JPH04297498A - ペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規なペプチド誘導体
に関する。詳しくは新規な血管作動性腸管ペプチド（Ｖ
ａｓｏａｃｔｉｖｅ　Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　Ｐｅｐｔ
ｉｄｅ　以下ＶＩＰと略す）誘導体に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＶＩＰは脳−腸管ペプチドと呼ばれてい
る生理活性ペプチドの一種で、１９７０年ブタ腸管より
抽出された血流促進、血圧低下作用をもつ２８個のアミ
ノ酸からなるペプチドである。そのアミノ酸配列がセク
レチン、グルカゴン等に類似しているところからグルカ
ゴンファミリーに属するペプチドとされている。ＶＩＰ
はその強い血管拡張、血流促進作用から、潰瘍、しもや
け、インポテンツ、発毛あるいは育毛などの効果が期待
されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ＶＩＰ
は生体内における含量が低く、抽出して大量に得ること
は困難であり、Ｃ末端がアミド化されているため遺伝子
組換えによる製造も困難である。また、液相法や固相法
によるペプチド合成による製造も高価なものとなってい
る。

【０００４】一方、気管支拡張作用・降圧作用又は育毛
作用を有する２９〜３１個のアミノ酸残基からなるＶＩ
Ｐ誘導体が知られている（特開昭６２−２４６５９５号
及び特開昭６４−８３０１２号）。

【０００５】本発明は、公知のＶＩＰの特定の作用を増
強又は低減することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、式Ｈｉｓ　Ｓ
ｅｒ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ａｓ
ｐ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　ＬｅｕＡｒｇ　
　Ａ　　ＧｌｎＢ　　Ａｌａ　Ｖａｌ　　Ｃ　　Ｄ　　
Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａ
ｓｎ（式中　　Ａ、Ｃ及びＤはＬｙｓ　又はＡｒｇ　を
示すが、いずれか１つ以上はＡｒｇ　を示し、ＢはＭｅ
ｔ　又はＬｅｕ　を示す）で表されるペプチド又はその
塩からなるＶＩＰ誘導体を提供するものであり、ＶＩＰ
は１５、２０及び２１番目のアミノ酸がＬｙｓであるの
に対し、本発明のＶＩＰ誘導体はこれら対応する位置の
アミノ酸のいずれか１つ以上がＡｒｇ　であることを特
徴とする。

【０００７】本明細書中において、保護基、溶媒、その
他に関し次の略号で表示する。 Ａｏｃ　　　　　；ｔ−アミルオキシカルボニルＢｏｃ
　　　　　；ｔ−ブトキシカルボニルＢｚｌ　　　　　
；ベンジル ＯＢｚｌ　　　　；ベンジルエステル Ｔｏｓ　　　　　；ｐ−トルエンスルホニルＺ　　　　
　　　；カルボベンゾキシ ＤＣＣ　　；ジシクロヘキシルカルボジイミドＤＣＭ　
　；ジクロロメタン ＤＩＥＡ；ジイソプロピルエチルアミンＤＭＦ　　；ジ
メチルホルムアミド ＤＭＳＯ；ジメチルスルホキシド ＨＭＰＡ；ヘキサメチルリン酸トリアミドＨＯＢｔ；１
−ヒドロキシベンゾトリアゾールＨＯＳｕ；Ｎ−ヒドロ
キシコハク酸イミドＭＢＨＡ；ベンズヒドリルアミン ＴＦＡ　　；トルフルオロ酢酸 ＴＨＦ　　；テトラヒドロフラン

