JPH04218376A - Ｃ型肝炎ウィルスのｃＤＮＡ配列 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、配列番号１に示される
Ｃ型肝炎ウィルスのｃＤＮＡ配列を有するＤＮＡ配列に
関するものである。本発明のＤＮＡ配列は、Ｃ型肝炎ウ
ィルスのＲＮＡ診断に用いる　プロ−ブやプライマ−の
設定・合成に有用である。さらに、このＤＮＡ配列は、
Ｃ型肝炎の免疫診断に用いられるペプチドの遺伝子工学
的製造に有用である。さらにまた、このＤＮＡ配列を用
いて遺伝子工学的に製造されたペプチドは、Ｃ型肝炎の
免疫診断に用いられる抗体の製造に有用である。

【０００２】

【従来の技術】Ａ型肝炎は、直径２７ｎｍのＲＮＡウィ
ルスによる予後良好な急性伝染病で、ウィルスは肝実質
細胞および星細胞に存在し、糞便内に排泄されるため、
経口により伝播される。ウィルスが血中に出現する期間
は極めて短いため、血液を介しての伝染はない。他の肝
炎ウィルスによる急性肝炎に比べ、３８℃以上の発熱を
伴って発症することが多く、大多数は約４０日で肝機能
が正常化するが、稀に、劇症肝炎となることもある。

【０００３】Ｂ型肝炎は、Ｂ型肝炎ウィルスの感染によ
るものであり、このウィルスはＤＮＡウ　ィルスで二重
構造を有し、外被にＨＢｓ抗原、芯にＨＢｃ抗原、さら
にその内部にＨＢｅ　抗原が存在する。Ｂ型肝炎には一
過性感染と持続感染がある。一過性感染は、Ｂ型肝炎ウ
ィルス感染後１〜６ケ月の潜伏期を経てから消化器系症
状を主とする肝炎症状と共に血清ＧＯＴ、ＧＰＴの上昇
と黄疸が現れる。ほとんどの例では発症後３ケ月以　内
に肝機能は正常化するが、劇症肝炎となり速やかな経過
で死亡する例もある。持続感染には、Ｂ型肝炎ウィルス
の初感染から持続感染に移行する例と、無症侯　性キャ
リアの急性発症例がある。この場合は定型的な急性肝炎
を発症する例は少なく、大部分が潜行性に発症して、慢
性肝炎あるいは肝硬変で初めて発見されることが多い。

【０００４】非Ａ非Ｂ型肝炎は、ウィルスが原因と考え
られる輸血後肝炎、散発性の急性肝炎のうち、Ａ型なら
びにＢ型肝炎を除外した肝炎であり、未知のウィルスに
よる肝炎とされていた。日本では輸血後肝炎が１３〜２
０％の確率で発症しており、その９０％以上が非Ａ非Ｂ
型肝炎である。しかも慢性化する傾向はＢ型に比べて強
い。症状は、Ａ型ならびにＢ型肝炎に比べ無黄疸、自覚
症状を欠く例が多い（免疫学用語辞典第二版、最新医学
社）。

【０００５】上記のとおり、非Ａ非Ｂ型肝炎は未知のウ
ィルスによる肝炎とされていたが、最近Ｈｏｕｇｈｔｏ
ｎらは、非Ａ非Ｂ型肝炎患者の感染組織および血清から
得られたｃＤＮＡライブラリ−由来の発現産物をスクリ
−ニングすることにより、非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスゲノ
ムの一部のｃＤＮＡの単離に成功し、Ｃ型肝炎ウィルス
（ＨＣＶ）と命名した（欧州　公開特許０　３１８　２
１６）。さらに、Ｋｏｂｏらは、上記ＨＣＶとは異なる
ＨＣＶゲノムの一部のｃＤＮＡの単離に成功した（Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，　２４（
１９８９）　１０３６７−１０３７２）。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】上記のように、ＨＣＶ
は単一のウィルスではなく、数多くの亜型（ｓｕｂｔｙ
ｐｅ）が存在することが示唆されている。従って、Ｃ型
肝炎の正確な診断、予防・治療および　その解明のため
には、さらなる亜型のＨＣＶの単離が必要となる。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、公知の
ＨＣＶとは異なる亜型ＨＣＶのｃＤＮＡを提供すること
にある。本発明のＤＮＡ配列は、配列番号１に示される
ＨＣＶのｃＤＮＡ配列を含むものであり、詳細には、配
列番号１に示されるＤＮＡ配列からなるものである。本
発明のＤＮＡ配列は、ＨＣＶのＲＮＡ診断に用いるプロ
−ブやプライマ−の設定・合成に有用であり、さらに、
Ｃ型肝炎の免疫診断に用いられるペプチドの遺伝子工学
的製造に有用である　。さらにまた、このＤＮＡを用い
て遺伝子工学的に製造されたペプチドは、Ｃ型肝炎の免
疫診断に用いられる抗体の製造に有用である。本発明の
ＤＮＡ配列は、公知のＨＣＶのｃＤＮＡとは異なるため
、公知のＨＣＶのｃＤＮＡを用いては検出され得ないＣ
型肝炎の診断に特に有用である。さらには、本発明のＤ
ＮＡ配列と公知のｃＤＮＡとを比較する　ことにより、
より共通性の高いプライマ−やプロ−ブを作成すればよ
り広範なＣ　型肝炎のＲＮＡ診断が可能になる。本発明
のＨＣＶのｃＤＮＡは以下の方法に従い単離される。

