JPH04178335A - ウイルス性下痢症治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はウィルス性下痢症の治療剤に関する。

〔従来の技術〕

ウィルス性下痢症（胃腸炎）は日常ありふれた感染症で
ある。その原因ときれるウィルスとしてロタウィルス、
アデノウィルス、アストロウイルス、カリシウィルス、
ノーウオークウィルス、コロナウィルスが発見されてい
るが、大部分はロタウィルス性であることがわかってい
る。

羅患最多年齢は０〜２４ケ月の乳幼児で、下痢。

嘔吐２発熱を主機とし、日本を含む温帯諸国では毎年、
冬期に集中して多発する。

下痢症は、発展途上国においては特に深刻な問題で、医
療設備の不備や低栄養状態と相まって現在でも乳幼児の
死亡主要原因であり、年間数百万Å以上の子供が下痢症
により死亡していると言われる。

このようなロタウィルス性下痢症に対して、弱毒化ウィ
ルスや異種動物ウィルスを用いたワタチン開発も進めら
れているが、その対象が免疫学的に未熟な乳幼児のため
、顕著な効果を上げるまでには到っていない。

また、本ウィルスに対する抗ウィルス剤も開発されてお
らず、有効な治療法はない。唯一対症療法として、経口
輸液や経静脈輸液により水と電解質の喪失を補い、体液
を補正しながら、自然治癒を待っているのが現状である
。

〔発明が解決しようとする課題〕

ロタウィルス感染による下痢の発症機序は今だ不明な点
が多い。感染により小腸上皮細胞及び消化にあずかる膜
微繊毛の変化が顕著であるが、感染後の細胞内でのウィ
ルス増殖の機構については何ら知見がない。

しかし、飲食物等を経て経口的に侵入し、腸管まで到達
したロタウィルスが、腸管細胞に吸着・感染し、次々に
近隣の細胞に伝播していくことが明らかとなっているた
め、侵入したロタウィルスの腸管細胞への吸着、あるい
は細胞内でのウィルスの増殖をブロックする薬剤の開発
が望まれている。

本発明は、以上のようなロタウィルス性下痢症に対して
ウィルスの細胞への吸着・感染または細胞間伝播を阻止
する薬剤を提供するものである。

〔課題を解決するための手段〕

ロタウィルスは、内外２層のカプシドと呼はれる殻を持
っている。この内、外層カプシドはＶＢ２及びＶＦ６と
呼ばれる２種のタンパク質で構成されているが、ＶＢ２
は特定のプロテアーゼにより、きらにＶＦ６とＶＦ６の
タンパク質に開裂されることがわかっている。

細胞内で合成きれ、放出されたウィルス粒子が感染性を
獲得するためには、このＶＢ２の開裂が必須であり、そ
の結果、ウィルスの細胞への侵入または脱穀が促進され
ると解きれている。（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、　、　３９　：
　８７９〜８８８．１９８１／Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、、　
３９　：　８１６〜８２２．１９８１　）　Ｖ　Ｐ　４
開裂を担うプロテアーゼの１つがセリンプロテアーゼの
１種トリプシンである。

すなわち、経口的に侵入したロタウィルス、あるいは感
染細胞から放出されたウィルスは腸管的消化酵素として
存在しているトリプシンのようなプロテアーゼによりＶ
Ｂ２の開裂を受け、感染性を獲得し近隣細胞へ次々と伝
播・感染していくと考えられている。

本発明者らは、ロタウィルス性下痢症に対する経口薬剤
の開発を目的とし、鋭意研究した結果、ＶＰ４開裂をブ
ロックするプロテアーゼ阻害剤に顕著な治療効果を見い
出した。すなわち、すなわち、本発明の要旨は、 （１）　　プロテアーゼ阻害物質を有効成分とするウィ
ルス性下痢症治療剤。

