JPH04247236A - 高架橋されたパール状の活性化可能な親水性支持材料、該支持材料の変性方法、生物学的に活性の物質を水性液体から吸着する方法もしくは大量排除クロマトグラフィー処理する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、それ自体吸着的で支持
体として生物学的に活性の物質に使用できる、高架橋さ
れたパール状の活性化可能な親水性支持材料に関し、も
しくは２官能性活性化剤を用いて、生物学的に活性な物
質に対して結合活性の状態にし、かかる物質を変換させ
ることができる、高架橋されたパール状の活性化可能な
親水性支持材料に関する。

【０００２】

【従来の技術】英国特許第１００４６６９号明細書の記
載から、ラジカル重合可能なエチレン性不飽和の親水性
モノマーと、多官能性架橋モノマーとのコポリマーをベ
ースとする、架橋されたパール状の親水性支持材料は、
公知であり；親水性モノマーはアクリルアミドである。 架橋モノマーとして、Ｎ，Ｎ´−メチレン−ビス−（メ
ト）アクリルアミドは、１０重量％まで、場合によって
は、２０重量％までの割合で使用され、これによりゲル
状の膨潤性ポリマーが得られる。

【０００３】ドイツ連邦共和国特許出願公開第１９５４
３４９号明細書の記載によると、この種の親水性支持材
料の小粒子は、同じモノマーから構成できるようなマク
ロ多孔質の剛性の親水性支持材料によって強化されるが
、しかしながら、この小粒子はＮ，Ｎ´−メチレン−ビ
ス−（メト）アクリルアミドの３０〜９０重量％の範囲
内にある割合によって高架橋されている。強化材料の構
成には、ヒドロキシル基含有のアクリルアミド誘導体、
例えばＮ−（ヒドロキシメチル）アクリルアミドが関与
してもよい。強く架橋することにより、水膨潤化された
状態で剛性は高まり、このことは、それによって充填さ
れたカラム反応器に液状基質が貫流される場合には、有
利な効果を生じさせる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明には、高い親水
性、容易な活性化可能性、水飽和の状態での高い剛性お
よび水性−アルカリ性媒体中での高い耐加水分解性の要
求を同時に充足する、パール状の支持材料を製造すると
いう課題が課された。

【０００５】

【課題を解決するための手段】提起された課題の解決は
、ラジカル重合可能なエチレン性不飽和の親水性モノマ
ーの高架橋されたコポリマーに見出され、このモノマー
の構成には、ラジカル重合可能なエチレン不飽和性の親
水性モノマーとして、式： ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−Ｏ−Ｒ−Ｘｎ ［式中、Ｒは水素原子（この場合、ｎは０である）であ
るか、または炭素原子１〜（ｎ＋４）個を有する、（ｎ
＋１）−価の脂肪族炭化水素基を表し、Ｘはヒドロキシ
ル基または−（Ｏ−Ｒ′）ｍ−ＯＨの基（この場合、Ｒ
′はエチレン基もしくはプロピレン基であり、ｍは１〜
４５までの数である）の群からなる同一または異なる親
水性の基を表し、ｎは１〜５の範囲内の数である］のア
リルモノマーが関与し、かつ少くとも２つのラジカル重
合可能なエチレン性不飽和基は、カルボンアミド基また
はエーテル基を含有する鎖によって結合した、多官能性
モノマーの単位によって架橋されている。

【０００６】コポリマーの親水性成分としての記載され
たアリルモノマーおよび架橋する成分としての、カルボ
ンアミド結合またはエーテル結合を有するモノマーが使
用される場合には、要求された高い耐加水分解性が充足
され得るということが確認された。これに対して、親水
性基または架橋の橋が、容易に加水分解可能な結合、例
えばエステル基によって重合体に結合した場合には、こ
れら親水性基または架橋の橋は加水分解的に脱離させる
ことができ、かつ重合体マトリクスの電気化学的な状態
を深い所で変化させる陰イオン性のカルボキシレート基
を後に残す。本発明によって使用されたアリルモノマー
は、加水分解しやすい基の群を１つも含有しない。架橋
単位に場合によっては含有されるカルボンアミド基は、
同様に広範に亘る加水分解安定であることが判明する。

