JPH0421698A - 環状テトラペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １１上立■亙豆！ 本発明は医薬の分野で有用であり、更に詳細には免疫担
当細胞であるマクロファージ及び多形核白血球に作用し
、腫瘍の増殖を宿主介在性に阻害し、又は感染性の疾患
、例えばウィルス性、細菌性若しくは真菌性の疾患に対
する感染防御効果を有し、又は免疫の関与する疾患、例
えば自己免疫疾患（ｔｃ斑性狼癒又は慢性関節リュウマ
チ等）の治療に効果を発揮する新規化合物、その製法及
びその用途に関する。

１来ｑ筑亘 免疫担当細胞、例えばマクロファージ及び多形核白血球
を活性化する作用を有する天然又は合成のテトラペプチ
ドであるタフトシン（Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒ。

−Ａｒｇ）は公知である［ニシオカら、ビオヒミカ・ニ
ド・ビオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　　
ｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ）　３１０巻、２
１７−２２９頁（１９７３年）参照］。この文献に見ら
れるように、タフトシンはその発見の初期に於て既にカ
ルボキシル末端側からカルボキシペプチダーゼによって
、またアミノ末端側からアミノペプチダーゼによって分
解を受けることが知られている。

カルボキシペプチダーゼに対して抵抗性を有するタフト
シン誘導体としては国際特許願ＰＣＴ／５Ｕ８０１００
６０号明細書に記載の化合物、スレオニル−シクロ（−
Ｎ’−リジル−プロリル−アルギニル−）なる環状トリ
ペプチド誘導体がある。

一方、アミンペプチダーゼ阻害剤の研究によって明らか
にされた知見［ニシザワら、ジャーナル・オブ・メデイ
シナル・ケミストリー（Ｊ、　ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈ
　ｅ　ｍ　ｉ　ｓ　ｔ　ｒ　ｙ　）　２０巻、５１０−
５１５頁（１９７７年）参照コをもとに、アミノペプチ
ダーゼに抵抗性を有するタフトシン類縁体が考案され、
欧州特許願第２９６０５９号明細書に記載されている。

上記のような酵素の働きによって、タフトシンは生体内
に於て速やかに分解を受けるので、別の方法としてポリ
タフトシン［Ｒ，サーキスら、インターナショナル・ジ
ャーナル・オブ・バイオケミストリー　（Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ）２２巻、１９３−１９５頁（１９９０年
）参照］などもその効果を持続させる目的で考案されて
いる。

が　・　よ−と　る 本発明が解決しようとする課題は、マクロファージ及び
多形核白血球の賞食能を強く活性化し、免疫不全症候群
に対して優れた治療作用を有する新規化合物を提供する
ことにある。

を　・　　　ための 本発明者らは、上記課題を解決するために、タフトシン
類縁体を合成し、それらのマクロファージに対する寅食
能活性化作用の検討を行なっていたが、構造と活性との
相関性を追究することにより、最早タフトシン雫縁体と
は見倣されない一般式［１］で表される環状テトラペプ
チドがマクロファージの貢食能を強く活性化し、免疫不
全症候群に対する薬剤として有用であることを見出し本
発明を完成した。

更に詳細には、本発明は一般式 Ｕ式中、Ａ及びＢはそれぞれ独立にアミノ基、モノ若し
くはジ低級アルキルアミノ基、アミジノ基又はグアニジ
ノ基を示し、ｎ及びｍはそれぞれ独立に３又は４を示し
、Ｒ１及びＲ２は同時に水素原子又は低級アルキル基を
示すか、又はいずれか一方が水素原子を示し、他方が水
酸基、低級アルキルオキシ基又は低級アルキル基を示す
か、或いは両者が一緒になって単結合を示し、またＲ３
及びＲ“は同様に、同時に水素原子又は低級アルキル基
を示すか、又はいずれか一方が水素原子を示し、他方が
水酸基、低級アルキルオキシ基又は低級アルキル基を示
すか、或いは両者が一緒になって単結合を示す］で表さ
れる環状テトラペプチド及びその医薬上許容される塩並
びにそれらの製造法及び用途に関するものである。

次に本明細書において用いられる用語及び略号の一味を
説明する。

皿■Ω脱工 「低級」なる語は、この語が付された基又は化合物の炭
素数が６個以下、好ましくは４個以下であることを意味
するために用いる。従って、低級アルキル基としては、
例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル
基、ブチル基、イソブチル基、５ｅｃ−ブチル基、ｍｌ
−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチ
ル基、ヘキシル基等の炭素数１〜６個の直鎖又は分岐状
のアルキル基が挙げられる。

低級アルキルオキシ基としては、例えばメトキシ基、エ
トキシ基、プロポキシ基、５ｅｃ−プロポキシ基、ブト
キシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基等の炭素
数１〜６個の直鎮又は分岐状のアルキルオキシ基が挙げ
られる。

び　　　の、。

虱ヱ　　　　　　　　　堅−号一例一豊一味ＤＣＣジシ
クロヘキンルーカルボソイミドＥＤＣ１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドＨＯＢ
ｔ　　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＤＭＦ　　Ｎ
、Ｎ−ジメチルホルムアミド次に、前記一般式［Ｉ］で
表される本発明化合物を更に具体的に開示するため、式
［Ｉ］に於て用いられる各種記号につき、その具体例を
挙げて更に詳細に説明する。

Ｒ’及びＲ２は同時に水素原子又は低級アルキル基を示
すか、又はいずれか一方が水素原子を示し、他方が水酸
基、低級アルキルオキシ基若しくは低級アルキル基を示
すか、或いは両者が一緒になって単結合を示し、またＲ
３及びＲ“は同様に、同時に水素原子又は低級アルキル
基を示すか、又はいずれか一方が水素原子を示し、他方
が水酸基、低級アルキルオキシ基又は低級アルキル基を
示すか、或いは両者が一緒になって単結合を示す。