【０００８】本発明のペプチドは、公知のペプチドの合
成の常法手段に従って合成できる。例えば「ザ．ペプチ
ド（Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」第１巻（１９６６年
）［Ｓｃｈｒｅｄｅｒ　ａｎｄＬｕｈｋｅ著、Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　Ｕ．Ｓ
．Ａ．］、あるいは「ペプチド合成」［泉屋ら著、丸善
株式会社（１９７５年）］に記載されている方法に従い
、例えばアジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合
酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法（ｐ−ニトロフ
ェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエス
テル法、シアノメチルエステル法等）ウッドワード試薬
Ｋを用いる方法、カルボイミダゾール法、酸化還元法、
ＤＣＣ−アデイテイブ（ＨＯＢｔ、ＨＯＳｕ）法等を例
示できる。上記においては、固相合成法及び液相合成法
のいずれも適用できる。本発明においては、上記した一
般のポリペプチドの合成法に従い、例えば末端アミノ酸
に順次１個ずつアミノ酸を縮合させるいわゆるステップ
ワイズ法によって、または数個のフラグメントに分けて
カップリングさせていく方法によって製造される。

【０００９】より詳細には、例えば固相合成法はメリフ
ィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ．　Ｒ．Ｂ．）の方法
［Ｓｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ．　Ｊ．　Ａｍｅｒ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．
，　８５，２１４９　〜２１５９　（１９６３）］に従
い、以下のようにして行うことができる。すなわち、Ｃ
末端アミノ酸（アミノ基を保護したもの）をそのカルボ
キシル基によって、不溶性担体に結合させ、次いでアミ
ノ保護基を除去した後、一般式で表されるアミノ酸配列
に従い順次アミノ基保護アミノ酸を、その反応性アミノ
基及び反応性カルボキシル基との縮合反応により結合さ
せ、一段階ずつ合成し、全配列を合成した後、ペプチド
を不溶性担体からはずすことにより製造される。ここで
用いられる不溶性担体は、反応性カルボキシル基との結
合性を有する各種のもののいずれでもよく、例えばＭＢ
ＨＡ系樹脂等を用いることができる。

【００１０】上記各種方法において側鎖官能基を有する
各アミノ酸、例えばＨｉｓ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、
Ａｓｐ、Ａｒｇ及びＳｅｒは、その側鎖官能基は保護し
ておくのが望ましく、これは通常の保護基により保護さ
れ、反応終了後該保護基は脱離される。又、反応に関与
する官能基は通常活性化される。これら各反応方法は公
知であり、それに用いられる試薬等も公知のものから適
宜選択し得る。

【００１１】アミノ酸の保護基としては、例えばＺ、Ｂ
ｏｃ、Ａｏｃ、イソボニルオキシカルボニル、ｐ−メト
キシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジル
オキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、ト
リフルオロアセチル、フタリル、ホルミル、ｏ−ニトロ
フェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル
などが挙げられる。

【００１２】Ｈｉｓのイミノ基の保護基としては、例え
ばＴｏｓ、Ｂｚｌ、Ｚ、トリチル等が挙げられる。Ｓｅ
ｒ及びＴｈｒの水酸基は、例えばエステル化又はエーテ
ル化によって保護することができるが、必ずしも保護す
る必要はない。このエステル化に適する基としては、ア
セチル等の低級アルカノイル基、ベンゾイル等のアロイ
ル基、ベンゾイルオキシカルボニル、エチルオキシカル
ボニル等の炭酸から誘導される基等が挙げられる。また
エーテル化に適する基としては、Ｂｚｌ、テトラヒドロ
ピラニル、ｔｅｒｔ−ブチル基等を例示できる。

【００１３】Ｔｙｒの水酸基の保護基としては、例えば
Ｂｚｌ、Ｃｌ２　−Ｂｚｌ、Ｚ、アセチル、Ｔｏｓ基等
が挙げられる。Ｌｙｓのアミノ基の保護基としては、た
とえばＺ、Ｃｌ−Ｚ、Ｃｌ２　−Ｂｚｌ、Ｂｏｃ、Ｔｏ
ｓ基等が挙げられる。Ａｒｇのグアニジノ基の保護基と
しては、例えばＴｏｓ、ニトロ、Ｚ、Ａｏｃ基等が挙げ
られる。

