JPH041137A - 複合抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は腫瘍壊死因子を含有する複合抗腫瘍剤に関する
。この抗腫瘍剤は、ヒトを包含する哺乳類に投与するこ
とにより抗腫瘍療法において使用することができる。

〔従来の技術〕

従来、腫瘍壊死因子（以下、ＴＮＦと略称する）はヒト
マクロファージ由来の癌細胞障害因子であり、抗腫瘍剤
〔マチユース（Ｍａｔｔａｗｓ）ら、イムノロジー（Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、第４４巻、第１３５頁（１９８
１）］として応用が期待されている。ＴＮＦは、遺伝子
のクローニング及び発現が報告されるに至り大量に入手
することが可能になった〔ペニカ　Ｄ、　（Ｐｅｎｎｉ
ｃａ、　Ｄ、　）ら、ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第
３１２巻、第７２４頁（１９８４）］。

〔発明が解決しようとする課題〕

ＴＮＦは、単独で用いても顕著な抗腫瘍効果を示すもの
の、腫瘍の種類、投与方法によっては治療効果をあげる
ために多量の投与が必要のため副作用がある等欠点も認
められる。そこでこのＴＮＦのより有効な利用法が求め
られている。

本発明の目的は、上記課題を解決した、ＴＮＦを含有す
る複合抗腫瘍剤を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明を概説すれば、本発明は複合抗腫瘍剤に関する発
明であって、ＴＮＦとグアノシン３−５′−サイクリッ
クモノホスフェート誘導体又はグアノシン３′，５′−
サイクリックモノホスフエ−ト誘導能を有する物質を含
有していることを特徴とする。

本発明者らは種々の腫瘍細胞を用いて鋭意検討した結果
、ＴＮＦをグアノシン３′，５′−サイクリックモノホ
スフェート誘導体又はグアノシン３′，５′−サイクリ
ックモノホスフェート誘導能を有する物質と併用するこ
とにより著しく優れた抗腫瘍作用が認められることを見
出し、本発明を完成するに至った。

以下、更に本発明について詳しく説明する。

本発明に用いるＴＮＦは、その蛋白質の有する性質であ
る細胞障害活性を持っているものであれば、天然型、遺
伝子組換え型のいずれも使用することが可能である。一
方、グアノシン３′。

５′−サイクリックモノホスフェート（以下、サイクリ
ックＧＭＰと略す）誘導体とは、細胞膜透過型サイクリ
ックＧＭＰ誘導体を意味し、サイクリックＧＭＰ誘導能
を有する物質とは、Ｎｏ（−酸化窒素）誘導物質（Ｎｏ
ジェネレーター）　ホスホジェステラーゼ・インヒビタ
ー及びホスホリラーゼＡ２活性化物質等が挙げられる。

サイクリックＧＭＰは細胞内で蛋白質のリン酸化に関わ
る物質であるが、いまだにその機能は十分に明らかとは
なっておらず、抗腫瘍効果に関しての報告はない。

具体的に、サイクリックＧＭＰ誘導体としては、細胞膜
透過型サイクリックＧＭＰ誘導体であるジブチリルサイ
クリックＧＭＰ、ブロモサイクリックＧＭＰ、モノブチ
ルサイクリックＧＭＰ、ジブロモサイクリックＧＭＰ等
が使用でき、サイクリックＧＭＰ誘導能を有する物質と
しては、Ｎｏ誘導物質であるナトリウムニトロプルシド
、ニトログリセリン、８７４４−９９　（２’。

３′−ジニトロアデノシン−５′−エチルカルボキシア
ミド）等、ホスホジェステラーゼインヒビターであるイ
ソブチルメチルキサンチン、テオフィリン、Ｍ＆Ｂ２２
９４８　（２−ｏ−プロポキシフェニル−８−アザプリ
ン−６−オン）　、Ｒｏ７−２９５６　（３，４−ジメ
トキシイミダゾリジノン）ＭＹ−５４４５［１−（３−
クロロアニリノ）−４−フエニルフタラジン］　、ＳＫ
＆Ｆ９４１２０　（５（４−アセトアミド−フェニル）
ピラジン−２［ＩＨ］　−ｔン）　、ＭＩＭＡＸ［：１
−ｙｌ＋ルー３−インブチルー８−（メチルアミノ）キ
サンチン］、ビンポセチン〔エチル（３α、１６α）エ
ブルナメニン−１４−カルボキシレート、エチルアポビ
ンカミン−２２−オエート〕、メバクリン（ＤＬ−＋ナ
クリンーＨＣ１）、ハハヘリン、ジピリダモール等、ホ
スホリラーゼＡ２活性化物質であるＧＴＰ結合蛋白のト
ランストシン等を使用することが可能である。本発明に
おけるＴＮＦとサイクリックＧＭＰ誘導体又はサイクリ
ックＧＭＰ誘導能を有する物質の配合比率はＴＮＦｌｍ
ｇに対してサイクリックＧＭＰ誘導体又はサイクリック
ＧＭＰ誘導能を有する物質が１μＭ〜ＩＭが好ましいが
、これらの数値範囲内に制限されるものではない。

