JPH0412714B2

JPH0412714B2 -

Info

Publication number: JPH0412714B2
Application number: JP60144371A
Authority: JP
Inventors: Hideki Fukuda
Original assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1985-07-01
Filing date: 1985-07-01
Publication date: 1992-03-05
Also published as: DE3686788D1; EP0207475A2; DE3686788T2; EP0207475B1; EP0207475A3; JPS623791A

Description

【発明の詳細な説明】

［産業上の利用分野］本発明は、脂質生合成能を有するカビ類もしく
は藻類、または同カビ類もしくは藻類の固定化微
生物粒子を用いて脂質を生成せしめるに際し、培
地中に界面活性剤を存在させて培養を行なうこと
を特徴とする脂質の製造法に関する。［従来技術］微生物菌体の脂質はそれ自体油脂原料として、
また脂質の精製によつてえられる各種ステロール
や各種高級脂肪酸などの有用物質は食品用、医薬
用、または一般工業用として幅広い用途に適用で
きるので、従来より脂質生産性を高めたり望まし
い組成の脂質を生産させる技術に関して活発な研
究開発が続けられてきた。特に最近では、このよ
うな脂質から回収される不飽和脂肪酸のうちアラ
キドン酸やγ−リノレン酸が多様な生理活性を有
することが明らかになりつつあり、ますます注目
を集めている。従来このような脂質の製造方法と
しては、カカオ脂類似の油脂の製造法（特開昭60
−75292号）、アラキドン酸の製造法（特開昭52−
64482号、バイオテクノロジー・アンド・バイオ
エンジニアリング（Biotechnology and
Bioengineering）、25巻、1057（1983））およびγ
−リノレン酸の製造法（特公昭47−22280号、同
58−22199号）などを示すことができる。［発明が解決しようとする問題点］しかしながら、このような製造法では各種微生
物菌体内の脂質蓄積量は制限を受け、充分量生産
することは不可能であり、しかも脂質の大部分が
菌体内に蓄積されるので、これらを回収するため
には菌体を破砕処理したり酸処理したりするなど
の複雑な抽出処理が必要となつていた。このよう
な抽出処理を用いれば抽出される多量の不純物の
存在によつて精製プロセスがきわめて複雑にな
り、工業化を推進するうえで大きな阻害要因とな
つていた。したがつて、脂質を高収量で製造で
き、しかも回収が容易な新しい製造プロセスの開
発が強く望まれていた。［問題点を解決するための手段］本発明者は、このような観点から鋭意研究を重
ねた結果、培地中に界面活性剤を存在させながら
培養を行なえば菌体内に蓄積した脂質を菌体外に
蓄量分泌させることができ、脂質が高収量でしか
も容易に回収できることを見出し本発明を完成す
るにいたつた。また、培地中に界面活性剤を存在
させながら培養を行なう際に脂質生合成能を有す
るカビ類または藻類の固定化微粒子を用いれば培
養器中の微生物濃度を高濃度に維持できるのでよ
り高収量に、また効率よく脂質を生産することが
できる。菌体中に生成した有用物質を培養液中に分泌せ
しめようとした例には酵母菌体中のグルタチオン
の製造方法（特開昭54−86691号）があるが、本
発明とは微生物の種類や蓄積される物質が異な
り、脂質を効率よく培養液中に分泌せしめようと
する方法は本発明が最初である。［作用および実施例］本発明は、脂質生合成能を有するカビ類もしく
は藻類、または同カビ類もしくは藻類の固定化微
