JPH03502483A

JPH03502483A - 胎児のダウン症候群を検出する方法およびその装置

Info

Publication number: JPH03502483A
Application number: JP63505897A
Authority: JP
Inventors: ウォルド，ニコラス　ジョン; カックル，ハワード　ステファン; キャニック，ヤコブ　アブラハム; ハドウ，ジェームズ　エドワード
Original assignee: ３アイ・リサーチ・エクスプロイテーション・リミテッド
Priority date: 1987-07-09
Filing date: 1988-07-11
Publication date: 1991-06-06
Anticipated expiration: 2011-08-21
Also published as: DK172477B1; WO1989000696A1; EP0362294B1; DE3882140T2; ATE91182T1; EP0362294A1; DK115489D0; DE3882140D1; DK115489A; JP2525474B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ダウン症候群の出産前スクリーニング本発明は、出産前の胎児の段階で、ダウン症の危険を検知するスクリーニング方法に関する。

胎児にダウン症が現れる危険は、母体が高齢なほど高いことは周知であり、精密検査の対象となる母親の振り分けも年齢により行われる。検査の方法としては羊水穿刺による羊水のサンプリングがあるが、この方法は母体もしくは胎児を損傷するおそれがあり、流産の危険を伴うことが知られている。

上記ダウン症検出の羊水テストは、胎児細胞中に余分な２１番染色体が存在するか否かを確認する診断検査である。

したがって、この様な危険の伴う羊水穿刺を行う必要のある母体、すなわちダウン症妊娠の危険度の高い母体を判定するスクリーニング法が必要である。

本発明の目的は、改良されたスクリーニングの方法を提供することである。

本発明の提供する胎児のダウン症候群をスクリーニングする方法は、妊娠第３三半期の初め以前に母体から採取した血清を分析検査して、同血清中の非抱合エストリオール、プロゲステロン、１６−αヒドロキシデヒドロエピアンドロステロン硫酸（１６−αヒドロキシＤＨＥＡＳ）　、デヒドロエピアンドロステロン硫酸（ＤＨＥＡＳ）およびその前駆体または代謝物質のうちどれか一つ以上の値を測定するものであり、上記測定値が胎児のダウン症候群の恐れが濃厚であるか否かを示すものである。

また本検査法にα−フェトプロティンの測定を含めても良い。

また、本検査法にはヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の測定をも含めることが望ましい。

本検査法の実施に当たり特に望ましいのはα−フェトプロティン（ＡＦＰ）、非抱合エストリオール及びヒト絨毛性ゴナドトロピンの三点につい測定を行うことである。

いま一つの実施例においては、さらに、１６−αヒドロキシデヒドロエピアンドロステロン硫酸（１６−αヒドロキシＤＨＥＡＳ）およびデヒドロエピアンドロステロン硫酸（ＤＨＥＡＳ）のいずれかあるいは双方についても測定を行なう。

危険度の判定においては、測定値を母親の年齢と合わせて解釈してもよい。

本発明は、また、上記に掲げた代謝物質を測定する道具と、上記測定値からダウン症胎児である可能性が高い場合それを表示する手段とから成る測定キットをも提供する。

本発明は、ダウン症児を懐胎した妊娠の初期における母体血液中の血清ＡＦＰおよび非抱合エストリオール値はダウン症でない妊娠の場合に比べ大幅に低いこと、従って１６−αヒドロキシＤＨＥＡＳやＤＨＥＡＳ等の前駆体にも影響が出て、血清中プロゲステロンおよびヒト絨毛性ゴナドトロピン値も正常妊娠に比較して大きいという事実を根拠としている。

ダウン症妊娠による非抱合エストリオール、血清中プロゲステロン及びヒト絨毛性ゴナドトロピンの異常な値は胎児や胎盤の異常な合成代謝を示唆する。添付第１図は妊娠期間中のエストリオール（およびプロゲステロン）の生成に関する代謝過程を示し、この図中においてエストリオールの生成過程はゴシック体で図示されている。また、ＤＨＥＡＳと略称されているものはデヒドロエピアンドロステロン硫酸、１６−０ＨＤＨＥＡＳはその１６ヒドロキシ誘導体をそれぞれ表す。

ＡＦＰは卵黄嚢および胎児の肝臓で生成される。

こうして、第１図に示すごとく、母体のコレステロールから派生したエストリオールが、プレグネノロンからＤＨＥＡＳを経て１６ヒドロキシＤＨＥＡＳへと転換し、それからさらに胎盤機能によりエストリオールに、それがさらに非抱合体の形で母体血清中に戻り、そこでエストリオール硫酸およびグルクロナイドに転換される。

