JPH03500048A - 癌、自己免疫疾患または感染症の診断、モニター、治療および／または予防のための抗イディオタイプ抗体を選択するための方法および手段ならびにその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 癌、自己免疫疾患または感染症の診断、モニター、治療および／または予防のた めの抗イデイオタイプ抗体を選択するための方法および手段ならびにその用途 発明の分野 本発明は、能動および受動免疫療法の分野に関する。より詳細には、本発明は、 癌、自己免疫疾患、または感染症、アレルギーまたは移植拒絶の診断、モニター 、治療、および／または予防に有用なイディオタイプまたは抗イデイオタイプを 選択する技術分野に関する。

抗原は、免疫応答を誘発し得る物質である。代表的な免疫応答は抗体産生である 。抗体はＢ−細胞リンパ球から産生される。他の代表的な免疫応答はＴ−細胞の 刺激である（Ｔ−細胞は、胸腺で選別を受けた別のタイプのリンパ球である）。

Ｔ−細胞は、ある特定のタイプのウィルスまたはその他の病原体に感染された細 胞を破壊することができる。Ｔ−細胞はまた、Ｂ−細胞による抗体産生に関与し ている。従って、抗原は、抗体、またはその抗原が刺激するＴ−細胞上のレセプ ターのいずれかと反応することができる。抗体およびＴ−細胞レセプターは、誘 導性抗原に特異的である。

抗体およびＴ−細胞レセプター分子は、特異的な抗原認識に関与している可変領 域を有している。抗体またはＴ細胞と実際に結合する抗原中の領域は、抗原決定 基または「エピトープ」と呼ばれている。抗体およびＴ−細胞レセプターの可変 領域は、決定基、即ちこれも免疫原性を有し、抗−イディオタイプ（抗−１ｄ） 免疫応答を開始させる「イディオトープ」を含有している。

より詳細には、イディオトーブは、抗体およびＴ−細胞レセプターの可変領域と 関連していると考えられる。これらの可変領域が、抗原に対する特異性を抗体お よびＴ−細胞レセプターに与えている。

イディオトーブは抗体、Ｂ細胞免疫グロブリンレセプター、およびＴ細胞レセプ ターにおける免疫システム標識（マーカー）である。

イディオタイプは、イディオトープ決定基またはある種のイディオタイプ内のイ ディオトーブを認識する１つよりも多い抗−イディオトーブ抗体との反応性によ って免疫学的に規定される。即ち、イディオタイプは、イディオトーブ群が集合 して形成される。イディオトーブは、モノクローナル抗−イディオタイプ抗体と の結合性によって規定するのが、最良である。

イディオトープは、１つより多い異なるグループの抗体またはＴ細胞レセプター に見いだすことができる。即ち、イディオトーブは、種々の個体由来の異なる抗 体またはＴ細胞レセプターで共有されていることもある。この特徴は、［共通（ ｐｕｂｌ　１ｃ）ｊイディオトーブと呼ばれている。抗体はまた、単一の個体か ら特異的に発現される１固有（ｐｒｉｖａｔｅ）Ｊイディオトーブをも有してい ることもある。従って、個体には、共通および固有のイディオトープの両者が現 れるものである。従って、共通イディオトーブを検出する抗−ｉｄ治療は、種々 の患者の治療に応用することができ、他方、固有イディオトープに対する抗−ｉ ｄは患者の特定の治療に応用できる。ここで、イディオトーブは、アイソタイプ （免疫グロブリンクラス特異的）決定基、異種型（ｘｅｎｏｔｙｐｉｃ）　（種 特異的）決定基、およびアロタイプ（ある特定の種のサブグループ特異的）決定 基とは異なっていることに留意すべきである。

抗体およびＴ細胞レセプターはそれぞれ、抗原決定基、いわゆる「エピトープ」 に対する結合部位である、少なくとも１つのパラトープを有している。パラトー プは、イディオトーブの役目をすることができる。即ち、パラトープは、元の抗 原と同様に、抗−イディオタイプ抗体がパラトープに結合するという抗−イディ オタイプ応答を刺激することができる。抗−パラトープ抗−イディオトーブ抗体 が構造的に抗原と似ている場合、それは抗原の「インターナルイメージ（ｉｎｔ ｅｒｎａｌ　ｉｍａｇｅ）Ｊと呼ばれる。元の抗原の立体配置を示すこれら抗パ ラトープ抗−ｉｄのほか、他の抗−ｉｄ抗体は、免疫応答の調節に関与している 抗体およびＴ細胞レセプターイディオ）　−プが特徴である。これらのイディオ タイプは、調節イディオタイプ（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　１ｄｉｏｔｙｐｅｓ） と命名され、本質的に、元の抗原の「インターナルイメージ」ではない。これら の背景の原理についての一般的考察は、バープツト（Ｂｕｒｄｅｔｔｅ、　Ｓ、 　）およびシ二バルッ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ、　Ｒ。

）らのＮｅｗ　Ｅｎｇ、　Ｊ、　ｏｆ　Ｍｅｄ、　３１７：２１９（１９８７） に記載されている。

イディオタイプネットワーク ある特定の種または個体ではいずれも、異った抗体およびＴ細胞レセプターの数 が、非常に多い（＞１０’）。抗体およびＴ細胞レセプターは各々、調節ネット ワークを介して相補的抗−イディオトープと連結される幾つかのイディオトープ を発現する。ジェーン（Ｊｅｒｎｅ、　Ｎ、　、　Ａｎｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、 　１２５６：３７３（１９７４））は、免疫システムは、イディオタイプおよび 抗−イディオタイプからなるネットワークによって調節されていると提唱してい る。イディオタイプネットワークの機能が免疫システムのホメオスタシスを維持 し、さらに免疫応答を調節していることを示す実験に基づく膨大な証拠が存在す る。イディオタイプはＢ−細胞およびＴ−細胞から発現されるので、イディオタ イプネットワークは、体液性（抗体）および細胞性（Ｔ−細胞媒介）免疫応答の 両者を包含する。特異的な免疫応答は、１対ｌを基礎とした特異的な抗−イディ オタイプ抗体、または共有されたイディオトーブを介したグループ内の特異的な 抗−イディオタイプ抗体のいずれかによって調節される。これらの抗−イディオ タイプ抗体は、「調節抗−イディオタイプ」と呼ばれ、本質的に標的抗原のイン ターナルイメージではない。ゴールドバーブ（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、　Ｂ、　）ら のＪ、　Ｅｅｐ。

Ｍｅｄ、　１５８：５１５（１９８３）を参照。

抗−イディオタイプ療法 最近、「インターナルイメージ」抗−イディオタイプの治療的用途が示唆されて おり、幾つかの実験系で証明されている［ＥＰＯ出願番号第８４８１０５１６． ９号、出願臼１９８４年１０月２５日、公開番号第０１４１７８３号；ニソノフ （Ｎｉｓｏｎｏｆ　ｆ、　Ａ）およびラモイ（Ｌａａ＋ｏｙｉ、　Ｅ、　）のＣ ｌ１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ、　２１°３９７（１ ９８１）　；ケネディー（Ｋｅｎｎｅｄｙ、　Ｒ，Ｃ，）らのＢｉｏｔｅｃｈｎ ｕｑｉｅｓ　３：４０４０（１９８５）：ｊ　。これらのインターナルイメージ 抗−イディオタイプは、ウィルス、細菌および病原体感染、ならびに癌に対する 特異的な免疫応答を得る上での、抗原の代用物として使用されている［ヘールリ ン（Ｈｅｒｌｙｎ、　Ｄ、　）らの５ｃｉｅｎｃｅ　２３２：１００（１９８６ ）　；　Ｏイカードフリ（Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ、　Ｓ、　）らのＪ、Ｉｍ ｍｕｎｏｌ、　１３７：１７４３（１９１１１６）］。

現在では、インターナルイメージポリクローナルおよびモノクローナル抗−イデ ィオタイプが、動物およびヒトの能動免疫療法に使用されている。このようなイ ンターナルイメージ抗−イディオタイプを生成させる方法を以下に示す：１）腫 瘍抗原または感染原に対する抗体を調製する。この抗体をＶ′Ａｂ１」と命名す る。２）この最初の抗体に対する抗−イディオタイプ抗体群（Ａｂ２ｇ）を調製 する。これらの抗−ｉ　ｄｓ　（Ａｂ２ｓ）を、最初の抗原（例えば、腫瘍また は感染原から発現されるようなもの）の立体配置を示すイディオトープの発現性 に関してスクリーニングする。このスクリーコン・グ法は、元の抗原がＡｂｌ− Ａｂ２結合を阻害することに基づくものであり、生体内において抗−イディオタ イプ（Ａｂ２）を代用抗原として生物学的に試験することである。この試験は動 物で行うが、従来、これにより、インターナルイメージ抗−イディオタイプが腫 瘍抗原および感染原を示していることが証明されている［ケネディ−（Ｋｅｎｎ ｅｄｙ、　Ｒ，Ｃ，）らのＢｉｃｔｅｅｈｎｉｑｕｅｓ　３：４０４０（１９８ ５）、ヘールリン（Ｈｅｒｌｙｎ、　Ｄ、　）らの５ｃｉｅｎｃｅ　２３２：１ ００（１９８６）、ロイカードフリ（Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ＋　Ｓ、　）ら のＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３７：１７４３（１９８６）：ｌ。

