JPH04103539A - 特異的抗体を含有する白色化卵黄及び特異的抗体含有組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野〕 本発明は、特異的抗体を含有する白色化卵黄、該白色化
卵黄の製造方法及び該白色化卵黄を用いて調製される特
異的抗体含有組成物に関する。

［従来の技術］ 一般に、口腔内感染症、消化器官感染症、皮膚感染症、
膣内感染症等は、体外器官又は組織表層への病原ウィル
スあるいは病原細菌による付着が感染の第１ステツプで
ある。これら感染症の病原体を抗原として調製された特
異的抗体は、対応する病原体に結合し、病原体が歯面、
腸管上皮細胞等の体外器官又は組織表層への付着を阻害
することにより感染症の予防あるいは治療に有効である
ことが指摘されている。

通常、特異的抗体は免疫哺乳動物（ウサギ、ヤギ、ウマ
等）を殺し、その血液より分離して得られる。従って該
抗体の大量生産には必然的に多数の動物を犠牲にしなけ
ればならないが、免疫に用いる哺乳動物は高価であるの
みならず、その血液中にはウィルス存在の可能性もあっ
て衛生学的に必ずしも清潔ではなく、その取り扱いに繁
雑な操作と注意を必要とし、また抗体収量も必ずしも良
好でない。

一方、鶏も侵入異物抗原に対し、自己の血液中に特異的
抗体を産生しその鶏卵の卵黄中には該特異的抗体が親鶏
血液から移行して存在する。この事実は、１９６２年に
パターソンらによりはじめて見い出された［Ｐａｔｔｅ
ｒｓｏｎ、　Ｒ，ら：　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

８９．２７２．　　（１９６２）］。

これ以来、鶏を用いてその卵の卵黄中に種々の抗原に対
する特異的抗体が得られることか報告されている。

そして、この鶏の免疫システムを利用して、その鶏卵よ
り抗原特異的抗体の大量調製が可能となった。

このような鶏卵より得られる抗原特異的抗体を用いた感
染症の予防研究も種々進められ、鶏卵抗体を用いた感染
症の予防例が報告されるに至っている（特開昭６２−２
１５５３４号公報）。

［発明が解決しようとする課題］ 従来、鶏卵抗体を用いた感染症病原体に対する特異的抗
体を含有する組成物は、通常、特異的抗体を含有する卵
黄の卵黄液、卵黄粉末などを飼料、食品、化粧品、医療
用品（例えば、医薬部外品）等に配合することにより調
製されている。

しかしながら、この場合卵黄の有する特有な色、臭い及
び味が配合する商品へ混入し、その商品価値をそこなｔ
という問題が指摘されている。

この問題を解決する方法として、卵黄から特異的抗体を
精製し利用する試みがなされている。しかし、この場合
、卵黄特有の色、臭い及び味は特異的抗体の精製度が上
るに従い減少するが、反面特異的抗体の精製工程が複雑
化しかつ経済的にコストが非常に高くなるという問題が
生ずる。

このような課題に鑑み、当業界では卵黄由来の色、臭い
及び味に問題がな（かつ比較的低コストで製造可能な特
異的抗体含有組成物の開発が期待゛されているが、未だ
充分なものは見い出されていないのが実情である。

本発明の目的は、このような卵黄の色、臭い及び味に問
題のない特異的抗体を含有する白色化卵黄を提供するこ
とにある。

本発明の他の目的は、前記白色化卵黄の製造方法を提供
することにある。

本発明のさらに他の目的は、前記白色化卵黄を用いて調
製される特異的抗体含有組成物を提供することにある。

［課題を解決するための手段］ 従来より、産卵鶏をカロチノイド類の少ない飼料で飼育
すると卵黄は白色化し、鶏卵の商品価値が低下すること
が知られている。従って、通常の産卵鶏飼育用の配合飼
料はカロチノイド類を多く含有するとうもろこしが主成
分であり、尚かっ、コーングルテンミール、コーンジャ
ームミール、アポカロチン酸エステル、カンタキサンチ
ン、アルファルファミール等のカロチノイド類含有素材
を配合したものである。

従来、鶏卵抗体を得る場合も、前記のようなカロチノイ
ド類を含有する配合飼料で飼育する方法が用いられてき
たが、本発明者らは前記課題を解決するために、あらか
じめ抗原で免疫された産卵鶏をカロチノイド類を実質的
に含まない飼料で飼育することにより、通常の飼料で飼
育した場合と比較し、意外にも抗原特異的抗体の鶏卵卵
黄中への産生量を何ら低下させることなく、卵黄のみが
白色化することを見い出した。さらにその白色化卵黄は
、従来の卵黄色が白色化するのみならず、卵黄特有の風
味すなわち、動物臭と黄味味までも非常に少なくなるこ
とを見い出し、さらに研究を重ねて本発明を完成するに
至った。

