JPH03502997A

JPH03502997A - ヒト抗Ｒｈ（Ｄ）モノクローナル抗体

Info

Publication number: JPH03502997A
Application number: JP63507370A
Authority: JP
Inventors: ド、バラ、ブラッドリー，ベンジャミン、アーサー; ドイル，アラン; カンペル，ベリンダ　メアリー
Original assignee: セントラル、ブラッド、ラボラトリーズ、オーソリティー
Priority date: 1987-09-18
Filing date: 1988-09-16
Publication date: 1991-07-11
Anticipated expiration: 2012-02-19
Also published as: EP0383777B1; DK162773C; EP0383777A1; DK69590A; DE3886545T2; WO1989002600A1; GB8722019D0; DK69590D0; CA1303534C; JP2583302B2; DK162773B; DE3886545D1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ヒト抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクローナル抗体本発明はヒト赤血球のＲｈ　（Ｄ）抗原に対するヒトモノクローナル抗体に関する。特に本発明は、Ｄ−陽性、“弱Ｄ″ 又はＤ　細胞のいずれかにおける正常Ｒｈ　（Ｄ）抗原のみならずＲｈ　（Ｄ）抗原の重要な変異体をも検出するために用いられるＩｇに３サブクラスのこのような抗体に関する。

いわゆるＲｈ血液型系の抗原の中では、Ｒｈ　（Ｄ）抗原が対応抗体保有患者への輸血後における最も重篤な反応の一部に関与している。Ｒｈ　（Ｄ＋）血液をうけた抗Ｒｈ　（Ｄ）保有Ｒｈ　（Ｄ−）個体はＲｈ　（Ｄ）表現型不適合のせいで実質的赤血球（ＲＢＣ）破壊をうけやすいことから、ドナー及び受血者の血液は抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体との凝集試験によりＲｈ　（Ｄ＋）又はＲｈ　（Ｄ−）としてルーチンに分類される。ＲＢＣのＲｈ表現型は普通更にフィッシャー・レース（Ｆｌｓｈｅｒ−Ｒａｃｅ）系に基づき定義されるが、これはＲｈ抗原の遺伝は非常に近接して結合した座で作用する３対の対立遺伝子Ｃ−ｃ　ｓ　Ｄ　− ｄ及びＥ−ｅで決定されるという仮定に基づいている。この理論によれば、ヒトは彼の両親の各々から３つのＲｈ遺伝子、即ち（１）Ｃ又はｃ、（２）Ｄ又はｄ、（３）Ｅ又はｅの一組を受は継ぐ（ｄ抗原はまだ同定されていないが、但し記号“ｄ”はＤ抗原を産生じないＤ遺伝子と対立する遺伝子の存在を示すために用いられている）。例えば、Ｒｈ　（Ｄ＋）者は片親からＣＤｅ及び他方からｃｄｅを受は継いでいる。イギリス人をフィッシャｍ−レース系に関して調べた場合に最も共通するＲｈ遺伝子組合せの割合が、特に言語上用いられる“短記号°と共に下記第１表で示されている。

第１表イギリス人に関する共通Ｒｈ遺伝子の割合短記号　　　　　　　ＣＤＥ名　　　　　割合（％）ｒ　　　　　　　　　　ｃ　ｄ　ｅ　　　　　　　　３８．９ｒ　＝　　　　　　　　　Ｃｄ　ｅ　　　　　　　　Ｏ，０１何年にもわたる拡大調査にもかかわらず、フィッシャー・レース系はＲｈ系で観察されたすべての反応を説明する上で十分ではなかった〔モリソン、　Ｐ、　　Ｌ、　。

１９８３年、臨床医学における輸血、第７版、ブラックウェル・サイエンティフィック、オックスフォード（Ｍｏ１１１ｓｏｎ、Ｐ、Ｌ、、（１９８３）　Ｂｌｏｏｄ　Ｔｒａｎｓｆｕｓｌｏｎ　ＩｎＣ１１ｎ１ｃａｌ　Ｍｅｄｌｃｉｎｅ、７ｔｈ　ｅｄｎ、、Ｂｌａｃｋｖｅｌｌ　５ｃｉｅｎｔ１ｆ１ｃ。

０ｘｆｏｒｄ）　）。それにもかかわらず、世界保健機構では単純性及び画一性の理由からこの命名法が世界的に採用されるべきであると推奨してきたため、以下で示されるすべてのＲｈ遺伝子型は慣用的フィッシャー・レース系に基づき定義される。

ＲＢＣのＲｈ型判定に関する抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体の必要性に加えて、このような抗体は新生児溶血症（ＨＤＮ）を防止するためＲｈ　（Ｄ−）母親の受動免疫にとっても非常に必要とされる。この症状は、妊娠中胎盤を通過して胎児ＲＢＣ破壊を引き起こすＩｇＧ抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体に起因してＲｈ　（Ｄ）抗原に既に感作されたＲｈ　（Ｄ−）母親の新生Ｒｈ　（Ｄ＋）児で生じる。Ｒｈ　（Ｄ）抗原によるＲｈ　（Ｄ−）母親の感作は、母親の循環に入って母親の免疫系により認識されるある胎児ＲＢＣのせいで第−Ｒｈ　（Ｄ＋）子の誕生時に生じたのであろう。ＨＤＮの発生率を低下させるため、母親の循環に入ったいがなるＲｈ（Ｉ）＋）ＲＢＣも速やかに除去されるようＲｈ（Ｄ＋）児の誕生直後Ｒｈ　（Ｄ −）母親に抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体を投与することがイギリス及び他の多数の国におけるルーチン的実務である〔モリソン、　　Ｐ、　　Ｌ、　。

１９８３年、前掲；レーロスやジュニア、　Ｒ，Ｋ。

（Ｌａｒｏｓ　Ｊｒ、、Ｒ，に、）、　　１９８６年、　“妊娠中の血液型疾患２中における″胎児赤芽球症°、第７章、第１０３頁〕。

現在、ＲＢＣのＲｈ型判定及びＲｈ　（Ｄ−）母親の受動免疫の双方における使用のための抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体は、妊娠中に免疫された女性ドナーから又は免疫された男性ボランティアから直接主に得ている。しかしながら、Ｒｈ　（Ｄ−）女性へのヒト抗Ｒｈ　（Ｄ）免疫グロブリンの産後予防投与プログラムの成功で、自然アロ免疫女性の数に関し著しい減少を招いた〔アーバニアック、Ｓ。