インターナルイメージ抗−ｉｄが天然抗原よりも非常に都合の良い点は、インタ ーナルイメージ抗−イディオタイブハイブリドーマ抗体のほうが元の抗原よりも 経済的に、かつ容易に調製できることが多いことである。さらに、感染症に関し ては、抗−ｉｄは感染原が排除されているので、感染性粒子を含有している可能 性のある他のワクチンよりも患者にとってより安全である。インターナルイメー ジ法の他の利点が提示されており［例えば、ＥＰＯ出願番号第８４８１０５１６ ．９号、１９８４年１０月２５日出願、公開番号第０１４１７８３号］、それは 、その相当する抗原（腫瘍関連抗原、または感染原関連抗原）が異なる分子およ び生物学的情況を呈することに存する。このことは、癌の場合、腫瘍抗原に対す る免疫寛容性の自然状態が存在することが多いので、より当てはまるかもしれな い。

従来技術の限界 しかしながら、インターナルイメージ抗−イデイオタイプを使用した現在の方法 には幾つかの欠点がある。本発明者らは、同一の抗原エピトープを示す異なるイ ンターナルイメージ抗−ｉｄによる免疫化が、保護免疫を誘発し得ることもあり 、誘発し得ないこともあることを明らかにした。従来技術では、患者の非−イン ターナルイメージ調節イディオトープの状態および応答が適切には考慮されてい ないか、または制御されていない。これらの応答は、効果的な抗−腫瘍または抗 −感染原免疫応答を媒介し、かつ有害な応答、例えば自己免疫またはアレルギー 反応または移植拒絶を制御する、患者における調節イディオタイプネットワーク と連絡することができる。

これらの調節イディオタイプ／抗−イデイオタイプ相互作用の結果は、疾患経過 にとって有益、あるいは有害となり得る。従って、現在当業界で使用されている この方法では、免疫療法のための抗−イディオタイブを選択する上で、これらの 調節イディオタイプ相互作用が適切に考慮されていない。

従って、本発明者らは、インターナルイメージの特性のみに基づいて抗−イディ オタイプを選択することは、治療目的としては適切でなく、効果的なイディオタ イプ免疫療法を目的としてはイディオトープレベルと疾患の進行度または回復度 との相関関係に基づいて抗−ｉｄを選択することが重要であると考える。本発明 の目的は、治療上有用な抗−イディオタイプ抗体の開発から、思わぬ発見因子を 取り出すことにある。

例えば、当業界で現在既知のものを使用して、インターナルイメージまたは非− インターナルイメージ抗体（Ａｂｌ抗体との反応性によってのみ選択した抗体） を投与すれば、サプレッサーＴ細胞を活性化する患者の調節循環が刺激されるの で、抗−腫瘍免疫が弱められる。他の疾患の自己免疫では、サプレッサーＴ細胞 の活性化はそめ免疫システムによって正常組織の破壊を阻害するので、患者にと って好都合である。このことは、調節イディオトーブが抗−イディオタイプ免疫 療法の結果を決定する上で重要な役割を担っているという上記の考えから、明白 である。従来技術では、疾患の進行度または回復度と相関し、かつ疾患経過およ び治療の介入によって誘発されるイディオトープの生物学的効果を、患者の利便 のために、同定、制御することが現在でも教示されていない。本発明の他の目的 は、現在の方法の欠点に対処し、抗−イディオタイプ免疫療法において所望の有 益な免疫応答をより確実に誘発する方法を提供するこ本発明は、癌、感染症およ び自己免疫疾患、アレルギーまたは移植拒絶の選択的抗−イディオタイプ治療ま たは予防に関する。抗−イディオタイプ物質の選択は、このような物質を、疾患 の進行または回復に関連した患者イディオトープ（本明細書では、「予後徴候イ デイオトーブ（ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　１ｄｉｏｔｏｐｅｓ）ｊと命名する）に 対して経時的にスクリーニングすることに基づく。同様に、イディオトーブまた は抗−イディオトープを調節ネットワークの一部として認識するＴヘルパー細胞 は、疾患の進行または回復期にその頻度（ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）および活性に変 化を受ける。特定の疾患に対する免疫応答に関連した抗体のイディオトーブ、ま たはＢ−もしくはＴ−細胞レセプターを検出することは、既述のように、免疫療 法にとって合理的かつ有効な方法の有用な補助手段である。この選択により、疾 患に対する宿主免疫応答に関連したイディオトープを、その疾患に対する宿主の 免疫を援助するような特別な態様で処理できるようになる。

本発明は、癌、感染症、自己免疫疾患、アレルギー、または移植拒絶の患者の血 清、血液または組織中のある種のイディオトープの発現性とこれらの障害に打ち 勝つ宿主の能力との相関関係を認識することに関する。このようなイディオトー プの発現は、一群のモノクローナル抗−イディオタイプ抗体によってモニターさ れる。本発明はまた、このような抗−イディオタイプを診断、モニターおよび免 疫療法に使用することに関する。本発明者らは、疾患変調に有用なイディオトー ブが有効な抗−イディオタイプ抗体（本明細書では、これらの抗体を「変調（ｍ ｏｄｕｌａｔｏｒｙ）抗−イディオタイプ抗体」と命名する）の治療適用によっ て産生されることを見いだした。本発明者らは、このような変調抗−イディオタ イプ抗体、ならびにそれらの調製法およびそれらの疾患診断、モニター、予防お よび治療への使用法を開示し、特許請求するものである。

変調抗−イディオタイプ抗体は、次のようにして能動および受動免疫療法に使用 することができる。まず、イディオタイプを担う抗体（Ａｂｌ）を生成させるか 、または獲得する。次に、癌、感染原もしくは自己免疫疾患標的抗原、アレルゲ ン、もしくは移植片抗原と反応する、少なくとも１つのイディオタイプを担うＡ ｂｌまたはＴ−細胞を以後のスクリーニングのために選択する。次いで、Ａｂｌ またはＴ細胞レセプターに対する少な（とも１つの抗−１ｄ（Ａｂ２）をｍ製す る。この時点で、調製された抗−ｉｄ群（Ａｂ２Ｓ）をスクリーニングする。こ れら抗−ｉｄ群（Ａｂ２ｓ）を各々、統計学的に有意なパネル患者の血清、血液 または組織中に存在するＢ−またはＴ−細胞イディオトーブ、あるいは単一の患 者または動物の血清、血液または組織中に発現するイディオトープのいずれかに 関してスクリーニングすればよい。いずれの場合でも、このスクリーニングの目 的は、イディオトープレベルと、ｉ）疾患の存在もしくは進行度、またはｉｉ） 疾患の不存在もしくは回復度のいずれかとの相関関係を確認することである。最 後に、１）通常は疾患の回復に伴って低下するイディオトーブの抑制、２）通常 は疾患の回復に伴って上昇するイディオトーブの刺激、３）通常は疾患の進行に 伴って低下するイディオトーブの刺激、または４）通常は疾患の進行に伴って上 昇するイディオトーブの抑制のいずれかを誘発する抗−１ｄ（Ａｂ２）またはそ の組合わせ物（Ａｂ２ｓ）を投与する。これら本発明に係る方法および変調抗− イディオタイプは、他の抗−１ｄ１および非−抗−ｉｄ免疫療法または他の治療 と併用することができる。

さらに、本発明は、疾患を診断、モニター、および／または予防するために行う ことができる。例えば、本発明を利用して、臨床的に適切な、または予後徴候イ ディオトープに対する抗−イディオタイプのパネルを生成させることができる。

なかんずく、本発明の方法により、生成される患者イディオタイプのプロフィル に応じてＡｂ２を投与し、癌または自己免疫または感染症またはアレルギーまた は移植拒絶を予防あるいは阻害することができる。

図面の簡単な説明 第１図は、予後徴候イディオトープＤｌｌの発現性の対時間グラフである。

第２図は、予後徴候イディオトーブの反応性パターンが仮説患者（実施例１にお ける患者スミス）においていかに呼瘍発現と相関しているかを示すグラフである 。第２図は、腫瘍マーカーである癌−胎児性抗原（ＣＥＡ）の血清レベルによっ て分かるイディオトーブと腫瘍の負荷を時間に対してプロットしたものである。

ディオド−プレベル、および動物生存性とのそのポジティブ相関を示すグラフで ある。垂直方向の実線はマウスの死亡時間を示す。

第４図は、２Ｆ１０予後徴候イデイオトープレベルと、サイクロフォスフアミド （本明細書ではｒｃｙＪと呼ぶこともある）で処置した腫瘍保持マウスの生存性 との相関を示すグラフである。

第５図は、抗−ｉｄとサイクロフォスフアミドとの併用治療を施した動物におい て腫瘍の増殖性を減少させるために投与する抗−１ｄ抗体の投与量を増加させた 場合の有益な効果を示すグラフである。

