JPH03505734A - 非常にオピオイドレセプター選択性に優れたペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 非常にオピオイドレセプター 選択性に優れたペプチド 本発明は、改畳されたデルタレセプター選択性を有するエンケファリンの類縁体 である化合物に関する。本発明はまた、該デルタレセプターに特異性を有する化 合物の安全で且つ有効な量を投与することにより、鎮痛作用のようなデルタレセ プター作動薬活性及び拮抗薬活性と関連した薬理的作用をもたらす方法にも関す る。

オピオイド（ｏｐｉｏｉｄ　）　＠痛薬は、激しい痛みを和らげるのに有用であ り、また下剤及び咳の治療にも有用な麻酔薬である。そルヒネ（植物アルカロイ ドの一つ）は、最も普通に知られたオピエー）　（ｏｐｉａｔｅ　）　楽の−っ である。その植物オビ二一トに関しての大きな間廟点は、その非常に大きな耽搦 性を持つと共に腸内の物質移動を阻害する作用を持つことである。［エンケファ リン（ｅｎｋｅｐｈａｌ　ｉｎ　）　Ｊとして知られる天然に存在するオピエー トは、ヒトの脳内湛びＫより下等な動物の各種の組織中に見出されている。天然 に存在するエンケファリンは、二種のペンタペプチドの混合物であり、「エンド ルフィン（ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ　）Ｊとして知られたオピオイドペプチドの大き な一部の一部のものである。モルヒネが有スるような欠点を持たない合成オピエ ートな製造することを目ざして、大いに研究がなされている。

このようなオピエートの作用機作ははんの最近になって理解されるようになって きた。その作用機構を理解するためのキーポイントは、そのオピオイドレセプタ ーにある。レセプターとは、化学物質を認識し、それと結合するところの細胞上 に存在するものである。故に１オピエートレセプターは、オピエート薬を認識し 、それと結合するものである。そのレセプターと結合すると、オピオイド渠は一 連の各種の生化学的且つ生理学的反応を起こさせたり、遮断するように働く。こ のような誘起あるいは遮断作用はし、ばしば変換作用（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏ ｎ　）と呼ばれる。

オピオイドによって影響を受けるところの数種の型のレセプターが存在すること が見出されている。その主に知られたタイプのオピオイドレセプターとしては、 ミュー（ｍｕ）ｐデルタ（ｄｅｌｔａ　）　、カッパア（ｋａｐｐａ　）の各レ セプターである。この王権のレセプター全部は、鎮痛作用を仲介しているが、そ れらのその他の薬理的作用効果はかなり異なっている。例えば、ミューレセプタ ーは、さらに呼吸作用な抑制することを仲介し、彎腸内の物質移動を阻害する。

カッパアレセプターは、頚靜作用を仲介している。デルタレセプターもまた上記 したようにＭＡ作用を生ぜしめると考えられているが、それはミューレセプター のようには腸内の物質移動を阻害しないと考えられる。そのオピオイドの生物的 活性並びに結合性は直接にそのオピオイドの構造と関係している。

構造上レセプターサイトに結合することのできるオピオイド化合物は、各種の生 物学的作用効果を持つことができ、それら全ては各種の条理的な作用効果並びに 治療薬としての作用効果を得るに有用である。［作動薬（ａｇｏｎｉｓｔ　）　 Ｊとして知られたある糧のオピオイドは、レセプターを有する組織のある種の電 気的刺激のなされた神経伝達の出力を阻止し、例えば、電気的刺激による痙−や その他の反応を阻害することができる。モルヒネは、−糧の作動薬であり、価み に関連した伝達及び胃腸管の収縮を阻害するように働く。また「拮抗系（ａｎｔ ａｇｏｎｉｓｔ　）　Ｊとして知られたその他の物質は、作動薬のように電気的 刺激による現象を阻止することなくレセプターに結合することＫよって作動薬の 作用を阻止することが知られている。ナロキソン（ｎａｉｏｘｏｎｅ　）は拮抗 薬の一種で、作動薬がそのレセプターに結合するのを妨害するように働く。さら にある種の物質は、部分的に作動薬としても部分的に拮抗薬としても作用する。

エンドルフィン、籍にエンケファリンとして知られた天然に存在するオピオイド 鎮痛薬はその研究が非常になされてきている。その研究は、天然に存在するエン ケファリンの単離することから始められ、その二／ケフプリンハ、メチオニン・ エンク７７１Ｊン（ＨｔＮ　−ＴＹｒ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ− ＯＨ）とロイシン拳エンクファリン（ＨＩＮ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ −Ｌｅｕ−ＯＨ）との混合物であった。天然に存在するエンケファリンの単離の 後、工／クファリン様のオピオイド作用を全部有している合成エンケファリン類 が製造された。

更に説明を加える前に、ポリペプチドを記載するに用いられる用語について簡単 に説明して置くことが必要と思う。ペプチドは、確豆されたところの略号を用い てそのアミノば配列によって示される。例えば、本明細書で用いられているよう に、ｒＧｌｙＪはグリシンを表わし、「ＬｅｕＪはロイシンを表わし、ｒＴｙｒ Ｊはチロシンを我わし、ｒＰｅｎＪはペニシラミンを表わし、ｒｃｙｓＪはシス ティンを表わし、「ＰｈＣ」はフェニルアラニンを表わし、［ＴｈｒＪはスレオ ニンを表わし、ｒＭｅｔＪはメチオニンを表わす。そのアミノ酸のうちの一個以 上が他のアミノ酸で置き換えられているポリペプチド誘導体は、しばしばその基 本の化合物と、その置換された基の位置及び種類等を示して記載される。通常そ の置換位置は、そのペプチド鎖のアミノ末端のアミノ酸から始まる配列中のアミ ノ酸残基の数を示して示される。例えば、Ｈ，Ｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐ ｈｅ−Ｐｅｎ−ＯＨは、（Ｐｅｎ’）エンケファリンと書くことができ、エンケ ファリンの７ミノ末端から第５番目のアミノ酸を普通構成しているロイシン又は メチオニンの代わりにペニシラミンが置き換わっであることを示している。また 、アミノ酸は、Ｌ配置及びＤ配置の両方の立体異性体として存在することもでき る。

各種の困姫性の故に合成エンケファリンを大量に用いることは実用的ではない。

エンケファリンに関連してのそれら困難な問題の一つは、それが非常に不安定で あることそして血中での半減期が非常に短かいことである。

次に、エンクツプリン様ペプチドは、脳の血液関門を簡単には通過できないこと が知られている。しかしながら、その二ンクファリン様ペプチドは胎盤の関門を 通過することが知られ、未出生児に影響を与えることなく妊娠期間中及び出産時 に編痛剤として使用することはできない。

これらの問題点を解決しようとする試みは、そのエンケファリン分子の構造を改 変することに向けられた。そのエンケファリンの構造を改変すると、種々異なっ た薬理作用のものを生せしめる。それぞれのエンケファリン類縁体は、異なった 系においてかなり選択的な作用を持っている。脣に、種々のエンケファリン類縁 体は、異なったオピオイドレセプターに結合することが見出された。

しかしながら今日までそのエンケファリン類縁体のうちには単一のレセプターの タイプに高い選択性を有するものがなかったのでそれぞれのレセプターに関連し た薬理学的作用効果及び治療上の作用効果を選択的に誘導せしめたりあるいはそ れぞれのタイプのレセプターの役割を調べることは困難であった。

最近、ミューレセプターに高い特異性を有する工ンクファリン誘導体が示された 。

参照：　Ｈａｎｄａ、　Ｂ、　Ｋ、　Ｌａｎｅ、　Ａ、Ｃ，、Ｌｏｒ４　Ｊ、　 Ａ、　Ｈ，。

Ｍｏｒｇａｎ、　Ｂ−Ａ、、　Ｒａｎｃｅ、　Ｍ−Ｊ、、及びＳｍｉ　ｔｈ、　 Ｃ，Ｆ、　Ｃ−、ＥｕｒＪ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　７０：　５３１−５４０ （１９８１）　：Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、７７：４６１−４６８（１９８２）；及 び。

これらの文献は、本明細書において特に参考として加えられるものである。

また、レセプターの特異性は、工ンケ７アリンベプテドを立体配位の上から無理 に固定化することによっても実現されうる。このような固定化の例としては、そ のペプチド骨格のαまたはＮ−メチル化あるいは環化があげられる。

５ａｒａｎｔａｋｉｓの米国特許第４１ｔ＆７８６号明細書（本明細書中に特に 参考として加えられる）は、次式＝（式中　Ｒ１は水素１、低級アルキル、アリ ル、２−インペンテニル、３−インペンテニル、シクロプロピルメチル。

シクロブチルメチル、７エネチルまたはアルギニルで、Ｂ２は水素又は低級アル キルで　ＲＪは水素又は低級アルキルで、Ｒ４は水素、とドロキシメチル、カル ボ（低級）アルコキシ、カルバミル又はカルボキシで、Ｘは水素。

クロ０．７ロロ、ブロモまたはヨードである）の環状ポリペプチドまたはその１ ｌｉｌ型前駆体またはその因果として許容しうる塩について開示している。

５ａｒａｎｔａｋｉｓ　Ｋよって開示された化合物は、それを末梢部に投与した 場合温血動物に鎮痛作用を与えると言われている。しかしながら、その５ａｒａ ｎｔａｋｉｓの化合物はどのレセプタータイプに特異性を持つかについては示さ れていない。今日まで、デルタレセプターと特異的に反応するものとしては極く 僅かのエンケファリン類縁体が示されているのみである。

Ｈｒｕｂｙの米国特許第４５１＆７１１号明細１１（本明細書中に％に参考とし て加えられる）には、次式：（式中８１及びＲ２は同一でも異なっていてもよく 、水素。

メチル又は低級アルキルで；Ｒ″及びＲ４は同一でも異なっていてもよく、水素 、メチル又は低級アルキルである。

但し、ｎとｍの両方がＯの時Ｂｌ　、　ＢＺ　、　ＢＲ及びＲ４のすべてが水素 であることはない；Ｒｂは水素、Ｌ−チロシン。

Ｄ−チロ４７ン、又は１個又は２個の低級アルキル又はアルクニル基で七〇Ｎ− アミン基が置換されているＬ−チロシンあるいはＤ−チロシンで：Ｒ・は、置換 又は非置換の芳香族基で　Ｒ７は水素又はメチル基で　Ｂａはカルボキシレート 又はカルボキサミド又はアミノ酸残基で、Ｘ及びＹは水素又はメチル基で、ｎ及 びｍはそれぞれＯ又は１である） の環状ポリペプチドについての開示がなされている。そこに記載の化合物は、オ ピオイドレセプターに対し作動薬活性も拮抗薬活性も有していると言われている 。そしてヒト及びその他の動物において鎮痛作用を含めての薬理的あるいは治療 上の作用を誘導するのに使用され得よう。

Ｍｏｓｂｅｒｇ、　ｅｔ　ａｉ、は、ＰＮＡ８，８０．５８７１−５８７４　に おいて、環状でジスルフィドを含有しているｍ−コ 化合物、すなわち［Ｄ−Ｐｅｎ”、　Ｄ−Ｐｅｎ　’　）ｚ／り７アリｙ（ＤＰ ＤＰＥ）、及び［Ｄ−Ｐｅｎ　”　、　　Ｌ−Ｐｅｎ　’　〕エンケファリン（ ＤＰＬＰＥ）（該式中、Ｐｅｎはペニシラミン。

すなわち、β、β−ジメチルシスティンである）を開示している。これらのジア ステレオマー型エンケファリン類縁体は、次の式： を有している。これらの化合物は、δオピオイドレセプターに結合すると言われ ている。