生物粒子を用いて脂質を生成せしめるに際し、培
地中に界面活性剤を存在させて培養させることを
特徴とする脂質の製造法であつて、本発明によつ
て培養液中に多量の脂質を蓄積することができ
る。このような脂質が菌体外にスムーズに移行す
る理由は明らかではないが、界面活性剤を適切な
条件下で培養液中に存在させれば界面活性剤は微
生物の生育に何ら悪影響を与えることなく微生物
の細胞表面に作用して、細胞膜の透過性を改善す
るものと思われる。このようにしてえられた培養
液中の脂質は従来より公知の抽出および精製方法
によつて容易に高純度の油脂、各種ステロールお
よび各種高級脂肪酸などを回収することができ
る。本発明に使用しうる微生物としては、脂質生合
成能を有するカビ類または藻類であればよく任意
のものを用いることができるが、(1)アスペルギル
ス属（Aspergillus）、(2)フザリウム
（Fusarium）、(3)ペニシリウム属（Penicillium）、
(4)ポリピリジウム属（Porphyridium）、(5)ムコー
ル属（Mucor）、(6)リゾプス属（Phizopus）、(7)
アブシデイア属（Absidia）、(8)アクチノムコー
ル属（Actinomucor）、(9)コアネネフオラ属
（Choanephora）、(10)カニンガメラ属
（Cunninghamella）、（11）ピコマイセス属
（Phycomyces）、（12）リゾムコール属
（Rhizomucor）、（13）ヘリコスチラム属
（Helicostylum）、（14）パエシロマイセス属
（Paecilomyces）、（15）シンセフアラストラム属
（Syncephalastrum）、（16）サルシネラ属
（Circinella）、（17）ゴングロネラ属
（Gongronella）、（18）バクセラ属
（Backusella）、（19）ピチウム属（Pythium）、
（20）フエネロマイセス属（Fennellomyces）、
（21）モルテイエレラ属（Mortierella）、（22）ス
ピルリナ属（Spirulina）、（23）クラドスポリウ
ム属（Cladosporium）、（24）トルコデルマ属
（Trichoderma）、（25）ペリキユラリア属
（Pellicularia）、（26）グリオクラデイウム属
（Gliocladium）、（27）ヒユミコラ属
（Humicola）、（28）クラビセプス属
（Claviceps）および（29）クロレラ属
（Chlorella）などをその代表的なものとしてあげ
ることができる。特にアラキドン酸については上
記のうち(1)〜(6)に属する微生物、γ−リノレン酸
については(5)〜（22）に属する微生物から選択す
るのが含有量の点から好ましい。さらに具体的にそれぞれの属に対する代表的菌
株例をあげれば、アスペルギルス・カンデイダス
（A.candidus）IFO 4309、フザリウム・オキソポ
ラム（F.oxysporum）IFO 5942、ペニシリウ
ム・スピヌロサム（P.spirulosum）IFO 5793、
ポリピリジウム・クルエンタム（P.cruentum）、
ムコール・アンビガウス（M.ambiguus）IFO
6742、リゾプス・オリゼー（R.oryzae）IFO
5418、リゾプス・ストロニフアー（R.stolonifer）
IFO 4781、アブシデイア・コエルレア（A.
coerulea）IFO 4011、アクチノムコール・レペ
ンス（A.repens）HUT 1049、コアネフオラ・
シルシナンス（C.circinans）IFO 5991、カニン
ガメラ・エチヌレータ・エレガンス（C.
echinuleta var.elegans）IFO 4441、ピコマイセ
ス・ニテンス（P.nitens）IFO 5694、リゾムコ