ＤＢＡ／２マウスのグループ群には、１０，０００個の生Ｌ１２１０／Ｇ　Ｚ　 Ｌｌｌｌ瘍細胞を皮肉注射し、３日目にサイクロフォスフアミ）’　（８０ｍｇ ／ｋｇ）を投与し、７日月に食塩水を、または予後徴候イディオトープ２Ｆ１０ と反応してそれを刺激するような抗−イディオタイプ抗体である抗−２Ｆ１０を 種々の投与量で静脈内投与した。

触診によって腫瘍の様相をモニターした。

好ましい態様の雪細な説明 Δ−恵鳳 本明細書および請求の範囲で使用する用語を以下のように定義する： 受動免疫療法：抗体を投与すること。患者または動物への抗体の受動移入。

能動免疫療法：患者または動物における抗体および／またはＴ細胞反応の誘導。

抑制：免疫応答の阻害またはイディオタイプ応答の発現の阻害。

刺激：免疫応答の誘導またはイディオタイプ応答の発現の誘導。

腫瘍退縮：腫瘍の３０％以上の全体にわたる減縮。

予後徴候イディオトープ：疾患の進行度に応じて経時的に増加または減少するか 、または疾患の回復度に応じて経時的に増加または減少する抗原結合性、または 抗体もしくはＢ−もしくはＴ−細胞レセプターの調節イディオトーブ。

変調抗−イディオタイプ抗体：生体内において予後徴候イディオトープレベルを 刺激または抑制するのに使用できる抗−イディオタイプ抗体。

本明細書で引用している文献はすべて本発明に包含される。

Ｂ、序論 最近、腫瘍保持マウスの血清中のイディオトーブの発現性は腫瘍に対するその宿 主の寛容性と相関していことが、動物腫瘍系において観察された。特定のイディ オトーブは進行性増殖腫瘍を有する動物では高い血清レベルを示し、１瘍を拒絶 している動物では、低いか、または存在していないレベルであった。同様の相関 関係が、膿瘍寛容性を誘導するか、または誘導しない抗−イディオタイプ抗体で 接種した動物に観察された。第１図では、２つのグループのマウスを、抗−腫瘍 Ａｂｌと反応するモノクローナル抗−イデイオタイプ抗体（抗−３Ａ４または抗 −２Ｆ１０）で免疫した。２週間後、これら両グループに生腫瘍細胞を投与した 。抗−３Ａ４で免疫した動物では、加速された１瘍増殖、および予後徴候イディ オトーブＤ１１の高い血清レベルが示された。他方、抗−２Ｆ１０で免疫した動 物では、遅延した腫瘍増殖、および予後徴候イディオトーブＤ１１の低い血清レ ベルが示された。Ｄｌｌ予後徴候イディオトープレベルは、抗−腫瘍Ａｂｌ上の イディオトーブを認識するモノクローナル抗−イディ・オタイプ抗体である抗− Ｄｌｌを使用して測定した。

予後徴候イディオトープＤｌｌの量はμｇ／πＣ血清の単位で表している。

本明細書において、本発明者らは、（ｉ）疾患の進行に伴って経時的に増加する ことが示され得る、および／または疾患の回復に伴って経時的に減少することが 示され得るイディオトープを抑制すること、および／または（ｉｉ）疾患の回復 に伴って経時的に増加することが示され得る、および／または疾患の進行に伴っ て経時的に減少することが示され得るイディオトープを刺激することが有益であ ることを開示するものである。

Ｃ１方法 最初の工程は、腫瘍または疾患に対する患者（または動物）の応答に関連したイ ディオタイプ成分の同定である。これは、幾つかの当業界既知の方法によって実 施されるであろう。例えば、ランプ（Ｒａｐｐ）らのＣａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　 、　４３：２５９２（１９８３）、およびウィソトナ−（Ｗｉｔｔｎｅｒ、　Ｍ 、　Ｋ、　）　；のＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、　１２８：５９５（１９ｇ２） を参照（これらも本明細書に包含される）。例えば、抗体（Ａｂｌ）またはＴ細 胞を、業者から入手した相当する腫瘍または疾患抗原と特異性を示す患者または 実験動物から、あるいは当業界で通常行われている方法によって入手する。本発 明の目的では、Ａｂｌは、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体のいずれで もよい。ポリクローナル抗体は、リアル（Ｒｅａｌ、　Ｆ、’Ｘ、　）らのＪ、 Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　１６０：１２１９（１９８４）および実験免疫学の手引書［ ワイアー（Ｗｅｉｒ、　Ｄ、　Ｍ、　）らｉ、　１９８Ｂ］　（以下、本明細書 では「手引書」と称する）に記載されているように、患者または動物の血清から 単離することができ、また固定疾患関連抗原を使用してアフィニティー精製する ことができる。モノクローナル抗体は、患者の末梢Ｂ細胞、または相当する疾患 関連抗原に対して感作することのできる他のあらゆるＢ細胞、例えばリンパ節、 肺臓もしくは骨髄由来のＢ細胞を利用し、（インビトロ刺激法を使用すると否か とに拘わらず）、当業界の常法［上述の手引書、キャロル（Ｃａｒｒｏｌ、　Ｌ 　Ｌ、　）のＪ、　Ｉｎｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、　、　８９：６１（１９８６ ）参照］によって、標準的な体細胞ハイブリダイゼーシヨンリスキニ−融合（リ スキー−融合（ｒｅｓｃｕｅ　ｆｕｓｉｏｎ））により生成することができる。

ポリクローナルおよびモノクローナル抗体はさらに、腫瘍、腫瘍エキスまたは疾 患関連抗原または感染症ワクチンを接種したヒト被験者または実験動物から、既 述の方法によって生成することができる。相当する疾患関連抗原に特異的なＴ細 胞は、スロピン（Ｓｌｏｖｉｎ。

Ｓ、　Ｆ、　）らのＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、　１３７：３０４２（１９１１ ６）に詳細に記載されているように、末梢血、リンパ節、肺臓または他の組織か ら入手可能な利用し易いりンバ球からクローンすることができる。腫瘍または疾 患関連抗原と反応するこれらのＡｂｌ抗体またはＴ細胞は、モノクローナル抗− イディオタイプのパネルを調製するための免疫原として使用することができる。

抗体に関する適切な方法については、ＲａｙｃｈａｄｈｕｒＬ　Ｓ、らのＪ、　 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、　１３７：１７４３（１９８６）を、Ｔ細胞に関する方法 については、ニードル（Ｅｒｔ　ｌ、　Ｈ，Ｃ，）らのＪ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　 １５９：１７７６（１９８５）を参照。抗−１ｄ（Ａｂ２）は、Ｒａｙｃｈａｄ ｈｕｒｉ、　Ｓ、らのＪ、　１ｍ１１ｕｎｏ１．　、１３７：１７４３（１９８ ６）に詳細に記載された当業界の常法によって、インターナルイメージおよび非 −インターナルイメージイディオトーブの発現性に関して特性化されるであろう 。

第２の工程は、患者の血清もしくは末梢血または組織を、抗−イディオタイプの パネルと反応するＢ−またはＴ−細胞イディオトーブの存在および不存在に関し てスクリーニングすることである。即ち、モノクローナル抗−１ｄ（Ａｂ２）各 々の反応性は、血清およびリンパ球イディオトープおよびそれらの反応性レベル を規定するものである。イディオトープ血清のスクリーニングは、ラジオイムノ アッセイ、酵素結合イムノアッセイ、またはＲａｙｃｈａｄｈｕｒｉ、　Ｓ、ら のＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、　１３７：１７４３（１９８６）に詳細に記載さ れたそれらと同等の検定法を利用して実施できるであろう。簡単に言えば、被検 血清中のイディオトープ（Ａｂｌ　ｉ　ｄ）の温間を測定するため、ポリビニル クロリド平板を、異なる分子量のモノクローナル抗−イディオタイプ抗体２００ −４００ｎｇで、４°Ｃで一晩被覆する。この平板をリン酸緩衝化食塩゛水で２ 回洗浄した後、１％ウシ血清アルブミンで１時間ブロックする。その後、得られ た平板を、異なる希釈度の被検血清、または既知のＡｂｌ抗体標準物、および２ ０．　ＯＯＯｃｐｍの１２５−Ｉラベル化Ａｂｌと共に、４°Ｃで一晩インキユ ベートする。

得られた平板を洗浄し、ガンマ−カウンターでカウントする。

末梢血または組織リンパ球イディオトーブの発現性は、コーラ−（Ｋｏｈｌｅｒ 、　Ｈ，）らのサイエンス１８６：６４３（１９７４）に記載された通常の免疫 蛍光法、または上述の手引書に記載された通常の免疫組織化学的方法によって検 定することができる。簡単に言えば、免疫蛍光法では、単核細胞フラクションを Ｆｉｃｏｌｌ−（Ｒファルマシア・ファイン１ケミカル）Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｒ％ １ｎｔｈｒｏｐ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）密度勾配遠心によって精製する。

