
ルボキシメチルオキシム（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ
　ｏｘｉｍｅ）　などが結合したテストステロンをハプ
テンとして、牛血清アルブミンなどと結合して作製した
テストステロン−　牛血清アルブミンなどを、ラットな
どの動物に免疫してえられる抗血清、または、その免疫
した動物の脾臓細胞をマウスなどのミエローマ細胞と細
胞融合してえたハイブリドーマのクローン細胞から放出
される抗テストステロンモノクローナル抗体としてえら
れる。

【０００６】本発明の免疫賦活剤の投与経路はとくに制
限されず治療目的に応じて適宜選択すればよく、非経口
投与（たとえば静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与）が
可能である。

【０００７】本発明の免疫賦活剤は各種剤形で使用する
ことができ、剤形としてはたとえば注射剤、輸液、点眼
剤などがあげられる。これら各種剤形の製剤は常法にし
たがい治療目的に応じて、賦形剤、結合剤、溶解剤、溶
解補助剤、乳化剤、懸濁化剤などの製剤技術分野におい
て通常使用することができる担体を用いて調製すること
ができる。

【０００８】このような担体としては、たとえば乳糖、
白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロース、ヒドロキ
シプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ース、アラビアゴム、ゼラチン、メタケイ酸アルミン酸
マグネシウム、無水リン酸カルシウム、クエン酸、クエ
ン酸三ナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ソ
ルビトール、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニルピ
ロリドン、植物油（落下生油、オリーブ油など、ベンジ
ルアルコール、プロピレングリコール、水などがあげら
れる。

【０００９】また、本発明の免疫賦活剤を注射剤として
投与するばあいは、有効成分の投与量（成人１日あたり
）０．１　〜５０ｍｇの範囲から選ばれる。

【００１０】本発明の免疫賦活剤は、エイズウイルス、
Ｂ型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルスなどのウイ
ルスやグラム陽性、グラム陰性、などの細菌の感染治療
または前立腺癌、白血病のような癌の治療剤として有用
である。これらの効果は本発明の免疫賦活剤が基礎的免
疫機構を活性化することにより異物に対しての認識・感
作の亢進やＴ細胞等の産生を促進し、えられるものであ
ると考えられる。

【００１１】以下に具体的な実施例をあげて本発明の免
疫賦活剤の効果を説明するが、本発明はかかる実施例の
みに限定されるものではない。

【００１２】参考例 （抗テストステロンモノクローナル抗体の精製）腹水抗
テストステロンモノクローナル抗体（ラット由来、クロ
ーン　Ｎｏ．Ｆ２、抗体サブクラス　ＩｇＧ１　、イン
トラファーム　　ラボラトリーズ　　リミテッド（Ｉｎ
ｔｅｒｐｈａｒｍ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ＬＴＤ
）　（イスラエル）製、セロノ　　シンポジア　　パブ
リケイションズ（Ｓｅｒｏｎｏ　Ｓｙｍｐｏｓｉａ　Ｐ
ｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）３０巻、ｐ８７−９５（１９
８６）記載）を１５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ　７．０）
で１０倍希釈し、すでに１５ｍＭリン酸緩衝液（ＰＨ　
７．０）で平衡化済みのハイドロオキシアパタイトカラ
ムにて、リン酸緩衝液（ＰＨ　７．０）の濃度勾配法に
より、クロマトグラフィーを行ない精製（ブコフスキー
、ジェイ、ケネット　　アールエイチ（Ｂｕｋｏｖｓｋ
ｙ　Ｊ，　Ｋｅｎｎｅｔ　ＲＨ）　、ハイブリドーマ（
Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ）　６巻、Ｐ２１９−２２８）した
後、以下の生化学、免疫学的性質を有する物質をえて、
抗テストステロンモノクローナル抗体であることを確認
した。

【００１３】（イ）抗テストステロンモノクローナル抗
体 １）比活性：４６０　ピコモル　　テストステロン　　
バインド（ｂｉｎｄ）／ｍｇ　　プロティン ２）クロス反応 　　　　　　　　ステロイド　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　クロス反応率（％）　　　　　　
テストステロン　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　１００．００　　　　　　５−アルファ−
　ジヒドロテストステロン　　　　　　２．００　　　
　　　５−ベータ−　ジヒドテストステロン　　　　　
　　　　１５．００　　　　　　アンドロステロン　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
０　　　　　　プロゲステロン　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　＜０．１０　　　　　　コ
ーチゾル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　＜０．１０　　　エストラジオール　　
　　　　　　　　　＜０．１０ 処方例 下記の処方の注射剤を調製した。

【００１４】 実施例１ 移植皮膚片の生着期間に対する効果１ 主要組織適合抗原が互いに異なる、近交系ＤＡラットを
皮膚ドナー、近交系ＰＶＧラットをレシピエントとした
（両系ともハーラン・オーラック社（Ｈａｒｌａｎ　Ｏ
ｌａｃＬｔｄ）（イギリス国）から購入）。成熟した雄
１２〜１５週令ラット（体重２５０　〜２９０ｇ）６匹
を各群（Ａ〜Ｅ群）とし、実験に使用した。

【００１５】なお、本実験においては、レクチン刺激に
よるリンパ球幼若化反応を抑制し、免疫機能を低下させ
る作用を有して臓器移植後の拒絶反応を抑制するための
薬剤として、非特異的免疫抑制剤のシクロスポリンを使
用した。

