KR100667255B1 - 검출 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 미생물의 존재 여부를 확인하기 위하여 탄화수소 연료를 분석하는 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 미생물의 존재 또는 부재를 검출하기 위하여 연료 샘플을 수용성 희석제 및 미생물과 반응하거나 또는 상기 미생물에 의해 생성된 대사물질 또는 분해 산물과 반응하는 항체와 접촉시키는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 탄화수소(hydrocarbon) 연료의 분석 방법에 관한 것이다.
탄화수소 연료는 미생물에 오염될 수 있음이 잘 알려져 있으며, 이는 바람직하지 않은 일이다. 예를 들면, 호르모코니스 레지내(Hormoconis resinae)(제트기 연료 진균)는 항공 등유에서 자랄 수 있으며, 항공기 날개 탱크에서 부식 및 봉쇄(blockage) 문제를 야기시킨다. 항공회사들은 오염이 의심되는 경우에는 검사를 위하여 샘플을 실험실에 보낼 것을 요구받고 있다. 대부분의 실험실에서는 확인을 위하여 10일 가까이 걸리는 표준 배양 기술을 사용한다. 시장에는 흔히 말하는 "신속한" 검사들이 존재한다. 그러나, 이들 모두는 결과를 얻기 위하여 72시간이 걸리는 배양 기술에 기초하고 있다.
대부분의 항공회사들은 이러한 정도의 지연도 수용할 수 없으며, 자동적으로 살생물제(biocide)를 사용한다: 따라서, 검사를 하는 것은 단지 문제의 사후 확인에 불과하다. 진실로 신속한 검사 방법은 실질적으로는 불필요한 비가동시간(downtime) 및 살생물제의 처리에 따른 비용을 제거시킬 것이다.
현재 탄화수소 연료에서의 미생물의 존재를 확인하기 위한 신속한 검사는 여전히 가용하지 않는다. 본 발명에서는 이러한 문제에 대하여 언급하고자 한다.
첫 번째 관점에서, 본 발명은 미생물의 존재 여부를 확인하기 위하여 액체 탄화수소 연료를 분석하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 미생물의 존재 또는 부재를 검출하기 위하여 연료 샘플을 액체 탄화수소 연료와 접촉하여 성장한 미생물 또는 상기 미생물의 균질액에 특이적인 항체와 접촉시키는 것을 포함한다.
상기 방법은 바람직하게는 탄화수소 연료의 샘플을 관심있는 미생물과 반응하는 항체와 혼합시키고, 미생물과 결합한 항체를 검출하는 단계를 포함한다.
미생물에 대한 항체를 연료에 처리하면 연료에 있는 미생물의 존재에 대한 매우 신속한 분석(assay)을 제공한다는 것이 발견되었다. 예를 들면, 항공 연료에 존재하는 호르모코니스 레지내에 대한 검사들이 개발되었으며, 90분 이내에 결과를 제공한다. 상기 방법에 의해, 본 발명은 살생물제를 필요한 경우에만 사용할 수 있게 하며, 살생물제는 잠재적으로는 사용하고 취급하기에 위험한 화합물이기 때문에, 이는 바람직한 일이다. 반대로, 캠포스 로페스(Campos Lopes) 및 게이라드(Gaylarde)의 Int. Biodeterioration & Biodegradateion (1996) 37-40 에서는 연료 샘플이 여과되고 여과 패드가 막히고, 건조되고, 포르말린에 고정되고, 특정한 항체와 배양되어 세 번 세척되고, 다시 세 번 세척되는 방법이 개시되어 있다. 그 후, 항체 결합체(conjugate)는 첨가되고 추가로 배양된다. 세 번의 세척 뒤에 필터는 건조되고 관찰되며, 전체 과정은 4시간을 상회한다.
비록 분석은 경-중급(light-middle) 증류 연료에 대하여 수행되기에 적당하지만, 모든 액체 탄화수소 연료는 본 발명의 방법을 사용하여 미생물 오염에 대해 분석될 수 있다. 액체 연료 및 연료 성분들은 항공 및 디젤 연료 및 이와 동등하거나 유사한 조성을 가지는 탄화수소 연료와 같이 390℃ 이하의 끓는점을 가지는 것이 바람직하다. 다른 적합한 탄화수소 연료들은 기술 분야에서 잘 알려져 있다. 가솔린은 본 발명에 있어서의 다른 바람직한 연료이다.
