JPH0378654A - 血管障害判定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、各種の生体内体液中のトロンボモジュリンを
測定することによって血管障害を判定する方法に関する
。

（従来の技術） 血管内皮細胞は血液凝固調節系の反応と深く関わってい
るが、その凝固調節機構の一因子として血管内皮細胞表
面に分布する膜蛋白ｖトロンボモジュリンがある。トロ
ンボモジュリンはトロンビンとの複合体を形成すること
により、プロティンＣの活性化を著しく促進させる。プ
ロティンＣは、凝固系補酵素の第Ｖ因子及び第■因子を
選択的に失活させ、強力な抗凝固作用を示すとともに、
血管ブラスミノーゲンアクチベーターを遊離させ、線溶
促進作用を有する血漿蛋白質の一つとして注目されてい
る。

近年、トロンボモジュリンは循環血流中及び尿中に存在
することが示され、健常人においては組織トロンボモジ
ュリンの分子量１０５，０００　（還元剤存在下ドデシ
ル硫酸ナトリウム−電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ））よ
り小さく、８５，０００のものが主で他にいくつかの分
解物がみられることが明らかになっているが、それら血
中、尿中トロンボモジュリンの由来並びに生体内におけ
る働きは未だ不明である。

ところが、動脈硬化症等による器質的血管障害や線溶系
の異常又は凝固系の亢進によって生ずる血栓症等各種の
血管障害を生した病態状態においては、前記分子量の小
さい分解物ではなく、分解をうけていない組織トロンボ
モジュリンそのものが主として血液や尿中等体液中にみ
られることを本発明者は見出し、この新しい知見に基づ
き本発明を完成した。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明の目的は、体液又は各種組織洗浄液中のトロンボ
モジュリンを測定することによって、動脈硬化症、微小
循環障害その他各種組礒の血管障害を判定する方法を提
供することにある。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、体液又は各種組織洗浄液中のトロンボモジュ
リンを測定することを特徴とする血管障害判定法である
。

本発明者は、血液凝固調節系、特にトロンボモジュリン
の生理的意義について研究を行ってきた結果、正常動物
の血中又は尿中にはトロンボモジュリン分解物が主に存
在するのに対し、血管障害を起こした病態状態において
は、分子量の小さい分解物ではなく、分解をうけていな
い組織トロンボモジュリンそのもの（本明細書において
、これを単に組織トロンボモジュリンと略記する）が体
液又は組織洗浄液中にみられることを明らかにした。こ
れより、体液又は組織洗浄液中のｍ織トロンボモジュリ
ンを測定することにより、その動物が血管に障害をうけ
ているか否か並びにその障害の重症度を判定できること
を見出した。

本発明判定法は、人間やその他動物より体液又は各種組
織洗浄液中しくは′潅流液、詳しくは生体内に存在する
種々の体液、特に血液、尿、間質液、細胞浸出液、胸腹
腔内液、関節液、髄液、心嚢液等の細胞外液及び肺胞、
又は鼻粘膜、腹腔等各種組織洗浄液中並びに腎臓、肝臓
等各種組織の潅′流液に存在する組織トロンボモジュリ
ンを測定することによって容易に実施できる。

該組織トロンボモジュリンを測定する方法としては、当
該分野で通常行われている方法が利用でき、例えば、試
料を抗トロンボモジュリン抗体を結合させたカラムによ
り部分精製した後、ウェスターンプロ、ト法等により検
出する方法などが挙げられる。

また、トロンボモジュリン分解物と免疫交叉性を示さず
、組織トロンボモジュリンとのみ特異的に免疫交叉反応
性を有するモノクローナル抗体を用いれば、より簡単明
瞭に測定定量できる。

（実施例） エンドトキシン投与による方法で血管障害症状に陥った
病態動物を作製した。体重２．４乃至３．２ｋｇの雄性
日本白色ウサギに、リボ多糖（５ｍｇ／ｋｇ）を２時間
かけて静脈内投与し、４乃至５時間後に採血して血漿を
得た。

