JPH04273826A

JPH04273826A - 抗ｒｓウイルス剤

Info

Publication number: JPH04273826A
Application number: JP3033255A
Authority: JP
Inventors: Shiro Shigeta; 士郎茂田; Takao Chiba; 千葉　卓男
Original assignee: Dainippon Ink and Chemicals Co Ltd
Current assignee: DIC Corp
Priority date: 1991-02-27
Filing date: 1991-02-27
Publication date: 1992-09-30

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗ウイルス剤に関し、更
に詳しくはＲＳウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　　
Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ　　ｖｉｒｕｓ）の感染により生じ
るヒト及び動物の感染症の予防用及び治療用薬剤に関す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】ＲＮＡウイルスであるＲＳウイルス（Ｒ
ｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　　Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ　　ｖｉ
ｒｕｓ）は、幼児が高頻度に感染し、重篤な呼吸器症状
を呈する病原ウイルスとして、最も重要かつ危険なもの
として知られている。抗ウイルス剤としては抗ヘルペス
剤のアシクロビルを代表とする核酸系化合物やアマンタ
ジン及びその誘導体が数種知られているが、いずれもウ
イルスに対する選択性が低い為、哺乳動物に対する毒性
が高く、治療効果と毒性の関係で満足すべきものは未だ
得られていない。しかしながら、近年ウイルスの宿主細
胞への感染方法が分子レベルで研究されるに至り、ウイ
ルスが宿主細胞表面に吸着し、ウイルスゲノムを宿主細
胞内に注入する際に作用するフュージョンペプタイドの
アミノ酸配列が解明されるようになった。これにともな
いウイルスのフュージョンペプタイドの類似化合物を合
成し、ウイルスに選択的に阻害効果を与えようとする研
究が行なわれ始めた。例えば、ショパン等は本発明の化
合物と類似の化合物　Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニル−Ｄ−フェニルアラニル）−Ｌ−フェニルア
ラニル］グリシンがパラミクソウイルス（Ｐａｒａｍｙ
ｘｏｖｉｒｕｓ）科、ミクソウイルス（Ｍｙｘｏｖｉｒ
ｕｓ）科のウイルスに対して阻害活性を有する事を報告
している（Ｐｕｒｎｅｌｌ　　Ｗ．Ｃｈｏｐｐｉｎ　　
ｅｔ．ａｌ　　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　　Ｖｏｌ．１０５　
　２０５−２２２（１９８０））。

【０００３】ショパン等はそれら化合物のＲＳウイルス
に対しての阻害活性を報告していないが、本発明者等は
本発明の研究過程において、ショパン等の作製した化合
物はＲＳウイルスに対しての阻害活性を全く有していな
い事を明らかにした。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】ＲＳウイルスを弱毒化
したＲＳウイルスに対するワクチンは、効果の点で疑問
が生じたために、その製造が中止されている。またＲＳ
ウイルスに対して、核酸系化合物であるリバビリンの有
効性が認められたが、リバビリンも毒性が高く、臨床上
ＲＳウイルスに対して十分な治療効果を有する薬剤は未
だ存在しない為、ＲＳウイルスによる乳児の院内感染が
、臨床医師の大きな問題になっている。特に乳児に対し
ては、用いる薬剤の毒性は重要な問題であり、十分な予
防・治療効果を有し、かつ低毒性の抗ＲＳウイルス剤の
開発が嘱望されていた。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者等は従来の問題
を解決すべく、ＲＳウイルスが宿主細胞表面に吸着し、
ウイルスゲノムを宿主細胞内に注入する際に作用するフ
ュージョンペプタイドと類似のアミノ酸配列を有する化
合物を多数合成し、選択的な抗ＲＳウイルス活性を有す
る化合物を鋭意研究した結果、Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−ロ
イシル］グリシンが優れた抗ＲＳウイルス活性を有する
事、更にその哺乳動物に対する毒性が著しく低い事を見
い出して本発明を完成した。

【０００６】本発明はＮ−［Ｎ−（Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−ロイシル］
グリシンを有効成分としてなる抗ＲＳウイルス剤に関す
る。更に詳しくはＲＳウイルスの感染により生じるヒト
及び動物の感染症の予防用及び治療用薬剤に関する。こ
こでいうＲＳウイルスの感染症とは、ＲＳウイルスの感
染により生じる咽頭炎、気管支炎、肺炎等の疾患並びに
ＲＳウイルス及び細菌の感染によって生じる合併症をい
う。またＲＳウイルスはヒト以外の哺乳動物にも感染症
を引き起こす事が知られており、本発明による抗ＲＳウ
イルス剤は、これら動物の感染症にも有効である。