Ｍｏｓｂｅｒｇ、　ｅｔ　ａｌ、はＬｉｆｅ　５ｃｉｅｎｃｅ、　３２ｐ　２５ ６５−２５６９（１９８１）において、環状のエンケファリンＣＤ−Ｐｅｎ”、 　Ｄ−Ｃｙｓ’　）　ｘンヶファリナミド及び−０）１（Ｄ−Ｐｅｎ”、　Ｌ− Ｃｙｓ’　〕ｘｙケファリン及びエンケファリンはオピオイドレセプターに結合 することを開示している。

本発明は、デルタレセプターに対する特異性（以下、「デルタレセプター特異活 性」という）の非常に高い新規な化合物を提供するものである。本発明の化合物 は、予想外のデルタレセプター特異活性を示すところの一連の立体配位の固定化 された環状のエンケファリン頌縁体である。本発明の新規化合物は、作動活性剤 としても拮抗作用剤としても働き且つヒト及びその他の動物において作動薬活性 あるいは拮抗薬活性に相当する薬理学的作用効果あるいは治療上の作用効果を誘 起するのに使用することができる。特に好ましい群の化合物は、デルタレセプタ ー作動薬であって、慌知しうるようなミューレセプターの関与なしにそしてそれ に関連した副作用なしくヒト及びそれより下等な動物において鎮痛作用を誘起す るのに使用することができる。デルタレセプター拮抗薬とし、て作用するところ の本発明の範囲内の化合物は、必要な場合又は所望の場合本発明に従って製造さ れたデルタレセプター作動薬の作用な遮断するのに使用することができるし、ま た、アルツハイマー病の治療のような他のオピオイドアンタゴニスト（拮抗薬） の薬理作用あるいは治療上の作用効果を誘起するのに使用することができる。

本発明に従えば、次式のポリペプチド化合物およびその医薬として許容しうる塩 が提供される。

（上式中　Ｒ１、ＢＸ　、　Ｒ７及びＨａは、それぞれ独立に水素又は低級アル キルで　Ｂａ及びＲ４はそれぞれ独立に水素又は低級アルキルで、ＲＳ及びＲ− はそれぞれ独立に水素又は低級アルキルである：但し、ｎとｐの両方が００時Ｒ ”、Ｒ’、Ｒ″及びＲ＠のうちの少なくとも一つは水素以外である：Ｒ′１は低 級アルキル又は水素で　Ｒ２Ｏはヒドロキシ、低級アルコキシ、アミン、低級ア ルキルアミノ、低級ジアルキルアミノで　Ｂｌｌ　、　ＨＩ３及びＲ１３はそれ ぞれ独立に水素又は低級アルキルで　Ｒ１４は水素、低級アルキル又は低級アル カノイルで；ＢはＧｌｙ又は化学結合で、Ｘは、水素、低級アルキル、低級アル クニル、低級アルキニル、カルボキシ、低級カルボアルコキシ、カルバモイル、 低級アルキルアミノカルボニル、低級ジアルキルアミノカルボニル、低級アルコ キシ、アミノ、ハロゲン。

ニトロ、シアノ、低級アルカノイル又はホルミルで、Ｙは水素、低級アルキル、 低級アルケニル、低級アルキニル、カルボキシ、低級カルボアルコキシ、カルバ モイル。

低級アルキルアミノカルボニル、低級ジアルキルカルボ二Ａ／、　低級アルキル 、クロロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、シアノ、低級アルカノイル又はホルミルで ある、但し、Ｘ及びＹは両方が同時に水素であることはない；ｍ。

ｎ＋　　ｐ及びｑはそれぞれ独立に０，１又は２である）。

本明細書において、それ単独の場合もあるいは他の基と組み合わさっている場合 も低級アルキル基とは、６個までの炭素原子を有し、直鎖または分枝した形態の ものであってよく、メチル、エチル、プロピル、イノプロピル、ブチル、イソブ チル、ｔ−ブチル、アミル、ペンチル、ヘギシル等があけられる。その好ましい アルキル基は１個から３個の炭素原子を有するものである。特に好ましいアルキ ル基はメチルである。

低級アルクニル基あるいはアルキニル基は２個から６個の炭素原子を有し、直鎖 または分枝鎖の形態のものであってよい。低級アルクニル基としてはエチニル、 プロペニル、ブテニル、イソブテニル、ペンテニル等かアｆｆられる。低級アル キニル基としては、エチニル、プロピニル、フチニル、インブテニル、ペンテニ ル、インペンチニル等があげられる。

本明細書においてハロゲン（又はハロ）とは、ブロモ。

７０口、ヨード及びクロロのことである。

本明細書において、アルカノイルとは、主鎖上にカルボニル基を含有している低 級アルキル基のことである。

そのカルボニル基は該鎖の末端にあってもよいし、中間にあってもよい。好まし いアルカノイル基としてはアセチルがあげられる。

ｍ、ｎ、ｐ及びｑは０であるものが好ましい。１１　、　Ｒ＊。

Ｒ７及びＲＡは存在する時、それらは同一または異なってもよい。Ｒ１、Ｈ！　 、　Ｒ７及びＨｐのそれぞれの好ましいものは、独立に水素又はメチルであるも のである。１１　、　Ｈ！。

Ｒ７及びＲ畠は存在する場合、それらは水素であるものが％に好ましい。

Ｒ８、ＢＳ　、　ＢＳ及びＲ・のうちの好ましいものは、水素又はメチルである ものである。Ｒ３、Ｈ４、ＲＹ及びＲ＄がすべて水素であるものが峙に好適であ る。

Ｒ１の特に好適なものは水素又はメチルであるものである。Ｒｌｏがヒドロキシ であるものが好ましい。ａｌｌのうちの好ましいものは水素又はメチルである。

水素は特に好ましいものである。Ｈ１怠として水素又はメチルであるものが好ま しい。水素は特に好ましいものである。Ｒｌｍとして籍に好ましいものは水素又 はメチルである。Ｒ１４が水素又はアセチルであるものは好ましいものである。

ＢがＧｌｙであるものは好ましいものである。Ｘのうちの好ましいものとしては 、メトキシ、ヨード、ブロモ、アミノ、クロｏ、＝）口、及び水素があげられる 。Ｙのうちの好ましいものとしては、ヨード、クロロ、ブロモ。

メトキシ、ニトロ及び水素があげられる。

本発明の好ましい化合物としては、次式：（上式中％　ｎ”　ｅ　Ｒ’　＃　ｎ ’　ｅ　Ｒ”　ｅ　ｎ’　＋　ｎ”　ｅ　ｎ”　ｅ　Ｒ”　ｅ　Ｒｕ＃Ｒ”、Ｂ 、Ｘ及びＹは、これまでに定義したと同様のものである） る有するものである。

本発明の特に好ましい化合物としては、次式：％式％ （上式中、Ｘはメトキシ、ヨード、ブロモ、クロロ、ニトロ、アミノ又は水素で 、Ｙはヨード、クロロ、ブロモ。

メトキシ、ニトロ又は水素で　１１１は水素又はメチルで、Ｒ１４は水素、低級 アルカノイル又はアルキルで、Ｂは、Ｇｌｙ又は化学結合である） を有するものである。

上式中、ｃｉｙ以外のすべてのアミノ酸残基は、２位及び５位のペニシラミン及 び４位のアミノ酸（このものはフェニルアラニンであるか又はその誘導体である か、あるいはホモフェニルアラニン又はその誘導体等であってよい）を除いてＬ −配置のものである。４位のアミノ酸はＤ−配置であってもＬ−配置のものであ ってもよい。

２位のペニシラミンはＤ−配置のものであるが、５位のペニシラミンはＤ配置で あってもＬ配置であってもよい。

５位のペニシラミンとしてはＤ−配置であるものが好ましいものである。

本発明の好ましいものとしては、次のものをあけることができる： （ｐ　−ＣＩ　−Ｐｈｅ’）ＤＰＤＰＩ（ｐ−Ｉ−Ｐｈｅ’）ＤＰＤＰＥ （３’　−Ｎ（ｈ−Ｔｙｒ’　）ＤＰＤＰＩ［３’−Ｉ−Ｔ）’ｒ”）ＤＰＤＰ Ｅ （３’−Ｃｕ２Ｏ−Ｔｙｒｌ）ＤＰＤＰＥ（３’　−ＭＨｚ　−Ｔｙｒ”　）Ｄ ＰＤＰＥ（（Ｓ　？　Ｓ　）　−ｐ−Ｎｏｔ−β−ＭｅＰｈｅ’　）ＤＰＤＰＥ （（Ｒ，Ｒ）−１）−Ｎｏｔ　−β−ＭｅＰｈｅ番）ＤＰＤＰＥ（（Ｓ　＊　Ｒ ）　−ｐ　−Ｎ０ｓ−β−ＭｅＰｈｅ’　）ＤＰＤＰＩ（（Ｒ＊　Ｓ　）　−ｐ 　−Ｎｏ雪−β−ＭｅＰｈｅ’　）ＤＰＤＰＩ［（ｐ−Ｂｒ）−Ｐｈｅ番　）Ｄ ＰＤＰＩ（上式中、ＤＰＤＰＥはＣＤ−Ｐｅｎ”、　Ｄ−Ｐｅｎ’　）　ｘンケ ファリン、すなわちＬ−Ｔｙｒ’　−Ｄ−Ｐｅｎ”−Ｇｌｙ”−Ｌ−Ｐｈｅ’− Ｄ−Ｐｅｎ’である）。

該アミノ酸の肩に付けられた数字は、アミノ末端からのそのポリペプチド中での 位置を示すものである。例えば、Ｔｙｒは最初のアミノ酸を示しており、ペニシ ラミンは第二番目のアミノ酸であることを示しており、グリシンは第三番目のア ミノ酸であることを示しており、フェニルアラニンは第四番で、ペニシラミンが 第五番目にあることを示している。

本発明゛の化合物としては、作動薬（アゴニスト）と拮抗薬（アンタゴニスト） の双方があげられる。

本発明はさらにデルタレセプター特異活性を有しオピォイドレセプター作個薬の 安全で且つ有効な量を投与することによりヒト又はより下等な動物において鎮痛 作用を誘導する方法にも関するものである。

作動系である本発明の化合物は、従来公知のオピオイドに伴った望ましくない副 作用を生ずることな、＜鎮痛剤として使用することができる。本発明の作動系は 、胎盤関門を通過せず、故に未出生児に悪影響を与えないことから妊娠時及び出 産時においても使用されうると考えられる。また本発明の拮抗薬は、精神分裂病 やアルツハイマー病の治療と同様呼吸機能あるいは心血管機能の処置にも有用で ある。

特に、本発明のポリペプチドは、デルタオピオイドレセプターに対して非常に優 れた特異性を有する環状オピオイド化合物である。その改嵜された特異性は、本 発明の化合物が構造的に固定化された形態を有することによると考えられる。そ の構造上一定の形態を有することがデルタオピオイドレセプターのところでの活 性に必要とされる三次元的な配位形態を安定化しているようであるが、ミューレ セプターのところでの活性に必要とされた最適な配位を排除しているようである 。好ましい群において、その時に特異性が大きくなっているのはそのペプチド環 状の双子の（ｇｅｍｉｎａｌ　）ジアルキル置換の存在によると考えられ、そし て特に好ましい態様にあっては、そのペプチドの２位及び／又は５位の硫黄含有 残基の中のβ、β−ジアルキル置換基の存在によりその特異性が大きくなってい ると考えられている。

そのような双子型のジアルキル基は、そのｓ−８結合と一緒になり、立体配位上 安定な型のエンク７アリン類縁体を生成せしめる。このようにして、これらの化 合物は、デルタレセプターでの活性に必要とされる三次元配位となり、同時にミ ューレセプターに求められる至適配位を排除している。

