JPH0365653A - 自動血液分析機器用の光学的標準 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ａ０発明の技術分野 本発明は組成物シよびその自動血液分析機器計測用の光
学的標準としての利用に関する。更に特別には、この発
明はＴＢＣＨＮＩＣＯＮ　Ｈ１血液学分析機器（ＴＥＣ
ＨＮＩＣＯＮ　Ｈ＊ｌはＴｅｃｈｎｉｃｏｎ　Ｉｎ５ｔ
ｒｕｎｅｎｔｓ　０ｏｒｐｏｒａ−ｔｉｏｎ、　Ｔａｒ
ｒｙｔｏｗｎ、　ＮＹ、＋７）登録商標である）での散
乱並に吸収利得設定のための、固定され、染色されそし
て安定化されている白血球組成物の利用に関する。

Ｂ、従来技術 正常の白点細胞即ち白血球には５つの群、好中球、リン
パ球、単球、好酸球シよび好塩基球が存在する。何れか
の異常細胞の濃度と同様、白点細胞のこれらの５つの正
常型の相対的な比率を測定するため、顕微鏡スライド上
の乾燥し、染色された血液塗抹標本を調べるのが既知の
医学的診断方法である。その方法は鑑別白点細胞計算と
称せられ、Ｍｉａｌｅ、　Ｊ、Ｂ、、　”Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ−Ｈｅｍａ−１ｏ１ｏｇｙ
”８２２−８３０頁、１１２６頁、１１２７頁並に１ｌ
３０頁、Ｃ，Ｖ、Ｍｏ５ｂｙ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓｔ、
Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ（１９６７）に記載されている。

最近、米国特許第３．７４１．８７５号および４．０９
９．９１７号に記載されている如く、そのための自動化
方法および自動化流れシステム装置が開発され、鑑別白
点細胞計算の負担が軽くなった。これらは、特異的に個
別の細胞型を同定し、標識するため細胞化学的方法を用
いる。典型的には、染色ならびに未染色の細胞の流れを
光学的観測室を通して流し、そこで光電測定操作で各細
胞によυ吸収された光と、別に、散乱された光との振幅
を記録する。電子的信号は振幅によう選別され、幾つか
の細胞の型に応じて種類に分けられる。・データは全血
の５つの主要白点細胞型に関して印刷される。特定の化
学的同定操作で白点細胞を染色する。散乱された光で細
胞の処理した大きさを概略測定する。

精巧な測定技術が開発されているので、これらの機器を
、療法の結果をより効果的に監視すると共に、疾病の経
過を追跡するのに採用することができる。

このようなシステム中に用いるための細胞懸濁液の調製
の初期の方法は、米国特許第４，０９９，９１７号に記
載の如く、溶解のため赤血細胞を予め処理するのに、未
凝固の血液試料を界面活性剤で約１．５分処理し、後、
中性のｐＨを維持しながら、約１分間その細胞に固定剤
を添加し、そして赤血細胞を溶解し、セして白点細胞を
固定するため、その混合物を約２分間５８〜６０℃に保
温することからなっている。

試料中の鑑別白息細胞計算の迅速な測定のための更に最
近の方法が米国特許第４．８０１．５４９号に公開され
ていて、それは（１）ホルムアルデヒド筐たはパラホル
ムアルデヒドと（１１）界面活性剤と＋ｉｉｉ＋糖また
は糖アルコールと唸■）緩衝剤との試薬溶液を調製する
ことからなっている。この試薬溶液を分析されるべき試
料と速に混合して反応混合物を形成させ、そこでは始め
試薬溶液と試料との両方を約加〜約２８’Ｃの温度にし
てかく。その後、試薬溶液を、試料中の赤血細胞を溶解
し、そして白点細胞を固定するため、約３０秒以内に約
６２〜約７２’Ｃの温度に加熱する。

現存の方法は更に特異的で正確な血液細胞測定に対し潜
在的可能性を持っているが、その特異性と正確さとはそ
の測定を行うのに採用される機器の精度に直接に関係す
る。

これらの細胞化学的システムは、種種な細胞母集団を信
号の大きさ釦よび（ｉ！たは）染色強度の近似的範囲内
にかくために、細胞の特性である電気光学的信号の処理
に頼っている故に、機器内の電気回路の信号処理にかけ
る利得の変動によるどでな変動も取るに足らない程最低
に減少させるかあるいは実質的に排除しなければならず
、さもなければ正確な結果は得られない。

機器あるいは更に適切には、信号処理電気回路における
利得の変動は測定値に影響するであろうことは認識され
て来た。現在では、正常な試料を選択するようにし、種
種な細胞母集団を信号の大きさの適当な範囲にかさめる
ため、その機器の利得を調節している。