得られた血漿を、抗ウサギトロンボモジュリンヒツジ抗
体を結合させた５ｅｐｈａｒｏｓｅ　−４Ｂと混合し、
室温で２時間ゆるやかに攪拌した。０．０５％Ｔｗｅｅ
ｎ２０を含むリン酸緩衝化生理食塩水で洗浄した後、０
．２Ｍグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ２，５）で溶出した。

限外濾過により少量に濃縮した後、これを１０％ＳＤＳ
及び５％β−メルカプトエタノールを含む８０ｍＭ　）
リス塩酸緩衝液（ｐｌ＋６．８）に溶解し、Ｌａｅｍｍ
ｌｉの方法〔ネイチャー（１９７０）　２２７巻６８０
−６８５頁〕に従って８％５ＤＳ−ＰＡＧＥを行った。

トロンボモジュリン及びその分解物は、ウェスターンプ
ロット法により検出した。即ち、ニトロセルロースにブ
ロッティングした後、抗ウサギトロンボモジュリンーヒ
ツジ抗体を結合させ洗浄した後、ペルオキシダーゼ結合
−抗ヒツジ抗体−ブタ抗体で処理し、０．５ｍｇ／ｄの
ジアミノベンジジンで発色させて組織トロンボモジュリ
ン及びその分解物を検出した。

結果の一例を以下に記す。

（１）正常ウサギの血中トロンボモジュリンウサギの組
織トロンボモジュリンの分子量は還元剤存在下の５ＤＳ
−ＰＡＣ；Ｅでは７４，０００であるが、正常ウサギの
血中にみられるものは、約ｓｏ、ｏｏｏの分解物が主で
その他の小分子量の分解物もあったが、分子量７４，０
００の組織トロンボモジュリンは検出されなかった。

（２）エンドトキシン処理ウサギの血中トロンボモジュ
リン 上記正常ウサギの場合とは異なり、ウェスターン法によ
れば、分子量的５０　、０００等のトロンボモジュリン
分解物もわずかにみられたが、分子、１７４，０００の
組織トロンボモジュリンが主として検出された。

（作用と効果） 工・ンドトキシンは血管系、凝固系に影響を及ぼし例え
ば、血管内皮細胞への障害、汎発性血管向凝固症候群等
がエンドトキシン処理により生じ、血管障害の病態状態
が引き起こされることが知られている。

上記の実施例で述べたとおり、このような血管障害状態
に陥った病態動物の血液や尿等体液中においては、トロ
ンボモジュリン分解物が主である正常動物の場合とは異
なり、分解をうけていないと示唆される組織トロンボモ
ジュリンが検出されることが明らかになった。この結果
より、各種の生体内体液中の組織トロンボモジュリンを
測定することにより、その動物が血管に障害をうけてい
るか否か並びにその障害の重症度を判定できることが見
出された。

本発明判定法、即ち体液又は各種組織洗浄液中の組織ト
ロンボモジュリンを測定することによる血管障害の判定
法は、血管内皮の損害による血管の器質的障害或いは線
溶系の異常又は凝固系の亢進による各種血管障害、例え
ば、動脈硬化症、脳動脈硬化症、虚血性心疾患、血管炎
並びに汎発性血管向凝固症候群（ＤＥＣ）、脳血栓、脳
出血後遺症、頭部外傷後遺症、腎静脈血栓症、血栓性静
脈炎、閉塞性動脈硬化症等の血栓性疾患などの血管障害
性の各種疾患の診断に有用である。

本発明血管障害判定法は、血管に障害をうけているか否
かを判断するだけでなく、各種の生体内体液中の組織ト
ロンボモジュリンを定量的に測定することにより、患者
又は病態動物の血管障害の重症度を数値的に判定できる
ため診断の客観的スコアー化が可能であり、この点でも
有用性が高い。

また、血管障害状態に陥らせた病態モデル動物を用いた
抗動脈硬化剤、抗血栓剤等の薬剤のスクリーニング試験
においても、体液又は各種組織の洗浄液並びに潅流液中
の組織トロンボモジュリンを指標として測定することに
より、該薬剤の血管障害防御作用を判定することができ
る。このように、本発明判定法は単なる血管障害の診断
法としてのみでなく、血管障害を治療又は予防する薬剤
の薬効判定法として用いることもできる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）体液中の組織トロンボモジュリンを測定すること
   を特徴とする血管障害判定法。