JPH04220401A - 脂質を除去した多糖化合物、その製法及びそれを含有する組成物 - Google Patents
脂質を除去した多糖化合物、その製法及びそれを含有する組成物Info
- Publication number
- JPH04220401A JPH04220401A JP3069255A JP6925591A JPH04220401A JP H04220401 A JPH04220401 A JP H04220401A JP 3069255 A JP3069255 A JP 3069255A JP 6925591 A JP6925591 A JP 6925591A JP H04220401 A JPH04220401 A JP H04220401A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- polysaccharide
- imaging
- composition
- weight
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/06—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
- A61K49/10—Organic compounds
- A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
- A61K49/16—Antibodies; Immunoglobulins; Fragments thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/26—Klebsiella (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はＤ２５と名づけられた化
合物の新規誘導体に関する。本発明は特別には化合物Ｄ
２５の脂質を除去した誘導体に関する。本発明はこれら
の新規誘導体の製法にも関する。
合物の新規誘導体に関する。本発明は特別には化合物Ｄ
２５の脂質を除去した誘導体に関する。本発明はこれら
の新規誘導体の製法にも関する。
【０００２】本発明は、マクロファージの標的化による
画像化、特に感染性、炎症性及び腫瘍性病巣の診断また
は治療に用いるための上記誘導体を含む組成物にも関す
る。本発明は、リンパ径路、特に皮下または皮内または
胸膜内径路、または静脈径路それぞれによって投与可能
な注射用組成物のみならず、エアロゾル組成物にも関係
する。
画像化、特に感染性、炎症性及び腫瘍性病巣の診断また
は治療に用いるための上記誘導体を含む組成物にも関す
る。本発明は、リンパ径路、特に皮下または皮内または
胸膜内径路、または静脈径路それぞれによって投与可能
な注射用組成物のみならず、エアロゾル組成物にも関係
する。
【０００３】本発明は、脂質を除去したＤ２５誘導体を
検出可能要素によって標的化した本発明による組成物を
再形成することができる診断用キットにも関する。
検出可能要素によって標的化した本発明による組成物を
再形成することができる診断用キットにも関する。
【０００４】
【従来の技術】Ｄ２５と名づけられた製品は、菌の膜プ
ロテオグリカンから抽出される多糖化合物である。この
多糖化合物は、フランス特許出願第８４ １３８４４号
及び第８６ ０６７６５号に元来記述されている。
ロテオグリカンから抽出される多糖化合物である。この
多糖化合物は、フランス特許出願第８４ １３８４４号
及び第８６ ０６７６５号に元来記述されている。
【０００５】Ｄ２５多糖化合物は、好ましくはパスツー
ル研究所の国立収集物に１４５−Ｉ−ＩＰの番号で保存
されているクレブシェラ・ニューモニア （Ｋｌｅｂｓ
ｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のバイオタイプＡ
の被覆をもたない非病原性の突然変異菌株から抽出され
る。
ル研究所の国立収集物に１４５−Ｉ−ＩＰの番号で保存
されているクレブシェラ・ニューモニア （Ｋｌｅｂｓ
ｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のバイオタイプＡ
の被覆をもたない非病原性の突然変異菌株から抽出され
る。
【０００６】フランス特許出願第８４ １３８４４号及
び第８６ ０６７６５号において、Ｄ２５及びその誘導
体は特に内因性インターフェロンの誘導およびＮＫ細胞
（ナチュラルキラー）の活性化に対する免疫刺激特性を
有することが示された。
び第８６ ０６７６５号において、Ｄ２５及びその誘導
体は特に内因性インターフェロンの誘導およびＮＫ細胞
（ナチュラルキラー）の活性化に対する免疫刺激特性を
有することが示された。
【０００７】これらの特許出願において記載されている
Ｄ２５は、一方では糖１０個の単量体モチーフの約５反
復から成る線状多糖鎖を、他方ではより短いペプチド鎖
が結合した、より複雑な特異な結合配列を含んでいる。
Ｄ２５は、一方では糖１０個の単量体モチーフの約５反
復から成る線状多糖鎖を、他方ではより短いペプチド鎖
が結合した、より複雑な特異な結合配列を含んでいる。
【０００８】線状多糖鎖の単量体の反復単位は、ピラン
型及びフラン型ガラクトースのみを下記の割合：３βＧ
ａｌ ｐ，３αＧａｌ ｐ，２βＧａｌ ｆ，２αＧａ
ｌｆ，で含んでいる。
型及びフラン型ガラクトースのみを下記の割合：３βＧ
ａｌ ｐ，３αＧａｌ ｐ，２βＧａｌ ｆ，２αＧａ
ｌｆ，で含んでいる。
【０００９】この単量単位の配列は次のようである：
【
００１０】
００１０】
【化１】
【００１１】この特異な結合構造は線状多糖鎖の末端に
固定される。この結合構造は、グルコース、ガラスクト
ース、グルコサミン、ヘプトース及びマンノデオキシオ
クツロソン酸残基を含んでいる。この結合構造には、２
つの短いペプチド鎖が結合されている。予想できる配列
は下記のようである。
固定される。この結合構造は、グルコース、ガラスクト
ース、グルコサミン、ヘプトース及びマンノデオキシオ
クツロソン酸残基を含んでいる。この結合構造には、２
つの短いペプチド鎖が結合されている。予想できる配列
は下記のようである。
【００１２】
【化２】
【００１３】２つの結合されたペプチド鎖を構成する下
記のアミノ酸が、平均して次に示す数だけあらわれる。 アスパラギン酸：３ グルタミン酸：２ セリン：１ プロリン：１ グリシン：１．５ アラニン：２ バリン：１ ロイシン：１ リジン：１ 略号： βＧａｌ ｐ＝βガラクトピラノース αＧａｌ ｐ＝αガラクトピラノース βＧａｌ ｆ＝βガラクトフラノース αＧａｌ ｆ＝αガラクトフラノース αＧｌｃ ｐ＝αグルコピラノース αＧｌｃ ｐ，ＮＨ２ ＝αグルコサミンαＨｅｐ ｐ
＝αヘプトース（Ｄ．マンノヘプトース）Ｍａｎ Ｏ
ｃ．Ａ ＝３−デオキシ−Ｄ−マンノオクツロソン酸
記のアミノ酸が、平均して次に示す数だけあらわれる。 アスパラギン酸：３ グルタミン酸：２ セリン：１ プロリン：１ グリシン：１．５ アラニン：２ バリン：１ ロイシン：１ リジン：１ 略号： βＧａｌ ｐ＝βガラクトピラノース αＧａｌ ｐ＝αガラクトピラノース βＧａｌ ｆ＝βガラクトフラノース αＧａｌ ｆ＝αガラクトフラノース αＧｌｃ ｐ＝αグルコピラノース αＧｌｃ ｐ，ＮＨ２ ＝αグルコサミンαＨｅｐ ｐ
＝αヘプトース（Ｄ．マンノヘプトース）Ｍａｎ Ｏ
ｃ．Ａ ＝３−デオキシ−Ｄ−マンノオクツロソン酸
【００１４】アミド、エステルまたはエーテル型のＤ２
５の誘導体、ならびにＤ２５の半合成誘導体である塩及
び第四級アンモニウム誘導体が、出願人名義のフランス
特許第８６ ０６７６５号及び第８７ ０５６９０号に
述べられている。
５の誘導体、ならびにＤ２５の半合成誘導体である塩及
び第四級アンモニウム誘導体が、出願人名義のフランス
特許第８６ ０６７６５号及び第８７ ０５６９０号に
述べられている。
【００１５】Ｄ２５の線状多糖鎖のガラクトフラノース
（Ｇａｌ ｆ）残基がアラビノースに置き換えられてい
るＤ２５の酸化誘導体も、フランス特許出願第８７ ０
５６９０号に述べられている。
（Ｇａｌ ｆ）残基がアラビノースに置き換えられてい
るＤ２５の酸化誘導体も、フランス特許出願第８７ ０
５６９０号に述べられている。
【００１６】化合物Ｄ２５とその誘導体はマクロファー
ジに対して親和性を示し、周辺のマクロファージの動員
をおこす炎症性及び腫瘍性病巣を確認し、そこに結合す
るための理想的なベクター物質となる。本発明以前にお
いて、医学的画像化のためにはエアロゾル組成物のみが
提供されてた。放射性同位体で標識化されたエアロゾル
投与用Ｄ２５の使用は、人、特に気管支癌ガングリオン
転移又は悪性メラノーマガングリオン転移において炎症
性及び腫瘍性ガングリオンの画像化を可能にする。実施
した試験では、実際に先行フランス特許出願に従って製
造したＤ２５の画像化の結果は、エアロゾル経路以外の
適用経路には満足できるものではなかった。
ジに対して親和性を示し、周辺のマクロファージの動員
をおこす炎症性及び腫瘍性病巣を確認し、そこに結合す
るための理想的なベクター物質となる。本発明以前にお
いて、医学的画像化のためにはエアロゾル組成物のみが
提供されてた。放射性同位体で標識化されたエアロゾル
投与用Ｄ２５の使用は、人、特に気管支癌ガングリオン
転移又は悪性メラノーマガングリオン転移において炎症
性及び腫瘍性ガングリオンの画像化を可能にする。実施
した試験では、実際に先行フランス特許出願に従って製
造したＤ２５の画像化の結果は、エアロゾル経路以外の
適用経路には満足できるものではなかった。
【００１７】本出願人の先行フランス特許出願に記載さ
れたように、このＤ２５の製法は、実際に、Ｄ２５の約
１．５重量％を占める２つのβ−ヒドロキシミリスチン
酸がＮ−グリコシド結合によってグラフト結合し、且つ
Ｄ２５の約０．５重量％を占める痕跡量のＣ１６脂肪酸
（パルミチン）がエステル化された型もしくは遊離され
た形式で協合している製品を与える。
れたように、このＤ２５の製法は、実際に、Ｄ２５の約
１．５重量％を占める２つのβ−ヒドロキシミリスチン
酸がＮ−グリコシド結合によってグラフト結合し、且つ
Ｄ２５の約０．５重量％を占める痕跡量のＣ１６脂肪酸
（パルミチン）がエステル化された型もしくは遊離され
た形式で協合している製品を与える。
【００１８】リポソームの存在の必要性又はその他のガ
レヌス形の使用の必要性なしに、エアロゾル経路によっ
て肺胞表面活性剤で溶解することにより肺の障壁を浸透
できるようにする両親和性の特性をこの分子に与えるの
は、これら脂肪酸の存在である。Ｃ１６遊離脂肪酸は、
脂肪親和性賦形剤の役割を果たす。分子上の疎水性極の
存在も、単球及びマクロファージ膜との相互作用に重要
な役割を演じ、疎水性極の存在によって分子はＤ２５レ
セプターに近づくことができ、これら細胞と結合するこ
とができるようになる。
レヌス形の使用の必要性なしに、エアロゾル経路によっ
て肺胞表面活性剤で溶解することにより肺の障壁を浸透
できるようにする両親和性の特性をこの分子に与えるの
は、これら脂肪酸の存在である。Ｃ１６遊離脂肪酸は、
脂肪親和性賦形剤の役割を果たす。分子上の疎水性極の
存在も、単球及びマクロファージ膜との相互作用に重要
な役割を演じ、疎水性極の存在によって分子はＤ２５レ
セプターに近づくことができ、これら細胞と結合するこ
とができるようになる。
【００１９】それにもかかわらず、分子末端の強い脂肪
親和性のために分子は水性媒質中で疎水性相互作用を受
け、見かけ分子量１５０ｋＤ以上の「重合体」を生成す
ることが判明した。この「重合体」の型はＤ２５溶液中
で３０ｋＤ単量体型と平衡しており、３０重量％に達し
得る。この場合、「重合体」は好適にはミセル型協合又
は凝集体として理解される。
親和性のために分子は水性媒質中で疎水性相互作用を受
け、見かけ分子量１５０ｋＤ以上の「重合体」を生成す
ることが判明した。この「重合体」の型はＤ２５溶液中
で３０ｋＤ単量体型と平衡しており、３０重量％に達し
得る。この場合、「重合体」は好適にはミセル型協合又
は凝集体として理解される。
【００２０】エアゾル経路により、これらの「重合体」
は肺胞界面活性剤中で解離し、単量体を放出し、単量体
は肺障壁を通過する。他方、静脈経路によってはこれら
の重合体は肝及び脾の網内系によって非常に速やかに取
り込まれ、結合したままここにとどまる。これまで静脈
経路によって注射できる組成物を用いて行った試験が失
敗したのはこのためである。エアロゾル経路は、ミリメ
ーターサイズ範囲の病巣を明らかにすることができると
はいえ、放射性エアロゾルの適用によって直接汚染され
るか（顔面）、又は嚥下又は肺粘膜絨毛クリアランスの
結果、消化管にはこの生成物が不可避的に存在するため
、いくつかの解剖学的領域の探査を不可能にするという
欠点をもつ。その上、放射性エアロゾルの適用は、患者
自身による皮膚汚染に関連する間違った陽性結果のリス
クを回避するためにとらなければならない予防措置を考
えるならば、このような診断型で大規模に使用するには