【０００７】本発明の有効成分Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−ロ
イシル］グリシンは、アミノ基がＮ−ベンジルオキシカ
ルボニル基で保護されたＬ−フェニルアラニンに、Ｌ−
ロイシン次にグリシンがペプチド結合したアミノ酸３個
からなるトリペプタイドであり、ペプタイドの公知の製
造方法により製造される。

【０００８】本発明によるＲＳウイルス感染症の予防用
及び治療用薬剤は、経口または非経口投与（例えば、静
注，皮内投与，直腸投与，噴霧吸入，鼻内投与）する事
ができ、投与に際しては、それぞれの投与方法に適した
剤型に調製する事ができる。かかる薬剤は、その用途に
応じて錠剤、カプセル剤、か粒剤、散剤、細粒剤、丸剤
、トローチ剤、舌下剤、坐剤、軟膏、注射剤、乳剤、懸
濁剤、噴霧剤、点鼻剤、シロップなどのいずれかの製剤
形態に調製する事ができる。これら製剤の調製には、無
毒性の溶剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、防腐剤
、等張化剤、安定剤、分散剤、酸化防止剤、着色剤、矯
味剤、緩衝剤等の添加剤を使用して公知の方法により製
剤化する事ができる。製剤中の本発明化合物の含有量は
その剤形に応じて異なるが、一般に０．１〜１００重量
％の濃度で含有していることが望ましい。製剤の投与量
はヒトを含む哺乳動物の種類、症状の軽重、医師の診断
などにより広範に変える事ができるが、一般に１日当り
０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇとすることができる。この
投与量は１日１回または数回に分けて投与する事ができ
る。

【０００９】

【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、もとより本
発明は以下に示す実施例に限定されるものではない。（以下、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基をＢｏｃ
、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル基をＺ、Ｌ−フェニル
アラニンをＬ−Ｐｈｅ、Ｌ−ロイシンをＬ−Ｌｅｕ、グ
リシンをＧｌｙと略記する。）

【００１０】（実施例１）　　Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｙＯＥｔを用いるＮ−［Ｎ−（Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−ロイシル］グ
リシン（Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ）の合成
。

【００１１】常法に従いＢｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ（Ｎ−ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−ロイシン）（４６２ｍ
ｇ，２ｍｍｏｌ），エトキシグリシン酸塩酸塩（以下、
ＧｌｙＯＥｔ・ＨＣｌと略記する）（２７９ｍｇ，２ｍ
ｍｏｌ），トリエチルアミン（０．５ｍｌ），１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾール（以下、ＨＯＢｔと略記する
）（２７０ｍｇ，２ｍｍｏｌ），ジシクロヘキシルカル
ボジイミド（以下、ＤＣＣと略記する）（４１２ｍｇ，
２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍｌ中で室温、８時
間反応させて、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＧｌｙＯＥｔを定
量的に得た。次にＢｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＧｌｙＯＥｔ（
３１６ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を２５％ＨＢｒ−酢酸で室温
１時間処理した後、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ（２９９ｍｇ，１ｍ
ｍｏｌ），トリエチルアミン（０．５ｍｌ），ＨＯＢｔ
（１３５ｍｇ，１ｍｍｏｌ），ＤＣＣ（２０６ｍｇ，１
ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍｌ中で室温、８時間
反応させて、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＧｌｙＯＥ
ｔを定量的に得た。

【００１２】以下にＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｙＯＥｔの物性値を示す。

【００１３】ｍｐ：１４７−１４９℃，ＩＲ（ＣＨＣｌ
３）：３４５０，１７４２，１７２５，１６７２ｃｍ−
１

【００１４】ＮＭＲ（ＣＨＣｌ３）δ：０．８９（６
Ｈ，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，（ＣＨ３）２ＣＨ），１．２３（
３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨ３），１．３３−
１．８５（３Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），３．
０３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＣＨ２Ｐｈ），３．８
７（２Ｈ，ｂｒｓ，ＮＣＨ２ＣＯ），４．３７（２Ｈ，
ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨ３），４．１８−４．７
２（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨＣＯ×２），５．０２（２Ｈ，ｓ
，ＯＣＨ２Ｐｈ）５．５０−５．６６（１Ｈ，ｂｒｓ，
ＮＨ），６．６５−６．８２（１Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ），
７．１５（５Ｈ，ｓ，Ｃ６Ｈ５），７．２３（５Ｈ，ｓ
，Ｃ６Ｈ５），７．９６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）