ール・ミーヘイ（R.miehei）IFO 9740、ヘリコ
スチラム・ニグリカンス（H.nigricans）IFO
8091、パエシロマイセス・バリオチ（P.varioti）
HUT 4028、シンセフアラストラム・ニグリカ
ンス（S.nigricans）HUT 1229、サルシネラ・
リジダ（C.rigida）IFO 6411、ゴングロネラ・
ブトレリ（G.butleri）、IFO 8080、バクセラ・シ
ルシナ（B.circina）IFO 9231、ピチウム・デバ
リアナム（P.debaryanum）IFO 5919、フエネロ
マイセス・リンデリ（F.linderi）IFO 6409、モ
ルテイエレラ・イサベリナ（M.isabellina）IFO
7824、スピルリナ・プラテンシス（S.platensis）、
クラドスポリウム・ヘルバラム（C.herbarum）
IFO 6348、トルコデルマ・ビリデ（T.viride）
IFO 9066、ペリキユラリア・フイラメントサ
（P.filamentosa）IFO 6476、グリオクラデイウ
ム・ビレンス（G.virens）IFO 9169、ヒユミコ
ラ・グリゼー（H.grisea）IFO 4868、クラビセ
プス・プルプレア（C.purpurea）IFO 5782およ
びクロレラ・ピレノイドサ（C.pyrenoidosa）が
ある。このような微生物の培養条件としては各種微生
物が生育できる条件であれば特に制限はなく、カ
ビ類に対してはグルコース、糖蜜またはシユクロ
ースなどの炭水化物、エタノール、酢酸やｎ−ア
ルカン、ｎ−デカン、ヘキサデカンまたはヘプタ
デカンなどの炭化水素類を炭素源とし、その他必
要な栄養源を添加した培地が一般に用いられ、温
度、PHおよび培養時間などの条件は各種微生物に
適した条件に準ずればよい。また藻類に対しても
一般に知られる無機栄養源を基本培地とし適切な
光照射度、温度、PHおよび反応時間などの培養条
件に準ずればよい。本発明の培地中に存在させる界面活性剤は陽イ
オン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、非イオン
界面活性剤または両性イオン界面活性剤のいずれ
も用いることができるが、陰イオン界面活性剤お
よび非イオン界面活性剤が特に効果的である。陰イオン界面活性剤としては(1)カルボン酸型高
分子活性剤、(2)ポリオキシエチレンアルキルエー
テル硫酸エステル塩、(3)ポリオキシエチレンアル
キルアリルエーテル硫酸エステル塩、(4)ジアルキ
ルスルホコハク酸塩、(5)アルキルベンゼンスルホ
ン酸塩、(6)アルキル硫酸エステル塩、(7)脂肪酸
塩、(8)アルキルリン酸塩、(9)アルキルナフタレン
スルホン酸塩、(10)芳香族スルホン酸ホルマリン縮
合物および（11）ナフタレンスルホン酸ホルマリ
ン縮合物に属するもののほか、陰イオン界面活性
剤の性質を有するものが用いられるが、特に(1)〜
(4)に属するものが効果的である。具体的に代表的
なものをあげれば、(1)についてはデモールEP（商
品名、花王石鹸(株)製）、ポイズ540（商品名、花王
石鹸(株)製）、エレミノールMBN−１（商品名、三
洋化成工業(株)製）、エレミノールMBN−２（商品
名、三洋化成工業(株)製）、サンスパールPS−８
（商品名、三洋化成工業(株)製）およびポリスター
OM（商品名、日本油脂(株)製）など、(2)について
はエマール20C（商品名、花王石鹸(株)製）など、
(3)についてはサンノールNES（商品名、ライオン
(株)製）およびエマール（商品名、花王石鹸(株)製）
など、(4)についてはペレツクスOT−Ｐ（商品名、
花王石鹸(株)製）およびラピゾールＢ−30（商品名、