【０００７】重合されたアリルモノマーの単位に含有さ
れているヒドロキシル基は、一方で、重合体の必要な親
水性を若起し、他方で、化学的活性化のための出発点を
提供する。従って、例えば、ビス−エポキシ−化合物を
有する重合体の変換によって、生物学的に活性の物質に
対して反応能のある、重合結合したオキシラン基が得ら
れる。前記の基も、後にこれに結合した基質も、アルカ
リ性の加水分解によって脱離されない。

【０００８】

【作用】化学式によって特徴付けられたアリルモノマー
には、アリルアルコールおよび一定のアリルエーテルが
属する。これらは、１つまたは複数のヒドロキシル基を
含有してよく、かつこのことによって、いろいろ異なっ
て強く親水化的に作用する。脂肪族炭化水素基Ｒ中の炭
素原子の数は、高い親水性を保証するために、Ｒに結合
したヒドロキシル基の数よりも本質的には大きくなく、
このことは、ヒドロキシル基ｎ個当りの炭素原子ｎ＋４
個に制限することにより表記される。ヒドロキシル基は
、直接的には脂肪族炭化水素基Ｒに結合させる必要はな
いが、オキシアルキレン基またはポリオキシアルキレン
基を介して結合させることができる。

【０００９】アリルエーテルは、ヒドロキシル基がアリ
ルアルコールでエーテル化されているような、多価の脂
肪族アルコールを基礎とし、一方で１つまたは複数の別
の水酸基は、それ自体としてまたはオキシアルキル化さ
れた形で存在する。有利にこの脂肪族アルコールは少く
とも３価のアルコール、殊にグリセリンから派生する。 基礎にある脂肪族アルコールは、ヒドロキシル基よりも
多く炭素原子を多くとも４個含有する。このヒドロキシ
ル基は、酸化エチレンまたは酸化プロピレン１〜４５モ
ル、有利に１〜１０モルと変換できる。既に述べたグリ
セリン以外に、多価の脂肪族アルコールの例としてエチ
レングリコール、プロピレングリコール、ジエチレング
リコール、トリエチレングリコールならびに高級ポリエ
チレングリコールまたはポリプロピレングリコール、グ
リセリン、ソルビット、マンニットおよび類似の糖アル
コールが、挙げられなければならない。３−アリルオキ
シ−１，２−プロパンジオールは、有利なアリルエーテ
ルである。

【００１０】少くとも２つのラジカル重合可能なエチレ
ン性不飽和基が、カルボンアミド基またはエーテル基を
含有する鎖によって結合された、多官能性モノマーが、
重合体の架橋に使用される。Ｎ，Ｎ´−メチレン−ビス
−アクリルアミドおよびＮ，Ｎ´−メチレン−ビス−メ
タクリルアミドが、カルボンアミド基含有の架橋モノマ
ーの間では有利である。少くとも２つのラジカル重合可
能なエチレン性不飽和基が、エーテル酸素原子を介して
相互に結合された架橋モノマーとして、式：ＣＨ２＝Ｃ
Ｈ−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−（Ｒ″−Ｏ）ｑ−（ＣＨ２）ｐ
−ＣＨ＝ＣＨ２のジビニルエーテルおよびジアリルエー
テルは、挙げることができる。ｐは０または１であるこ
とができ；ｐが０である場合には、ジビニルエーテルが
重要であり；ｐが１である場合には、ジアリルエーテル
が重要である。しかしながらエーテル基は、ｑが１であ
る場合に、通常重合可能な基すら含有しない、核Ｒ″に
結合していてよい。例えば炭素原子２〜１２個を有する
、有利に脂肪族の炭化水素基または、酸素原子によって
結合されている複数の基の鎖であってよい。これらは、
場合によっては１つまたは複数のヒドロキシル基を有し
ていてよい。好適なエーテルの例は、エチレングリコー
ル−ジビニルエーテルおよびエチレングリコール−ジア
リルエーテル、ブタンジオール−ジビニルエーテルおよ
びブタンジオール−ジアリルエーテル、ジエチレングリ
コール−ジビニルエーテルおよびジエチレングリコール
−ジアリルエーテル、トリエチレングリコール−ジビニ
ルエーテルおよびトリエチレングリコール−ジアリルエ
ーテル、ペンタエリトリット−ジビニルエーテルおよび
ペンタエリトリット−ジアリルエーテル、およびトリメ
チロールプロパン−ジビニルエーテルおよびトリメチロ
ールプロパン−ジアリルエーテルである。