そのような利得のシステム変動を除くことは重要である
のみならず、同じ血液試料では異った機器から得られる
分析情報が同じになるよう、１つの機器からの読みと他
の機器での読みとを標準化することが望ましい。

Ｃ・　本発明の目的 従って、本発明の目的は、正確な血液学的訃よびサイト
メ）　ＩＪ−分析に関し、新規で改良された電子光学的
標準を提供するととＫある。

本発明の他の目的は、リンパ球部分集合の測定のための
自動化されている血液学的シよびサイトメトリー分析シ
ステムでの使用に特に適合させた新規で改良された電子
光学的標準を提供するにある。

この発明の他の目的は、血液学釦よびサイトメトリー分
析システムにかける吸収唄よび散乱利得の設定に特に有
用な新規で改良された電子光学的標準を提供することに
ある。

本発明の更に他の目的は、細胞凝集体を含有しない新規
で改良された電子光学的標準を提供することにある。

本発明のその上の目的は、保存期間を長くしたそして調
製が簡単で安価な前記の電子光学的標準を提供すること
にある。

本発明の他の目的および特徴は一部分は明らかであり、
一部分は以後指摘されよう。

Ｄ９本発明の要約 本発明は、自動化血液分析器例えば血液学的またはフロ
ーサイトメトリー測定機器で行われるリンパ球亜型分類
法における電子光学的標準の使用に関する。ここで使用
するごとく、血液学的測定機器なる術語はフローサイト
メトリーの原理を利用するどんな自動化血液分析器も包
含するものとする。本発明は特にＴｅｃｈｎｉｃｏｎ　
ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、　Ｔ
ａｒｒｙｔ□ｗｎ、　Ｎ　Ｙ　、　テ製造すレルＴＥＣ
ＨＮＩＣＯＮ　Ｈ＊１機器を特に留意して説明するが、
以下公開する組成物と方法とは他の血液学的およびフロ
ーサイトメトリー分析器のための標準の調製と使用とに
適用され、本発明はＴＥＣＨＮＩＣＯＮ　Ｈ”１機器の
ための標準とそれを用いる方法とに限定されると解釈さ
れるものではないと認識されるであろう。

一般に本発明に従って、固定され染色された白梅細胞懸
濁液は適当な緩衝剤と固定剤と糖とを用いることにより
安定化され、その中で細胞は散乱と吸収（染色強度）と
の性質に関し、長時間に亘シ血液学的測定機器での散乱
と吸収との利得の適切な調節を効果的に可能にするよう
充分に保存される。

本発明は血液学的測定機器のための散乱３よび吸収利得
設定標準としての、緩衝剤／糖／固定剤再懸濁媒質中の
、固定され、染色された出血細胞の安定な組成物の使用
である。本発明は固定され染色された出血細胞の光学的
性質の、長期間、例えば１年に亘る安定性が特徴である
。

血液学的測定機器にかける電子光学的システムの利得の
調節方法は、直ぐ前に記載のような標準を準備し、種種
な細胞例えば標識されたリンパ球（リンパ球亜型）、標
識されていないリンパ球訃よび酵素法例えばペルオキシ
ダーゼで染色されている好中球の集団を信号の大きさ（
または）染色強度の適当な範囲Ｋｊ？＜ことを可能にす
る電子光学的信号を発生させるために、同じものをフロ
ーサイトメーターの流路を通過させることからなる。

Ｅ０本発明の詳細な記述 概括的に云えば、本発明に従う電子光学的標準は固定さ
れ、染色されている出血細胞またば、緩衝剤と糖と固定
剤とを包含する再懸濁媒質中の固定され、染色された出
血細胞と固定され、染色されていない出血細胞との混合
物の安定な組成物である。本発明は固定され、染色され
た出血細胞と再懸濁媒質中の固定され、染色された出血
細胞と固定され、染色されていない出血細胞との混合物
の長期に亘る安定性が特徴である。

ホルムアルデヒド渣たはパラホルムアルデヒドを染色さ
れていない出血細胞の安定剤として本発明の試薬溶液中
に用いる。好ましくはホルムアルデヒドを用い、その溶
液中に約０．５〜約７．４　ｗｔ／ＶＯＺ％量存在させ
る。理想的にはホルムアルデヒドを約１．３〜約３．５
　ｗｔ／ｖｏｔ％量存在させる。