即ち、本発明の趣旨は、 （１）　　予め抗原で免疫された鶏が産卵した卵より得
られる、特異的抗体を含有する白色化卵黄、（２）予め
抗原で免疫された鶏を、カロチノイド類を実質的に含ま
ない飼料で飼育することを特徴とする、特異的抗体を含
有する白色化卵黄の製造方法、並びに （３）特異的抗体を含有する白色化卵黄を用いて調製さ
れる特異的抗体含有組成物、 に関する。

本発明の特異的抗体を含有する白色化卵黄は、特異的抗
体を含有している白色化した卵黄であり、その白色化度
合はロツシュ社製のＹｏｌｋ　Ｃｏ１ｏｕｒ　Ｆａｎで
通常２以下の白色度を示すものである。

この白色化卵黄は色が白色であると同時に臭いや味につ
いても通常の卵黄とは異なり、動物臭や黄味味が殆んど
感じられないものである。

白色化卵黄中に含有される特異的抗体は、通常の鶏卵卵
黄から得られるものと抗体価及びその産生量において何
ら異なるものではない。

この特異的抗体を含有する白色化卵黄は、以下のように
して得ることができる。

予め抗原で免疫された鶏を、カロチノイド類を実質的に
含まない飼料で飼育し、その鶏が産卵した卵より得られ
る。

ここで用いられる抗原は、抗原となるものであれば特に
限定されるものではなく、例えば花粉、細菌、ウィルス
、カビ、アレルゲン、罹患動物の血液、精子、毒素など
種々のものが例示され、該抗原に対する特異的抗体の使
用目的に応じて適宜選択される。

特異的抗体の使用目的からみた場合、特に抗原が感染症
病原体である場合の特異的抗体を含有する飼料、食品、
化粧品、医療用品等の開発が期待されている。

抗原が感染症病原体の場合については、特に限定される
ものではないが具体的に次のようなものが例示される。

例えば、口腔内で歯面への付着が感染原因となるストレ
プトコッカス・ミュータンス、ストレプトコッカス・ソ
ブリヌス等のう蝕誘発菌、胆管内上皮細胞への付着が感
染原因とされるロタウィルス、アデノウィルス等のウィ
ルス性下痢症病原体、サルモネラ菌、コレラ菌、チフス
菌、カンピロバクタ−５病原性大腸菌等の細菌性下痢症
病原体、咽頭部への付着が感染原因とされるインフルエ
ンザウィルス等のインフルエンザ病原体、皮膚面での付
着増殖が感染原因とされるプロピオニバクテリウム・ア
クネス等のニキビ菌、白癬菌等の水虫菌など、種々の感
染症の病原体の１種あるいは２種以上の複合抗原が用い
られる。

免疫される鶏としては、特に制限はないが、抗体の量産
性などの点からは、白色レグホン系、ロードアイランド
レッド系、横斑プリマスロック系、ニューハンプシャー
系等の卵用種を用いるのが特に好ましい。

免疫方法としては、皮下注射、筋肉注射、腹腔内投与等
、鶏を免疫することのできる方法であれば特に制限はな
い。

抗原の投与量は所望の抗体価が得られ、かつ鶏に対して
悪影響を与えない程度の量を適宜選択すればよい。

通常、初回免疫後、毎週１回で３〜５回程度くり返し投
与すると、抗原に特異的に反応する抗体が鶏卵中に得ら
れる。

その後、抗体価の維持を目的として１〜４月毎に追加免
疫すると良い。

また、必要に応じてＦＣＡ（フロイント完全アジュバン
ト）、ＦＩＡ（フロイント不完全アジュバント）等のア
ジュバントを併用して免疫しても良い。

このようにして通常、初回免疫から１力月以上経過する
と、鶏卵中から十分な抗体価を有する抗体を調製するこ
とができる。

鶏卵中の特異的抗体価は、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ
）、ラジオイムノアッセイ、マイクロタイター法等を用
いて測定することができ、免疫後に２週間程度の間隔で
抗体価を測定することにより抗体価の推移を追跡するこ
とができる。

本発明では、このようにして免疫された鶏を、カロチノ
イド類を実質的に含まない飼料を用いて飼育する。

ここで、カロチノイド類とは、ルティン、ゼアキサンチ
ン、クリプトキサンチン等のキサントフィル類、及びβ
−カロチンに代表されるカロチン類である。

卵黄の色素は大部分がカロチノイド系の色素であるが、
卵黄の色をつくり出すカロチノイド類は鶏の体内では合
成されず、もっばら飼料に由来するものである。

本発明の白色化卵黄は、飼料中にカロチノイド類を実質
的に含まない飼料で飼育すれば容易に得ることができる
。

即ち、カロチノイド類を実質的に含まない飼料とは、産
卵鶏の配合飼料中に実質的に卵黄へのカロチノイド供与
体となるものが配合されていないものであればよい。例
えば、通常の産卵鶏配合飼料中、卵黄へのカロチノイド
供与体となるとうもろこし、コーングルテンミール、コ
ーンジャームミール、コーングルテンフィード、アポカ
ロチン酸エステル、カンタキサンチン等を少なくとも含
まず、マイロ、小麦、米を主要穀類として、大豆油かす
、なたね油かす、ミートポーンミール、魚粉、フィツシ
ュソルブル、米ぬか、ふすま、カキガラ、炭酸カルシウ
ム、食塩、動物性油脂、リン酸カルシウム、及び産卵鶏
への使用を認められているビタミン、ミネラル等の微量
成分を配合し、粗タンパク質で１７％以上、代謝エネル
ギーで２８２０　Ｋｃａｌ／ｋｇ以上となるよう配合し
た飼料を挙げることができる。