（り　プロテアーゼ阻害物質が、卵白由来のシスタチン
である請求項（１）記載のウィルス性下痢症治療剤。

ｃ３）　　プロテアーゼ阻害物質が卵白由来のオボムコ
イドである請求項（１）記載のウィルス性下痢症治療剤
。

（４）請求項（１）記載のプロテアーゼ阻害物質が卵白
由来のオボインヒビターであるウィルス性下痢症治療剤
。

未発明のプロテアーゼ阻害物質の内、シスタチンは主と
してフィシン、パパインを、オボムコイドはトリプシン
を、オボインヒビターはトリプシン、キモトリプシンを
阻害する。

ロタウィルスが感染性を獲得するためには、ＶＢ２の開
裂が必要であるが、ロタウィルスの生活環には未解明な
部分が多いため、これらプロテアーゼ阻害物質がＶＰ４
開裂以外にも、ロタウィルス増殖過程をブロックしてい
る可能性がある。

すなわち、腸管ｍ胞におけるウィルス産生タンパク質の
プロセシングの阻害などが考えられる。

本発明の有機成分であるプロテアーゼ阻害物質は卵白か
らの精製品に限らずそれを含有する卵２卵白、あＩ；）
るは粗抽出物でもよい。

また、卵白由来のプロテアーゼ阻害物質を化学的に修飾
したものあるいは遺伝子組換え体より得られた卵白プロ
テアーゼ阻害物質も使用できる。

使用形態としては、同プロテアーゼ阻害物質を含む錠剤
、顆粒剤、経口輸液への添加という形の治療剤も可能で
ある。腸溶性のカプセルにすることはより効果的である
。

ロタウィルス性下痢症は、牛、ブタ、馬といった家畜に
おいても、その被害は深刻である。従って、ヒト以外に
幼若家畜の下痢症治療剤として、本プロテアーゼ阻害剤
の飼料あるいは飲料への添加が考えられる。

本プロテアーゼ阻害物質を含有するウィルス性下痢症治
療剤を、経口剤あるいは経口輸液としてヒト乳幼児に投
与する場合、１日２回、１回につき有効成分として１０
〜５００ｍｇを投与するのが良い。

以下、試験例及び実施例により、本発明をさらに詳しく
説明する方が、本発明はこれらによって制限されるもの
ではない。

試験例１．（ｉｎ　　ｖｉｔｒｏ　における卵白由来プ
ロテアーゼ阻害物質によるロタウィルス増殖の抑制〉 Ｍ　Ａ　１０４細胞を試験管内にて単層となるまで培養
後、Ｍ、○、Ｉ＝０．０５の多重度でヒトロタウィルス
（ＭＯ株）を３７℃、ｌｈｒ、吸着許せ感染させた。ｌ
ｈｒ後、ＭＥＭ培地にて洗浄し、シスクチン、オボムコ
イド、オボインヒビターを各々１００μｇ　／　ｍ　ｌ
の濃度で含むＭＥＭ培地（アセチルトリプシン０５μｇ
　／　ｍ　／！金含有にて３７℃、３日間回転培養した
。

得られた培養上清につき、螢光抗体法によりロタウィル
スの力価決定を行い、プロテアーゼ阻害物質を含まない
対照に対するロタウィルス増殖抑制効果を得た。

結果を表−１に示す。

以下余白 表−１卵白由来プロテアーゼ阻害物質によるロタウィル
ス増殖の抑制 試験例２．〈マウス感染実験における卵白由来プロテア
ーゼ阻害物質によるロタウィルス性下痢症治療効果〉 生後５日齢の乳飲みマウス（ＢＡＬＢ／Ｃ）に対し、ヒ
トロタウィルスＣＭｏ株）　ＩＸ　１０”　ＦＣＦＵを
経口感染させた。

感染後、１２時間及び２４時間の２回に分けて、シスタ
チン、オボムコイド、オポインヒビターをマウス当たり
１５０μｇ経口的に投与し、その後の下痢発症の様子を
調べた。

その結果を表−２に示す。

以下余白 表−２卵白由来プロテアーゼ阻害物質による下痢症治療
効果感染２日後 以下余白 〔実施例〕 実施例１．〈卵白由来プロテアーゼ阻害物質の調製〉 （１）　　シスタチンの精製 卵白に等量の水を加え、撹拌後、遠心し、その上清につ
き、５０％硫安塩析を行った。塩析後の沈殿を集め脱塩
後、０．１Ｍリン酸Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ６，８）で平衡
化したＣｍ−Ｐａｐａｉｎ−Ｃ。