これらの具体例としては、水素原子、水酸基、例えばメ
トキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキン基、ｔ
ｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペンチル
オキシ基、ヘキシルオキシ基若しくはイソへキシルオキ
シ基等の低級アルキルオキシ基、又は例えばメチル基、
エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、５
ｅｃ−ブチル基、ｔｙｔ−ブチル基、イソペンチル基、
ヘキシル基若しくはイソヘキシル基等の低級アルキル基
等が挙げられる。

また、両者が一緒になって単結合を示す場合には、これ
を有するアミノ酸は３．４−テヒドロブロリンである。

ｎ及びｍはそれぞれ独立に３又は４を示し、Ａ及びＢは
それぞれ独立にアミノ基、モノ若しくはジ低級アルキル
アミノ基、アミジノ基又はグアニジノ基を示す。従って
、ｎ又はｍが３の時には、Ａ又はＢを有するアミノ酸は
、例えばオルニチン、Ｈａメチルオルニチン、Ｎ６−シ
メチルオルニチン、５−アミジノ−２−アミノペンタン
酸、アルギニン等であることができ、ｎ又はｍが４の時
には、Ａ又はＢを有するアミノ酸は、例えばリジン、Ｎ
″−メチルリジン、Ｎ′−ジメチルリジン、６−アミジ
ノ−２−アミノへキサン酸、２−アミノ−６−ゲアニジ
ノヘキサン酸等であることができる。

次に、本発明化合物の製造法について説明する。

本発明化合物は、環状のテトラペプチドであって、これ
を構成するアミド結合は４箇所あるが、その縮合を行な
う箇所はいずれでも良いが、例えば一般式 ［式中、ＡＳＢ、　ｎ、　ｍ、　Ｒ’、　Ｒ２、Ｒ３及
びＲ４は第１請求項で定義したとおりの意味を有する］
で表される化合物又は必要に応じて化合物［ｎ］中の官
能基が保護された化合物Ｂ−［■］を縮合剤及び必要に
応じて塩基の存在下に反応させ、更に必要に応じて保護
基を除去することにより製造することができる。

化合物［１１］又はＢ−［］Ｉ］で表されるテトラペブ
チドの環化反応は、ペプチド化学の分野で広く知られた
カルボキシル基とアミノ基との反応である。従って化合
物［ｎｌ又はＢ−［１１］で表されるテトラペプチドの
環化（縮合）反応は、ペプチド化学で公知の方法、例え
ば反応に悪影響を及ぼさない溶媒中で、適当な縮合剤を
用いて行うことができ、また必要に応じて適当な塩基及
び／又はＮヒドロキシサクシンイミド又はｌ−ヒドロキ
シベンゾトリアシー゛ル等の縮合補助剤を用いて行われ
る。

縮合剤としては、例えばジシクロへキシルカルボジイミ
ド（ＤＣＣ）、ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノ
プロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）等のカルボジイミ
ド類が使用される。

縮合反応に用いられる有機溶媒としては、例えばエチル
エーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテ
ル類、例えば酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類、
例えばアセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、例
えば塩化メチレン、クロロホルム等の塩化炭化水素類、
例えばジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、
アセトニトリル等の非プロトン性極性溶媒、又はこれら
の混合溶媒が挙げられる。

適切な塩基の例としては、例えば炭酸水素ナトリウム、
酸化マグネシウム等の無機塩基又はトリエチルアミン、
Ｎ−メチルモルホリン等の有機塩基が挙げられる。

反応試剤の使用量は化合物［ｎｌ又はＢ−［ＩＩ］に対
して、塩基は、通常、触媒量から２モル当量であるが、
はぼ等量を好適に用いうる。縮合剤は、通常、少過剰量
用いられる。

反応温度は、通常、−５０〜５０℃であり、必要に応じ
てこれ以上又はこれ以下の温度を選択することもできる
。

反応時間は、通常、３０分〜２日間の範囲であるが、必
要に応じて、これ以上又はこれ以下の時間で行われる。

上記反応条件により、縮合反応を行ったのち、又は必要
に応じて保護基を除去したのちに、有機合成化学の分野
に於ける公知の方法、例えば溶媒抽出、再結晶、クロマ
トグラフィー、イオン交換樹脂を用いる方法等により目
的物を精製１０ことができる。

なお、原料化合物に於ける官能基の保護はペプチド化学
に於てよ（用いられる保護基を用いればよいが、例えば
アミノ基の保護基としてはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニ
ル基又はベンジルオキシカルボニル基等が好適に用いら
れ、アミジノ基又はグアニジノ基の保護基としてはメシ
チルスルホニル基等が好適に用いられ、水酸基の保護基
としてはテトラヒドロピラニル基、ｍｌ−ブトキシ基、
ベンジル基、アルカノイル基等が好適に用いられ、また
、カルボキシル基の保護はアルキル若しくはベンジルエ
ステルの形で好適に行うことができる。また、保護基の
除去はパラジウム−炭素、パラジウム黒等を用いる触媒
水素添加、酢酸中の臭化水素酸、トリフルオロ酢酸、ジ
オキサン、テトラヒドロフラン等の有機溶媒中のｐ−ト
ルエンスルホン酸、塩化水素酸による酸加水分解等のペ
プチド化学に於て常用される方法によって行うことがで
きる。