日本油脂(株)製）などを示すことができる。非イオン界面活性剤としては(1)ポリオキシエチ
レンソルビタン脂肪酸エステル、(2)オキシエチレ
ンオキシプロピレンブロツクポリマー、(3)ソルビ
タン脂肪酸エステル、(4)ポリエチレングリコール
脂肪酸エステル、(5)ポリオキシエチレンアルキル
エーテル、(6)ポリオキシエチレンアルキルフエニ
ルエーテル、(7)脂肪酸モノグリセライドおよび(8)
ポリオキシエチレンアルキルアミンに属するもの
のほか、非イオン界面活性剤の性質を有するもの
が用いられるが、特に(1)〜(4)に属するものが効果
的である。具体的に代表的なものをあげれば(1)に
ついてはポリオキシエチレンソルビタンモノラウ
レートとして、たとえばノニオンLT−221（商品
名、日本油脂(株)製）、レオドールTW−L120（商品
名、花王石鹸(株)製）およびツイーン20（商品名、
半井化学薬品(株)製）など、ポリオキシエチレンソ
ルビタンモノパルミテートとして、たとえばレオ
ドールTW−P120（商品名、花王石鹸(株)製）およ
びツイーン40（商品名、半井化学薬品(株)製）など、
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート
として、たとえばレオドールTW−S120（商品名、
花王石鹸(株)製）など、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノオレエートとして、たとえばノニオン
OT−211（商品名、日本油脂(株)製）、レオドール
TW−O120（商品名、花王石鹸(株)製）およびツイ
ーン80（商品名、半井化学薬品(株)製）など、ポリ
オキシエチレンソルビタントリオレエートとし
て、たとえばレオドールTW−O320（商品名、花
王石鹸(株)製）など、(2)についてはプロノン201お
よび102（商品名、日本油脂(株)製）など、(3)につい
てはノニオンOP−85R（商品名、日本油脂(株)製）、
レオドールSP−O30（商品名、花王石鹸(株)製）お
よびエマゾールＯ−30(F)（商品名、花王石鹸(株)
製）など、(4)についてはエマノーン4110（商品名、
花王石鹸(株)製）などを示すことができる。もちろ
ん、これら陰イオン界面活性剤および非イオン界
面活性剤の両方を適切に混合して使用することも
できる。また界面活性剤は培養の初期から添加し
てもよく、培養の途中または終期に添加し効果的
に脂質を培養液中に移行させてもよい。もちろ
ん、これら界面活性剤の添加により発泡がはげし
いばあいには通常用いられる消泡剤を適量添加す
ればよい。本発明の培地中に存在させる界面活性剤の量
は、陰イオン界面活性剤のばあいには、0.005重
量％以下では細胞膜に効果的な影響を与えること
ができず、５重量％以上では微生物の生育に好ま
しくない影響を与えるので、0.005〜５重量％、
好ましくは0.01〜１重量％、非イオン界面活性剤
のばあいにも同様の理由で0.05〜８重量％、好ま
しくは0.3〜３重量％であり、かかる条件下にお
いて脂質が培養液中に著量蓄積する。本発明においては、通常のサスペンジヨン系で
の回分、半回分、連続培養などの各種培養方法は
もちろん適用できるが、上記微生物を固定化した
固定化微生物を用いるとより効率的である。固定
化の方法は、ゲル化剤を用いる包括固定化法およ
び微生物保持材料を用いる物理吸着固定化法のい
ずれをも適用できる。ゲル化剤としては通常公知
の物質が適用でき、具体的にはポリアクリルアミ
ド、アルギン酸、カラギーナン、コラーゲンおよ
びウレタンプレポリマーなどをあげることができ
る。微生物保持材料としては、カビ類や藻類の持つ
粘着力により固定化を可能ならしめる任意の材料
が適用できる。たとえば、高分子発泡材料として
は、ポリエチレンまたはポリプロピレンなどのポ