例えば、５ａｒａｎｔａｋｉｓ　Ｋよって開示されたペプチドの２位のシスティ ンの半分をペニシラミンの半分（β、β−ジメチルシスティンの半分）、好まし くはＤ−配置のもので置き換えるとその５ａｒａｎｔａｋｉｓによって開示され たペプチドに高められたところの固い形態そしてデルタレセプター特異性を高め ることとすることができる。その半ペニシラミンエンクフアリン類縁体は、ミュ ーレセプターに対する特異性の分析における活性と比べて、デルタレセプターに 対する特異性の分析において６００倍も高い選択性を有することができる。また 本発明の双子型のジアルキル基で置換された化合物は、ラットの脳での結合アッ セイにおいて非常に大きいデルタレセプター特異性を示す。

本発明の好ましいエンク７アリン＠縁体の特徴の一つは、その工ンク７アリンの ２位及び／又は５位に半一ベニジラミンアミノ酸残基を導入することＫある。ペ ニシラミンは、β、β−ジメチルシスティンのことである。こ゛れらの化合物は 、その環中にすくなくとも一対の双子型のジアルキル基を有するという共通した 特徴を持っている。これらのジアルキル基は、特別に高度に立体的な形態を制限 し更に立体的に障害を付与し、その結果特にデルタレセプター特異性を高くする 。またβ、β−ジアルキル基とミューレセプターの結合部位との間の互いに親和 性のない立体的な相互作用及び／又は極性−非極性相互作用が、その東側された デルタレセプター特異性に貢献していると考えられる。棟々のアミノ酸を変える ことにより、異なった薬理物性が得られる。

作＠栗は平滑筋の電気刺激による収縮を阻害し、拮抗薬は作動系に起因した阻害 作用を阻止する。本発明の特定の化合物が作ｍ薬であるのか、部分的な作動系で あるのか、拮抗薬であるのか、部分的な拮抗薬であるのかは、本明細誉の教示を みて当業者によって通常の実験を行なうことＫより決定することができる。しか しながら、本発明の化合物は、非常に大きなデルタレセプターに対する％異性を 有すると考えられる。

またその環の大きさを変えること九より、種々の薬理学的作用効果及び生物学的 作用効果を生ぜしめられる。

例えば、本発明のポリペプチドの２位または５位のいずれかのアミノ酸をＤ−ホ モシスティン又は■１−ホモシスティンでもって置き換えることができる。

同様にして本発明のポリペプチドの２位又は５位のペニシラミン、又はシスティ ンはＬ−ホモシスティンで置き換えることができる。これらの修飾法のすべては 、本発明の範囲内のものである。

本発明の化合物は当該分野で知られた方法によって製造することができる。次に その方法を例示する。

下記の式で示される式■： （上式中、Ｘ、　Ｙ、　Ｂ、　Ｒ１−Ｒ１番２ｍｓ　　ｎｅ　Ｉ）及びｑは上記 で定義したようなものである） のポリペプチドを酸化剤、例えばＫｓ［Ｆｅ（ＣＮ）・〕でもってジスルフィド 結合形成条件下に処理し、式Ｉの化合物を形成せしめる。特に説明すると、その ジスルフィド結合は前もって脱ガス処理された水中に塩基性ｐＨｚ例えば、り） （Ｒ４（これはアンモニア水溶液でｐＨを調節することにより得られる）のもと てその線型のペプチドを溶解することにより生成させることができる。その溶液 は、次に酸化剤、例えばＫｉｄ：Ｆｅ（ＣＮ）・〕でもって画定せしめられる。

次にそのｐＨを酸、例えば、氷酢酸で、５に調節する。次にその粗生成物を当業 者に知られた方法によってｗＩ製する。例えば、唱イオン交換樹脂、例えば１５ ｍ／のＡｍｂｅｒｌｉｔｅ　ＩＲＡ−４５を加えて、過剰の７エリシアナイド及 びフェロシアナイド化合物を除去し、その混合物を濾過し、凍結乾燥する。その 粗生成物を５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　−１０力オムにかけ、１５％酢鍍でもって脱 塩処理する。更なる精製は、ＲＰ　−ＨＰＬＣ［ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、　Ｖ ｙｄａｃ　２１８　ＴＰ　１０１０　Ｃ１８逆相カラム（２５５ＢＩＸ　１５１ ）で行なわれ、α１チドリフルオロ酢酸中の２０−４０％アセトニトリルのグラ ジェント、１％／ｆｎ　Ｉ　ｎ−を用い流速４　ｄ／ｍ　ｉ　ｎで２１４　ｎｍ 又は２８０ｎｍでのＵＶ検知をしながら行なった。

式■の化合物は、当業者に知られた方法を用いて製造されることができる。式■ のポリペプチドは次に示されるアミノ酸からペプチド形成条件下に製造され５る 。

ＮＨ冨ｃａｘｃｏｏａ （上式中、Ｂ、　Ｘ、　Ｙ、　Ｒ”　−Ｒ１４，ｍ、　　ｎ、　ｐ及びｑは上記 で定義したものと同様のものである）。

次の工程式において、各アミノ酸部は、Ｉ、　　Ｈ，ＩＩＩ。

■あるいはＶで示される。

工程式 ％式％ 上記工程式において、２は、アミノ保護基で、Ａはカルボキシ保護基である。そ の使用することのできる各種の保護基は、　Ｔ−Ｗ、Ｇｒｅｅｎ、　Ｐｒｏｔｅ ｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎＯｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　Ｊｏ ｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ。

１９８１中に見出すことができょう。２としてはベンジロキシカルボニル又はＮ −１−ブチロキシカルボニルが、Ａとしてはベンジロキシカルボニルが好ましい 。上記工程式に示されているように１各力ツプリング反応の後、そのポリペプチ ド鎖を伸長させているものからアミン保繰基を当業者に知られた方法で除去する 。ポリペプチドを合成した後に当業者に知られた方法でそのアミノ保−基及びカ ルボキシル保護基を次に除去する。例えば、Ａがベンジロキシカルボニルである なら、接触水素添加に・　より除去することができる。

２がベンジロキシカルボニルの場合、接触水素添加又は酸試薬、例えばＨＢｒ／ ＨＯＨｃ、ＯＦ／ＰＹｒ、等による処理によりそれを除去することができる。

もし、置換基Ｘ、Ｙ又はＲ１４がペプチド形成条件下で反応性である場合保護基 を使用することができる。使用することのできる保護基については、前記したＴ 、Ｗ。

ＧｒｅｅｎのＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ ｙｎｔＪｚｓｉｓに記載のものを参照して決められる。

上記工程式に示されているように、そのアミノ酸は順番に１度に一個づつ付加さ れて、より大きな分子とされる。より詳細に述べると、アミン保繰されたアミノ 酸をカルボキシ保護されたアミノｒＲＫ加えて、２個のアミノ酸部分からなるペ プチドを形成せしめる。次に保讃されたアミノ酸を保護されたペプチドに加え、 それによりトリペプチドが形成される。この工程を式■のポリペプチドが得られ るまで続ける。

該工程式の各ステップにおける化合物のカップリング反応は、ペプチド化学にお いて確立された方法を用いてなされる。そのような方法の一つは、カップリング 剤としてシフクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いるものである。この ＤＣＣ法は、４−ジメチルアミノピリジン、ＨＯＢｔ又はｆＩ４（■）のような 添加剤と共にあるいはそのような添加剤なしに使用せしめられる。一般ＫＤＣＣ カップリング反応は室温で行なわれるが、その試薬に対して不活性な各種溶媒巾 約−２０℃〜５０℃のもと行なうことができる。

好ましい溶媒としては、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド。

メチレンクロライド、トルエン号があげられるが、これらに限定されるものでは ない。好ましくは反応は、アルゴン又は窒素のような不活性芥囲気下に行なわれ る。通常カップリング反応は、２時間内で完結するが、試薬により２４時間まで 行なうことができる。

そのカップリング反応の前にＸ及びＹがそのアミノ酸中に存在することが好まし い。Ｘ及びＹは、芳香族親電子付加反応、例えばニトロ化、ハロゲン化、７リー デル・クラフトアルキル化反応又はアシル化反応等のような当業者に知られた方 法でその適当なアミノ酸部分に加えられることができる。例えば、ｐ−二Ｆロー β−メチルフェニルア２ニン異性体は、Ｋａｔａｏｋａ、　ｅｔ　ａｌ、。

１０８４（１９７６）（これは参考として本明細書に付は加えられる）により合 成され分離することのできるエリ本発明のポリペプチドは固相ペプチド合成法に より製造することが好ましい。該合成法は同相マトリックス、例えば、クロロメ チル化されたポリスチレンで１−２チノシヒニルベンゼンでもって交差結合され ているものの表面でなされる。七〇〇−末端のＮ−保護されたアミノＦ３Ａ細誉 に加えられる）Ｋ開示された方法を用いて樹脂に結合させることができる。

該ｚ−■−樹脂な固相ペプチド合成反応容器中に入れ、Ｊ１次ｚ−■、ｚ−ｍ、 ｚ−ｎ及びＺ−１を固相ペプチド合成条件下に付加する。各ステップにおいて、 ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸及びアニソールでもって脱保讃処理をなす ことができる。次に１０チジイソプロビルエチルアミンでその得られたペプチド を中和する。次にそのペプチドを別のＮ−保融されたアミノ歌部分とカップリン グ反応させ、式■の所望ポリペプチドが得られるまでその工程処理を続ける。

該固相合成法力；完結したなら、当業者に知られた方法でそのポリペプチドの脱 保護を行なうことができる。例えば、そのペプチド樹脂をジクロロメタン、エタ ノール及びＤＣＭで洗い、乾燥する。次に該ペプチド樹脂をアニソール存在下成 体ＨＦでもって開裂処理する。溶媒を蒸発処理して除去し、乾燥した生成物をエ チルエーテルで洗い、該ペプチドを氷ｒｎｌ、３０％酢酸及び１ｏチ酢飲で佃出 し、濾過し、凍結乾燥し、式■（式中　ＢＩＯはヒドロキシである）の化合物を 得、次に上記で述べたようにしてジスルフィド型に変換する。次に該得られたポ リペプチド（式中８１°はヒドロキシである）を当業者に知られた方法で弐■の 他のポリペプチド（式中、ＲｌＧはアミン、アルコキシ、アルキルアミノ又はジ アルキルアミノである）に変えることができる。例えは、該ポリペプチド（式中 、Ｒ１０はアルコキシである）は、相半する酸化合物からフィッシャーのエステ ル化条件下に製造することができる。別の方法としては、もしＲ１０がメトキシ 又はエトキシの場合、ジアゾメタン又はジアゾエタンをそれぞれその場で合成し て使用することができる。

Ｒ１１１がアミン、アルキルアミノ又はジアルキルアミノである化合物は、該エ ステルとアンモニア、Ｎ−アルキルアミン又はＮ、Ｎ−ジアルキルアミンとを反 応させ、相当する非置換アミド又はＮ−置換アミド又はＮ、Ｎ−ジ置換アミド忙 することができる。