また、化合物［Ｉ［］又はＢ−［Ｉ［］の環化縮合反応
は、混合酸無水物法を用いて行うこともできる。

該縮合反応は、化合物［Ｉ［］又はＢ−［Ｉｒ］に適当
な溶媒中、塩基の存在下にエチルクロロホルメイト又は
イソブチルクロロホルメイト等のクロロホルメイト類を
反応させて混合酸無水物をつくることによって縮合させ
る方法である。

この際に使用し得る溶媒及び塩基としては前記のＤＣＣ
又はＥＤＣ等のカルボジイミド系の縮合剤を用いる方法
と同様のものを用いることができる。

反応に用いる塩基の使用量は、化合物［Ｉ［］又はＢ−
［１１］に対して、通常、１．０〜２０モルを使用する
。

上記環化縮合反応ののち、又は必要に応じて保護基を除
去したのち、有機合成化学の分野に於ける公知の方法、
例えば溶媒抽出、再結晶、クロマトグラフィー、イオン
交換樹脂を用いる方法等により目的物を精製することが
できる。

更に具体的に説明すると、前記したように、−数式［Ｉ
］で表される化合物は、化合物［ＩＩ］又は化合物［１
１］中のＡ及びＢで示されるアミノ基、モジ低級アルキ
ルアミノ基、アミジノ基若しくはグアニジノ基、又はＲ
１，Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうち少なくとも１個が水酸基
の場合１′：於けるそれらの基を必要に応じて保護した
化合物Ｂ−［ｆｆ］を通常のペプチド縮合反応によって
環化させることによって容易に製造することができ、ま
た、化合物［■］及びＢ−［ｆｆ］はテトラペプチドで
あり、それらはペプチド合成の分野に於ける公知の方法
で容易に製造することができる。

即ち、化合物［ｎｌ及びＢ−［ＩＩ’ｌはその構成アミ
ノ酸を必要に応じて適当な保護基で保護したのちに、液
相法又は固相法により順次縮合させることによって得ら
れる。

一般式［Ｉ］により表される本発明の化合物は環状テト
ラペプチドであって、これを構成するアミド結合は４箇
所にあるが、その縮合を行う箇所は必要に応じいずれで
も良く、更に、化合物［ｎｌ又はこれに保護基を導入し
た化合物Ｂ−［ｎｌに関してもその構造中に含まれるペ
プチド結合を形成させる順序はいずれでも良い。化合物
［１１］又はＢ［ｎｌを製造するための縮合反応、脱保
護及び縮合生成物の精製は、化合物［ＩＩ］又はＢ−［
１１］から化合物［Ｉ］を得る方法の項において記載し
た方法と同様に行うことができるが、例えば化合物［ｎ
ｌ又はＢ−［ｎｌは下記の方法で製造することができる
。

まず、−数式 ［式中、Ａ１は必要に応じて保護されていても良いアミ
ノ基、モノ若しくはジ低級アルキルアミノ基、アミジノ
基又はグアニジノ基を示し、Ｐはアミノ基の保護基を示
し、Ｐｌはカルボキシル基の保護基を示し、ｎは前記の
意味を有する。但し、Ｐを除去できる条件ではＡＩ及び
Ｐｌに悪影響を及ぼさず、かつＰｌを除去できる条件で
はＡ１に悪影響を及ぼさないことを条件とするコで表さ
れる化合物を、例えばＰがベンジルオキシカルボニル基
の場合は適当な触媒としてパラジウム黒の存在下に水素
添加反応を行って、アミノ基の保護基Ｐを除去し、−数
式［式中、Ａ１、Ｐｌ及びｎは前記の意味を有するコで
表される化合物を得る。ここで、Ａ１における保護基と
しては例えば−一ブトキシカルボニル基又はメンチルス
ルホニル基が、Ｐで表される保護基としてはベンジルオ
キシカルボニル基又はｔｅｒｔ−カルボニルオキシ基が
、Ｐｌで表される保護基としてはメチル基が好適に用い
られる。

次に化合物［■コに一般式 ［式中、２はイミノ基の保護基を示し、Ｒ３及びＲ４は
前記の意味を有する。但し、Ｐｌを除去できる条件では
Ａ１及びｒに悪影響を及ぼさないことを条件とする］で
表される化合物又はＲ３若しくはＲ４が水酸基である場
合には、必要に応じてこれを保護した化合物を縮合させ
て、−数式 ［式中、Ａ１、Ｐ’、　Ｐ”、　Ｒ”、Ｒ４及びｎは前
記の意味を有するコで表される化合物又はＲ３若しくは
Ｒ′が水酸基である場合にはＲ３若しくはＲ４を保護し
た化合物を製造することができる。

この際に使用し得る縮合条件としては前記の化合物［Ｕ
］又はＢ−［ＩＩ］の環化縮合反応と同様の条件を用い
ることができる。またピロリジン環のイミノ基の保護基
としてはベンジルオキシカルボニル基が好適に使用され
る。

次に化合物［ＶＩ］に於けるカルボキシル基の保護基を
、例えばＰｌがメチル基の場合は水酸化カリウムのよう
なアルカリの存在下に除去し、カルボキシル基の脱保護
された、一般式 ［式中、Ａ１、？、Ｒ３、Ｒ４及びｎは前記の意味を有
する］で表される化合物を得る。