Ｊｌ、　“新生児のＲｈＤ溶血症：変化する状況°、プリテッシュ・メディシナル・ジャーナル、１９８５年。

第２９１巻、第４−６頁（ｔｌｒｂａｎｌａｋ　、Ｓ、Ｊ、。

“ＲｈＤ　ｈａｅｍｏｌｙｔｌｃ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｅｗｂｏｒｎ：ｔｈｅｃｈａｎｇｉｎｇ　５ｃｅｎｅ”、Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ（１９８５）２９１．４−６））。更に、Ｒｈ　（Ｄ＋）ＲＢＣによる個体の意図的な免疫には、いかなるＲＢＣ輸血をうけた場合にも共通するリスク、例えば肝炎ウィルス及びＨＩＶの移入のリスクを伴う。したがって、診断及び治療双方の目的のためヒトモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体を得ることに多大な関心が集まっているのである。

上記のようにルーチンの血液試験において、血液型は抗Ｒｈ　（Ｄ）の凝集試験で示されるようにＲＢＣ上のＲｈ　（Ｄ）抗原の見掛上の存在又は非存在に基づきＲｈ（Ｄ＋）及びＲｈ　（Ｄ−）に分けられる。しかしながら、見掛上Ｒｈ　（Ｄ−）血液を有するヒトの少数は、このようなルーチン試験において抗Ｒｈ　（Ｄ）により直接凝集されないが、Ｄ型判定試験が選択された抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬を用いて間接的抗グロブリン試験で実施された場合には反応するＲＢＣを有している。こうして同定された細胞はＤ　と表示される。Ｄ　表現型の割合は全体で約０．２％、コーカサス人中０．６％及び全Ｒｈ　（Ｄ−）妊娠女性巾約１．５％である。少なくとも３つの異なるメカニズム、即ち（１）完全Ｒｈ　（Ｄ）抗原の一部の遺伝的欠如、（２））ランス位置におけるＣによるＤの抑制に関する遺伝子相互作用及び（３）弱抗原を産生ずるＤ遺伝子が、Ｄ　表現型の発現に関与しているのであろう。

１９５０年代初期、Ｒｈ　（Ｄ＋）血液の輸血後又はＲｈ　（Ｄ＋）児を出産した妊娠の後、Ｄ　表現型の個体における抗Ｒｈ　（Ｄ）の存在に関する報告が最初にみられた。血液がＲｈ　（Ｄ＋）に分類された一部の個体においてＲｈ　（Ｄ）抗原の一部がＲＢＣから欠落していることが、その後明らかになった。輸血又は妊娠により完全Ｒｈ　（Ｄ）抗原を有するＲｈ　（Ｄ＋）ＲＢＣと接触された場合、不完全Ｒｈ　（Ｄ）抗原をＲＢＣ上に有するヒトは彼等が欠如するＲｈ　（Ｄ）抗原部分に対するアロ抗りを産生ずることができる。このような個体の血液は、ＲＢＣがルーチン抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬と直接反応する場合にはＤ変異体と呼ばれ又は細胞が間接的抗グロブリン技術でのみ反応する場合にはＤ　変異体と呼ばれる。

Ｒｈ　（Ｄ＋）ＲＢＣを有する患者でアロ抗Ｒｈ　（Ｄ）が産生されるという観察から、用語“Ｄモザイク”の共通の用法としてその完全天然型のＲｈ　（Ｄ）抗原を表すようになった。ルーチン抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬では、Ｄモザイクの一部を欠＜ＲＢＣをすべてのＤ成分を有するＲＢＣから通常区別しえない。Ｄ変異体表現型はチベツ）　（Ｔｔｐｐｅｔｔ）及びサンガー（Ｓａｎｇｅｒ）　（ボックス・サング（Ｖｏｘ、Ｓａｎｇ）、　　１９６２年、第７巻、第９−１３頁〕により類別された。この系はＤ−及びＤｕ変異体個体からのＲＢＣ及び血清の相互作用に基づいている。６つのカテゴリー（下記第■表参照）に大別され、小分類がカテゴリー■、■及びＶで既に認められている。カテゴリー１及び■は、それらが現在単一のサブグループとして通常考えられるほど多数の類似性を有することが判明した。

第■表抗Ｒｈ　（Ｄ）のＤ−又はＤｕ陽性血液に関するチベット及びサンガーカテゴリー１　　　　　　白人　　　　　　　　　　　　　ＤＣｅ■ Ｈａ　　　　　黒人ｍｂ　　　　　通常黒人　　　　　　　　　　Ｄｃｅｍｅ　　　　　白人ＩＶａ　　　　　大部分黒人、一部白人ＩＶｂ　　　　　白人　　　　　　　　　　　　　ＤｃｅＶａ　　　　　黒人及び白人ｖｂ　　　　　白人　　　　　　　　　　　　　ＤｕＣｅＶｃ　　　　　黒人及び白人 ■　　　　　はぼすべて白人　　　　　　　Ｄ’Ｃｅ一方、さほど用いられないが、ウィーナ−（Ｗｌｅｎｅｒ）に゛よる分類ではローマ数字の代わりに文字Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄを用いている。２つの系間に直接の相互関係はないが、ＤＢ及びＤＶＫは互換性があると通常考えられる。

人口中におけるＤ及びＤｕ変異体個体の割合は比較的低いけれども、輸血又は妊娠による非変異体Ｒｈ　ＣＤ＋）細胞との接触のせいで現実的な抗Ｒｈ　（Ｄ）形成のリスクを潜在的に有するこれら血液型の個体の総数は決して微々たるものではない。更にＲｈ　（Ｄ＋）又はＤ　児を生んだＲｈ　ＣＤ−）女性に加えて、Ｒｈ　（Ｄ＋）児を生んだＤｕ変異体女性もＨＤＮのリスクを低下させるため産後抗Ｒｈ　（Ｄ）治療から利益を得るであろう〔ホワイト、　Ｃ，Ａ、　　ら、１９８３年、アメリカン拳ジャーナル・オブ・オブステトリカル・ギネコロジー、第１４５巻。