【００１６】３ｃｍ四方のＤＡ系ラット腹部全層皮膚片
をＰＶＧ　系ラット体側部に、常法（トゥピック　　イ
ー（Ｔｏｗｐｉｋ　Ｅ）ら、トランスプランテーション
（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　）４０巻、Ｐ７１
４〜７１８（１９８５））にしたがって移植した。移植
手術後、Ａ〜Ｅ群の各ラットに、シクロスポリン（商品
名：サンディミュン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ）　、サンド
社、スイス）の、２０ｍｇ／ｋｇ／日量を術後６時間以
内に、さらに２４時間ごとに連続１４日間、後肢筋肉内
に投与した。また、Ｆ群のラットはシクロスポリン非投
与群とした。さらに、Ｂ〜Ｅ群の各ラットには、手術後
同日、シクロスポリンと同時（前投与および後投与でも
良い）に１回のみ、抗テストステロンモノクローナル抗
体の、それぞれ０．１ｍｇ　／ｍｌ生理食塩水（以下同
様）（Ｂ群）、０．７５ｍｇ／ｍｌ（Ｃ群）、１．５ｍ
ｇ／ｍｌ（Ｄ群）および４．５　ｍｇ／ｍｌ（Ｅ群）を
、シクロスポリンと併用投与した。Ｆ群にはシクロスポ
リンの代替としてオリーブ油を１ｍｌ／ｋｇ／日と、生
理食塩水１ｍｌを投与した。これらの投与量は全て１ｍ
ｌとした。それぞれの皮膚移植による拒絶反応を、移植
皮膚片の壊死によって判定した。結果を図１および図２
に示す。

【００１７】シクロスポリン非投与群で、レシピエント
ＰＶＧ　系ラットは、ＤＡ系ラット皮膚片を７〜９日に
激しく拒絶し（Ｆ群）、シクロスポリンのみ投与された
群では、移植片は平均８５．８±１７．０日間生着した
（Ａ群）。しかし、抗テストステロンモノクローナル抗
体を投与したＢ〜Ｅ群においては、図１に各群における
移植片生着日数を示したように、抗テストステロンモノ
クローナル抗体の投与量が増加すると移植片の生着期間
が短縮され、とくに抗体の投与量が１．５ｍｇ　以上で
は、抗体非投与群に比べて生着期間が明らかに短縮され
た。また、図２には術後日数と移植片の生着率との関係
を示しているが、抗テストステロンモノクローナル抗体
とシクロスポリンを併用されたＥ群では、シクロスポリ
ンのみ投与されたＡ群と比較して、同じ術後日数での生
着率が小さかった。 また、両者の間にはスチューデントＴ検定（Ｓｔｕｄｅ
ｎｔ　Ｔ　Ｔｅｓｔ）法統計処理でｐ＝０．０００９で
あり、有意差が認められた。

【００１８】このように、抗テストステロンモノクロー
ナル抗体は非特異的免疫抑制剤シクロスポリンにより低
下された免疫機能を賦活させる効果を有していることか
ら、この抗体は非特異的免疫賦活作用を有することがわ
かった。

【００１９】実施例２ 移植皮膚片の生着期間に対する効果２ 本実験においては、移植後の拒絶反応を抑制するために
、シクロスポリンを使用するかわりに全身的放射線照射
により免疫機能を低下させた。全身的放射線照射は顕著
な白血球数の減少をきたし、免疫機能を低下させるもの
である。全身的放射線照射は、７５０ｒａｄ／ラットを
手術の３時間前に行なった。それ以外の実験材料および
移植方法は実施例１と同様に行なった。

【００２０】全身的放射線照射非処置群で、レシピエン
トＰＶＧ　ラットは、ＤＡラット皮膚片を７〜８日目に
激しく拒絶した。一方、全身的放射線照射処置群では、
移植片は平均１７．２±１．５　日間生着した。また、
全身的放射線照射処置群に、手術後６時間以内に抗テス
トステロンモノクローナル抗体（４．５ｍｇ　／ｍｌ生
理食塩水）を１回のみ投与すると、移植皮膚片の生着日
数が１４．０±０．９　日に短縮された。これら抗テス
トステロンモノクローナル抗体投与群と非投与群とでは
、スチューデントＴ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ　Ｔ　Ｔｅｓ
ｔ）法統計処理でｐ＝０．０００１で有意差が存在した
。このことから、抗テストステロンモノクローナル抗体
が、放射線照射による白血球減少に起因する免疫機能低
下を賦活させる効果を有することがわかった。

【００２１】実施例３ 急性毒性試験 ＰＶＧ　系雄性ラット（８週令、体重　２００〜２２０
ｇ）に抗テストステロンモノクローナル抗体を静脈内投
与した結果、ＬＤ５０値は４０ｍｇ／ｋｇ以上であった
。

【００２２】

【発明の効果】本発明の免疫賦活剤は非特異的免疫抑制
剤や全身的放射線照射により低下させられた免疫機能を
賦活させることから、明らかな基礎的免疫機能の賦活作
用を有し、ウイルスや細菌感染症、癌の治療に有用であ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で抗テストステロンモノクローナル抗
体の投与量を変化させた各群における移植皮膚片の生着
日数を示すグラフである。

【図２】実施例１における移植皮膚片の生着率と術後日
数との関係を示すグラフである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　抗テストステロン抗体を有効成分とす
   る免疫賦活剤。