JPH04243804A - 診断用試験系の保存組成物及び保存される診断用試験キット - Google Patents
診断用試験系の保存組成物及び保存される診断用試験キットInfo
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Abstract
め要約のデータは記録されません。
Description
断用試験系、特に試験キットの保存並びにそのような剤
を含有する診断用試験系に関する。
ットは試薬及び標準として、微生物により分解され得る
物質を含有する。それ故、試験キットの耐性を改良する
ためにはキットをメーカーに保管してもらわなければな
らない。しかし今まではこのような診断剤に好適である
保存剤を見出すことは極めて困難であることが明らかに
なった。それというのも細菌、酵母及び真菌に対する十
分な有効作用と共に試験に関与する物質の反応性が使用
する保存剤によって妨害されてはならないからである。 例えば酵素又は抗体のようなタンパク質並びに抗原及び
基質の保存剤に対する感度は、例えばタンパク質が変性
され得るかあるいはまた免疫構造が分解されることで明
らかになる。更に、添加した保存剤がそのような物質と
しばしば結合し、それ故試験における本来の結合成分に
対して競合する(例えば酵素/基質、抗体/抗原の結合
)。それ故従来は特定の診断試験系に関してその都度そ
れに適した前記の性質を有する保存剤を見出す必要があ
った。
に診断試験系に使用することができ、その保存特性にお
いて広範な菌を遮断しかつ耐性菌の形成を最少にする保
存剤を開示するという目的を有している。このようにし
て保存剤の試験及び貯蔵挙動により数少ない物質に限定
されることになり、かつ前記の性質を有する新しい保存
剤の調査は少なくなりあるいは忘れ去られてしまった。
験系の保存に好適でありかつ2−メチル−4−イソチア
ゾリン−3−オン−ヒドロクロリド、2−ヒドロキシピ
リジン−N−オキシド、クロルアセトアミド、{N,N
−メチレン−ビス{N−(1−ヒドロキシメチル)−2
,5−ジオキソ−4−イミダゾリジニル]}−尿素及び
5−ブロム−5−ニトロ−1,3−ジオキサンを包含す
る群類から選択される成分少なくとも2種を含有する保
存剤組成物により解決される。
組成物が広範な多種多様の菌に対して殺菌作用をするば
かりでなく、それと同時に診断試験法にマイナスの作用
を及ぼさないということが判明し驚異的であった。
ン−ヒドロクロリドを前記の保存剤の少なくとも1種と
組合せて使用すると特に優れいる。それ故、2−メチル
−4−イソチアゾリン−3−オン−ヒドロクロリドと2
−ヒドロキシピリジン−N−オキシドもしくは2−メチ
ル−4−イソチアゾリン−3−オン−ヒドロクロリドと
クロルアセトアミドもしくは2−メチル−4−イソチア
ゾリン−3−オン−ヒドロクロリドと{N,N−メチレ
ン−ビス[N−(1−ヒドロキシメチル)−2,5−ジ
オキソ−4−イミダゾリジニル]}−尿素又は2−メチ
ル−4−イソチアゾリン−3−オン−ヒドロクロリドと
5−ブロム−5−ニトロ−1,3−ジオキサンを含有す
る保存剤が特に優れている。
サンを前記の他の保存剤と組合せても同様に優れている
。
ン−ヒドロクロリド(以下メチルイソチアゾリンとも記
載する)は、S.N.ルイス(Lewis)及びその他
共著、“J.Heterocycl.Chem.”(1
971)、8、571及び米国特許第4105431号
明細書(1968)に記載されているような方法により
得られる。2−ヒドロキシピリジン−N−オキシドは、
20%−溶液として商品名オキシ・ピリオン(Oxy−
Pyrion;Pyrion−Chemie、ドイツ国
Neuss在)で市販されておりかつそれを酢酸エチル
エステル及び/又はクロロホルムで抽出しかつ引続いて