第１０６９−１０７３頁（Ｗｈｉｔｅ、Ｃ，＾、ｅｔ　ａｌ、（１９８３）＾ｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　０ｂｓｔｅｔｒｉｃａｌ　Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ、１４５゜１０６９−１０７３）］　、　Ｄ及ヒＤ　ｕ変ｉ体ＲＢ　Ｃヲ区別Ｌ　ウＺ抗血清は広く入手しえない。したがって、Ｄ及びＤ　変異体ＲＢＣに関しである範囲の結合特異性を有する抗Ｒｈ（Ｄ）モノクローナル抗体の供給は、このような細胞を有する個体（特に予防的抗Ｒｈ　（Ｄ）治療の適切な候補者であるＤ又はＤｕ変異体妊娠女性）の更に容易な確認及び類別化を可能にし並びにＲｈ　（Ｄ）抗原複合体に関する構造情報を更に得る上で有用とみられる。

ヒトモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体産生は既に＝Ｃり抗Ｒｈ　（Ｄ）陽性ドナーのＢリンパ球に由来するエプスタイン・バール（Ｅｐｓｔｅｉｎ　Ｂａｒｒ）ウィルス形質転換ロリンパ球細胞系（以下、ＥＢＶ形質転換ＬＣＬと称される）を直接クローニングする〔英国特許出願第２１２７４３４号明細書；クロフォードら、１９８３年、ランセット、第１＠、第３８６−３８８頁（Ｃｒａｖｆｏｒｄ　ｅｔａｌ、（１９８３）　Ｌａｎｃｅｔ、１．３８８−３８８）　　；及びベアーら。

１９８６年、イムノロジー・レターズ、第１３巻。

第１３７−１４１頁（Ｐａｉｒｅ　ｅｔａｌ、（１９８８）　１ｍｔａｕｎｏＩｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ、　１３．１３７−１４１）参照〕　；（ｂ）抗Ｒｈ　（Ｄ）産生ＥＢＶ形質転換ＬＣＬをマウス、マウス−ヒト又はヒトミエローマ細胞系と融合させて形成されるハイブリドーマ細胞系をクローニングする〔同時係属英国特許出願第８７０９７４８号明細書；トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）ら、１９８６年、イムノロジー、第５８巻、第１５７−１６０頁；及び欧州特許出願第１６２９１８号明細書参照〕　：又は（Ｃ）ヒトＬ、ＣＬと免疫Ｂ細胞との融合〔ローウニ（Ｌｏｖｅ）ら、１９８６年、ボックス・サング、第５１巻。

第２１２−２１６頁〕　；により達成された。

しかしながら抗Ｒｈ　（Ｄ）陽性ドナーからのＥＢＶ形質転換ＬＣＬをクローニングすることにより、我々は以前に開示されたいずれの抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクローナル抗体試薬の場合でも示されていない特に有用な結合特異性スペクトルを有するＩｇＧクラスのモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体を得ることができた。

本発明によれば、我々は下記の本質的特徴：（ａ）Ｒｈ血液型系のＣＳｃ、、Ｅ又はｅ抗原ではなくＲｈ　（Ｄ）抗原に対して活性を示す；（ｂ）Ｉ　ｇＧ３タンパク質である；（ｃ）にＬ鎖を有する；（ｄ）アロタイプ０３ｍ　（２１）に属する；（ｅ）間接的抗グロブリン試験でｖ　ｕ　ｍ胞に対して活性を示す；ＶＶ（ｆ）Ｄ、Ｄ　　及びＤＴａｒ変異抗原に対して活性を示す；及び ■ （ｇ）Ｄ　又はＤＢ変異抗原に対して不活性である；を有するヒトモノクローナル抗体及びその抗原結合性断片を提供する。

しかも本発明のモノクローナル抗体はｉＮ抗原に対して活性を示すことがわかった。

このようなモノクローナル抗体は、ＲＢＣをＤ陽性、Ｄｕ又はＤ陰性に分類しうるルーチン抗ＤｇＮとして使用可能である。この目的のため、本発明のモノクローナル抗体は単独で、又は１以上の付加的結合特異性を有する更に１種以上の抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクローナル抗体と共に、のいずれでも用いることができる。このため例えば本発明のモノクローナル抗体は、Ｄ■変異ＲＢＣをＤ陽性として分類しうる更に広い特異性のある抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬を得るためＤｖＩ変異体と結合しうる更にもう１種のモノクローナル抗体と混合されることが有利であろう。

このような抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬にお゛いて、本発明のＩｇＧ１抗体は、例えば英国特許出願第８７２２０２０号の優先権を主張する本出願と同日付の我々の同時係属国際特許出願中で開示されたタイプの下記結合特徴を有するＩｇＧ１モノクローナル抗体と混合される：（ａ）Ｒｈ血液型系のＣ，ｃ、Ｅ又はｅ抗原ではなくＲｈ　（Ｄ）抗原に対して活性を示す；Ｖ　　　Ｔａｒ　　　ＶＩ　　　　Ｂ（ｂ）Ｄ　　ＳＤ　　　、Ｄ　　及びＤ　変異抗原に対して活性を示す；及び（ｃ）ＩＡＧ試験において非パパイン処理り■細胞と実質上非反応性である。

このような抗体の中では、本発明の抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクローナル抗体と共に使用する上で、イギリス、ポートン・ダウン（Ｐｏｒｔｏｎ　Ｄｏｗｒｔ）のヨーロピアン・コレクション争オブ・アニマル拳セル・カルチャーズ（ＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｌｌｅｃｔｌｏｎ　ｏｒ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ）に受理魔ＥＣＡＣＣ８６０９１６０３号として１９８７年９月１６日付で寄託されたＢ７と称されるモノクローナル抗体が特に好ましい。

本発明のモノクローナル抗体がＤ９変異体に対して反応性の抗Ｒｈ　（Ｄ）　、例えば適切なポリクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）血清と共にＲｈ型判定に用いられる場合において、後者に関する凝集試験で陽性結果を示すが但し本発明のモノクローナル抗体に関して陰性結果を示す血液サンプルは主に又は完全にＤ■カテゴリーに属すると予測することができる（これは新規モノクローナル抗体が不活性な事実上唯一のＤ変異抗原であるためである）。