プロゲステロンは、コレステロールをプレグネノロンへ、それをさらにプロゲステロンへと転換する胎盤の機能により生じ、この際プレグネノロンの一部が胎児へ運ばれて上記の過程を経てエストリオールに転換され、残りが母体の血清中に戻る。

ダウン症候群に関わる妊娠７７例の妊娠第１３ないし２７週の母体血清中の非抱合エストリオールの中央値は、対照試験の対象である母体年齢、妊娠期間および血清サンプルの保存期間の等しいダウン症でない妊娠３８５例の中央値（Ｍ　ｏ　Ｍ　）の０．７３倍であった。

この結果は統計学的にも大きな意味を持つ。血清中の非抱合エストリオールはダウン症妊娠とダウン症でない妊娠とを振り分ける上で母体年齢や血清中のＡＦＰより優れた判別体である。ダウン症候群の判定において、いかなる構成因子にしろ単独もしくは二つだけの組み合わせで用いた場合より、年齢、血清中のＡＦＰおよび血清中の非抱合エストリオールという三つの要素を組み合わせるのが最も効果的であった。これに血清中のプロゲステロンを加えると、検出効果がさらに大幅に高まる。

ダウン症候群に関わる妊娠７７例の妊娠第１３ないし２７週目における母体血清中プロゲステロン値の中央値は、対照試験の対象である妊娠期間の等しい正常妊娠３８５例の中央値（Ｍ　ｏ　Ｍ　）の１．１９倍であった。このプロゲステロン値の増大は統計的に重要である（Ｘ？　　−１４：各粗間の変動条件の分析に基づく。）。ダウン症妊娠のプロゲステロン値の分布状態は、非抱合エストリオールに比ベダウン症でない妊娠の場合と重なる部分が多い。

正常妊娠においては胎児の副腎皮質がＤＨＲＡＳを生成し、このＤＨＥＡＳが胎児の循環系に入り、胎児の肝臓に運ばれ、そこで大部分が１６α−ヒドロキシ化する。こうして形成された１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳは胎盤に達し、そこでその一部が四段階の酵素反応を経てエストリオールに転換される。転換されなかった１６α〜ヒドロキシＤＨＥＡＳも概ね母体の循環系に運ばれる。母体血清中の１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳはそのほとんどすべてが母体自身でなく胎児から派生した可能性があり、したがってこれの測定は胎児の発達を示す明確な指標となる。

ダウン症の胎児はそうでない胎児に比べて未熟であり、よってダウン症児を身籠もっている場合の１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳ値は、正常な妊娠の場合より低くなると思われる。したがって、上記と同様の推論によりダウン症胎児を身籠もっている母体の血液中のＤＨＥＡＳ値はダウン症でない妊娠のそれに比べ低くなると思われる。

よって、ＤＨＥＡＳおよび１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳはどちらも妊娠早期におけるダウン症の発見に有効な指標となり、その測定値をここに掲げた他の指標と合わせて鑑みたとき特に有効である。

本発明の検査法は、何らかの基準により羊水穿刺検査の対象とされる正常妊娠の女性の割合を増やすことなく　（すなわち偽陽性の割合を増加させることなく）、羊水穿刺対象となるべきダウン症妊娠の女性をより多く判定する（すなわち真陽性の比率を高める）ことにより、ダウン症妊娠のスクリーニング効果を高めるものである。

以下、図面を参照して本発明を説明する。

及−迭３０．０００件以上の妊娠に関わる一４０℃で保存された出産前の血清のバンクを使用し、同血清中ダウン症候群に関わる７７件の単胎妊娠に関わるものから７７の出産前血清サンプルを採取した（以下、これらをケースと呼ぶ）。各ケースのサンプルは妊婦の年齢（同じ年数）妊娠期間（同−退散）およびサンプルの保存期間（−年以内）が合致するダウン症でない妊娠（対照）５件ずつをマツチさせた。これらのサンプルを、バンクから取りだし非抱合エストリオールとＡＦＰ値を測定した。ケースにも対照にもすべて神経管の異常に関わる妊娠例はなく、また、すべてのサンプルは妊娠期問丸１３がら２７週のものであった。

非抱合エストリオールは直に、非抽出ラジオイムノアッセイ法（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製Ａｍｅｒｌｅｘ−エストリオールＲＩＡキット）により測定した。分析対象となったすべての試料について、サンプル量を２倍の４０マイクロリツトルに増やして測定に修正を加えた。