次いで、得られた細胞を、種々のモノクローナル抗−１ｄ（Ａｂ２）および対照 抗体と共にインキュベートする。

この細胞を洗浄した後、適当な蛍光色素でラベルした第２抗体と共にインキュベ ートする。次いで、ＴＩｆｌ胞のバーセンテイジを、サイトフルオログラフまた は蛍光顕微鏡のいずれかによって検定する。

患者は、疾患初期の診断時に、抗−イディオタイプパネルを使用してモニターす る。各抗−イディオタイプ抗体に関しては、血清および／またはりンバ球イディ オトーブとの反応性レベルを時間に対してプロットし、疾患の進行または回復と の相関関係を算定する（以下参照）。

第３工程は、血清またはリンパ球イディオトープの発現性と疾患状態との相関関 係を確立することである。イディオトーブ発現性と疾患状態との相関関係は、既 述のように、（ｉ）診断時に得られた標本、（ｉｉ）完全な、または部分的な疾 患の予防または回復を招来する予防的または好成績の治療（外科療法、化学療法 、放射線治療、免疫療法、接種療法など）の前、間および後に得られた標本、（ ｉｉｉ　）疾患進行期に得られた標本、（ｉｖ”）疾患の無い正常個体、由来の 血清およびリンパ球を分析することによって算定する。疾患の存在または進行と 相関するか、または疾患の不存在、回復または予防と相関する血清およびリンパ 球イディオトーブ（即ち、予後徴候イディオトーブ〉を同定する。

第４の工程は、抗−イディオタイプを、能動または受動免疫療法のいずれかのた めに選択することである。本発明では、（１）疾患の不存在または回復または予 防に伴って増加するか、または（２）疾患の進行に伴って減少する患者の血清ま たはリンパ球予後徴候イディオトーブと結合する抗−１ｄ（Ａｂ２）を能動刺激 免疫に使用する。

さらに、本発明では、疾患の存在または進行に伴って増加するか、または（２） 疾患の回復に伴って減少する患者の血清またはリンパ球イディオトープと結合す る抗−ｉ　ｄ　（Ａｂ２）を抑制免疫療法に使用する。ある種の抗−ｉｄを投与 すると、有益な治療効果を発揮することが認められる。また、治療効果を有さな いものもあり、それらは生体内では使用されないであろうが、しかし、それらの 血清イデイオトープとの反応性を測定することは、疾患の診断およびモニターに は有用である。

あるいは、疾患の進行に伴って増加するこれらのイディオトーブを担う抗体を能 動免疫に利用すれば、能動的抑制を誘導すること（即ち、抑制する抗−イディオ タイプを誘導すること）ができる。これらのイディオトープを担う抗体は、固定 化抗−イディオタイプ抗体を使用する当業界における常法である抗−イディオタ イプアフィニティークロマトグラフィ−（上述の手引書参照）、または進行性疾 患に罹患した患者由来および当業界で開示または入手可能な幾つかの適当な融合 パートナ−セルライン由来のＢ−リンパ球を使用するりスキニー融合によって血 清から単離される。上述の方法の原理は、有益な免疫応答を増強させるための能 動免疫化物質として使用され、また有害な免疫応答を抑制するのに使用されるイ ディオトーブを担う種々の抗体の中から１つを選択することである。この選択に とって必須の情報は、血清、血液および組織イディオトープレベルをモニターす るための上述の検定法を使用して患者の血清およびリンパ球をイディオタイプパ ネル分析することによって入手されるであろう。さらに、適切な抗−イディオタ イプ療法を選択する上でそれろを適用することに加え、留意すべきことは、ある 種の血清およびリンパ球イディオトープレベル検定によって、臨床経過が予測で き、また、それを診断およびモニター検定に利用することで、患者の予後を評価 し、さらに抗−イディオタイプの開始、強化もしくは中止、または他の治療の介 入を決定する指標とすることができる。

Ｄ、変法 リス牛ニー融合［Ｃａｒｒｏｌ、　Ｗ、　Ｌ、らのＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔ ｈ、　８９：６１（１９８６）：：によって入手可能な、またはアフィニティー 精製［Ｒｅａｌ、　Ｆ、　Ｘｌ、　Ｊ、　ＥＸｐ、Ｍｅｄ、　１６０：１２１９ （１９８４）コを利用して単離できる、疾患経過の種々の時点、例えば患者が緩 解状態にある時、または疾患進行期にある時などの時点におけるＴ細胞イディオ トープ：５ｌｏｖｉｎ、　Ｓ、　Ｆ、らの」Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３７：３０４２ （１９８６）、Ｅｒｔｌ、Ｈ，Ｃ，らのＪ、　ＥＸＰ、　Ｍｅｄ、１５９：１７ ７６（Ｉｎ２）、　Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ、Ｓ、らのＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 　１３９：２０９６（１９８７）：　、またはＡｂｌを使用することが必要であ るかもしれない。あるいは、受動免疫療法においてＡｂ２抗−イディオタイプモ ノクローナル抗体のパネルを調製するのに使用した、未だに存在するモノクロー ナルまたはポリクローナル抗体（Ａｂｌ）を使用することもできるであろう。

さらに、Ａｂ２抗−イディオタイプ抗体は、リスキー−融合、またはアフィニテ ィー精製（本バラグラフの引用文献参照）によって、存在するモノクローナルま たはポリクローナル抗体（Ａｂｌ）で治療、または他の療法で治療された患者ま たは動物からも入手可能である。

疾患状態に関連したイディオトーブを同定するのに有用である他の方法は、それ らを罹患患者の血清から、免疫グロブリンフラクションを使用し、固定化抗−免 疫グロブリンの襟章的なアフィニティークロマトグラフィー法で精製することで ある（上述の手引書参照）。

Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ、　Ｓ、らのＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７：１７４ ３（１９８６）に記載されたマウスにおけるヒト免疫グロブリンのアイソトープ 決定基に対する寛容性の創製（従来技術として記述した）調製のように、これら の免疫グロブリンは、抗−ｉｄ　（Ａｂ２）を調製するのに使用できるであろう 。（上述の手引書参照）。この方法は、寛容化工程が無くても行うことができる 。抗−ｉ　ｄ　（Ａｂ２）が得られたならば、それを、セクションＣ１方法、工 程３に記載したように、種々の疾患状態（進行性疾患、回復性疾患、正常の個体 ）の個体由来の血清試料のパネルに対してスクリーニングする。

本発明では、異種（ｘｅｎｏｔｙｐｉｃ）、アイソタイプ、またはアロタイプの 決定基と交差反応しない代表的抗体のパネルに対して試験することによって、す べての抗−１ｄ（Ａｂ２）が証明されるであろうと理解される。この目的のため の検定は、当業者であれば容易に実施することができ、この目的のための有用な 検定は、上述の手引書に記載されている。

抗−４ｄの治療的使用を説明するため、本発明者らは、マウスにおける予後徴候 イディオトープ２Ｆ１０の血清レベルをモニターシた。まず第１に、５匹のマウ スの予後徴候イデイオトーブ２Ｆ１０の安定状態のレベルを測定した。各マウス 毎に、１００％の内部標準を確立した。０８目に、マウスに１０００個の生Ｌ　 １２１０／ＧＺＬ腫瘍細胞を注射した。その後、各マウス毎にイディオトープ２ ＦＩＯレベルをモニターした。番号付したマウス１１２、および３ては（第３図 に示している）、イディオトーブ２Ｆ１０のレベルが最初は抑制された。数日後 には、２Ｆ１０イデイオトープレベルは開始レベルの１００％よりも少なくなっ た。番号４および５のマウスでは、イディオトープレベルは最初減少したが、そ の後、増加した。予後徴候イディオトープ２Ｆ１０が低いレベルで維持していた ３匹のマウス（マウス１．２および３）は１１−１４日後に死亡した。予後徴候 イディオトープ２Ｆ１０が内部標準１００％以上の増加を示したマウス４および ５は、それぞれ１９日問および２９日間以上生存した。従って、個々のマウスの 予後徴候イディオトーブ２ＦＩＯレベルが増加することは、これらマウスの呻瘍 耐用能と相関しており、さらに２Ｆ１０レベルを増加させる治療介入は腫瘍保持 動物の生存性を増大させるであろうと、結論付けるれる。

さらに、サイクロフォスフアミドで処置したマウスを用い、予後徴候イディオト ーブ２Ｆ１００発現性をモニターした。０日時に、マウスに生Ｌ１２１０／ＧＺ Ｌ腫瘍細胞１０００個を注射し、その後２Ｆ１０イデイオトープレベルをモニタ ーした。腫瘍細胞の移植後１７７日目、８０ｍｇ／ｋｇ体重サイクロフォスフア ミドをマウスに注射し、その１７７日目、２Ｆ１０イデイオトーブの各マウス内 レベルを任意に１００％と設定した（第４図参照）。イディオトープ２Ｆ１０レ ベルを全期間にわたってモニターした。第４図に示したケースでは、マウス１お よび３０予後徴候イデイオトーブ２Ｆ１０レベルはサイクロフォスフアミド処置 後に増加した。第４図におけるマウス２．４および５では、予後徴候イディオト ープレベルは、サイクロフォスフアミド処置後でも同じか、または減少した。サ イクロフォスフアミド処置後に予後徴候イディオトープ２Ｆ１０レベルが増加し たマウスｌおよび３は、腫瘍移植後４５日間生存した。