【００１１】有利には、この重合体は、親水性のモノマ
ー成分および架橋モノマー成分からのみ構成されている
。別のコモノマーは、親水性または耐アルカリ性が許容
されるように減少する場合には、併用してよい。従って
、長鎖の脂肪族基または芳香族基を有するコモノマーも
しくは不飽和カルボン酸から誘導された、エステル基ま
たは第１アミド基を有するコモノマーは、できるだけ回
避される。

【００１２】重合体の重量に対するアリルモノマーの割
合は、有利に１０〜９０重量％、殊に１０〜８０重量％
の間にあり、多数の不飽和を有する架橋モノマーの割合
は９０〜１０重量％、殊に９０〜２０重量％の間にある
。

【００１３】コポリマーの製造本発明による、高架橋さ
れたパール状の活性化可能な親水性支持材料は、パール
重合の自体公知の方法原理により、逆の相にて製造され
る。このためにモノマーの水性または水性−アルコール
性溶液は、無制限ではないが水と混合可能な有機媒体、
例えばベンジン炭化水素、クロル炭化水素、トルエンま
たはこれらの混合物の中で、直径５〜１０００μｍの液
滴に細分され、この形で、ラジカル形成する開始剤の添
加および場合によっては、加熱によって重合される。重
合の間の液滴状の分配状態の安定化のため、常法の巨大
分子の分配剤が使用される。重量平均値として表記され
た、有利な平均粒径は３〜１０００μｍ、有利に５〜２
００μｍであり；これは、分配剤の量および作用によっ
て、および懸濁剤の製造の際の撹拌によって定められる
。

【００１４】好適な巨大分子の分配剤は、コポリマーが
モノマー懸濁液の両相に対して十分な親和力を有するよ
うな量の比における疎水性モノマーと親水性モノマーと
からなるコポリマーである。この親和力は、種々な重合
鎖から構成されるブロックコポリマーまたはグラフトコ
ポリマーが使用されることにより得られ、この場合重合
鎖は、単離された形で、一部はモノマー溶液中で、別の
一部は有機的媒体中で溶解されているように選択されて
いる。しかし勿論種々な極性を有する少くともモノマー
の混合物から製造される統計学的なコポリマーを使用す
ることでも事足りる。ここでも、水性モノマー溶液中の
１つのモノマーの重合体および有機媒体中の別のモノマ
ーの重合体が、溶解されているように選択されるべきで
ある。有機媒体としてのベンジン炭化水素中の重合体に
とって、例えば高級アルキルメタクリレートの大きな割
合とヒドロキシアルキルアクリレートの小さい割合から
なるコポリマーが、好適である。

【００１５】重合を、懸濁化されたモノマー相で触発さ
せるため、開始剤として、常法の過酸化物開始剤または
アゾ開始剤を使用してよい。例えばアゾ−ビス−シアン
吉草酸または過酸化ジベンゾイルが好適である。開始剤
の量および重合の触発に適した温度は、当業界で常用の
条件により選択される。通常、重合は、４０〜１００℃
で行なわれる。

【００１６】本発明による重合体の製造のために一貫し
て使用できる、マクロ多孔質構造を有する、高架橋され
たパール状の活性化可能な親水性支持材料の製造のため
の公知方法は、例えばドイツ連邦共和国特許第２７２２
７５１号明細書および欧州特許第５８７６７号明細書に
記載されている。

【００１７】パール状の支持材料の使用この材料は、好
ましい水性媒体中で懸濁され、撹拌しながら、媒体中に
溶解した基質を用いて相互作用を生じさせることによっ
てバッチ法で使用してよい。引き続き支持材料は、濾別
することができ、かつ別の媒体中で後処理するか再生す
ることができる。