媒質の屈折率を適当な流れ細胞の鞘の屈折率と釣合せる
ことによシ、血小板、赤梅細胞幻影ならびに他の小粒子
に相対的なリンパ球の信号を生じさせるため、その再懸
濁媒質中には糖または糖アルコールを存在させる。適当
な糖または糖アルコールにはスクロース、フルクトース
、デキストロース、ソルビトール釦よびマンニトールが
含まれる。

本発明の再懸濁媒質中に用いる好ましい糖はデキストロ
ースであう、好ましい糖アルコールはソルビトールであ
る。デストロースまたはソルビトールは細胞懸濁液の屈
折率を鞘のそれと釣合せるに充分な量を存在させるべき
である。例えば、屈折率約１　、３６４〜約１．３６７
を持つ、得られる細胞懸濁液に対し約２１　ｗｔ／ｖｏ
ｔ％量のソルビトールを用いて再懸濁媒質を調製する。

従って、他の所望される屈折率に釣合すために再懸濁媒
質中の糖濃度を変えることはこの技術に熟練した人には
明らかであろう。デキストロースではない糖あるいはソ
ルビトールではない糖アルコールを用いる場合はその量
は代りの糖または糖アルコールがデキストロースまたは
ソルビトールに関してほぼ等モルペースで存在させるよ
うに調節すべきである。

本発明に有用な緩衝剤または緩衝剤の混合物は応答する
媒質のｐＨを約５．５〜約８、好ましくは約６．４〜約
６．６に維持するのに適当なものであるべきである。適
当な緩衝剤にはリン酸ナトリウムまたはカリウム、３−
（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＩＶ［）ＰＳ
　）　、　Ｎ　−２−アセトアミド−２−アミノエタン
スルホン酸（ＡＣＥＳ）＞！　び４−（２−ヒドロキシ
−エチル）−１−ピペラジンエタンスにホン酸（ＨＥＰ
ＥＳ）　７５Ｅ包含サレル。Ｎａ２ＨＰＯ４トＮａ）（
２ＰＯｓとの混合物が好ましい。既に示した如く、その
緩衝剤は本発明の再懸濁媒質中にその溶液のｐｇをほぼ
中性の水準に維持するに適当な量で存在させるべきであ
る。例えばＮａ　２ＨＰＯ４とＮａＨ２ＰＯ４トの混合
物を用いる場合、その混合物は、ｐＨ範囲約５．５〜約
８を持つ一連の溶液を作るのには、Ｎａ２ＨＰＯ４対Ｎ
ａＨｚＰＯ４の％に比約２．０４　：　１〜約０．８１
：１を含有すべきである。本発明の再懸濁媒質中のその
ような混合物濃度は約０．０７５モル〜約１．１２５モ
ルである。

本発明の実施に有用な再懸濁媒質は水性溶液であシ、好
ましくは脱イオン水を用いる。その溶液は混和物の成分
を水中に配合して調製する。その溶液のｐＨが所望の範
囲内にとど１つていることを確実にするため、その溶液
の一維持には厳重な監視が必要である。更に熟達した技
術者は所望の試薬溶液中に他の添加剤を含有させてもよ
い。例えば、エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ　）を
金属キレート剤として含有させてもよい。

次の表は成分を再懸濁媒質１を当りの濃度で表わした、
本発明の再懸濁媒質のための好筐しい組成を示している
。

表　　　１ 成分　　　　　量／１ Ｎａ２ＨＰＯ４４，６ｇ ＮａＨ２ＰＯ４Ｈｚ０　　　　５．８ｇソルビトール　
　　　　　　　　　　　２１０ｇホルムアルデヒド（３
７多）　　　　　　　４１−説イオン水　　　　　　　
　１０００−になる適当量組成物のｐ■範囲は約６．４
と約６．６との間にあり、屈折率は約１．３６４と約１
．３６７との間にある。

この技術に熟達した人には、この光学的標準に３ける白
点細胞の濃度は４０μｌ当り約１０，０００個と約３５
，０００個との間の範囲内にあらねばならず、好ましく
は濃度は４０μｌ当り約１５，０００個〜約３０，００
０個であるべきで、最適にはその濃度は４０μｌ当り約
２０．０００ｆ［Ｉ！ｉｔであるべきであることは理解
されよう。

若し、自立細胞濃度が４０μｌ当り１０．０００個以下
に３ちれば、統計的に満足な再現性が得られない。

４０μｌ当り３５，０００個以上の濃度では信号にかけ
る重大な同時発生が起り不正確な結果になる。

以下の実施例に釦いては本発明に従う光学的標準の調製
のための種種な方法が記載され、その標準の効能に関し
、実験データが示される。可能な場合にはいつでも標準
的な商業的に入手できる試薬級の材料が用いられる。そ
の処方と方法とは単に説明的なものであり、本発明にか
ける公開に従って、他の成分、比率訃よび方法を′採用
し得ることは理解されよう。