【０００８】（１）ＲＮＡ抽出 肝癌患者の切除肝の正常組織をＧＩＴ緩衝液などの適当
な緩衝液中でホモジナイ　ズした後超遠心し、得られた
ペレットをＴＥ緩衝液などの適当な緩衝液に溶解し、フ
ェノ−ル抽出／エタノ−ル沈殿によりＲＮＡを抽出する
。

【０００９】（２）逆転写 （１）で得られたＲＮＡと、公知のＨＣＶのｃＤＮＡ配
列を基に合成されたアンチセンスプ　ライマ−とを、市
販の逆転写酵素と反応させ、逆転写を行なう。

【００１０】（３）ポリメラ−ゼ・チェイン・リアクシ
ョン（ＰＣＲ） （２）で得られた反応溶液に、公知のＨＣＶのｃＤＮＡ
配列を基に合成されたセンスプライマ−と、Ｔａｑ　Ｄ
ＮＡ　ポリメラ−ゼを加え、常法に従いポリメラ−ゼ・
チェイン・リアクション反応を行なう。

【００１１】（４）Ｓｅｃｏｎｄ　ＰＣＲ（３）で用い
たプライマ−とは別のセンス・アンチセンスプライマ−
を用いて、（３）で得られたＰＣＲ産物をさらに２度目
のＰＣＲにかける。

【００１２】（５）電気泳動 ２度目のＰＣＲ反応液をポリアクリルアミドゲルなどを
用いて電気泳動し、もちいたプライマ−から推定される
鎖長を有するバンドを切りだし、目的の鎖長を有するＤ
ＮＡを得る。

【００１３】（６）クロ−ニング （５）で得られたＤＮＡは、好ましくは５’末端をリン
酸化した後、適当な選択マ−カ−を有する市販のプラス
ミドに挿入し、得られたプラスミドを大腸菌などの適切
な宿主に導入する。形質転換体の有するプラスミドの挿
入ＤＮＡの鎖長を調べ、目　的の鎖長の挿入ＤＮＡを有
するクロ−ンを陽性とする。

【００１４】（７）シ−ケンシング 陽性クロ−ンの挿入ＤＮＡの塩基配列は、通常のジデオ
キシ鎖終止法により決定　した。本発明のｃＤＮＡ塩基
配列を配列番号１に示す。以下、実施例により本発明を
さらに詳細に説明するが、この実施例は本発明を限定す
るものではない。

【００１５】

【実施例】（１）ＲＮＡ抽出 単一患者（肝癌患者）の切除肝の正常組織１ｇをＧＩＴ
緩衝液（４．０Ｍ　グアニジウム・チオシアネ−ト、０
．１Ｍ　トリス−塩酸　（ｐＨ　７．８）、１％　β−
メルカプトエタノ−ル）４０ｍｌに加え、ブレンダ−（
ＫＩＮＥＭＡＴＩＣ社製）を用いて最高速で約３０秒間
ホモジナイズした。このホモジネ−ト液に１０％　Ｎ−
ラウロイルサルコシンナトリウム塩溶液を最終濃度が０
．５％になるように加えた。