問題がある。
は肺胞界面活性剤中で解離し、単量体を放出し、単量体
は肺障壁を通過する。他方、静脈経路によってはこれら
の重合体は肝及び脾の網内系によって非常に速やかに取
り込まれ、結合したままここにとどまる。これまで静脈
経路によって注射できる組成物を用いて行った試験が失
敗したのはこのためである。エアロゾル経路は、ミリメ
ーターサイズ範囲の病巣を明らかにすることができると
はいえ、放射性エアロゾルの適用によって直接汚染され
るか（顔面）、又は嚥下又は肺粘膜絨毛クリアランスの
結果、消化管にはこの生成物が不可避的に存在するため
、いくつかの解剖学的領域の探査を不可能にするという
欠点をもつ。その上、放射性エアロゾルの適用は、患者
自身による皮膚汚染に関連する間違った陽性結果のリス
クを回避するためにとらなければならない予防措置を考
えるならば、このような診断型で大規模に使用するには
問題がある。
【００２１】リンパ経路によって注射する組成物の場合
には、リンパ系を画像化する現在の技術は、概してラジ
オグラフィーの場合には皮下又はリンパ内経路による画
像化剤の注射を行い、リンパ系シンチグラフィーの場合
には放射性同位体標識コロイド又は微小粒子の皮下注射
を行うが、これらコロイド又は微小粒子はリンパ流にと
り込まれ、濾過現象によってガングリオンに集まり、そ
の結果そのガングリオンが可視化される。
には、リンパ系を画像化する現在の技術は、概してラジ
オグラフィーの場合には皮下又はリンパ内経路による画
像化剤の注射を行い、リンパ系シンチグラフィーの場合
には放射性同位体標識コロイド又は微小粒子の皮下注射
を行うが、これらコロイド又は微小粒子はリンパ流にと
り込まれ、濾過現象によってガングリオンに集まり、そ
の結果そのガングリオンが可視化される。
【００２２】リンパ系シンチグラフィーはリンパドレナ
ージの定性及び定量試験（外傷学）並びに感染性、炎症
性及び腫瘍性病変のガングリオンの画像化を可能にする
。後二者の場合、侵襲ガンクリオンではリンパ流のため
の有孔性が減少するということに、この方法の限界があ
る。その結果、可視化すべき第１の病的ガングリオンで
は放射性同位体標識生成物の篩過による受動的濃度が得
られるが、その後の段階の画像化は結果的に不可能であ
る。それにもかかわらず、このような病的構造はリンパ
流に対する透過性を若干は保有するから、標識分子が可
溶性で、高度に拡散性であるならば、これを用いて画像
化する新しいアプローチが考えられるかも知れない。 こうして近年では何人かの患者が、リンパ経路の解剖学
的可視化のための放射性同位体標識血清アルブミン、又
はリンパ球又は腫瘍細胞に特異的なモノクローナル抗体
を使用するようになった。しかしながら、後者の場合、
やはり、使用化合物の低クリアランス（これはミリメー
ター以下のサイズ範囲の病巣の画像化を阻止する）に関
連する免疫シンチグラフィーの公知の制限が見出されて
いる。
ージの定性及び定量試験（外傷学）並びに感染性、炎症
性及び腫瘍性病変のガングリオンの画像化を可能にする
。後二者の場合、侵襲ガンクリオンではリンパ流のため
の有孔性が減少するということに、この方法の限界があ
る。その結果、可視化すべき第１の病的ガングリオンで
は放射性同位体標識生成物の篩過による受動的濃度が得
られるが、その後の段階の画像化は結果的に不可能であ
る。それにもかかわらず、このような病的構造はリンパ
流に対する透過性を若干は保有するから、標識分子が可
溶性で、高度に拡散性であるならば、これを用いて画像
化する新しいアプローチが考えられるかも知れない。 こうして近年では何人かの患者が、リンパ経路の解剖学
的可視化のための放射性同位体標識血清アルブミン、又
はリンパ球又は腫瘍細胞に特異的なモノクローナル抗体
を使用するようになった。しかしながら、後者の場合、
やはり、使用化合物の低クリアランス（これはミリメー
ター以下のサイズ範囲の病巣の画像化を阻止する）に関
連する免疫シンチグラフィーの公知の制限が見出されて
いる。
【００２３】正常ガングリオンに存在し、炎症又は癌増
殖中に著しく増大するマクロファージ集団があることか
ら、Ｄ２５をこの細胞型のための標的剤として局所投与
によって使用し、最高の検出感度を得ることができる。
殖中に著しく増大するマクロファージ集団があることか
ら、Ｄ２５をこの細胞型のための標的剤として局所投与
によって使用し、最高の検出感度を得ることができる。
【００２４】
【発明が解決しようとする課題】Ｄ２５の使用は上述の
巨大分子化合物の欠点を減らすことができる。しかしな
がらこれが「重合体」型で存在すとき、最初のガングリ
オンのレベルにおけるブロック及び全リンパ鎖への接近
不能を含めた、コロイド状または矮小粒子状物質（ｎａ
ｍｏｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ） の欠点がやはり現れる
。
巨大分子化合物の欠点を減らすことができる。しかしな
がらこれが「重合体」型で存在すとき、最初のガングリ
オンのレベルにおけるブロック及び全リンパ鎖への接近
不能を含めた、コロイド状または矮小粒子状物質（ｎａ
ｍｏｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ） の欠点がやはり現れる
。
【００２５】本発明の目的は、特に感染性、炎症性及び
腫瘍性病巣を、マクロファージを標的とすることによっ
て画像化、診断又は治療するために用いられる、静脈経
路またはリンパ経路によって注入可能なＤ２５を基礎と
する組成物を提供することである。
腫瘍性病巣を、マクロファージを標的とすることによっ
て画像化、診断又は治療するために用いられる、静脈経
路またはリンパ経路によって注入可能なＤ２５を基礎と
する組成物を提供することである。
【００２６】
【発明の概要】本発明では脂質を除去した新規なＤ２５
誘導体を提供し、これにより、Ｄ２５の疎水性を完全に
は除去しないが減らすことによって水溶液中のＤ２５の
重合度を低下させるものである。上記疎水性の完全除去
は、Ｄ２５のマクロファージへの特異的結合のようなＤ
２５活性に関する製品特性を破壊し得る。
誘導体を提供し、これにより、Ｄ２５の疎水性を完全に
は除去しないが減らすことによって水溶液中のＤ２５の
重合度を低下させるものである。上記疎水性の完全除去
は、Ｄ２５のマクロファージへの特異的結合のようなＤ
２５活性に関する製品特性を破壊し得る。
【００２７】先行特許出願に記載のＤ２５の製法の特徴
は、例えばクレブシェラ・ニューモニア（Ｋｌｅｂｓｉ
ｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）などのグラム陰性
菌を用いて、水溶性プロテオグリカンを細胞膜から抽出
することである。多糖は、存在する蛋白質の除去後に抽
出される溶性プロテオグリカンまたは粗製膜プロテオグ
リカンをアルカリ加水分解によって可溶化することによ
って作られる。粗製膜プロテオグリカンは細胞ホモジネ
ートから遠心分離によって得られる。
は、例えばクレブシェラ・ニューモニア（Ｋｌｅｂｓｉ
ｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）などのグラム陰性
菌を用いて、水溶性プロテオグリカンを細胞膜から抽出
することである。多糖は、存在する蛋白質の除去後に抽
出される溶性プロテオグリカンまたは粗製膜プロテオグ
リカンをアルカリ加水分解によって可溶化することによ
って作られる。粗製膜プロテオグリカンは細胞ホモジネ
ートから遠心分離によって得られる。
【００２８】加水分解の研究によって、Ｄ２５の特性を
保持するために超えてはならない限度を定めることがで
きた。すなわち水酸化ナトリウムの場合のモル濃度は０
．３〜１Ｍ、好適には０．５Ｍであり、処理は、好適に
は９０℃以下の温度、より好適には５０〜６０℃の範囲
内、例えば５６℃で攪拌下で行われ、この処理は例えば
１時間続けられる。過剰の試薬を取り除くために、冷却
後、例えば塩酸のような酸を用いて中和する。この多糖
化合物の分子量に近い分子量をもつ蛋白質は、この蛋白
質の酵素的加水分解、特にプロテアーゼ作用によって除
去される。最後にＤ２５多糖化合物は、沈殿による不溶
化後、遠心分離によって分離される。
保持するために超えてはならない限度を定めることがで
きた。すなわち水酸化ナトリウムの場合のモル濃度は０
．３〜１Ｍ、好適には０．５Ｍであり、処理は、好適に
は９０℃以下の温度、より好適には５０〜６０℃の範囲
内、例えば５６℃で攪拌下で行われ、この処理は例えば
１時間続けられる。過剰の試薬を取り除くために、冷却
後、例えば塩酸のような酸を用いて中和する。この多糖
化合物の分子量に近い分子量をもつ蛋白質は、この蛋白
質の酵素的加水分解、特にプロテアーゼ作用によって除
去される。最後にＤ２５多糖化合物は、沈殿による不溶
化後、遠心分離によって分離される。
【００２９】本発明によって、アルカリ加水分解の役割
が、粗製細菌膜フラクション（特にクレブシェラ・ニュ
ーモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ ）を可溶化することのみならず、多糖鎖に結合した
β−ヒドロキシミリスチン酸でエステル化されたＣ１６
パルミチン酸を少なくとも一部について脱エステル化す
ることもあることが知見された。しかしながら、これら
のＣ１６遊離脂肪酸は、Ｄ２５に結合していないとはい
え、抽出しない限り、いかなる場合でもＤ２５に協合し
て残っている。
が、粗製細菌膜フラクション（特にクレブシェラ・ニュ
ーモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ ）を可溶化することのみならず、多糖鎖に結合した
β−ヒドロキシミリスチン酸でエステル化されたＣ１６
パルミチン酸を少なくとも一部について脱エステル化す
ることもあることが知見された。しかしながら、これら
のＣ１６遊離脂肪酸は、Ｄ２５に結合していないとはい
え、抽出しない限り、いかなる場合でもＤ２５に協合し
て残っている。
【００３０】Ｃ１６パルミチン脂肪酸を脱エステル化し
て除去することにより、実際には水溶液中でもはやミセ
ル又は重合体を形成せず、所望ならば実質上単量体のみ
で存在する疎水性のより小さい生成物が得られることが
本発明によって知見された。
て除去することにより、実際には水溶液中でもはやミセ
ル又は重合体を形成せず、所望ならば実質上単量体のみ
で存在する疎水性のより小さい生成物が得られることが
本発明によって知見された。
【００３１】このとき化合物の疎水性は、実質的には、
化合物の活性及び標的特性を十分にあらわすβ−ヒドロ
キシミリスチン酸のみによって生ずる。
化合物の活性及び標的特性を十分にあらわすβ−ヒドロ
キシミリスチン酸のみによって生ずる。
【００３２】十分徹底的なアルカリ加水分解が行われな
い場合、Ｃ１６脂肪酸の一部がβ−ヒドロキシミリスチ
ン酸でエステル化されたままになる。アルカリ性加水分
解後に遊離脂肪酸の徹底的抽出が行われない場合にも、
それらはエステル化型になって再協合するか、非結合的
にＤ２５に協合したまま残り、ミセル又は重合体の形成
をおこす。これら脂肪酸の抽出を行わない場合、先行フ
ランス特許出願に記載さたように重合体型の２０−３０
重量％のＤ２５が水溶液中に含まれるのはこのためであ
る。
い場合、Ｃ１６脂肪酸の一部がβ−ヒドロキシミリスチ
ン酸でエステル化されたままになる。アルカリ性加水分
解後に遊離脂肪酸の徹底的抽出が行われない場合にも、
それらはエステル化型になって再協合するか、非結合的
にＤ２５に協合したまま残り、ミセル又は重合体の形成
をおこす。これら脂肪酸の抽出を行わない場合、先行フ
ランス特許出願に記載さたように重合体型の２０−３０
重量％のＤ２５が水溶液中に含まれるのはこのためであ
る。
【００３３】従って本発明の主題は、脂質を一部除去し
た、単量体型のＤ２５化合物、又は水溶液中の「重合」
度が１５重量％を超えない、より好適には１０重量％を
超えないＤ２５化合物である。言い換えれば、化合物の
少なくとも８５重量％、より好適には９０重量％が単量
体の形で水溶液中に存在する。
た、単量体型のＤ２５化合物、又は水溶液中の「重合」
度が１５重量％を超えない、より好適には１０重量％を
超えないＤ２５化合物である。言い換えれば、化合物の
少なくとも８５重量％、より好適には９０重量％が単量
体の形で水溶液中に存在する。
【００３４】こうして「重合体」の生成をコントロール
し、従って分子の疎水性を調節することによって、静脈
経路及びリンパ経路による投与が可能となる。
し、従って分子の疎水性を調節することによって、静脈
経路及びリンパ経路による投与が可能となる。
【００３５】こうして、静脈経路で投与したＤ２５の肝
脾への結合を回避するためには重合体型が１５％を超え
ないことが必要であり、より好適には３０ｋＤの単量体
型が安定化することが必要である。リンパ系シンチグラ
フィーの場合には、或る比率の（約１０％から１５％ま
で）重合体の存在は不利益にはならない。なぜならばそ