以下は固定された白点細胞から、本発明の光学的標準調
製法の記述である。

固定された白点細胞（ＷＢＣ）はこの技術に熟練した人
により認められている確立された技術に従つて得られる
。白点細胞は始め１２５ｄのＷＢＣ画分に１２５−のＴ
ｗｅｅｎ／　Ｎａｃｌ溶液を加えることにより固定され
、その溶液を室温で３分間静に連続して混合する。後固
定剤（２塩基性リン酸ナトリウム６．５ｇ／ｌ、１塩基
性ＩＪ　７酸ｆ−）　ＩＪ　ラム４．Ｏｆ／ｌ、デキス
トロース２．５０ｆ／ｌ、ホルムアルデヒド２００ψ／
１．脱イオン水３７　ｗｔ／ｗｔ多）２５ｏｐＨをその
溶液に加え、水浴中、毎分約１００回振動して６分間混
合する。それからその混合物を室温に貯蔵する、それか
ら白点細胞を無菌ｒ過水を用い、確立した方法を利用し
て洗浄する。後、この中間生成物ＷＢＣ計算値を確立さ
れている技術で決める。

光学的標準１ｔを調製するのに必要な、このＷＢＣ中間
生成物量（、／）を次の式： 前記の如く決めた固定ＷＢＣ中間生成物の処方量を染料
処方物６００−に加え、１ｏ分間混合して内因性ペルオ
キシダーゼ活性により好中球母集団を染色する。その染
料処方物は脱イオン水３７５−と、リン酸緩衝剤（溶液
１を当シリン酸ナトリウム緩衝剤２５０　ｍ　ｍｏｌ　
ｔたはＩ（ＥＰＢＳ緩衝剤５００　ｍ　ｍｏｚと防腐剤
’）　４２５　ｄと、ペルオキシダーゼ染料（溶液１を
当υ９５蝿エタノール中の４−クロロ−１−ナフト−Ａ
、　２１．０５　ｍ　ｍｏｔ）　７５　ｍｌと、ペルオ
キシダーゼ基質（０，３φ過酸化水素と防腐剤）７．５
−とを含有する。

それからその固定され、染色されたＷＢＣ中間生成物は
加工され、最後に次の方法に従って、族１の再懸濁媒質
に添加される。

１、固定され、染色されたＷＢＣ中間生成物を２つの２
５０＋ｄ円錐形遠心管に分ける。

２．３分間１０００Ｇで遠心分離する（例：回転半径１
８．９　ｃｍ　ｆ　モツＩＥＣＣｅｎｔｒａ−７Ｒ，３
分間２２００　ＲＰＭで回転） ３、上澄液を注意深く細胞ボタン状物に出来るだけ近く
まで吸引する。

４、細胞ボタン状物をほごすためにしばらく渦動させる
。

５、上澄液を、牛血清アルブミン０．２　％をもつυノ
酸塩緩衝されている食塩水の等量で置換え、渦動して混
合する。

６０段階２と３と４とを繰返す。

７、固定され、染色されているＷＢＣを再懸濁媒質１０
０−に定量的に移し、その懸濁液を１５〜３０分間放置
して混合する。

次のは固定されている白点細胞よりはむしろ全血液を利
用する、本発明の光学的標準調製方法の記述である。

１、　　ＥＤＴＡで凝固Ｉ−ないようにした新鮮な１０
−全血液試料１５個を集め、１０分間遠心分離する。軟
層画分を集め、１つの容器に集める。反転させてよく混
合し、確立された実験記録により自立細胞計算値を得る
。

２、　４００　Ｘ　１０’箇の細胞ｆ、得るのに必要な
、集合された細胞量を次の式 を用いて求める。

計算量の軟層画分を、標識された、染色および未染色の
２つの２５０−円錐形成遠心管のそれぞれに加える。

３、容管に溶解試薬（塩化アンモニウム１５４．４ｒｒ
ｒｎｏｔ釦よび適当な緩衝剤）１００ｐＨを加える。Ｉ
Ｏ分間回転子上に置く。これで赤梅細胞の溶解が起る。

４．４００ｘＧで１０分間両管を遠心分離する。

５、両管から上澄液を吸引し、渦動混合機を用いて細胞
の小粒を移動させる。

６、容管に細胞洗浄溶液（ＥＤＴＡ　２ナトリウム２水
和物３．０９　ｍ　ｍａｔ、　ＥＤＴＡ　４ナトリウム
２水和物３．８２　ｍ　ｍｏｂ、アルブミン０．２％＆
よび適当な緩衝剤）２００ｐＨを加え、混合する。段階
４と５とを繰返えす。