また、母体血清中のＡＦＰはイムノラジオメトリックアッセイ（Ｂｏｏｔｓ−Ｃｅｌｌｔｅｃｈ　　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　　Ｌｉｍ１ｔｅｄ）により測定した。

母体の血清中のプロゲステロン値の測定には、ラジオメトリックアッセイ（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製Ａｍｅｒｌｅｘ−Ｍプロゲステロン（新）キット）、血清ＤＨＥＡＳ値の測定にもラジオメトリックアッセイ（Ｐａｎｔｅｘ　　ＤＨＥＡ−８１１２’キツト）を用いた。

すべての測定は約１週間の期間内に行い、ケースとその対照とは常に同一の分析バッチ内で測定した。また、試料がダウン症妊娠の母体から採られたものか否かは判別できない状態で測定を行なった。

母体の血清中のｈＣＧの測定には、イムノラジオメトリックアッセイ（最初の国際基準標本（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）に合わせたＳｅｒｏｎｏ−ＭＡＩＡクローン・キット）を５００分の１に薄めて用いた。すべての測定は三日間以内に行われ、ケースとその対照とは、常に試料がダウン症の物か否かは判別できない状態で同一バッチ内で測定した。

第２図は妊娠期間に重きを置いて妊娠各週ごとに試験した婦人の数の回帰直線に基づき、各ダウン症妊娠ケースの個々の非抱合エストリオール値をダウン症でない妊娠測定値の中央値および２５ならびに７５／（−センタイル点と共に示したものである。妊娠各週ごとのダウン症でない妊娠における中央値も示している。

平均的にみてダウン症妊娠の非抱合エストリオール値は、正常妊娠のそれに比べて大幅に低かった（マツチさせた各粗間の変数分析によるとｐ＜０．００１）。

妊娠１３ないし２７週の間は、特定の退的で注目すべきほど大きな相違が出ることは無かった。

非抱合エストリオール値は、下記表１に記された回帰中央値を用いて同一妊娠期間の正常妊娠の中央値（Ｍ　ｏ　Ｍ）の倍数で簡単に表せる。

バーセンタイル　ダウン症妊娠　ダウン症でない妊娠（ｎ＝７７）　　　　　（ｎ＝３８５　）１２５　　　　　　０、５９　　　　　０．８３１５０（中央値）　　　　　　　０．７３　　　　　　　　　　１．００１７５　　　　　　０、９０　　　　　１．１９Ｍ５Ｏ＝母体の血清中の非抱合エストリオール表１は、ダウン症妊娠およびダウン症でない妊娠の母体の血清中の非抱合エストリオール値の２５．５０ならびに７５パ一センタイル点の値をＭｏＭで表したものである。ダウン症妊娠の血清中ＡＦＰの中央値は、正常妊娠のそれの７３％に過ぎなかった（ｐ＜０．００１）。

表２は、ある特定のレベル以下の血清中の非抱合エストリオール中央値を持つダウン症およびダウン症でない妊娠の割合を示す。ガウス頻度分布がこのデータにほぼ符合する。

表２・非抱合エストリオール値　　ダウン症妊娠　　ダウン症でない妊娠（Ｍ　ｏ　Ｍ　）　　　　　　　　（％）　　　　（％）≦０．４０　　　　　　　　９．１　　　　　１．３≦０．５０　　　　　　　　１６　　　　　　３．１≦０．６０　　　　　　　　２６　　　　　　４．９≦０．７０　　　　　　　　４６　　　　　　９．６≦０．８０　　　　　　　　６２　　　　　　２１≦０．９０　　　　　　　　７５　　　　　　３５≦１．００　　　　　　　　８６　　　　　　５０表３は、ダウン症妊娠およびダウン症でない妊娠の母体血清中の非抱合エストリオール（ＭＳＯ）中央値を母体年齢別に示している。ダウン症妊娠の場合も、ダウン症でない妊娠の場合も、共に血清中非抱合エストリオール中央値は、母体年齢に関係なくダウン症の危険度を推し量る物差しとなる。

表３出産予定日の　　ダウン症妊娠　　　ダウン症でない妊婦母体年齢ＭＳＯＭＳＯ（歳）　　　　　（ＭｏＭ）件数　　（ＭｏＭ　）件数３０歳未満　　　０．７５　２０　　　０．９８　１００３０−３４　　　　０．７２　１７　　　１．０４　８５３５−３９　　　　０．７６　１９　　　１．００　９５４０歳以上　　　０．７３　２１　　　１．００　１０５計　　　　　　　　　　０．７３　　７７　　　　　　１．００　　３８５表４は、ダウン症妊娠、ダウン症でない妊娠の双方において母体血清中のＡＦＰ　（非抱合エストリオール同様Ｍ　ｏ　Ｍにて表示）の増加につれ母体血清中非抱合エストリオールの中央値（ＭＳＯ）も増加することを示している。非抱合エストリオールとＡＦＰ値の対数との相関関係には統計的重要性がある（ダウン症妊娠においてｒ＝０．２１．ｐ＜Ｑ、０５、ダウン症でない妊娠においてはｒ＝０．２０．ｐ＜０．００１）。