このようにして飼育された鶏が産卵した卵より得られる
卵黄は白色化しており、その白色化度合は前記の如くロ
ツシュ社製のＹｏｌｋ　Ｃｏ１ｏｕｒ　Ｆａｎで通常２
以下である。

本発明の特異的抗体含有組成物は、前記のようにして免
疫した鶏の卵より、本発明の白色化卵黄を分離し、卵黄
をそのままで、あるいは卵黄液を粉末化した卵黄粉末と
して、又は卵黄液をカラギナン等を用いて卵黄リポタン
パク質を除去した卵黄水溶性タンパク質を粉末化した卵
黄水溶性タンパク質粉末として調製し、飼料、食品、化
粧品又は医療用品（例えば、医薬部外品）等に配合する
ことにより調製することができる。

卵黄粉末の調製は、常法により行なうことができ、例え
ばスプレードライヤを用いて容易に行なうことができる
。また、卵黄水溶性タンパク質粉末の調製も常法により
行なうことができ、例えば、デキストラン硫酸やポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ）、寒天、カラギナン、ファ
ーセレラン、ペクチン、キサンタンガム、アルギン酸、
アルギン酢塩、アルギン酸誘導体等を用いてリポタンパ
ク質を沈澱させ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈ。

ｄｓ、　４６．６３−６８．１９８１　／　ｒｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ、　９
（５）、４７５−４９３．１９８０　／特開昭６３−２
１５６９９号／特開昭６４−３８０９８号）、その上清
を粉末化する方法や、プロパツール、クロロホルム等を
用い卵黄中の脂質を脱脂したのち、その残渣を粉末化す
る方法等、公知の種々の方法が用いられる。

白色化卵黄の配合量は、特異的抗体の種類、配合組成物
の種類により異なるが、特異的抗体の効果が発揮され得
る必要量を配合させればよい。

本発明の特異的抗体含有組成物は、特異的抗体の用途に
応じて種々の態様がある。例えば、抗原がう蝕誘発菌で
ある場合の特異的抗体であれば、その特異的抗体を含有
する白色化卵黄をチョコレート、アイスクリーム、チュ
ーイングガム、グミキャンデイ−、ヨーグルト、成分調
整牛乳、ベビーフード、飲料等の食品、あるいはうがい
液、練り歯みがき、口腔パスタ等の医薬部外品に配合す
ることにより特異的抗体含有組成物を調製することがで
きる。本発明の白色化卵黄は卵黄特有の味、臭い、色が
ほとんどない為、これらの配合商品が本来有する味、臭
い、色をそこなわないう蝕予防食品あるいはう蝕予防効
果を有する医薬部外品が得られる。

これらのう蝕予防組成物の場合、白色化卵黄の配合量は
通常、抗体として０．０５重量％以上を含有するよう調
製される。

抗原が下痢症病原体である場合の特異的抗体においては
、その特異的抗体を含有する白色化卵黄を子豚代用乳、
修生用飼料等の家畜飼料及びベビーフード、育児調製粉
乳、経口流動食等の食品に配合することにより調製する
ことができる。

本発明の白色化卵黄は、卵黄特有の味、臭い、色がほと
んどない為、家畜及び人の嗜好性を高めた下痢症予防飼
料あるいは食品が得られる。

これらの下痢症予防組成物の場合、白色化卵黄の配合量
は通常抗体として０．０５重量％以上を含有するよう調
製される。

抗原がインフルエンザウィルスである場合の特異的抗体
においては、その特異的抗体を含有する白色化卵黄を前
記のう蝕予防組成物の場合と同様の食品や医薬部外品に
配合することによりインフルエンザ予防食品あるいはイ
ンフルエンザ予防効果を存する医薬部外品が得られる。

また、抗原がニキビ菌である場合は、ニキビ菌に対する
特異的抗体を含有する白色化卵黄をフェースバック剤、
洗顔クリーム、石けん等の化粧品に配合することにより
、これらの配合商品の商品価値をそこなわないニキビ予
防化粧品が得られる。

［発明の効果］ 本発明の特異的抗体を含有する白色化卵黄は、卵黄特有
の黄色、動物臭及び味の殆どないものであるため、白色
化卵黄中の抗体を精製することなく白色化卵黄をそのま
まで、あるいは卵黄粉末、卵黄水溶性タンパク質粉末と
して用いても、配合商品の本来の色、臭、味を損なわな
い特異的抗体含有組成物を得ることができる。