また、−数式 ｃ式中、Ｂ１は必要に応じて保護されていても良いアミ
ノ基、モノ若しくはジ低級アルキルアミノ基、アミジノ
基又はグアニジノ基を示し、ｙはカルボキシル基の保護
基を示し、ｍは前記の意味を有する］で表される化合物
と、−数式 ［式中、？はイミノ基の保護基を示し、Ｒ１及びＲ２は
前記の意味を有する］で表される化合物又はＲ１若しく
はＲ２が水酸基である場合にはＲ１若しくはＲ２を保護
した化合物Ｂ−［ＩＸ］とを縮合させて、−数式［式中
、Ｂ１、Ｐ’、　Ｐ’ＳＲ’、Ｒ２及びｍは前記に意味
を有する。但し、？を除去できる条件ではＢ１及びｙに
悪影響を及ぼさないことを条件とする］で表される化合
物を製造することができる。ここで、Ｂ１における保護
基としては例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基若し
くはメシチルスルホニル基が、Ｐで表される保護基とし
てはベンジル基が、Ｒ１若しくはＲ２で表される基が水
酸基である場合にはアセチル基が、ｒで表される基には
ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基がそれぞれ保護基とし
て好適に使用される。

次に一般式［Ｘ］で表される化合物の保護基Ｐを、例え
ば保護基がｔｔｙｒｔ−ブトキシカルボニル基である場
合には、Ｐ−トルエンスルホン酸等の酸触媒を用いて除
去し、こうして得られる一般式 ［式中、Ｂ１、Ｐ”、　Ｒ’、　Ｒ”及びｍは前記の意
味を有する］で表される化合物を製造する。

次に一般式［ＸＩ］で表される化合物と、−数式［■］
で表される化合物とを縮合させて一般式り式中、Ａ１、
Ｂ１、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｐ、Ｐ、ｎ及びｍは前
記の意味を有するコで表される化合物を製造する。

次に、化合物［Ｘ［！］における保護基？及びＦを、例
えばｙがベンジルオキシカルボニル基である場合にはパ
ラジウム黒等を触媒として用い、水素添加を行うことに
より除去する。このときカルボキシル基の保護基Ｐとし
てベンジル基を使用した場合にはＢ２の除去と同時に２
を除去することができ、次の環化反応にそのまま付すこ
とができるという意味から有利であり、このようにして
−数式［１］で表される環状テトラペプチドを製造する
ために中間体となる一般式［Ｉ［］で表され′る化合物
又は化合物［Ｉ［］中の官能基を必要に応じて保護した
化合物Ｂ−［ＩＩ］を製造することができる。

また、本発明に使用する出発原料化合物は、醗酵法又は
化学合成法によって得られる公知のアミノ酸、天然のペ
プチド若しくは蛋白質の加水分解によって得られるアミ
ノ酸である。

上記のようにして得られる一般式［Ｉ］で表される化合
物は、原料の選択により単独の立体異性体として、又は
立体異性体の混合物として得られるが、本発明は両者を
包含するものである。なお、立体異性体の混合物は、公
知の方法により、分離・分割することも可能である。更
に、本発明には、上記方法で得られる化合物の医薬上許
容される塩も包含される。このような塩としては、塩酸
、臭化水素酸、硫酸、燐酸等の無機酸の塩又は酢酸、ス
ルホン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、クエン酸、マ
レイン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸及
びグリコール酸等の有機酸及び酸性アミノ酸の塩を挙げ
ることができる。

本発明の一般式［Ｉ］で表される化合物は、菟疫担当細
胞である、例えばマクロファージを活性化することがで
きる。このことを立証するために下記の方法によってそ
の活性化能を測定した。

測定方法： ヒツジ赤血球を外的異物として、マウス腹腔マクロファ
ージの責食能を測定した。

６週令のメスＣＤＦ、マウスの腹腔内に１０％プロテオ
ースペブトン（Ｄｉｆｃｏ社製）を１．５ｍｌ注射し、
３日後に腹腔中をハンクス液（ＨＢＳＳ、日水社製）に
て洗浄し、腹腔内細胞を回収した。回収した細胞を１０
００ｒ％ｘ、　１０分間で遠心分離した後、細胞数４×
１σ個／ｍｌとなるようにｌＯ％牛脂児血清を含むＲＰ
ＭＩ−１６４０培地（日水社製）に分散させ、０．５ｒ
ｒＬｌずつ２４穴プラスチツクプレート（直径１６ｍｍ
）の各ウェルに加え、５％ＣＯ２，３７°Ｃの条件下に
３時間加温して、マクロファージをプレートに吸着させ
たのち、非吸着細胞をＨＢＳＳで洗浄除去し、１０％牛
脂児血清を含むＲＰＭＴ−１６４０培地を加えた。次い
で、１０％牛脂児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地に
溶解した被験ペプチドを加え、３７℃、１５分間加温し
たのち、ウサギの抗ヒツジ赤血球血清で処理したヒツジ
赤血球（ＳＲＢＣ）　１０’個ずつを各ウェルに加えて
、３７°０１４５分間加温した。そして、０．８３％塩
化アンモニウムを含む１７ｍＭ）リス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，６）によって、マクロファージに賞食されなかっ
た５ＲＢＣを溶血、除去し、０．５％グルタルアルデヒ
ドを含むＰＢＳ　（リン酸緩衝生理的食塩水）で細胞を
固定化して、顕微鏡カメラにより撮影し、５ＲＢＣを寅
食しているマクロファージの割合を計数した。ペプチド
のマクロファージに対する寅食能の活性化作用は、ペプ
チドを添加しなかった場合の賞食能を１００として表し
た。その結果を第１表に示す・なお、参考化合物として
タフトシンのマクロファージに対する活性化能を比較試
験した。