본 발명은 탄화수소 연료에 존재할 수 있는 모든 미생물의 검출에 관한 것이다. 예를 들면, 세균, 효모 및 진균 종들은 본 발명의 방법을 사용하여 모두 분석될 수 있다. 탄화수소 연료에서 생활할 수 있으며, 분석이 바람직한 세균의 예로는 슈도모나스(Pseudomonas) 및 알칼리게너스(Alcaligenes) 종들을 포함하며, 바람직한 효모의 예로는 칸디다(Candida), 야로위아(Yarrowia) 및 로도토룰라(Rhodotorula) 종들을 포함하지만, 본 발명은 단지 상기 종들의 분석에 한정되지는 않는다. 특별히 바람직하게는 클라도스포리움 레지내(Cladosporium resinae)로도 알려져 있으며 생식기에는 아모르포테카 레지내(Amorphotheca resinae)로 불리는 진균 종인 호르모코니스 레지내가 있다. 다른 진균으로는 아스퍼질러스 퓨미가투스(Aspergillus fumigatus), 아스퍼질러스 나이거(A. niger), 알케르나리아 알테르나타(Alternaria alternata), 패실로마이세스 비리오타이(Paecilomyces viriotii) 및 페니실린 종들을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 '항체'라는 용어는 특정한 미생물과 반응하는 모든 적합한 면역학적 물질(agent)을 나타낸다. 따라서, '항체'라는 용어는 단지 자연적으로 발생하는 항체에만 한정되지 않으며, 예를 들면 전체 항체의 절편 및 항체 유도체를 포함한다. 만일 항체 절편 또는 유도체가 사용된다면, 미생물 항원에 대한 상기 물질의 반응성이 전체 자연 항체와 대등하게 일정하게 유지되어서, 항체가 미생물의 검출에 사용될 수 있는 것이 바람직하다. 단일클론(monoclonal) 및 다클론(polyclonal) 항체 모두 본 발명에서 사용될 수 있으며, 상기 항체들의 제조는 기술 분야에서 표준화되어 있다.
분자 수준에 있어서, 항체의 반응성 또는 특이성은 일반적으로 미생물에서 발현된 또는 연관된 항원에 의해서 결정된다. 따라서 본 명세서에서 기재된 미생물에 대한 항체의 반응성은 상기 항체-항원의 상호작용을 나타내며, 이것은 항체 표적(antibody target) 및 특이성을 나타낸다.
또한, 탄화수소 연료에서의 미생물의 존재는 관심있는 미생물의 대사물질 또는 분해 산물의 존재에 의해서 나타날 수 있다. 이러한 대사물질 또는 분해 산물에 대한 항체도 탄화수소 연료에서의 미생물의 검출을 허용하며, 이러한 항체의 사용은 또한 본 발명의 범위에 포함된다.
바람직하게는 항체는 관심있는 미생물에 대하여 특이적이며, 관심있는 미생물에 특이적인 대사물질 및/또는 분해 산물에 대하여 반응한다. 이러한 방법으로, 특정한 미생물 종은 본 발명의 방법을 사용하여 동정될 수 있다. 그러나, 본 발명에서는 다수의 종들에서 공통적인 항원 또는 유도체에 반응하는 항체를 사용하는 것이 또한 가능하다. 이러한 경우, 항체는 종-특이적이지는 않지만 여전히 탄화수소 연료에 존재하는 미생물 클래스(class)의 검출을 허락한다. 따라서, 본 발명은 또한 탄화수소 연료에서의 미생물 클래스의 검출 방법에 관한 것이며, 클래스는 공통적인 항원에 의해서 정의된다.
사용된 분석 및 검출 방법에 따라, 본 발명에서 사용되는 항체는 항원에 대한 항체 결합의 검출을 향상시키기 위하여 선택적으로는 다른 단백질 또는 화학 표지자(chemical marker)와 결합될 수 있다. 바람직하게는 항체는 알칼라인 포스파타제(alkaline phosphatase)와 같은 효소 인자 또는 콜로이드 금(colloidal gold), 바이오틴(biotin) 및 스트렙트아비딘(streptavidin)과 같이 쉽게 검출될 수 있는 그룹과 결합된다. 다른 적합한 결합 물질들은 기술 분야에서 잘 알려져 있다.