二変量ガウス頻度分布が、このデータにほぼ合致する。

表４血清中ＡＦＰ値　ダウン症妊娠　ダウン症でない妊娠ＭＳＯＭＳＯ（ＭｏＭ　）　　　　　（ＭｏＭ　）件数　（ＭｏＭ　）件数≦０．６０　　　　　０．６６　１？　　　０．７４　２２０．６１−０．８０　　　０．７２　２４　　０．９５　７６０．８１−１．００　　　０．８２　２３　　０．９６　９４＞１．００　　　　　０．８２　１３　　１．０４　１９３計　　　　　　　　　　　０．７３　　７７　　　　１．００　　３８５双方のテストに同等に重きを置きつつ得られた血清中のＡＦＰ中央値および血清中非抱合エストリオール中央値を解釈する一つの方法は、どちらかの測定値が正常値の同じパーセンタイル点の値以下であれば、スクリーニング結果を陽性とみなすことである。この方法で両方のテストを実施した結果、陽性とされたダウン症妊娠数に対し、陽性と出た正常妊娠件数は、各テストを単独で検討したときよりも少なかった（表５）。

表５ダウンｔ　　　　　　　偽陽性率（判定方法）検出率　　　年齢のみ　　八ＰＦのみ　　　ｕＥ、　　　　年齢と　　　年齢と　　　年齢、ＡＦＰのみ　　　　ＡＦＰ　　　　ｕＥ３　　　及σｕＥ３（％）　　　　　（ａ）　　　　　（ｂ）　　　　　　　（ｃ）　　　　　（ｄ）　　　　　（ｅ）　　　　　（ｆ）６０　　　　３１　　　　３３　　　　　　２８　　　　２０　　　　　＋４　　　　１２５５　　　　２５　　　　２８　　　　　　１９　　　　１６　　　　１１　　　　　９．１５０　　　　１９　　　　２４　　　　　　１６　　　　１２　　　　　　ｇ、８　　　１、Ｏ４５１５２０１３９，８６，７５，３４０１１１７ＩＩ　　　　　　７．３　　　５．０　　　３．９３５　　　　　７．５　　　＋４　　　　　　　８．５　　　５．３　　　３．７　　　２．８３０　　　　　５．１　　　ＩＩ　　　　　　　　６．６　　　３．６　　　２．５　　　１．９２５　　　　　３．３　　　８．２　　　　　５．０　　　２．２　　　　＋、６　　　１．２２θ　　　　　１．９　　　６．０　　　　　３．５　　　１．３　　　０．９　　　０．７注：　　（ａ）母親が高年齢であるとき、（ｂ）Ａ、ＦＰ値が低いとき、（ｃ）ｕＥｑが低いとき、また、（ｄ）（ｅ）および（ｆ）の場合はダウン症の危険度が高い（出産時に）とき陽性となる。

ＡＦＰならびにＭＳＯ双方のテストを実施することにより、どちらか片方のみの場合に比べて結果の改善を見たが、これはＡＦＰよりも概ね非抱合エストリオールのスクリーニング効果によるものである。たとえば、ダウン症妊娠の３５％を陽性と判定するに当たり（表５参照）、二つのテストの実施によりダウン症でない妊娠を陽性と判定した割合は、非抱合エストリオール値のみの測定に比べ、０．１％減でしかないが、ＡＦＰのみの測定と比較すると、２．２％も減っている。両者は、共に統計的に意義のある付帯データを提供したが、ロジスチック回帰解析すると非抱合エストリオールのほうが、ＡＦＰよりもダウン症のより強力な予測因子であることが分かった（非抱合エストリオールをＡＦＰに加えた場合Ｘ？＝４５゜４、ｐ〈０゜０００１、ＡＦＰを非抱合エストリオールに加えた場合ｘｉ＝ｔｔ、２、ｐ＜０．０００１）。

これらの結果は、母体の血清中の非抱合エストリオールが、母体の年齢に関係なくダウン症妊娠の場合は、そうでない場合に比較して平均的に低いことを立証している。また、血清中の非抱合エストリオール値が血清中ＡＦＰより効果的に、ダウン症妊娠と正常妊娠とを区別し得ることをも明らかにしている。