蒸留により抽出剤を除去して単離することができる。 {N,N−メチレン−ビス[N−(1−ヒドロキシメチ
ル)−2,5−ジオキソ−4−イミダゾリジニル]}−
尿素は商品名ゲルマル(Germall)115(Ch
emag AG社、ドイツ国フランクフルト在)で市
販されている。2−クロル−アセトアミドはE.メルク
(Merck)社(ドイツ国ダルムシュタット在)から
市販されている。5−ブロム−5−ニトロ−1,3−ジ
オキサンはヘンケル(Henkel)KG社(ドイツ国
在)から商品名ブロニドックス(BRONIDOX)で
市販されている。
の微生物に関して知らている。しかしながらそれらの組
成物が、生物学的、特に診断試験法で行なわれる高感度
な反応メカニックを一般的に損なわないのは驚異的であ
る。
−4−イソチアゾリン−3−オン−ヒドロクロリド、2
−ヒドロキシピリジン−N−オキシド、クロルアセトア
ミド、{N,N−メチレン−ビス[N−(1−ヒドロキ
シメチル)−2,5−ジオキソ−4−イミダゾリジニル
]}−尿素及び5−ブロム−5−ニトロ−1,3−ジオ
キサンを含む群類から選択される物質少なくとも2種か
らの組成物を含有する診断用試験系、特に診断試験用キ
ットにも関する。
2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オン−ヒドロク
ロリドは0.001〜0.5%の量で、2−ヒドロキシ
−ピリジン−N−オキシド、クロルアセトアミド及び{
N,N−メチレン−ビス[N−(1−ヒドロキシメチル
)−2,5−ジオキソ−4−イミダゾリジニル]}−尿
素は0.1〜0.5%の量で及び5−ブロム−5−ニト
ロ−1,3−ジオキサンは0.001〜0.5%の量で
含まれており、その際にその量は試験用キットもしくは
標準又は緩衝溶液が使用されるまで貯蔵される水溶液中
の濃度に関する。本発明による保存剤組成物は試験用キ
ット中で緩衝液に、またそれぞれの試薬に添加できるこ
とも明らかになった。また保存剤組成物を試験試薬及び
緩衝溶液に同時に添加すると有利であることも明らかに
なった。本発明による試験用キット中の試験試薬とは一
般に生物学的に活性なタンパク質及び特に酵素及び/又
は抗体である。
断試験系の保存に使用することにも関する。
、特に酵素、抗体及び/又はタンパク質ホルモン、その
ような酵素、ホルモン、特にT3、T4の基質もしくは
ステロイド及び/又は抗原もしくはハプテンを含有する
試験に特に好適であることが明らかになった。
コリ(Escherichia coli)ATCC
8739 プソイドモナス・エルギノーサ(Pseudomona
s aeruginosa)ATCC9027 スタフィロコックス・アウレウス(Staphyloc
ocus aureus)ATCC6538P を接種用白金耳を用いてCaSo寒天上に塗沫しかつ3
1℃で16〜24h培養する。集密的成長が単一コロニ
ーに移行する塗沫区域から接種用白金耳により少なくと
も5つのコロニーに由来する細菌を採取しかつ約10m
lの生理食塩溶液中に均一に懸濁させる。このようにし
て得られた懸濁液を試験用芽胞懸濁液Tと表わす。
7KBE/mlのコロニー数の接種用懸濁液10mlを
生成する。バチルス・スブチリス(Bacillus
subtilis)については蒸留水中の胞子懸濁液
が貯蔵されており、その力価を1/4年間隔で改めて測
定する。“細菌”混合懸濁液を製造するために個々の接
種懸濁液を同量で混合する。この混合懸濁液にバチルス
・スブチリス胞子懸濁液を1ml当り胞子105個が生
成するように添加する。この懸濁液を“細菌”の混合懸
濁液と表わす。
カンジダ・アルビカンス(Candida albi
cans)ATCC 10231 ロドトルラ・ルブラ(Rhodotorula ru
bra)DSM 70403 アルペルギルス・オリゼ(Aspergillus