【００１４】カルボキシル基の保護基としては、例えば
アルキルエステル（メチル、エチル、プロピル、ブチル
、ｔｅｒｔ−ブチル等）、ベンジルエステル、ｐ−ニト
ロベンジルエステル、メチルベンジルエステル、ｐ−ク
ロルベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル、カル
ボベンゾキシヒドラジド、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカル
ボニルヒドラジド、トリチルヒドラジド等が挙げられる
。Ａｓｐのカルボキシル基の保護は、例えばベンジルア
ルコール、メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ−ブタノ
ール等によるエステル化により行われる。

【００１５】カルボキシル基が活性化されたものとして
は、例えば対応する酸クロライド、酸無水物又は混合酸
無水物、アジド、活性エステル（ペンタクロロフェノー
ル、ｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イ
ミド、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロ
キシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド
等とのエステル）等が挙げられる。なお、ペプチド結合
形式反応は、縮合剤、例えばＤＣＣ、カルボジイミダゾ
ール等のカルボジイミド試薬やテトラエチルピロホスフ
ェイト等の存在下に実施し得る場合もある。

【００１６】上記方法において反応性アミノ基と反応性
カルボキシル基との縮合反応（ペプチド結合形成反応）
は、溶媒の存在下に行い得る。溶媒としては、ペプチド
結合形成に使用し得ることが知られている各種のもの、
例えば無水または含水のＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ピリジン、
クロロホルム、ジオキサン、ＤＣＭ、ＴＨＦ、酢酸エチ
ル、Ｎ−メチルピロリドン、ＨＭＰＡあるいはこれらの
混合溶媒等を用いることができる。

【００１７】本発明のペプチド及びその塩は、例えばこ
れを血流改善剤として用いるに当たり、通常製剤的担体
とともに製剤組成の形態に加工されるが、中でも注射剤
の形態に加工され使用されるのが好ましい。

【００１８】注射剤として調製される場合、得られる製
剤は殺菌されかつ血液と等張であるのが好ましい。注射
剤の形態に成形するに際しては、希釈剤としてこの分野
において慣用されているものを使用することができる。 例えば、水、生理食塩水等を挙げることができる。なお
、この場合の等張性の溶液を調製するのに充分な量の食
塩、あるいはグリセリンを注射剤の形態の製剤中に含有
させてもよい。また上記製剤には通常の緩衝液、無痛化
剤、保存剤等、更に必要に応じて着色剤、保存剤、香料
、風味剤、甘味剤等や他の医薬品をも含有させることが
できる。また上記有効成分は使用時に注射用蒸留水に溶
解し、用事に溶解剤に溶解しても使用できる。

【００１９】上記の如くして調製される製剤は、その形
態に応じた方法で投与される。注射剤の場合には単独で
あるいはアミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与
される。

【００２０】有効成分の投与量は使用目的、症状等によ
り適宜決定されるが、通常１人１日当たり１ｎｇ〜１ｍ
ｇ／Ｋｇ程度の範囲で使用するのが好ましく、１日に２
〜４回分割投与するのが好ましい。

【００２１】

【実施例】以下に実施例、参考例により本発明をより具
体的に説明するが、これらは本発明を限定するものでは
ない。

【００２２】（１）　　保護ペプチド：（Ｂｏｃ）　Ｈ
ｉｓ（Ｔｏｓ）　Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）　Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）　Ａｌａ　Ｖａｌ　ＰｈｅＴｈｒ（Ｂｚｌ）　Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）　Ａｓｎ　Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）　Ｔｈｒ（Ｂ
ｚｌ）　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）　Ｌｅｕ　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）
　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｖａｌ　
Ａｒｇ（Ｔｏｓ）　Ａｒｇ（Ｔｏｓ）　Ｔｙｒ（Ｂｚｌ
）　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）　Ｉｌｅ　Ｌｅ
ｕ Ａｓｎ　−ＭＢＨＡ樹脂の製造