ダウン症妊娠では母体血清中の非抱合エストリオール値が、なぜ低くなるかは明らかではない。第１図は胎児および胎盤でのエストリオール生成の代謝過程を表し、代謝性変容がどこで起こる可能性があるかを示している。通常の妊娠では、胎児の副腎皮質でＤＨＥＡｓが生産され、これが胎児循環系から胎児の肝臓へと運ばれ、その大部分が１６α−ヒドロキシ化される。

新たに形成された１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳは胎盤に達し、そこで四段階の酵素反応（サルファターゼ（ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ）、アロマターゼ（ａｒｏｒｎａｔａｓｅ）および１７β−ヒドロキシデヒドロゲナーゼ（１７−ｂｅｔａ− ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ　　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ））を経てエストリオールに転換される。ついで、このエストリオールは母体内に分散し、非抱合ステロイドとして測定され、その濃度は胎児と胎盤の成長につれ高まる。エストリオール全体と異なり、母体の血清中の非抱合エストリオールは、すべて胎児または胎盤から生ずる。それゆえここでは胎児の代謝変化を母体の血清中エストリオール総量より敏感に表示する因子として使われている。

プロゲステロン値の測定をスクリーニング・プログラムに加え、危険度の指標を４つのパラメータ（母体年齢、非抱合エストリオール、ＡＦＰおよびプロゲステロン）とすることで判別効果をいっそう高めることができる。

また、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の測定をスクリーニング・プログラムに加えても効果が上がることが判明した。ダウン症妊娠７７件の母体のｈｃＧ °中央値は、母体年齢、妊娠期間および血清サンプルの保存期間をそれぞれ合わせた３８５件のダウン症でない妊娠のそれの中央値の２倍であった（ｐ＜０．００１）。したがって、母体の血清中のｈＣＧを測定することは、ダウン症のスクリーニング・テストとじて効果的である。たとえば３０％の検出率に対して偽陽性の割合（陽性の範晴に入れられたダウン症でない妊娠の割合）はｈＣＧで３％であり、これは母体年齢（５％）、非抱合エストリオール（７％）　ＡＦＰ　（１１％）より低い。これら４つのパラメータ全部で行うと、同じ３０％の検出率に対し偽陽性率は０．５％にまで低下し、これが最も効果的なスクリーンであった。

組み合わせスクリーニング・テストある特定の異常のスクリーニング・テストのために、数種の変数を組み合わせて使用する場合は、当該変数間の相関関係の範囲を判定する必要がある。たとえば、ある二つの変数が完全な相関関係にある場合、もう一方をテストに加えても、検査対象に当該の異常があるか否かの危険度の判定に、一方だけ使用した場合と比較して何等寄与しない。だが、変数同士が完全に無関係である場合は、各変数がそれぞれ独立した危険度の度合いを提示する。ある程度の相関関係がある可能性はあるが、その範囲内においては何らかの独立した情報が得られると思われる。ｈＣＧ、ｕＥ、およびＡＦＰのダウン症およびダウン症でない妊娠においての関係を下記の表６に示した。

表６ダウン症妊娠　　　　ダウン症でない妊娠ｈｃＧ中央値　（件１）　　　　　　ｂｃＧ中央値　（件数）（ＭｏＭ　　）　　　　　　　　　　　　　（ＭｏＭ　　）年齢（年）＜３０　　　　　１．９４　　（２０）　　　１．１０　　（１００）３０−　　　　　１．Ｈ（＋７）　　　０．９６　　　（８５）３５−　　　　　２．１１　　（１９）　　　０．９５　　　（９５）≧４０　　　　　２．１９　　（２１）　　　１．０２　　（１０５）ｕ５　　（ＭｏＭ　）〈０．６０　　　　２．７１　　（２０）　　　１．２５　　　（１９）０．６０−　　　　１．８８　　（２０）　　　１．２１　　　（３６）０．７５−　　　　１．８５　　（１ｇ）　　　０．９７　　　（７７）≧０．９０　　　　１．８４　　（＋９）　　　１．００　　（２５３）ＡＦＰ　　（ＭｏＭ　）＜０．６０　　　　１．６４　　（１７）　　　１．θ２　　　（２２）０．６０−　　　　２．０５　　（２４）　　　０．９１　　　（７５）０．８Ｇ−２，１２（２３）　　　０．８９　　　（９５）≧１．０Ｇ　　　　　２．２４　　（１３）　　　１．１０　　（１９３）計　　　　　　　　　　２．０４　　　（７７）　　　　　１．０２　　　（３８５）これらの測定値は、ｈＣＧ値と母体年齢の間には何等の相関関係もないが、非抱合エストリオール値（ｕＥ３）との間には、僅かながら反比例的な関係があることを示している。ｈＣＧとＡＦＰとの間の関係はそれほど明白ではないが、ｕＥ、とＡＦＰとが相互関係がある事がすでに明らかにされており、ｈＣＧとｕＥ３との間にもおそらく潜在的な関係があると思われる。