れは生成物の排除を遅らせ、非結合ガングリオン（健康
ガングリオン）を可視化せしめ、一方その化合物は病的
ガングリオン内部に結合してとどまるからである。
脾への結合を回避するためには重合体型が１５％を超え
ないことが必要であり、より好適には３０ｋＤの単量体
型が安定化することが必要である。リンパ系シンチグラ
フィーの場合には、或る比率の（約１０％から１５％ま
で）重合体の存在は不利益にはならない。なぜならばそ
れは生成物の排除を遅らせ、非結合ガングリオン（健康
ガングリオン）を可視化せしめ、一方その化合物は病的
ガングリオン内部に結合してとどまるからである。
【００３６】最後に、水溶液中に低い「重合度」で存在
する無脂質Ｄ２５の使用は、エアロゾル経路による投与
にも好都合であり、画像化はより速やかに行われる。
する無脂質Ｄ２５の使用は、エアロゾル経路による投与
にも好都合であり、画像化はより速やかに行われる。
【００３７】本発明の好適実施例において本発明による
化合物Ｄ２５は、菌クレブシェラ・ニューモニア（Ｋｌ
ｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）の膜プロ
テオグリカンから、分子量３０ｋＤの単量体型で抽出さ
れる。
化合物Ｄ２５は、菌クレブシェラ・ニューモニア（Ｋｌ
ｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）の膜プロ
テオグリカンから、分子量３０ｋＤの単量体型で抽出さ
れる。
【００３８】特に、本発明の主題は、ガラクトースのみ
を含む配列の反復から成る線状多糖鎖を含んで成る化合
物であり、この末端には、グルコース、ガラクトース、
グルコサミン、ヘプトース及びマンノデオキシオクツロ
ソン酸残基を含む特異な結合構造があり、２個の短いペ
プチド鎖がこの特異構造に結合し、この構造の末端には
化合物の約１．５重量％の２個のβ−ヒドロキシミリス
チン酸がＮ−グリコシド結合を経てこの構造の２個のグ
ルコサミンにそれぞれ結合する。
を含む配列の反復から成る線状多糖鎖を含んで成る化合
物であり、この末端には、グルコース、ガラクトース、
グルコサミン、ヘプトース及びマンノデオキシオクツロ
ソン酸残基を含む特異な結合構造があり、２個の短いペ
プチド鎖がこの特異構造に結合し、この構造の末端には
化合物の約１．５重量％の２個のβ−ヒドロキシミリス
チン酸がＮ−グリコシド結合を経てこの構造の２個のグ
ルコサミンにそれぞれ結合する。
【００３９】本発明よる化合物において、好適には、エ
ステル化型でそれらに結合するパルミチン脂肪酸の量は
化合物の０．０１重量％を超えず、遊離型としてそれら
に協合するパルミチン脂肪酸の量は化合物の０．１重量
％を超えない。
ステル化型でそれらに結合するパルミチン脂肪酸の量は
化合物の０．０１重量％を超えず、遊離型としてそれら
に協合するパルミチン脂肪酸の量は化合物の０．１重量
％を超えない。
【００４０】本発明において無脂質Ｄ２５というのは、
脂質が一部除去され、一方ではβ−ヒドロキシル脂肪酸
は結合したままで、少量のＣ１６脂肪酸が上記のように
残っているＤ２５を意味する。
脂質が一部除去され、一方ではβ−ヒドロキシル脂肪酸
は結合したままで、少量のＣ１６脂肪酸が上記のように
残っているＤ２５を意味する。
【００４１】本発明は、下記ステップから成る前記無脂
質Ｄ２５誘導体の製法も提供し、これらステップは、（
ａ） 粗製膜プロテオグリカンをグラム陰性菌株の細菌
溶解物から抽出し、 （ｂ） ステップ（ａ） の粗製プロテオグリカンをア
ルカリ加水分解によって可溶化し、水溶液中にある溶性
プロテオグリカンを回収し、 （ｃ） 多糖化合物を分離し、必要ならば、分離フラク
ション中にある蛋白質を除去し、 （ｄ） 上記多糖化合物と協合している遊離脂肪酸を適
合した有機溶媒を用いて抽出する、各ステップからなっ
ている。
質Ｄ２５誘導体の製法も提供し、これらステップは、（
ａ） 粗製膜プロテオグリカンをグラム陰性菌株の細菌
溶解物から抽出し、 （ｂ） ステップ（ａ） の粗製プロテオグリカンをア
ルカリ加水分解によって可溶化し、水溶液中にある溶性
プロテオグリカンを回収し、 （ｃ） 多糖化合物を分離し、必要ならば、分離フラク
ション中にある蛋白質を除去し、 （ｄ） 上記多糖化合物と協合している遊離脂肪酸を適
合した有機溶媒を用いて抽出する、各ステップからなっ
ている。
【００４２】使用可能なグラム陰性菌としてはクレブシ
ェラ・ニューモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅ
ｕｍｏｎｉａｅ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒ
ａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ ）及びエッシェリヒ
ア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）がある
。これまでにわかったところによればナショナル・コレ
クション・オヴ・マイクロバイアル・カルチャース（Ｎ
ａｔｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ； ＣＮＣＭ）に１４５
−Ｉ−ＩＰの番号で寄託されているクレブシェラ・ニュ
ーモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ ）が特によく用いることができる。
ェラ・ニューモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅ
ｕｍｏｎｉａｅ）、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒ
ａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ ）及びエッシェリヒ
ア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）がある
。これまでにわかったところによればナショナル・コレ
クション・オヴ・マイクロバイアル・カルチャース（Ｎ
ａｔｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ； ＣＮＣＭ）に１４５
−Ｉ−ＩＰの番号で寄託されているクレブシェラ・ニュ
ーモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ ）が特によく用いることができる。
【００４３】本発明の製法の特別な態様においては下記
のステップが行われる： （ａ） 粗製膜プロテオグリカンをグラム陰性菌株から
抽出する。この粗製プロテオグリカンは細菌溶解物の遠
心分離後に得られる上澄液に回収される。 （ｂ） ステップ（ａ） で得た粗製プロテオグリカン
を、アルカリ加水分解により、特に水酸化アルカリ、好
ましくはモル濃度０．３〜１Ｍ、より好適には０．５〜
０．７５Ｍの水酸化ナトリウムで、９０℃以下の温度、
好適には５０〜６０℃、例えば５６℃の温度で、好適に
は攪拌しながら可溶化し、その処理を最低１時間続ける
。 （ｃ） 放冷後、その懸濁液を酸、例えば塩酸で中和し
、必要ならば溶液中に存在する蛋白質の酵素的加水分解
を、特にプロテアーゼ作用によって行う。 （ｄ） それからＤ２５多糖化合物をアルコール沈殿に
よって精製し、例えば遠心分離によって回収する。 （ｅ） 遊離脂肪酸を適当な有機溶媒、例えばクロロホ
ルム又はクロロホルトとメタノールと混合液によって抽
出し、それから例えばＤ２５多糖化合物の沈殿物を攪拌
下で有機溶媒に分散し、それから溶媒を除去し、最後に
沈殿を同じ溶媒で洗浄する。 （ｆ） 沈殿を水に再懸濁し、本発明による脂質を除去
したＤ２５の溶液を遠心分離により澄明にし、それから
上澄液を回収し、最後に （ｇ） 本発明による脂質を除去したＤ２５化合物を一
般的分画化又は限外濾過法によって分離する。特にステ
ップ（ｇ） では、蒸溜水を用いる透析が、１００００
ダルトンカットオフの膜を用いる限外濾過によって行わ
れる。
のステップが行われる： （ａ） 粗製膜プロテオグリカンをグラム陰性菌株から
抽出する。この粗製プロテオグリカンは細菌溶解物の遠
心分離後に得られる上澄液に回収される。 （ｂ） ステップ（ａ） で得た粗製プロテオグリカン
を、アルカリ加水分解により、特に水酸化アルカリ、好
ましくはモル濃度０．３〜１Ｍ、より好適には０．５〜
０．７５Ｍの水酸化ナトリウムで、９０℃以下の温度、
好適には５０〜６０℃、例えば５６℃の温度で、好適に
は攪拌しながら可溶化し、その処理を最低１時間続ける
。 （ｃ） 放冷後、その懸濁液を酸、例えば塩酸で中和し
、必要ならば溶液中に存在する蛋白質の酵素的加水分解
を、特にプロテアーゼ作用によって行う。 （ｄ） それからＤ２５多糖化合物をアルコール沈殿に
よって精製し、例えば遠心分離によって回収する。 （ｅ） 遊離脂肪酸を適当な有機溶媒、例えばクロロホ
ルム又はクロロホルトとメタノールと混合液によって抽
出し、それから例えばＤ２５多糖化合物の沈殿物を攪拌
下で有機溶媒に分散し、それから溶媒を除去し、最後に
沈殿を同じ溶媒で洗浄する。 （ｆ） 沈殿を水に再懸濁し、本発明による脂質を除去
したＤ２５の溶液を遠心分離により澄明にし、それから
上澄液を回収し、最後に （ｇ） 本発明による脂質を除去したＤ２５化合物を一
般的分画化又は限外濾過法によって分離する。特にステ
ップ（ｇ） では、蒸溜水を用いる透析が、１００００
ダルトンカットオフの膜を用いる限外濾過によって行わ
れる。
【００４４】特に、非常に低い「重合度」、特に２％以
下の「重合度」を得るために有用な本発明の方法の実施
例においては、ステップ（ｆ） 後に、新たにアルカリ
加水分解を行い、それから放冷後その懸濁液を酸（例え
ば塩酸）で中和し、任意にデオキシコール酸ナトリウム
を０．５％を超えない割合で溶液に加え、それから多糖
化合物を沈殿させ、沈殿物を水に懸濁し、その後得られ
た脂質除去したＤ２５化合物を分画化又は限外濾過によ
って分離する。
下の「重合度」を得るために有用な本発明の方法の実施
例においては、ステップ（ｆ） 後に、新たにアルカリ
加水分解を行い、それから放冷後その懸濁液を酸（例え
ば塩酸）で中和し、任意にデオキシコール酸ナトリウム
を０．５％を超えない割合で溶液に加え、それから多糖
化合物を沈殿させ、沈殿物を水に懸濁し、その後得られ
た脂質除去したＤ２５化合物を分画化又は限外濾過によ
って分離する。
【００４５】本発明により細菌クレブシェラ・ニューモ
ニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
）から抽出される脂質を除去したＤ２５の約３０ｋＤの
単量体構造を図１に示す。
ニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
）から抽出される脂質を除去したＤ２５の約３０ｋＤの
単量体構造を図１に示す。
【００４６】線状多糖鎖の末端に付着せる特異な結合構
造は、既述の配列の他に、２個の末端グルコサミンを含
み、その各々にβ−ヒドロキシミリスチン酸かＮ−グリ
コシド結合によって結合している。もう一つのペプチド
鎖はエチルアミノ燐酸基によって最後のグルコサミンに
結合する。短いペプチド鎖の末端はアスパラギン酸で終
る。一つのペプチド鎖はＰＳ単量体単位に隣接せる第１
のグルコサミンに結合する。
造は、既述の配列の他に、２個の末端グルコサミンを含
み、その各々にβ−ヒドロキシミリスチン酸かＮ−グリ
コシド結合によって結合している。もう一つのペプチド
鎖はエチルアミノ燐酸基によって最後のグルコサミンに
結合する。短いペプチド鎖の末端はアスパラギン酸で終
る。一つのペプチド鎖はＰＳ単量体単位に隣接せる第１
のグルコサミンに結合する。
【００４７】最後に、本発明は、本発明によって脂質を
一部除去したＤ２５化合物を含んで成る、画像化、診断
又は治療を目的とする組成物に関する。
一部除去したＤ２５化合物を含んで成る、画像化、診断
又は治療を目的とする組成物に関する。
【００４８】発明の好適実施例において、前記組成物は
、マクロファージの標的化による感染性、炎症性及び腫
瘍性病巣の画像化と診断、又は治療のためのものである
。
、マクロファージの標的化による感染性、炎症性及び腫
瘍性病巣の画像化と診断、又は治療のためのものである
。
【００４９】本発明の組成物は、静脈経路、リンパ経路
により、特に皮下又は胸膜内それぞれに注入でき、また
エアロゾル経路によって投与できる。
により、特に皮下又は胸膜内それぞれに注入でき、また
エアロゾル経路によって投与できる。
【００５０】組成物が画像化及び診断のためのものであ
る場合には、本発明による多糖化合物を検出可能な要素
、例えば常磁性放射性又は蛍光製要素などで標識化する
。
る場合には、本発明による多糖化合物を検出可能な要素
、例えば常磁性放射性又は蛍光製要素などで標識化する
。
【００５１】上記多糖化合物は間接的にも検出される。