７、段階６を繰返す。これで細胞は２回洗浄されたこと
になる。

８、容管にリンパ球固定剤（ホルムアルデヒド７．４％
、デキストロ−スフ５５，９　ｒｒｒｎｏｌ　、　　釦
よび適轟な緩衝剤）１００ｐＨを加える。回転子上に１
０分間釦く。

９、段階４と５とを繰返えす。

１０、　　段階６を２回繰返えす。

１１、　　”未染色”と標識されている管に再懸濁媒質
２００　ｗｄを加える。この管を取ってかく。残υの段
階は標識され、′染色された“管にのみ行う。

１２、　　ＨＥＰＥＳ緩衝剤（水酸化ナトリウム２２０
ｒｒＥＫＪＯ１ＨＥＰＥＳ　５００　ｒｒｍｏｔ　ｋよ
び防腐剤）１３４ｐＨを１染色されている”と標識され
た管に加え、混合する。

１３、　　染料（４−クロロ−１−ナフトール２１．０
５ｍ　ｍｏｚおよび９５％エタノール）２４ｐＨをその
１染色されている”と標識された管に加え、混合する。

１４、　　基質（過酸化水素０．３　％訃よび防腐剤）
２．４ｐＨを“染色されている”と標識された管に加え
、回転子上に１０分間かく。

１５、　　段階４と５と６とを繰返えす。

１６、　　″′染色されている”と標識された管に再懸
濁媒質２００ｐＨを加え、混合する。

各遠心管からの全細胞計算値は確立された技術を用いて
得られ、その全細胞計算値は互に４０００１１１以内で
あることが判った。

両遠心管は普通の１ｔビーカーにあける（Ｖｌ）。

全細胞計算値２０，０００個を得るために必要な、再懸
濁媒質の体積を計算するため、次の式を用いる。

Ｖ２　＝最終体積 Ｖ２−Ｖｌ　＝添加すべき再懸濁媒質の体積（−）計算
された体積の再懸濁媒質をビーカーに加え、得られる溶
液を完全に混合する。

本発明の方法を、自動化された装置を用いて説明してい
るが、それを手動の方法に適用してもよいことはこの技
術に熟達した人には容易に観察されるであろう。次の実
施例は本発明の説明である。

データは標準のＴＥＣＨＮＩＣＯＮ　Ｈ＊ｌ　　分析器
を用□いて提示する。それらは本発明の概念の理解をよ
り容易にするために提示するものであるが、それらは決
して、本発明を限定するものと解釈すべきではない。

実施例１ 比較の目的のため、重色されたＷＢＣのＩＩＩをＴｌ８
（Ｎ１００Ｎ１−１１へｋｙＦ＊シｆ−セ鞘（３０ｔｓ
プロヒレングリコール）中に懸濁させ、その鞘の屈折率
と釣合せ、一方、他の部分・を表１に前記した再懸濁媒
質中に懸濁する。表２に示すデータは再懸濁媒質中に懸
濁させた細胞は安定していないことを示している。この
データは１ケ月は安定であることを示している。この実
施例中および 表　　　２ ３　　　　　３６．５　　２６．７　　　　　２４．５
　　　　　３９．５註：ｔｌ）各データは３回の反復の
平均を表わす。

後続の実施例中にかいて呼称ＮＩＵｒ　ＭＩＤハＸ朕Ｉ
ｓとは染色されている好中球母集団の平均吸収信号を示
す。呼＄　ＮＥＵ’ｌ’　Ｍｌ１７　Ｙ　ＡＸＩ８　　
とは染色されている好中球の平均散乱信号を示す。

第１図のチトグラムはこの点を更に説明している。８１
図にかいては再懸濁媒質中に懸濁されているＷＢＣは細
胞の特徴の完全な状態を維持しているが、３０ｅｓプロ
ピレングリコール中への細胞の再懸濁後は（至）分以内
に”脱染色”の跡があり、４日で脱染色は完全になる。

４−クロロ−１−ナフトール染料はプロピレングリコー
ルに可溶で、このことが、若し溶剤が長期間に亘り除去
されないと、好中球の脱染色を引起す。

実施例■ 再懸濁媒質の処方はホルムアルデヒドの種種な百分率、
０，１，２，４および７，４に変動する。

何れの場合に釦いても糖濃度ｔ＊切な屈折率が維持され
るよう調整する。固定されたＷＢＣは染色され、各試薬
中に再懸濁され、各調製物の１部は４℃で貯蔵され、３
７℃のストレスを与えられて、光学的標準の４℃にかけ
る貯蔵期間のアレニウス外挿を誘導する。その結果を表
３に示す。