【００１６】この０．５％ホモジネ−ト溶液２０ｍｌを
、５．７Ｍ　ＣｓＣｌ−０．０１Ｍ　ＥＤＴＡ　（ｐＨ
　８．０）　２０ｍｌにゆっくりと重層し、ＨＩＴＡＣ
ＨＩ　ＳＲＰ−２８ＳＡロ−タ−を用いて、２４０００
ｒｐｍ、１５℃で２４時間超遠心した。得られたペレッ
トをジエチルピロカ−ボネ−ト処理ＴＥ緩衝液（１００
ｍＭ　トリス−塩酸　（ｐＨ　７．８），　１ｍＭ　Ｅ
ＤＴＡ）に溶解し、フェノ−ル／クロロホルム／　イソ
アミルアルコ−ル（２４：２４：１）で抽出した後、エ
タノ−ル沈殿させた。

【００１７】得られた沈殿をジエチルピロカ−ボネ−ト
処理ＴＥ緩衝液３００μｌに溶解し、核酸濃度を測定し
たところ、ＲＮＡ濃度は２．８μｇ／μｌ　ＴＥ緩衝液
となっていた。

【００１８】（２）逆転写 上記工程（１）で得られた全ＲＮＡ（２．８μｇ／μｌ
）１μｌを以下の組成の反応溶液と　混合した。

【００１９】 　　　　　　　　１０×ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅ
ｒ＊　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
μｌ　　　　　　　　滅菌蒸留水　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１２μ
ｌ　　　　　　　　アンチセンスプライマ−　（１０　
ｐｍｏｌ／μｌ）＊＊　　　　２μｌ　　　　　　　　
＊：　１０×ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒの組成　
　　　　　　　　　　５００ｍＭ　ＫＣｌ　　　　　　
　　　　　１００ｍＭ　トリス−塩酸　（ｐＨ　８．３
）　２５℃　　　　　　　　　　　１５ｍＭ　ＭｇＣｌ
２　　　　　　　　　　　０．１％（Ｗ／Ｖ）　ゼラチ
ン　　　　　　　　＊＊：　アンチセンスプライマ−の
配列　　　　　　　　　　　　５’−ＡＡＧＡＴＡＧＡ
ＧＡＡＡＧＡＧＣＡＡＣＣ−３’　（配列番号　２）　
　　　　　　　　　　　Ｊａｐａｎ．　Ｊ．　Ｅｘｐ．
　Ｍｅｄ．，　６０　（１９９０）　１６７−１７７　
参照

【００２０】上記反応溶液を６５℃で５分間予備加熱し
てＲＮＡの２次構造を解除した後、室温で２分間放置し
てプライマ−をアニ−ルさせた。これに、以下の溶液を
加えて、４２℃で６０分間逆転写反応を行なった。 ｄＮＴＰ　（それぞれ１０ｍＭ）　　　　　　　　　　
　　　　２μｌＲＮａｓｅ阻害剤（４０単位／μｌ）＊
　　　　　　　　　０．５μｌＭＭｕＬＶ逆転写酵素（
２００単位／μｌ）＊＊　　　０．５μｌ＊：　Ｐｒｏ
ｍｅｇａ社 ＊＊：　Ｂｅｔｈｅｓｄａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ

【００２１】（３）ポリメラ−ゼ・
チェイン・リアクション（ＰＣＲ）上記工程（２）の反
応溶液２０μｌに以下の溶液を加えた。

【００２２】１０×ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒ　
　　　　　　　　　　　　　　　８μｌ センスプライマ−（１０　ｐｍｏｌ／μｌ）＊　　　　
　２μｌ滅菌蒸留水　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　６９．５μｌＴａｑ　ＤＮＡ　ポリ
メラ−ゼ（４単位／μｌ）＊＊０．５μｌ＊：　センス
プライマ−の配列 ５’−ＣＴＣＧＴＡＧＡＣＣＧＴＧＣＡＣＣＡＴＧ−３
’　（配列番号　３）Ｊａｐａｎ．　Ｊ．　Ｅｘｐ．　
Ｍｅｄ．，　６０　（１９９０）　１６７−１７７　参
照＊＊：　「Ｇｅｎｅ　ＡｍｐＴＭ」キット（宝酒造）

【００２３】ＰＣＲ反応は、 デナチュレ−ション工程　　：　９４℃　３０秒アニ−
リング工程　　　　　　　　：　５５℃　１分エクステ
ンション工程　　　　：　７２℃　１分を１サイクルと
して、３０サイクル行なった後、７２℃　１５分間の反
応を追加した　。

