JPH04338330A - チロシン硫酸塩からなる血小板凝集阻止剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、血小板凝集阻止剤に関
し、詳しくはチロシン硫酸塩からなる血小板凝集阻止剤
に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】チロシンはタンパク質を構成する芳香族
アミノ酸の一つとして知られ１８４６年にカゼインのア
ルカリ加水分解物中に発見された。チロシン構造中のフ
ェノール核はハロゲン化されやすく定量やタンパク質の
標識に利用される。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明者は長年血小板
凝集阻害物質及びチロシン薬理活性の研究を重ね、各種
チロシン誘導体を合成しその薬理活性を研究した結果、
その硫酸塩が血小板凝集阻止作用を有することを見出し
た。本発明の目的は、チロシン硫酸塩からなる血小板凝
集阻止剤を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は一般式（ＩＩ）
で表わされるチロシン硫酸塩からなる血小板凝集阻止剤
に関する。

【０００５】

【化２】

【０００６】一般式中、Ｚは、薬学的に許容される金属
イオンを表わし、Ｒは水素原子または低級アルキルアシ
ル基を表わす。

【０００７】

【有用性】本発明化合物（２）〜（４）はいずれも新規
な化合物であり、化合物（３）、（４）は血小板凝集阻
害剤として有用である。

【０００８】

【実施例】以下、本発明を参考例および実施例によりさ
らに説明する。

【０００９】参考例１（化合物（１）の製造）

【００１
０】

【化３】

【００１１】無水酢酸３０ｍｌ（０．３２ｍｏｌ）とピ
リジン８．１ｍｌ（０．１０ｍｏｌ）の混合物を０℃に
冷却しておき、これを撹拌下０℃を維持しながら濃硫酸
５．４ｍｌを滴下した。１０分後析出している結晶性の
沈殿を濾取し、これをジエチルエーテルで洗浄し化合物
（１）を得た。これを五酸化リンおよび水酸化カリウム
上で減圧乾燥後以下の反応式に使用した。

【００１２】参考例２（化合物（２）の製造）

【００１
３】

【化４】

【００１４】ＤＬ−チロシン１．０ｇ（５．５２ｍｍｏ
ｌ）の水溶液８００ｍｌ中にジーターシャリー−ブチル
−ジカルボネート１．２０ｇ（５．５２ｍｍｏｌ）及び
トリエチルアミン５５８ｍｇ（５．５２ｍｍｏｌ）を加
えた。得られた溶液を室温で３８時間撹拌した。反応混
合物中にまだ多くのＤＬ−チロシンが残っているため、
（ＴＬＣ上）一担反応混合物を減圧留去後、得られた白
色粉末を７００ｍｌの水−ジオキサン（４：３、ｖ／ｖ
）の混合物に溶解後、更にジーターシャリー−ブチル−
ジカルボネート１．２０ｇ（５．５２ｍｍｏｌ）及びト
リエチルアミン５５８ｍｇ（５．５２ｍｍｏｌ）を加え
、この混合物を室温で１７時間撹拌した。ＴＬＣ上でま
だＤＬ−チロシンの存在が認められたため、先と等量の
ジーターシャリー−ブチル−ジカルボネートとトリエチ
ルアミンを加え更に７時間室温にて撹拌した。ＴＬＣ上
でＤＬ−チロシンの存在が認められなくなったので反応
を停止した。反応混合物を８０℃にて減圧留去し、２．
４４ｇの淡褐色の粘着性油状物質として化合物（２）を
得た。

【００１５】参考例３（化合物（３）の製造）

【００１
６】

【化５】

【００１７】化合物（２）１．５５ｇ（５．５２ｍｍｏ
ｌ）を１０ｍｌの無水ピリジンに溶解し、これに化合物
（１）１．８１ｇ（８．２８ｍｍｏｌ）を撹拌下加えた
。室温にて一昼夜放置後、析出している沈殿を溶解させ
るため無水ピリジン１０ｍｌ及び化合物（１）１．８１
ｇを反応混合物中加え、得られた混合物を６０℃で２時
間３５分加熱した。沈殿は加熱後約２分で溶解し、反応
混合物は透明な溶液となった。この段階でまだ出発原料
である化合物（２）の存在がＴＬＣ上で確認されたため
、化合物（１）３．６２ｇ（１６．６ｍｍｏｌ）と無水
ピリジン２０ｍｌを加えた。反応混合物室温にて３時間
半撹拌した。ＴＬＣ上で化合物（２）が消失したためこ
の段階で反応を終了した。反応混合物の溶媒を５０℃に
て減圧留去し、黄色油状物質を得た。この油状物質を水
３０ｍｌに溶解させ、２規定水酸化ナトリウムにてこの
水溶液のｐＨを８．０とした。遊離したピリジンをジエ
チルエーテル２０ｍｌで３回抽出することにより取り除
き、続いて水層のｐＨを１規定硫酸により３．５とした
後、この水溶液を凍結乾燥した。得られた白色粉末にジ
クロロメタン４０ｍｌを加えその可溶部を取り除いた。 ジクロロメタン不溶部に３０ｍｌのエタノールを加え、
その熱エタノール可溶部より目的物である化合物（３）
を含む白色粉末を１．４ｇ得た。同様にエタノール抽出
を更に２回繰返しさらに０．６７ｇの白色粉末を得た。

