JPH041136A - 複合抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はリンホトキシンを含有する複合抗腫瘍剤に関す
る。この抗腫瘍剤は、ヒトを包含する哺乳類に投与する
ことにより抗腫瘍療法において使用することができる。

〔従来の技術〕

従来、リンホトキシン（以下、ＬＴと略記する）はリン
パ球及びリンパ系株化細胞から抗原刺激又はマイトジェ
ン刺激によって生産されるリンホカインの一種であり、
種々の癌細胞に対して障害性を有することから抗腫瘍剤
〔エバンス　Ｃ４Ｈ，（Ｂｖａｎｓ　Ｃ，Ｈ，）　　ら
、キャンサー　リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、）第
３７巻、第８９８頁（１９７７）　）としての応用が期
待されている。ＬＴは、遺伝子のクローニング及び発現
が報告されるに至り大量に人手することが可能になった
〔グレイ　ｐ、　′？！。

（Ｇｒａｙ　Ｐ、Ｗ、）ら、ネーチ−？　−（Ｎａｔｕ
ｒｅ）、第３１２巻、第７２１頁（１９８４）］。

〔発明が解決しようとする課題〕

ＬＴは、単独で用いても顕著な抗腫瘍効果を示すものの
、腫瘍の種類、投与方法によっては治療効果ををげるた
めに多量の投与が必要のため副作用がある等欠点も認め
られる。そこでこのリンホカインのより有効な利用法が
求められている。

本発明の目的は、ＬＴを含有する複合抗腫瘍剤を提供す
ることにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明を概説すれば、本発明は複合抗腫瘍剤に関する発
明であって、ＬＴとグアノシン３′。

５′−サイクリックモノホスフェート誘導体又はグアノ
シン３′，５′−サイクリックモノホスフェート誘導能
を有する物質を含有していることを特徴とする。

本発明者らは種々の腫瘍細胞を用いて鋭意検討した結果
、ＬＴをグアノシン３′，５′−サイクリックモノホス
フェート誘導体又はグアノシン３′，５′−サイクリッ
クモノホスフェート誘導能を有する物質と併用すること
により著しく優れた抗腫瘍作用が認められることを見出
し、本発明を完成するに至った。

以下、更に本発明について詳しく説明する。

本発明に用いるＬＴは、その蛋白質の有する性質である
細胞障害活性を持っているものであれば、天然型、遺伝
子組換え型のいずれも使用することが可能である。好ま
しい例は、遺伝子組換え型のＬＴの特開昭６３−８３９
８号、同６３−８３９９号、同６４−６２９８号の各公
報に記載の方法で作成された以下の一般式で示すアミノ
酸配列を有するものが挙げられる。

Ｘ−３ｅｒ−＾５ｎ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｌａ
−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕｌｌｅ−Ｇｌｙ−＾ｓｐ−Ｐ
ｒｏ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ
−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−
＾５ｐ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａ
ｓｎ−ＡｓｎＳｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ
−Ｔｈｒ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−
Ｖａｌ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐ
ｈｅ−３ｅｒ−ＧｌｙＬｙｓ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−３ｅｒ
−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−＾１ａ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−３ｅｒＰ
ｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−１（ｉｓ−Ｇ
ｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−３ｅ
ｒ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｔｌ　１ｓ−
Ｖａ　１−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−３ｅｒ−
Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−Ｌｅｕ−ＧＩｎ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｌｅ
ｕ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ
−＾１ａ−＾１ａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−
Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔ
ｈｒ−）１ｉｓ−Ｔｈｒ−＾５ｐ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｐ
ｒｏ−）１ｉｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｐ
ｒｏ−３ｅｒ−ＴｈｒＶａｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ
−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ　　（但しＸは、Ｎ
ｅｔ−＾５ｐ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−＾１
ａ−Ａｒｇ−ＧｌｎＨｉｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−
Ｈ１ｓ−Ｌｅｕ−＾１ａ−Ｈｉｓ、　Ｍｅｔ−）１ｉｓ
−Ｌｅｕ−＾１ａ−Ｈｉｓ、又はＭｅｔ−Ｈ１ｓ−Ｌｅ
ｕ−Ａ　ｌａを示す）一方、グアノシン３′、５′−サ
イクリックモノホスフェート（以下サイクリックＧＭＰ
と略記する）誘導体とは、細胞膜透過型サイクリックＧ
ＭＰ誘導体を意味し、サゴ２９フ２０導能を有する物質
とは、Ｎｏ　（−酸化窒素）誘導物質（Ｎｏジェネレー
ター）　ホスホジェステラーゼ・インヒビター、及びホ
スホリラーゼＡ２活性化物質等が挙げられる。サイクリ
ックＧＭＰは細胞内で蛋白質のリン酸化に関わる物質で
あるが、いまだにその機能は十分に明らかとはなってお
らず、抗腫瘍効果に関しての報告はない。