リオレフイン系；ブタジエンまたはイソプレンな
どのジエン系；ポリウレタン；ポリ塩化ビニル、
アクリルアミドまたはポリスチレンなどのビニル
系重合体；ポリエーテル、ポリエステル、ポリカ
ーボネートまたはナイロンなどの縮合系；シリコ
ンおよびフツ素樹脂などの材料、無機材料として
は、セラミツクス、ガラス、活性炭、軽石および
金属類などが適用できるが、いずれの材料におい
てもカビ類や藻類を良好に該微生物保持材料に固
定化させるためには、空げき率が70〜99％、単位
直線長さ当りの孔数が２〜50個／cmの範囲である
多孔質材料か、空げき率が70〜99％である金属加
工材料などを使用するのが好ましい。通常、前記にあげた微生物はペレツト状または
菌糸状などの種々の様相を呈するが、上記の特徴
を有する保持材料を適用すれば、微生物が増殖を
くり返す過程において、微生物固有の粘着力や保
持材料の包括作用などによつて吸着固定化され
る。このような各種保持材料は、微生物の種類お
よび培養条件などによつて適宜選択でき、形状に
ついてはたとえば球状、ブロツク状、リング状、
筒状またはシート状などに加工し使用することが
できる。寸法については、微生物の種類、培養条
件および培養器の種類などにより決定できるが、
おおむね球状のものであれば直径１〜100mm、ブ
ロツク状のものであれば一辺が１〜100mmのもの
が使用される。微生物を上記保持材料に固定化させるには、通
常、公知の回分、半回分、連続培養法などを用い
て容易に吸着固定化させることができる。１例を
示すと、あらかじめ蒸気などで殺菌された空の該
保持材料と微生物を好ましい反応条件下、たとえ
ばムコール・アンビガウスIFO 6742をグルコー
スを基本培地とし、初発PH6.0、温度30℃で通気
培養すれば、約100時間後には該微生物が保持材
料に吸着され、培養に適した固定化微生物が形成
される。このような固定化法は他のカビ類や藻類
についても同様に、好適な培養条件下で容易に固
定化できる。このような固定化微生物は、ひきつづき同一培
養器で界面活性剤の存在下において回分、半回分
または連続培養法などにより培養を行なわせう
る。すなわち、回分培養または半回分培養のばあ
い、培地を新しい培地と交換し、培養を継続す
る。このような交換操作をいく度もくり返すこと
によつて効率をより高めることができる。また連
続培養のばあい、固定化後、新しい培地をポンプ
などで連続的に送り込み、培養器の一方から連続
的に注入速度と同じ割合で培養液を流出させれば
よい。本発明においては、通気は空気、酸素または両
者の混合ガスが用いられ、培養器は撹拌型または
無撹拌型の各種気泡型のあらゆる型式のものが適
用できるが、固定化微生物を用いるばあいには通
常無撹拌型の培養器が操作面およびコスト面から
より好ましい。このようにしてえられた培養液中の脂質は精製
する常法、たとえば溶媒抽出により回収でき、さ
らに各種高級脂肪酸やステロール類もクロマトグ
ラフイーなどの公知の分離精製法により高純度の
製品をうることができる。また、残存している菌
体中の脂質もホモジナイズなどの処理を行ない同
様に各種有用物質を回収することができる。つぎに本発明を実施例によりさらにくわしく説
明するが、本発明はもとよりこれらに限られるも
のではない。以下の実施例においては生成した培養液中の脂
質はクロロホルムによる溶媒抽出後、常法の重量
法によつて分析した。各種高級脂肪は溶媒抽出
後、加水分解およびメチルエステル化を施した
後、ガスクロマトグラフイーにより分析を行なつ
た。菌体中に残存する脂質についても菌体をホモ
ジナイズしたのち、培養液のばあいと同様の操作
によつて分析した。実施例１各種カビ類をグルコースが４％、KH₂PO₄が
0.3％、（NH₄）₂SO₄が0.2％、（NH₂）₂COが0.1％、