また、抗体の単離、精製工程が必要でないことから比較
的低コストで製造することができる。

［実施例］ 以下、実施例及び試験例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例に制限されるもので
はない。

試験例１ く産卵鶏への免疫及び産卵率の変化〉 抗原としては、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓ
、ｍｕｔａｎｓ）　ＭＴ　８１４８血清型Ｃを用いた。

Ｓ、　ｍｕｔａｎｓを５％スクロース含有プレインハー
トインフュージョン培地で３７°Ｃ１４８時間静置培養
した後、培養液に対し、０．５％（Ｖ／Ｖ）となるよう
にホルマリンを加え、３７°Ｃ１２４時間放置し、菌体
の不活化処理を行った。培養液を遠心分離（１０，ＯＯ
Ｏｘｇ、１０分間）し沈殿物を集め、この沈殿物を生理
食塩水で３回洗浄した。沈殿物を生理食塩水に懸濁し、
ホモミキサー（ヒスコトロン）で均質化した後、吸光度
６６０ｎｍにおける吸収（濁度）を８．０とし、抗原液
の調製を行った。

産卵鶏は、白色レグホン系の鶏を１群１０羽づつ、Ａ、
Ｂ、Ｃ群の３群に分けた。Ａ、　　Ｂ群には、１羽当り
抗原！７７Ｌ７７を筋注で免疫した。免疫は毎週１回、
初回を含めて４回くり返した。その後は卵黄中の抗原特
異的抗体価の維持を目的として、３ケ月毎に１度の免疫
を行った。Ｃ群については免疫を行わず、コントロール
産卵鶏とした。

初回免疫後、Ａ、　　Ｃ群は通常の成鶏飼育用配合飼料
（日本農産工業株式会社製、Ｓ−セブンＡ）で飼育した
。Ｂ群はカロチノイド類を含まない白色化卵黄飼料で飼
育した。本試験で用いた白色化卵黄飼料の原材料配合率
を表−１に示す。

〔以下余白〕

表−１白色化卵黄飼料の原材料配合率 原材料区分　　　　原材科名　　　　配合率１、穀　　
　類　　　玄　米　　　　４０％マイロ　　　　１５％ 小麦　　１１％ ２、植物性油かす類　　大豆油がす　　　１３％３、動
物質性飼料　　魚　粉　　　　４％脱脂粉乳　　　　４
％ ４、そうこう類　　　米ぬか　　　　３％ふすま　　　
　　２％ ５、そ　の　他　　炭酸カルシウム　　４．５％力　　
キ　　ガ　　ラ　　　　１．５％リン酸カルシウム　　
１．５％ 食　　　　塩　　　　０．２７％ ビタミンミネラル　０．２３％ 合　　　計　　　　１００　％ また、Ａ、　　Ｂ、　Ｃ群の初回免疫後の産卵率の変化
を表−２に示す。表−２より白色化卵黄飼料で飼育した
Ｂ群の産卵率は通常の成鶏用配合飼料で飼育したＡ、　
Ｃ群の配卵率と何ら変化は認められなかった。

表−２ 産卵率の変化 初回免疫〜１ケ月 １〜２ケ月 ２〜３ケ月 ３〜４ケ月 ４〜５ケ月 ５〜６ケ月 ６〜７ケ月 ７〜８ケ月 ８〜９ケ月 ９〜１０ケ月 １０〜１１ケ月 １１〜１２ケ月 ８３％　　　８２％ ７９％　　　８０％ ８３％　　　８１％ ８４％　　　８４％ ８２％　　　８１％ ８０％　　　８３％ ７２％　　　７６％ ７３％　　　７０％ ６９％　　　６８％ ６５％　　　６３％ ６１％　　　６６％ ６３％　　　６２％ ８２％ ８０％ ８５％ ８５％ ８１％ ７９％ ７４％ ６７％ ６５％ ６８％ ６４％ ５９％ 試験例２ 〈卵黄中の抗原特異的抗体価の推移〉 初回免疫後、卵黄中の抗原（スクロース培養Ｓ。