すなわち前述のような検出可能要素で標識化され、上記
多糖化合物（脂質を除去したＤ２５）を識別してこれに
特異的に結合する物質によって検出される。上記脂質を
除去したＬ２５多糖化合物を識別し、これに特異的に結
合する物質としては、上記化合物に対する抗体が挙げら
れる。
多糖化合物（脂質を除去したＤ２５）を識別してこれに
特異的に結合する物質によって検出される。上記脂質を
除去したＬ２５多糖化合物を識別し、これに特異的に結
合する物質としては、上記化合物に対する抗体が挙げら
れる。
【００５２】そこで本発明による生体内又は生体外画像
化又は診断用キットは、脂質を除去したＤ２５多糖組成
物とそれを標識化する手段、或いは脂質を除去したＤ２
５多糖組成物と上記化合物を識別する物質と上記物質を
標識化する手段とを含む。
化又は診断用キットは、脂質を除去したＤ２５多糖組成
物とそれを標識化する手段、或いは脂質を除去したＤ２
５多糖組成物と上記化合物を識別する物質と上記物質を
標識化する手段とを含む。
【００５３】本発明によって記述されるＤ２５誘導体の
適用分野は、この作用物質が放射性同位体と結合した場
合は、シンチグラフィー画像化又は操作的 （ｏｐｅｒ
ａｔｉｖｅ）検出である。これらの放射性核種は実際、
マニュアルに指示されているプローブを用いて可視化す
るか、操作的に計数することによって検出される。従っ
てそれは画像化による診断ではなく、電子的カウンティ
ングによる診断に関係する。本発明において適合する放
射性要素としては、シンチグラフィーによって検出可能
な放射性核種、例えばテクネシウム ９９ｍＴｃ 又は
非制限的にヨウ素 １２３Ｉ及びインジウム１１１ Ｉ
ｎ などが挙げられる。
適用分野は、この作用物質が放射性同位体と結合した場
合は、シンチグラフィー画像化又は操作的 （ｏｐｅｒ
ａｔｉｖｅ）検出である。これらの放射性核種は実際、
マニュアルに指示されているプローブを用いて可視化す
るか、操作的に計数することによって検出される。従っ
てそれは画像化による診断ではなく、電子的カウンティ
ングによる診断に関係する。本発明において適合する放
射性要素としては、シンチグラフィーによって検出可能
な放射性核種、例えばテクネシウム ９９ｍＴｃ 又は
非制限的にヨウ素 １２３Ｉ及びインジウム１１１ Ｉ
ｎ などが挙げられる。
【００５４】脂質を除去したＤ２５誘導体は、例えばガ
ドリニウムなどの常磁性体と結合して、例えば磁気共鳴
画像（ＭＲＩ）の濃淡付与物質を生成することもできる
。
ドリニウムなどの常磁性体と結合して、例えば磁気共鳴
画像（ＭＲＩ）の濃淡付与物質を生成することもできる
。
【００５５】感染性炎症性又は腫瘍性病巣を画像化する
能力に加えて、脂質を除去したＤ２５は正常又は病変肝
及び脾臓のための器官マーカーとなる。
能力に加えて、脂質を除去したＤ２５は正常又は病変肝
及び脾臓のための器官マーカーとなる。
【００５６】より詳細に述べるならば、重合度１５％以
下、より好適には５ないし１５％の脂質を除去したＤ２
５を含む注射用組成物は、マクロファージを標的とする
リンパ経路による感染性、炎症性及び腫瘍性病巣の画像
化、診断及び治療に特に適している。
下、より好適には５ないし１５％の脂質を除去したＤ２
５を含む注射用組成物は、マクロファージを標的とする
リンパ経路による感染性、炎症性及び腫瘍性病巣の画像
化、診断及び治療に特に適している。
【００５７】本発明による化合物の新しいリンパ系シン
チグラフィーの用途は、縦隔カングリオンの画像化に関
係する。
チグラフィーの用途は、縦隔カングリオンの画像化に関
係する。
【００５８】同様に「重合度」が５％以下の脂質を除去
したＤ２５を含む注射組成物は、マクロファージを標的
とする静脈経路による感染性、炎症性及び腫瘍性病巣の
画像化、診断及び治療に最も適している。
したＤ２５を含む注射組成物は、マクロファージを標的
とする静脈経路による感染性、炎症性及び腫瘍性病巣の
画像化、診断及び治療に最も適している。
【００５９】最後に、マクロファージを標的とすること
ができるその特性を考えると、本発明による化合物は、
標的放射線治療、細胞毒化合物の運搬、又は免疫原及び
／又は免疫調節剤の運搬のための運搬剤として治療的目
的に使用できることはもちろんである。
ができるその特性を考えると、本発明による化合物は、
標的放射線治療、細胞毒化合物の運搬、又は免疫原及び
／又は免疫調節剤の運搬のための運搬剤として治療的目
的に使用できることはもちろんである。
【００６０】最後に、本発明による脂質を除去したＤ２
５は、その本来の免疫薬理学的特性（マクロファージア
クチベーター、インターフェロン−α誘発剤、ＮＫ細胞
アクチベーター、インターロイキン−１産生誘発剤など
）のために、特に細胞内転移及び感染症に対する薬剤と
して、特に免疫刺激剤として直接用いられる。
５は、その本来の免疫薬理学的特性（マクロファージア
クチベーター、インターフェロン−α誘発剤、ＮＫ細胞
アクチベーター、インターロイキン−１産生誘発剤など
）のために、特に細胞内転移及び感染症に対する薬剤と
して、特に免疫刺激剤として直接用いられる。
【００６１】本発明は脂質を除去したＤ２５誘導体にも
関する。また本発明は、酸化誘導体（Ｄ２５酸化誘導体
とは線状多糖鎖のガラクトフラノース残基（Ｇａｌ ｆ
）がアラビノースに置き換えられた化合物を意味する）
、及びアミド、エステル又はエーテル型誘導体、並びに
それらの塩及び第四級アンモニウム誘導体にも関するも
のである。
関する。また本発明は、酸化誘導体（Ｄ２５酸化誘導体
とは線状多糖鎖のガラクトフラノース残基（Ｇａｌ ｆ
）がアラビノースに置き換えられた化合物を意味する）
、及びアミド、エステル又はエーテル型誘導体、並びに
それらの塩及び第四級アンモニウム誘導体にも関するも
のである。
【００６２】本発明のその他の特徴及び利点は下記の実
施例から明らかとなろう。
施例から明らかとなろう。
【００６３】
【実施例】実施例１：製法
（乾燥重量で１ｋｇのＫ．ニューモニア（Ｋ．ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅ）生物体量を用いた場合） １．澄明な細菌溶解物の製法 クレブシェラ・ニューモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）生物集団は、液体培地の発酵
槽で一般的条件下で培養することによって得た。唯一の
特別な条件は、指数的増殖期の終りに＋４度に冷却する
ことによって突然増殖を停止し、生物学的構造の一体性
を維持することであった。
ｍｏｎｉａｅ）生物体量を用いた場合） １．澄明な細菌溶解物の製法 クレブシェラ・ニューモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）生物集団は、液体培地の発酵
槽で一般的条件下で培養することによって得た。唯一の
特別な条件は、指数的増殖期の終りに＋４度に冷却する
ことによって突然増殖を停止し、生物学的構造の一体性
を維持することであった。
【００６４】シャープルズ（Ｓｈａｒｐｌｅｓ）又はウ
エストファリア（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ） 型の工業的分
離器を用いて、冷時、連続遠心分離することによって生
物集団を培養培地から分離する。減菌生理的血清溶液に
再懸濁することによって洗浄し、遠沈した後分離細胞を
、処理するまで凍結保存する。
エストファリア（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ） 型の工業的分
離器を用いて、冷時、連続遠心分離することによって生
物集団を培養培地から分離する。減菌生理的血清溶液に
再懸濁することによって洗浄し、遠沈した後分離細胞を
、処理するまで凍結保存する。
【００６５】分離細菌を反応器中で融解し、ＭｇＣｌ２
（１０ｍＭ）及びＮａＣｌ（０．１５ｍＭ）を含むｐ
Ｈ７．０のトリスＨＣｌ緩衝液（１０ｍＭ）に４℃で懸
濁し、懸濁液１リットツあたり乾燥細胞５０ｇに相当す
る最終濃度を得る。次に懸濁液１リットルあたり５ｍｇ
のＤＮａｓｅを加える。
（１０ｍＭ）及びＮａＣｌ（０．１５ｍＭ）を含むｐ
Ｈ７．０のトリスＨＣｌ緩衝液（１０ｍＭ）に４℃で懸
濁し、懸濁液１リットツあたり乾燥細胞５０ｇに相当す
る最終濃度を得る。次に懸濁液１リットルあたり５ｍｇ
のＤＮａｓｅを加える。
【００６６】細菌細胞をＡＰＶマントンガウリン型工業
用ミルを連続的に通過させて崩壊する。こうして得られ
た細菌溶解は、４℃でシャープルズ分離器中で１５００
０×ｇで、第１の連続澄明化プロセスを受け、すりつぶ
した残渣とすりつぶされてない細胞を除去する。遠沈ペ
レットを除去し、上澄液を回収する。それは澄明な溶解
物である。
用ミルを連続的に通過させて崩壊する。こうして得られ
た細菌溶解は、４℃でシャープルズ分離器中で１５００
０×ｇで、第１の連続澄明化プロセスを受け、すりつぶ
した残渣とすりつぶされてない細胞を除去する。遠沈ペ
レットを除去し、上澄液を回収する。それは澄明な溶解
物である。
【００６７】２．膜プロテオグリカンの製法澄明な細菌
溶解物を酢酸でｐＨ４．２±０．２に酸性にし、３０分
間＋４℃で静置する。生成した不純物から成る沈殿は、
シャープルズ中で１５０００×ｇで連続遠沈することに
より除去される。膜プロテオグリカンを含む、タンパク
濁の上澄液をＮａＯＨで中和し、その後、１００００ダ
ルトンカットオフの膜を用いて一定容量で蒸溜水に対し
て限外濾過を行うことによって透析した。 抵抗が１０００Ωｃｍ−１に等しいか又はそれより大き
い場合には、１００００ダルトン膜上の濾過によって、
最初の生物集団の乾燥細胞１Ｋｇ当量に対して６ｌに容
量を濃縮する。
溶解物を酢酸でｐＨ４．２±０．２に酸性にし、３０分
間＋４℃で静置する。生成した不純物から成る沈殿は、
シャープルズ中で１５０００×ｇで連続遠沈することに
より除去される。膜プロテオグリカンを含む、タンパク
濁の上澄液をＮａＯＨで中和し、その後、１００００ダ
ルトンカットオフの膜を用いて一定容量で蒸溜水に対し
て限外濾過を行うことによって透析した。 抵抗が１０００Ωｃｍ−１に等しいか又はそれより大き
い場合には、１００００ダルトン膜上の濾過によって、
最初の生物集団の乾燥細胞１Ｋｇ当量に対して６ｌに容
量を濃縮する。
【００６８】膜プロテオグリカン懸濁液の蛋白質含量を
ビュレット反応によって測定し、それから蒸溜水で希釈
して調節し、蛋白質１０ｍｇ／ｌの最終濃度を得る。
ビュレット反応によって測定し、それから蒸溜水で希釈
して調節し、蛋白質１０ｍｇ／ｌの最終濃度を得る。
【００６９】このＫ．ニューモニア（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａｅ）膜プロテオグリカン懸濁液を用いてＤ２５を
抽出し、種々の用途に用いる。
ｎｉａｅ）膜プロテオグリカン懸濁液を用いてＤ２５を
抽出し、種々の用途に用いる。
【００７０】３．リンホシンチグラフィーに使用する無
脂質Ｄ２５の製法（水溶液中約１０％の「重合体」型化
合物）（コードＳＪＤ２５２） １，２で得られた膜プロテオグリカン懸濁液に、濃水酸
化ナトリウムを加えて最終規定度０．５ないし０．７５
Ｎ（好適には０．５Ｎ）にする。溶液を温度５６℃にし
、攪拌しながら１時間この温度に保持する。室温にまで
放冷後、溶液を塩酸で中和する。
脂質Ｄ２５の製法（水溶液中約１０％の「重合体」型化
合物）（コードＳＪＤ２５２） １，２で得られた膜プロテオグリカン懸濁液に、濃水酸
化ナトリウムを加えて最終規定度０．５ないし０．７５
Ｎ（好適には０．５Ｎ）にする。溶液を温度５６℃にし
、攪拌しながら１時間この温度に保持する。室温にまで
放冷後、溶液を塩酸で中和する。
【００７１】中和した溶液にトリス適量を加えてＭ／１
００にし、またＥＤＴＡ適量を加えてＭ／１０００にし
、ｐＨを７．４に調節する。それから酵素消化を、プロ
テアーゼＫ０．４ｇ／ｌおよびリゾチーム０．１ｇ／ｌ
の存在下で３７℃で２時間行う。
００にし、またＥＤＴＡ適量を加えてＭ／１０００にし
、ｐＨを７．４に調節する。それから酵素消化を、プロ
テアーゼＫ０．４ｇ／ｌおよびリゾチーム０．１ｇ／ｌ
の存在下で３７℃で２時間行う。
【００７２】予じめ２０℃に冷やしたエタノール２容量
でＤ２５を沈殿させて分離する。４℃で３０分間放置後
、シャープルズを用いて流速６ｌ／ｍｉｎで連続遠心分
離することにより沈殿物を回収する。
でＤ２５を沈殿させて分離する。４℃で３０分間放置後
、シャープルズを用いて流速６ｌ／ｍｉｎで連続遠心分
離することにより沈殿物を回収する。
【００７３】Ｄ２５ペレットを室温で直ちにタラックス
（Ｔｕｒｒａｘ）を通すことによってクロロホルム：メ
タノール（３：１）混液１リットル中に分散し、Ｎｏ．
３焼結ガラスで濾過し、フィルター上の沈殿物を同じク
ロロホルム：メタノール混液５００ｍｌで洗った。沈殿
物を窒素気流下で乾燥し、タラックス分散により蒸溜水
１．５リットル中に再懸濁させ、攪拌しながら１晩＋４
℃に保持する。