【００２３】固相合成装置としてＡｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ社製４３０−Ａペプチドシンセサイザ
ーを用いて固相合成を行った。まず、ＭＢＨＡ樹脂（Ａ
ｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製、アミノ基０
．７２ｍｍｏｌ／ｇ）０．６９４ｍｇをペプチド固相合
成用反応容器に入れ、ＤＣＭ８ｍｌ（４回、各１分）、
６０％ＴＦＡ含有ＤＣＭ容器８ｍｌ（２０分）、ＤＣＭ
４ｍｌ（３回、各１５秒）、ＤＩＥＡ１ｍｌ含有ＤＭＦ
溶液３ｍｌ（２回、各１分）、ＤＭＦ８ｍｌ（６回、各
４０秒）の順にアルゴンガス気流中撹拌下処理し、各々
の処理後濾過した。

【００２４】一方、アミノ酸順序２８番目の（Ｂｏｃ）
−Ａｓｎ−ＯＨ２ｍｍｏｌｅ　をＤＣＭ４ｍｌに溶解し
、アミノ酸活性化容器中でＤＣＣ（０．５Ｍ　−ＤＣＭ
溶液）３ｍｌ及びＨＯＢｔ（０．５Ｍ　−ＤＣＭ溶液）
４ｍｌを加え、３０分間反応させた。反応液を濾過して
濃縮容器に移し、これにＤＭＦ３ｍｌを加え、アルゴン
ガス気流下ＤＣＭを留去した。これにＤＭＦ３ｍｌを加
え、前記の反応容器に移して３０分間反応させた。つい
でＤＣＭ８ｍｌ（６回、各２０秒）で洗浄した。さらに
（Ｂｏｃ）−Ａｓｎ−ＯＨ２ｍｍｏｌｅ　をＤＣＭ４ｍ
ｌに溶解し、アミノ酸活性化容器中で同様の操作を繰り
返したいわゆるダブルカップリング法を行った後、濾過
して（Ｂｏｃ）−Ａｓｎ−ＭＢＨＡ樹脂を得た。

【００２５】次に、得られたＢｏｃ−Ａｓｎ−ＭＢＨＡ
樹脂を反応容器中ＤＣＭ８ｍｌ（４回、各１分）で洗浄
し、濾過した。これに、６０％ＴＦＡ含有ＤＣＭ溶液８
ｍｌ（２０分）、ＤＣＭ４ｍｌ（３回、各１５秒）、Ｄ
ＩＥＡ１ｍｌ含有ＤＭＦ溶液３ｍｌ（２回、各１分）、
ＤＭＦ８ｍｌ（６回、各４０秒）の順にアルゴンガス気
流中撹拌下処理し、各々の処理後濾過した。

【００２６】さらに、アミノ酸順序２７番目の（Ｂｏｃ
）−Ｌｅｕ−ＯＨ２ｍｍｏｌｅ　をＤＣＭ４ｍｌに溶解
し、アミノ酸活性化容器中でＤＣＣ（０．５Ｍ　−ＤＣ
Ｍ溶液）１．５ｍｌを加え、７分間反応させた。反応液
を濾過して濃縮容器に移し、これにＤＭＦ３ｍｌを加え
、アルゴンガス気流下ＤＣＭを留去した。これにＤＭＦ
３ｍｌを加え、前記の反応容器に移して３０分間反応さ
せた。ついでＤＣＭ８ｍｌ（６回、各２０秒）で洗浄し
、濾過して（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−ＭＢＨＡ樹脂
を得た。