上記した生成物のＮＵは、ＴＬＣをシリカゲルプレー）　（Ｍｅｒｃｋ、　Ｋｉ ｅｓｅｌｇｅｌ　Ｆ−２５４，５Ｘ２０５１Ｉ）上で行ないみることができ、そ のスポットはＵＶ、ニンヒドリン又はヨウ素蒸気を用いて検出することができる 。次の組み合わせを用いることができる：ａ）ブタノール−酢識−水（４：１： １）、ｂ）　　ブタノール−酢酸−ピリジン−水（１３：３：１２：１０）、ｃ ）　　インプロパノ−ルー水酸化アンモニウム−水（３：１：１）、ｄ）　　ブ タノール−酢酸−酢酸エチルー水（１：１：１：１）。分析用ＨＰＬＣはＶｙｄ ａｃ　２１８　ＴＰ　１０１０　Ｃ１８カラム（２５ｅｘ　Ｘ　１５１　）を用 いて、０．１チドリフルオロ酢酸中の２５％アセトニトリルを用い、２１４ｎｍ 又は２８０ａｍでＵＶ検知しながら４ｍ／ｍｉｎの流速で均一な条件下に行なう ことができる。アミノ酸の定量分析は、ペプチド（約α５ｑ）を排気し且つ密封 したアンプル中でＨＣｌ液（０，５ｍ）でもって２４時間１１０℃で定常蕉沸し て加水分解して行なうことができる。分析はＢｅｃｋｍａｎ２０Ｃアミノ酸分析 機でもって行なう。

本発明の新規化合物は、塩基性窒素原子を有しており、酸と一緒になり塩を形成 することができる。そのような塩のすべてが本発明の範囲内のものであり、医薬 として許容しうる酸、例えば、塩ｒＲ，ａｍ、硝酸、トルエンスルホン戚、酢酸 、プロピオン酸、　１１！石酸、リンゴ酸及び同様な当該分野でよく知られた戚 との塩が特に好ましいものである。更に、例えば、メチル、エチル、ベンジル。

プロピル又はアリルのハロゲン化物又はサルフェートのようなハロゲン化炭化水 素又は恢酸化炭化水素を用いてアルキル化を普通の方法で行ない第四級化塩を形 成することもできる。

本発明の化合物は、選ばれた投与ルート、すなわち、経口投与、Ｗ脈内投与、筋 肉内投与又は皮下投与に適した各種の形態にされて宿主に投与されることができ る。

その活性成分化合物は、例えば、不活性希釈剤と共に又は資化性で可食性の担体 と共に経口投与されることができるし、ハード又はソフトな外殻のゼラチンカプ セル中に入れることもできるし、錠剤に圧縮することもできるし、直接に飲食物 と一緒に摂取することもできる。経口投与のためには、その活性成分化合物は、 賦形剤と一緒に摂取されることができ、摂貢できる錠剤、バッカルを錠剤、トロ ーチ剤、カプセル剤、エリ中シル剤、Ｓ濁剤、シロップ剤、ウェハー剤等の形態 を用いることができる。このような組成物及び調剤は、少なくともα１％の活性 成分化合物を含むべきものである。勿論、その組成物及び調剤の比率は変えるこ とができ、便利には単位ｌ量の約２％〜約６０−の間であることができる。この ような治療用途に用いられる組成物中の活性成分化合物の量は、好適な投与量が 得られるようなものである。本発明に従って、経口の単位投与剤型に約ｌμｔ１ ｋｇＣ体重）〜約１０００μｆ／ｋＩＣ体′Ｍ、）の範囲の活性成分化合物の量 を含むようにその組成物又は調剤は製造される。

好ましい活性成分化合物の投与量は、約１μｔ１ｋｇ（体Ｎ）〜約２０μｆ１ｋ ｇＣ体重）の範囲である。

該錠剤、トローチ剤、ピル剤、カプセル剤等は、また次のようなものを含有する ことができる二トラガントガム、アカシア、コーンスターチ又はゼラチンのよう な結合剤；リン酸二カルシクムのような賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデ ンプン、アルギン酸等の崩壊剤ニステアリン酸マグネシクムのような滑沢剤；シ ュクロース。

ラクトース、又はサッカリンのような甘味剤；ベパーミント、ウィンターグリー ン油又はチェリーフレーバー化剤のようなフレーバー付与剤が加えられる。巣位 投与剤型がカプセルの場合、上記の形の物質に加えて、液状担体を含有していて よい。各種のその他の物質がコーガングとしであるいはその投与単位剤型の物理 的形態を改変するために存在することができる。例えば、錠剤、ピル剤又はカプ セル剤は、シェラツク、槍又はその両方でコーティングすることができる。シロ ップ剤及びエリキシル剤は、活性化合物、甘味剤としてシュクロース、保存剤と してメチルパラベン又はプロピルパラベン、染料及ヒチェリーフレーバー又はオ レンジフレーバーのようなフレーバー付与剤を含有していてよい。もちろん、い ずれの単位投与剤型物を製造するにあたっても用いられるいずれの物質も医薬と して純粋であり、用いられた量で実質上非毒性であるべきである。加えて、その 活性成分化合物は、徐放性調夷物又は製剤中に入れられることもできる。

該活性成分化合物はまた非経口的に又は腹腔的投与されることができる。遊点の 塩基又は医薬として許容しうる塩として該活性成分化合物の溶液はヒドロキシプ ロピルセルロースのような界面活性剤の適切に混合された水のうちで製造される ことができる。Ｍｆｆｉ剤もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール 類、それらの混合物、オイル中で製造されることができる。通常の保存あるいは 使用条件下では、これらの調製物は保存剤を含有し、微生物が生育することを防 止せしめられている。

注射用に適した医薬形態としては、無菌水溶液剤又は懸濁化剤、あるいは注射す ることのできる無菌溶液又は懸濁液に即座に調製することのできる無園粉末剤が あけられる。すべての場合において、その実刑は無菌でなければならず、容易に 注射投与しうるように流動性でなければならない。それは、製造及び好酸条件の もとて安定でなければならず、細菌やカビのような微生物の汚染作用に対して保 存性がなければならない。該担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例 えば、グリセロール、プロピレングリコール、又は液体ポリエチレングリコール 等）、それらの適切な混合物又は植物油を含有する溶媒又は懸濁媒質であること ができる。その適度な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング剤を用 いたり、懸濁剤の場合には所期の粒子径に保持したり又は界面活性剤を使用した りして保たれることができる。

微生物の作用を防止するためには例えばパラベン類、クロロブタノール、フェノ ール、ソルビンｌ！Ｉ！、　チメロサール等の各種抗菌剤又は抗カビ剤によって なすことができる。多くの場合において、例えば糖類又は塩化ナトリウムといっ た等張化剤を含むことは好ましいことである。

注射用組成物に持続的な吸収性を付与するため、例えば、モノステアリン酸アル ミニウム又はゼラチ／といった吸収を遅延化させる試薬をその組成物中に用いて 行なうことができる。

無菌注射溶液は所要量の活性成分化合物を必要に応じ、各種の他の成分を含んだ 適当な溶媒中に入れ、次Ｋ濾過して殺菌することにより製造される。普通、懸濁 剤は、種々の殺菌した活性成分を上記したうちから選ばれた所・　要のその他の 成分及び塩基性の懸濁媒質を含有する無菌媒体中に入れることにより製造される 。無菌注射溶液を製造するための無菌粉末の場合、その好ましい製造法は、減圧 下乾燥し、その凍結乾燥処理により、該活性成分と所要の添加成分とからなる粉 末が、その前もって殺ｍＷ遇された溶液から得られる。

次なる実施例は、本発明をさらに説明するためのもの記載の方法により製造した 。

標記化合物は、固相法により、上記したようにしてＬ１７？のＮＰ−Ｂｏｃ−Ｄ −Ｐｅｎ−（Ｓ−ｐＭＢ）−樹脂（置換度＝０、８６　ｍｒｎｏｌ　／ｆ　ｍ樹 脂、ＬＯｍｍｏｌ）から出発して、次なる保護されたアミノ酸を１−次伸長する ペプチド鎖に加えて合成した： Ｎ’−Ｂｏｃ−ｐ−Ｆ−Ｐｈｅ　：　Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　；　Ｎ’−Ｂｏａ −Ｄ−Ｐｅｎ（Ｓ−ｐＭＢ）　：　Ｎ“−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ。

１５７ｔのＮ’−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｐｅｎ（Ｓ−ｐＭＢ）−Ｇｆｙ−ｐ−Ｆ −Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｅｎ（Ｓ−ｐＭＢ）−０−樹脂を得、それをＬ５−のアニソー ルを含む１５ｄのＨＦ液で６０分闇０℃で処理した。

該ＨＦを２０℃で減圧吸引１−てすばやく除去した。混合物を３Ｘ６０ｍ７！の エーテルで洗い、該ペプチドを４０ｓ＋／氷酢歌で抽出し、３Ｘ３０ｍの２０チ ａ［水溶液で洗った。該ペプチド溶液を凍結乾燥し、残留物を１，５００ＭＩｔ の脱気したＯ、　ｌチ酢酸水浴液に溶解した。該ｐＨを３Ｎ水酸化アンモニウム 液で＆４に調節し、１５０Ｉｌｔの０．０１Ｎ　Ｋｓ　（Ｆｅ（ＣＮ）ｓ　）　 Ｈな加えた。１２０分して後、そのｐＨを氷酢酸で４．５にあけ、陰イオン交換 樹脂ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲＡ−４５（Ｃｔ″″型）によってフェロシアナイド 物及び過剰の７エリシアナイド物を除去した。２０分間攪拌した後、樹脂を濾過 して除き、該樹脂を３　Ｘ　３０ｍの３０チ酢戚水Ｉ＠液で洗った。溶液を減圧 下２５℃でロータリーエバポレーター上で１５０ｍＫ濃縮し、ｆＬ結乾燥した。

残留物を５ｄの１５チ酢葭水浴液に溶解し、５０ｘλ２０の５ｅｐｈａｄｅｘ　 Ｇ　−１０を含有するカラムでのゲル濾過を行なった。主要ピークを単離し、凍 結乾燥した。得られた粉末を０．１％トリフルオロ昨酸中の２０％アセトニトリ ル２ＭｔＫ溶解し、Ｖｙｄａｃ　２１８　ＴＰ　１０１０　Ｃ１８ＲＰ−ＨＰＬ Ｃカラム（２５ｃｍ　ｘ　１６１１　）で精製した。

条件＝０．１％ＴＦＡ中の２０％ＣＨ３ＣＮで開始しての２０分間１％／ｍｉｎ のリニアーグラジェント溶出、Ｒ，速４ｄ／ｍｉｎ、比較的栽油性の不純物がα １１ＴＦＡ中の８０チＣＨＩ　ＣＮでカラムから洗われ、平衡（５ｍｉｎ、２０ ＳＣ＆ＣＮ　）化した後、カラムは使用される。主要ピークが白色粉末（収量７ ０１１Ｆ）として単離される。アミノ酸分析：　Ｇｌｙｌ、００（ＬＯＯ）　； Ｔｙｒ、　ａ！９３（１００）　：ｐ−Ｆ−ＰｈｅＬＯｌ（１０）精製された生 成物２の分析値はｆｉｌに示されている。

実施例３ １：Ｄ−Ｐｅｎ”、　ｐ−ｃｔ−ｐｈｅ’、　ｏ−ｅｎ’）エンケファリン（３ ）標記化合物なＮ’−Ｂｏｃ−ｐ−Ｆ−Ｐｈｅの代わりＩｃ　Ｎ’−Ｂｏｃ−ｐ −Ｃｔ−Ｐｈｅ　を伸長するペプチド鎖に加える以外ｗｍ例２におけると同様に して製造した。１．５ｆのＮ”−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ　−Ｄ−Ｐｅｎ　（Ｓ−ｐＭＢ 　）　−Ｇ　Ｉｙ−ｐ−Ｃ２−Ｐｈｅ４−Ｐ　’ｅｎ　（Ｓ　−ｐＭＢ　）−〇 −樹脂を得た。該ペプチド樹脂を前述のようにＨＦで処理し、該ペプチドを単離 し、環状構造に酸化し、次に上記実施例２のようにして精製した。白色粉末とし て６５岬の標記化合物３を得た。アミノ酸分析：ｃｌｙ　１００（ＬＯＯ）　： Ｔｙｒ、　０．９４（１，００）　；ｐ−Ｃｔ−Ｐｈｅ、　１．０９（ＬＯＯ） 。