【００１８】水飽和状態での支持材料の際立った機械的
剛性故に、この支持材料は有利にカラム反応器での使用
に適している。水の吸収は、支持材料の乾燥重量に対し
て、２００〜５００重量％の飽和値で達成され；支持材
料の膨潤は、殊に０〜６０℃の温度範囲内で、通常２０
０容量％以下のままである。「水飽和」（Ｗａｓｓｅｒ
ｇｅｓａｅｔｔｉｇｔ）という表現は、含水量が一定の
平衡値を達成したことに対してのみ云える。

【００１９】支持材料の強い親水性の性質、もしくはそ
の僅少な残存疎水性の故に、本発明による支持材料は、
生物分子との、特に僅少な疎水性相互作用を示す。この
ことから、固定相−生物工学の夥しい数の方法にとって
有利に使用できる。固定相は、高分子構造または低分子
構造の純粋生物分子を混合物から分離するために使用さ
れる。更に、この固定相は固定された生物分子、殊に酵
素のための支持体として、または分析的方法、例えば免
疫−分析（Ｉｍｍｕｎｏ−Ａｓｓａｙｓ）のための表面
として、またはバイオセンサー（Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ）
として使用される生物分子の重要な分離技術の１群は、
液体クロマトグラフィーの概念下にまとめられる。この
技術の場合では、貫流可能な管が固定相で充填されてい
る。生物分子をその水性混合物から分離することは、こ
の充填された管の貫流の際に直接行なわれる。

【００２０】本発明による支持体は、例えばゲル透過ク
ロマトグラフィー法（ＧＰＣ）の技術のために好適であ
る。このゲル透過クロマトグラフィー法の場合に、混合
物の分子は、分子の種々異なる大きさ故に分離される。 小さな分子は、それより大きな分子よりも、支持材料の
より小さな孔に入り込むことができ、その結果小さな分
子は、それより大きな分子よりも大きな容量が通過する
。最も大きな孔よりも大きな分子は、支持材料の粒子の
間の空いた間隙中のみを通り、従って、第１に溶離され
る。

【００２１】使用法の１つの別の部類の場合に、本発明
による支持材料は、化学的に変性された形で使用される
。この目的のために、共有結合の原子は、重合体に、有
利にヒドロキシル基に結合する。有利には、加水分解可
能な結合の形成を生じない結合法である。従って、アシ
ル化された変性化剤は、エーテル結合の形成を生じるも
のよりも、大低あまり適さない。このことは、古典的な
全てのアルキル化法に当てはまる。特に有利には、ヒド
ロキシル基との反応によって、β−ヒドロキシアルキル
エーテル基を形成する、エポキシド基を含有する変性化
剤との変換である。多方面に使用できる変性化方法は、
支持体のビスエポキシドとの変換にあり、この場合一方
ではエポキシド基が支持体のヒドロキシル基に付加反応
を起こし、他方では生物分子との別の変換を提供する。

【００２２】生物分子を変性した支持体を用いる前記方
法では、例えばいわゆるアフィニティークロマトグラフ
ィー法（ＡＩＣ）に適する。アフィニティークロマトグ
ラフィー法には、特異分子に対して、できるだけ高い選
択性の結合力を有する支持材料が必要とされる。しかし
、結合は、結合した分子が、まず明確な条件で溶離可能
であるように、強固であってはならない。前記要求に相
応する支持体は、一般に親和力吸収剤と呼ばれる。この
親和力吸収剤は、生物補足的な分子を特殊に結合し、こ
の方法において混合物から高度に浄化された形で分離す
る、いわゆる生物リガンドを固定相への共有結合で含有
している。