【００２７】以下、次に示す保護アミノ酸を用いて順次
２６番目から１番目までのアミノ酸をカップリングさせ
た。 アミノ　　　　　　　　　　　　　　　　保護アミノ酸
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　使
用量酸順序　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　（ｍｍｏｌ）　　２６　　　　　　　　
　　　　Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　２　　２５　　　　　　　　　
　　　Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ　　　　　　　
　　　　　２　　２４　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ
−Ａｓｎ−ＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２×２　　２３　　　　　　　　　　　　Ｂｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　２　　２２　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ
−Ｔｒｙ（Ｂｚｌ）−ＯＨ　　　　　　　　　　　　２
　　２１　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔ
ｏｓ）−ＯＨ　　　　　　　　　　　　２×２　　２０
　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−
ＯＨ　　　　　　　　　　　　２×２　　１９　　　　
　　　　　　　　Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　２　　１８　　　　　
　　　　　　　Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２　　１７　　　　　　
　　　　　　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　２　　１６　　　　　　　
　　　　　Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　２×２　　１５　　　　　　
　　　　　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ　　　　
　　　　　　　　２×２　　１４　　　　　　　　　　
　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ　　　　　　　　
　　　　２×２　　１３　　　　　　　　　　　　Ｂｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　２　　１２　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ
−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ　　　　　　　　　　　　２
×２　　１１　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ）−ＯＨ　　　　　　　　　　　　２　　１０
　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−
ＯＨ　　　　　　　　　　　　２　　　　９　　　　　
　　　　　　　Ｂｏｃ−Ａｓｎ−ＯＨ　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２×２　　　　８　　　
　　　　　　　　　Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ
　　　　　　　　　　２　　　　７　　　　　　　　　
　　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ　　　　　　　
　　　　　２　　　　６　　　　　　　　　　　　Ｂｏ
ｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　２　　　　５　　　　　　　　　　　　Ｂｏ
ｃ−Ｖａｌ−ＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　２　　　　４　　　　　　　　　　　　Ｂｏ
ｃ−Ａｌａ−ＯＨ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　２　　　　３　　　　　　　　　　　　Ｂｏ
ｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ　　　　　　　　　　２
　　　　２　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（
Ｂｚｌ）−ＯＨ　　　　　　　　　　　　２　　　　１
　　　　　　　　　　　　Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）−
ＯＨ　　　　　　　　　　　　２×２

【００２８】上記
固相合成において、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓを
用いた場合はダブルカップリングを行った。この様にし
て、表記の樹脂２．７６ｇ　を得た。

【００２９】（２）配列表に記載のペプチドの製造（１
）で得られた保護ペプチド−ＭＢＨＡ樹脂２．７６ｇ　
にＤＭＦ５０ｍｌ及びチオアニソール３ｍｌを加え、室
温で２時間撹拌した後、数回エーテルで洗浄、濾過して
乾燥させた。これにアニソール５ｍｌを加え、さらに無
水弗化水素２５ｍｌを加え、０℃で１時間撹拌した。反
応後、無水弗化水素を減圧下留去後、残査をエーテルで
洗浄し、これに０．１Ｍ　酢酸１００ｍｌを加えペプチ
ド抽出した。

【００３０】抽出液をアンバーライトＩＲ−４１０の陰
イオン交換樹脂２０ｍｌとともに１５分間撹拌した後、
不溶樹脂を濾去した。得られた溶液は、０．２２μミリ
ポアフィルターにて濾過し凍結乾燥して８２３ｍｇの白
色粉末を得た。次にＣＭ−セルロースカラム（２．５×
３０ｃｍ）にかけ０．０５Ｍ　から０．５Ｍ　の直線勾
配をもったＡｃＯＮＨ４（ｐＨ７．０）で溶出（１０ｍ
ｌ／ｆｒａｃｔｉｏｎ）　を行い、フラクション６９〜
８２を集め目的とするペプチド３８２ｍｇを得た。これ
をさらに以下に示す条件にて高速液体クロマトグラフィ
ーにかけ精製した。

【００３１】カラム：ＴＳＫ　　ＧＥＬ　　ＯＤＳ−１
２０Ｔ（５５×３００ｍｍ） 溶　　媒：０．１％ＴＦＡ−アセトニトリル（アセトニ
トリルを２０％から４０％に変化させる直線勾配グラジ
ェント） 流　　速：１０ｍｌ／ｍｉｎ 当該高速液体クロマトグラフィーにより部分精製ペプチ
ド１００ｍｇより６３ｍｇが得られた。