ｍｕｔａｎｓ菌体）特異的抗体価の変化を酵素免疫測定
法（ＥＬＩＳＡ）により測定した。試験例１で用いた抗
原液を遠心分離し、その沈殿物をコーティングバッファ
ー（０，１Ｍ炭酸ナトリウムバッファーｐＨ９，６）で
充分洗浄後、同バッファーに懸濁し、６６０ｎｍにおけ
る吸光度を１．０に調整した。この液１００μｌをＥＬ
ＩＳＡ９６穴プレートの穴中レートたりに添加し、５°
Ｃ１−夜装置でコーティング操作を行った。ウェルをＰ
ＢＳ−Ｔｗｅｅｎ　（０，５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む生
理的リン酸バッファーｐＨ７，２）で洗浄後、ＰＢＳ−
Ｔｗｅｅｎで１，０００倍に希釈した卵黄の１００μｌ
をウェルへ添加した（ｎ＝３／サンプル）。室温２時間
放置後、ウェルをＰＢＳ−Ｔｗ　ｅ　ｅ　ｎで洗浄し、
次にＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで２゜０００倍希釈した。抗ニ
ワトリＩｇＧ−ウサギＩｇＧアルカリフォスファターゼ
コンジュゲート（ザイメット社製）の１００Ｉｌｆをウ
ェルへ添加した。室温２時間放置後、ウェルをＰＢＳ−
Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次に基質バッファー（ジェタノー
ルアミンバッファーｐＨ９，８）に溶解したｐニトロフ
ェニルホスフェ−）（１■／−）溶液の１００μｌをウ
ェルへ添加し、室温３０分間酵素反応を行った。酵素反
応は２ＭＮａＯＨ溶液の５０μｌをウェルへ添加し停止
させた。プレートリーダーにより各ウェルの４０５ｎｍ
における吸光度を測定し、ブランク値（卵黄液の代りに
ＰＢＳ−Ｔｗｅ　ｅｎ　１００μｌを用いたもの）を引
き、ＥＬＴＳＡ　　ｖａｌｕｅを卵黄中の抗原特異的抗
体価とした。Ａ、Ｂ、Ｃ群の卵黄中の抗原特異的抗体価
の推移を第１図に示す。通常の成鶏飼育飼料及び表−１
の白色化卵黄飼料で飼育した免疫部（Ａ群及びＢ群）で
は、初回免疫後の卵黄中抗原特異的抗体価の差は認めら
れなかった。

試験例３ く卵黄色の測定及び卵黄粉末の官能検査〉初回免疫後、
Ａ、　　Ｂ、　　Ｃ群の産卵鶏について、その卵黄の色
の変化をロツシュ社製のＹｏｌｋ　Ｃｏ１ｏｕｒ　Ｆａ
ｎを用いて測定した。結果を表−３に示す。

通常の成鶏飼育用配合飼料を用いたＡ群、Ｃ群ではその
卵黄色は産卵期間を通じ、Ｙｏｌｋ　Ｃｏ１ｏｕｒ　Ｆ
ａｎでｌＯ〜１２の間であった。白色化卵黄飼料で飼育
したＢ群では、免疫後３週目にはＹｏｌｋ　Ｃｏ１ｏｕ
ｒ　Ｆａｎ　２以下となり、その後産卵期間を通じ１〜
２の値となった。

表−３初回免疫後の卵黄色の変化 衣にＡ、Ｂ、Ｃ群の初回免疫後、１〜４ケ月の鶏卵をそ
れぞれ集め卵黄を分離し、スプレードライ法で粉末化し
た。それぞれの卵黄粉末の色、味、臭いについてパネラ
−１０人で官能検査を行った。

その結果を表−４に示す。白色化卵黄は粉末化するとほ
とんど白色であり、かつ卵黄特存の味がなく、非常に淡
白な味であるという評価を得た。また、臭いについては
卵黄特有の動物臭がなく、この点においても食品等への
抗原特異的抗体付与素材として従来の卵黄粉末より優れ
るものであるという結果を得た。なお、評価基準は０〜
１０点の段階で評価し、各スコアー〇平均値で結果を示
した。色については、完全な白色を０点とし、卵黄色を
１０点とした。味は卵黄の味を全く感じないものを０点
とし、卵黄の味の強いものを１０点とした。臭いは動物
臭を全く感じないものを０点とし、動物臭の強いものを
１０点とした。

表−４卵黄粉末の官能検査評価結果 実施例１ くう蝕誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄の調製〉抗原と
しては、Ｓ、ｍｕｔａｎｓ　　ＭＴ　８１４８　（血清
型Ｃ）とＳ、５ｏｂｒｉｎｕｓ　６７１５　（血清型ｇ
）の混合抗原を用いた。それぞれの菌をＢＩＴ培地で３
７°Ｃ１４８時間培養後、０．５％（ｖ／ｖ）ホルマリ
ンで菌体の不活化処理を行った。さらに菌体は生理食塩
水で充分に洗浄した。

抗原液は、その１ｒｎｌ中にそれぞれの不活化菌体を１
０ａ個づつ含むように調製した。産卵８１００羽を用い
、１羽あたり抗原液１ｍｌと水酸化アルミニウムゲル１
−の混合液を筋注で免疫した。免疫は毎週１回で初回免
疫を含めて合計４回行った。

初回免疫後、産卵鶏は試験例１で用いた白色化卵黄飼料
で飼育した。４回目の免疫後、３ケ月間に産卵した鶏卵
７３８０個より卵黄を分離し、ＹｏｌｋＣｏｌｏｕｒ　
Ｆａｎで２以下の白色化卵黄液１１７．５ｋｇを得た。