【００２３】

【実施例】Ａ．パール状の支持材料の製造３−アリルオ
キシ−１，２−プロパンジオール１８．７５ｇおよびＮ
，Ｎ´−メチレン−ビス−アクリルアミドを水１０４．
８ｇおよびメタノール２６．２ｇからなる混合物に溶解
した。溶液を、有機相で、ｎ−ヘプタン４７３ｇおよび
Ｃ１２〜Ｃ１８−アルキルメタクリレート並びに２−ヒ
ドロキシエチルアクリレート（８０／２０）からなる混
合重合体１．５ｇから液滴に懸濁した。 懸濁液を４０℃に加熱し、重合を４，４´−アゾ−ビス
−４−シアンバレリアン酸１ｇの添加によって開始した
。４０〜６０℃で１４時間の重合時間の後、発生したパ
ール重合体を濾過し、洗浄し、かつ乾燥した。湿潤生成
物の平均粒径は、４０〜６０マイクロメーターである。

【００２４】Ｂ．耐アルカリ試験 アルカリ加水分解の場合、カルボンアミド基の分解によ
って、高められた結合作用によりチトクロームＣ群に対
してはっきり現れる、重合結合したカルボキシレート基
が発生する。以下に記載された試験により、アルカリ処
理前およびアルカリ処理後の吸着挙動を測定した。

【００２５】パール重合体５ｇをＮａＯＨ５０ｍｌ、１
モル中で懸濁させ、２３℃で７２時間放置した。引き続
き重合体を濾過し、水を用いて中性に洗浄した。

【００２６】吸着試験のため、Ｋｎａｕｅｒ社、Ｂａｄ
　　Ｈｏｍｂｕｒｇ、のレオダイン（Ｒｈｅｏｄｙｎ）
−注入弁、分光計測器および自動記録計器を備えた常用
のＨＰＬＣ−装置を使用した。空のカラムとしてＰｈａ
ｒｍａｃｉａ−ＬＫＢ社、スウェーデンのＨＲ１０／１
０カラム、長さ１００ｍｍおよび内径１０ｍｍを使用し
た。

【００２７】以下の溶液を使用した： 溶液Ｉ：ＮａＨ２ＰＯ４　　０．０１モル＋ＫＣｌ　　
０．１モル＋ｐＨ７．４までＮａＯＨ溶液ＩＩ：溶液Ｉ
　　１ｍｌ中のチトクロムＣ群２ｍｇ（Ｍｅｒｃｋ社、
第２４８０４番）カラムに溶液Ｉ中のパール重合体の懸
濁液を充填し、沈澱終了後に、ＨＰＬＣ−装置に装入し
た。溶液Ｉを用いて、分光計測器が４１０ｎｍおよび０
．１６の感度で一定の信号を示すまで平衡を保たせた。

【００２８】この後、溶液ＩＩを４０マイクロリットル
注入し、１ｍｌ／分の流量でクロマトグラフィー処理し
、還元した溶離容量を測定した。そのために、記録され
た計測図表中に注入時点から溶離ピークの最大値までの
区間を計測し、容量に換算した。幾可学的床容量で除す
ることによって、還元されたチトクロンＣ群の還元され
た溶離容量Ｖｒｅｄを得る。

【００２９】未処理のパール重合体を用いての試験経過
５から、Ｖｒｅｄ＝０．８５を測定した。アルカリ処理
したパール重合体を用いての試験経過７から、Ｖｒｅｄ
＝０．８９を計測した。ピーク面は±５％の計測精度の
範囲内で同じ大きさだったので、支持材料の変化は、ア
ルカリ処理によって排除することができた。

【００３０】Ｃ．カラム中におけるパ−ル重合体を用い
ての蛋白質のゲル透過クロマトグラフィ−法カラム：長
さ２８３ｍｍ、内径１０ｍｍ（Ｓｕｐｅｒｆｏｒｍａｎ
ｃｅ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ社、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ
） ＨＰＬＣ容器：ＬＫＢ型、Ｐｈａｒｍａｃｉａ；チタン
ポンプ；Ｒｈｅｏｄｙｎｅ（登録商標）−注入弁；記録
装置。