サイクロフォスフアミド処置後に予後徴候イディオトーブ２Ｆ１０レベルが同じ であったか、または減少したマウス２．４および５は、腫瘍移植後４５日以内に 死亡した。この実験は、治療を施した患者または動物でモニターした特定のイデ ィオトーブの予後の値を示している。イディオトーブ２Ｆ１０の予後の値の対照 値として、非関連イディオトーブの発現性をモニターした。この結果により、非 関連イディオトープ評Ｆ６−ｓ」、ホスホリルコリン免疫応答に関連するイディ オトーブ］を同一の個々のマウスでモニターしても生存性との相関が認められな いことがわかった。

さらに、腫瘍保持マウスを使用し、変調抗−イディオタイプである抗−２Ｆ１０ （予後徴候イディオトーブ２Ｆ１０と結合する抗−イディオタイプ抗体）の治療 効果を評価した。５匹のマウスのグループ群に、０．１〜１０００μｇ／ｋｇ体 重の種々の投与量で抗−２ＦＩＯを静脈内注射した。マウスの生存率は、抗−２ Ｆ１０の投与ｊ１５０μｇ／ｋｇ体重に最も高い生存率として認められた７１７ 日間８０％生存率、２０日間６０％、２８日間４０％、４５日８Ｏ％］。

抗−２Ｆ１０の投与量をもっと低く、またはもっと高くした場合の生存率は、前 記の各時点と比較してそれぞれ低率であった。例えば、処置投与量０．１μｓ／ ｋｇ体重、および１０００μｇ／ｋｇ体重では、マウスは１７日以上生存しなか った。

抗−ｉｄおよびサイクロフォスフアミドの併用療法がそれぞれ単独の療法よりも 優れていることを証明するため、さらに実験を行った。本実験では、予後徴候イ ディオトーブ２Ｆ１０レベル、およびサイクロフォスフアミドと抗−２Ｆ１０抗 体とで処置したマウスの生存性をモニターした。予備試験として腫瘍細胞を注射 した。１７７日目、各マウスでイディオトープ２Ｆ１０レベルが安定した後、サ イクロフォスフアミド（８０ｘｇ／ｋｇ）を投与した。２日後、マウスに抗−２ Ｆ１０抗体１０μｇを静脈注射した。動物をサイクロフォスフアミドまたは抗− ２Ｆ１０のいずれか単独で処理した上記の実験とは対照的に、サイクロフォスフ アミドおよび抗−ｉｄの両療法を施したマウスはすべて４５日間以上生存した。

これらのマウスではすべて、２Ｆ１０イデイオトープレベルが増加していた。あ るケースでは４００％の増加が観察された。これらのデータは、抗−イディオタ イプとサイクロフォスフアミドとの、＠瘍に対する併用処置が、これらいずれか の単独処置よりも優れていることを証明するものである。

他の実験では、サイクロフォスフアミド（８０ｙｇ／ｋｇ）と抗−２Ｆ１０との 併用療法が、養子肺癌移植後における腫瘍増殖の発生率を増大させた。ＤＢＡ／ ２マウスのグループ群に生Ｌ１２１０／ＧＺＬＩＷ瘍細胞１０．０００個を皮肉 投与した：３３日目サイクロフォスフアミド（８０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、７日 目に食塩水または異なる投与量の抗−２Ｆ１０もしくは食塩水を静脈内注射した 。触診によって腫瘍の様相をモニターした。

抗−２Ｆ１０で処置したすべてのグループは、食塩水を注射した対照グループと 比較して、腫瘍移植後３００日目は腫瘍増殖の発生率が低かった。腫瘍移植後１ ５日では、より高い抗−２Ｆ１０の投与量で処置した動物群のいずれにおいても 腫瘍は検出されなかった（第５図）。このように、抗−ｉｄの投与量を増加させ ることは、腫瘍増殖を減少させる上で有用であった。当業者であれば、理解でき るであろうが、イディオトーブの刺激は、（１）能動免疫、例えば免疫原を、担 体および／またはアジユバントの存在下または不存在下に、筋肉内、皮下、皮肉 または腹腔内投与するか、または（２）アジユバントまたは担体の不存在下に、 抗体を低用量で静脈内投与する、ことによって実施することができ、さらにイデ ィオトープの抑制は、アジュバントまたは担体の不存在下に、高用量の抗体を静 脈内または腹腔内投与する、受動免疫療法によって実施することができる。

このように、最良の治療法は、臨床的経過と相関することが知られているイディ オトープのレベルを適切に調節する方法であることを、上記の実験は示唆してい る。上記の特定の実験から分かるように、サイクロフォスフアミドと抗−ｉｄと の併用療法を施したマウスでは、抗−腫瘍効果および生存性と相関する予後徴候 ２Ｆ１０イデイオトープレベルの増加が認められた。他の場合、抗−ｉｄ処置単 独、または他の処置モダリティ−を併用する抗−ｉｄ処装によって、相当する予 後徴候イディオトープレベルとその後の臨床的成績とを変調する効果としては同 等、またはそれよりも優れた成績を収めることがてきる。これらすべての場合に おいて、一連の患者の血清、血液または組織の予後徴候イディオトープレベルを 経時的に測定すれば、疾患の進行または回復と相関する予後徴候イデイオトープ レベルを適切に変調させる治療法が特定される。上記のデータは、本発明の方法 を使用して特定した抗−イディオタイプ抗体である抗−２Ｆ１０が腫瘍の治療に 有用であることを示すものである。抗−２Ｆ１０とサイクロフォスフアミドで処 置した腫瘍保持マウスは、増大した生存性を示した。サイクロフォスフアミドを 単独で使用しても、５匹の動物のうち２匹しか４５日以上の延命に成功しなかっ たが、抗−２Ｆ１０抗体をサイクロフォスフアミドと併用して投与した場合、試 験した５匹の動物すべてが腫瘍移植後４５日以上生き続けた。

予後徴候イディオトーブの血清レベルに関連した本明細書に記載の方法はさらに 、予後徴候イディオトープを担うＴ−細胞を使用しても実施することができる。

この方法では、末梢血Ｔ−細胞、造血組織Ｔ−細胞、または特異的イディオトー ブを担う他の組織Ｔ−細胞の頻度（ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）（割合）を常法によっ て測定する［Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ＋　Ｓ、らのＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３ ９＋２０９６（１９ｇ？）、５ｌｏｖｉｎ、　Ｓ、　Ｆ、らのＪ、　ｌａ＋ｍｕ ｎｏｌ。

１３７＋３０４２（１９８６）、Ｅｒｔ　１．　Ｈ，Ｃ，らのＪ、Ｅｘｐ、Ｍｅ ｄ、１５９：１７７６（１９８５）３゜これらイディオトープ陽性Ｔ−細胞のレ ベルは、１）腫瘍抗原、または腫瘍抗原と反応する抗体、または２）自己免疫に 関連する組織抗原、またはこれらの自己抗原と反応する抗体、または３）感染性 病原体によって発現される抗原、またはこれらの感染原と反応する抗体、または ４〉アレルゲン、またはこれらのアレルゲンと反応する抗体、または５）移植抗 原、またはこれらの移植抗原と反応する抗体、または６）これら１）から５）ま でのいずれかに記載の抗原反応性抗体から誘導される抗−イディオタイプ抗体を 使用して、上記の引用文献に記載されているように測定することができる。次い で、これらイディオトープ特異的Ｔ−細胞の頻度を経時的に調査し、疾患の進行 および回復と相関するＴ−細胞イディオトープを同定する。次いで、以下の１） から４）のいずれかの能力に基づいて、治療介入を選択するか、または計画する ：Ｉ）疾患の回復に伴って通常は減少する抑制イディオトーブ、２）疾患の回復 に伴って通常は増加する刺激イディオトーブ、３）疾患の進行に伴って通常は減 少する刺激イディオトープ、または４）疾患の進行に伴って通常は増加する抑制 イディオトーブ。

ヘルパーニー細胞を認識する特定のイディオトーブのレベルは、腫瘍増殖の進行 または回復と相関していることが証明された。例えば、抗−Ｌ１２１０／ＧＺＬ 腫瘍抗体２Ｂ２との反応性によって規定されるイディオトープを発現するＴヘル パー細胞の頻度（割合）は、２Ｂ２イデイオタイプ陽性ヘルパーＴ−細胞の低い 頻度の、保護抗−イディオタイプ抗体２Ｆ１０で前免疫した（既述のように皮下 投与で）動物と比較して、非保護抗−イディオタイプ抗体３Ａ４で皮下投与で免 疫した動物で増加した。得られた結果を以下の第１表に示す。