この白色化卵黄液１　ｍｌに対し生理的リン酸バッファ
ーｐＨ７，２／ｍｌ及びクロロホルム２ｒＩＬｌを混合
し、遠心分離後の水層を卵黄４倍希釈液としてそれぞれ
の抗原に対する特異的抗体価を測定したところ、Ｓ、ｍ
ｕｔａｎｓ　　ＭＴ　８１４８、Ｓ、ｓ。

ｂｒｉｎｕｓ　　６７１５いずれの菌に対する凝集抗体
価も５１６倍であった。

凝集抗体価は卵黄２″倍希釈液の５０μｌとマツクハラ
ンド濃度５に調製した菌液５０μｌを混合し、３７°Ｃ
で２時間反応させた後、５°Ｃ１２４時間放置し、目視
検査を行い、菌体の凝集が確認できる卵黄液の最大希釈
倍率であられした。

本実施例で得た白色化卵黄液１１７．５ｋｇは６３　’
Ｃ１３，５分間の殺菌後、スプレードライヤで粉末化し
、う蝕誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄粉末５５．８ｋ
ｇを得た。該白色化卵黄粉末の抗体純度は５ＲＩＤ法で
１．５％であった。

実施例２ くう蝕誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄を配合したアイ
スクリームの調製〉 無塩バター０．７ｋｇ、全脂練乳１．０ｋｇ、牛乳３、
Ｏｋｇ、脱脂粉乳０．０５ｋｇ、グラニユー糖０゜４ｋ
ｇ、水あめ（７５％ブリックス）１．４ｋｇ、乳化安定
剤０．０５ｋｇ、水２．６ｋｇ及び実施例１で得たう蝕
誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄粉末０゜５ｋｇを混合
し、７０°Ｃ１１０分間の加温溶解した。

次いでこの混合液をホモジナイザーした後、８０℃、１
５秒間の殺菌を行った。殺菌後ただちに５°Ｃまで冷却
し、ワニラエッセンスを適量添加し、再度アイスクリー
ムミックスを均質化した。次いで、エージング後、フリ
ージングを行い、う蝕誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄
を配合したアイスクリームを作製した。得られたアイス
クリームは卵黄特有の風味及び色が全くないものであっ
た。

実施例３ くう蝕誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄を配合したチョ
コレートの調製〉 カカオマス１．５ｋｇ、カカオ脂２．１ｋｇ、粉糖４．
４ｋｇ、レシチン０．０５ｋｇ、全脂粉乳１．６ｋｇを
ミキサーで混合しリファイニング及びコンチング終了後
、テンバリング工程において、チョコレート品温的４０
°Ｃで実施例１で得られたう蝕誘発菌特異的抗体含有白
色化卵黄粉末を０．３５ｋｇ添加し均質化した。その後
、型流−し・冷却工程を経て、う蝕誘発菌特異的抗体含
有白色化卵黄を配合したチョコレートを作製した。得ら
れたチョコレートは卵黄特有の風味が全くないものであ
った。

実施例４ くう蝕誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄を配合した練り
はみがきの調製〉 第２リン酸カルシウム・２水和物５ｋｇ、ソルビット１
．０ｋｇ、グリセリン１．０ｋｇ、カルボキシメチルセ
ルロース０，１ｋｇ、リジウムラウリルサルフェー）０
．２ｋｇ、香料０，１ｋｇ、サッカリン０．０１ｋｇ、
実施例１て得たう蝕誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄粉
末０．５ｋｇ、及び水２．０９ｋｇを配合することによ
りう蝕誘発菌特異的抗体含有白色化卵黄粉末を配合した
練りはみがきを得た。

得られた練りはみがきは卵黄特有の風味及び色が全くな
いものであった。

実施例５ 〈仔豚下痢症病原体特異的抗体含有白色化卵黄の調製〉 抗原としては、仔豚下痢症の病原体として、病原性大腸
菌に８８抗原産生株、Ｋ９９抗原産生株、９８７Ｐ抗原
産生株及びブタロタウィルス（ｏＳＵ株）の混合抗原を
用いた。病原性大腸菌については、それぞれの菌株をＢ
ＨＩ培地て３７°Ｃ１２４時間培養した後、０．５％（
Ｖ／Ｖ）ホルマリン処理で菌体の不活化を行った。菌体
は生理食塩水で充分洗浄した。

ブタロタウィルスはあらかじめ１０％（Ｖ／Ｖ）修生脂
児血清含有ミニマムエッセンシャル培地（ＭＥＭ）で培
養したサル腎細胞（ＭＡ　１０４細胞）を宿主として常
法に従い感染増殖させ、その培養液より３５％ショ糖溶
液を用いた超遠心法（１００゜０００Ｘｇ、３時間）で
ウィルス粒子をベレット状に沈殿精製した。このウィル
ス粒子を生理食塩液に懸濁しＥＤＴＡ処理でウィルスの
不活化を行った。