（以下余白） 第 表 〈実 験１〉 く実 験２〉 第１表に示したように、参考化合物であるタフトシンの
有効濃度領域は狭（、その本試験に於ける至適濃度０．
０１５Ｎ／ｍ／に於てＴ／Ｃ１３２％を示した。一方、
実施例１の化合物はマクロファージを活性化できる濃度
領域がタフトシンよりも広く、例えば０．０５ｐｇ／ｍ
ｌに於てＴ／Ｃ１３８％と、タフトシンの至適濃度にお
ける活性とほぼ同等の活性を示し、更に容量を増すこと
により、例えば０．１５μｇ／−に於てＴ／Ｃ１９８％
　とタフトシンでは得られない高い活性を示した。

上記のように、本発明の一般式［Ｉ］で表される化合物
の、マウスの腹腔より採取したマクロファージに対する
試験管内活性化作用を貢食作用を指標にして検討するこ
とにより、本発明の化合物はタフトシンよりも遥かに強
いマクロファージ活性化作用を有する物質であることが
証明された。かつ、その活性化は標的細胞であるマクロ
ファージに対する直接作用であることが証明された。こ
のことは免疫不全症候群に対して用いられる本発明の化
合物の作用機序のひとつを明確にしたという意味で重要
である。

本発明化合物を、抗腫瘍剤を含む、免疫不全症候群に対
する薬剤として使用する際の投与形態としては各種の形
態が選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤
若しくは液剤等の経口剤、又は例えば溶液若しくは懸濁
液等の殺菌した液状の非経口剤が挙げられる。

固体の製剤はそのまま錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は粉
氷の形態として製造することもできるが、適当な添加物
を使用して製造することもできる。そのような添加物と
しては、例えば乳糖若しくはブドウ糖等の糖類、例えば
トウモロコシ、小麦若しくは米等の澱粉類、例えばステ
アリン酸等の脂肪酸、例えばメタケイ酸アルミン酸マグ
ネシウム若しくは無水リン酸カルシウム等の無機塩、例
えばポリビニルピロリドン若しくはポリアルキレングリ
コール等の合成高分子、例えばステアリン酸カルシウム
若しくはステアリン酸マグネシウム等の脂肪酸塩、例え
ばステアリルアルコール若しくはベンジルアルコール等
のアルコール類、例えばメチルセルロース、カルボキシ
メチルセルロース、エチルセルロース若しくはヒドロキ
シプロピルメチルセルロース等の合成セルロース誘導体
、その他、水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴ
ム等、通常用いられる添加物が挙げられる。

これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉末等の固形製
剤は一般的には０．１〜１００重量％、好ましくは５〜
１００重量％の有効成分を含む。

液状製剤は、水、アルコール類又は例えば大豆油、ピー
ナツ油若しくはゴマ油等の植物由来の油等液状製剤にお
いて通常用いられる適当な添加物を使用し、懸濁液、シ
ロップ剤若しくは注射剤等の形態として製造される。

特に、非経口的に筋肉内注射、静脈内注射又は皮下注射
で投与する場合の適当な溶剤としては、例えば注射用蒸
留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉内注射用）、生理食
塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈内注射用液体
（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム等の水溶液）
若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）等、
又はこれらの混合溶液が挙げられる。

また、これらの注射剤は予め溶解したものの他、粉末の
まま或いは適当な添加物を加えたものを用時溶解する形
態もとり得る。これらの注射液は、通常０．１〜１０重
量％、好ましくは１〜５重量％の有効成分を含む。

また、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤等の液剤は、０
５〜１０重量％の有効成分を含む。

本発明の化合物の実際に好ましい投与量は、使用される
化合物の種類、配合された組成物の種類、適用頻度及び
治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍によって変化するこ
とに注意すべきである。例えば、１日当りの成人１人当
りの投与量は、経口投与の場合、１ないし５００ｒｒｕ
Ｊであり、非経口投与、好ましくは静脈内注射の場合、
１日当り工ないし１００ｍｇである。なお、投与回数は
投与方法及び症状により異なるが、１回ないし５回であ
る。

また、隔日投与、隅々日投与などの間歇投与方法も用い
ることができる。

以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが
、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない
。

実施例１ （１）　Ｎ−１ｅｎ−ブトキシカルボニル−し−プロリ
ル−Ｎ′メシチルスルホニル−Ｌ−アルギニン　ベンジ
ルエステル （ａ）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ′−メシ
チルスルホニル−し−アルギニン・酢酸エチル・−水和
物４７９ｇをＤＭＦ　７ｍ／に溶解し、炭酸水素ナトリ
ウム１．８４ｇとベンジルプロミド１．７ｍ／を加えて
室温で終夜撹拌する。反応液に酢酸エチルを加えて希釈
し、水、飽和食塩水で洗浄する。無水硫酸ナトリウムで
乾燥してから減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（牛−ゼルゲル６０゜５０ｇ、
タロロホルムーメタノール−２０＝１で溶出）で精製し
、Ｎ−１ｃｒｔ−ブトキンカルボニル−Ｎ′−メチルス
ルホニル−Ｌ−アルギニンベンジルエステル４．６６＋
７を無色油状物として得る。

Ｒｆ値＋　　０．３４　（りｏＯｔルム：メタ／−ル＝
２０：１）（ｂ）　　（ａ）で得られる化合物４．６６
９をンクロロメタン２０ｒｒＬｌに溶解し、ｐ−ｈルエ
ンスルホン酸・−水和物６．５ｇを水冷下に加え、室温
に戻して３時間撹拌する。反応液に炭酸水素ナトリウム
水溶液を加えて中和後酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル
層を水、飽和食塩水で洗浄する。無水硫酸ナトリウムで
乾燥し減圧下で溶媒を留去し、Ｎ“−メシチルスルホニ
ル−Ｌ−アルギニンベンジルエステル３．７２９を淡黄
色油状物として得る。