【００２４】（４）Ｓｅｃｏｎｄ　ＰＣＲ上記工程（３
）のＰＣＲ反応産物５μｌに以下の溶液を加えた。 １０×ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒ　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　１０μｌｄＮＴＰ（それぞ
れ１０ｍＭ）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　２μｌセンスプライマ−（１０　ｐｍｏｌ／μｌ）
＊　　　　　　　　　２μｌアンチセンスプライマ−（
１０　ｐｍｏｌ／μｌ）＊＊　　２μｌ滅菌蒸留水　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　７８．５μｌＴａｑ　ＤＮＡ　ポリメラ−ゼ＊＊＊
　　　　　　　　　　　　　　　　０．５μｌ

【００２
５】＊：　センスプライマ−の配列５’−ＡＣＣＡＡＡ
ＣＧＴＡＡＣＡＣＣＡＡＣＣＧ−３’　（配列番号　４
）Ｊａｐａｎ．　Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　６０　
（１９９０）　１６７−１７７　参照＊＊：　アンチセ
ンスプライマ−の配列５’−ＧＴＴＧＣＡＴＡＧＴＴＣ
ＡＣＧＣＣＧＴＣ−３’　（配列番号　５）Ｊａｐａｎ
．　Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　６０　（１９９０）
　１６７−１７７　参照＊＊＊：　工程（２）で用いた
ものと同じ

【００２６】ＰＣＲ反応は、 デナチュレ−ション工程　　：　９４℃　３０秒アニ−
リング工程　　　　　　　　：　５５℃　１分エクステ
ンション工程　　　　：　７２℃　１分を１サイクルと
して、３０サイクル行なった後、７２℃　１５分間の反
応を追加した　。

【００２７】（５）電気泳動 上記工程（４）のＰＣＲ反応産物６０μｌにブロモフェ
ノ−ルブル−／キシレンシア　ノ−ル／シュクロ−ス　
２０μｌを加え、低融点アガロ−スゲル（Ｓｅａ　Ｐｌ
ａｑｕｅ，　ＦＭＣ社）を用いて電気泳動した後、エチ
ジウムブロマイド染色し、二本鎖ＤＮＡを紫外線下で確
認した。同時に、サイズマ−カ−として、Ａｌｕ消化Ｐ
ＢＲ３２２（９０８，　６５９，　６５６，　５２１ｂ
ｐ断片を含む）を電気泳動し、それを参考にして目的の
長さに出た単一バンド　を切りだし、Ｓａｍｂｒｏｏｋ
らの方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ，　Ｃ
ｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ＨａｒｂｏｕｒＬａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ（ＣＳＨＬ）　Ｐｒｅｓｓ）に従い、ＤＮＡを回
収した。

【００２８】（６）クロ−ニング カイネ−ション（Ｋｉｎａｔｉｏｎ）反応上記工程（５
）で回収したＤＮＡをＴＥ緩衝液で０．２μｇ／μｌに
調製し、その１０μｌ　を以下の溶液と混合した。

【００２９】５×Ｋｉｎａｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒ＊　
　　　　　　　　４μｌＡＴＰ（５０　ｐｍｏｌ／μｌ
）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２μｌ滅菌蒸留水　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２μｌＴ
４ポリヌクレオチドキナ−ゼ（１０単位／μｌ）＊＊　
　　　２μｌ＊：　５×Ｋｉｎａｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅ
ｒの組成２５０ｍＭ　トリス−塩酸（ｐＨ　９．５）５
０ｍＭ　ＭｇＣｌ２ ２５ｍＭ　ＤＴＴ ２５％　グリセリン ＊＊：　Ｂｉｏ　Ｌａｂｓ社

【００３０】上記混合溶液を３７℃で３０分間反応させ
た後、Ｔ４ポリヌクレオチドキナ−ゼを２μｌ追加し、
更に３７℃で３０分間反応を行ないＤＮＡの５’末端を
リン酸化した。 反応液をフェノ−ル処理した後、エタノ−ル沈殿させた
。

【００３１】 ベクタ−へのライゲ−ション（ｌｉｇａｔｉｏｎ）反応
エタノ−ル沈殿で得られたＤＮＡ沈殿物をＴＥ緩衝液で
０．０５μｇ／μｌに調製し、その１μｌを以下の溶液
と混合した。