具体的に、サイクリックＧＭＰ誘導体としては、細胞膜
透過型サイクリックＧＭＰ誘導体であるジブチリルサイ
クリックＧＭＰ，ブロモサイクリックＧＭＰ，モノブチ
ルサイクリックＧＭＰ、ジブロモサイクリックＧＭＰ等
が使用でき、サゴ２９フ２０ しては、ＮＯ誘導物質であるナトリウムニトロプルシド
、ニトログリセリン、Ｂ７４４−９９　（　２　’。

３′−ジニトロアデノシン−５′−エチルカルボキシア
ミド）等、ホスホジェステラーゼインヒビターであるイ
ソブチルメチルキサンチン、テオフィリン、Ｍ＆Ｂ２２
９４８　（２−ｏ−プロポキシフェニル−８−アザプリ
ン−６ーオン）　、Ｒｏ７２９５６　（３．　４−ジメ
トキシイミダゾリジノン）ＭＹ−５４４５　［　１　−
　（　３−クロロアニリノ）−４＝フエニルフタラジン
］　、ＳＫ＆Ｆ９４１２０　（５（４−アセトアミド−
フェニル）ピラジン−２　　［ＩＨ］　−オン）　、Ｍ
ＩＭＡＸ［１−メｆルー３ーイソブチル−８−（メチル
アミノ）キサンチン〕、ビンポセチン〔エチル（３α，
１６α）エフルナメニン−１４−カルボキシレート、エ
チルアポビンカミン−２２−オエート〕、メバクリン（
ＤＬ−キナクリン−ＨＣｌ）、ハハヘリン、ジビリダモ
ール等、ホスホリラーゼＡ２活性化物質であるＧＴＰ結
合蛋白のトランストシン等を使用することが可能である
。

本発明におけるＬＴとサイクリックＧＭＰ誘導体又はサ
ゴ２９フ２０ 質の配合比率はＬＴｌｍｇに対してサイクリックＧＭＰ
誘導体又はサゴ２９フ２０ 有する物質が１μＭ〜ＩＭが好ましいが、これらの数値
範囲内に制限されるものではない。

本発明の制癌剤が適用可能な疾患は実施例において例示
する繊維肉腫、黒色腫、白血病等、に限らず、腎癌、乳
癌、肺癌、肝癌、ウィルス性疾患など種々なものが挙げ
られる。

また本発明の制癌剤は静脈内注射、筋肉内注射、局所投
与、経口投与、皮下投与等種々の投与形態が可能であり
、それぞれに応じた剤型が可能である。また併用療法と
して用いる際には、投与形態はＬＴとサイクリックＧＭ
Ｐ誘導体又はサイクリックＧＭＰ誘導能を有する物質両
者の投与が同時且つ同一の投与経路である必要はなく、
静脈注射と皮下投与、経口剤と注射剤の組合せなど、種
々の方法が可能である。また、ＬＴとサイクリックＧＭ
Ｐ誘導体又はサイクリックＧＭＰ誘導能を有する物質と
を異なる時間に投与することもできる。その選択、組合
せ、容量、投与タイミング等の選択は医師により最終的
に決定されるべきものである。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明について詳細に説明するが
、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

実施例１ １０％のＦｅ２を含むＲＰＭＩ−１６４Ｄ培地を用いて
イン　ビトロ（Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で継代培養して維持
しているＬＴ抵抗性のメス（Ｍｅｔｈ）　−Ａ　（マウ
ス繊維肉腫）細胞に対するＬＴ（特開昭６３−８３９９
号公報記載のヒトＬＴ）とジブチリルサイクリックＧＭ
Ｐ　（シグマ社製）の細胞障害活性を調べた。メスーＡ
細胞を９６穴マイクロタイタープレート〔ファルコン３
０７２：］に２Ｘ１０’セル／ウエルになるようにＲＰ
ＭＩ培地を用いてまき、ＬＴをＩ　ＸＩＯ’　Ｕ／ｍ１
２になるように添加した系と添加しない系でジブチリル
サイクリックＧＭＰの濃度を０〜４ｍＭまで変化させて
添加し、次いで５％ＣＤ、、３７℃の条件下で４８時間
培養し、その後トリパンブルーを用いて死細胞と生細胞
を染め分は顕微鏡下でその数を数えることで生細胞の割
合を調べた。また、その際の細胞障害活性は以下の式に
よって算出した。

細胞障害活性（％） 上記の結果を第１図に表した。すなわち第１図はメスー
Ａ細胞に対するジブチリルサイクリックＧＭＰ量（ｍＭ
、横軸）とＬＴの細胞障害活性（％、縦軸）との関係を
示したグラフである。

図中、−〇−はＬＴをｌＸ１０’Ｕ／−になるように添
加した系、−・−は添加しない系についての結果である
。

その結果、ＬＴ　１　ｘ１０５Ｕ／ｍｅでは細胞障害活
性をほとんど示さないがジブチリルサイクリックＧＭＰ
を添加することで用量依存的に高い細胞障害活性を示す
ようになった。また、図から明らかなように相乗的に細
胞障害活性が上昇することがわかった。