第１表 腫瘍保持動物を次のもの　２Ｂ２イデイオトーブ陽で前もって免疫する　性Ｔヘ ルパー細胞の頻度腫瘍状態　リンパＥＴ−Ｅ胞（１０’）半ｆ、り抗−ｉｄ　３ Ａ４　進行　５００ 抗−ｉｄ　２Ｆ１０　回復　６６ Ｆ、仮説患者の処置 以下に、４人の仮説患者の処置について説明する。最初の患者（実施例１の患者 スミス）は、予後徴候イディオトーブに対する抗−イディオタイプの初期出現期 に、採用すべき方法を代表するものである。第２の患者（実施例２の患者ジョー ンズ）は、臨床的に適切な予後徴候イディオトープに対する抗−イディオタイプ のパネルを生成させた後に処置する例を代表するものである。実施例２に記載し た治療法における投与量、投与経路、および製剤およびモニター法は、実施例１ の患者スミスの治療法に同様に適用することができる。

実施例１は、広いパネルからなる予後徴候イディオトーブをいかに同定するか、 またいかに第一に調製するか、を詳細に記載している。

重要なパネルのデータには、標的疾患に罹をした少なくとも数百の患者、および 健康な個体からなる対照群、および他の疾患の患者を分析することが必要であろ う。

実施例１゜患者スミス スミス氏を、結腸直腸癌について診断した。選択した処置は、その腫瘍の外科的 切除であった。手術前に、血清試料を入手して寒冷保存し、さらに末梢白血球細 胞を寒冷保存し、リンパ節バイオプシーまたは外科的に切除したリンパ節を入手 して寒冷保存する。細胞生存性を維持するための常法に従って、すべての寒冷保 存細胞を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中、液体窒素を用いて凍結させる 。これらの検体を使用すれば、結腸直腸癌腫関連抗原と反応する抗体（Ａｂｌ抗 体）が得られるであろう。

次の工程として、Ａｂｌ抗体を利用し、抗−ＩｄＡｂ２を生成させる。結腸直腸 癌腫と反応するＡｂｌを得るには、幾つかの方法を採用し得る。結腸直腸癌腫と 反応する患者血清由来の免疫グロブリンは、当業者に通常実施されている方法、 例えばＲｅａｌ、　Ｆ、　Ｘ、らのＪ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　１６０：１２１９（ １９８４）、および上述の手引書に記載されているように、固定化唾瘍エキスを 使用したアフィニティークロマトグラフィーによって入手できる。さらに、患者 の腫瘍排液性リンパ節は、体細胞ハイブリダイゼーションリスキ−融合に使用す ることができ、次いで上述の手引書に記載されているように、得られた抗体は、 腫瘍セルラインまたは組織に対する反応性に関してスクリーニングする。これら 体細胞ハイブリドーマＡｂｌ抗体の生成、および特異的スフ１ノーニング法は、 当業者では常法によって行うことができる。

上述の手引書参照。さらに、Ａｂｌポリクローナルおよびモノクローナル抗体は 、当業界で通常行われている方法によって、結腸直腸腫瘍関連抗原に対する特異 性を有した動物において生成させることができる。

これらの方法のいずれかによって産生されるＡｂｌ抗体は、Ｒａｙｃｈａｕｄｈ ｕｒｉ、　Ｓ、らのＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３γ：１７４３（１９８６）に記 載されている常法によって、Ｂａ１ｂ／ｃマウスに抗−イディオタイプモノクロ ーナル抗体を生成させるのに使用することができる。これらの抗−ｉｄ抗体を、 対応するＡｂｌとの反応性、および異種型およびアロタイプおよびアイソタイプ 対照抗体との反応性の不存在に基づいて選択した［セクションＣ８方法に既に記 載し、さらにＲａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ、　Ｓ、らのＪ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７：１７４３（１９８６）に記載されているＲＩＡまた はＥＬＩＳＡ検定を使用した］。

患者スミスから診断用に１２力月間にわたって採取した血清試料を、種々の抗− イディオタイプモノクローナル抗体（Ａｂ２ｓ）との結合性に関して検定した［ セクションＣ１方法に記載し、さらにＲａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ、　Ｓ、らのＪ 、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７：１７４３（１９８６）に記載されているイディオ トープモニターリング検定を、当業者が通常実施するように使用した］。種々の 抗−１ｄｓ（Ａｂ２ｓ）を使用して血清試料をスクリーニングした。２つの抗− イディオタイプが、経時的に、相補性血清イディオトーブに対する異なった結合 性レベルを示した。これらの予後徴候イディオトープレベルが、腫瘍マーカー、 例えば癌胎児性抗原（ＣＥ　Ａ）の血清レベルによって、および／または肝にお ける腫瘍転移を検出する物理的検査もしくはＸ線検査によって測定される腫瘍重 圧と相関した（イディオトーブ１は逆比例でうり、イデイオトーブ３は正比例で あった）。手術後の最初の年の最後までに、予後徴候イディオトープｌは高い血 清レベルに達したが、予後徴候イディオトーブ３は非常に低かった。手術後２年 目の中頃までには、Ｘ線計算機体軸断層撮影（ＣＡＴ）スキャンおよびＣＥＡレ ベルが腫瘍の再発を示した。この時点におけるイディオタイプパネル分析は、予 後徴候イディオトープｌの低下、および予後徴候イディオトーブ３の上昇を示し た（第２図参照）。

疾患の進行と予後徴候イディオトーブ３の増加とは明らかに相関しており、また 疾患の回復と予後徴候イディオトーブ１の増加とは明らかに相関しているので、 予後徴候イディオトーブ３の受動抗−イディオタイプ抑制のために変調抗−１６ ３を選択し、予後徴候イディオトープ１の能動抗−イディオタイプ刺激には変調 抗−１ｄｌを選択した。

患者ジョーンズに関して記載している受動免疫療法プロトコール（下記の実施例 ２参照）に従って、１力月にわたり１週間隔て患者スミスに各々５００Ｆ、ｇの 変調抗−）ｄ３（Ａｂ２）を４回静脈内注入した。１週間後、アジニバント製剤 ［これも、患者ジョーンズにかかるプロトコールを参照］中、変調抗−Ｔ　ｄｌ （Ａｂ２）を投与量５００μｇから５ｚｇで使用して（筋肉内投与（ｉｍ））能 動免疫を開始した。１０日後、同一の投与量および製剤を使用して患者をブース ター免疫した。

この受動免疫療法プロトコール期では、予後徴候イディオトープ３レベルは減少 し始め、能動免疫療法プロトフール後の予後徴候イディオトーブｌは上昇し始め た。治療が完了した後、ＣＥＡレベルは減少し始めた。ＣＡＴスキャンは改善を 示した。

この結腸直腸患者は、予後徴候イディオトーブおよび変調抗−イディオタイプ抗 体を使用した開示している免疫療法の原理を説明する実施例として、記載してい る。このことは、本方法を、結腸直腸癌または癌のみに対する使用に限定するこ とを意図するものではない。さらに、本実施例は、この開示した方法における初 期の進行段階を示している。これと同一の癌、または自己免疫疾患または感染症 またはアレルギーまたは移植拒絶に罹患した患者の多数の一群における予後徴候 イディオトープを代表し、かつ包含する変調抗−イディオタイプのパネルが調製 されるであろうと期待できる。より進行した状態における免疫療法期に採用され るべき方法の説明のために、以下に、癌、自己免疫疾患、および感染症に罹患し た他の仮説患者の実施例を記載する。

実施例２．患者ジ璽−ンズ ジ１−ンズ氏は、バイオプシーによって悪性黒色腫であることが判明した皮膚損 傷を有していることが見いだされている。選択した処置は、その腫瘍の広範な外 科的切除である。手術前に、末梢血検体を、疾患の活性および治療に対する応答 と相関することが知られている血清、およびＢ−およびＴ−リンパ球イディオト ープレベルについて分析する。これらの分析は、黒色腫患者からアフィニティー 精製して得られた抗−黒色腫抗体に対して生成される抗−イディオタイプモノク ローナル抗体を利用し、本明細書セクションＣ％ＤおよびＥに記載のように実施 される。ジテーンズ氏は、他の患者では進行性疾患活性および悪い予後と相関す ることが示されている予後徴候イディオトーブ４が高い血清レベルであることが 判明している。さらに、ジョーンズ氏では、予後徴候イディオトープ５の血清レ ヘルカ低く、また予後徴候イディオトーブ６０Ｔ−リンパ球レベルが低いことが 見いだされた。これまでの試験では、予後徴候イディオトープ５および予後徴候 イディオトーブ６の高いレベルは疾患の回復および良好な予後と相関しているこ とが示された。

腫瘍を外科的に除去した後、その患者を、疾患の進行に関連するイディオトーブ 応答を抑制するために変調抗−１ｄ４による受動免疫療法によって処置する。さ らに、疾患の回復に関連したイディオトーブ応答を増強するために、患者を変調 抗−１ｄ５および変調抗−Ｉｄ（３で免疫する（能動免疫療法）。抑制受動免疫 療法のために、ジ璽−ンズ氏に、ネズミ変調抗−１ｄ４　（５００ｚｇ）の生理 緩衝化食塩水溶液をＬ週間に少なくとも４回静脈内注入し、さらに１週間処置し て予後徴候イディオトーブ４の血清レベルを正常被験者に認められるレベルにま で減少させた。Ｌ週間後、アジニバント製剤中のネズミ変調抗−Ｉｄ５およびネ ズミ変調抗−１ｄ６　（各々０゜５ｍｇ）を使用して能動免疫を開始した。