【００１５】［α］Ｄ２２＝−２７．３°（ｃ＝０．３
，ＭｅＯＨ），高分解能マススペクトル：Ｃ２７Ｈ３５
Ｎ３Ｏ６（Ｍ＋）理論値：４９７．２５２４，実測値：
４９７．２５３８

【００１６】次いで、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｙＯＥｔ（２４８．５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）をメタ
ノール（４ｍｌ）及び５％ＮａＯＨ水溶液２ｍｌ中で、
室温１．５時間加水分解した。メタノールを減圧留去後
、水溶液をクエン酸酸性として析出するＺ−Ｌ−Ｐｈｅ
−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙの結晶を濾取した。また、その収
量は１８５ｍｇ（７９％）であった。

【００１７】以下、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｙの物性値を示す。

【００１８】ｍｐ：１５４−１５５℃，ＩＲ（ＣＨＣｌ
３）：３３５０，１７２０，１６７０ｃｍ−１

【００１
９】ＮＭＲ（ＣＨＣｌ３）δ：０．８６（６Ｈ，ｄ，Ｊ
＝５Ｈｚ，（ＣＨ３）２ＣＨ），１．３６−１．７５（
３Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），２．９２（２Ｈ
，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，ＣＨ２Ｐｈ），３．９７（２Ｈ，ｂ
ｒｓ，ＮＣＨ２ＣＯ），４．３７−４．７９（２Ｈ，ｍ
，ＮＣＨＣＯ×２），５．０５（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２Ｐ
ｈ），５．６３−５．９３（１Ｈ，ｂｒｓ，ＮＨ），６
．８７−７．７６（１２Ｈ，ｍ，Ｃ６Ｈ５×２，ＮＨ×
２）

【００２０】［α］Ｄ２２＝−３３°（ｃ＝０．２
，ＭｅＯＨ），高分解能マススペクトル：Ｃ２５Ｈ３１
Ｎ３Ｏ６（Ｍ＋）理論値：４６９．２２１１，実測値：
４６９．２２３５

【００２１】（実施例２）　　Ｚ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
ＯＥｔを用いるＮ−［Ｎ−（Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−ロイシル］グリシ
ン（Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ）の合成を行
った。

【００２２】Ｚ−Ｌ−Ｌｅｕ（１．１１５ｇ，４．２ｍ
ｍｏｌ），ＧｌｙＯＥｔ・ＨＣｌ（５８６ｍｇ，４．２
ｍｍｏｌ），ＤＣＣ（８６７ｍｇ，４．２ｍｍｏｌ），
ＨＯＢｔ（５６８ｍｇ，４．２ｍｍｏｌ），トリエチル
アミン（３ｍｌ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）中で室
温８時間反応させてＺ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＧｌｙＯＥｔを定
量的に得た。Ｚ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＧｌｙＯＥｔ（３５０ｍ
ｇ，１ｍｍｏｌ）をメタノール１０ｍｌに溶解し、パラ
ジウムカーボン（５０ｍｇ）で接触還元による脱保護を
行い、次いでＺ−Ｌ−Ｐｈｅ（２９９ｍｇ，１ｍｍｏｌ
），ＨＯＢｔ（１３５ｍｇ，１ｍｍｏｌ），トリエチル
アミン（０．１ｍｌ），ＤＣＣ（２０６ｍｇ，１ｍｍｏ
ｌ）をジクロロメタン（１０ｍｌ）中で反応させて、Ｚ
−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＧｌｙＯＥｔを得た。更に
これを実施例１と同様に処理して、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを得た。

【００２３】（実験例１）上記実施例１，２で得られた
本発明に係るＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙの抗
ＲＳウイルス活性を測定した。

【００２４】抗ＲＳウイルス活性を測定する為に、Ｈｅ
Ｌａ細胞を用いＲＳＶ−Ｌｏｎｇ株で試験を行った。２
４穴のマイクロプレートにＨｅＬａ細胞を３５℃で２日
間培養し、単層になったところで増殖培養液（ＧＭ）を
捨て、最終濃度が２００，４０，８，１．６，０．３及
び０μｇ／ｍｌとなるように細胞維持液（ＭＳ）と０．
７％メチルセルロース溶液で希釈した薬剤溶液を０．９
ｍｌづつ加えた。更に、各穴に５０プラックフォーミン
グユニット（ｐｌａｑｕｅ　　ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ
、ＰＦＵ）のウイルス液０．１ｍｌを加え、５％炭酸ガ
ス培養器を用いて、３５℃で４日間培養した後、各穴に
おけるプラックの有無を顕微鏡により観察し、ＥＣ５０
（Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　　Ｃｏｎｃｅｔｒａｔｉｏｎ）
を求めた。本発明のＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｙのＥＣ５０は２．７μｇ／ｍｌ以下であり、ＲＳウイ
ルスに対して強い阻害作用を示した。