慣用的凝集試験でＲｈ　（Ｄ＋）又はＤｕとして分類されるが但し抗りを産生しうる個体の中では、高率でＤｖｒ変異抗原を有することが確立されていた〔モリソン、Ｐ。

Ｌ、、１９８３年、　“臨床医学における輸血″、第８章。

第３３９頁〕。そのため本発明のモノクローナル抗体の一使用例は、人口中におけるＤＶｌ型個体の発生率を研究することである。

本発明のモノクローナル抗体は、抗Ｄｕ活性のない又は非常に弱い、即ち慣用的凝集試験でＤｕ細胞をＤ陰性細胞から信頼性をもって区別しつるにはこのような細胞に対して不十分な活性である抗Ｒｈ　（Ｄ）の特異性を補うため抗Ｒｈ　（Ｄ）型判定試薬における使用にとっても特に価値がある。実際に、米国規制市販抗Ｒｈ　（Ｄ）型判定試薬に関する食品医薬品局（ＦＤＡ）の規制下では、このような試薬はＤ　　ＲＢＣを真のＤ陰性ＲＢＣから区別しうることが要求されている。本発明の組合せ抗Ｒｈ（Ｄ）試薬の中では、本発明のＩｇＧ抗Ｒｈ　（Ｄ）が非常に弱いＤ　活性のＩｇＭ抗Ｒｈ　（Ｄ）　、例えば特に欧州特許出願公開第２５１４４０号明細書の主題をなす寄託されたハイブリドーマ細胞系ＭＡＤ −２（ＥＣＡＣＣ８６０４１８０３号）及びＦＯＭ−１（ＥＣＡＣＣ８７０２１３０１号）のモノクローナルＩｇＭから選択されるＩｇＭモノクローナル抗Ｒｈ　ＣＤ）と共に用いられた上記条件を満足するこのような試薬が特に好ましい。

このような試薬は間接的抗グロブリン試験でＤｕ赤血球との活性を個別的に示す更に少なくとも１種のＩｇＧモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体で更に補充されることが有利であり、その結果混合試薬は同一の試験でＤｕ、ＤＩＶ、ＤＶ及びＤ９細胞と反応するようになる。Ｒｈ型判定がこのような試薬で行われる場合、Ｄ陽性細胞は最初にＩｇＭ抗Ｒｈ　（Ｄ）で直接凝集される。次いで残りの非凝集細胞（見掛上り陰性）は間接的抗グロブリン試験用の慣用的クームス（ＣｏｏＩｌｂ’ｓ）試薬の添加により真のＤ陰性及びＤ　細胞に分けられるが、その場合ＩｇＧ抗体に結合するＤｕ細胞は凝集されるため区別される。

本発明のモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体は、モノクローナル抗体の産生に関して公知の常法により、特に、必要な抗体に関する上記特徴を有した抗Ｒｈ　（Ｄ）免疫グロブリンの分泌に基づき選択されるＥＢＶ形質転換ヒトＢリンパ球の培養により得ることができる。こうして得られた培養上澄は、本発明の特徴を有している。

我々は上記のようなＩｇＧ３抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクローナル抗体を産生ずるクローニングされたＥＢＶ形質転換ＬＣＬ５つについて今や詳細に研究した。これらは以下でＡ４、Ａ５、Ａ６、Ａ７及びＡ８と称される。これらすべてのクローニングされた細胞系は、選択された抗Ｒｈ　（Ｄ）　　ドナーの末梢Ｂリンパ球から出発し、所望の特異性をもつモノクローナル抗体を産生ずるＥＢＶ形質転換ＬＣＬを確立しかつクローニングするため英国特許出願第２１４５１１３号明細書で記載された操作又は実質上同様の操作を用いることにより得た（例１参照）。

１０％（Ｖ／Ｖン無マイコプラズマ牛脂児血清、０．　２ｍｇ／ｍｌアルギニン及びマイコプラズマ増殖を予防する抗生物−質で補充されたＲＰＭ１１６４０培地を用いた連続培養において、それらは高度に安定であって、ＲＩＲｌ（ＣＤ　ｅ　／　ＣＤ　ｅ　）　ＲＢ　Ｃに対する低イオン強度塩水中での間接的抗グロブリン（ＩＡＧ）アッセイにより測定した場合に２０００〜１６０００の範囲内の抗Ｒｈ　（Ｄ）力価を有する培養上澄を生じることが見出された。このような培養上澄は濃縮必要性のないＲｈ型判定での使用に適しているが、実際には使用上希釈してもよい。

連続培養における上記具体的クローンの抗体産生特徴は、上記第ｍａ及びｍｂ表で要約されている。これらすべてのクローンは、少なくとも８ケ月間にわたる連続培養で安定な力価を維持しうることか示された。ＩＡＧ試験における凝集の程度は、常法に従いスケール０〜６に等級分けされた。

第Ｈａ表ＩＡＧ力価（低イオン強度塩水中３％ＲＢＣ）Ｒ１ｒ細胞　　　　　　　　　　　　　　　　８４−２５８ＲＩＲ１細胞　　　　　　　　　　　　　　２０００ −１８０００Ｒ１ｒ細胞　　　　　　　　　　　　　　　　３２−２５８プロメライン処理Ｒ２Ｒ２細胞の微量滴定　ｇｏｏｏ〜１８０００抗Ｒｈ　（Ｄ）　　（ＩＵ／ｍｌ）　　　　　　　　　　２−１２−１２Ｉμｇ／ｍｌ）　　　　　　　　　　　　　　　１．１−２．８第ｍｂ表Ａ４　　Ａ５　　Ａ６　　Ａ７　　Ａ８培養上澄　　　　低イオン強度塩水中３％ＲＢＣに対する上澄のＩＡＧ反応性（等級：０〜６）赤血球表現型ＲＩＲｌ６　　６　　６　　６　　５試験された本発明のモノクローナル抗体は表現型Ｒ２ｒ　Ｇ−１ｈｒ８−１ＲＩＲ２及びＲ２Ｒ２のＲＢＣと反応するが、但しｒ″Ｇｒ、ｒ”ｓ　ｒＧ％ｒ　− ｓｒ。

ｈｒ−１ｒｒ及びＲｈ３３＋とは陰性であることが更に判明した。

本発明の更にもう１つの面によれば、我々は本発明のモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）免疫グロブリンの水性溶液が用いられるＲＢＣのＲｈ型判定法を提供する。