実施例２ ＬＴ（特開昭６３−８３９９号公報記載のヒトＬＴ）と
ジブチリルサイクリックＧＭＰの相乗作用による細胞障
害活性の上昇を種々の癌細胞を用いて調べた。

浮遊細胞のＨＬ−６０（ヒト前骨芽球系細胞）、［９３
７（ヒト組織腫細胞）　　Ｋ５６２（ヒト赤芽球系白血
病細胞）は実施例１の方法に同様にして細胞障害活性を
調べた。付着細胞であるＮＬ−１７（マウス結腸線癌細
胞）は実施例１の方法に準じて５％ＣＯ２，３７℃の条
件下で、４８時間の培養した後、培養上清及び死細胞を
除去し、残存している生細胞を０．２％クリスタルバイ
オレットを含む２０％エタノールで５分間染色し、水で
よく洗浄してから０．１　ｍｌのアルコール溶液（蒸留
水：　ＭｅＯＨ：　ＢｔＯＨ：　５　：　１　：　４　
）を加えて色素を抽出した。その後、分光光度計で５５
０ｎｍの吸収（Ａｓ５ｏ）を計測することで生細胞数の
割合を求めた。なお、細胞障害活性は以下の式により算
出した。

細胞障害活性（％） 結果を示したのが第２図である。すなわち、第２図は種
々の癌細胞に対するジブチリルサイクリックＧＭＰとＬ
Ｔの細胞障害活性（％、縦軸）を示したグラフである。

その結果、どの細胞もＬＴ　１　ｘｌＯ’　Ｕ／ｍｆ＋
とジブチリルサイクリックＧＭＰ２ｍＭを併用すること
で、その細胞障害活性がそれぞれ単独に比べて増強され
ているのが明らかである。

実施例３ 実施例１と同様の方法を用いてメス−Ａに対する他のサ
ビ２９フ２０ 質とＬＴの併用効果を調べた。サビ２９フ２０ルキサン
チン（１．Ｂ．Ｍ．Ｘ）　　（シグマ社製）とナトＩＪ
　ウムニトロブルシド（シグマ社製）を用いた。

結果を示したのが第３図である。すなわち、第３図は１
，　Ｂ，　Ｍ，　Ｘ．又はナトリウムニトロプルシドと
ＬＴのメスーＡ細胞に対する細胞障害活性（％、横軸）
を示したグラフである。その結果、実施例２と同じよう
ニＩ，Ｂ，Ｍ．Ｘ．　４　０　μＭ、＋）リウムニトロ
プルシド５０μＭのいずれかとＬＴ　１　ｘｌＯ’　Ｕ
／ｍｌ！を併用すると、その細胞障害活性がそれぞれ単
独に比べて相乗的に著しく増強された。

以上、実施例１〜３で記したように、ＬＴとサイクリッ
クＧＭＰ誘導体又はサビ２９フ２０より一層の効果が期
待できる。またそれぞれ単独投与で効果発現が期待でき
る投与量に比べより少量での効果発現も期待できる。こ
れは新たな癌治療剤、治療法としての用途が期待できる
ものである。

〈製剤例〉 製剤例−１ 単位バイアル当り、２−の注射用水中に、下記組成を含
む凍結乾燥製剤を製造した。

（組成：１バイアル当り） １、　　Ｂ．　Ｍ．　Ｘ．　　　　　　　　　　　０．
９　ｍｇＬＴ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
５ｘ１０５［１ヒト血清アルブミン　　　　　　　　２
，０ｍｇマルトース　　　　　　　　　　　　５０　　
ｍｇリン酸　２　水素　１　ナトリウム・　２　水塩　
　　　　　　　１５，６ｍｇリン酸１　水素２ナトリウ
１．−１２水塩　　　　　　　３８、Ｂ　　Ｂ〔発明の
効果〕 ＬＴとサイクリックＧＭＰ誘導体又はサビ２９フ２０ 規抗腫瘍剤及びＬＴとサイクリックＧＭＰ誘導体又はサ
ビ２９フ２０ を併用した新規抗腫瘍療法は優れた抗腫瘍効果を示すこ
とより優れた癌治療剤、治療法としての用途が期待でき
る。

【図面の簡単な説明】

第１図はメスーＡ細胞に対するジブチリルサイクリック
ＧＭＰとＬＴの細胞障害活性を示したグラフ、第２図は
種々の癌細胞に対するジブチリルサイクリックＧＭＰと
ＬＴの細胞障害活性を示したグラフ、第３図はサビ２９
フ２０ンチン（１．　Ｂ．　Ｍ．　Ｘ．　）、又はナト
リウムニトロプルシドとＬＴのメスーＡ細胞に対する細
胞障害活性を示したグラフである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、リンホトキシンとグアノシン３′，５′−サイクリ
   ックモノホスフェート誘導体又はグアノシン３′，５′
   −サイクリックモノホスフェート誘導能を有する物質を
   含有していることを特徴とする複合抗腫瘍剤。