本発明の制癌剤が適用可能な疾患は実施例において例示
する繊維肉腫、黒色腫、白血病等、に限らず、腎癌、乳
癌、肺癌、肝癌、ウィルス性疾患など種々なものが挙げ
られる。

また本発明の制癌剤は静脈内注射、筋肉内注射、局所投
与、経口投与、皮下投与等積々の投与形態が可能であり
、それぞれに応じた剤型が可能である。また併用療法と
して用いる際には、投与形態はＴＮＦとサイクリックＧ
ＭＰ誘導体又はサイクリックＧＭＰ誘導能を有する物質
両者の投与が同時且つ同一の投与経路である必要はなく
、静脈注射と皮下投与、経口剤と注射剤の組合せなど、
種々の方法が可能である。また、ＴＮＦとサイクリック
ＧＭＰ誘導体又はサイクリックＧＭＰ誘導能を有する物
質とを異なる時間に投与することもできる。その選択、
組合せ、容量、投与タイミング等の選択は医師により最
終的に決定されるべきものである。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明について詳細に説明するが
、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

実施例１ １０％のＦｅ２を含むＲＰＭＩ−１６４０培地を用いて
イン　ビトロ（Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で継代培養して維持
しているＴＮＦ抵抗性のメス（Ｍｅｔｈ）　−Ａ　（マ
ウス繊維肉腫）細胞に対するＴＮＦ　（ゼンザイム社製
）とジブチリルサイクリックＧＭＰ　（シグマ社製）の
細胞障害活性を調べた。メスーＡ細胞を９６穴マイクロ
タイタープレート〔ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）　３０
７２］に２Ｘ１０’セル／ウエルになるようにＲＰＭＩ
培地を用いてまき、ＴＮＦをｌＸ１０’Ｕ／−になるよ
うに添加した系と添加しない系でジブチリルサイクリッ
クＧＭＰの濃度を０〜４＋ｎＭまで変化させて添加し、
次いで５％ＣＤ、、３７℃の条件下で４８時間培養し、
その後トリバンブルーを用いて死細胞と生細胞を染を分
は顕微鏡下でその数を数えることで生細胞の割合を調べ
た。また、その際の細胞障害活性は以下の式によって算
出した。

細胞障害活性（％） 上記の結果を第１図に表した。すなわち、第１図は、メ
スーＡ細胞に対するジブチリルサイクリックＧＭＰ量（
ｍＭ、横軸）とＴＮＦの細胞障害活性（％、縦軸）との
関係を示したグラフである。図中、白丸印はＴＮＦをｌ
Ｘ１０’Ｕ／−になるように添加した系、黒丸印はＴＨ
Ｆを添加しない系についての結果である。その結果、Ｔ
ＮＦ　Ｉ　ＸＩＯ’　Ｕ／−では細胞障害活性をほとん
ど示されないがジブチリルサイクリックＧＭＰを添加す
ることで用量依存的に高い細胞障害活性を示すようにな
った。また、図から明らかなように相乗的に細胞障害活
性が上昇することがわかった。

実施例２ ＴＮＦ　（ゼンザイム社製）とジブチリルサイクリック
ＧＭＰの相乗作用による細胞障害活性の上昇を種々の癌
細胞を用いて調べた。浮遊細胞のＨＬ−６０（ヒト前骨
芽球系細胞）、０９３７　（ヒト組織腫細胞）　、Ｋ５
６２　（ヒト赤芽球系白血病細胞）は実施例１の方法と
同様にして細胞障害活性を調べた。付着細胞である　Ｎ
Ｌ−１７（マウス結腸線癌細胞）は実施例１の方法に準
じて５％ＣＯ７，３７℃の条件下で、４８時間の培養し
た後、培養上清及び死細胞を除去し、残存している生細
胞を０．２％クリスタルバイオレットを含む２０％エタ
ノールで５分間染色し、水でよく洗浄してから０．１艷
のアルコール溶液（蒸留水：　ＭｅＯＨ：ＢｔＯＨ：　
５　：　１　：　４）を加えて色素を抽出した。