モノクローナル免疫グロブリンは、直接又はより一般的には希釈後用いられる培養上澄中に含有されることが好ましい。

前記のように、本発明のＩ　ｇＧ３抗体を異なる特異性の抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクロ−六ル抗体の１種以上、例えば更に抗ＤＶＩ活性を存するＩｇＧ抗体と混合することが望ましい。適切な希釈剤としては、有利には牛血清アルブミン及びツイーン（Ｔｗｅｅ口）８０又はメチルセルロースのような界面活性剤又は懸濁化剤を含有した生理塩水又はリン酸緩衝液がある。

本発明のＩｇＧ３抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体は単球及びマクロファージによるＲｈ　（Ｄ＋）ＲＢＣ結合及び食作用の優れた促進剤であって、このためＨＤＮ予防用の有効な予防抗り治療剤を提供するという観点からも大きな関心がある。実際に、細胞系Ａ４及びＡ５の培養上澄はインビトロアッセイにおいて慣用的ポリクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）血清よりもＵ９３７単球による感作ＲＢＣのロゼツト化及び食作用を更に高度に誘導することが判明した。しかも同様の培養上澄は、γ−インターフェロン刺激単球由来培養マクロファージに対する感作ＲＢＣの結合を媒介する上で慣用的ポリクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）血清に匹敵する（例１のセクション（３）及び（４）参照）。

このため本発明のもう１つの面によれば、我々はＲｈ（Ｄ）抗原に対する母親の感作を防止するためＲｈ（Ｄ＋）　児の誕生後Ｒｈ　（Ｄ−）　、Ｄ又Ｇ；ＬＤｕ変異体母親の受動免疫用に本発明のモノクローナルＩ　ｇＧ３抗体を提供する。ヒト注射用のかかる抗体の無菌溶液は、いずれかの生理学上許容される水性媒体、例えば等張リン酸緩衝液又は血清で処方される。一方、抗体は使用前に再調整される凍結乾燥処方剤として供給してもよい。

ＨＤＮの予防用として高度に有効な予防製剤を提供するため、本発明のモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）は更に１種以上の抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体と共に用いられる。

ルーチン使用のためには、抗ＤＶＩ抗体が含有されていることが望ましい。本発明の抗体は、その内容が参考のため本明細書に組込まれる英国特許出願第８７２２０１８号の優先権を主張した本出願と同日付の我々の同時係属国際特許出願におけるＩｇＧ１抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクローナル抗体を補助する予防製剤としての用途も有する。

上記のクローニングされたＥＢＶ形質転換リンす球細胞系Ａ７は、イギリス、ボートン・ダウンのヨーロピアン−コレクション中オブーアニマル・セルーカルチャーズに受理ＴｈＥＣＡＣＣ８６０９１６０６号として１９８７年９月１６日付で寄託された。

この寄託細胞系の産生及びその連続培養上澄の同定特徴に関する詳細は、下記非制限例の例１で示されている。

例１（Ｄ＋）児を生んだ）中に免疫され、分娩４年後にパック詰めＲｈ　（Ｄ　＋　）　　（Ｒ２ｒ　）　ＲＢ　ＣＯ−５ｍｌで追加免疫され及び追加免疫の８日後に彼女の血清抗Ｄレベルが６０ＩＵ／ｍｌになったとき得られた末梢血液サンプルで追加免疫された女性。

（ｂ）細胞系の確立ドナーＡの末梢血単核細胞をリンホプレブ（Ｌｙｗｐｈｏｐｒｅｐ）　Ｃニエガード社（Ｎｙｅｇａａｒｄ　ａｎｄ　Ｃｏ、））で分離し、ＥＢＶ　（濾過された無マイコプラズマＢ９５−８細胞系からの培養上澄１ｍｌ／１０７細胞）の存在下３７℃で１時間インキュベートし、リン酸緩衝液（Ｐ　Ｂ　Ｓ）で洗浄した。一部を、１％（Ｖ／Ｖ）フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）又は０．５μｇ／ｍｌシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）のいずれかで補充されたリンパ芽球細胞培地〔１０％（ｖ／ｖ）無マイコプラズマ牛脂児血清（Ｆ　ＣＳ）、０、　２１ｇ／ｍｌアルギニン、１００Ｉυ／　ｍｌペニシリン（グラクツ（Ｇｌａｘｏ）　）　、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（グラクツ）　、２５１０／ｍｌポリミキシン（グラクツ）、２５μｇ／ｍｌカナマイシン（ギブコ（Ｇｌｂｃｏ）　）、２０　ｕｌ　／ｍｌフンギシン（スクイブ（Ｓｑｕｉｂｂ））、２５μｇ／ｍｌ硫酸ゲンタマイシン（シグマ（Ｓｌｇｍａ）　）及び２０μｇ／ｍｌトｏビシン（アップジョン（ＵｐＪｏｈｎ））を含有したＲＰＭ１１６４０培地〕を用いマウス腹膜マクロファージ供給細胞層上で２ｍｌウェル中０．５Ｘ１０６細胞／　ｍｌで培養した。

次いで、すべての培養物を５％ＣＯ２，９５％湿空気中３７℃でインキュベートした。培地変更を３〜４日毎に行い、３週間の培養後細胞を５０ｍ１フラスコに移した。

すべての細胞系を３〜４週間週間口ゼツト化することにより豊富化させた。

（ｃ）クローニング細胞をマウス腹膜マクロファージの供給細胞層上平底９６ウエルプレート中５及び１０細胞／ウエルで限定希釈下培養した〔ドイルら、１９８５年、ヒユーマン・イムノロジー、第１３巻、第１９９−２０９頁（Ｄｏｙｌｅ　ｅｔａｌ、（１９８５）　Ｈｕｓａｎ　Ｉ＋ｎｕｎｏ１ｏｇｙ、１３．１９９−２０９＞）　ｏ培養物に１週間１回基質添加したところ、３〜４週間後抗りに陽性のクローニング細胞が生じた。

（ｄ）クローンの誘導クローンＡ４を生じるドナーＡポリクローナル細胞系をＰＨＡで開始し、続いてクローニング前に１３回ロゼツト化することにより抗Ｒｈ　（Ｄ）陽性細胞について豊富化させた。

１　ｇＧＢサブクラスの抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体を産生する更に４つのクローン（Ａ５、Ａ６、Ａ７及びＡ８と称される）は、クローンＡ４のＢリンパ球から誘導された。