Ｒｆ値：　　０．３７　（クロロホルム：メタノール（
ｃ）　　Ｎ−ｔａｒｔ−ブトキシカルボニル−し−プロ
リン１．７７ｇをＤＭＦ　６ｍｌに溶解し、水冷下、Ｈ
ＯＢｔ−Ｈ２Ｏ２．２８ｆ７。

ＤＣＣｌ．７４ｇと（ｂ）　テ得られる化合物３．７２
（７　（７）　ＤＭＦ溶液６ｒｒ＋７を加え、室温に戻
して終夜撹拌する。不溶物を濾去し、濾液を酢酸エチル
で希釈し、ＩＮ塩酸、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液、水、飽和食塩水で洗浄する。無水硫酸マグネシウム
で乾燥し、減圧下で溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（キーゼルゲル６０、５０ｇ１
クロロホルム：メタノール＝５０：１で溶出）で精製し
、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−し−プロリル−
Ｎ″メシチルスルホニルし−アルギニンベンジルエステ
ル５．２６ｇを無色アモルファスとして得る。

Ｒｆ値：　　０．４０　（クロロホルム・メタノール＝
２０：１）（２）　Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
−し−プロリル−Ｎ″−メシチルスルホニル−し−アル
ギニル−し−プロリル−Ｎ″−メジギルスルホニル−し
−アルギニンベンジルエステル （ａ）　　（１）で得られる化合物６４．０ｍｇをメタ
ノール０、６ｍｌに溶解し、パラジウム黒を加えて常温
常圧下で水素添加する。１時間撹拌後、触媒を濾去し、
濾液を濃縮して、Ｎ−ｔｍｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ
−プロリル−Ｎ″−メシチルスルボニル−Ｌ−アルギニ
ン５５、Ｏｍｇを白色固体゛として得る。

Ｒｆ値：　　０．０３　（酢酸エチル：メタノール＝２
ｏ：１）（ｂ）　　（１）で得られる化合物６　６　、
　６　ｍｇをジクロロメタン０．５ｍ／に溶解し、トリ
フルオロ酢酸０．５ｍｌを加えて室温で３０分間撹拌す
る。反応液から減圧下で試薬と溶媒を留去し、Ｌ−プロ
リル−Ｎ″−メシチルスルホニル−Ｌ−アルギニンベン
ジルエステル・トリフＡｔオフ酢酸塩６　７　、　７　
ｍｇを白色固体として得る。

Ｒｆ値：　　０．０７　（酢酸ｘｆｋ　：　メタ／　−
ル＝　２０　：　１）（ｃ）　　（ａ）で得られる化合
物５２．７ｍｇを無水ＤＭＦＯ．２ｍｌ＋．：溶解し、
−　１　０　’Ｃ撹拌下、ＨＯＢｔ−Ｈ２Ｏ　１８．９
ｍｇとＤ　Ｃ　Ｃ　２　５　、　５　ｍｇを加え、つツ
イテ（ｂ）テ得うれる化合物６　７　、　７　ｍｇをト
リエチルアミン１４ｄで中和したＤＭＦ溶液０．３ｍ／
を加える。−１０　’Ｃで２時間撹拌し、室温にもどし
て終夜撹拌する。反応液から不溶物を濾去し、濾液を酢
酸エチルで希釈し、５％硫酸水素カリウム水溶液、４％
炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄する
。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去し
、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（キーゼ
ルゲル６０、５ｇ１゛酢酸エチル：メタノール＝　１０
　＋　１）にて精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボ
ニル−し−プロリル−Ｎ′−メシチルスルホニル＝し一
アルギニルーＬープロリルーＮ″−メシチルスルホニル
−Ｌ−アルギニンベンシルエステル７　０　、　６　ｍ
ｇを白色固体として得る。

Ｒｆ値：　　０．２０　（酢酸エチル：メタノール＝　
２０　：　１）（３）シクロ（−Ｌ−プロリル−し−ア
ルギニル−し−プロリル−し−アルギニル−）・二酢酸
塩（ａ）　　（２）で得られる化合物６６、６ｍ（７を
（２）の（ａ）と同様の操作を行い、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブ
トキシカルボニル−し−プロリル−Ｎ″−メシチルスル
ホニル−し−アルギニル−し−プロリル−Ｎ”−メシチ
ルスルホニル−し−アルギニン６　０　、　７　ｍｇを
白色固体として得る。

Ｒｆ値：　　０．１９’（酢酸エチル：メタノール：酢
酸＝１０：５：０．１）（ｂ）　　（ａ）で得ら′れる
化合物５７ｍ（７を（２）　ノ（ｂ）と同様の操作を行
い、Ｌ−プロリル−Ｎ”−メシチルスルホニル−し−ア
ルギニル−し−プロリル−Ｎ″−メシチルスルホニル−
し−アルギニン・トリフルオロ酢酸塩５１．２ｍｇを白
色固体として得る。

Ｒｆ値：　　０．１０　（酢酸エチル：メタノール：酢
酸＝８：４：０．１）（ｃ）　ＨＯＢｔ−Ｈ２Ｏ　　１
３．２ｍｇ（！：　ＥＤＣ−ＨＣＩ　１７．０ｍｇを乾
燥ＤＭＦ　２．４ｍｌに溶解し、０℃撹拌下、（ｂ）で
得られる化合物５１．２ｍ（７をトリエチルアミン８Ｉ
ｉＩで中和し、ＤＭＦ溶液１４．６ｍｌとしたものを３
０分にわたり滴下する。室温にもどして終夜撹拌し、反
応液を減圧下で濃縮する。残渣を酢酸エチルで希釈し、
４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄
する。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留
去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（キ
ーゼルゲル６０，　３．５ｇ，酢酸エチル・メタノール
＝４・ｌ）により精製し、シクロ（−Ｌ−プロリル−Ｎ
″−）゛ツキ＋Ｌ　７　１１・＋−　＋＋・−１　−’
？　＋１ギニルーし一プロリルーＮ”−メシチルスルホ
ニル−し−アルギニル−）　２８．８ｍｇを白色固体と
して得る。