表７は、３５歳の婦人に３種の生化学スクリーニング・テスト（母体血清中ＡＦＰ、非抱合エストリオールおよびｈＣＧ）を行って得たものとして特定の測定値を設定し、これに基づきダウン症妊娠の危険度を裏したものである。

表７ｕＥｉ　　ｈＣＧ　　　　　ＡＦＰ　　（ＭｏＭ）（ＭＯＭ）　　（ＭＯＭ）　　□ ０．４　　　　１．０　　　２．５０．４Ｇ、５１：３７０に２８０（１１：２２０００＋、０　　１：８４　　１・４８０　　１：２８００２．０　　１：１６　　１：　　６９　　１：３１０１．０　　　Ｇ、５　　１：８２０　　１：４８００　　１：２８０００１．０　　１：３３０　　１：１４００　　１：　６４００２．０　　１：１１０　　１・３６０　　１：　１２００１．４　　０．５　　１：２２００　　１：１１０００　１：５２０００１．０　　１：１３０Ｑ　　ｌ：　４６００　１：１７０００２．０　　１＋　６３０　　１：　１７００　１・４７００表７の結果は、任意の二つのテストの測定値が分かっていても、三番目のテストの結果が有用な情報となることを表している。たとえば、３５歳の女性のＡＦＰ値がｌ、ＱＭｏＭでｕＥ、値がＱ、４ＭｏＭであるとき、ｈＣＧ値がＱ、５ＭｏＭなら危険値は１；２８００であるが、ｈＣＧ値が２．０ＭｏＭなら１：６９となる。

実施するテストを二つに限るなら、ＡＦＰとｈＣＧの組み合わせが望ましい。これはＡＦＰは神経管の異常の検出に使えるという別の価値があり、また、ＡＦＰとｈＣＧの組み合わせの成績はｕＥ、とｈＣＧとの組み合わせと比較しても、さほど劣らないからである。

しかしながら、総体的に最も良い結果が得られたのは、これら三つのテスト全部と母体年齢を採用したときである。この場合、偽陽性率４．７％に対し、６０％の検出率が得られた（下記参照）。

表８は、非抱合エストリオール（ｕ　Ｅ　３　）　、Ａ　Ｆ　ＰおよびｈＣＧのそれぞれ、もしくはそれらの組み合わせと母体年齢とを合わせて使用した場合のダウン症検出率に対する偽陽性率をまとめたものである。

表８検出率　　ＡＦＰ　　　　ａＥｉ　　　　ｈｃＧ　　　　ＡＦＰ　　　　ＡＦＰ　　　　ＩＩＥ３　　　　ＡＦＰ。

と　　　　と　　　　と　　　　山（％）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｕＥ３　　　　ｈＣＧ　　　　ｂｃＧ　　　　およσｈｃｃ８０　　４４　　　　３４　　　　２７　　　　２９　　　　２Ｇ　　　　　２０　　　　１６７０３０　　　　２２　　　　１６　　　　１８　　　　１２　　　　１１　　　　　１１．６６５　　２５　　　　１８　　　　１２　　　　　Ｉｓ　　　　　　８．８　　　　Ｉ！　、　１　　６、４１ｉ０　　２Ｇ　　　　　　１４　　　　　　９．５　　１２　　　　　　６．７　　　６．０　　　４．７５５　　１６　　　　　１１　　　　　　７．２　　　９．１　　　　５．０　　　　４．４　　　　３．４５（１１２ｇ、８　　　　５．４　　　　７．０　　　　３．７　　　　３．２　　　　２．５４５　　　　９．７　　　　６．７　　　　３．９　　　　５　、３　　　　２．７　　　　２ｊ　　　　　１．７４０　　　　　？、３　　　　５．０　　　　２．８　　　　３．９　　　　１．９　　　　１．６　　　　　＋、２３５　　　　５．３　　　　３．７　　　　１．９　　　　２．８　　　　　＋、３　　　　１．（１０，８３０３，６２，５１，２１，９０，８０，７０，５２５２，２１，６０，８１，２０，５０，４０Ｊ２０１．３０．９０．４０．７（１，３０，２０，２下記表９は、各種の測定値を単独あるいは組み合わせて使用した場合の５％偽陽性に対する検出率を表している。左側のコラムの略号は以下の通りである。