（Ｔｕｒｒａｘ）を通すことによってクロロホルム：メ
タノール（３：１）混液１リットル中に分散し、Ｎｏ．
３焼結ガラスで濾過し、フィルター上の沈殿物を同じク
ロロホルム：メタノール混液５００ｍｌで洗った。沈殿
物を窒素気流下で乾燥し、タラックス分散により蒸溜水
１．５リットル中に再懸濁させ、攪拌しながら１晩＋４
℃に保持する。
【００７４】無脂質Ｄ２５溶液を＋４℃で３００００ｇ
で６０分間遠沈することにより澄明にし、１００００ダ
ルトンカットオフの膜を用いて、上澄液を５０００Ωｃ
ｍ−１以上の抵抗が得られるまで蒸溜水に対して透析す
る。蒸溜水で容量を１．５リットルとし、ｐＨを７．２
に調節した。
で６０分間遠沈することにより澄明にし、１００００ダ
ルトンカットオフの膜を用いて、上澄液を５０００Ωｃ
ｍ−１以上の抵抗が得られるまで蒸溜水に対して透析す
る。蒸溜水で容量を１．５リットルとし、ｐＨを７．２
に調節した。
【００７５】Ｄ２５を０．２２μ膜上の濾過によって減
菌し、無菌条件下で凍結乾燥する。この凍結乾燥した化
合物がＳＪＤ２５２となる。この原理を用いて以下でリ
ンパ系シンチグラフィーを行う。
菌し、無菌条件下で凍結乾燥する。この凍結乾燥した化
合物がＳＪＤ２５２となる。この原理を用いて以下でリ
ンパ系シンチグラフィーを行う。
【００７６】４．静脈注射用Ｄ２５の製法（コード
ＳＪＤ２５３）（水溶液中５％以下の「重合体」型化合
物） １，２で得た膜プロテオグリカンの懸濁液に濃水酸化ナ
トリウムを加えて最終規定度０．５〜０．７５Ｎ（好適
には０．７５Ｎ）とする。溶液を温度５６℃とし、攪拌
しながら、１時間この温度に保つ。室温に放冷後、溶液
を塩酸で中和する。
ＳＪＤ２５３）（水溶液中５％以下の「重合体」型化合
物） １，２で得た膜プロテオグリカンの懸濁液に濃水酸化ナ
トリウムを加えて最終規定度０．５〜０．７５Ｎ（好適
には０．７５Ｎ）とする。溶液を温度５６℃とし、攪拌
しながら、１時間この温度に保つ。室温に放冷後、溶液
を塩酸で中和する。
【００７７】中和した溶液にトリス適量を加えてＭ／１
００とし、またＥＤＴＡ適量を加えてＭ／１０００とし
、ｐＨを７．４に調節する。それから酵素消化を３７℃
で、プロテアーゼＫ０．４ｇ／ｌおよびリゾチーム０．
１ｇ／ｌの存在下で２時間行う。
００とし、またＥＤＴＡ適量を加えてＭ／１０００とし
、ｐＨを７．４に調節する。それから酵素消化を３７℃
で、プロテアーゼＫ０．４ｇ／ｌおよびリゾチーム０．
１ｇ／ｌの存在下で２時間行う。
【００７８】予じめ２０℃に冷やしたエタノール２容量
によりＤ２５を沈殿させ分離する。＋４℃で３０分間放
置後、シャープルズ遠心分離器を用いて、流速６ｌ／ｍ
ｉｎで連続遠心分離することにより沈殿物を回収する。
によりＤ２５を沈殿させ分離する。＋４℃で３０分間放
置後、シャープルズ遠心分離器を用いて、流速６ｌ／ｍ
ｉｎで連続遠心分離することにより沈殿物を回収する。
【００７９】Ｄ２５ペレットを直ちにクロロホルム：メ
タノール（３：１）混液に分散させる。そのため室温で
間欠的に１５分間攪拌しながらタラムックスを通過させ
る。Ｎｏ．３焼結ガラスで濾過することによって溶媒を
除去し、フィルター上の沈殿物を同じクロロホルム：メ
タノール混液１リットルで洗う。沈殿物を窒素気流下で
乾かし、タラックスで分散させることにより蒸溜水１．
５リットルに再懸濁させ、攪拌しながら１晩＋４℃に保
つ。
タノール（３：１）混液に分散させる。そのため室温で
間欠的に１５分間攪拌しながらタラムックスを通過させ
る。Ｎｏ．３焼結ガラスで濾過することによって溶媒を
除去し、フィルター上の沈殿物を同じクロロホルム：メ
タノール混液１リットルで洗う。沈殿物を窒素気流下で
乾かし、タラックスで分散させることにより蒸溜水１．
５リットルに再懸濁させ、攪拌しながら１晩＋４℃に保
つ。
【００８０】脂質を除去したＤ２５溶液を４℃で３００
００ｇで６０分間遠沈することにより澄明にし、上澄液
を回収し、それから濃水酸化ナトリウムを加えて最終規
定度０．５Ｎとする。溶液を温度５６℃にし、攪拌しな
がら１晩この温度に保つ。室温にまで放冷し、その後、
溶液を塩酸中和する。
００ｇで６０分間遠沈することにより澄明にし、上澄液
を回収し、それから濃水酸化ナトリウムを加えて最終規
定度０．５Ｎとする。溶液を温度５６℃にし、攪拌しな
がら１晩この温度に保つ。室温にまで放冷し、その後、
溶液を塩酸中和する。
【００８１】この溶液にデオキシコール酸ナトリウム適
量〜０．５％を加え、２５℃で３０分間強く攪拌する。 あらかじめ＋４℃に冷やしたエタノール２容量を加えて
Ｄ２５を沈殿させる。４℃で３０分間放置後、シャープ
ルズ遠心分離器で流速６ｌ／ｍｉｎで連続遠心分離する
ことによって沈殿を回収する。
量〜０．５％を加え、２５℃で３０分間強く攪拌する。 あらかじめ＋４℃に冷やしたエタノール２容量を加えて
Ｄ２５を沈殿させる。４℃で３０分間放置後、シャープ
ルズ遠心分離器で流速６ｌ／ｍｉｎで連続遠心分離する
ことによって沈殿を回収する。
【００８２】Ｄ２５ペレットを、タラックス分散により
蒸溜水２リットル中に直ちに再懸濁させ、攪拌しながら
１晩＋４℃に保つ。溶液を１００００ダルトンカットオ
フの膜を用いて、抵抗が５０００Ωｃｍ−１以上になる
まで蒸溜水に対して透析する。蒸溜水で容量１．５リッ
トルに調節し、ｐＨを７．２に調節する。
蒸溜水２リットル中に直ちに再懸濁させ、攪拌しながら
１晩＋４℃に保つ。溶液を１００００ダルトンカットオ
フの膜を用いて、抵抗が５０００Ωｃｍ−１以上になる
まで蒸溜水に対して透析する。蒸溜水で容量１．５リッ
トルに調節し、ｐＨを７．２に調節する。
【００８３】それからＤ２５を０．２２μｍ膜で濾過し
て減菌し、無菌条件下で凍結乾燥する。
て減菌し、無菌条件下で凍結乾燥する。
【００８４】この凍結乾燥した化合物がＳＪＤ２５３で
あり、その有効成分を下記で静脈径路に用いる。
あり、その有効成分を下記で静脈径路に用いる。
【００８５】種々のシンチグラフィー画像化の用途のた
めのＤ２５抽出の概要 蛋白質１０ｍｇ／ｍｌに調節した最初の生物体重１ｋｇ
（乾燥重量）に相当するクレブシェラ・ニューモニア（
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）膜プ
ロテオグリカンを用いる： Ｉ−Ｄ２５：ＳＪＤ２５１（約２０−３０％重合体）（
先行技術のプロセス） １．アルカリ加水分解（０．５ＮａＯＨ−１時間５６℃
） ２．中和 ３．酵素消化（０．１ｇ／ｌプロテアーゼＫ＋０．１ｇ
／リゾチーム、３７℃で２時間） ４．アルコール沈殿（２容量のエタノール、２０℃）５
．０．５ＭのＣＨ３ ＣＯＯＮａに再懸濁６．アルコー
ル沈殿（４と同じ） ７．蒸溜水に再懸濁 ８．澄明化（６０分間、３００００ｇ）９．Ｈ２ Ｏに
対して透析（＞２５００Ωｃｍ−１、１００００Ｄ膜を
使用） １０．０．２２μｍ膜で濾過減菌 １１．無菌凍結乾燥：ＳＪＤ２５１
めのＤ２５抽出の概要 蛋白質１０ｍｇ／ｍｌに調節した最初の生物体重１ｋｇ
（乾燥重量）に相当するクレブシェラ・ニューモニア（
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）膜プ
ロテオグリカンを用いる： Ｉ−Ｄ２５：ＳＪＤ２５１（約２０−３０％重合体）（
先行技術のプロセス） １．アルカリ加水分解（０．５ＮａＯＨ−１時間５６℃
） ２．中和 ３．酵素消化（０．１ｇ／ｌプロテアーゼＫ＋０．１ｇ
／リゾチーム、３７℃で２時間） ４．アルコール沈殿（２容量のエタノール、２０℃）５
．０．５ＭのＣＨ３ ＣＯＯＮａに再懸濁６．アルコー
ル沈殿（４と同じ） ７．蒸溜水に再懸濁 ８．澄明化（６０分間、３００００ｇ）９．Ｈ２ Ｏに
対して透析（＞２５００Ωｃｍ−１、１００００Ｄ膜を
使用） １０．０．２２μｍ膜で濾過減菌 １１．無菌凍結乾燥：ＳＪＤ２５１
【００８６】ＩＩ−リンホシンチグラフィー用Ｄ２５：
ＳＪＤ２５２（約７−１２％の重合体）１．アルカリ加
水分解（０．５ＮａＯＨ−１時間５６℃） ２．中和 ３．酵素消化（０．４ｇ／ｌプロテアーゼＫ＋０．１ｇ
／リゾチーム、３７℃で２時間） ４．アルコール沈殿（２容量のエタノール、２０℃）５
．クロロホルム：メタノールで脂質除去、乾燥。 ６．蒸溜水に再懸濁（１晩、４℃） ７．澄明化（６０ｍｉｎ、３００００ｇ）８．Ｈ２ Ｏ
に対して透析（＞５０００Ωｃｍ−１、１００００Ｄ膜
を使用） ９．０．２２μｍ膜で減菌 １０．無菌凍結乾燥：ＳＪＤ２５２
ＳＪＤ２５２（約７−１２％の重合体）１．アルカリ加
水分解（０．５ＮａＯＨ−１時間５６℃） ２．中和 ３．酵素消化（０．４ｇ／ｌプロテアーゼＫ＋０．１ｇ
／リゾチーム、３７℃で２時間） ４．アルコール沈殿（２容量のエタノール、２０℃）５
．クロロホルム：メタノールで脂質除去、乾燥。 ６．蒸溜水に再懸濁（１晩、４℃） ７．澄明化（６０ｍｉｎ、３００００ｇ）８．Ｈ２ Ｏ
に対して透析（＞５０００Ωｃｍ−１、１００００Ｄ膜
を使用） ９．０．２２μｍ膜で減菌 １０．無菌凍結乾燥：ＳＪＤ２５２
【００８７】ＩＩＩ−静脈径路用Ｄ２５：ＳＪＤ２５３
（実質上単量体、重合度＜５％） １．アルカリ加水分解（０．７５ＮａＯＨ−１時間５６
℃） ２．中和 ３．酵素消化（０．４ｇ／ｌプロテアーゼＫ＋０．１ｇ
／リゾチーム、２０℃） ４．アルコール沈殿（２容量のエタノール、２０℃）５
．クロロホルム：メタノールで脂質除去、乾燥６．蒸溜
水に再懸濁（１晩、４℃） ７．澄明化（６０分間、３００００ｇ）８．アルカリ加
水分解（０．５ＮａＯＨ−１時間５６℃） ９．中和 １０．デオキシコール酸ナトリウム処理（０．５％、３
０分間、２５℃） １１．アルコール沈殿（２容量のエタノール、４℃）１
２．蒸溜水に再懸濁（１晩、４℃） １３．Ｈ２ Ｏに対して透析（＞５０００Ωｃｍ−１、
１００００Ｄ膜を使用） １４．０．２２μｍ膜で濾過減菌 １５．無菌凍結乾燥：ＳＪＤ２５３
（実質上単量体、重合度＜５％） １．アルカリ加水分解（０．７５ＮａＯＨ−１時間５６
℃） ２．中和 ３．酵素消化（０．４ｇ／ｌプロテアーゼＫ＋０．１ｇ
／リゾチーム、２０℃） ４．アルコール沈殿（２容量のエタノール、２０℃）５
．クロロホルム：メタノールで脂質除去、乾燥６．蒸溜
水に再懸濁（１晩、４℃） ７．澄明化（６０分間、３００００ｇ）８．アルカリ加
水分解（０．５ＮａＯＨ−１時間５６℃） ９．中和 １０．デオキシコール酸ナトリウム処理（０．５％、３
０分間、２５℃） １１．アルコール沈殿（２容量のエタノール、４℃）１
２．蒸溜水に再懸濁（１晩、４℃） １３．Ｈ２ Ｏに対して透析（＞５０００Ωｃｍ−１、
１００００Ｄ膜を使用） １４．０．２２μｍ膜で濾過減菌 １５．無菌凍結乾燥：ＳＪＤ２５３
【００８８】実施例２：マクロファージを標的とする、
感染性、炎症性及び腫瘍性病巣の造影及び診断のための
組成物
感染性、炎症性及び腫瘍性病巣の造影及び診断のための
組成物
【００８９】本発明による脂質を除去したＤ２５及びそ
の誘導体は単球マクロファージ型細胞に対する親和性を
有することが判明した。この親和性のために、詳述すれ
ば、これら化合物は、これら細胞を動員する炎症性及び
腫瘍性病巣を識別し、これに結合する理想的な運搬剤と
なる。
の誘導体は単球マクロファージ型細胞に対する親和性を
有することが判明した。この親和性のために、詳述すれ
ば、これら化合物は、これら細胞を動員する炎症性及び
腫瘍性病巣を識別し、これに結合する理想的な運搬剤と
なる。
【００９０】フルオレセインイソチオシアネートで標識
化された無脂質Ｄ２５（Ｄ２５−ＦＩＴＣ）の結合研究
が人白血球及び種々の細胞系で行われた。０．１〜１ｍ
ｇ／ｍｌ量の場合、人の単球、リンパ球及び顆粒球の存
在下でインキュベートしたＤ２５−ＦＩＴＣは、流動細
胞蛍光定量法で単球集団に選択的結合性を示す。Ｄ２５
のこれら細胞への結合性と、媒質中におけるその濃度と
の関係を表す曲線は、単球の脂質を除去したＤ２５に対
する好適な親和性が０．５〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲
にあり、単球では蛍光指数が２．２〜６．５倍高い（リ
ンパ球及び多核細胞では１．１〜１．６）ことを示す。
化された無脂質Ｄ２５（Ｄ２５−ＦＩＴＣ）の結合研究
が人白血球及び種々の細胞系で行われた。０．１〜１ｍ
ｇ／ｍｌ量の場合、人の単球、リンパ球及び顆粒球の存
在下でインキュベートしたＤ２５−ＦＩＴＣは、流動細
胞蛍光定量法で単球集団に選択的結合性を示す。Ｄ２５
のこれら細胞への結合性と、媒質中におけるその濃度と
の関係を表す曲線は、単球の脂質を除去したＤ２５に対
する好適な親和性が０．５〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲
にあり、単球では蛍光指数が２．２〜６．５倍高い（リ
ンパ球及び多核細胞では１．１〜１．６）ことを示す。
【００９１】種々の型の細胞系−造血（Ｋ５６２）、前
骨髄球（ＨＬ−６０）、単球様（Ｕ９３７）、リンパ芽
球（ＩＭ−９）、骨髄細胞（Ｕ−２６６）及びＴ白血球
（ＭＯＬＴ４）細胞を用いてＤ２５−ＦＩＴＣ結合性の