精製された生成物３の分析値は、表ＩＫ示されている。

実施例４ （Ｄ−Ｐｅｎζｐ−Ｂｒ−Ｐｈｅ’、　Ｄ−Ｐｅｎ’　）エンケファリン、（４ ）１１Ｆｅ化合物ハ、Ｎ“−Ｂｏｃ−ｐ−Ｆ−Ｐｈｅ　　４℃代エテＮ”−Ｂｏ ｃ−ｐ−Ｂｒ−Ｐｈｅを伸長するペプチド鎖を合成する九使用する以外は上記実 施例２に記載のようにして製造した。

Ｌ３ｔのＮ’−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｐｅｎ（Ｓ−ｐＭＢ　）−Ｇｌｙ−ｐ−Ｂ ｒ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｅｎ（Ｓ−ｐＭＢ）−０−樹脂を得た。該ペプチド樹脂を前 と同様にしてＨＦで処理し、該ペプチドを単離し、環状構造Ｋｆｆｉ化し、次に 上記実施例２のようにしてＮ製した。白色粉末として４３ｑの標題化合物４を得 た。アミノ酸分析： Ｇｌｙｔ　１．００（１，００）：Ｔｙｒ、　０．８９（１，００）；ｐ−Ｂｒ −Ｐｈｅ、　０．９５（１００）生成物４の分析値は、表１に示しである。

実施例５ （Ｄ−ｅｎ”、　ｐ−Ｉ−Ｐｈｅ’、　Ｄ−Ｐｅｎ’　）エンケファリン（５） 標記化合物は、Ｎ″−Ｂｏｃ−ｐ−Ｆ−Ｐｈｅの代わりＫＮ”−Ｂｏｃ−ｐ−Ｉ −Ｐｈｅをその伸長するペプチド鎖の合成にあたり使用する以外実施例２と同様 にして製造した。１．８７−Ｐｅｎ（Ｓ−ｐＭＢ）−０−樹脂を得た。該保護さ れたペプチド樹脂を前記したようにしてＨＦで処理した。該ペプチドを単離して 、上記したようＫｌｌ状構造処し、次ＫＷ施例２のよう処して精製した。５５ｖ の標題化合物５を白色粉末として得た。アミノ酸分析： Ｇｕｙ、　ＬＯＯ（１，００）；Ｔｙｒ、　０．９１（１，００）；ｐ−１−Ｐ ｈｅ、　０．８８（１，００）。

化合物５０分析値は表１に示しである。

実施例６ （ＳｔＳ）［ｐ−Ｎαｒβ−ＭｅＰｈｅ’〕ＤＰＤＰＥ及び（ｇ、Ｒ）（ｐ−Ｎ Ｏ！−β−ＭｅＰｈｅ’　）ＤＰＤＰＩＬ７５ｆ／Ｌ５ｍｒｎｏｌのＮ’−Ｂｏ ｃ−８−ｐＭＢ−Ｄ−Ｐｅｎ−樹脂を用い、上記の方法を用い脱保護、中和及び カップリングのサイクルを２回ラセミ体のＮ’−Ｂｏｃ−（Ｓ、Ｓ）　（Ｒ。

Ｒ）−１）−ＮＯ，−β−ＭｅＰｈｅ−ＯＨ（ｍｐ　：　１４３℃）、Ｎ“−Ｂ ｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ，Ｎ’−Ｂｏｃ−８−ｐＭＢ−Ｄ−Ｐｅｎ−ＯＨ及びＮ”− Ｂｏｃ−Ｔｙ　ｒ−ＯＨに対して行ない、２．４３９の保護されたペプチド樹脂 を得た。該樹脂からそのペプチドを解離させた後、上記したようＫしてその粗製 の紛型のペプチドをＫｓ　（Ｆｅ（ＣＮ）ｇ）でもって環化した。粗製ペプチド を５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　１０カラムにかけ、１５％酢ばでゲル濾過しｗＩ製し た。主要ピークを集め、凍結乾燥し、白色粉末を得た。その一部（１００ＩＩＩ Ｆ’）をＶｙｄａｃ　２１８　ＴＰＩＯＩＯＣ１８カラム（２５ｃｙｓ　ｘ　１ 　ｃｍ　）を用いたセミ分離用ＲＰ−ＨＰＬＣにかけ、均−及びグラジェントク ロマトグラフィーな組み合わせて用いて分離した。条件：０．１％トリフルオロ 酢敵中の２５％ＣＨｓＣＮでもっての均一溶出。

２０分間、流速４　ｍ／ｍｉｎ　、　　２８０　ｎｍで検知；次に２０分〜２５ ．５分の１０％／ｍ　ｉ　ｎのリニアーグラジェント浴出；統いて０．１％ＴＦ Ａ中の８０％ＣＴｌ１ｌＣＮで　５分間均一溶出し、２分間０．１％ＴＦＡ中の ８０％〜２５％のＣＨ，ＣＮのグラジェント溶出を行なった。５分の平衡化の後 該カラムに新しいサンプルを流すことができる。

該カラムに約５１１Ｆのペプチドを注入してかけた。ジアステレオマーの二個の ペプチドに相当する主要ピーク２つを集めた。凍結乾燥処理し、それぞれ１８Ｎ と２３１ｑの純ペプチドを得た。＃素性によって光学的に純粋なエナンチオマ一 体の測定を行なった。第一のピーク及び第二のピークに対応するペプチドの１１ １９を６ＮＨＣ２液でもって２４時閣１１０℃で加水分解した。減圧下ＨＣ４溶 液を除去し、残留物をｚｏｏｐｔの水に溶解した。この溶液１００μｔをアミノ 酸分析に用い、別の１００．ｕｔの溶液をＴＲｌ５［＃液ｐＨ７，２の１００μ ｔで希釈した。

５Ｍ９（Ｚ２５Ｕ）のし−アミノ酸オキシダーゼ（Ｓｉｇｍａ）を加え、混合物 を２４時間３７℃でインキュベーション処理した。さらに酵素（’ｔｓ’ｘｑ＞ を加え、インキュベーション処理を２４時間続けた。サンプルをクエン酸緩衝ｇ 、　　ｐＨ＝　Ｚ　２　（Ｂｅｃｋｍａｎ　）で１ゴに希釈した。酵素で処理さ れたサンプルと酵素で処理してないサンプルの７ミノ醒の分析を行なった。第一 のピークから得られ、酵素で処理されたサンプルにおいてはアミノ酸分析でｐ− Ｎｏｔ−β−ＭｅＰｈｅは検出されなかった。これはＬ−アミノ酸オキシダーゼ 酵素がこのアミノ酸を分解したことを意味している。故にこのペプチドは、（Ｓ 　９　Ｓ　）　Ｉ）　−Ｎｏｗ−βＬＭｅＰｈｅ−ＤＰＤＰＩ　（Ｌ異性体）か らなるものであるが、第二のピークから得られたペプチドは、（Ｒｔ　Ｒ）　ｐ 　−Ｎｏｔ−β−ＭｅＰｈｅ’　−ＤＰＤＰＥ　（Ｄ異性体）からなるものであ った。

分析値：　（Ｓ　、ｓ）　Ｃｐ−Ｎｏ＠−β−Ｍｅ−Ｐｈｅ’　）　ＤＰＤＰＥ ：ＴＬＣ：ＪＡ：０．４６：ＲｆＢ：Ｑ、６４；ＲｆＣ：０．９１　；Ｒ４Ｄ： ０．８２；ＨＰＬＣ：に’−Ｌ５９；ＦＡＢＭＳ：ＭＨ”７０５．実測値７０５ ．　’Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ−ｄ＠　）　Ｔｙｒ’　δ９．４ 　（Ｈ，ＮＨ，ｍ）、４．２５　（Ｈ，ＩＩ！＃＃　ｍ）、１９５（Ｈ。

ＨＪ、ｄｄ）、Ｚ７５　（Ｈ，Ｈｐ、　ｄｄ　）　；Ｄ−Ｐｅｎ”δ＆５３（Ｈ ，ＮＨ，ｄ）、４．５（Ｈ，Ｈａ、　ｄ）、Ｌ２５（３Ｈ，ＣＨＩ。

Ｓ）、０．９６　（３Ｈ，ＣＨ３，ｓ　）　；　Ｇｌｙ”δ＆５１　（Ｈ，ＮＨ 。

ｔ）、４１３（亀Ｈ，，ｄｄ）、１１０（Ｈ，Ｈ，、ｄｄ）；（Ｓ　ｔ　Ｓ　） 　ｐ　−Ｎｏｗ−β−ＭｅＰｈｅδ＆３０（Ｈ，Ｎ）ｉ、　ｄ）、４．３１　（ Ｈ，Ｑ、　ｄ、　ｄｄ）、３．４３（ＩＨ，ＨＦ、ｄｄ）、Ｌ　１８　（３Ｈ， ＣＨｓ　、ｄ　ｄ　）　；　Ｄ　−Ｐ　ｅｎ”　７．４５　（Ｈ−ＮＨ−ｄ）、 ４．１８　（Ｈ，Ｈ，、ｄ　）、１．２２　（３Ｈ，ＣＨｓ、　Ｓ　）、ＬＯ６ （３Ｈ，ＣＨｓ、　Ｓ　）。分析値”　（”５Ｒ）Ｃｐ−ＮＯ２−β−Ｍｅ−Ｐ ｈｅ’　）　ＤＰＤＰＥ　：　Ｔ　Ｌ　Ｃ：　ＲＩＡ　：α４１；ＲｆＢ：α６ １　；Ｒ４Ｃ：　０．８１　；ＲｆＤ：　０．８２；ＨＰＬＣ：に’＝３．６６ ；ＦＡＢＭＳ　：　ＭＨ”　７０５．　実測値７０５；’Ｈ−ＮＭＲ（５００Ｍ Ｈｚ、　ＤＭＢＯ−ｄ＠）　；Ｔｙｒ’δ９．３３　（Ｈ，ＮＨ，ｍ）、４．１ ０　（Ｈ，Ｈ，、ｍ）、Ｚ８４．Ｚ８１　（２Ｈ，Ｈ，＃、ｄｄ）、Ｄ−Ｐｅｎ ”　（δ＆６０（Ｈ，Ｎ）ｌ、　ｄ）、４３６　（Ｈ，Ｈ，、ｄ）、Ｌ２４（３ Ｈ，ＣＨｓ、ｓ）、α９６　（３Ｈ，ＣＨｓ、　　ｓ　）　：Ｇｌｙ”δ＆４４ （Ｈ，ＮＨ，ｄ）、３．６５（Ｈ，Ｈ，、ｄｄ）、λ５１（Ｈ，Ｈ、ｄｄ）；（ Ｒ，Ｒ）ｐ−Ｎｏ、−β−ＭｅＰｈｅ’　７．６２（Ｈ，ＨＮ、　ｄ　）、４． ７６（Ｈ，Ｈｐ、ｄｄｄ）、３．４６（Ｈ。