抗原液はその１ｒＩＬｌ中にそれぞれの大腸菌１０８個
づつ及びウィルス（Ｌｏｗｒｙタンパク質量として）５
０μｇ含むものを調製した。産卵鶏５０羽を用い、１羽
あたり抗原液１７７＋７７と、水酸化アルミニウムゲル
ｌ艷の混合液を筋注で免疫した。免疫は隔週１回で初回
免疫を含めて合計４回行った。

初回免疫後、産卵鶏は試験例１で用いた白色化卵黄飼料
で飼育した。４回ｇの免疫後、２ケ月間に産卵した鶏卵
２１０３個より卵黄を分離し、ＹｏｌｋＣｏｌｏｕｒ　
Ｆａｎで２以下の白色化卵黄液３４．３ｋｇを得た。こ
の白色化卵黄液１ｒｎｌに対し、生理的リン酸バッファ
ー（ｐＨ７，２）１−及びクロロホルム２−を混合し遠
心分離後の水層を卵黄４倍希釈液として、それぞれの抗
原に対する特異的抗体価を測定したところ、大腸菌に８
８抗原産生株、Ｋ９９抗原産生株、９８７Ｐ抗原産生株
、に対する凝集抗体価でそれぞれ５１２倍、２５６倍、
２５６倍であった。またブタロタウィルスに対する中和
抗体価は２５６倍であった。

大腸菌に対する凝集抗体価は卵黄２″′倍希釈液の５０
μｌとマツクハランド濃度５に調製した。

大腸菌液５０μ！を混合し、３７°Ｃ１２時間反応させ
た後、５℃、２４時間放置し、目視検査を行い、菌体の
凝集が確認できる卵黄液の最大希釈倍率で示した。

ロタウィルスに対する中和抗体価は卵黄２″倍希釈液５
０μｌとブタロタウィルス（Ｏ３Ｕ株）５０μｌを混合
し、３７°Ｃ１１時間反応させた後、ＭＡ　１０４細胞
に感染させ、３７°ＣＳ　１６時間後に細胞をメタノー
ル固定し、細胞上の感染ウィルス数を蛍光抗体法で測定
する時、感染を１００％阻害する卵黄の最大希釈倍率で
示した。尚、本測定系では、ＭＡ　Ｉ　０４細胞数に対
する感染ウィルス数として２０：１を用いた。

実施例６ く修生下痢症病原体特異的抗体含有白色化卵黄の調製〉 抗原としては修生下痢症の病原体として病原性大腸菌に
９９抗原産生株とウシロタウィルス（ＮＣＤＶ株）の混
合抗原を用いた。

病原性大腸菌はＢＨＩ培地で３７°Ｃ１２４時間培養し
た後、０．５％（Ｖ／Ｖ）ホルマリン処理で菌体の不活
化を行った。次に菌体を生理食塩水で充分洗浄した。

ウシロタウィルスはあらかじめ１０％（Ｖ／Ｖ）仔牛胎
児血清含有ミニマムエツセンシャル培地（ＭＥＭ）で培
養したサル腎細胞（ＭＡ　１０４細胞）を宿主として常
法に従い感染増殖させ、その培養液より３５％ショ糖溶
液を用いた超遠心法（１００゜０００Ｘｇ、３時間）で
ウィルス粒子を沈殿させ精製した。このウィルス粒子を
生理食塩水に懸濁させ、ＥＤＴＡ処理でウィルスの不活
化を行った。

抗原液はその１ｍｌ中に大腸菌１０”個及びロタウィル
ス（Ｌｏｗｒｙタンパク質量として）５０μｇ含むもの
を調製した。

免疫に産卵鶏１０羽を用い、１羽あたりに抗原液１　ｍ
ｌと水酸化アルミニウムゲル１　ｍｌの混合液を筋注て
免疫した。免疫は隔週１回で初回免疫を含めて合計４回
行った。初回免疫後、産卵鶏は試験例１で用いた白色化
卵黄飼料で飼育した。４回目の免疫後、２ケ月間に産卵
した鶏卵４８５個より卵黄を分離し、Ｙｏｌｋ、　Ｃｏ
１ｏｕｒ　Ｆａｎて２以下の白色化卵黄液７．３ｋｇを
得た。この卵黄液について大腸菌及びウシロタウィルス
に対する特異的抗体価を実施例５と同様の方法で調べた
ところ、大腸菌に９９抗原産生株に対する凝集抗体価で
５１２倍、ウシロタウィルス（ＮＣＤＶ株）に対する中
和抗体価で２５６倍であった。