特異性を研究すると、非標識Ｄ２５との競合後の置換に
よって、単球細胞系に対する結合の選択性が確認される
（表１）。
骨髄球（ＨＬ−６０）、単球様（Ｕ９３７）、リンパ芽
球（ＩＭ−９）、骨髄細胞（Ｕ−２６６）及びＴ白血球
（ＭＯＬＴ４）細胞を用いてＤ２５−ＦＩＴＣ結合性の
特異性を研究すると、非標識Ｄ２５との競合後の置換に
よって、単球細胞系に対する結合の選択性が確認される
（表１）。
【００９２】表１：ヒト由来の細胞系に対する蛍光脂肪
を除去したＤ２５（フルオレセインイソチオシアネート
）結合の研究 ＊１ｍｇ／ｍｌ Ｄ２５−ＦＩＴＣ ＊＊１０ｍｇ／ｍｌ Ｄ２５による競争後の１ｍｇ／ｍ
ｌ Ｄ２５−ＦＩＴＣ ＊＊＊Ｄ２５によるＤ２５−ＦＩＴＣ結合阻止パーセン
ト
を除去したＤ２５（フルオレセインイソチオシアネート
）結合の研究 ＊１ｍｇ／ｍｌ Ｄ２５−ＦＩＴＣ ＊＊１０ｍｇ／ｍｌ Ｄ２５による競争後の１ｍｇ／ｍ
ｌ Ｄ２５−ＦＩＴＣ ＊＊＊Ｄ２５によるＤ２５−ＦＩＴＣ結合阻止パーセン
ト
【００９３】２．１ ｉ．ｖ．径路によるマクロフ
ァージを標的とする造影 本発明の主題である運搬剤によって、マクロファージを
生体内で標的とする戦略を動物に用いて、次の２つの実
験的病的モデルのシンチグラフィーによって評価を行っ
た。 （１） 卵アルブミンによって家兎に誘起させる免疫学
的関節炎。 （２） 豚肢筋肉の部分的照射に関連させる炎症性反応
。
ァージを標的とする造影 本発明の主題である運搬剤によって、マクロファージを
生体内で標的とする戦略を動物に用いて、次の２つの実
験的病的モデルのシンチグラフィーによって評価を行っ
た。 （１） 卵アルブミンによって家兎に誘起させる免疫学
的関節炎。 （２） 豚肢筋肉の部分的照射に関連させる炎症性反応
。
【００９４】実験結果
１：成ニュージーランド家兎を、卵アルブミンとフロイ
トントのアジュバントとの混合物を背中に反復皮内注射
することによって感作させた。感作から１箇月後に、誘
発的卵アルブミン注射を右膝に相当する関節に行った。 病状が進行し、最初の浮腫が減退して、１５日後にそれ
らの動物で３箇月にわたって、静脈径路で投与した。
９９ｍＴｃで標識化したＳＪＤ２５３及びメチレンジホ
スフォネート（骨関節標準トレーサー）によるシンチグ
ラフィーを行った。
トントのアジュバントとの混合物を背中に反復皮内注射
することによって感作させた。感作から１箇月後に、誘
発的卵アルブミン注射を右膝に相当する関節に行った。 病状が進行し、最初の浮腫が減退して、１５日後にそれ
らの動物で３箇月にわたって、静脈径路で投与した。
９９ｍＴｃで標識化したＳＪＤ２５３及びメチレンジホ
スフォネート（骨関節標準トレーサー）によるシンチグ
ラフィーを行った。
【００９５】この試験は、意識のある動物を使用し、Ｔ
ＩＭ５１２コンピューターシステム（メジマグ，ベサン
ソン）に接続され平行コリメーターを備えたフォガンマ
カメラ（Ｐｈｏｇａｍｍａｃａｍｅｒａ）（ジーメンス
）を用いて行った。１ ｍＣｉ の ９９ｍＴｃＯ４−
（ＣＩＳ，Ｇｉｆ−ｓｕｒ−Ｙｖｅｔｔｅ）で標識化し
た生成物を静脈注射した１時間のちに、１２８×１２８
ピクセルのマトリックスで１分間の静的捕捉を行った。
ＩＭ５１２コンピューターシステム（メジマグ，ベサン
ソン）に接続され平行コリメーターを備えたフォガンマ
カメラ（Ｐｈｏｇａｍｍａｃａｍｅｒａ）（ジーメンス
）を用いて行った。１ ｍＣｉ の ９９ｍＴｃＯ４−
（ＣＩＳ，Ｇｉｆ−ｓｕｒ−Ｙｖｅｔｔｅ）で標識化し
た生成物を静脈注射した１時間のちに、１２８×１２８
ピクセルのマトリックスで１分間の静的捕捉を行った。
【００９６】ＳＪＤ２５３の標識化は、２ ｍＣｉ の
９９ｍＴｃＯ４−を用い、リン（Ｌｉｎ） らの方法
（Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，１９７１，１２巻，２０４
−２１１ページ）により減圧下で塩化第１錫又はその他
のハロゲン化第１錫（ＳｎＦ２ など）１００μｇによ
って還元した滅菌又は無発熱性生成物を用いて行われた
。
９９ｍＴｃＯ４−を用い、リン（Ｌｉｎ） らの方法
（Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，１９７１，１２巻，２０４
−２１１ページ）により減圧下で塩化第１錫又はその他
のハロゲン化第１錫（ＳｎＦ２ など）１００μｇによ
って還元した滅菌又は無発熱性生成物を用いて行われた
。
【００９７】溶媒メタノール／水（８５／１５）で薄層
分配ラジオクロマトグラフィーによって測定した標識化
率は９９．５％より大きく、検出し得る量のコロイドは
存在しない。
分配ラジオクロマトグラフィーによって測定した標識化
率は９９．５％より大きく、検出し得る量のコロイドは
存在しない。
【００９８】メチレンジホスフォネートの試験では、メ
チレンジホスフォネート２．５ｍｇと塩化第１錫二水加
物０．２５ｍｇを含むＴＣＫ１４Ｍキット（ＣＩＳ，Ｇ
ｉｆ−ｓｕｒ−Ｙｖｅｔｔｅ）を用いた。標識化は５
ｍＣｉの ９９ｍＴｃＯ４−を加えることによって即座
に行われた。メタノール／水（８５：１５）溶媒中で分
配ラジオクロマトグラフィーにより測定した標識化率は
９９．５％より大きく、コロイドははっきりとは検出さ
れなかった。１ ｍＣｉ に相当する試料の１／４を、
シンチグラフィー試験の１時間前に動物に静脈注射した
。
チレンジホスフォネート２．５ｍｇと塩化第１錫二水加
物０．２５ｍｇを含むＴＣＫ１４Ｍキット（ＣＩＳ，Ｇ
ｉｆ−ｓｕｒ−Ｙｖｅｔｔｅ）を用いた。標識化は５
ｍＣｉの ９９ｍＴｃＯ４−を加えることによって即座
に行われた。メタノール／水（８５：１５）溶媒中で分
配ラジオクロマトグラフィーにより測定した標識化率は
９９．５％より大きく、コロイドははっきりとは検出さ
れなかった。１ ｍＣｉ に相当する試料の１／４を、
シンチグラフィー試験の１時間前に動物に静脈注射した
。
【００９９】２：豚の照射巣における試験１００Ｃｉ
の １９２Ｉｒ（イリジウム）源を用いて大型白豚の右
肢後面を照射した。その際、２ｃｍの距離で照射線量６
０Ｇｙを与えた。照射部位は大腿骨の後部１０ｃｍ、転
子間稜と外側上顆とから等距離にある部分である。照射
後１５日目に動物を気体麻酔下で処置し、照射皮膚の切
除を行い、非特異的炎症反応及び放射線壞死による感染
症を回避した。シンチグラフィー試験は処置後６０〜７
０日目に浮腫、及び瘢痕化過程に関係した表層性炎症反
応がないことを確認してから行われた。シンチグラフィ
ー試験は、平行コリメーターを備え、２０％の窓で９９
ｍＴｃの光電ピーク１４０ｋｅＶに設定されたＧＣＡ型
ガンマカメラ（東芝）を用いて行われた。画像のデジタ
ル化及び保存はペリカラー１０００画像解析器を用いて
行われた。７０ｋｇの動物で投与量はシンチグラフィー
試験の１時間前に、塩化第１錫２００μｇの存在下で１
０ ｍＣｉ の ９９ｍＴｃＯ４−で標識化したＳＪＬ
２５３の１ｍｇに相当した。既述の方法で薄層分配ラジ
オクロマトグラフィーで標識量をチェックした後、標識
Ｄ２５をシンチクラフィー試験の１時間前に耳の辺縁静
脈に注射した。
の １９２Ｉｒ（イリジウム）源を用いて大型白豚の右
肢後面を照射した。その際、２ｃｍの距離で照射線量６
０Ｇｙを与えた。照射部位は大腿骨の後部１０ｃｍ、転
子間稜と外側上顆とから等距離にある部分である。照射
後１５日目に動物を気体麻酔下で処置し、照射皮膚の切
除を行い、非特異的炎症反応及び放射線壞死による感染
症を回避した。シンチグラフィー試験は処置後６０〜７
０日目に浮腫、及び瘢痕化過程に関係した表層性炎症反
応がないことを確認してから行われた。シンチグラフィ
ー試験は、平行コリメーターを備え、２０％の窓で９９
ｍＴｃの光電ピーク１４０ｋｅＶに設定されたＧＣＡ型
ガンマカメラ（東芝）を用いて行われた。画像のデジタ
ル化及び保存はペリカラー１０００画像解析器を用いて
行われた。７０ｋｇの動物で投与量はシンチグラフィー
試験の１時間前に、塩化第１錫２００μｇの存在下で１
０ ｍＣｉ の ９９ｍＴｃＯ４−で標識化したＳＪＬ
２５３の１ｍｇに相当した。既述の方法で薄層分配ラジ
オクロマトグラフィーで標識量をチェックした後、標識
Ｄ２５をシンチクラフィー試験の１時間前に耳の辺縁静
脈に注射した。
【０１００】２．２ リンパ径路でのマクロファージ
の標的化 リンパ系シンチグラフィーのためのマクロファージ標的
化の戦略を、健康動物及び実験的病的状態において評価
した。
の標的化 リンパ系シンチグラフィーのためのマクロファージ標的
化の戦略を、健康動物及び実験的病的状態において評価
した。
【０１０１】（１） 健康な犬及びサルにおいて：この
研究は、意識のある動物の、後足の２箇所の指間隙に、
前述リンらの方法（Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，１９７１
，１２巻，２０４−２１１ページ）によってハロゲン化
第１錫（例えばＳｎＣｌ２ ，ＳｎＦ２ など）１００
μｇの存在下で５００μＣｉ の ９９ｍＴｃで標識化
したＤ２５の５００μｇを含む溶液を１箇所につき５０
μリットルづつ皮下注射することによって行われた。現
在市販されているリンホシンチグラフィー用放射性薬物
製品を用いて較正試験を行った。 ９９ｍＴｃで標識し
たヒトアルブミンナノコロイド（ナノコル、ソルコバー
ゼル）又はコロイド状硫化レニウム（ＴＣＫ−１７，Ｃ
ＩＳ，Ｇｉｆ−ｓｕｒ−Ｙｖｅｔｔｅ）。
研究は、意識のある動物の、後足の２箇所の指間隙に、
前述リンらの方法（Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，１９７１
，１２巻，２０４−２１１ページ）によってハロゲン化
第１錫（例えばＳｎＣｌ２ ，ＳｎＦ２ など）１００
μｇの存在下で５００μＣｉ の ９９ｍＴｃで標識化
したＤ２５の５００μｇを含む溶液を１箇所につき５０
μリットルづつ皮下注射することによって行われた。現
在市販されているリンホシンチグラフィー用放射性薬物
製品を用いて較正試験を行った。 ９９ｍＴｃで標識し
たヒトアルブミンナノコロイド（ナノコル、ソルコバー
ゼル）又はコロイド状硫化レニウム（ＴＣＫ−１７，Ｃ
ＩＳ，Ｇｉｆ−ｓｕｒ−Ｙｖｅｔｔｅ）。
【０１０２】試験したＤ２５は下記のものに相当する：
−ＳＪＤ２５１と名づけたＤ２５ −リンホシンチクラフィーのために至適化された天然分
子の両親媒性による疎水性相互作用を制限するための本
発明に記載の技術によって得られた誘導体；こうして至
適化された生成物はＳＪＤ２５２と呼ばれる。Ｄ２５フ
ラクションの標識化率は溶媒メタノール／水（８５／１
５）中で薄層分配ラジオクロマトグラフィーによって測
定され、９９．５％より高く、検出し得る程のコロイド
はなかった。
−ＳＪＤ２５１と名づけたＤ２５ −リンホシンチクラフィーのために至適化された天然分
子の両親媒性による疎水性相互作用を制限するための本
発明に記載の技術によって得られた誘導体；こうして至
適化された生成物はＳＪＤ２５２と呼ばれる。Ｄ２５フ
ラクションの標識化率は溶媒メタノール／水（８５／１
５）中で薄層分配ラジオクロマトグラフィーによって測
定され、９９．５％より高く、検出し得る程のコロイド
はなかった。
【０１０２】試験は、平行コリメーターを備え、ＴＩＭ
５１２コンピューターシステム（メジマグ，ベサンソル
）に接続されたフォガンマンカメラ（シーメンス）で行
われた。動的捕捉が後肢で、１分間に１画像の速度で１
時間行われた。その結果はＳＪＤ２５１，ナノコル及び
コロイド状硫化レニウムでほぼ一致したリンパ分布動態
を示した。これは３０分後にガングリオンリレーの可視
化によって特徴づけられ、１時間、或いはそれ以上も続
く。
５１２コンピューターシステム（メジマグ，ベサンソル
）に接続されたフォガンマンカメラ（シーメンス）で行
われた。動的捕捉が後肢で、１分間に１画像の速度で１
時間行われた。その結果はＳＪＤ２５１，ナノコル及び
コロイド状硫化レニウムでほぼ一致したリンパ分布動態
を示した。これは３０分後にガングリオンリレーの可視
化によって特徴づけられ、１時間、或いはそれ以上も続
く。
【０１０４】リンパ系シンチグラフィのために最適化さ
れた無脂質Ｄ２５（ＳＪＤ２５２）では、リンパ系によ
るとり込みは注射後最初の５分から非常に速くなり、１
０〜２０分に得られるガングリオンリレーの画像は、標
準放射性薬物で得られるものに近いシンチグラフィーコ
ントラストをもつ。対照的に、健康な動物では、ガング
リオン画像の消失をおこす速やかなクリアランスが注射
後３０〜６０分の間に生じる。
れた無脂質Ｄ２５（ＳＪＤ２５２）では、リンパ系によ
るとり込みは注射後最初の５分から非常に速くなり、１
０〜２０分に得られるガングリオンリレーの画像は、標
準放射性薬物で得られるものに近いシンチグラフィーコ
ントラストをもつ。対照的に、健康な動物では、ガング
リオン画像の消失をおこす速やかなクリアランスが注射
後３０〜６０分の間に生じる。
【０１０５】実験的病的状態においては２つのモデルを