その他のすべての週で少なく３サイクル、または予後徴候イディオトープδおよ び予後徴候イディオトーブ６０レベルが増加を示す（既述のイディオトーブ検定 （セクションＣ，ＤおよびＥを参照）を利用）まで、能動免疫物を皮下または筋 肉内投与した。シンテックス（Ｓｙｎｔｅｘ）アジュバント製剤−１（ＳＡＦ− １）　ｃアリリン（Ａｌ　ｌ　１ｓｏｎ＋　Ａ、　Ｃ，）のＢｉｏ／ｌｅｃｈｎ ｏｌｏｇｙ　５：１０４１（１９８７）を参照コまたはミョウバンアジュバント のいずれかを利用した抗−１ｄアジユバント製剤を、以下に記載のように、Ｒａ ｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ、　Ｓ、らのＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３７　：１７４３ （１９８６）の方法による抗−１６タンパク質のキーホールリンベットヘモシア ニン（ＫＬＨ）へのカップリングに従って使用した。

０．４％ｖ／ｖＴｗｅｅｎ８０　（ＲＩ　ＣＩ　アメリカ）を含有させたリン酸 緩衝食塩水に、５％ｖ／ｖプルロニックＬ１２１　（ＲＢＡＳＦ）および１０％ ｖ／ｖスクアランを加える。この混合物を激しく旋回させ、均一なエマルジョン を調製する。次いで、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−）レオニル−Ｄ−イソグルタ ミンを加え、得られたアジュバント−ビヒクル混合物を完全に混合する。この混 合物１容量を、等容量のＫＬＨ−カップリング化抗−１６の生理緩衝食塩水溶液 （２Ｊ！ｇ／１Ｉ２）に加え、手短に旋回し、完全に混合させる。各成分の最終 温間は、０，１７％Ｔｗｅｅｎ８０．２．５％プルロニックＬ１２１、および５ ％スクアランとするべきである。

ミョウバンアジュバントのためには、ミョウバンの沈澱化を以下のように行う。

抗−１６−ＫＬＨ（１，０Ｋｇ／ｉのおよびミョウバン（９％Ｗ／〜・）の各等 量を混合し、ｐ　Ｈ６，５に調節し、３０分間沈澱せしめる。得られた沈澱物を 遠心（７５０Ｘ９．５分間）によって採取し、リン酸緩衝食塩水に再懸濁して０ ．５ｘｇ／ｚ（ｌ抗−Ｉｄ−ＫＬＨとする。

患者を、上記のアジュバント製剤（総ｌ０９５から２．０Ｆｆｆ）のいずれかの 中、等重量のＫＬＨにカップリングさせた抗−イディオタイプタンパク質０．５ ｙｇから５ｘｇで免疫し、２週間後、同量の抗原を用いてブースターする。５Ａ Ｆ−１中の変調抗−１６で免疫した患者に、最初のワクチン法としてＮ−アセチ ルムラミル−Ｌ−トレオニルーＤ−イソグルタミンを投与量１．０ｘｇ投与し、 その後のブースター免疫として１．０ｘｇを投与する。

この処置プロトコールの後では、予後徴候イディオトーブ４レベルは正常限界内 であり、予後徴候イディオトープ５および予後徴候イディオトーブ６レベルは、 処置前の値よりも有意に増加した。その患者は１年間無症候を維持した。この間 に、イディオトープレベルを試験すると、予後徴候イディオトープ４レベルは増 加を、予後徴候イディオトープ５および予後徴候イディオトーブ６レベルは減少 を示した。標準的な血液化学検査により、肝酵素に異常が認められた。腹部のＣ ＡＴスキャンにより、転移黒色腫と矛盾なく肝に損傷があることが判明した。肝 バイオプシーにより、転移黒色腫を確認した。変調抗−１ｄ４による受動免疫療 法、ならびに変調抗−Ｉｄ５および変調抗−１６６による能動免疫療法の初期要 領を繰り返した。２力月後に治療を中止すると、予後徴候イディオトープ４レベ ルは正常値に回復し、予後徴候イディオトープ５および６レベルは上昇したので 、肝のＣＡＴスキャンを再度行うと、腫瘍サイズの顕著な退縮が認められた。

実施例３．患者トー トー婦人を重症筋無力症について診断した。この疾患は、主要な症状が、筋肉の 収縮に関与するアセチルコリンレセプターの抗体破壊に従属する筋肉脆弱である 自己免疫疾患である。末梢血検体を、疾患活性および治療に対する応答に相関す ることで知られている血清およびＢ−およびＴ−リンパ球イディオトープレベル に関して分析する。これらの検定は、抗−アセチルコリンレセプター抗体に対応 して生成させた抗−イディオタイプモノクローナル抗体を利用してセクションＣ ％ＤおよびＥに記載のように実施した。この抗−アセチルコリン抗体は、感作リ ンパ球を利用し、当業界の常法によってアフィニティー精製または体細胞ハイブ リダイイーシコン法を利用してヒト患者または動物から入手した。ドー婦人では 、疾患活性と正比例することが他の患者で示された予後徴候イディオトーブ７の 血清レベルが高いことが判明している。さらに、ドー婦人では、予後徴候イディ オトーブ８の血清レベルが低く、予後徴候イデイオトープ９のＴ−リンパ球レベ ルが低いことが判明している。これまでの試験によって、高いレベルの予後徴候 イデイオトープ８および９は、疾患の回復と相関することがわかっている。患者 ジョーンズに関して記載しているのと同一の受動免疫療法および能動免疫療法抗 −１ｄ７’ロトコールを用い、疾患活性に関連するイディオトープ応答を抑制す るため、ドー婦人に、変調抗−１ｄ７を使用した受動免疫療法を施す。さらに、 その患者を、疾患回復に関連するイデイオトーブを増加するため、変調抗−１ｄ ８および変調抗−１ｄ９で免疫する（能動免疫療法）。１力月後、この治療を終 了させると、患者は増加した筋肉強度に気付く。治療６力月後、患者は治療の追 跡調査に戻り、軽い筋肉脆弱の兆候を説明する。血清およびリンパ球イディオト ープのレベルを再度試験すると、疾患活性に関連する増加した予後徴候イディオ トープ、および疾患の回復に関連する予後徴候イディオトーブ８および９の低レ ベルの同一パターンが認められる。この患者を再度、既述したのと同じ受動およ び能動免疫療法プロトコールで処置すると、筋肉の脆弱が減少する。

実施例４．患者ライト ライト氏は、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）感染によって誘導された急性肝炎から 回復していた。このウィルスによって感染された一部の患者は、慢性の活動性肝 炎または肝細胞性癌腫の発病へと移行する。末梢血検体を、Ｂ型肝炎ウィルスの 感染によって誘発される疾患活動の種々の段階と相関することで知られている血 清およびＢ−およびＴ−リンパ球イディオトープレベルに関して分析する。これ らの検定は、ＨＢ　Ｖ感染によって誘発される種々の状態、即ち急性肝炎、慢性 キャリアー状態、慢性活動性肝炎、肝細胞性癌騨に関連するＡｂｌ抗体および／ またはＴ−細胞に対応して生成させた抗−イディオタイプモノクローナル抗体を 利用してセクションＣ％ＤおよびＥに記載のように実施した。ライト氏は、ＨＢ Ｖ感染個体では慢性活動性肝炎の発病と他の患者では相関することが示されてい る予後徴候イディオトーブ１０の血清レベルを高く示している。さらに、ライト 氏は予後徴候イディオトーブ１１の血清レベルが低いことが見いだされた。これ までの試験により、このイディオトープの高いレベルは、ＨＢＶ感染個体におい て慢性活動性肝炎の回復と相関することか判明した。

ライト氏は、慢性活動性肝炎の古典的兆候および症状の治療の追跡調査のために 診察を受けに来る。その際、その患者に、慢性活動性肝炎の発病または進行に関 連するイディオトーブ応答を抑制するため、変調抗−１６１Ｏで受動免疫療法を 施す。さらに、その患者を、慢性活動性肝炎の回復に関連するイディオトープ応 答を増加するため、変調抗−１ｄｌｌで免疫する（能動免疫療法）。これら受動 および能動免疫療法は、患者２のジジーンズ氏で記載したものと同一である。

ライト氏の過去の治療経過をさらに評価すると、彼は、Ｂ型肝炎と接触する数年 前にＢ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）に関して入手可能な標準的なワクチンで免疫さ れていたことが判明した。この患者の血清を分析すると、標準的なＨＢＶワクチ ンで効果的に免疫した個体の血清中に存在することが見いだされる予後徴候イデ ィオトーブ１５は存在していないことが判明した。ＨＢＶワクチンに応答して保 護免疫が固定されていない他の個体を分析することによっても、予後徴候イディ オトーブ１５のレベルは低いことが証明された。ライト氏と同様の患者を、既述 のような能動免疫療法プロトコールを使用して変調抗−１ｄ１５で能動免疫する と、保護免疫を伴って、Ｂ型肝炎ワクチンに応答するこれら患者の能力が生じる 。従って、この変調抗−１ｄ１５は、Ｂ型肝炎ウィルスに対する予防ワクチンに 混合する価値がある。