MgSO₄・7H₂Oが0.05％、FeSO₄・7H₂Oが0.001
％、CaCl₂・2H₂Oが0.001％、CuSO₄・5H₂Oが
0.00002％、ZnSO₄・7H₂Oが0.0001％、MnCl₂・
4H₂Oが0.0001％、NaClが0.01％、酵母エキスが
0.04％、麦芽エキスが0.04％およびポリペプトン
が0.02％の(A)培地、またはグルコースが３％、
KH₂PO₄が0.3％、NH₄NO₃が0.3％、MgSO₄・
7H₂Oが0.03％、酵母エキスが0.02％、麦芽エキ
スが0.02％、FeSO₄・7H₂Oが0.001％、CaCl₂・
2H₂Oが0.00012％、CuSO₄・5H₂Oが0.00002％お
よびZnSO₄・7H₂Oが0.0001％の(B)培地で初発PH
6.0、温度30℃にて約１時間振盪培養を行ない種
母を調整した。500ml容のシエーカーフラスコに
種母調整用培地と同じ(A)培地100mlまたは(B)培地
200mlを入れ、上記種母とともに初発PH6.0、温度
30℃にて界面活性剤の存在下で約１周間振盪培養
を行ない培養液中に脂質を生成させた。一方、スピルリナ・プラテンシスおよびクロレ
ラ・ピレノイドサについては、NaClが0.5％、
KClが0.5％、Na₂CO₃が0.8％、KNO₃が0.1％、
MgSO₄・7H₂Oが0.01％、クエン酸ソーダが0.02
％、A₅溶液が１ml／、硫酸鉄溶液が１ml／、
土壌浸出液が100ml／およびビタミンB₁₂が
40μg／の(C)培地500mlに植菌し、PH8.0、温度30
℃、螢光燈による照度約5000ルツクスで約６日
間、ポリピリジウム・クルエンタムについては
NaClが2.7％、KNO₃が0.1％、KH₂PO₄が0.007
％、NaHCO₃が0.004％、MgSO₄・7H₂Oが0.66
％、MgCl₂・6H₂Oが0.56％、CaCl₂・2H₂Oが
0.15％、ZnClが４×10^-6％、H₃BO₄が６×10^-5
％、CoCl₂・6H₂Oが1.5×10^-6％、CuCl₂・2H₂O
が４×10^-6％、MnCl₂・4H₂Oが４×10^-5％、Mo
が3.7×10^-5％、FeCl₂・4H₂O（240mg／100ml
0.05MNa₂EDTA）が１ml／および1Mトリス
−HCl溶液（PH7.6）が20ml／の(D)培地100mlに
植菌し、温度20℃、螢光燈による照度約8000ルツ
クスにて約10日間それぞれ界面活性剤の存在下で
培養させた。界面活性剤はカビ類および藻類いず
れの場合も非イオン系に属するレオドールTW−
O320を1.0重量％となるように添加し、対照とし
ての無添加のばあいと比較した。ムコール・アンビガウスIFO 6742を(A)培地で、
フザリウム・オキソポラムIFO 5942を(B)培地で
それぞれ培養したばあいの脂質などの分析結果を
第１表に、本発明による培養液中の脂質の脂肪酸
組成を第２表に示す。また、その他各種微生物の
培養液中の脂質、アラキドン酸またはγ−リノレ
ン酸とそれぞれの全量との比を第３表に示す。い
ずれの表においても（）内は対照の結果を示
す。また、上記のごとくえられたアラキドン酸とγ
−リノレン酸は常法のクロマトグラフイーなどに
よる分離精製法によつて97％以上の高純度の製品
がえられた。なお第３表において１の菌については(B)培地使
用で培養液中のアラキドン酸と全アラキドン酸と
の比、２の菌については(D)培地使用で培養液中の
アラキドン酸と全アラキドン酸との比、３の菌に
ついては(A)培地使用で培養液中のγ−リノレン酸
と全γ−リノレン酸との比、４の菌については(C)
培地使用で培養液中のγ−リノレン酸と全γ−リ
ノレン酸との比、５の菌については(C)培地使用で
培養液中の脂質と全脂質との比をそれぞれあらわ
す。