用いた： −子羊のヒツジ偽結核菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ） 感染症：後肢の端にあった感染性肉芽腫からの細菌をリ
ンパドレナージ管によって播種し、２つの感染性ガング
リオンをつくった。これはリンパ系シンチグラフィー標
準物質には不透過性である。−あらかじめＢＣＧで免疫
した腓々属サルに、ツベルクリン皮下注射により誘起し
た反応性炎症性腋窩ガングリオンのモデル。
用いた： −子羊のヒツジ偽結核菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ） 感染症：後肢の端にあった感染性肉芽腫からの細菌をリ
ンパドレナージ管によって播種し、２つの感染性ガング
リオンをつくった。これはリンパ系シンチグラフィー標
準物質には不透過性である。−あらかじめＢＣＧで免疫
した腓々属サルに、ツベルクリン皮下注射により誘起し
た反応性炎症性腋窩ガングリオンのモデル。
【０１０６】羊の感染性ガングリオンの場合、ＳＪＤ２
５２は注射後３０〜６０分に２つの病的ガングリオンの
画像化を可能にし、少なくとも９０分間はクリアランス
は認められない。反対側の健康な肢では、実施した試験
は正常ガンリリオンの画像化を３０分間だけ可能とする
。それは非結合生成物のクリアランスがおこるからであ
る。
５２は注射後３０〜６０分に２つの病的ガングリオンの
画像化を可能にし、少なくとも９０分間はクリアランス
は認められない。反対側の健康な肢では、実施した試験
は正常ガンリリオンの画像化を３０分間だけ可能とする
。それは非結合生成物のクリアランスがおこるからであ
る。
【０１０７】サルにおいてツベルクリンによって誘起し
た炎症性ガングリオンでも、同様な結果が同じ期間内に
得られるが、画像は３時間続く。ＳＤＪ２５２の新しい
リンパ系シンチグラフィーの用途は、縦隔ガングリオン
の画像化に関する。この開発は、意識のある腓々属サル
で、２５０μＣｉ の ９９ｍＴｃで標識化した生成物
２５０μｇの皮内又は胸膜内注射によって行われた。注
射後３時間は、シンチグラフィー剤の胸膜クリアランス
と同時に、後縦隔ガングリオンにおける活性が時間と共
に増大する。こうしてこれらガングラオンの画像化が可
能である。
た炎症性ガングリオンでも、同様な結果が同じ期間内に
得られるが、画像は３時間続く。ＳＤＪ２５２の新しい
リンパ系シンチグラフィーの用途は、縦隔ガングリオン
の画像化に関する。この開発は、意識のある腓々属サル
で、２５０μＣｉ の ９９ｍＴｃで標識化した生成物
２５０μｇの皮内又は胸膜内注射によって行われた。注
射後３時間は、シンチグラフィー剤の胸膜クリアランス
と同時に、後縦隔ガングリオンにおける活性が時間と共
に増大する。こうしてこれらガングラオンの画像化が可
能である。
【０１０８】通例、この経路によって探査可能な主な領
域は、リンパドレナージ領域に生成物を皮下又は皮内注
射した後の上及び下肢、及び乳房領域のガングリオン鎖
である。探査の可能性は、炎症性及び腫瘍性病的状態に
おいてかなり重要な縦隔ガングリオンの画像化にも及ぶ
、それは生成物の胸膜内注射によって行われる。
域は、リンパドレナージ領域に生成物を皮下又は皮内注
射した後の上及び下肢、及び乳房領域のガングリオン鎖
である。探査の可能性は、炎症性及び腫瘍性病的状態に
おいてかなり重要な縦隔ガングリオンの画像化にも及ぶ
、それは生成物の胸膜内注射によって行われる。
【０１０９】
【発明の効果】以上のように、本発明によれば、Ｄ２５
の脂質を除去して疎水性を減らすことによって、水溶液
中のＤ２５の重合度を低下させた新規な無脂質Ｄ２５誘
導体、その製法及びそれを含有する組成物を提供するた
め、静脈経路及びリンパ経路に投与可能な、マクロファ
ージの標的化により、画像化、診断又は治療に用いるこ
とのできる組成物を得ることができる。
の脂質を除去して疎水性を減らすことによって、水溶液
中のＤ２５の重合度を低下させた新規な無脂質Ｄ２５誘
導体、その製法及びそれを含有する組成物を提供するた
め、静脈経路及びリンパ経路に投与可能な、マクロファ
ージの標的化により、画像化、診断又は治療に用いるこ
とのできる組成物を得ることができる。
【図１】無脂質Ｄ２５の構造図である。
Claims (16)
- 【請求項１】 化合物の少なくとも８５重量％、より
好適には９０重量％が水溶液中で単量体の形で存在する
、脂質を一部除去したＤ２５多糖化合物及びその誘導体
。 - 【請求項２】 前記Ｄ２５が、クレブシェラ・ニュー
モニア（ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ）菌の膜プロテオグリカンから抽出した分子量３０ｋ
Ｄの多糖化合物である請求項１に記載の化合物。 - 【請求項３】 ガラクトースのみを含む配列の反復か
らなる線状多糖鎖を含み、その配列の末端には、グルコ
ース、ガラクトース、グルコサミン、ヘプトース及びマ
ンノデオキシオクツロソン酸残基を含む特異的結合構造
があり、２本の短いペプチド鎖がこの構造に結合してお
り、さらにこの構造の末端には、化合物の約１．５重量
％をなす２つのβ−ヒドロキシミリスチン酸が、Ｎ−グ
リコシド結合によってそれぞれ結合している請求項１又
は２に記載の化合物。 - 【請求項４】 エステル化された型で化合物に結合し
たパルミチン脂肪酸の量が化合物の０．０１重量％を越
えず、遊離した型で化合物に協合するパルミチン脂肪酸
の量が化合物の０．１重量％を越えていない請求項１〜
３のうちの何れかに記載の化合物。 - 【請求項５】 請求項１〜４のいずれかに記載された
化合物を製造するための方法であって、 （ａ） 粗製膜プロテオグリカンをグラム陰性菌株の細
菌溶解物から抽出するステップと、 （ｂ） ステップ（ａ） の粗製プロテオグリカンをア
ルカリ加水分解によって可溶化し、水溶液中にある溶性
プロテオグリカンを回収するステップと、 （ｃ） 多糖化合物を分解し、必要に応じて分解フラク
ション中に存在する蛋白質を除去するステップと、（ｄ
） 前記多糖化合物に協合している遊離脂肪酸を、適合
する有機溶媒を用いて抽出するステップ、とを備えたこ
とを特徴とする多糖化合物の製法。 - 【請求項６】 請求項５に記載の多糖化合物の製法で
あって、 （ａ） 粗製膜プロテオグリカンをグラム陰性菌株の細
菌溶解物から抽出するステップと、 （ｂ） ステップ（ａ） で得られる粗製プロテオグリ
カンを、好ましくはモル濃度が０．３〜１Ｍ、より好適
には０．５〜０．７５Ｍの水酸化ナトリウムによるアル
カリ加水分解によって、９０℃より低い温度、より好適
には５０℃〜６０℃の間の温度で可溶化し、その処理を
少なくとも１時間は継続するステップと、 （ｃ） 冷却後、その懸濁液を酸で中和し、必要に応じ
て溶液中に存在する蛋白質の酵素的加水分解を行うステ
ップと、 （ｄ） しかる後、多糖化合物をアルコール沈殿によっ
て生成して遠心分離などにより回収するステップと、（
ｅ） 適合する有機溶媒、例えばクロロホルム又はクロ
ロホルムとメタノールとの混合液を用いて前記多糖化合
物を前記有機溶媒に分散し、その後、溶媒を除去してか
ら、好ましくは同一溶媒で沈殿を洗浄することによって
遊離脂肪酸を抽出するステップと、 （ｆ） 前記沈殿物を水に再懸濁し、脂質を除去した前
記Ｄ２５の溶液を遠心分離によって清澄にしてから上清
液を回収するステップと、 （ｇ） 最後に、脂質を除去したＤ２５化合物を分画化
又は限外濾過法によって分離するステップ、とを備えた
ことを特徴とする多糖化合物の製法。 - 【請求項７】 極めて低い重合度、特に２％より低い
重合度を得るのに特に適合された請求項６に記載の多糖
化合物の製法であって、前記ステップ（ｆ） の後に新
たにアルカリ加水分解を行い、その後、冷却した後に懸
濁液を酸で中和し、付加的にデオキシコール酸ナトリウ
ムを０．５％を越えないような割合で溶液に加え、次い
で多糖化合物を沈殿させ、この沈殿物を水に懸濁して脂
質を除去したＤ２５化合物を得、得られた前記化合物を
分画化又は限外濾過によって分離することを特徴とする
多糖化合物の製法。 - 【請求項８】 前記請求項１〜４うちの何れかに記載
の脂質を一部除去したＤ２５化合物、又はその誘導体の
一つ、を含んでなる画像化、診断又は治療のための組成
物。 - 【請求項９】 マクロファージを標的とすることによ
って、感染性、炎症性及び腫瘍性病巣を画像化及び診断
するための請求項８に記載の組成物。 - 【請求項１０】 静脈経路によって注入可能な請求項
８又は９に記載の組成物。 - 【請求項１１】 リンパ経路、特に皮下又は胸膜内経
路によって注入可能な請求項８又は９に記載の組成物。 - 【請求項１２】 エアロゾル経路によって投与可能な
請求項８又は９に記載の組成物。 - 【請求項１３】 脂質を一部除去したＤ２５多糖化合
物が、検出可能要素、例えば放射性、常磁性又は蛍光性
要素で標識化されている請求項８〜１２のいずれかに記
載の画像化または診断用組成物。 - 【請求項１４】 標識化されていない前記多糖化合物
からなる組成物であって、その組成物が、上記多糖化合
物を識別することのできる物質、特に抗体を含んだ第２
の組成物を有する画像化及び診断用キットの一部をなし
、前記物質そのものが例えば放射性、常磁性又は蛍光性
要素などの検出可能要素で標識化されている請求項８〜
１２のいずれかに記載の画像化及び診断用組成物。 - 【請求項１５】 放射性要素がシンチグラフィーによ
って検出される放射性核種である請求項１３又は１４に
記載の組成物。 - 【請求項１６】 放射性核種が ９９ｍＴｃ、 １２
３Ｉまたは １１１Ｉｎである請求項１５に記載の組成
物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9002957 | 1990-03-08 | ||
| FR9002957A FR2659351B1 (fr) | 1990-03-08 | 1990-03-08 | Compose polysaccharidique delipide, procede de preparation, compositions en comprenant. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04220401A true JPH04220401A (ja) | 1992-08-11 |
Family
ID=9394527
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3069255A Pending JPH04220401A (ja) | 1990-03-08 | 1991-03-08 | 脂質を除去した多糖化合物、その製法及びそれを含有する組成物 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5601799A (ja) |
| EP (1) | EP0446143B1 (ja) |
| JP (1) | JPH04220401A (ja) |
| AT (1) | ATE116662T1 (ja) |
| AU (1) | AU646842B2 (ja) |
| CA (1) | CA2037741A1 (ja) |
| DE (1) | DE69106406T2 (ja) |
| DK (1) | DK0446143T3 (ja) |
| ES (1) | ES2068527T3 (ja) |
| FR (1) | FR2659351B1 (ja) |
| GR (1) | GR3015538T3 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007094248A1 (ja) * | 2006-02-14 | 2007-08-23 | Kushiro Industrial Technology Center | プロテオグリカンの製造方法 |
| JP2016079402A (ja) * | 2014-10-16 | 2016-05-16 | 地方独立行政法人青森県産業技術センター | プロテオグリカンの分解方法及び分解物 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2655267B1 (fr) * | 1989-12-04 | 1992-04-03 | Roussel Uclaf | Nouveau derive sulfate du galactanne extrait de klebsiella, procede de preparation, application a titre de medicaments et compositions pharmaceutiques le renfermant. |
| US5406950A (en) * | 1993-12-23 | 1995-04-18 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Inhalable contrast agent |