oryzae)DSM 6303 ムコル・ラセモスス(Mucor racemosu
s)TACC 7935 ペニシリウム・フレクエンタンス(Penicilli
um frequentans)DSM62843 をサブロー・マルトース−寒天を含有する傾斜寒天試験
管上に接種しかつ23℃で12〜16日間培養する。培
養物の上に生理食塩溶液約2mlを注ぎかつ滅菌ガラス
棒で懸濁させる。このように生成した懸濁液を生理食塩
溶液で混濁がマックファーランド標準(Mc−Farl
and−Standard)108に相当するように稀
釈する。この懸濁液を滅菌生理食塩溶液1:10で稀釈
して、1ml当り胞子又は酵母細胞約107個の懸濁液
を生成する。この懸濁液を“糸状菌と酵母”の混合懸濁
液と表わす。
市販されている試験溶液の成分について試験した。
5mlを添加する。それ故、このバッチはKBE約10
5/mlを含有し、その際にバチルス・スブチリスの割
合はKBE約103/mlである。バッチの貯蔵温度は
31℃である。
濁液0.5mlを添加する。それ故、このバッチはKB
E約105/mlの糸状菌及び酵母を含有する。バッチ
の貯蔵温度は23℃である。
ニー数を測定する。このために、試料0.5〜2mlを
バッチから採取しかつ2つの平行な稀釈列において予測
される芽胞力価に相応して生理食塩溶液で稀釈しかつ寒
天培養プレート上に塗り拡げてコロニー数を測定する。 その都度0.1mlを手で又はラセン状板形装置で標準
寒天平板上(φ90mm)に分散させる。稀釈は予測さ
れるコロニー数に相応する。
は、芽胞が保存剤の添加により6週間の貯蔵後に減少す
る数を表わす。表中に記載の注文No.はベーリンガー
・マンハイム社(Boehringer Mannh
eim GmbH、ドイツ国在)の注文番号である。
rij35(登録商標):ラウリルアルコールのポリエ
チレングリコールエーテルをベースとする界面活性剤(
製造者:Atlas Chemie)POD:ペルオ
キシダーゼ AFP:α−フェトタンパク質 CEA:癌胎児性抗原 FSH:卵胞刺激ホルモン HCG:ヒト絨毛性腺刺激ホルモン LM :黄体形成ホルモン MES:4−モルホリンエタンスルホン酸緩衝液抗−プ
ロゲステロン−ビオチン:ビオチンと、プロゲステロン
に対する抗体とからの複合体 PEG40000/6000:平均分子量40000/
6000のポリエチレングリコール 抗−ApoAI:アポリポタンパク質AIに対する抗体
抗−ApoB:アポリポタンパク質に対する抗体
表 1
芽胞減少KBE/ml
試 験
成 分 試験キット
試 薬 組 成 細 菌
糸状菌/酵母コリンエステラーゼ ビン1
7×104
9.6×104試験組成物
リン酸塩緩衝液52mM;注文No.12713
3 pH7.7
5,5−ジチオビス−ニトロ
ベンゾエート
0.25mM
メチルイソチアゾロン0.01%
ゲルマル(Germall)
0.1%
コリンエステラーゼ ビン1
6.8×104
9.2×104Hitahi704のシステム リ
ン酸塩緩衝液60.7mM;パッケージ
pH7.7注文No.851167
5,5−ジチオビス−ニトロ
ベンゾエート0.30mM
メチルイソチ
アゾロン0.001%
ゲルマル115 0.1%
アルブミン自
動パッ スクシネート緩衝液 1
.6×104 8.3×104ケージ
750mM;pH4.2注文N
o.263869 ブロムクレゾールグリーン
1.5m
M Brij
35 2−ヒ
ドロキシピリジン−N
−オキシド 1.0%
ゲルマル115 1.0
%
Hitachi704のアルブ スクシネート緩
衝液 3.6×104 7.
0×104ミンシステムパッケージ 75mM;pH
4.2注文No.816272 ブロムクレゾー
ルグリーン
0.15mM
Brij35
2−ヒドロキシピリジン−N
−オキシド 0.