これら４人の患者の仮説治療は本発明の説明のために記載したのであって、限定 を意図するものではない。医学、免疫学、分子生物学および関連分野の当業者で あれば、癌、自己免疫疾患、および感染症、アレルギーまたは移植拒絶を診断、 モニター、治療および／または予防するために、本発明を実施することは可能で あろう。

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脚棒４ 国際調査報告 ｐｃ’ｒ７ｕｓａｓ。

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Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．患者または動物における癌、自己免疫疾患または感染症、アレルギーまたは 移植拒絶の治療または予防のための抗−イディオタイプ抗体または抗体フラグメ ントを選択する方法であって、ａ）少なくとも１つのイディオトープを担うＡｂ １またはＴ−細胞であって、癌、感染原または自己免疫疾患標的抗原、アレルゲ ンまたは移植抗原と反応する少なくとも１つのレセプター手段を有する該Ａｂ１ または該丁−細胞を選択し、 ｂ）Ａｂ１またはＴ−細胞のいずれかのレセプター手段のイディオトープに対す る、少なくとも１つの抗−イディオタイプ抗体を調製し、 ｃ）患者の血清または組織中のＢ−またはＴ−細胞イディオトープに対する抗− イディオタイプ抗体（群）各々をスクリーニングすることによって、疾患の進行 と経時的に相関する少なくとも工つの予後徴候イディオトープを同定し、 ｄ）疾患の進行に伴って通常は減少する患者イディオトープの増加を誘導するか 、または疾患の進行に伴って通常は増加する患者イディオトープの減少を誘導す る、少なくとも１つの変調抗−イディオタイプ抗体またはその組合わせ物を投与 すること、を特徴とする方法。 ２．患者または動物における癌、自己免疫疾患または感染症、アレルギーまたは 移植拒絶の治療または予防のための抗−イディオタイプ抗体または抗体フラグメ ントを選択する方法であって、ａ）少なくとも１つのイディオトープを担うＡｂ １またはＴ−細胞であって、癌、感染原または自己免疫疾患標的抗原、アレルゲ ンまたは移植抗原と反応する少なくとも１つのレセプター手段を有する該Ａｂ１ または該Ｔ−細胞を選択し、 ｂ）Ａｂ１またはＴ−細胞のいずれかのレセプター手段のイディオトープに対す る、少なくとも１つの抗−イディオタイプ抗体を調製し、 ｃ）患者の血清または組織中のＢ−またはＴ−細胞イディオトープに対する抗− イディオタイプ抗体（群）各々をスクリーニングすることによって、疾患の回復 と経時的に相関する少なくとも１つの予後徴候イディオトープを同定し、 ｄ）疾患の回復に伴って通常は減少する患者イディオトープの減少を誘導するか 、または疾患の回復に伴って通常は増加する患者イディオトープの増加を誘導す る、少なくとも１つの抗−イディオタイプ抗体またはその組合わせ物を投与する こと、を特徴とする方法。 ３．疾患の進行に関連する１つよりも多いイディオトープと相関する、１つより も多い変調抗−イディオタイプ抗体を同定する、請求項１に記載の方法。 ４．疾患の回復に関連する１つよりも多いイディオトープと相関する、１つより も多い変調抗−イディオタイプ抗体を同定する、請求項２に記載の方法。 ５．患者または動物における癌、自己免疫疾患または感染症、アレルギーまたは 移植拒絶の治療または予防のための抗−イディオタイプ抗体または抗体フラグメ ントを選択する方法であって、ａ）少なくとも１つのイディオトープを担うＡｂ １またはＴ−細胞であって、癌、感染原または自己免疫疾患標的抗原、アレルゲ ンまたは移植抗原と反応する少なくとも１つのレセプター手段を有する該Ａｂ１ または該丁−細胞を選択し、 ｂ）Ａｂ１またはＴ−細胞のいずれかのレセプター手段のイディオトープに対す る、少なくとも１つの抗−イディオタイプ抗体を調製し、 ｃ）統計的に有意なパネル患者の血清、組織、またはＴ−細胞に対する抗−イデ ィオタイプ抗体（群）各々をスクリーニングすることによって、疾患の進行と相 関する少なくとも１つのイディオトープを同定し、 ｄ）疾患の進行に伴って通常は減少する患者イディオトープの増加を誘導するか 、または疾患の進行に伴って通常は増加する患者イディオトープの減少を誘導す る、少なくとも１つの変調抗−イディオタイプ抗体またはその組合わせ物を投与 すること、を特徴とする方法。 ６．患者または動物における癌、自己免疫または感染症、アレルギーまたは移植 拒絶の治療または予防のための抗−イディオタイプ抗体または抗体フラグメント を選択する方法であって、ａ）少なくとも１つのイディオトープを担うＡｂ１ま たはＴ−細胞であって、癌、感染原または自己免疫疾患標的抗原、アレルゲンま たは移植抗原と反応する少なくとも１つのレセプター手段を有する該Ａｂ１また は該丁−細胞を選択し、 ｂ）Ａｂ１またはＴ−細胞のいずれかのレセプター手段のイディオトープに対す る、少なくとも１つの抗−イディオタイプ抗体を調製し、 ｃ）統計的に有意なパネル患者の血清、組織、またはＴ−細胞に対する抗−イデ ィオタイプ抗体（群）各々をスクリーニングすることによって、疾患の回復と相 関する少なくとも１つのイディオトープを同定し、 ｄ）疾患の回復に伴って通常は減少する患者イディオトープの減少を誘導するか 、または疾患の回復に伴って通常は増加する患者イディオトープの増加を誘導す る、少なくとも１つの変調抗−イディオタイプ抗体またはその組合わせ物を投与 すること、を特徴とする方法。 ７．抗−イディオタイプ抗体またはその組合わせ物を、免疫変調活性を有する物 質と共に投与する請求項１から６までのいずれかに記載の方法。 ８．請求項１から６までのいずれかに記載の方法によって調製される変調抗−イ ディオタイプ抗体。 ９．抗−イディオタイプ抗体を得るために使用されるＡｂ１がモノクローナルで あった請求項８に記載の変調抗−イディオタイプ抗体。 １０．抗−イディオタイプ抗体を得るために使用されるＡｂ１がポリクローナル であった請求項８に記載の変調抗−イディオタイプ抗体。 １１．抗−イディオタイプ抗体を得るために使用されるＡｂ１の全部または一部 が、ヒト以外の哺乳類供給源から誘導されたものである請求項８に記載の変調抗 −イディオタイプ抗体。 １２．抗−イディオタイプ抗体を得るために使用されるＡｂｌの全部または一部 が、ヒト供給源から誘導されたものである請求項８に記載の変調抗−イディオタ イプ抗体。 １３．モノクローナルである請求項８に記載の変調抗−イディオタイプ抗体。 １４．ポリクローナルである請求項８に記載の変調抗−イディオタイプ抗体。 １５．ヒト以外の哺乳類供給源からその全部または一部が誘導されたものである 請求項８に記載の変調抗−イディオタイプ抗体。 １６．ヒト供給源からその全部または一部が誘導されたものである請求項８に記 載の変調抗−イディオタイプ抗体。 １７．疾患の診断と治療、またはモニターと治療または予防のための方法であっ て、 （１）少なくとも１つの免疫刺激物質を使用することによって、疾患回復期には 通常は増加し、または疾患進行期には通常は減少する、患者の予後徴候イディオ トープレベルを経時的に測定し、そして（２）この情報を使用して、投与量改変 の開始、継続、中断、または患者への該物質の投与を控えるなど、予後徴候イデ ィオトープレベルを増加させるための少なくとも１つの治療方針を決定する工程 からなることを特徴とする方法。 １８．疾患の診断と治療、またはをモニターと治療のための方法であって、 （１）少なくとも１つの免疫抑制物質を使用することによって、疾患進行期には 通常は増加し、または疾患回復期には通常は減少する、患者の予後徴候イディオ トープレベルを経時的に測定し、そして（２）この情報を使用して、投与量改変 の開始、継続、中断、または患者への該物質の投与を控えるなど、予後徴候イデ ィオトープレベルを減少させるための少なくとも１つの治療方針を決定する工程 からなることを特徴とする方法。 １９．疾患の進行または回復と相関することが知られている予後徴候イディオト ープの量を経時的に測定する工程を包含する、疾患の診断またはモニター方法。 ２０．請求項１７に記載の方法によって調製される免疫刺激物質。 ２１．請求項１８に記載の方法によって調製される免疫抑制物質。 ２２．イディオトープの抑制を誘導する方法であって、ａ）疾患の進行に伴って 増加する少なくとも１つのイディオトープを担う少なくとも１つの抗体またはＴ −細胞レセプターを同定し、ｂ）該抗体（群）またはＴ−細胞レセプター（群） を、免疫ネットワーク成分を刺激して該イディオトープを抑制せしめるのに十分 な量および方法で投与する、ことを特徴とする方法。