クローンＡ５、Ａ６及びＡ７は優先権出願（英国特許出願公開第８７２２０１９号）で各々Ｂ４、Ｂ５及びＢ６と誤記された。上記選択細胞系の組織型及び核型分析の結果は、上記第■表で示されている。

第■表細胞系　　　　Ａ５　　　Ａ６　　　Ａ７　　　Ａ８性別　　　　　　　　　　　女性組織型ＨＬＡ　：　Ａ　　　　　　　　２．ｖ１９８　　　　　　　４４．３５Ｄ　Ｒ３，５核型性染色体　　　　　　　　　ｘｘ倍数性　　　一部二倍体細胞、一部四倍体細胞上澄中における抗Ｒｈ　（Ｄ）活性は、オートアナライザーでイギリスナショナルスタンダードに対して定量された。少なくとも２回の測定平均が計算された。ＩｇＧの定量的評価は、ＥＬＩＳＡ　（ウェイクツイールドら。

クリ二カ・キミ力・アクタ、１９８２年、第１２３巻。

第３０３−３１０頁（νａｋｅｆｉｅｌｄ　ｅｔ　ａｌ、、ｃＩｉｎｌｃａＣｈｉｍｌｃａ　Ａｃｔａ（１９８２）　１２３．３０３−３１０＞の方法の修正〕により各上澄毎に少なくとも８回の測定で行われた。コーティング抗体〔アフィニティー精製ヤギ抗ヒトＩｇＧ（シグマ）〕をｐＨ９，６の０．０５Ｍ炭酸緩衝液中１／２００で用いた。上澄及びスタンダード〔精製ヒトＩｇＧ（シグマ）〕をＲＰＭ、１１６４０＋１０％ＦＣ５で希釈した。ペルオキシダーゼ複合化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（シグマ）をＰＢＳ＋０．０５％ツイーン２０で１１５００希釈したが、基質はＴＭＢ　（３，３−，５，５−−テトラメチルベンジジン）であった。

異なる実験条件下で確立されたすべての細胞系が安定な抗体産生を示したのではなかった。しかしながら、その後でクローニングされたすべての細胞系は６月間以上にわたり高力価（微ｊｌ？ｆｌ定で１／３３，０００以上）の抗Ｒｈ　（Ｄ）を維持した。これら細胞系からのすべてのクローンは抗Ｒｈ　（Ｄ）に関して陽性であり、連続培養期間中それらの力価を維持した（例えば、Ａ４の場合２年間以上）。倍加時間は３〜７日であっノ；。細胞は抗体産生の低下なしに懸濁培養物中でよく増殖した。

（ｆ）免疫グロブリンクラス及びサブクラス決定イムノドツトアッセイ　〔マクドウガル（ＭｃＤｏｕｇａ　Ｉ　）ら。

１９８３年、第６３巻、第２８１−２９０頁〕がニトロセルロースに吸着されたモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体と抗ＩｇＧ、抗１ｇＭ、抗に及び抗λ抗血清〔セロチック（Ｓｅｒｏｔｅｃ）　）との反応を調べるため用いられ、陽性ツク）しかる後４−クロロ−１−ナフトールでの発色により検出した。ＩｇＧサブクラスは、モノクローナル抗サブクラス抗体〔ユニパス（Ｕｎｉｐａｔｈ）　）による抗り被覆ＲＢＣの凝集から評価された。

アイコブ（Ｉｓｅｏｖｅ’ｓ）上澄（無血清）を１５％ポリアクリルアミドゲル上還光条件下で電気泳動に付した〔レムリ、ネーチャー、１９７０年、第２２７巻、第６８０−６８５頁（Ｌａｅｍｓｌｌ、Ｎａｔｕｒｅ　（１９７０）　２２７，８８０−６８５）　）−次いで、分離されたタンパク質を電気泳動でニトロセルロース膜に移し〔プラネット、アンルズ・オブ・バイオケミストリー、１９８１年、第１１２巻、第１９５−２０３頁（Ｂｒｕｎｅｔｔｅ、Ａｎｎａｌｓ　　ｏｒ　　Ｂ！ｏｃｈｅｍ１ｓｔｒｙ　　（１９８１）１１２．１９５−２０３））　、これを抗ＩｇＧ抗血清（セロチック）でプローブ処理し、上記のように検出した。

細胞系Ａ４．Ａ５、Ａ６及びＡ７のモノクローナル抗体はすべて分子量約６１．０００ドルトンのＨ鎖を有することが判明した。

（ｈ）プロティンＡ吸着上澄２ｍｌ容量をプロティンＡセファロースＣ１−４Ｂ（シグマ）の２５＋ａｍ（１ｍｌ）カラムに２回通し、抗りの吸着を滴定で評価した。選択された細胞系の抗Ｒｈ　（Ｄ）は、！　ｇＧ３サブクラスの免疫グロブリンに関して予想されるようにプロティンＡで吸着されなかった。

（ｉ）Ｇｍアロタイプ判定ＲＢＣをモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体でコーティングし、凝集をＧｍアロタイプ判定試薬〔バーミンガム（Ｂ１　ｒｌｌｎｇｈａｍ）又はアムステルダム（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）　）で評価した。

（２）血清学選択された細胞系の連続培養による培養上澄は、低イＲ１ｒ、Ｒｌｒ又はＲｏ　ｒ細胞を用いてＩＡＧ試験により測定された（第Ｈａ及びｍｂ表参照）。同一の上澄は同一の条件下でＤ変異体ＲＢＣのパネルに対しても試験された（下記第Ｖ表参照）。凝集の程度は常法に従いスケール０〜５又は０〜６に等級分けされた。

第７表ＩＡＧによるモノクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体と“部分的″Ｄ陽性赤血球との反応培養上澄　　　Ａ４　　　　Ａ５　　　　Ａ６　　　　Ａ７（等級二〇〜５）バック詰め０ＲＩＲ２ＲＢＣ１００μｇを３７℃で６０分間にわたり抗Ｄ（既に１μｇ　／　ｍｌに調整されている）５００μｇで感作し、洗浄し、ＲＰＭＩ中１×１０８細胞／ｍｌで再懸濁した。Ｕ９３７細胞を対数増殖期に採取し、５０Ｕ／ｍｌでγ−インターフェロン〔アマ−ジャム（Ａｓｅｒｓｈａｓ））の存在下又は非存在下のいずれかで２日間培養した。次いで４５×１０６の赤血球を１．５Ｘ１０６のＵ９３７細胞のベレットに加え、混合して３０：１の比率にした。ロゼツト化アッセイの場合、細胞を室温で５分間インキュベートし、６００　ｒｐｍで３分間遠心し、更に５〜２０分間後分間吐血器で試験した。