1% ゲルマ
ル115 0.1%
酸性ホスファターゼ ビン1
2
×104 1.5×105試験組成物
クエン酸塩緩衝液注文No.125008
550mM;pH4.8
メチルイソチアゾロン
0.11%
2−ヒドロキシ
ピリジン−N
−オキシド 1.1%
エンチムン(En
zymun) ビン1 恒温保持緩衝液
7.5×104 8.6×104試験AFP
リン酸塩緩衝液40mM;注
文No.711411 pH6.6
メチルイソ
チアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン4a−e標準
1.1×105 6.2×10
4 ヒト
血清中のAFP
メチルイソチアゾロン
0.1%
2−ヒドロキシピリジン
−N
−オキシド 0.1%
Enzymun試験CEA
ビン1 恒温保持緩衝液 7
.3×104 5.6×104注文No.204
501 酢酸塩緩衝液100mM;
pH5.7
メチルイソチアゾロ
ン
0.01%
クロルアセトアミド
0.10%
ビン3a−e標準
8.4×105 2.4×104
馬血清中のCEA
メチルイソチアゾロン
0.1% 2−ヒドロ
キシピリジン−N
−オキシド 0.1%
Enzymu
n試験 ビン1 恒温保持緩衝液
7.5×104 8.6×104コル
チゾール リン酸塩緩衝液40mM;注
文No.1096141 pH6.0
牛血清アルブミン
0
.30% メ
チルイソチアゾロン
0.10%
クロルアセトアミド
0.10%
ビン3a−e標準
1.1×105 6.2
×104 ヒ
ト血清中のコルチゾール
メチルイソチアゾロン
0.1%
2−ヒドロキシピリジン
−N
−オキシド 0.1%
Enzymun試験FSH
ビン1 恒温保持緩衝液 7
.5×104 8.6×104注文No.109
6923 リン酸塩緩衝液40mM;
pH7.4
メチルイソチ
アゾロン
0.01%
2−ヒドロキシピリジン−N
−オキシド 0
.1% ビン
3a−f標準 9.4×104
7.2×104
牛血清マトリクス中のFSH
メチルイソチアゾロン
0.
01% 2−
ヒドロキシピリジン−N
−オキシド 0.1%
Enz
ymun試験HCG ビン1 恒温保持緩
衝液 7.5×104 8.6×10
4注文No.855332 リン酸塩緩衝液40
mM;
pH7.4
メチルイソチアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン4a−e標
準 1.4×105 6
.1×104
タンパク質マトリクス中のHCG
メチルイソチアゾロン
0.05%
2−ヒドロ
キシピリジン−N
−オキシド 0.1%
Enzymu
n試験IgE ビン1 恒温保持緩衝液
9.6×104 7.6×104注文
No.886882 トリス緩衝液100mM;
pH7
.6 メチル
イソチアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン2 接合体緩衝液
トリス緩衝液
100mM;
pH7.6
ビン4a−f標準
8.4×105 2.4×104
馬血清中のIgE
メチルイソチアゾロ
ン
0.1% 2
−ヒドロキシピリジン−N
−オキシド 0.1%
En
zymun試験 ビン1 恒温保持
緩衝液 7.5×104 8.6×1
04インシュリン リン酸塩緩衝液40
mM;注文No.974820 pH7
.0 メチル
イソチアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン3a−e標準
9.4×104 7.2×10
4 牛血清マ
トリクス中の
インシュリン
メチルイソチアゾロン
0.1%
2−ヒドロキシピリジン−N
−オキ
シド 0.1%
Enzymun試験LH
ビン1 恒温保持緩衝液 7.5×1
04 8.6×104注文No.1096907
リン酸塩緩衝液40mM;
pH7.4
メチルイソチアゾロン
0.01%
クロルアセ
トアミド
0.1%
ビン3a−f標準
牛血清マトリクス中のLH 9.
4×104 7.2×104
メチルイソチアゾロン
0.1%
2−ヒドロキ
シピリジン−N
−オキシド 0.1%
Enzymun
試験 ビン1 複合体緩衝液
7.5×104 8.6×104プロ
ゲステロン リン酸塩緩衝液40mM;注文No
.1204475 pH7.0
メチルイソチアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン2 PO
D複合体 6.5×104
8.1×104
POD>2U/ml
MES100mM;pH5.5
メチルイソチアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン3 AK−ビオチン
6.5×104 8.1×10
4 抗−プロゲス
テロン−ビオチン
MES100mM;pH5.5
メチルイソチアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン4a−e標準
1.1×105 6.2×1
04 ヒト血清中
のプロゲステロン
メチルイソチアゾロン
0.1%
2−ヒドロキシピリジン−N
−オキシド 0
.1%
Enzymun試験 ビン1
複合体緩衝液 7.5×104
8.6×104テストステロン リン酸塩緩
衝液40mM;注文No.1242024 pH
7.0 メチルイ
ソチアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン2 POD複合体
6.5×104 8.1×104
POD>6.5U/ml
MES 100mM;
pH5.5 メチ
ルイソチアゾロン
0.01%
クロルアセトアミド
0.1%
ビン3 AK−ビオチン 7.5
×104 8.6×104
抗−テストステロン−ビオチン
リン酸塩緩衝液40m
M; pH7
.0 メチルイソ
チアゾロン
0.01% クロ
ルアセトアミド
0.1% ビ
ン4a−e標準 9.4×
104 7.2×104
牛血清マトリクス中のテスト
ステロン
メチルイソチアゾロン
0.1%
2−ヒドロキシピリジン
−N −
オキシド 0.1%
チナクアント(Tinaq
uant)a ビン1
5.3×104 6.6×104
アポリポタンパク質AI トリス緩衝液50mM;注
文No.1174371 pH8.