Ｒｆ値：　６．２５　（酢酸エチル：メタノール＝５：
１）（ｄ）　　（ｃ）で得られる化合物２５．１ｍｇに
メタンスルホン酸０．２５ｍ／とアニソール１４ｍを加
え、室温で３時間撹拌する。反応液に水を加えてからエ
ーテルを加えて、有機物を除去する。水層は、ダウエッ
クス１−Ｘ２　（５０−１００メツシユ、酢酸型）　５
０ｒｒＬｌを通過させ、つづいて水で洗浄する。生成物
の存在する画分を集め、減圧下で水を留去する。残渣を
クロロホルム−エーテルで固体化させ、溶媒を留去し、
シクロ（−Ｌ−プロリル−し−アルギニル−し−プロリ
ル−し−アルギニル−）二酢酸塩１９．６ｍｇを白色粉
末として得る。

ＦＡＢ−ＭＳ　（ｍ／ｚ）　：　５０７　［Ｍ　＋　Ｈ
］”ＩＲν雰：　３３５８．２９６８．１６５６．１５
６３．１４１３実施例２ （１）　＃−ベンンルオキシカルポニルーＬ−プロリル
−Ｎ“−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−し−リジン（
ａ）　Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ’−１ｅｒｔ
−ブトキシカルボニル−し−リジン４４７．５ｍｇをＤ
ＭＦ１ｍｊ！に溶解し、炭酸水素ナトリウム０．３０ｑ
、ヨウ化メチル０．１１ｒｒＬｌを加え、遮光して室温
で終夜撹拌する。

反応液から無機物を濾去し、濾液を酢酸エチルで希釈し
て、１０％硫酸水素ナトリウム水溶液、飽和炭酸水素ナ
トリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄する。無水硫酸
マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去し、残渣をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（キーゼルゲル６０
．１０ｇ、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝　１　：　１）
で精製し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ’−１ｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニル−し−リジンメチルエステル
４６３．９ｍ（７を無色油状物として得る。

Ｒｆ値＋　０．２７　（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２
：１）（ｂ）　　（ａ）で得られる化合物４６３　ｍｇ
をエタノール１ｒｒＬｌに溶解し、パラジウム黒を加え
て常温常圧下で水素添加する。反応液から触媒を濾去し
、濾液を減圧下で留去して、Ｎ’−１ｅｒｔ−ブトキシ
カルボニル−し−リジン　メチルエステル３０６ｍｅｔ
を無色油状物として得る。

Ｒｆ値：　　０．０３　（クロロホルム：メタノール＝
　１０　：　１）（ｃ）　　Ｎ−ベンジルオキシ−Ｌ−
プロリン２８９　ｍｇをＤＭＦＯ，６ｍｇに溶解し、０
℃撹拌下、ＨＯＢｔ−ＨｚＯＯ，１９ｇ、ＤＣＣ０，２
７９を加え、つづいて（ｂ）で得られる化合物３０６ｍ
ｇのＤＭＦ溶液０．８ｒｒＬｌを加える。室温にもどし
て終夜撹拌し、反応液から不溶物を濾去する。濾液を酢
酸エチルで希釈し、ＩＮ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム
水溶液、水、飽和食塩水で順次洗浄する。無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去し、残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（キーゼルゲル６０．
１５ｑ１クロロホルム：メタノール＝　５０　：　１）
で精製し、Ｎ−ベンジルオキシ−し−プロリル−Ｎ’−
ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−し−リジン　メチルエ
ステル５２２　ｍｇを無色油状物として得る。

Ｒｆ値：　０．１１　（ｙ＋−ヘキサン：酢酸エチル＝
　１　：　１）（ｄ）　　（ｃ）で得られる化合物２８
９ｍｇをエタノール２Ｔｎｌに溶解し、ＩＮ水酸化カリ
ウムエタノ−ルー−Ｆｌ／／Ｑ　　ＩＳ　ｍｍ　Ｉ　７
Ｆｉｍ／　４　ｎ　”（’、で加λ５室温にもどして２
時間撹拌する。反応液を０℃に冷却し、ＩＮ塩酸をｐＨ
２となるまで加える。酢酸エチルで抽出し、水、飽和食
塩水で洗浄する。無水硫酸マグネンウムで乾燥し、減圧
下で溶媒を留去し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ
−プロリル−Ｎ”−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−し
−リジン２７０　ｍｇを白色固体として得る。

Ｒｆ値：　　０．０４　（クロロホルム：メタノール＝
　１０　：　１）（２）Ｌ−プロリル−Ｎ“−１ｒ−ブ
トキシカルボニルーしリジル−Ｌ−プロリル−Ｎ″−メ
シチルスルホニル−し−アルギニン （ａ）　実施例１の（１）で得られる化合物３．　ｌ　
９Ｑをジクロロメタン３０ｒｒＬｌに溶解し、ＯｏＣで
ｐ−トルエンスルホン酸・−水和物３７７ｇを加え、室
温にもどして４時間撹拌する。反応液を酢酸エチルで希
釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水
で洗浄する。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶
媒を留去し、Ｌ−プロリル−Ｎ″−メシチルスルホニル
−Ｌ−アルギニンベンジルエステル２２０ｇをＲｆ値・
　０．０７　（クロロホルム、メタノール＝　１０　＋
　１）（ｂ）　　（ａ）で得られる化合物３０４　、２
　ｍｇと（１）で得られる化合物２６８．７ｍｇを（１
）の（ｃ）と同様にＤＣＣ−ＨＯＢｔ法でカップリング
し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−し−プロリル−Ｎ
“−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−し−リジル−し−
プロリル−Ｎ″−メシチルスルホニルＬ−アルギニンベ
ンジルエステル４９０．５ｍｇを無色アモルファスとし
て得る。