【表】

【表】実施例２各種カビ類を実施例１に示した(A)培地を用い、
同一条件にて脂質を生成させた。培養液中の脂質
と全脂質との比を第４表に示す。（）内は界面
活性剤無添加の対照の結果を示す。

【表】

【表】実施例３ムコール・アンビガウスIFO 6742およびフザ
リウム・オキソポラムIFO 5942をそれぞれ実施
例１に示した(A)培地および(B)培地で実施例１と同
様の手順にしたがつて振盪培養を行ない、各種界
面活性剤の効果を比較した。培養液中の脂質と全
脂質との比を無添加の対照とともに第５表に示
す。

【表】

【表】このようにしてえられた脂質中の脂肪酸組成は
実施例１の第２表に示した結果と類似しており、
ムコール・アンビガウスIFO 6742についてはγ
−リノレン酸含量は８〜20％、フザリウム・オキ
ソポラムIFO 5942についてはアラキドン酸含量
は１〜４％であつた。実施例４ムコール・アンビガウスIFO 6742およびフザ
リウム・オキソポラムIFO 5942をそれぞれ実施
例１に示した(A)培地および(B)培地で実施例１と同
じ手順にしたがつて振盪培養を行ない種母を調整
した。微生物保持材料を用いるばあい、あらかじめ殺
菌された１辺６mmのブロツク状ポリウレタンおよ
びナイロン（いずれも空げき率95〜98％、孔数30
個／cm）の微生物保持材料約１を実施例１と同
じ培地２中で上記種母とともに通常の気泡塔に
て通気培養した。培養開始約100時間後には微生
物は保持材料に物理吸着されたので、ひきつづき
界面活性剤の存在下において脂質を生成させる培
養に供した。ゲル化剤としてアルギン酸を用いるばあい、上
記のごとく調整された種母を遠心分離にて集菌し
２％アルギン酸ナトリウム液に懸濁させた。あら
かじめ撹拌されている0.1M CaCl₂溶液中に懸濁
液をノズルから滴下させ直径約４mmの球状ゲルに
した。カラギーナンを用いるばあい、同様にカラ
ギーナン水溶液に菌体を懸濁させ、２％KCl溶液
中に滴下させて直径約４mmの球状ゲルにした。こ
のようにしてえられた球状ゲル約１を気泡塔に
充填し、界面活性剤の存在下で脂質を生成させ
た。培地成分はいずれも種母調整用培地と同じもの
を用い、PH３〜５、温度30℃、通気量1vvmで培
養せしめ、７日間ごとに３回培養液を交換した。
界面活性剤はレオドールTW−O320を1.0重量％
となるように添加した。それぞれのばあい培養液中の脂質量を分析して
第６表に示したような結果をえた。

【表】このようにしてえられた脂質中のγ−リノレン
酸やアラキドン酸の含有量は実施例１でえられた
結果に類似しておりムコール・アンビガウスIFO
6742についてのγ−リノレン酸組成は９〜18％、
フザリウム・オキソポラムIFO 5942についての
アラキドン酸組成は２〜４％であつた。実施例５実施例４と同じ手順にしたがつてえられた固定
化微生物（ムコール・アンビガウスIFO 6742を
ブロツク状ポリウレタンにて固定化）を同一気泡
塔にて続培養を行なつた。グルコースが0.4％で
その他の組成は実施例１の(A)培地と同じ新しい培
地をポンプで200ml／時の速度で連続的に送り込
み、気泡塔の一部から連続的に注入速度と同じ割
合で培養液を流出させた。界面活性剤はレオドー
ルTW−0320を培養液中に1.0重量％となるよう
に添加した。定常状態に達したのち、流出中の脂
質を分析したところ培養液中の脂質濃度およびγ
−リノレン酸濃度はそれぞれ65mg／および8.2
mg／であつた。［発明の効果］このように、本発明によれば界面活性剤を添加
しないばあいに比べ脂質を高収量でうることがで
き、さらに精製工程の簡素化が可能となることか
ら高純度の脂質を高収量にえられるので工業的に
製造するうえできわめて好都合である。