0
PEG 40000 4.00%
メチルイソチアゾロ
ン
0.01%
ブロニドックス
(Bronidox)0
.10%
ビン2 5
.3×104 6.6×104
トリス緩衝液100
mM;
pH8.0
抗−ApoAI(羊)
メチルイソチアゾ
ロン
0.01%
ブロニドックス0.10%
キャリブレータ
5.5×104 5.4×
104
ヒト血清
メチルイソチアゾロン
0.01%
ブロニドッ
クス0.10%
Tinaquant a
ビン1 5.
3×104 6.6×104アポリポタンパク質
B トリス緩衝液50mM;注文No.1174
380 pH8.0
PEG 600
0 4.00%
メチルイソチアゾロン
0.01%
ブ
ロニドックス0.10%
ビン2
5.3×104 6.6×104
トリ
ス緩衝液100mM;
pH8.0
抗−ApoB(羊)
メチルイ
ソチアゾロン
0.01%
ブロニドックス0.10%
キ
ャリブレータ 5.5×104
5.4×104
ヒト血清
メチルイソチアゾロン
0
.01%
ブロニドックス0.10%
尿中アルブミン
ビン1
3.1×105 5.5×104測定用試薬
トリス緩衝液100mM;(Ti
naquanta pH8
.0注文No.1203622) PEG 4
0000 4.00%
メチルイソチアゾロン
0.01%
ブロニドック
ス0.10%
ビン2
3.1×105 5.5×104
トリス緩衝液100
mM;
pH7.2
抗−hSA(羊)
メチルイソチアゾロン
0.01%
ブロニドッ
クス0.10%
キャリブレータ 3.
1×105 5.5×104
リン酸塩緩衝液50mM;
p
H8.0
血清アルブミン300mg/l
メチルイソチアゾロン
0.01
% ブロ
ニドックス0.10%5. 芽胞減少 5.1 細菌 コロニー数は観察時間中に少なくとも103KBE減少
し、有意な芽胞の増殖は起り得ない。
し、有意な芽胞の増殖は起り得ない。
際に、滅菌していない条件下で充填する際にもしくはこ
れらの試薬を一般的に取り扱う際に生じる汚染(空中菌
、手に付着している菌、滅菌していないピペット、滅菌
していないパッキング材)に対して保存作用は十分であ
る7. 診断法に対する影響 使用した保存剤組成物のいずれもが表1による診断試薬
系の測定結果に対する影響を示さなかった。
Claims (2)
- 【請求項1】 2−メチル−4−イソチアゾリン−3
−オン−ヒドロクロリド、2−ヒドロキシピリジン−N
−オキシド、クロルアセトアミド、{N,N−メチレン
−ビス[(N−1−ヒドロキシメチル)−2,5−ジオ
キソ−4−イミダゾリジニル]}−尿素及び5−ブロム
−5−ニトロ−1,3−ジオキサンを包含する群類から
選択される成分少なくとも2種を含有することを特徴と
する診断用試験系の保存組成物。 - 【請求項2】 試験試薬並びに2−メチル−4−イソ
チアゾリン−3−オン−ヒドロクロリド、2−ヒドロキ
シピリジン−N−オキシド、クロルアセトアミド、{N
,N−メチレン−ビス[N−(1−ヒドロキシメチル)
−2,5−ジオキソ−4−イミダゾリジニル]}−尿素
及び5−ブロム−5−ニトロ−1,3−ジオキサンを包
含する群類から選択される保存剤少なくとも2種を含有
する、保存される診断用試験キット。
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