Ｒｆ値：　　０．４４　（クロロホルム：メタノール＝
　１０　：　１）（ｃ）　　（ｂ）で得られる化合物１
９７．５ｍｇを（１）の（ｂ）と同様の操作を行い、Ｌ
−プロリル−Ｎ’−１ｅｒｔ−ブトキシカルボニル−し
−リジル−し−プロリル−Ｎ″′−メシチルスルホニル
−Ｌ−アルギニン１５３．５ｍｇを白色固体として得る
。

Ｒｆ値：　　０．３５　（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝
４：１：１）（３）シクロ（−Ｌ−プロリル−し−リジ
ル−Ｌ−プロリル−し−アルギニル−）・二酢酸塩 （ａ）　ＨＯＢｔ　−Ｈ２Ｏ４９，４ｒｒ＋ｇとＥＤＣ
−ＨＣｌ５７．８ｍｇをＤＭＦ５ｒｒＬｌに溶解し、０
°Ｃで（２）で得られる化合物１５３ｍ（７のＤＭＦ溶
液２０ｒｒＬｌを１．５時間にわたって滴下する。室温
にもどして終夜撹拌し、反応液を減圧下で濃縮する。残
渣を酢酸エチルで希釈し、ＩＮ塩酸、飽和炭酸水素ナト
リウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄する。無水硫酸マ
グネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去し、残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（キーゼルゲル６０．
１０ｇ１クロロホルム：メタノール＝３０：１→１０　
：　１）で精製し、シクロ（−Ｌ−プロリル−Ｎ“−１
ｅｒｔ−ブトキシカルボニル−゛Ｌ−リジルーし一プロ
リルーＮ″−メシチルスルホニル−し−アルギニル−）
　９４．６ｍｇを白色固体として得る。

Ｒｆ値：　　０．３０　（クロロホルム：メタノール＝
　１０　：　１）（ｂ）　　（ａ）で得られる化合物９
１．７ｍｇにメタンスルホン酸０．８ｙｒＬｌとアニソ
ール０．０５ｍ１を加え、室温で３時間撹拌する。エー
テルを加えて有機物を除去し、水を少量加えて水層をダ
ウエックス１−Ｘ２　（５０−１００メツシユ、酢酸型
、１００　ｍｌ　）を通過させ、水で洗浄する。通過液
を集めて減圧下で水を留去し、残渣を少量のメタノール
に溶解し、セファデックスＬＨ−２０（φ１．２ｃｍ　
ｘ　１００ｃｍ）にのせて、メタノールで溶出させる。

生成物の存在する画分を集め、減圧下溶媒を留去し、シ
クロ（−Ｌ−プロリル−し−リジル−し−プロリル−し
−アルギニル−）・二酢酸塩５００ｍｇを白色粉末とし
て得る。

ＦＡＢ−ＭＳ　（ｍ／ｚ）　：　４７９　［Ｍ　＋　Ｈ
］”ＩＲνこ：　３４１８．２９６８．１６４１．１５
５４．１４１３Ｒ１口裏九！ 本発明化合物は、免疫担当細胞を活性化する作用を有し
、癌、感染性疾患及び自己免疫疾患の治療等の医療の分
野における利用が期待される。

特許出願人　　萬有製薬株式会社

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼［ I ］ ［式中、Ａ及びＢはそれぞれ独立にアミノ基、モノ若し
   くはジ低級アルキルアミノ基、アミジノ基又はグアニジ
   ノ基を示し、ｎ及びｍはそれぞれ独立に３又は４を示し
   、Ｒ＾１及びＲ＾２は同時に水素原子又は低級アルキル
   基を示すか、又はいずれか一方が水素原子を示し、他方
   が水酸基、低級アルキルオキシ基又は低級アルキル基を
   示すか、或いは両者が一緒になって単結合を示し、また
   Ｒ＾３びＲ＾４は同様に、同時に水素原子又は低級アル
   キル基を示すか、又はいずれか一方が水素原子を示し、
   他方が水酸基、低級アルキルオキシ基又は低級アルキル
   基を示すか、或いは両者が一緒になって単結合を示す］
   で表される環状テトラペプチド又はその医薬上許容され
   る塩。
2. （２）シクロ（−プロリル−アルギニル−プロリル−ア
   ルギニル−）、シクロ（−プロリル−リジル−プロリル
   −アルギニル−）又はそれらの医薬上許容される塩。
3. （３）シクロ（−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−
   プロリル−Ｌ−アルギニル−）、シクロ（−Ｌ−プロリ
   ル−Ｌ−リジル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニル−）又
   はそれらの医薬上許容される塩。
4. （４）第１請求項記載の環状テトラペプチドを少なくと
   も１種含有することを特徴とする免疫系疾患治療剤。
5. （５）第１請求項記載の環状テトラペプチド誘導体を少
   なくとも１種含有することを特徴とする、癌、ウィルス
   性、細菌性若しくは真菌性の感染性疾患又は自己免疫系
   疾患治療剤。