その後、分光光度計で５５０ｎｍの吸収（Ａ３．。）を
計測することで生細胞数の割合を求めた。なお、細胞障
害活性は以下の式により算出した。

細胞障害活性（％） 結果を示したのが第２図である。すなわち、第２図は種
々の癌細胞に対するジブチリルサイクリックＧＭＰとＴ
ＮＦの細胞障害活性（％、縦軸）を示したグラフである
。

どの細胞もＴＮＦ　１　ｘｌＯ’　Ｕ／ｍｌ！とジブチ
リルサイクリックＧＭＰ２ｍＭを併用することで、その
細胞障害活性がそれぞれ単独に比べて増強されているの
が明らかである。

実施例３ 実施例１と同様の方法を用いてメス−Ａに対する他のサ
イクリックＧＭＰ誘導能を有する物質とＴＮＦの併用効
果を調べた。サイクリックＧＭＰ誘導能を有する物質に
は、イソブチルメチルキサンチン（１，Ｂ、　Ｍ、　Ｘ
、　）　（シグマ社製）とナトリウムニトロプルシド（
シグマ社製）を用いた。結果を示したのが第３図である
。すなわち、第３図はサイクリックＧＭＰ誘導能を有す
る物質の１．　Ｂ、　Ｍ、　Ｘ、又はナトリウムニトロ
プルシドとＴＮＦのメスーＡ細胞に対する細胞障害活性
（％、横軸）を示すグラフである。実施例２と同じよう
に１．Ｂ０組Ｘ、４０μＭ１ナトリウムニトロプルシド
５０μＭのいずれかとＴＮＦＩＸＩＯ’Ｕ／−を併用す
ると、その細胞障害活性がそれぞれ単独に比べて相乗的
に著しく増強された。

以上、実施例１〜３で記したように、ＴＮＦとサイクリ
ックＧＭＰ誘導体又はサイクリックＧＭＰ誘導能を有す
る物質を併用することによりより一層の効果が期待でき
る。またそれぞれ単独投与で効果発現が期待できる投与
量に比べより少量での効果発現も期待できる。これは新
たな癌治療剤、治療法としての用途が期待できるもので
ある。

く製剤例〉 製剤例−１ 単位バイアル当り、２−の注射用水中に、下記組成を含
む凍結乾燥製剤を製造した。

（組成＝１バイアル当り） ナトリウムニトロプルシド　　　　　ＩＪｍｇＴＮＦ　
　　　　　　　　　　　　　５Ｘ１０’ｌｌヒト血清ア
ルブミン　　　　　　　　２．０ｍｇマルトース　　　
　　　　　　　　　５００ｇリン酸　２　水素　１　ナ
トリウム・　２　水塩　　　　　　　　１５．６ｍｇリ
ン酸　１　水素　２　ナトリウム・　１２水塩　　　　
　　　　３５．８ｍｇ〔発明の効果〕 ＴＮＦとサイクリックＧＭＰ誘導体又はサイクリックＧ
ＭＰ誘導能を有する物質を含有する新規抗腫瘍剤及びＴ
ＮＦとサイクリックＧＭＰ誘導体又はサイクリックＧＭ
Ｐ誘導能を有する物質を併用した新規抗腫瘍療法は優れ
た抗腫瘍効果を示すことより優れた癌治療剤、治療法と
しての用途が期待できる。

【図面の簡単な説明】

第１図はメスーＡ細胞に対するジブチリルサイクリック
ＧＭＰとＴＮＦの細胞障害活性を示したグラフ、第２図
は種々の癌細胞に対するジブチリルサイクリックＧＭＰ
とＴＮＦの細胞障害活性を示したグラフ、第３図はサイ
クリックＧＭＰ誘導能を有する物質のイソブチルメチル
キサンチン（１，Ｂ、　Ｍ、　Ｘ、　）、又はナトリウ
ムニトロプルシドとＴＮＦのメスーＡ細胞に対する細胞
障害活性を示したグラフである。 特許出願人　　電気化学工業株式会社 代　　理　　人　　　　　中　　本　　　　　　定向　
　　　　　　　井　　上　　　　　　昭同　　　　　　
　　吉　　嶺　　　　　　桂ジブチリルサイクツツクＧ
ＭＰｉ（ｍＭ）第７図 ＋十 ＋　＋ ＋　＋ セ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、腫瘍壊死因子とグアノシン３′，５′−サイクリッ
   クモノホスフェート誘導体又はグアノシン３′，５′−
   サイクリックモノホスフェート誘導能を有する物質を含
   有していることを特徴とする複合抗腫瘍剤。