본 발명에서는 항체의 결합을 분석하기 위하여 어떠한 적합한 검출 방법도 사용될 수 있다. 비색정량 분석(colorimetric assay)과 같이 결과가 광학적 또는 시각적으로 검출되는 방법이 바람직하다. 적합하게는 샌드위치 또는 이중 층(double layer) 분석과 같은 ELISA 분석이 사용될 수 있으며, 이에 대한 방법들은 기술 분야에서 표준화되어 있다. 마이크로타이터 접시(microtitre dish)와 같은 기질에 부착된 항원과 검사 샘플에 존재하는 항원이 항체의 결합을 위하여 경쟁하는 경쟁 분석(competition assay)이 바람직하다.
또한, 항체 결합의 검출은 계심봉(dipstick)과 같은 측면 흐름 장치(lateral flow device)를 사용하여 수행될 수 있으며, 이는 또한 기술 분야에서 표준이다. 시장에서 가용한 임신진단 키트는 이러한 기술의 간단한 예를 보여준다. 예로서, 항원에 대한 검사 샘플은 계심봉에 적용될 수 있으며, 계심봉은 적합한 거즈(wick) 및 항원과 반응하는 고정된 항체를 포함한다. 계심봉을 따라 샘플이 이동하면서 모든 항원은 고정된 항체와 접촉한다. 예를 들면, 표지된 항체와 추가로 반응함으로써 결합된 항원은 검출될 수 있다. 계심봉 기술의 다른 예 및 이러한 기술을 이용한 분석방법은 기술 분야에서 표준화되어 있다.
방사표지된 검출 시스템은 덜 바람직하지만, 그럼에도 불구하고 방사표지(예를 들면, 방사면역분석 및 방사알레르고흡수(radioallergosorbent) 검사)를 포함하 는 방법들은 본 발명의 항체-항원 결합을 검출하는데 있어서 또한 효과적이다.
특별히 바람직한 본 발명의 실시예에 있어서, 분석 방법은 유화제(emulsifier)의 존재하에서 연료와 항체를 접촉시키는 것을 포함한다. 유화제의 존재는 연료 샘플에서의 항체와 항원간의 상호작용을 촉진시킨다.
모든 적합한 유화제가 본 발명에서 사용될 수 있다. 강력한 유화제 및 연료 샘플에 존재하는 알칸(alkane) 화합물의 항체에 대한 모든 변성 효과를 감소시키는 유화제가 바람직하다. 유화제의 적합성은 예를 들면, 다른 유화제의 존재하에서 오염된 연료 샘플에서의 항원에 대한 항체의 결합을 비교함으로써 즉시 분석될 수 있다.
비-이온성 계면활성제는 본 발명에 있어서 일반적으로 바람직하며, 트리톤(Triton)과 같은 알킬에톡실레이트(alkylethoxylate) 계면활성제 및 폴리옥시에틸렌 (20) 소비탄 모노라우레이트 (트윈 20 이라고 알려져 있음)와 같은 폴리옥시에틸렌 소비탄 모노에스테르(polyoxyethylene sorbitan monoester)가 계면활성제로서 특별히 바람직하다. 적합하게는, 트윈 20과 같은 계면활성제는 탈이온화된 물에서 준비될 수 있으며, 부피비로 0.01 내지 10% 농도에서 사용될 수 있고, 1 내지 5% 농도에서 사용되는 것이 바람직하며, 2.5% 농도에서 사용되는 것이 가장 바람직하다. 그러나, 계면활성제의 최적 농도는 분석되는 연료에 따라서 변화될 수 있으며, 기술 분야에서 능숙한 당업자에 의해서 즉시 확인될 수 있다.
본 발명의 방법은 미생물의 배양을 요구하지 않으며, 따라서 결과는 매우 신속하게 얻어질 수 있다. 전형적으로, 본 발명의 방법은 연료 분석 시작, 즉 연료 샘플이 어떠한 방법으로든 처음 다루어진 시점으로부터 2시간 이내에 결과를 제공한다.
추가로 본 발명은 본 발명의 분석에 사용되기 위한 키트에 관한 것이다. 바람직하게는, 본 발명에 사용되기 위한 키트는 액체 탄화수소 연료에서 자랄 수 있는 미생물 유래의 항원 샘플, 상기 항원과 반응하는 항체 및 상기에서 기술한 적합한 유화제를 포함한다.