【００３２】 ５×ｌｉｇａｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒ＊　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２μｌＣＩＡＰ処理
したＳｍａＩ消化ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ　ＩＩ　ＳＫ
（＋）＊＊　　１μｌ滅菌蒸留水　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
μｌＴ４ＤＮＡリガ−ゼ（５単位／μｌ）　　　　　　
　　　　　　　　　　１μｌ＊：　５×ｌｉｇａｔｉｏ
ｎ　ｂｕｆｆｅｒの組成２５０ｍＭ　トリス−塩酸（ｐ
Ｈ　７．８）５０ｍＭ　ＭｇＣｌ２ ５０ｍＭ　ジチオトレイト−ル ２．５ｍＭ　ＡＴＰ ５００μｇ／ｍｌ　牛血清アルブミン

【００３３】＊＊：　Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社のｐＢｌ
ｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩ　ＳＫ（＋）をＳｍａＩで完全消
化した後、Ｓａｍｂｒｏｏｋら　（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
　ｃｌｏｎｉｎｇ，　ＣＳＨＬ　Ｐｒｅｓｓ）　の方法
に従って、ｃａｌｆ　ｉｎｔｅｓｔｉ−ｎａｌ　ａｌｋ
ａｌｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅにてｄｅｐｈｏｓ
ｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎしたものをＴＥ緩衝液にて０．
１μｇ／μｌに調製した。この混合液を１６℃で２４時
間反応させた。

【００３４】形質転換 Ｃａ＋＋処理した大腸菌ＸＬ−１−Ｂ（１００μｌ）と
上記ｌｉｇａｔｉｏｎ反応液（１μｌ）を混合し、氷中
０℃で３０分間静置した後、４０μｇ／ｍｌのＸ−ｇｅ
ｌ、４０μｇ／ｍｌのＩＰＴＧおよび５０μｇ／ｍｌの
アンピシリンを含有するＬ培地上で形質転換した。

【００３５】形質転換された白色のコロニ−をＬ培地５
ｍｌ中で一夜培養した。このうち１．５ｍｌを７０００
ｒｐｍで４０秒間遠心した。得られたペレットを１００
μｌのＳＴＥＴ緩衝液（８％シュクロ−ス、５％トライ
トンＸ−１００、５０ｍＭ　ＥＤＴＡ、５０ｍＭ　トリ
ス−塩酸（ｐＨ　８．０）　）に　懸濁した。これに１
０μｇ／μｌのライソザイムを１０μｌ加えた後４０秒
間煮沸した。これを等量のフェノ−ル／クロロホルム／
イソアミルアルコ−ル（２４：２４：１）で抽出　した
後、得られた上清に等量のイソプロパノ−ルを加え、−
２０℃で３０分間静置した。これを遠心（１５０００ｒ
ｐｍ、４℃、１０分間）後、得られたペレットを１００
μｌのＴＥ緩　衝液に懸濁した。この懸濁液１６μｌに
、２μｌの１０×Ｈｉｇｈ　ｂｕｆｆｅｒ　（５００ｍ
Ｍ　トリス−塩酸（ｐＨ　７．５）、１０００ｍＭ　Ｎ
ａＣｌ、１００ｍＭ　ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ　ジチオト
レイト−ル）、１μｌのＢａｍＨＩ（１２単位／μｌ）
、１μｌのＥｃｏＲＩ（１２単位／μｌ）を加え、３７
℃で１時間インキュベ　−トしてＢａｍＨＩとＥｃｏＲ
Ｉで二重消化した。

【００３６】この反応液２０μｌにブロモフェノ−ルブ
ル−／キシレンシアノ−ル／シュ　クロ−ス（５μｌ）
を加え、１．２％アガロ−スゲルを用いて電気泳動した
。サイズマ−カ−としてＡｌｕＩ消化ｐＢＲ３２２を用
いた。エチジウムブロミド染色後、紫外線下で、目的の
長さ付近にバンドのみえる陽性クロ−ンを得た。

【００３７】（７）シ−ケンシング 前記工程（６）で得られた陽性クロ−ンの１つであるＭ
２０のＤＮＡインサ−トの塩　基配列を、ジデオキシ鎖
終止法により決定した。決定された塩基配列を配列番号
１に示す。