ＨＬ　　ｄｄ）、Ｌ２１　（３Ｈ，ＣＨ３，ｓ　）　：　Ｄ−Ｐｅｎ５δ７．７ ８（Ｈ，ＮＨ，ｄ　）、４．２４　（Ｈ，Ｈ，、ｄ　）、１．２４（３Ｈ。

ＣＨ３，ｓ）、０．９６（３Ｈ，ＣＨｓ、ｓ）（Ｓ？　Ｒ）　Ｃｐ　−Ｎｏ、− β−ＭｅＰｈｅ’　：ｌ　ＤＰＤＰＥ及び（Ｒｔ・Ｓ　）　Ｃｐ　−Ｎｏ、−β −ＭｅＰｈｅ’　：］　ＤＰＤＰＥＬ４５　ｔ　（Ｌ２５ｍｍｏｌ　）のＮ’− Ｂｏｃ−８−ｐＭＢ　−Ｄ−Ｐｅｎ−樹脂を合成のために用いた。上記で記載し た処理方法に従ってＮ’−Ｂｏｃ−（Ｓ　、Ｒ）及び（Ｒ，５）ｐ−Ｎｏｔ−β −ＭｅＰｈｅ−ＯＨラセミ体アミノ［（ｒｒ＋ｐ：８４℃Ｌ　Ｎ“−Ｂｏｃ−Ｇ ｌｙ−ＯＨＮｇ−Ｂｏａ−８−ｐＭＢ−Ｄ−Ｐｅｎ−ＯＨ及びＮ“−Ｂｏｃ−Ｔ ｙｒ−ＯＨを伸長するペプチド鎖に加えた。該樹脂からＨＦによってそのペプチ ドを除去し、線型のペプチドを上記したのと同僚の方法によって環化した。粗製 ペプチドの脱塩を５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　−１０カラムでのゲル濾過によって行 なった。そのジアステレオマーペプチドの最終的な精製処理を、Ｖｙｄａｃ　２ １８　ＴＰ　１０１０　Ｃ１８カラム（２５ｅｙｎｘ　１６ｎ）を用いたセミ分 離用ＲＰ−ＨＰＬＣによって、均−及びグラジェントクロマトグラフィーを組み 合わせて行なった。

条件二０．１％ＴＦＡ中の２３．５−〇ＨｓＣＮで２０分間均一浴出した。流速 ４ｍ／／ｍｉｎ、　　２８０　ｎｍｍ知知カラムの洗滌は、（Ｓ　、Ｓ）及び（ Ｒ，Ｒ）［ｐ−Ｎｏｔ−β−Ｍｅ−Ｐｈｅ’）ＤＰＤＰＩのｗｊＩＲの場合と同 様にして行なった。二つの主要ピークを果めてＯＰ、粘乾燥した。酵素法によっ て前記したと同様の方法により光学的に純粋なペプチド中のｐ−Ｎｏ、−β−Ｍ ｅ−Ｐｈｅの配置を測定した。第一のピークからのペプチドは（ｓ＊　Ｒ）　（ ｐ−Ｎｏｔ−β−ＭｅＰｈｅ’　］ＤＰＤＰＥ　（Ｌ異性体）であり、第二のピ ークからのペプチドは、（Ｒ＊　Ｓ　）　Ｃｐ　−Ｎｏｔ−β−Ｍｅ−Ｐｈｅ’ ）ＤＰＤＰＩ（Ｄ異性体片あった。

分析値（Ｓ　＊　Ｒ）　ｐ　−Ｎｏｔ−β−ＭｅＰｈｅ’：ＩＤＰＤＰＥ　：　 ＴＬＣ：ＲｆＡ　：　０．４８　；Ｒ（Ｂ　：　０．５３　；Ｒ４Ｄ　：　０． ７５　；ＨＰＬＣ：　Ｋ’　＝Ｌ９８；ＦＡＢＭＳ：　（Ｍ＋１）”　７０５． 　爽ｍＩＭ７０５；’Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＪ（ｚ、　ＤＭＳＯ−ｄｓ）　Ｔｙ ｒ’　Ｊ　９．３２　（Ｈ，Ｎｕ。

ｍ）、４．２３　（Ｈ，Ｈｇ、　ｍ　）、１９３．Ｚ７４（２Ｈ，Ｈｐ。

ｄｄ）；Ｄ−Ｐｅ−δ＆６４（Ｉ（、ＮＨ，ｄ）、４．５６（Ｈ。

Ｈｅ、ｄ）、Ｌ３４　（３Ｈ，ＣＨｓ、　ｓ　）、１．０２（３Ｈ，ＣＨｍ。

Ｓ）、ｃｌｙ”δ８．６３（Ｈ，ＮＨ，ｄｄ）、４．４７　（Ｈ，Ｈａ。

ｄｄ）、３．２４（Ｈ，Ｈ，ｄｄ）；（ＳｔＲ）−ｐ−Ｎｏｗ−β−ＭｅＰｈｅ 　’δ＆６８（Ｈ，ＮＨ，ｄ）、４．４２　（Ｈ，Ｈ，、ｄｄｄ）、３．５７（ Ｌ　Ｈ，ｄｄ）、１．２８　（３Ｈ，ＣＨｓ、　ｄｄ）　；　Ｄ−Ｐｅｎ’　ａ 　７．３　（Ｈ，ＮＨ，ｄ　）、４．２３　（Ｈ，ＨＪ、　ｄ　）、１３４　（ ３Ｈ，ＣＨｓ、　　Ｓ　）、１．０２　（３Ｈ，ＣＨｓ、　Ｓ　）。

分ｍ直　（Ｒｔ　Ｓ　）（ｐ−Ｎｏｔ−β−ＭｅＰｈｅ’　：］ＤＰＤＰＥ　： 　ＴＬＣ：ＲｆＡ：０．４８：ＲｆＢ：０．５３；ＪＤ：Ｏ２７５；ＨＰＬＣ： 　Ｋ’＝Ｚ　５６　＊　　Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＥＺ　−ＤＭ　Ｓ　Ｏ−ｄｓ　 ）　’　ＴＹ　ｒ　’δ９．３４　（Ｈ，ＮＨ，ｒｒｘ）、４．０９　（ｉ（、 Ｈａ、　ｍ　）、ｚ８８゜Ｚ８０　（２ＦＩ、Ｈｐ、ｄｄ）；Ｄ−Ｐｅｎ”δ８ ．１０　（Ｈ，ＮＨ，ｄ）、４．３９　（Ｈ，Ｈｅ、　ｄ　）、１３２　（３Ｌ 　ＣＩ（！、　ｓ　）、１．０２（３Ｈ，ＣＨｓｔ　Ｓ　）　；Ｇｕｙ”δ＆８ １　（Ｈ，ＮＨ，ｄｄ）、３８０　（Ｈ，Ｈ，、ｄｄ）、３．７０（Ｈ，Ｈ，ｄ ｄ）；（Ｒ，Ｓ）ｐ　−Ｎｏ、−β−ＭｅＰｈｅ’　７．７４　（Ｈ，ＮＨ，ｄ 　）、４．７２（Ｈ。

Ｈａ、　　ｄｄｄ　）、　１５６（Ｈ，Ｈ−、ｄｄ）、　Ｌ２１　　（３）Ｉ、 　　ＣＨｍｄｄ）　；Ｄ−Ｐｅｎ’　ａ　７．７５　（Ｈ，ＮＨ，ｄ　）、４． ２１（Ｈ，Ｈ。

ｄ）、１．３’２　（３Ｈ，ＣＨｍ、　　ｓ　）、ＬＯ２（３Ｈ，ＣＨｓ、　ｓ ）。

実施例８ （３−Ｎｏｗ　−Ｔｙｒ’　）ＤＰＤＰＩａ）ＤＰＤＰＥのニトロ化 ＤＰＤＰＥのニトロ化は、Ｒｉｏｒｄａｎ　ｅｔ　ａｌのＪ　Ａ　ＣＳ、。

８８．４１０４（１９６６）の方法をＧｕｉｌｌｅｍｅｔｔｅ。

ｅｔ　　ａｌ　のＪ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、２７．　３１５（１９８４）’に従っ てすこ；し改変した方法に従って行なわれた。

ＤＰＤＰＩ（１０，４１１Ｆ、１１６．ｇｍｏｌ　）を５Ｍｔのエタノール−０ ，０１Ｍ酢飯ア／モニウム液ｐＨ＝７の混合物（１：）に熔解し、呈温で攪拌し た。テトラニトロメタン（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｒｐ、　１２０ １１Ｆ、　　６１４μｍｏｌ。

４５倍過剰な量）の５ＩＩｔエタノール液をゆっくりと８１０分間かけて加え、 ５時間攪拌した。３０分毎にＲＰ−ＨＰＬＣで、Ｖｙｄａｃ　２１８　ＴＰＩＯ ＩＯＣＩ８カラム（２５αｘ　１　ａｔｒ　）　？：用いて反応をチェックした 。

条件：リニアーグラジエント沼田、０．１％）リフルオロ酢酸中の２０　３５％ ＣＨｓＣＮ、　　１％／ｍｉｎ　、　　２８０　ｎｍで恢知、流速４　ｓｄ／ｍ ｉｎ　０反応の間にＤＰＤＰＥが消失し、［３’−ＮＣｈ−Ｔ’Ｙｒ”）ＤＰＤ ＰＥが現われ、ニトロ型のものが観察される。５時間後そのｐＨをｌ！ｒｌ：酸 で４に調節し、反応を停止させた。生成物の混合物をＲＰ　−ＨＰ　ＬＣ（上記 参照）によって分離した。反応混合物中には［３’　、　５’−ジニトロ−Ｔｙ ｒ’　］ＤＰＤＰＥは検出されなかった。

ＴＬＣ：　Ｒ４Ａ　：α４．Ｒ（Ｂ：α６６、ＲｆＣ：α８３．Ｒ（Ｄ：０．８ ２：ＨＰＬＣ：に’＝２１３１　；ＦＡＢＭＳ：　［Ｍ＋１）”６９１゜実測１ 直６９１０ ｂ）ｓｐｐｓによる（　３’　−Ｎｏｔ　−Ｔｙｒ’　）　ＤＰＤＰＥの製造Ｌ １７ｆ（１ｍｍｏｌ）のＮ　−Ｂｏｃ　−Ｓ　−ｐＭＢ　−Ｄ　−Ｐｅｎ−樹脂 を合成に用い、［ｐ　−Ｆ　−Ｐｈｅ’　）　ＤＰＤＰＩと同様にしてなされた 。

ＴＬＣ：ＲｆＡ：０．４．　ＲｆＢ：０．６７、　ＲＩＣ：０．８３．　ＲｆＤ ：　０．８２；ＨＰＬＣ：に’＝４８１　：ＦＡＢＭＳ　：　［Ｍ＋１）”６９ １゜爽＃１１直６９１゜ 実施例９ Ｃ３’−ＮＨ諺−Ｔｙｒ’　）ＤＰＤＰＩａ）　　Ｒｉｏｒｄａｎ、　ｅｔ　ａ ｌ、のＢｉｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ、２３６， １６１−１６３（１９７１）の方法を用いて、（３’　−Ｎｏｔ　−Ｔｙｒ　） 　ＤＰＤｉ’ＥｆｔＮａ＊５ｚＯ４で還元した。

（３’　−Ｎｏｔ　−ＴＹｒ’　）　ＤＰＤＰＩ　（２ｄのＴＲｌ５緩衝液（ｐ Ｈ８，０，０５Ｍ）中のｓ、ｏｑ）をα５ｄＴＲＩＳ緩衝液中の亜二チオン誠ナ トリウム（５，２１１１Ｐ、３０μｍｏｌ　。

４倍過剰１）中に加えた。（３’　−Ｎｏｔ　−Ｔｙｒ’　）　ＤＰＤＰＥのｍ ｇの黄色はすぐに消失した。反応混合物を〔３′−Ｎｏ！　−Ｔｙｒ　）ＤＰＤ ＰＨに対して使用されたと同じ条件下にＶｙｄａｃ　２１８　ＴＰＩＯＩＯＣ１ ８カラム（２５ｃＩｇｌｘ１６Ｉ）のＨＰＬＣで精製した。