선택적으로는, 본 발명의 키트는 하나 또는 그 이상의 하기 리스트로부터 선택되는 추가적인 성분들을 포함한다: 항원 또는 항체와 미리 코팅된 적합한 기질(예를 들면, 마이크로타이터 접시), 적합한 항원 표준물질, 미생물과 결합하는 항체를 표지하기 위한 표지 시약, 첫 번째 (미생물 특이적) 항체와 반응하는 추가 (검출) 항체, ELISA 기질 시약과 같은 검출 시약, 종결 용액(stop solution) 및 세척 용액.
추가로 본 발명은 본 발명에서 사용하기 위한 미생물 및 적합한 항원을 준비 하기 위한 방법에 관한 것으로서, 미생물을 탄화수소 연료에서 적어도 한 스텝(step)의 성장 과정동안 배양하는 단계를 포함한다. 다음으로 미생물 및/또는 항원은 표준 방법들을 사용하여 성장 배지에서 적합하게 회복된다. 이러한 방법으로, 미생물에 존재하는 항원의 형태(configuration) 및 이로부터 유래된 대사물질 또는 유도체의 형태는 탄화수소 연료에서 유래된 샘플에 존재하는 것들의 거울상이기 쉽다. 이러한 방법으로, 연료 샘플에서의 항원에 대한 항체 반응은 최적화될 수 있다.
따라서, 본 발명은 액체 탄화수소 연료에서 성장한 미생물에 대해 제조된 항체 및 연료 오일에서 성장하는 미생물의 대사물질 또는 유도체에 대한 항체에 관한 것으로서, 상기 항체는 선택적으로는 검출을 위한 표지를 포함한다. 또한, 본 발명은, 상기에서 기술된 바와 같이, 상기 항체를 이용하여 액체 탄화수소 연료를 분석하기 위한 방법 및 키트에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. ELISA를 이용한 탄화수소 연료에 존재하는 H. 레지내의 분석
물질
항원/호르모코니스 레지내의 준비
항원의 준비는 마이크로플레이트의 코팅 및 ELISA 테스트를 사용한 표준물질의 생산에 모두 사용된다.
1. H. 레지내는 맥아 추출 아가(토피 맥아 추출물(toffee barley malt extract) 20 g, 아가 옥소이드 No.3 20 g, 수돗물 1 ℓ, pH 6.5, 121℃에서 15분간 살균)에서 25℃에서 7 내지 10일간 성장한다.
2. 포자 현탁액이 'Bushnell Haas'(Difco) 액체 배지(broth)에서 준비된다. 100 ㎖의 연료 당 약 3 ㎖의 현탁액이 하기에 기술된 것처럼 접종물(inoculant)로 사용된다.
3. H. 레지내는 멸균 연료를 멸균 Bushnell Hass 배지로 대략 1 : 3의 비율로 부유시킴으로써 준비된 연료 배지에 접종된다.
4. 용기에서 가득찬(confluent) 균주 매트가 얻어질 때까지 배지는 25℃에서 배양된다.
5. 매트는 배지로부터 수집되어 여과되며, 멸균된 증류수로 세척된다.
6. 다음으로, 매트는 4분 동안 Mickle 비드 비터(bead beater)에서 멸균된 얼음물로 균질화된다.
7. 결과물인 균질액인 5,000 rpm에서 5분 동안 원심분리되며, 멸균된 증류수 로 세 번 세척된다.
8. 최종적인 균질물 펠렛(pellet)은 동결건조되고, 상기 생성물이 항원으로 사용된다.
플레이트 코팅을 위한 항원
1. 2 ㎎/㎖의 균질화된 항원 용액이 pH 7.4의 PBS 버퍼에서 준비되었고 4℃에서 밤새도록 세차게 교반시켰다.
2. 20 ㎍/㎖의 항원 부유물을 TRIS 버퍼 (50 mM Tris) pH 8.5에서 제조하고 100 ㎕/웰 로 마이크로타이터 플레이트의 웰에 코팅하였다.
3. 플레이트는 4℃에서 밤새 배양된다.
4. 플레이트는 5% 무게의 락토즈,0.2% 무게의 물고기 젤라틴 및 0.1% 나트륨 아자이드가 용해된 탈이온화된 수용액을 포함하는 블록킹(blocking)/글레이징(glazing) 버퍼로 세척된다(블록킹은 물고기 젤라틴 단백질의 존재에 기인하고 글레이징은 락토즈의 존재에 기인한다).
5. 플레이트는 액체가 흡입되기 전에 실온에서 1시간동안 배양되고, 플레이트는 실온에서 밤새 건조시킨다.