【００１８】参考例４（化合物（４）の製造）

【００１
９】

【化６】

【００２０】５０％トリフルオロ酢酸−ジクロロメタン
溶液２０ｍｌに化合物（３）１．７７ｇ（４．６２ｍｍ
ｏｌ）を溶解しこれを冷蔵庫（５℃）中で６０分間放置
した。この反応混合物の溶媒を３０℃にて減圧留去した
。少量の水を残渣に加え、得られた溶液を２規定水酸化
ナトリウムにて氷冷下ｐＨ７．４〜７．６に調節した。 この溶液を減圧乾固し、得られた残渣に２０ｍｌエタノ
ールを加え、その熱エタノール可溶部と不溶部に分けた
。熱エタノール不溶部に対して、更に２０ｍｌのエタノ
ールを加え、同様の操作を行なった。これらの操作によ
り得られた熱エタノール可溶部を合せ、これを再び減圧
乾固した。この残渣に対して先と同様のエタノール抽出
を繰り返し、目的の化合物（４）を０．５９ｇ得た。 融点　　２２２〜２２５℃（分解点）

【００２１】実施例１（血小板凝集阻止能の測定）実験
動物及び採血 家兎（日本白色雄性、体重３．５ｋｇ前後）耳介動脈よ
り３．８％クエン酸ナトリウム溶液１容に対して、血液
９容となるよう採取した。

【００２２】多血小板血漿（ＰＲＰ）及び乏血小板血漿
（ＰＰＰ）の調整 採血した血液を直ちに１０００〜１１００ｒｐｍで１０
分間遠心分離し、上清を多血小板血漿（ＰＲＰ）とした
。さらに残分を３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した
上清を乏血小板血漿（ＰＰＰ）とした。

【００２３】凝集の測定 血小板凝集能の測定はボーン（Ｂｏｒｎ）の比濁法に従
った。即ち、血小板試料を３７℃に保ち、スターラーで
撹拌（１０００ｒｐｍ）しながら凝集若起物質を加え、
凝集によって生じる透過度の経時的変化を自動測定した
。検体を含む２５μｌの１０％ＤＭＳＯ−１Ｍ塩酸緩衝
液（ｐＨ７．４）を３２５μｌのＰＲＰに加え（検体の
終濃度２５μｍｏｌ／ｌ）、続いてこれを３７℃で２分
間インキュベーションを行なった後、凝集若起物質とし
てコラーゲン（終濃度２０μｇ／ｍｌ）を加えることに
よって生じる凝集をアグリコーダＩＩ　　ＰＡ−３２２
０（京都第一化学）を用いて測定した。

【００２４】血小板凝集阻止能の評価 最大凝集率（ＭＡＲ）は計算式（１）より求め、また最
大凝集抑制率は計算式（２）より求めた。

【００２５】計算式（１） 計算式（２）

【００２６】以下の表に終濃度２５μｍｏｌ／ｌに於い
て最低３回以上測定した結果の最大凝集抑制率の平均及
び標準誤差を％で表示し、更にＩＣ５０を求めた。ＩＣ
５０の表示欄に於ける上の行の数値はＩＣ５０を、又、
カッコ内の数値は９５％信頼限界を示し、各々μｍｏｌ
／ｌで表示した。これらは、終濃度５、１０（又は２５
）、５０μｍｏｌ／ｌ（アスピリンの場合のみ５０、２
５０、５００μｍｏｌ／ｌ）に於いて各々３回以上行な
った測定結果よりプロビット法を用いて求めた。

【００２７】

【表１】

【００２８】実施例２（毒性試験） 実験方法 ＩＣＲ系マウス（雄）を用い経口投与並びに静脈注射投
与により３００ｍｇ／ｋｇを投与し、その毒性を検討し
た。

【００２９】結果

【００３０】

【表２】

【００３１】以上の結果より安全性が確認された。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　下記一般式（Ｉ）で表わされる化合物
   を有効成分とする血小板凝集阻止剤。 【化１】 （式中、Ｚは、薬学的に許容される金属イオンまたは水
   素原子を表わし、Ｒは水素原子または低級アルキルアシ
   ル基を表わす。）