表　　　　３ 標準の安定性に対するホルムアルデヒド濃度の影響 ４℃　　　　　　３７”Ｃ ３７，０２５，１ ３７，１２５，４ ３７，０２５，５ ３７，１２５，９ ３６，６２５，２ ３５，９ ３５，８ ３４，４ ３６，２ ３２，３ Ｎ８ ２６．３ ２７．４ ２６．１ ２６．５ ２０．８ Ｎ８ ３７．４ ２６．０ ３７．４　　２５．６ ３７．１　　　２６．４ ３６．８　　　２５．６ ３６．２　２７．０ ３６．１　２７．７ ３６．１　　３０．２ ３７．４ ２５．８ ３１．４　２５．８ ０　　　　　３７．４　　２５．９　　　３７．４　　
２５．９１　　　　　３７．０　　２５．８　　　３６
．３　　２６．７２　　　　　３７．１　　２６．１　
　　３６．５　　２７．２４　　　　　−　　　　−　
　　　３６．３　　２７．５７　　　　　３７．１　　
２６．６　　　３６．２　　２８．３３１　　　　　３
６．８　　２５．８　　　３６．２　　３０．９７．４ ０　　　　　３７．４　　２６．３　　　３７．４　　
２６．３１　　　　　３７．０　　２６．１　　　３６
．４　　２７．０２　　　　　３７．１　　２６．３　
　　３６．５　　２７．５４　　　　　　−　　　　−
　　　　３６．３　　２７．９７　　　　　３７．１　
　２６．８　　　３６．３　　２８．８３１　　　　　
３６．８　　２６．０　　　３６．２　　３１．７註＝
（１）各データは３回の反復の平均を表わす。

４℃で貯蔵していた試料はホルムアルデヒドの存在ある
いはその量に関係なく同一の安定性能を示す。凡ての４
℃の試料についてＯ８目から１日目に好中球染色（ＮＥ
ＵＴ　ＭＥＬＡＮＸ−ハＩｓ　）に約０．５チヤンネル
の減少があったが、染色はそれ以後は変化せずにいるこ
とを留意せよ。ｎ℃で強調された試料については、ホル
ムアルデヒド０％の調製物は２〜３日以内に散乱信号の
損失を示した。従って、ホルムアルデヒドの添加は光学
的標準の貯蔵期間ヲ増す。ホルムアルデヒド１−７．４
９６含有の調製物はその散乱と吸収との応答を維持し、
同等の安定性能を示した。このことはホルムアルデヒド
ｔＳはそれ以上の濃度と同じ効果であることを示してい
る。

実施例■ 実施例■の組成物と同じであるがホルムアルデヒド濃度
０多と１蝿とをもつ組成物を試験し、糖ヲテキストロー
スからソルビトールに変える。そのデータを表４に示す
。

表　　　４ ４℃　　３７’Ｃ ００３７ ３６ ３７ ３７ １７３７ ４５３７ １２４，７２３７４９ ９２５，０２３７３２ ２２５，２２３５７５ ２２４，９２４１４５ ２２５，２２３５４２ ２２５，３２３５０２ ３７，１２４，７ ３５，３２７，０ ３５，５２６，６ ３７，９２８，７ ３７４９ ８８２１ ４８０ ３５４ 註：（１） ０　　　３７．１　　　２５．２　２２３０？３　　　
３６　９　　　２５．５　２２４８６４　　　３７　１
　　　２５．５　２１６３０５　　　３７　１　　　２
５．５　２２３１５１７　　　３７．０　　　２５．６
　２２４４０４５　　　３７　２　　　２５．６　２２
１調各データは３回の反復の平均を示す。

３７．１ ３６．１ ３６．１ ３６．７ ２５．２ ２６．９ ２７．１ ２７．０ ２３０７ ２１８０ ２３６０ ２９１５ これらの結果は表３に示した観察、即ち、４°Ｃにかい
てはホルムアルデヒドＯ多訃よび１条の調製物は同等に
働くことを再確認させる。３７℃で強調し、４℃Ｋｋけ
る標準の貯蔵期間のアレニウス外挿を誘導する場合、ホ
ルムアルデヒドＯ１の調製物の染色強度は、前記の表Ｋ
　Ｌ−ける細胞の大きな損失で証明されている如く、散
乱に関して低下した。