食作用は細胞を３７℃で３時間インキュベートした直後に評価した。結果は１以上の付着又は貧食された赤血球に関する単球の率として示された。

クローンＡ４及びＡ５の培養上澄並びに慣用的ポリクローナル抗Ｒｈ　（Ｄ）血清に関して得られた結果の比較は、第１及び２図で示されている。クローンＡ８の培養上澄で感作された赤血球は、（γ−インターフェロンの非存在下で培養された場合）０９３７細胞の１００％とロゼツトを形成した。

（４）マクロファージ結合アッセイＲＢ　Ｃ（Ｒ２ｒ　）　　（１容量部）をモノクローナル抗Ｒｈ（Ｄ）（未処理培養上澄２容量部）で感作し、単球由来培養マクロファージと共にインキュベートした。マクロファージをアッセイにおけるそれらの使用前４８時間にわたり組換え免疫インターフェロン〔ジュネーブのバイオゲン（Ｂｉｏｇｅｎ））　５００　Ｕ　／ｍｌで刺激した。マクロファージに対するＲＢＣの結合は肉眼で評価され、マクロファージ結合インデックス（−１００のマクロファージに付着した又はそれで貧食された赤血球の数）として示された。

上記第■表は、クローンＡ４及びＡ５の培養上澄に関して得られた結果について示している。赤血球−マクロファージ相互作用を起こしうるこれら上澄の能力は、陽性コントロールとして機能するポリクローナル抗Ｒｈ（Ｄ）の場合と類似していた。

第■表抗り源　　　　　培養上澄　培養上澄　ポリクローナルＡ４　　　　Ａ５　　　抗Ｒｈ　（Ｄ）血清クローンＡ４、Ａ５、Ａ７及びＡ８の培養上澄をリンパ球抗体性細胞毒性（ＡＤＣＣ）アッセイで試験した。

等容量（５０μｇ）の標的細胞（クロム５１標識ＲＩＲＩＲＢＣ懸濁液）、エフェクター細胞（Ｋリンノ々球）及び抗Ｒｈ　（Ｄ）培養上澄を穏やかな遠心後マイクロプレート中３７℃で一夜インキユベートシ、クロム５１放出量を測定した〔アーバニア・ツク、１９７９年。

プリティシュｔジャーナルーオブ・ヘマトロジー。

第４２巻、第３０３−３１４頁（Ｕｒｂａｎｉａｋ　（１９７９）Ｂｒｌｔｌｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　Ｈａｅｓａｔｏｌｏｇｙ、４２．３０３−３１４））　ｏエフエクター二標的細胞の比率は１５：１であった。

試験された培養上澄はいずれも有意のＡＤＣＣ活性を示さないことが判明した（下記第■表参照）。

第■表モノクロ−Ａ４　　Ａ５　　Ａ７　　Ａ８　　抗Ｒｈ（Ｄ）ナル抗体　　　　　　　　　　　　　　　　　血清特異的溶解率％エフェクターＫＦ　　−２１０＊　　　９５エフエクターＢＷ　　　４　　０　　０　　　＊　　　９２エフエクターＴＪ　　　＊　　　＊　　　本　　０　　＊本測定せずｏ　ｔ”、　ト、（ｅ　２六ｒ：８ｆｎ４ｔ：／ｓ）’１６−ＬＦ−”Ｐ”ｉ’ 　２ζｔｔ　、ｉ＃　ｒ：　＊ｋ１．Ｅｔ：　ｋフッ’ｂ＋’ｒた”す；ン＝補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成　２　年　３　月　１７［１１、国際出願の表示ＰＣＴ／ＧＢ　　８８１００７５６２、発明の名称ヒト抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクローナル抗体名　称　　　セントラル、ブラッド、ラボラド１ノーズ、オーソリティー５、　補正書の提出年月日１９８９年　１２月　１１日６、　　添付書類の目録（１）　　補正書の翻訳文　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１　通添附の「請求の範囲」の補正は第１１項が追加されて（穐る旨上申します。

１、明細書第６頁第１３〜１４行に「６つのカテゴリー」とあるを「７つのカテゴリー」に補正する。

２、同第７頁第■表中ｒＶＩＪの行の下に「■　　　　　白人　　　　　　　　　　　ＤＣｅ　　　Ｊを挿入する。

３、　第１０頁第５行及び第１１頁第５行にｒ　ＤＴａｒ　Ｊとあるを「ＤｖＩ」に補正する。

４、第１０頁第１４〜１７行に「この目的のため、・・・・・・用いることができる。」とあるを「この目的のため、本発明のモノクローナル抗体は単独で、又は更に１種以上の抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体、好ましくは１以上の付加的結合特異性を有するモノクローナル抗体と共に、のいずれでも用いることができる。」に補正する。

５、第１０頁下から第２行〜第１１頁第２行に「例えば・・・・・・混合される：」とあるを「例えば本出願と同日付の我々の同時係属国際特許出願（公開第ＷＯ３９／２４４３号明細書）中で開示されたタイプの下記結合特徴を有するＩｇＧ１モノクローナル抗体と混合される：」に補正する。

６、第１７頁第１４〜１５行に「同時係属国際特許出願における」とあるを「同時係属国際特許出願（公開第ＷＯ３９／２４４２号明細書）における」に補正する。

７、第２３頁末行に「０〜５又は０〜６」とあるを「０〜６」に補正する。

８、第２４頁第Ｖ表中「（等級二〇〜５）」及び「Ｄｌａｒ」とあるをそれぞれ「（等級：０〜６）」及び「ＤＶＩＩ」に補正する。

請求の範囲１、　下記の本質的特徴：（ａ）Ｒｈ血液型系のＣ５ｃＳＥ又はｅ抗原ではなくＲｈ　（Ｄ）抗原に対して活性を示す；（ｂ）ＩｇＧ３タンパク質である；（Ｃ）にＬ鎖を有する；（ｄ）アロタイプ０３ｍ　（２１）に属する；（ｅ）間接的抗グロブリン試験でＤｕ細胞に対して活性を示す；（ｇ）Ｄ”又はＤＢ変異抗原に対して不活性である；を有するヒトモノクローナル抗体及びその抗原結合性断片。