収率：８０チ。ＴＬＣ：　ＲＩＡ　：　０．３．　ＲｆＢ　：　０．３９゜Ｒ（ Ｄ　：　０．６２　；ＲＰ−ＨＰＬＣ：　Ｋ’＝０．６３　；　ＦＡＢＭＳ　： ＣＭ＋１）”６６１．実測値６６１０ ｂ）　　（３’−Ｎｏｗ−Ｔｙｒ’：）ＤＰＤＰＥの水素化（３’　−Ｎｏｔ　 −Ｔｙｒ’　）ＤＰＤＰＩ　（１９’１？、　　１６　、ｇｍｏｌ　）を約４０ 　ｐ−ｓ−ｉ−のＨ，ガスのもと２時間炭素担持Ｐｄ（５チ）の７岬の存在下に 水素化した。触媒を一過する前に、２０ｐｔのジテオエタンを反応混合物中に加 えて、酸化から保表し、生成物が触媒に吸着されないようにした。触媒な濾過し 、溶液を凍結乾燥した。痕跡のジチオエタンを上記と同僚な条件下にＲＰ−ＨＰ ＬＣを用いて除去した。

収量：１岬、３３チ、ＴＬＣ：Ｒ（Ａ：α３．ＲｆＤ：α６０　；　ＲＰ−Ｉ（ ＰＬＣ：　Ｋ’＝０．６３゜〔３’　−Ｉ　−Ｔｙｒ’　）　ＤＰＤＰＥ　：ａ ）ＳＰＰＳによる（　３’　−Ｉ　−Ｔｙｒ’　）　ＤＰＤＰＥの製造１６１ｔ のＮ’−Ｂｏｃ−８−ｐＭＢ−Ｄ−Ｐｅｎ−樹脂（１５ｍｍｏｌ）を、Ｃｐ−Ｆ −Ｐｈｅ’）ＤＰＤＰＥＫ対して記載したようにして行なわれた合成法に用いた 。環化した粗製ペプチドを５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　１０カラムのゲル濾過にかけ 、３０チ酢酸液で精製した。主要ピークを集め、凍結乾燥し、５ｅｐｈａｄｅｘ 　Ｇ　−２５ブロック重合化カラムの分配クロマトグラフィーＫかケ、溶出液と してｎ−ブタノール−トルエン−ピリジン−昨改−水Ｃ６：　３　：α１３５： α１３５：＆５５）の上相を用いて精製した。

第一のピークはポリマーであり、第二のピークは〔３′−Ｉ−Ｔｙｒ’）ＤＰＤ ＰＥであった。

ＴＬＣ：ＲｆＡ：α４７．　ＲｆＢ　：　０．６７．　Ｒ２Ｏ：α８９゜ＲｆＤ 　：　０．８４　；　ＲＰ−ＨＰＬＣ：　Ｋ’＝Ｚ７４　；ＦＡＢＭＳ　：ＣＭ ＋１３”７７２．　　実測値７７２゜ｂ）　　Ｄ　Ｐ　Ｄ　Ｐ　Ｉのヨード化Ｇ ｒｅｅｎｗｏｏｄ法によってＤＰＤＰＥのヨード化を行なった。

ＤＰＤＰＥ−ＴＦＡ塩（０，８３４，Ｌ　１　ｐｍｏｌ　）をリン酸緩備１’ｌ ［（ｐＨ７，２，０，４Ｍ、Ｌ５Ｍｔ）Ｋ浴Ｍした。２０μｍのＮａＸ水浴液（ α２２４岬、Ｌ５μｍｏｌ　）を０℃で加えた。２０μｔのクロラミン（α８２ ４岬、２９μｍｏｌ　）の水溶液を加えて反応を開始した。混合物を１分間攪拌 した。３艷の０．１％ＴＦＡ液を加えて反応を止めた。反応混合物中の組成をＶ ｙｄａｃ　２１８ＴＰ１０１　ＱＣ１８カラムを用いてＨＰＬＣＫかけ、α１％ ）リフルオロ酢酸水浴液中の２０−４０％ＣＨ，ＣＮのリニアーグラジェント、 １％ｍ１ｎｔ　ｆｆ’−速３ｄ／ｍｉｎで溶出して測定した。未反応のＤＰＤＰ Ｅ、（モノ−ヨード−Ｔｙｒ’　：ＩＤＰＤＰＥ、痕跡の［３’、５’−ショー ト−Ｔｙｒ’　）ＤＰＤＰＥ及び未知の生成物が検出された。本粂件下でのに′ 値はそれぞれ１７７．１６．３．．１２及びＬｉ２であった。〔モノヨード−Ｔ ｙｒ’　）−ＤＰＤＰＥｆ）Ｋ’値は、５ＰＰＳＩＣＪ：って製造された［　３ ’　−Ｉ−Ｔｙｒ！〕−ＤＰＤＰＥから侍られたものと一致した。

実施例１１ （３’　−０ＣＨｓ−Ｔｙｒ’　〕ＤＰＤＰＩ標記化合物はＮ”−Ｂｏｃ−３’ −ＮＯ２−Ｔｙｒ−ＯＨの代わりにＮ’−Ｂｏｃ−３’−０ＣＨ３−Ｔｙｒ−Ｏ Ｈをその伸長ペプチド鎖に加える以外５ｐｐｓによってＣ３’　−Ｎｏｔ　−Ｔ ｙｒ’　）ＤＰＤＰＥについての方法に従って製造された。その処理操作及び精 製は、（ｐ　−Ｆ　−Ｐｈｅ’　）ＤＰＤＰＩと同僚な方法で行なった。

ＴＬＣ：　Ｒ４Ａ　：α３６．　ＪＢ　：　０．６８．　ＲｆＣ：　０．８６゜ ＲｆＤ　：　０．８１゜ＨＰＬＣ：　Ｋ’＝　ＬＯ５；　ＦＡＢＭＳ　：　（Ｍ ＋１　）”６７６、央測値６７６゜ 本発明の化合物は、モルモットの回＃（以下、ＧＰＩという）及びマウスの輸精 管（以下、ＭＶＤという）でのアッセイ系での七〇札対活性並びにラット脳レセ プターでのトリチウム化ナロキソン（以下、（’Ｈ）ＮＡＬという）及び［３Ｈ ）　［Ｄ　−Ａｌａ”、　Ｄ−Ｌｅｕ’　）エンケファリン（以下、Ｃ３Ｈ）Ｄ ＡＤＬＥという）と競合しての結合性について試験した。

一般的にはＭＶＤ調製物は、デルタレセプターを太いに含んでおり、ＧＰＩｆｉ ｉ物はミューレセプターを太いに含んでいると思われている。これらのアッセイ では、ＭＶＤ組城及びＧＰＩ組織におゆる電気刺激による収縮の程度が測定され た。本発明の化合物は、ＧＰＩアッセイにおけるよりもＭＶＤアッセイにおいて より大きな活性を示し、デルタレセプターに対し大きな豐異性を示していること が確認された。枢動の阻害は、ナロキソン（拮抗薬の原型）により侶抗され、拮 抗薬活性を有する本発明の化合物によっても拮抗されると考えられる。一般的に は以下を参照：　Ｋｏｓｔｅｒ　ｌ　ｉｔｚ、　Ｈ，Ｗ、、　Ｌｙｄｏｎ、　Ｒ 。

Ｊ、、及びＷａｔ　ｔ、　Ａ　Ｊ、、　Ｋｏｓｔｅｒｌ　ｉ　ｔｚ、　Ｈ，Ｗ、 、及びＬｅｓｌｉｅ。

Ｆ、　Ｍ、、　Ｂｒ、　Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、　５３．３７１−３８１ （１９７５）、（これらは参考として本明細書に含められる。）臀に説明すると 、ＧＰＩバイオアッセイ及びＭＶＤバイオアッセイの実施方法は次のとおりであ る。

ＧＰＩ及びＭＶＤバイオアッセイ マウスの輸精管及びモルモットの回腸の縦の腸筋神経最の帯状断片を電気的に刺 激して平滑筋の収縮を起こしてバイオアッセイに用いた。１５０−４００ｒの体 重の雄のＨａｒｔｌｅｙモルモット及び２５−３０２０体１の夏のＩＣＲマウス から組織はとられた。その組織は絹の縫合糸で金の鎖に結びつゆ、３７℃の酸素 付与された（９５％　０．　５　％　Ｃｏｔ　）　Ｋｒｅｂｓの夏炭酸塩浴液（ ＭＶＤではマグネシウムなし）を含有する２０ｍの浴液中につげ、１５分間平衡 化された。次にその組織をＩＦの張力（ＭＶＤでは０．５ｆ）で引っばり、１５ 分間平衡化した。

その組織を０．１　Ｈｚ　、　　０．４　ｍ５ｅｃのパルス（ＭｖＤでは２、０ 　ｍ５ｅｃのパルス）での白金板電極と極太の大きさの電位とで刺激した。薬剤 を浴槽中に２０−６０μｔの容量で加えた。その作動薬を３分間その組織に接触 しつづけた。次にその浴槽を数回新しいＫｒｅｂｓ溶液で洗った。

組織を８分間再平衡化処理し、薬剤付与前の収縮の高さを再び得た。作ｍ薬を加 える２分前に拮抗薬をその俗情に加えた。作動薬を加える１分前での収縮の平均 の高さを、作動薬にさらして後３分後での収縮の高さで割ることによって阻害チ を計算した。ＩＣ１ｏ（ｉ［は、４つの組織の平均値である。その結果を表２に 示す。

表２ ＧＰＸ及びＭＶＤアセッセイでの ＤＰＤＰＥ類縁体の阻害活性及び選択性ＧＰＩ調製物は、主にミュータイブのオ ピエートレセプターを含有し、ＭＶＤ調製物は主にデルタタイプのオピエートレ セプターを含んでいることが示されている。

こうして表２で示されているようにこの二つのアッセイ系でのＩＣ１ｏ値を比較 することにより、試験＠縁体化合物のレセプターに対する特異性が測定される。

表２に示されたその結果は、本発明の類縁体化合物はデルタレセプター籍異性が 非常に大きいことを明確に示している。

別のバイオアッセイ法は、ラジオレセプター結合アッセイ法である。このアッセ イは、オピエートレセプターへの結合の阻害とトリチウム化されたリガンド、　 ＤＰＤＰＥ及びＣＴＯＰ、すなわち （Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｏｒｎ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ −ＮＨｘ）に置き代わるそのエンクファリン＠縁体の活性をみるものである。

このアッセイの方法は、次のとおりである。

ラジオレセプター結合アッセイ 雄のＳｐｒａｇｕｅ　−Ｄ　ａｗｌ　ｅｙラットの成体（２００−２５０２）を 殺し、すぐさま脳を取り出し、氷上に置いた。

全編マイナス大脳をＰｏ１ｙｔｒｏｎ　ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ（Ｂｒｉｎｋｍ ａｎ、セツティング＃５．　１５　ｓｅｃ　）を用いてホモジュナイズした。そ のホモシュネートを２５℃で３０分間インキュベーション処理し、内因性オピオ イ・ドを除去し、ラジオパインディング（結合）アッセイにおいて使用する前に ４３００Ｏｆで１０分間遠心するのを２回行なった。迅速Ｆ適法によって（”Ｈ ）ＤＰＤＰＥ　（４３，ＯＣｉ／ｍｍｏｌｅ、　　Ｌ　５９　ＴＢｑ／ｍｍｏｌ 　、　ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ、　Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ　）及び （３Ｈ）ＣＴＯＰ　（８４，２Ｃｉ／ｍｍｏｌｅ、　　３．１２　ＴＢｑ／ｍｍ ｏｌ、　ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ、　Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ　）の 結合を測定した。１００μを部のラット脳ホモジュネー）（ｉｉ的に０．５　％ 　）を１．０ｍＭ［’Ｈ）ＤＰＤＰｇ又は０．５ｎＭ　［：３Ｈ）ＣＴＯＰのい ずれかと、５　ｎ　Ｍ　Ｍｇｃｚ！、牛血清アルブミン（ｌ岬／ａｍ）及びフェ ニルメチルスルホニルフルオライド（１００μｔ）を含有する５　０　ｎＭ　Ｔ ｒｉｓ−ＨＣ２ｐＨ７，４゜５０℃で１ｄの容量にしインキュベーション処理し た。