実施例ＩＶ 光学的標準を固定された白点細胞と新鮮全血液との両者
から調製し、相対的な安定性を評価した。

Ａ、固定白点細胞から調製した光学的標準の安定性 現在は公開されている知識であって推選される指針に従
って、全血を集め、ＴＥＣＨＮＩＣＯＮ　ｓ＊１リンパ
球Ｈｅ１ｐｅｒ　Ｔ　　キットに従い処理し、光学的標
準の安定性を証明するのに用いる。ＴＥＣｌｌＩ（１）
Ｎ）１１機器のＬＹＭＰｘ　ｐよびＩ、ＹＭＰｙ利得は
光学的標準のシステム固有値（ＳＳＶ　）に設定し、第
２図におけるＮＥＵＴ犯ハ、釦よびＮＥｔＪＴい化ハｙ
の如く呼称されている。それから染色されたＨｅ１ｐｅ
ｒ　　細胞をその利得設定で検定する。染色されたＨｅ
１ｐｅｒ　Ｔ細胞のＬ　ＰＯＳ　ＭＦＡＮ　Ｘ　（標識
されたリンパ球からの平均吸収信号）とＬ　ＰＯＳ　Ｍ
ＥＡＮ　Ｙ　（標識されたリンパ球の平均散乱信号）が
記録され、プロットして光学的標準の安定性を監視する
。正常の血液提供者からのＨｅ１ｐｅｒ　Ｔ細胞を検定
する場合、Ｌ　ＰＯＳ　ＭＥＡＮＸは１８．５±１．５
　、　Ｌ　ＰＯＳ　ＭＥＡＮ　Ｙは２７．７±１．０で
ある。正常細胞の値で前記の範囲外にある少数が存在す
ることがあるかもしれないことはこの技術に熟達した人
には理解されるであろう。これらは孤立値と称され、統
計的異常と見做され、通常無視される。しかし、−様に
この範囲外となる結果は、そのような常に外にある結果
は光学的標準の劣化により利得が不正確に設定されてい
ることを示しているのであるから、散乱および吸収の利
得設定に用いた一連の光学的標準の不安定性を示ｔ、−
（１／−ル、第２図に見られる如く、ＬＰＯ８ｕＸとＬ
　ＰＯＳ　ＭＥＡＮ　Ｙ　　との値はこれらの範囲にあ
り、安定性ｔｉ２４ケ月示され九０ Ｂ、新鮮全血液を用いて調製した光学的標準の安定性 ＴＥＣＨＮＩＣＯＮ　Ｈ１分析器ＯＬＹＭＰｘとＬＹＭ
Ｐｙとの利得を、Ａ、中で従った方法にょυ安定である
と証明された一連の期間内の光学的標準のｓｓＶに設定
し、第３図に３いては、ＮＥＩＪＴ　ＭＲＡＮｘ（Ｃｏ
ｎｔｒｏｌ　）およびＮＥＵ’ｌ鴇侃小ｙ　（Ｃｏｎｔ
ｒｏｌ　）と呼称した。前記の方法に従って新鮮全血液
から作った光学的標準をこれらの利得設定で検定し、Ｎ
ＥＴＪＴ４侶ｍｌｘ　　とＬＵＣＭＲＡＮｙ　（染色さ
れていない好中球母集団の平均散乱信号）を記録し、第
３図にそれぞれＮ酊１縄ｍ１ｘ（Ｔｅｓｔ）　オヨびＬ
ＵＣＭＲＡＮｙ　（Ｔｅ　ｓ　ｔ　）とＬ−ｔ”プロッ
トした。記録された値にかいて、時間に対し何らの有意
の変動がないことはその光学的標準の安定性を示してい
る。安定性は１２ケ月以上示した。

前記のことを考慮すると、本発明の幾つかの目的が達成
され、他の有利な結果が得られていることが判るであろ
う。

本発明の種種な特徴釦よび有利さは前述のことから明ら
かであると考えられる。しかし、特別に列挙されていな
い種種な他の特徴と有利さとは、説明された好ましい態
様の多くの変形と変更と同様に、技術に熟達した人には
疑もなく存在するであろう。その凡ては特許請求におい
て定義される如き、本発明の精神と範囲とから逸脱する
ことなく達成されてもよい。