플레이트 표준물질용 항원
20% 에탄올을 포함하는 PBS 버퍼가 (예를 들면, 2 ㎎/㎖의 알려진 농도의) 항원 현탁액에 첨가되어 예를 들면, 적당하게는 100 ㎍/㎖, 30 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖의 알맞은 농도의 표준물질을 제조한다.
항체
H. 레지내로부터 준비된 항원(상기)이 표준 기술을 사용하여 양에서 다클론 항체를 제조하기 위하여 사용되었다.
결합체(conjugate) 시약(추적자)
알칼라인 포스파타제 결합체에 결합된 원숭이 항-양 항체가 양의 항-H. 레지내 항체를 동정하기 위한 추적자(tracer)로 분석에 사용되었다. 또한, 알칼린 포스파타제 단백질을 양의 항-H. 레지내 다클론 항혈청(antiserum)과 결합시키는 것이 가능하며, 이후에 이것을 추적자로 직접적으로 분석에 사용한다.
샘플의 희석
샘플의 희석은 탈이온화된 물에서 제조된 2.5% 부피비의 트윈 20을 포함한다.
ELISA 방법을 위한 분석 시약(키트로서 제공될 수 있음)
1. 호르모코니스 레지내로 미리-코팅된 마이크로플레이트 12 ×8 스트립 (적당하게는 밀봉된 봉지에서 제공된다).
2. 호르모코니스 레지내 표준물질: 표준 물질 농도는 0 내지 100 ㎍/㎖의 범위이다. 각각의 바이알(vial)은 다양한 농도로 표지된다.
3. 비활성 푸른 염색약(15 ㎍/ℓ 농도의 cresyl Blue), 단백질 안정제(BSA 1% w/v) 및 나트륨 아자이드 0.1% w/v 를 포함하는 트리스 버퍼에서의 호르모코니스 레지내 항체.
4. 원숭이 항-양(anti-sheep) 이차 표지된 항체 시약: 비활성 푸른 염색약(, 단백질 안정제(상기와 같음) 및 나트륨 아자이드 0.1% w/v 를 포함하는 트리스 버퍼에 존재함.
5. ELISA 기질 시약: 다이에탄올아민(diethanolamine) 버퍼(262.5 g/2.5 ℓ, 탈이온화된 물에서 제조됨)에서 PMP(phenophthalein monophostphate, 22.5 g/2.5 ℓ 농도로 제조됨) 및 효소 조-인자(MgCl2 1 M/2.5 ℓ)로 구성됨.
6. ELISA 종결 용액: 상기의 다이에탄올아민 버퍼에서 수산화나트륨(70 g/ℓ) 및 킬레이트 시약(EDTA, 74.4 g/ℓ)으로 구성됨.
7. ELISA 세척 버퍼 농도(×10 농도). 0.1% w/v 최종 농도의 나트륨 아자이드를 포함하는 인산염 용액(PBS, pH 7.4) 및 트윈(0.5% v/v 최종 농도)으로 구성됨.
요구되는 물질 및 장치
정밀 피펫기(precision pipettor) 및 일회용 팁.
550 nM 여과기를 가지는 마이크로타이터 플레이트 판독기.
마이크로타이터 플레이터 세척기.
증류수 또는 탈이온수.
마이크로타이터 플레이트 교반기(shaker).
방법
샘플의 준비
1. 연료 샘플을 격렬하게 혼합한다.
2. 용기(container)로부터 연료 샘플을 당량화하고 동일한 양의 샘플 희석제를 첨가한다. 검사는 물 및/또는 연료 상(phase)을 평가하기 위하여 사용될 수 있다.
3. 유화하기(emulsify) 위하여 수초간 결렬하게 혼합한다.
4. 100 ㎕의 혼합물을 취하여 분석 지침(Assay protocol, 하기에 기술)에 따라 첨가한다.
분석 지침
1. 미리-코팅된 플레이트를 밀봉된 봉지에서 꺼내고, 샘플 및 대조군의 위치를 12 ×8 주형 쉬트(template sheet) 상에 기록한다.
2. 100 ㎕의 표준물질과 샘플을 취하여 적당한 웰에 피펫팅한다. 표준물질은 이중으로(duplicate) 검사되어야 한다. 또한, 각각의 샘플은 최적의 결과를 위하여 이중으로 검사되어야 한다.
3. 50 ㎕의 호르모코니스 레지내 항체를 각각의 웰에 분주한다. 플레이트를 씌우고 플레이트 교반기를 이용하여 실온(20 내지 25℃)에서 30분간 배양한다.