すべての結合性の測定は２組づつで行ない、１．ａＭのナルトレキソン（ｎａｌ ｔｒｅｘｏｎ　）塩酸塩によって置き代えられた結合性を組織の比結合性として 定義した。一定状態での結合性実験は、２５℃で１２０分間行なった。結合反応 はＢｒａｎｄｅｌセルハーベスタ−を備えた０、１％ポリエチレンアミン溶液で 前もって処理されたＧ　Ｆ／ＢＷｈａｔｍａｎガラス繊維ファイバーストリップ を通してサンプルを迅速濾過することにより止められる。次に４ｄの水冷塩水液 で３回迅速にすぐさま洗う。フィルターを取り出し、フィルターに結合した放射 能活性をそれを乾燥した後液体シンチュレーションスベクトロホトメーターで測 定した。そのデータをＡｐｐｌｅ　ｌ［＋コンピューターで非嶽型最小二乗回帰 分析法を用いて分析した。プログラムはＳＨＭ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｏｒｐ、 　Ｔｕｃｓｏｎ、　ＡＺから供給されている。

このバイオアッセイの結果を表３に示す。

表３ （”Ｈ，ＩｃＴＯＰ及び［”Ｈ）ＤＰＤＰＩのレセプター結合に対する競合反応 におけるＤＰＤＰＥ類縁体の結合活性及び選択性これらの試験で得られた陽性の 結果からみて、本発明のデルタレセプター作動作用化合物は、従来知られたオピ エートに関連した望ましくない副作用を持たず痛みの治療に有用であると考えら れる。柄抗果活性を有する本発明の化合物は、ナロキソンと同様に作用すると考 えられ、アルツハイマー病の治療を含め、従来麻酔拮抗薬が有用であると２３の 分野で有用であると考えられる。参照：　Ｒｅｉｓｂｅｒｇ、　Ｂ−、ｅｔ　ａ ｌ、　Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｖｏｌ。

３０８：１２，７２１−７２２（１９８３）（このものは参考として本明細書に 加えられる）。

上記好ましい態様及び実施例は、本発明の範囲及びその精神を説明するためのも のである。これらの態様及び実施例は当莱者が別の態様及び実施例をなすことを 明らかにする。これらの他の態様及び実施例も本発明の意図の範囲内のものであ る。故に本発明は、その請求の範囲のみに制約されるものである。

手続補正書 平成３年１月２５日 特許庁長官　植　松　　　敏　殴 １、事件の表示 ＰＣＴ／１Ｊｓ８９１０２９３６ ２、発明の名称 非常にオピオイドレセプター選択性に優れたペプチド３補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 明細書、請求の範囲の翻訳文 ６、補正の内容 国際調査報告

Claims (45)

【特許請求の範囲】
1. １．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ独立に水素又は低級アルキルで； Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に水素又は低級アルキルで；Ｒ５及びＲ６はそれぞ れ独立に水素又は低級アルキルである，但し、ｎとｐの両方が０の場合Ｒ３，Ｒ ４，Ｒ５及びＲ６のうちのすくなくとも一つは水素以外のもりであり；Ｒ９は水 素又は低級アルキルて； Ｒ１０はヒドロキシ；低級アルコキシ，アミノ，低級アルキルアミノ，又は低級 ジアルキルアミノで；Ｒ１１，Ｒ１２及びＲ１３はそれぞれ独立に水素又は低級 アルキルで； Ｒ１４は水素，低級アルキル又は低級アルカノイルで；ＢはＧｌｙ又は化学結合 で； Ｘは水素，低級アルキル，低級アルケニル，低級アルキニル、カルボキシ，低級 カルボアルコキシ，カルバモイル，低級アルキルアミノカルボニル，低級ジアル キルアミノカルボニル，低級アルコキシ，ハロゲン，ニトロ，シアノ，低級アル カノイル又はホルミルで；Ｙは水素．低級アルケニル，低級アルキニル，カルボ キシ，低級カルボアルコキシ，カルパモイル，低級アルキルアミノカルボニル， 低級ジアルキルアミノカルボニル，低級アルコキシ，クロロ，ブロモ，ヨード， シアノ，ニトロ，低級アルカノイル又はホルミルである，但し、Ｘ及びＹが両方 水素であることはない；ｍ，ロ，ｐ及びｑはそれそれ独立に０，１又は２である ，但し、ｍ及びｑが０で，ＢがＧＩｙで，Ｘが水素で且つＴがフロロ又はニトロ の時Ｒ１３は低級アルキルである）のポリペプチド化合物又はその医薬として許 容される塩。
2. ２．該低級アルキルが１個から３個の炭素原子を含有する請求項１に記載のポリ ペプチド化合物。
3. ３．該低級アルキルがメチルである請求項１に記載のポリペプチド化合物。
4. ４．該ＢがＧｌｙである請求項１に記載のポリペプチド化合物。
5. ５．該Ｒ１０がヒドロキシである請求項１に記載のポリペプチド化合物。
6. ６．該Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５及びＲ６がメチルである請求項１に記載のポリペプチド 化合物。
7. ７．該Ｒ９，Ｒ１１及びＲ１２が水素で、Ｒ１３が水素又はメチルである請求項 ６に記載のポリペプチド化合物。
8. ８．該Ｘがメトキシ，フロロ，プロモ，クロロ，ニトロ，又は水素で、Ｙがヨー ド，クロロ，プロモ，メトキシ，ニトロ，又は水素である請求項１に記載のポリ ペプチド化合物。
9. ９．該Ｒ１４が水素又はアセチルである請求項１に記載のポリペプチド化合物。
10. １０．該ｍ，ｎ，ｐ，及びｑが０である請求項１に記載のポリペプチド化合物。
11. １１．該低級アルキルが１個から３個の炭素原子を含有する請求項１０に記載の ポリペプチド化合物。
12. １２．該低級アルキルがメチルである請求項１０に記載のポリペプチド化合物。
13. １３．該ＢがＧｌｙである請求項１０に記載のポリペプチド化合物。
14. １４．該Ｒ１０がヒドロキシである請求項１０に記載のポリペプチド化合物。
15. １５．該Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５及びＲ６がメチルである請求項１０に記載のポリペプ チド化合物。
16. １６．該Ｒ９，Ｒ１１及びＲ１２が水素で、Ｒ１３が水素又はメチルである請求 項１５に記載のポリペプチド化合物。
17. １７．該Ｘがメトキシ，フロロ，プロモ，クロロ，アミノ，ニトロ，又は水素で 、Ｙがヨード，クロロ，プロモ，メトキシ，ニトロ，又は水素である請求項１０ に記載のポリペプチド化合物。
18. １８．該Ｒ１４が水素又はアセチルである請求項１０に記載のポリペプチド化合 物。
19. １９．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘはメトキシ，ヨード，プロモ，クロロ，アミノ，ニトロ又は水素で、 Ｙはヨード，クロロ，プロモ，メトキシ，ニトロ又は水素で、 Ｒ１３は水素又はメチルで、 Ｒ１４は水素，低級アルキル又は低級アルカノイルで、８はＧｌｙ又は化学結合 である） を有する化合物である請求項１に記載のポリペプチで化合物。
20. ２０．該ＢがＣｌｙである請求項１９に記載のポリペプチド化合物。
21. ２１．該Ｐｅｎ５がＤ配置である請求項１７に記載のポリペプチド化合物。
22. ２２．該Ｒ１４が水素又はアセチルである請求項１９に記載のポリペプチド化合 物。
23. ２３．該化合物が〔ｐ−Ｆ−Ｐｈｅ４〕ＤＰＤＰＥである請求項１に記載のポリ ペプチド化合物。
24. ２４．該化合物が〔ｐ−Ｂｒ−Ｐｈｅ４〕ＤＰＤＰＥである請求項１に記載のポ リペプチド化合物。
25. ２５．該化合物が〔ｐ−Ｉ−Ｐｈｅ４〕ＤＰＤＰＥである請求項１に記載のポリ ペプチド化合物。
26. ２６．該化合物が〔３′−ＮＯ２−Ｔｙｒ１〕ＤＰＤＰＥである請求項１に記載 りポリペプチド化合物。
27. ２７．該化合物が〔３′−Ｉ−Ｔｙｒ１〕ＤＰＤＰＥである請求項１に記載のポ リペプチド化合物。
28. ２８．該化合物が〔３′−ＣＨ３Ｏ−−Ｔｙｒ１〕ＤＰＤＰＥである請求項１に 記載のポリペプチド化合物。
29. ２９．該化合物が〔３′−ＮＨ２−Ｔｙｒ１〕ＤＰＤＰＥである請求項１に記載 のポリペプチド化合物。
30. ３０．該化合物が〔（Ｓ，Ｓ）−Ｐ−ＮＯ２−β−Ｍｅｐｙｅ４〕ＤＰＤＰＥで ある請求項１に記載のポリペプチド化合物。
31. ３１．該化合物が〔（Ｒ，Ｒ）−ｐ−ＮＯ２−β−ＭｅＰｈｅ４〕ＤＰＤＰＥで ある請求項１に記載のポリペプチド化合物。
32. ３２．該化合物が〔（Ｓ，Ｒ）−ｐ−ＮＯ２−β−ＭｅＰｈｅ４〕ＤＰＤＰＥで ある請求項１に記載のポリペプチド化合物。
33. ３３．該化合物が〔（Ｒ，Ｓ）−ｐ−ＮＯ２−β−ＭｅＰｈｅ４〕ＤＰＤＰＥで ある請求項１に記載のポリペプチド化合物。
34. ３４．該化合物が〔ｐ−Ｃｌ−Ｐｈｅ４〕ＤＰＤＰＥである請求項１に記載のポ リペプチド化合物。
35. ３５．該ポリペプチド化合物がデテルタレタレセプターに結合する活性を有し、 それが該デルタレセプターに結合した場合該レセプターに対して作働薬としても 拮抗薬としても作用する活性を有する請求項１に記載のポリペプチド化合物。
36. ３６．該ポリペプチド化合物がデルタレセプターに結合する活性を有し、それが 該デルタレセプターに結合した場合該レセプターに対して作働薬としても拮抗薬 としても作用する活性を有する請求項２３に記載のポリペプチド化合物。
37. ３７．該ポリペプチド化合物がデルタレセプター作働薬である請求項３５に記載 のポリペプチド化合物。
38. ３８．該ポリペプチド化合物がデルタレセプター拮抗薬である請求項３５に記載 のポリペプチド化合物。
39. ３９．該ポリペプチド化合物がデルタレセプターの部分的な作働薬である請求項 ３５に記載のポリペプチド化合物。
40. ４０．該ポリペプチド化合物がテルタレセプターの部分的な拮抗薬てある請求項 ３５に記載のポリペプチド化合物。
41. ４１．医薬として有効な量の請求項１に記載のポリペプチド化合物とそれに対す る医薬用担体とからなることを特徴とする医薬組成物。
42. ４２．医薬として有効な量の請求項２３に記載のポリペプチド化合物とそれに対 する医薬用担体とからなることを特徴とする医薬組成物。
43. ４３．鎮痛作用に有効な量の請求項１に記載のポリペプチド化合物を動物に投与 して鎮痛作用を誘起する方法。
44. ４４．請求項３７に記載のポリペプチド化合物の有効量を動物に投与してオピオ イドのデルタレセブター作働活性を動物に誘起する方法。
45. ４５．請求項３８に記載のポリペプチド化合物の有効量を動物に投与してオピオ イドのデルタレセプター拮抗作用活性を動物に誘起せしめる方法。