| FR2717483B1 (fr) * | 1994-03-16 | 1996-06-07 | Pf Medicament | Préparation d'un composé polysaccharidique D25 délipidé et purifié et composition injectable en comportant. |
| FR2734160B1 (fr) * | 1995-05-18 | 1997-08-01 | Pf Medicament | Utilisation d'un compose comportant une structure glycanique pour le blocage d'anticorps et procede d'obtention d'un tel produit |
| CA2279147C (en) | 1999-07-29 | 2003-02-18 | Graminia Developments Ltd. | Liquid for producing marker vapour, a method of producing marker vapour and a method of inspection with marker vapour |
| CA2438448C (en) * | 2003-08-27 | 2008-11-18 | Quality Fabricating & Machining Ltd. | Leak detector |
| US9820986B2 (en) * | 2005-03-04 | 2017-11-21 | Taiwan Hopaz Chems, Mfg. Co., Ltd. | Glycopeptide compositions |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4285936A (en) * | 1979-12-10 | 1981-08-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method for producing a vaccine against bacterial infections caused by pseudomonas aeruginosa |
| DE3224788A1 (de) * | 1981-07-17 | 1983-02-03 | South African Inventions Development Corp., Scientia, Pretoria,Transvaal | Traegergebundenes immunogenes material |
| US4873088A (en) * | 1983-09-06 | 1989-10-10 | Liposome Technology, Inc. | Liposome drug delivery method and composition |
| FR2598434B1 (fr) * | 1986-05-12 | 1988-09-16 | Pf Medicament | Nouveaux immunomodulateurs obtenus par hemisynthese a partir d'un polysaccharide bacterien isole d'une souche mutante non capsulee de klebsiella pneumoniae |
| FR2614306B1 (fr) * | 1987-04-22 | 1989-07-28 | Pf Medicament | Nouveau derive de d.25, procede de preparation, utilisation a titre d'agent immunostimulant et compositions pharmaceutiques le contenant. |
| FR2650506B1 (fr) * | 1989-07-11 | 1991-11-08 | Roussel Uclaf | Galactanne extrait de klebsiella, procede d'obtention et application a titre de medicament |
-
1990
- 1990-03-08 FR FR9002957A patent/FR2659351B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-03-06 AU AU72637/91A patent/AU646842B2/en not_active Ceased
- 1991-03-07 CA CA002037741A patent/CA2037741A1/fr not_active Abandoned
- 1991-03-08 JP JP3069255A patent/JPH04220401A/ja active Pending
- 1991-03-08 AT AT91400648T patent/ATE116662T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-03-08 DK DK91400648.1T patent/DK0446143T3/da active
- 1991-03-08 ES ES91400648T patent/ES2068527T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-08 EP EP91400648A patent/EP0446143B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-08 DE DE69106406T patent/DE69106406T2/de not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-01-06 US US08/369,430 patent/US5601799A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-23 GR GR950400672T patent/GR3015538T3/el unknown
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007094248A1 (ja) * | 2006-02-14 | 2007-08-23 | Kushiro Industrial Technology Center | プロテオグリカンの製造方法 |
| US8153769B2 (en) | 2006-02-14 | 2012-04-10 | Kushiro Industrial Technology Center | Process for producing proteoglycan |
| JP2016079402A (ja) * | 2014-10-16 | 2016-05-16 | 地方独立行政法人青森県産業技術センター | プロテオグリカンの分解方法及び分解物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2659351A1 (fr) | 1991-09-13 |
| DE69106406T2 (de) | 1995-05-24 |
| ATE116662T1 (de) | 1995-01-15 |
| FR2659351B1 (fr) | 1994-12-02 |
| DK0446143T3 (da) | 1995-03-13 |
| DE69106406D1 (de) | 1995-02-16 |
| EP0446143B1 (fr) | 1995-01-04 |
| AU646842B2 (en) | 1994-03-10 |
| US5601799A (en) | 1997-02-11 |
| ES2068527T3 (es) | 1995-04-16 |
| AU7263791A (en) | 1991-09-12 |
| EP0446143A3 (en) | 1992-02-12 |
| EP0446143A2 (fr) | 1991-09-11 |
| CA2037741A1 (fr) | 1991-09-09 |
| GR3015538T3 (en) | 1995-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2740782B2 (ja) | 生体内造影ｎｍｒ診断用医薬 | |
| Fischman et al. | Detection of acute inflammation with 111In-labeled nonspecific polyclonal IgG | |
| JP2011256186A (ja) | マクロファージが仲介する疾患の治療および診断 | |
| JPH03173900A (ja) | 免疫試薬 | |
| CN110791281A (zh) | 一种巨噬细胞示踪荧光探针的制备方法及应用 | |
| JPH04220401A (ja) | 脂質を除去した多糖化合物、その製法及びそれを含有する組成物 | |
| AU2022384375A1 (en) | Ligand compound targeting psma antigen, and chelate and use thereof in diagnosis and treatment of prostate cancer | |
| Horn et al. | An immunological approach to the therapy of cancer? | |
| CN112661812A (zh) | 一种kk-lc-1抗原靶向结合肽及其衍生物、探针与应用 | |
| Anderle et al. | Modulation of the susceptibility of inbred and outbred rats to arthritis induced by cell walls of group A streptococci | |
| AU626645B2 (en) | Aerosol compositions intended for the imaging, diagnosis and targeted therapy of inflammatory and tumour foci | |
| US5017359A (en) | Aerosol compositions for in vivo imaging and therapy | |
| Kluciński et al. | Immunological Induction of Endometritis‐Model Investigations in Cows | |
| JP2011518197A (ja) | マクロ分子を放射性標識化するための方法 | |
| US20210085809A1 (en) | Enhancement of pathogen immunogenicity | |
| Ammann et al. | Evaluation of infants and children with recurrent infection | |
| Friberg Jr et al. | Tumor cell-surface organization: Differences between two TA3 sublines | |
| CN104511030A (zh) | 基于葡聚糖的双模态纳米影像药物-Dex-Rho-99mTc | |
| JPH09512842A (ja) | 脱脂質化しかつ精製したｄ２５ポリサッカリド化合物の標品およびこれを含有する注射可能組成物 | |
| EP1181025B1 (en) | Molecular complexes presenting high affinity binding with respect to monocyte derived cells and their uses in therapy | |
| JPS62270531A (ja) | 生体内でのイメ−ジング及び治療用の新規エアロゾル組成物 | |
| JP2005512083A (ja) | 細胞集団の移動パターンおよび／または分布パターンを分析するための診断薬を製造するためのヒトｃｄ４分子に特異性を有する標識リガンドの使用 | |
| RU2404812C1 (ru) | Способ получения радиоактивно меченного радионуклидами йода альфа-фетопротеина и способ его применения для диагностики злокачественных новообразований | |
| JPH01501796A (ja) | 脈管疾患の検出 | |
| CN120590505A (zh) | 一种重组补体蛋白及在制备抗白血病药物中的应用 |