Ａ＝（ｌｏｇｔｏ）ａ−フェトプロティン（ＡＦＰ）、　　Ｅ＝非抱合エストリオール；　　　Ｈ＝（ｌｏｇｔｏ）ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）；　　Ｐ＝　（ｌ。

ｇ＋ｏ）プロゲステロン表１Ｄ）ＩＥＡｓ　　なし　　　　　　　　　　　　ＤＩ（ＥＡＳ　　あり測定対１ｄｆｉ１度　　検出率％　ＰＰＶ　　　ｄ　　　　　　危険度　　検出率％　ＰＰＶ＾Ｅ）ＩＰ　　１．７７１　２３２　　６３．６　　６２　　　１．７９５　２３２　　６４．３　　６１＾ＥＨｌ、６８０２２７　　６０．６　　６５　　　１．７［１０２２８６＋Ｊ　　　６４ＥＨＰ　　１．６０１２２６　５１１　６８　１．６３２２２６　５９．１　６７八ＥＰ　　　１．５８５２２５　　５７．５　　６８　　　１．６＋９２２６　　５８．７　　６７ＥＨ１，５３９２２５５６，１７０１，５６５２２５５６，９６９Ａ）ＩＰ　　　１．５１７２２５　　５５．４　　７１　　　１．５４６２２５　　５６．３　　７ＯＡ）ｌ　　　　１．４９３２２５　　５４．６　　７２　　　　＋、５１９２２５　　５５．５　　７１ＥＰ　　　　１．３９０２２７　　５１．４　　７６　　　　＋、４３４２２６　　５２．８　　７５１１Ｐ　　　　１．２７２２３１　　４７．９　　８２　　　１．３１２２２９　　４９．１　　８０Ｈ１，２６８２３１４７，８８２１ＪＯ５２２９４８，８８０人Ｅ　　　　１．１５９２３７　　４４．７　　８８　　　　＋、１９３２３５　　４５．６　　８６ＡＰ　　　　１．０８０２４３　　４２．６　　９２　　　１．１３３２３９　　４４．０　　８９Ｅ　　　　　１．００６２４９　　４０．７　　９６　　　１．０５１２４６　　４１．９　　９４八　　　　０．７０３　２８５　　３４．７　１１３　　　０．７６７　２７７　　３５．８　　＋１０Ｐ　　　　　Ｏ，６５６２９１３４，０１１６０，７５３２７８３５，５１１１ＤＨＥＡＳ　　　　　−−− −０，３３３３２１３０，７１２８ｄ＝標準偏差単位でのダウン症妊娠とダウン症でない妊娠との距離危険度は、１対表中の数字である。

ＰＰＶ＝陽性判定値であって、胎児が実際にダウン症児である確率を表す指標である。１に対し表中の数字がＰＰＶ値となる。

多くの既存スクリーニング・プログラムにおいて、およそ５％の婦人が高年齢というだけの理由で羊水穿刺の対象とされる。だが、本発明のＡＦＰ、ｈＣＧ及び非抱合エストリオールを母体年齢と組み合わせて用いる方法によれば、６０％以上のダウン症妊娠を検出することができ、これは、従来のスクリーニング・プログラムによって同じ割合の羊水穿刺を行って得られる検出率の倍以上である。上述の説明の通り、本発明の方法で英国におけるダウン症児の出産をスクリーニングなしの場合の年間９００件から３５０件に引き下げることが可能である。

また、補足手段として、たとえば胎児の大腿部の長さを測定する超音波スクリーニング等を併用するとさらに検出率が向上するであろう。

母りトｆ）ｉｒＬ月１中９エズトリオール（ｙ／＝−Ｑ補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成２年０１月０９日特許庁長官　　吉　１）文　毅　殿１、特許出願の表示　ＰＣＴ／ＧＢ８８１００５５７２、発明の名称　　ダウン症候群の出産前スクリーニング３、特許出願人イギリス国、ニスイード８エックスピー、ロンドン。

ウォーターロー・ロード　９１番３アイ・リサーチ・エクスブロイチージョン・リミテッド代表者　　　デスフォーゲス、チャールズ国　　籍　　イギリス国４、代理人東京都新宿区新宿４丁目３番２２号（安藤ビル）５、補正書の提出年月日　　１９８９年１０月３０日６、添付書類の目録（＋）　　補正書の翻訳文　　　　　　１通３、　　ヒト絨毛性ゴナドトロピンの測定をも含むことを特徴とする請求の範囲第１または第２項記載の検出方法。