Claims

【特許請求の範囲】１脂質生合成能を有するカビ類または藻類を用
いて脂質を生成せしめるに際し、カビ類または藻
類を界面活性剤存在下培養し、脂質を培地中に分
泌させることを特徴とする脂質の製造法。２前記脂質生合成能を有するカビ類または藻類
がアスペルギルス属、フザリウム属、ペニシリウ
ム属、ポリピリジウム属、ムコール属、リゾプス
属、アブシデイア属、アクチノムコール属、コア
ネフオラ属、カニンガメラ属、ピコマイセス属、
リゾムコール属、ヘリコスチラム属、パエシロマ
イセス属、シンセフアラストラム属、サルシネラ
属、ゴングロネラ属、バクセラ属、ピチウム属、
フエネロマイセス属、スピルリナ属、クラドスポ
リウム属、トリコデルマ属、ペリキユラリア属、
グリオクラデイウム属、ヒユミコラ属、クラビセ
プス属またはクロレラ属に属する特許請求の範囲
第１項記載の方法。３界面活性剤として陰イオン界面活性剤または
非イオン界面活性剤を用いる特許請求の範囲第１
項記載の方法。４前記陰イオン界面活性剤がカルボン酸型高分
子活性剤、ポリオキシエチレンアルキルエーテル
硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキルア
リルエーテル硫酸エステル塩およびジアルキルス
ルホコハク酸塩類よりなる群から選ばれた１種ま
たは２種以上の陰イオン界面活性剤である特許請
求の範囲第３項記載の方法。５前記非イオン界面活性剤がポリオキシエチレ
ンソルビタン脂肪酸エステル、オキシエチレンオ
キシプロピレンブロツクポリマー、ソルビタン脂
肪酸エステルおよびポリエチレングリコール脂肪
酸エステル類よりなる群から選ばれた１種または
２種以上の非イオン界面活性剤である特許請求の
範囲第３項記載の方法。６脂質生合成能を有するカビ類または藻類の固
定化微生物粒子を用いて脂質を生成せしめるに際
し、カビ類または藻類を界面活性剤存在下培養
し、脂質を培地中に分泌させることを特徴とする
脂質の製造法。７前記脂質生合成能を有するカビ類または藻類
がアスペルギルス属、フザリウム属、ペニシリウ
ム属、ポリピリジウム属、ムコール属、リゾプス
属、アブシデイア属、アクチノムコール属、コア
ネフオラ属、カニンガメラ属、ピコマイセス属、
リゾムコール属、ヘリコスチラム属、パエシロマ
イセス属、シンセフアラストラム属、サルシネラ
属、ゴングロネラ属、バクセラ属、ピチウム属、
フエネロマイセス属、スピルリナ属、クラドスポ
リウム属、トリコデルマ属、ペリキユラリア属、
グリオクラデイウム属、ヒユミコラ属、クラビセ
プス属またはクロレラ属に属する特許請求の範囲
第６項記載の方法。８界面活性剤として陰イオン界面活性剤または
非イオン界面活性剤を用いる特許請求の範囲第６
項記載の方法。９前記陰イオン界面活性剤がカルボン酸型高分
子活性剤、ポリオキシエチレンアルキルエーテル
硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキルア
リルエーテル硫酸エステル塩およびジアルキルス
ルホコハク酸塩類よりなる群から選ばれた１種ま
たは２種以上の陰イオン界面活性剤である特許請
求の範囲第８項記載の方法。１０前記非イオン界面活性剤がポリオキシエチ
レンソルビタン脂肪酸エステル、オキシエチレン
オキシプロピレンブロツクポリマー、ソルビタン
脂肪酸エステルおよびポリエチレングリコール脂
肪酸エステル類よりなる群から選ばれた１種また
は２種以上の非イオン界面活性剤である特許請求
の範囲第８項記載の方法。１１ゲル化剤または微生物保持粒子によつてえ
られる固定化微生物粒子を用いる特許請求の範囲
第６項記載の方法。１２前記ゲル化剤がポリアクリルアミド、アル
ギン酸、カラギーナン、コラーゲンまたはウレタ
ンポリマーである特許請求の範囲第１１項記載の
方法。１３前記微生物保持粒子がポリオレフイン系、
ジエン系、ポリウレタン、ビニル系、縮合系、シ
リコンまたはフツ素樹脂の高分子発泡材料よりな
る特許請求の範囲第１１項記載の方法。１４前記微生物保持粒子がセラミツクス、ガラ
ス、活性炭、軽石および金属類よりなる群から選
ばれた多孔質材または空〓率が70〜99％の金属加
工材料である特許請求の範囲第１１項記載の方
法。