２、　細胞系ＥＣＡＣＣ８６０９１６０６により産生される、請求項１に記載のモノクローナル抗体。

３、　請求項１又は２に記載されたモノクローナル抗体が１以上の付加的結合特異性を有する更に１種以上の抗Ｒｈ　（Ｄ）抗体と混合された抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬。

４、　　ＤＶＩ変異体と結合しうるモノクローナル抗体が存在する、請求項３に記載の抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬。

５、　抗体成分が：（ａ）請求項１に記載されたモノクローナル抗体；（ｂ）抗Ｄ　活性のない又は非常に弱いＩｇＭ抗Ｒｈ（Ｄ）；を含む、請求項３に記載の抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬。

６、　抗体成分が間接的抗グロブリン試験でＤｖＩ赤血球に対する活性を示しつるＩｇＧモノクローナル抗Ｒｈ（Ｄ）を更に含む、請求項５に記載の抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬。

７、　成分（ｂ）が寄託されたハイブリドーマ細胞系ＭＡＤ−２（ＥＣＡＣＣ８６０４１８０３）及びＦＯＭ−１（ＥＣＡＣＣ８７０２１３０１）のモノクローナルＩｇＭから選択される、請求項５又は６に記載の抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬。

８、　請求項１に記載されたモノクローナル抗体を産生しうるヒトリンパ球由来細胞系。

９、　　ヨーロピアン争コレクションφオブ・アニマル・セル・カルチャーズに受理１ｋＥｃＡｃｃ　　８６０９１６０６号として寄託された、請求項８に記載の細胞系。

１０、　　新生児の溶血症を防止するための受動免疫用である、請求項１又は２に記載のモノクローナル抗体。

１１、請求項８又は９に記載された細胞系の培養により得られた培養上澄。

１２、　　新生児の溶血症を防止する受動免疫用医薬組成物であって、生理学上許容される担体又は希釈剤と共に請求項１又は２に記載されたモノクローナル抗体を含むことを特徴とする医薬組成物。

１３、　　抗体成分がＤｖＴ変異体と結合しうるモノクローナル抗体を更に含む、請求項１２に記載の医薬組成物。

１４、　請求項１又は２に記載されたモノクローナル抗体又は請求項３〜７のいずれか一項に記載された抗Ｒｈ　（Ｄ）試薬が用いられ、上記モノクローナル抗体又は上記試薬が水性溶液の形態であることを特徴とするＲｈ型判定方法。

手続補正書（方式）平成　３年　４月１１日特許庁長官　　植　松　　　敏　　Ｗｉ　　　　　　　ｉｌ　事件の表示ＰＣＴ／ＧＢ　　８８１００７５６２　発明の名称ヒト抗Ｒｈ　（Ｄ）モノクローナル抗体３　補正をする者事件との関係　　　　特許出願人発送日　　平成　３年　３月　１２日６　補正の対象７　補正の内容国際調査報告 −Ｍ＋１＋１組１１１Ｍ１＾１１１１１１１＋噛れＮＣＰ口Ｔ／ＣＢＢＢ１００７５６特表千３−５０２９９７　（１２）

Claims

【特許請求の範囲】

１．下記の本質的特徴：（ａ）Ｒｈ血液型系のＣ、ｃ、Ｅ又はｅ抗原ではなくＲｈ（Ｄ）抗原に対して活性を示す；（ｂ）ＩｇＧ３タンパク質である；（ｃ）ｋＬ鎖を有する；（ｄ）アロタイプＧ３ｍ（２１）に属する；（ｅ）間接的抗グロブリン試験でＤＵ細胞に対して活性を示す；（ｆ）ＤＩＶ、ＤＶ及びＤＴａｒ変異抗原に対して活性を示す；及び（ｇ）ＤＶＩ又はＤＢ変異抗原に対して不活性である；を有するヒトそノクローナル抗体及びその抗原結合性断片。
２．細胞系ＥＣＡＣＣ８６０９１６０６により産生される、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
３．請求項１又は２に記載されたモノクローナル抗体が１以上の付加的結合特異性を有する更に１種以上の抗Ｒｈ（Ｄ）抗体と混合された抗Ｒｈ（Ｄ）試薬。
４．ＤＶＩ変異体と結合しうるモノクローナル抗体が存在する、請求項３に記載の抗Ｒｈ（Ｄ）試薬。
５．抗体成分が：（ａ）請求項１に記載されたモノクローナル抗体；（ｂ）抗ＤＵ活性のない又は非常に弱いＩｇＭ抗Ｒｈ（Ｄ）；を含む、請求項３に記載の抗Ｒｈ（Ｄ）試薬。
６．抗体成分が間接的抗グロブリン試験でＤＶＩ赤血球に対する活性を示しうるＩｇＧモノクローナル抗Ｒｈ（Ｄ）を更に含む、請求項５に記載の抗Ｒｈ（Ｄ）試薬。
７．成分（ｂ）が寄託されたハイプリドーマ細胞系ＭＡＤ−２（ＥＣＡＣＣ８６０４１８０３）及びＦＯＭ−１（ＥＣＡＣＣ８７０２１３０１）のモノクローナルＩｇＭから選択される、請求項５又は６に記載の抗Ｒｈ（Ｄ）試薬。
８．請求項１に記載されたモノクローナル抗体を産生しうるヒトリンパ球由来綴胞系。
９．ヨーロピアン・コレクション・オプ・アニマル・セル・カルチャーズに受理ＮａＥＣＡＣＣ８６０９１６０６号として寄託された、請求項８に記載の細胞系。
１０．新生児の溶血症を防止するための受動免疫用である、請求項１又は２に記載のモノクローナル抗体。
１１．新生児の溶血症を防止する受動免疫用医薬組成物であって、生理学上許容される担体又は希釈剤と共に請求項１又は２に記載されたモノクローナル抗体を含むことを特徴とする医薬組成物。
１２．抗体成分がＤＶＩ変異体と結合しうるモノクローナル抗体を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
１３．請求項１又は２に記載されたモノクローナル抗体又は請求項３〜７のいずれか一項に記載された抗Ｒｈ（Ｄ）試薬が用いられ、上記モノクローナル抗体又は上記試薬が水性溶液の形態であることを特徴とするＲｈ型判定方法。