【００３１】流展剤ＩＩＩ：Ｎａ−燐酸塩緩衝液１０ミ
リモル中のＮａＣｌ　　１００ミリモルｐＨ７．２流展
剤ＩＶ：Ｎａ−燐酸塩緩衝液１０ミリモル中のＮａＣｌ
　　５００ミリモルｐＨ７．２ 溶解度：０．４ｍｌ／分 溶離物の検出ＵＶ測光的に２６０ｎｍ 表中に一覧表にまとめられた蛋白質を記載した濃度で、
流展剤ＩＩＩ中に溶解した。

【００３２】カラムを流展剤ＩＶを用いて平衡させた。 較正のために、流展剤ＩＶの１０％のＮａＮＯ３溶液４
００マイクロリットルからなる溶液の２００マイクロリ
ットルおよび０．０１５％のＤＮＡ溶液２５マイクロリ
ットルを注入した。較正物質が溶離したら直ちに、流展
剤ＩＩＩを用いて平衡させ、２０分間隔でそれぞれ蛋白
質溶液の２００マイクロリットルを注入し、溶離物容量
Ｖｅを測定した。カラムの分離挙動は、商Ｖｅ／Ｖｔか
ら判明し、この場合Ｖｔは、全カラム容量である。

【００３３】 　　表 較正物質：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　Ｖｅ／Ｖｔ　　　　
Ｍｗ　　ＤＮＡ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３６　
　　　　　＞１０７　　ＮａＮＯ３　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　０．９３　　　　　　　　８５蛋白質： 　　フェリチン　　　　　　　　　　　　　　０．０５
ｍｇ／ｍｌ　　０．４０　　　　４．５×１０５　　カ
タラ−ゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０ｍ
ｇ／ｍｌ　　０．４１　　　　２．４×１０５　　アル
コ−ルデヒドロゲナ−ゼ　　　　５ｍｇ／ｍｌ　　０．
４３　　　　１．４×１０５　　リンダ−ゼルムアルブ
ミン　　　　　　５ｍｇ／ｍｌ　　０．４３　　　　６
．８×１０４　　ペルオキシダ−ゼ　　　　　　　　　
　　　　　５ｍｇ／ｍｌ　　０．５１　　　　４．０×
１０４　　キモトリプシノ−ゲン　　Ａ　　　　　　１
ｍｇ／ｍｌ　　０．６３　　　　２．５×１０４　　チ
トクロム　　Ｃ　　　　　　　　　　０．０５ｍｇ／ｍ
ｌ　　０．８５　　１．２５×１０４ 　　結果は、７×１０４の分子量Ｍｗまでの蛋白質の極
めて先鋭な分離挙動を示す。結果は図１中に略示した。

【００３４】Ｄ．パ−ル重合体Ａのエポキシド化パ−ル
重合体Ａ６ｇを、トルオ−ル６０ｍｌ中で撹拌しながら
、１，４−ブタンジオ−ル−ジグリシジルエ−テル６．
７ｍｌを用いて変換し、２２時間還流しながら沸騰させ
た。生成物を吸引濾過し、何倍にもアセトンを用いて膨
張させ、７時間後に吸引濾過し、最終的に真空中で乾燥
させた。

【００３５】Ｒ．Ａｘｅｎ（Ｌ．Ｓｕｎｄｂｅｒｇ，Ｊ
．Ｐｏｒａｔｈ；Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　　Ｃｈｒｏｍａ
ｔｏｇｒａｐｈｙ，第９０巻、１９７４、８９頁）によ
るオキシラン−酸素の測定：０．１１重量％＝６８マイ
クロモル／グラム。

【００３６】Ｅ．ペニシリンアミダ−ゼを用いてのエポ
キシド化されたパ−ル重合体の反応 １ミリリットル当り１２７．５単位の酵素活性を有する
ｐＨ７．５の燐酸塩緩衝液０．５モル中の大腸菌のペニ
シリンアミダ−ゼの溶液４ｍｌ（定義：１単位は、ｐＨ
７．８のＫ−燐酸塩緩衝液０．０５モル中の２％の溶液
からなる加水分解されたペニシリン−Ｇ−カリウム　　
１マイクロモル；３７℃；ｐＨスタットにおけるアルカ
リ滴定的な滴量による加水分解測定）および０．５モル
のＫ燐酸塩緩衝液３ｍｌをパ−ル重合体Ｄの１ｇの上に
加え、７２時間２３℃で反応させた。この後吸引濾過し
、それぞれ水３０ｍｌを用いて５回およびｐ−ヒドロキ
シ安息香酸メチルエステル０．０５重量％、イソプロピ
ルアルコ−ル２重量％およびＫ燐酸塩緩衝液０．１モル
を用いて洗浄した。湿潤生成物の収量：４．３ｇ。