4. 플레이트를 상기 ELISA 세척 버퍼(300 ㎕/웰)로 네 번 세척하고, 거꾸로 한 후 흡착 종이에서 견고하게 두드린다(tap). 웰이 완전히 건조된 것을 확인한다.
5. 100 ㎕의 원숭이 항-양 알칼라인 포스파타제 결합체 항체를 각각의 웰에 분주한다. 플레이트를 씌우고 플레이트 교반기를 이용하여 실온(20 내지 25℃)에서 30분간 배양한다.
6. 플레이트를 상기 세척 버퍼(300 ㎕/웰)로 네 번 세척하고, 거꾸로 한 후 흡착 종이에서 견고하게 두드린다(tap). 웰이 완전히 건조된 것을 확인한다.
7. 100 ㎕의 ELISA 기질 시약을 상기와 같이 각각의 웰에 분주한다. 플레이트를 씌우고 플레이트 교반기를 이용하여 실온(20 내지 25℃)에서 30분간 배양한다.
8. 50 ㎕의 ELISA 종결 용액을 상기와 같이 각각의 웰에 분주한다. 플레이트의 옆부분을 가볍게 두드려서 혼합시킨다.
9. 부드러운 티슈(tissue)로 응축(condensation)되지 않은 플레이트의 아래 표면을 닦는다. 550 nM에서 마이크로타이터 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트를 판독한다.
실시예 2. 연료 샘플의 분석
연료 샘플은 테스트를 위하여 항공회사로부터 공급되었다. 2가지 샘플은 전형적인(conventional) 배양 분석에 의해 검사한 결과 진균 오염이 된 것으로 알려져 있었다. 샘플은 실시예 1에서 개괄된 것처럼 처리되었다. 샘플은 유화되었고 분석한 당일에 작동되었다(run). 결과는 하기에 나타나 있다. ELISA 분석의 결과는 배양 분석 방법이 정확함을 증명하며, 2082/32 및 /36 샘플이 높은 진균 성분을 가지고 있을 알 수 있다.
| 샘플 번호(Identity) | ㎍/㎖ 농도 | ㎍/100 ㎖ 농도 |
| 2082/32 | > 200 | > 20,000 |
| 2082/33 | 1 | 100 |
| 2082/34 | 0.30 | 30 |
| 2082/35 | .034 | 34 |
| 2082/36 | 134 | 13,400 |
| 2082/37 | 1.8 | 180 |
| 2082/38 | 0.4 | 40 |
| 2082/39 | 0 | 0 |
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 검출 방법은 탄화수소 연료의 오염을 검출하기 위하여 유용하게 사용될 수 있다.
Claims (10)
- 미생물의 존재 여부를 확인하기 위하여 액체 탄화수소 연료를 분석하는 방법에 있어서, 상기 방법은 연료 샘플을 유화제를 포함하는 수용성 희석제와 혼합시키고, 미생물의 존재 또는 부재를 검출하기 위하여 상기 혼합물 또는 이의 한 상(one phase)을 탄화수소 연료와 접촉하여 성장한 미생물 또는 상기 미생물의 균질액을 항원으로 하여 제조된 항체와 접촉시키는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 방법은 항체와 접촉하기 전에 연료 및 수용성 희석제를 결렬하게(vigorously) 혼합하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 유화제는 비이온성 계면활성제인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 3항에 있어서, 유화제는 폴리옥시에틸렌 (20) 소비탄 모노라우레이트인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 4항에 있어서, 유화제는 0.01 내지 10%의 부피비 농도로 사용되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1항 또는 제 2 항에 있어서, 탄화수소 연료는 390℃ 이하의 끓는점을 가지는 경-중급(light-middle) 증류 연료인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1항 또는 제 2 항에 있어서, 미생물은 호르모코니스 레지내인 것을 특징으로 하는 방법.
- 탄화수소 연료에서 자랄 수 있는 미생물에 특이적인 항원 샘플, 탄화수소 연료와 접촉하여 성장한 미생물 또는 상기 미생물의 균질액으로부터 준비된 항원, 상기 항원을 이용하여 제조된 항체 및 유화제를 포함하는 수용성 희석제를 포함하는 것을 특징으로 하는 제1항의 방법에 사용되는 검출키트.
- 액체 탄화수소 연료에서 성장한 미생물 또는 상기 미생물의 균질액을 항원으로 이용하여 제조되는 항체.
- 삭제
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