４、　　α−フェトプロティン（ＡＦＰ）、非抱合エストリオールおよびヒト絨毛性ゴナドトロピンの測定を行なうことを特徴とする請求の範囲第３項記載の検出ロン硫酸（１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳ）およびデヒドロエピアンドロステロン硫酸（ＤＨＥＡＳ）の測定をも含むことを特徴とする請求の範囲第４項記載の検出方法。

６、　上記検出結果および母体年齢因子は上記危険度の指標であることを特徴とする請求かの項に記載された検出方法。

７、　上記いずれかの特許請求の範囲に記載された検出法を実施するための測定キットであって、妊娠第３三半期が始まる前に採取した母体血清サンプルを調べ、その構成要素のうち、非抱合エストリオール、プロゲステロン、１６α−ヒドロキシデヒドロエビアンドロステロン硫酸（１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳ）、デヒドロエピアンドロステロン硫酸（ＤＨＥＡＳ）およびその前駆体もしくは代謝物質のうち少なくとも一つの含有値を測定する手段から成る胎児のダウン症候群の危険度を判定する測定キット。

国際調査報告国際調査報告ＧＢ　８８００５５７ＳＡ　　　　２３３０７

Claims

【特許請求の範囲】

１．胎児におけるダウン症候群を検出するためのスクリーニング法であって、妊娠第３三半期が始まる前に採取した母体の血清サンプルを調べ、その構成要素のうち、非抱合エストリオール、プロゲステロン、１６α−ヒドロキシデヒドロエピアンドロステロン硫酸（１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳ）、デヒドロエピアンドロステロン硫酸（ＤＨＥＡＳ）およびその前駆体もしくは代謝物質のうち少なくとも一つの含有値を測定することから成り、該測定結果が胎児ダウン症の危険度が高いことを示し得ることを特徴とする検出方法。
２．α−フェトプロテインの測定をも含むことを特徴とする請求の範囲第１項記載の検出方法。
３．ヒト絨毛性ゴナドトロピンの測定をも含むことを特徴とする請求の範囲第１または第２項記載の検出方法。
４．α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、非抱合エストリオールおよびヒト絨毛性ゴナドトロピンの測定を行なうことを特徴とする請求の範囲第３項記載の検出方法。
５．１６α−ヒドロキシデヒドロエピアンドロステロン硫酸（１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳ）およびデヒドロエピアンドロステロン硫酸（ＤＨＥＡＳ）の測定をも含むことを特徴とする請求の範囲第４項記載の検出方法。
６．胎児にダウン症候群の危険が高いことを示す指標が、上記測定結果と母体年齢との組み合わせによることを特徴とする上記請求の範囲いずれかの項に記載された検出方法。
７．上記いずれかの特許請求の範囲に記載された検出法を実施するための測定キットであって、妊娠第３三半期が始まる前に採取した母体血清サンプルを調べ、その構成要素のうち、非抱合エストリオール、プロゲステロン、１６α−ヒドロキシデヒドロエピアンドロステロン硫酸（１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳ）、デヒドロエピアンドロステロン硫酸（ＤＨＥＡＳ）およびその前駆体もしくは代謝物質のうち少なくとも一つの含有値を測定する手段から成る胎児のダウン症候群の危険度を判定する測定キット。
８．α−フェトプロテインの測定をも含むことを特徴とする請求の範囲第７項記載の測定キット。
９．ヒト絨毛性ゴナドトロピンの測定をも含むことを特徴とする請求の範囲第７または第８項記載の測定キット。
１０．上記測定結果から胎児にダウン症候群の危険が高いことを示す指標を提供する手段をも含む上記請求の範囲第７、８または９項のいずれかに記載された測定キット。
１１．胎児におけるダウン症候群を検出するためのスクリーニング法であって、妊娠第３三半期が始まる前に採取した母体の血清サンプルを調べ、その構成要素のうち、α−フェトプロテイン及び非抱合エストリオールに加えて、プロゲステロン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、１６α−ヒドロキシデヒドロエピアンドロステロン硫酸（１６α−ヒドロキシＤＨＥＡＳ）、デヒドロエピアンドロステロン硫酸（ＤＨＥＡＳ）およびその前駆体もしくは代謝物質のうち少なくとも一つを選定してその含有値を測定することからなり、該測定結果が胎児ダウン症の危険度が高いことを示しうることを特徴とする検出方法。