【００２５】（実験例２）上記実施例１，２で得られた
本発明に係るＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙの細
胞毒性試験を行った。

【００２６】２４穴のマイクロプレートにＨｅＬａ細胞
を３５℃で２日間培養し、単層になったところで、増殖
培養液（ＧＭ）を薬剤液に換え、毎日顕微鏡により形態
変化を観察し、薬剤の細胞に対する毒性を調べた。薬剤
添加後２日目と７日目に細胞の生存率（ｖｉａｂｉｌｉ
ｔｙ）がコントロールの５０％に減少する薬剤濃度（Ｃ
Ｃ５０：ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔ
ｉｏｎ）を求めた。

【００２７】本発明のＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｙのＣＣ５０は２００μｇ／ｍｌ以上であり、正常細
胞には阻害作用を示さない極めて安全な化合物である事
が明らかである。

【００２８】以下、実験例１と実験例２の結果を表１に
示す。

【表１】

【００２９】上記実験例１，２の結果からも明らかなよ
うに、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＧｌｙのＬ−Ｐｈ
ｅをＤ−Ｐｈｅに変えたものは全く活性が見られず、光
学活性が阻害活性の発現に重要であることを示している
。また、ショパン等のＺ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙやＺ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＧｌｙはＲＳウイ
ルスに対しては全く阻害活性を示さなかった。これらか
らＲＳウイルスは他のウイルスと異なり、極めて特異性
の高いウイルスである事ならびに本発明による化合物が
特異的にＲＳウイルスを阻害する事が明らかである。

【００３０】（実験例３）上記実施例１，２で得られた
本発明に係るＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙのマ
ウスによる毒性試験を行った。

【００３１】Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ８０
ｍｇをエタノール１ｍｌに溶解後、生理食塩水で１０倍
に希釈してサンプル溶液とし、投与量４０ｍｇ／ｋｇ／
日でマウス５匹に毎日１回３日間連続して静脈内投与し
たが、死亡例はなく、また薬物投与によると思われる異
常も全く認められなかった。また同様に調製したサンプ
ル溶液で投与量４０ｍｇ／ｋｇ／日でマウス５匹に毎日
１回３日間連続して、腹腔内投与したが、死亡例はなく
、また薬物投与によると思われる異常も全く認められな
かった。更にＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ４０
０ｍｇをエタノール１ｍｌに溶解後、生理食塩水で１０
倍に希釈したサンプル溶液を、投与量２ｇ／ｋｇでマウ
ス５匹に経口投与したが、死亡例はなく、また薬物投与
によると思われる異常も全く認められなかった。これら
より本発明のＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙは哺
乳動物に対して極めて安全性が高い化合物である事が明
らかである。

【００３２】（実施例３）上記実施例１，２で得られた
本発明に係るＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを用
いて注射剤を調製した。

【００３３】Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ５０
ｍｇをエタノール１ｍｌに溶解後、滅菌した生理食塩水
９ｍｌを加えて希釈した後、メンブランフィルター（ポ
アサイズ：０．４５μｍ）により濾過し、滅菌したアン
プル瓶に封入し注射剤アンプルを作製した。

【００３４】（実施例４）上記実施例１，２で得られた
本発明に係るＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを用
いて噴霧剤を調製した。

【００３５】Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ２５
ｍｇをエタノール　　０．５ｍｌに溶解後、生理食塩水
９．５ｍｌを加えて希釈した後、メンブランフィルター
（ポアサイズ：０．４５μｍ）により濾過し、滅菌した
バイアル瓶に封入し、噴霧吸入器用製剤を作製した。

【００３６】（実施例５）上記実施例１，２で得られた
本発明に係るＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを用
いて２５ｍｇカプセル剤を調製した。

【００３７】Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ２５
ｍｇをよく粉砕した後に、乳糖５０ｍｇ、でんぷん２３
ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２ｍｇを加え、十分混
合した後カプセルに充填し、２５ｍｇカプセル剤を作製
した。

【００３８】

【効果】本発明の抗ＲＳウイルス剤は、哺乳動物に対す
る毒性が極めて低く、かつＲＳウイルスに対しては特異
的ウイルス活性阻害作用を示すので、従来臨床上十分な
治療効果を有する薬剤の存在しなかったＲＳウイルス感
染症に対し極めて有効な抗ＲＳウイルス剤の提供が実現
される。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−ロイシル］グリ
シンを有効成分としてなる抗ＲＳウイルス剤。