【００３２】得られた純粋ペプチドにつきペプチドマッ
プ及びアミノ酸値を求め、本発明物質であることを確認
し、さらに物性値として施光度及び高速液体クロマトグ
ラフィーの保持時間を求めた。アミノ酸分析条件は、６
Ｎ　−ＨＣｌ（０．１％フェノール含有）中で１１０℃
、２０時間の加水分解反応を行った後に、日立アミノ酸
分析Ｌ−８５００型によって分析した。 Ａｓｐ（５）　５．００，　Ｔｈｒ（２）　１．７２，
　Ｓｅｒ（２）　１．６１，　Ｇｌｕ（１）　１．１０
，　Ａｌａ（２）　２．００，Ｖａｌ（２）　２．００
，　Ｉｌｅ（１）　１．０２，　Ｌｅｕ（４）　４．１
５，　Ｔｙｒ（２）　１．８６，　Ｐｈｅ（１）　０．
９２，Ｈｉｓ（１）　０．９５，　Ａｒｇ（５）　４．
７５

【００３３】高速液体クロマトグラフィーの条件は以下
によって分析した。 カラム：ＴＳＫ　　ＧＥＬ　　ＯＤＳ−１２０Ｔ（４．
６×３００ｍｍ） 溶　　媒：０．１％ＴＦＡ−アセトニトリル（アセトニ
トリルを２０％から５０％に変化させる直線勾配グラジ
ェント） 流　　速：１ｍｌ／ｍｉｎ 保持時間　　２６．２分 施光度の測定装置、測定条件は次のごとくである。 装置：ＳＥＰＡ−２００（株式会社堀場製作所）条件：
Ｎａランプ５８９ｎｍ　　温度２０℃セル　　１００ｎ
ｍ インテグレーションタイム５秒 濃度１％（０．１Ｍ　−酢酸中） ［α］Ｄ　　５２．５

【００３４】試験例 前記実施例に示した本発明のＶＩＰ誘導体の血流量なら
びに血圧に及ぼす効果を公知のＶＩＰと比較した。体重
２２０〜２５０ｇ　のＷｉｓｔａｒ系雄性ラットをペン
トバルビタールの腹腔内投与（２５ｍｇ／ｋｇ）により
麻酔し、背位に固定した。血圧は頸動脈に動脈カニュー
レを挿入し、ヘパリン加生理食塩液（１０Ｕ　／ｍｌ）
を満たしたドームキット（ＳＣＫ−５１２日本光電）を
介して血圧トランスデューサー（ＤＸ−３００日本光電
）に接続し、ひずみ圧力用アンプ（ＡＰ−６０１Ｇ日本
光電）により測定した。血流量は右大腿動脈に血流測定
用プローブ（ＦＲ−０３０Ｔ日本光電）を取り付け、電
磁血流計（ＭＦＶ−３２００日本光電）に接続して測定
した。

【００３５】

【表１】

【００３６】

【発明の効果】上記試験例から明らかなように、本発明
のＶＩＰ誘導体は、ペプチドの活性が増強され、低用量
で血流量改善効果を発現することが可能となり、さらに
は副作用の血圧低下作用が少ない特徴を有す。

【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：２８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：ｐｅｐｔｉｄｅ 存在位置：１５、２０、２１ 特徴を決定した方法：Ｅ 　　配列

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖ
   ａｌ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｔｈ
   ｒ　Ａｒｇ　ＬｅｕＡｒｇ　　Ａ　　Ｇｌｎ　　Ｂ　　
   Ａｌａ　Ｖａｌ　　Ｃ　　Ｄ　　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｓ
   ｎ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ（式中　　Ａ、Ｃ
   及びＤはＬｙｓ　又はＡｒｇ　を示すが、いずれかひと
   つ以上はＡｒｇ　を示し、ＢはＭｅｔ　又はＬｅｕ　を
   示す）で表されるペプチド又はその塩。