【図面の簡単な説明】

第１図は３０多プロピレングリコール中に懸濁したＷＢ
Ｃに比較した、本発明の再懸濁媒質中に懸濁したＷＢＣ
の安定性を説明する一連のチトグラム線図である。 第２図は本発明の１つの態様に従う光学的標準の、２４
ケ月にわたる安定性を示すグラフ線図である。 第３図は本発明の他の態様に従う光学的標準の、１年以
上にわたる安定性を示すグラフ線図である。 図面の浄書（内容に変更 図面の浄書（内容に変更なし） 図面の浄書（内容に変更なし）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）（ａ）濃度約０．５〜約７．４重量／容量％のホ
   ルムアルデヒドと、 （ｂ）光学的標準の屈折率を鞘流れの屈折率に調節する
   ために充分な濃度の糖または糖アルコールと、 （ｃ）試薬溶液のｐＨを約５．５〜８．０に維持するた
   めの少くとも１種のｐＨ緩衝剤と、 （ｄ）４０μｌ当り約１０，０００から約３５，０００
   個の濃度の染色白血球と、 を含む水性液からなる、鞘流れフローサイトメトリーの
   原理を利用する血液学的測定機器のための電子光学的標
   準。 （２）ホルムアルデヒドの濃度が約１．３〜約３．６重
   量／容量％である前項（１）に記載の電子光学的標準。 （３）糖が２２重量／容量％量のソルビトールである前
   項（１）に記載の電子光学的標準。 （４）光学的標準の屈折率が約１．３６４〜１．３６７
   である、前項（１）に記載の電子光学的標準。 （５）少くとも１種のｐＨ緩衝剤がｐＨを約６．４〜約
   ６．６に維持する、前項（１）に記載の電子光学的標準
   。 （６）少くとも１種のｐＨ緩衝剤がリン酸ナトリウムま
   たはカリウム、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホ
   ン酸、Ｎ−２−アセトアミド−２−アミノエタンスルホ
   ン酸及び４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１−ピペラ
   ジン−エタンスルホン酸からなる群から選択したもので
   ある、前項（１）に記載の電子光学的標準。 （７）少くとも１種のｐＨ緩衝剤がモル比約２．０４：
   １〜約０．８１：１のＮａ＿２ＨＰＯ＿４とＮａＨ＿２
   ＰＯ＿４との混合物である、前項（１）に記載の電子光
   学的標準。（８）染色白血球が４０μｌ当り約１５，０
   ００〜約３０，０００個存在する、前項（１）に記載の
   電子光学的標準。 （９）染色白血球が４０μｌ当り約２０，０００個存在
   する、前項（８）に記載の電子光学的標準。 （１０）（ａ）（ｉ）約０．５〜約７．４重量／容量％
   濃度のホルムアルデヒドと、 （ｉｉ）光学的標準の屈折率を鞘流れの屈折率に調節す
   るために充分な濃度の糖または糖アルコールと、（ｉｉ
   ｉ）試薬溶液のｐＨを約５．５〜８．０に維持するため
   の、少くとも１種のｐＨ緩衝剤と、 （ｉｖ）４０μｌ当り約１０，０００〜約３５，０００
   個の濃度の染色白血球と、 を含む水性液からなる標準を備え、 （ｂ）前記標準中の白血球部分集合の集団を表わす電子
   光学的信号を発生させるため、前記標準をフローサイト
   メーターの流路を通過させ、 （ｃ）段階（ｂ）の前記の信号の値を前記標準の既知値
   と比較し、 （ｄ）前記標準の既知値を反映するよう、血液学的測定
   機器の利得を調節する、 ことからなる、鞘流れフローサイトメトリーの原理を利
   用する血液学的測定機器の電子光学的システムにおける
   利得を設定する方法。 （１１）ホルムアルデヒド濃度が約１．３〜３．６重量
   ／容量％である前項（１０）に記載の方法。 （１２）糖が２２重量／容量％量のソルビトールである
   、前項（１０）に記載の方法。 （１３）光学的標準の屈折率が約１．３６４〜約１．３
   ６７である、前項（１０）に記載の方法。 （１４）少くとも１種のｐＨ緩衝剤がｐＨを約６．４〜
   約６．６に維持する、前項（１０）に記載の方法。 （１５）少くとも１つのｐＨ緩衝剤が、リン酸ナトリウ
   ムまたはカリウム、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンス
   ルホン酸、Ｎ−２−アセトアミド−２−アミノエタンス
   ルホン酸及び４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１−ピ
   ペラジン−エタンスルホン酸からなる群から選択される
   、前項（１０）に記載の方法。 （１６）少くとも１種のｐＨ緩衝剤が、モル比約２．０
   ４：１〜約０．８１：１のＮａ＿２ＨＰＯ＿４とＮａＨ
   ＿２ＰＯ＿４との混合物である、前項（１０）に記載の
   方法。 （１７）染色白血球が４０μｌ当り１５，０００〜約３
   ０，０００個の濃度で存在する、前項（１０）に記載の
   方法。 （１８）染色白血球が４０μｌ当り約２０，０００個の
   濃度で存在する、前項（１７）に記載の方法。