【００３７】反応生成物を公知技術水準の方法（Ｐｒｏ
ｖｉｓｉｏｎａｌ　　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　　Ｓｈ
ｅｅｔ　　”ＥＵＰＥＲＧＩＴ（登録商標）−ＰｃＡ，
ＲｏｅｈｍＰｈａｒｍａ　　ＧｍｂＨ，Ｗｅｉｔｅｒｓ
ｔａｄｔ，ドイツ連邦共和国）により検査し、以下の結
果を見出した：使用した酵素の活性収率６６％；製品活
性、湿潤生成物１グラム当り７８単位。

【図面の簡単な説明】

【図１】各蛋白質の分子量におけるそれぞれの分離挙動
を示す線図。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　ラジカル重合可能な親水性のエーテル
   性不飽和モノマーのコポリマーをベースとする高架橋さ
   れたパール状の活性化可能な親水性支持材料において、
   該支持材料の構造にラジカル重合可能な親水性のエチレ
   ン性不飽和モノマーとして、式： ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−Ｏ−Ｒ−Ｘｎ ［式中、Ｒは水素原子（この場合、ｎは０である）であ
   るか、または炭素原子１〜（ｎ＋４）を有する、（ｎ＋
   １）−価の脂肪族炭化水素基を表し、Ｘは、ヒドロキシ
   ル基または−（Ｏ−Ｒ′）ｍ−ＯＨの基（この場合、Ｒ
   ′はエチレン基もしくはプロピレン基であり、ｍは１〜
   ４５の数である）の群からなる同一または異なる親水性
   基を表し、ｎは１〜５の数である］のアリルモノマーが
   関与し、少くとも２つのラジカル重合可能なエチレン性
   不飽和基が、カルボンアミド基またはエーテル基を含有
   する鎖によって結合した多官能性モノマーの単位によっ
   て架橋されていることを特徴とする、高架橋された、パ
   ール状の、活性化可能な、親水性支持材料。
2. 【請求項２】　　多官能性モノマーの単位がコポリマー
   の２０〜９０重量％の割合を成す、請求項１記載の親水
   性支持材料。
3. 【請求項３】　　Ｎ，Ｎ´−メチレン−ビス−（メト）
   アクリルアミドの多官能性単位を含有する、請求項１ま
   た２記載の親水性支持材料。
4. 【請求項４】　　アリルモノマーの単位がコポリマーの
   １０〜９０重量％の割合を成す、請求項１から３までの
   いずれか１項記載の親水性支持材料。
5. 【請求項５】　　３〜１０００μｍの平均粒径を有する
   、請求項１から４までのいずれか１項記載の親水性支持
   材料。
6. 【請求項６】　　請求項１から５までのいずれか１項記
   載の親水性支持材料を変性する方法において、２官能性
   活性化剤を用いて、生物学的に活性の物質に対して結合
   活性の状態にし、かかる物質と変換することを特徴とす
   る、請求項１から５までのいずれか１項記載の親水性支
   持材料の変性方法。
7. 【請求項７】　　水性の液体から生物学的に活性な物質
   を吸着する方法において、請求項１から５までのいずれ
   か１項記載の親水性支持材料を使用することを特徴とす
   る、水性の液体から生物学的に活性な物質を吸着する方
   法。
8. 【請求項８】　　親水性支持材料が貫流可能なカラムの
   中に配置される、請求項６または７記載の方法。
9. 【請求項９】　　大量排除クロマトグラフィー処理する
   方法において、請求項１から５までのいずれか１項記載
   の親水性支持材料を固定相として使用することを特徴と
   する、大量排除クロマトグラフィー処理方法。