１１ｕｌｏｆｉｎｅに吸着させた。

０．５　ＭＮ　ａ　Ｃ１を加え、撹拌溶出後、ＣＭ−Ｃ
ｅｌ　　１ｕｌｏｆｉｎｅり４０マド及び５ｅｐｈａｄ
ｅｘＧ−１００ゲル３過分画を行い、精製した。

同操作により、卵白１ｋｇより精製シスタチン１０ｍｇ
を得た。

■　オボムコイドの精製 卵白を５０％塩析した後、その上清につき、６０％硫安
塩析を行った。その上清につき、きらに１００％硫安分
析を行い、沈殿を透析、脱塩後、等量の１０％ＴＣＡ溶
液を添加し沈殿を除去後、上清につき、さらにクロマト
を行い、精製した。

以上の操作より、卵白１ｋｇよりオボムコイド４ｇを得
た。

０）　オボインヒビターの精製 卵白を５０％塩析後、その沈殿につき、Ｃｍ−Ｐａｐａ
ｉｎ−Ｃｏｌｌｕｌｏｆｉｎｅ処理し、未吸着画分を得
た。同画分に最終０．１５ＭになるようにＴＣＡ溶液を
加え沈殿を集めて透析した。その後、最終６０％のエタ
ノールで処理した後、ＣＭ−クロマトを行い、精製した
。

以上の操作により、卵白１ｋｇよりオボインヒビター０
．４ｇを得た。

実施例２．〈卵白由来プロテアーゼ阻害物質を有効成分
とするウィルス性下痢症治療剤の調製〉精製シスタチン
またはオボムコイドまたはオボインヒビター各１００ｍ
ｇ、乳糖２９４ｍｇ、ステアリン酸マグルシウム６　ｍ
　ｇを混合後打錠しく打錠ＥＥ１．５ｔ　／ｃｍ’　）
ウィルス性下痢症治療剤を調製した。

実施例３．く卵白由来プロテアーゼ阻害物質を有効成分
とするウィルス性下痢症治療飲料の調製精製シスタチン
またはオボムコイドまたはオポインヒビター各１００ｍ
ｇ果糖ブドウ糖液糖１００ｍｇ、リンゴ果汁５００ｇを
含むウィルス性下痢症治療用飲料１ｋｇを調製した。

実施例４．く卵白由来プロテアーゼ阻害物質を有効成分
とする家畜用ウィルス性下痢症治療飼料の調製〉 粗精製シスタチンまたはオボムコイドまたはオボインヒ
ビター（純度者々５％）各１００　ｇ　、全脂肪乳１０
ｋｇを混合し、幼若期家畜用ウィルス性下痢症治療飼料
を調製した。

〔発明の効果〕

ウィルス性下痢症に対する即効性のある特異的治療剤は
ない。

本発明は、ウィルス性下痢症に対して、初めて特異的治
療剤を提供するものである。

ロタウィルス下痢症は、保育園、幼稚園等において集団
発生することが多い。−人の乳児が下痢を発症した場合
、近辺の子供においてもすでに感染が成立している可能
性が高い。このような場合感染はしたが、その後の発症
を抑えるあるいは軽度の発症で終えることのできる治療
剤を開発することの社会的意義は極めて大きい。

またロタウィルス性下痢症は、ヒトに限らず牛、ブタ、
馬の家畜においても甚大な被害を及ぼしている。

従って、発明のウィルス性下痢症治療剤は家畜産業にお
いても貢献すること大である。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）プロテアーゼ阻害物質を有効成分とするウィルス
   性下痢症治療剤。
2. （２）プロテアーゼ阻害物質が、卵白由来のシスタチン
   である請求項（１）記載のウィルス性下痢症治療剤。
3. （３）プロテアーゼ阻害物質が卵白由来のオボムコイド
   である請求項（１）記載のウィルス性下痢症治療剤。
4. （４）請求項（１）記載のプロテアーゼ阻害物質が卵白
   由来のオボインヒビターであるウィルス性下痢症治療剤
   。