実施例７ 〈ヒトロタウィルス特異的抗体含有白色化卵黄の調製〉 抗原としてヒトロタウィルスＷａ株（血清型１）とＭｏ
株（血清型３）の混合抗原を用いた。

ヒトロタウィルスはあらかじめ１０％（ｖ／Ｖ）修生脂
児血清含有ミニマムエッセンシャル培地（ＭＥＭ）で培
養したサル腎細胞（ＭＡ　１０４細胞）を宿主として常
法に従い感染増殖させ、その培養液より３５％ショ糖溶
液を用いた超遠心法（１００，０００Ｘｇ、３時間）で
ウィルス粒子を沈殿させ精製した。このウィルス粒子を
生理食塩水に懸濁させ、ＥＤＴＡ処理でウィルスの不活
化を行った。

抗原液は、その１７７Ｉｌ中に、Ｌｏｗｒｙタンパク質
量としてＷａ株とＭｏ株のそれぞれを５０μｇづつ含む
ものを調製した。免疫は産卵鶏１０羽を用い１羽あたり
に抗原液１イと水酸化アルミニウムゲル１−の混合液を
筋注で免疫した。免疫は隔週１回で初回免疫を含めて合
計４回行った。初回免疫後、産卵鶏は試験例１で用いた
白色化卵黄飼料で飼育した。４回目の免疫後、３ケ月間
に産卵した鶏卵７０２個より卵黄を分離し、Ｙｏｌｋ　
Ｃｏ１ｏｕｒ　Ｐａｎて２以下の白色化卵黄液１１．５
ｋｇを得た。この卵黄液を６３°Ｃ１３，５分間殺菌し
、スプレードライヤーで粉末化し、ヒトロタウィルス特
異的抗体含有白色化卵黄粉末５．６ｋｇを得た。

該白色化卵黄粉末５０ｇを生理的リン酸バッファ　　（
ｐＨ７，２）に溶解し、１００ｍｊ’とした後、この液
を用いてヒトロタウィルスに対する中和抗体価を実施例
５と同様の方法で調べたところ、Ｗａ株に対し、５１２
倍、Ｍｏ株に対して２５６倍であった。

実施例８ くニキビ菌特異的抗体含有白色化卵黄の調製〉抗原とし
てプロピオニバクテリウム・アクネスＧＡＩ５４１９を
ＧＵＭ培地で嫌気的に３７°Ｃ１７２時間培養した後、
０．５％（・＋、／Ｖ）ホルマリン処理で菌体の不活化
を行った。次いで菌体を生理食塩水で充分洗浄した。生
理食塩水１−中に開園を１０９個懸濁させ抗原液として
用いた。産卵鶏１０羽に対し、１羽当り抗原液１ｍｌと
し水酸化アルミニウムゲル１ｍｌを混合し筋注により免
疫した。

免疫は毎週１回で初回免疫を含めて５回行った。

最終免疫より２ケ月間に産卵した鶏卵４６２個より卵黄
を分離し、Ｙｏｌｋ　Ｃｏ１ｏｕｒ　Ｆａｎで２以下の
白色化卵黄７．８ｋｇを得た。この卵黄液についてプロ
ピオニバクテリウム・アクネスに対する凝集抗体価を実
施例５と同様の方法で調べたところ５１２倍であった。

この白色化卵黄液を６３°Ｃ１３゜５分間殺菌し、スプ
レードライヤーで粉末化し、ニキビ菌特異的抗体含有白
色化卵黄粉末３，１ｋｇを得た。該白色化卵黄粉末の抗
体純度は５ＲＩＤ法で１．６％であった。

実施例９ くニキビ菌特異的抗体含有白色化卵黄を配合した抗ニキ
ビ皮膚外用剤の調製〉 実施例８で得られたニキビ菌特異的抗体含有白色比卵黄
粉末５．０％、ソルビトール５．０％、グリセリン５．
０％、カオリン３０．０％、亜鉛華５．０％、酢酸ビニ
ル系乳剤２５．０％及び精製水２５．０％を配合し、抗
ニキビ皮膚外用剤（フェースバック）を試作した。本島
は卵黄特有の色、臭いの全く気にならない抗ニキビ皮膚
外用剤であった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、卵黄中の抗原特異的抗体価の推移を示した図
である。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）予め抗原で免疫された鶏が産卵した卵より得られ
   る、特異的抗体を含有する白色化卵黄。
2. （２）請求項（１）記載の抗原が、感染症病原体である
   請求項（１）記載の特異的抗体を含有する白色化卵黄。
3. （３）請求項（２）記載の感染症病原体が、う蝕誘発菌
   、下痢症病原体、インフルエンザウイルス、ニキビ菌又
   は白癬菌である請求項（２）記載の特異的抗体を含有す
   る白色化卵黄。
4. （４）予め抗原で免疫された鶏を、カロチノイド類を実
   質的に含まない飼料で飼育することを特徴とする、特異
   的抗体を含有する白色化卵黄の製造方法。
5. （５）請求項（１）、（２）又は（３）記載の特異的抗
   体を含有する白色化卵黄を用いて調製される特異的抗体
   含有組成物。
6. （６）請求項（５）記載の特異的抗体含有組成物が飼料
   、食品、化粧品又は医療用品である請求項（５）記載の
   特異的抗体含有組成物。