【配列表】

【００３８】配列番号：　１ 配列の長さ：　４６７ 配列の型：　核酸 トポロジ−：　直鎖状 配列の種類：　他の核酸　　ウィルスＲＮＡ由来のｃＤ
ＮＡアンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：　Ｃ型肝炎ウィルス 配列 ＡＣＣＡＡＡＣＧＴＡ　ＡＣＡＣＣＡＡＣＣＧ　ＴＣＧ
ＣＣＣＡＣＡＧ　ＧＡＣＧＴＣＡＡＧＴ　ＴＣＣＣＧＧ
ＧＣＧＧ　ＴＧＧＴＣＡＧＡＴＣ　　　　　６０ＧＴＴ
ＧＧＴＧＧＡＧ　ＴＴＴＡＣＣＴＧＴＴ　ＧＣＣＧＣＧ
ＣＡＧＧ　ＧＧＣＣＣＣＡＧＧＴ　ＴＧＧＧＴＧＴＧＣ
Ｇ　ＣＧＣＧＡＣＴＡＧＧ　　　　１２０ＡＡＧＡＣＴ
ＴＣＣＧ　ＡＧＣＧＧＴＣＧＣＡ　ＡＣＣＴＣＧＴＧＧ
Ａ　ＡＧＧＣＧＡＣＡＡＣ　ＣＴＡＴＣＣＣＣＡＡ　Ｇ
ＧＣＴＣＧＣＣＧＧ　　　　１８０ＣＣＣＧＡＧＧＧＣ
Ａ　ＧＧＧＣＣＴＧＧＧＣ　ＴＣＡＧＣＣＣＧＧＧ　Ｔ
ＡＣＣＣＴＴＧＧＣ　ＣＣＣＴＣＴＡＴＧＧ　ＣＡＡＴ
ＧＡＧＧＧＴ　　　　２４０ＣＴＴＧＧＧＴＧＧＧ　Ｃ
ＡＧＧＡＴＧＧＣＴ　ＣＣＴＧＴＣＡＣＣＣ　ＣＧＡＧ
ＧＣＴＣＴＣ　ＧＧＣＣＴＡＧＴＴＧ　ＧＧＧＣＣＣＣ
ＡＣＴ　　　　３００ＧＡＣＣＣＣＣＧＧＣ　ＧＴＡＧ
ＧＴＣＧＣＧ　ＴＡＡＴＴＴＧＧＧＴ　ＡＡＧＧＴＣＡ
ＴＣＧ　ＡＴＡＣＣＣＴＣＡＣ　ＡＴＧＣＧＧＣＴＴＣ
　　　　３６０ＧＣＣＧＡＣＣＴＣＡ　ＴＧＧＧＧＴＡ
ＣＡＴ　ＴＣＣＧＣＴＣＧＴＣ　ＧＧＣＧＣＣＣＣＣＣ
　ＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣ　ＴＧＣＣＡＧＧＧＣＣ　　　
　４２０ＣＴＧＧＣＧＣＡＴＧ　ＧＣＧＴＣＣＧＧＧＴ
　ＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣ　ＧＧＣＧＴＧＡＡＣＴ　ＡＴ
ＧＣＡＡＣ　　　　　　　　　　　　　　　　　　４６
７

【００３９】配列番号：　２ 配列の長さ：　２０ 配列の型：　核酸 鎖の数：　一本鎖 トポロジ−：　直鎖状 配列の種類：　他の配列　　合成ＤＮＡアンチセンス：
Ｙｅｓ 配列 ＡＡＧＡＴＡＧＡＧＡ　ＡＡＧＡＧＣＡＡＣＣ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０

【００４０】配列番号：　３ 配列の長さ：　２０ 配列の型：　核酸 鎖の数：　一本鎖 トポロジ−：　直鎖状 配列の種類：　他の配列　　合成ＤＮＡアンチセンス：
Ｎｏ 配列 ＣＴＣＧＴＡＧＡＣＣ　ＧＴＧＣＡＣＣＡＴＧ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０

【００４１】配列番号：　４ 配列の長さ：　２０ 配列の型：　核酸 鎖の数：　一本鎖 トポロジ−：　直鎖状 配列の種類：　他の配列　　合成ＤＮＡアンチセンス：
Ｎｏ 配列 ＡＣＣＡＡＡＣＧＴＡ　ＡＣＡＣＣＡＡＣＣＧ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０

【００４２】配列番号：　５ 配列の長さ：　２０ 配列の型：　核酸 鎖の数：　一本鎖 トポロジ−：　直鎖状 配列の種類：　他の配列　　合成ＤＮＡアンチセンス：
Ｙｅｓ 配列

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　配列番号１に示されるＤＮＡ配列を有
   するＤＮＡ配列。
2. 【請求項２】　　配列番号１に示されるＤＮＡ配列であ
   る請求項１記載のＤＮＡ配列。