JPH0340B2 - - Google Patents
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Description
本発明はヒト白血球に存在する抗原を検出する
モノクローナル抗体およびその製造法に関する。 ヒトリンパ球Ｔ細胞、Ｂ細胞および各々のサブ
セツトに対するモノクローナル抗体が最近の細胞
工学の手法を用いることにより作製可能となり、
各々の細胞群が次第に明確になつてきた
〔Reiherz，E.L.et al：Cell 19，821（1980），
Foon，K.A.et al：Blood60，１（1982）〕。 即ち、これらサブセツトを認識するモノクロー
ナル抗体を用いることにより、ヒトリンパ球の機
能的細胞亜群がより明確となり、各種疾患におけ
るこれらの異常が明らかにされつつある。 本発明者らは、各種造血器疾患の診断等に使用
できるモノクローナル抗体を見出すべく研究を重
ねた結果、白血球に存在する抗原および成人Ｔ細
胞白血病（以下ATLと略記する）に対するモノ
クローナル抗体を見出し、本発明を完成するに至
つた。 以下本発明を詳細に説明する。 本発明は、白血球に存在する抗原およびATL
ウイルス（以下ATLVと略記する）に対するモ
ノクローナル抗体を提供する。 本発明のモノクローナル抗体は、具体的には、
Tpw40，Tp120，Ta60a，Ta60b，Ta60c，
Ts60，Tsw32，TsA，TsB，Ts145，Lp95，
Ls70，LsA，ATV19a，ATV19bと命名された
ものがあげられる。 Ta60a，Ta60bおよびTa60cは正常人末梢血Ｔ
細胞分画、非Ｔ（Ｂ）細胞分画、単球、顆粒球、
胸腺細胞などの正常血液細胞とは反応せず、Ｔ細
胞群をインターロイキン２−〔IL−２，バイオテ
スト社（西独）〕、フイトヘマグルチニン〔PHA
デイフコ社（米国）〕、コンカナバリンＡ〔ConA
E.T.社（米国）〕、ポークウイードマイトジエン
〔PWM，ギブコ社（米国）〕などのマイトジエン
やアロＢ細胞などで刺激することにより得られた
いわゆる活性化Ｔ細胞に反応することを特徴とし
ている（実施例８参照）。すなわち、対照として
マイトジエンを含まない倍養液のみの倍養条件で
は発現してこないことを特徴としている。 本発明のモノクローナル抗体うちTa60a，
Ta60bは、固型腫瘍由来の細胞とは反応しない造
血器腫瘍細胞に対しては、Ｔ細胞由来のうちでも
ATLの全例に陽性を示し、ATL以外のＴ細胞由
来悪性疾患に関してほとんど全ての症例で陰性で
ある。このことは臨床上鑑別困難な症例群を明確
に区別するために本発明のモノクローナル抗体が
使用できることを示している。 また本発明のモノクローナル抗体は、Ｔ細胞由
来以外の腫瘍細胞として、Ｂ−CLL（Ｂ細胞性慢
性リンパ性白血病）やＢ−ML（Ｂ細胞性悪性リ
ンパ腫）の一部症例に弱陽性に反応し、骨髄性細
胞由来のAML（急性骨髄性白血病）の一部症例に
も弱陽性に反応することも特徴としている。 Tpw40およびTp120は、末梢血リンパ球Ｔ細
胞分画の大部分の細胞と反応し、いわゆるＴ細胞
（panT）抗原を検出する。 Ts60，Tsw32，TsA，TsBおよびTs145の５
抗体は、Ｔ細胞分画の一部分の細胞に存在する抗
原、Ｔ亜分画（サブセツト）抗原を検出する。
Ts60は、Ta60と同じ抗原分子量を示すが、血清
学的特異性は異なり、活性化Ｔ細胞とは反応せ
ず、Ｔ細胞株の一部とのみ反応を示す。 Lp95は、全ての白血球細胞と反応を示す白血
球（Pan leukocyte）抗原を検出し、一方Ls70お
よびLsAは、単球およびその他の白血球細胞の一
部と反応を示し、白血球亜分画
（leukocytesubset）抗原を認識する。 Tpw40，Tp120は、ともにpanT抗原を検出し
ているが、Tpw40は、Ｔ細胞腫瘍のうち比較的
未熟なＴ細胞型急性リンパ性白血病（Ｔ−ALL）
およびリンパ芽球腫（LL）に反応を示し、一方
Tp120は、成熟型Ｔ細胞腫であるT2リンパ腫お
よびATLに反応を示す。また、Tp120はＢ細胞
型慢性リンパ性白血病（Ｂ−CLL）にも反応を
示す。（第６表） Tsw32は、Ｔ−ALLおよびLLに反応を示し、
TsAはこの両Ｔ細胞腫瘍とともにT2リンパ腫、
ATL等の成熟型Ｔ細胞腫とも反応を示した。 TsBは、成熟型Ｔ細胞腫であるT2リンパ腫、
ATLに高率に反応した。TsBは、Ｂ−CLLとも
反応を示した。 これら、Ｔ細胞分化抗原を検出する抗体は、Ｔ
細胞腫瘍の鑑別診断に有用である。 Ts145は、末梢リンパ球にはほとんど反応を示
さず、IL−２存在下で長期培養されているＴ細
胞株に特異的に反応を示すという特徴を持つ。 Lp95は、白血球の大部分と反応を示し、また、
ほぼ全ての白血病およびリンパ腫とも反応を示
す。 Ls70は、単球および他の白血球の一部に存在
し、Ｔ細胞リンパ腫中T2リンパ腫およびATLに
反応し、またＢ−CLLとも反応する。 LsAは、単球およびＴ細胞と主に反応し、Ｔ細
胞リンパ腫とはまつたく反応を示さない。また、
単球性白血病には高率に反応を示す。 ATV19aおよびATV19b抗体は、ATLV構成蛋
白中のP19成分に対するモノクローナル抗体であ
り、MT−１、MT−２などのATL由来の培養株
ならびにATL白血病細胞のIL−２存在下の短期
培養した細胞にも存在する抗原を検出することを
特徴とする。 ATV19aおよびATV19bは、ウイルスの粒子
構成蛋白で、分子量19×103のペプチドを認識し
ており、ATLの診断に有用である。 本発明モノクローナル抗体の生物学的活性は実
施例６〜13に示した。実施例中に用いたマウス混
合血球吸着試験〔Mouse−mixed
hemadsorptionassay，Ｍ−MHA〕法は下記の
方法に従い、マイクロプレート〔Falcon社，
3040〕に単層細胞培養または浮遊細胞を付着させ
た標的細胞への指示細胞の付着の有無で観察す
る。指示細胞としては、ヒツジ赤血球とマウス抗
ヒツジ赤血球抗体を反応させた後、さらに家兎抗
マウスイムノグロブリン血清を反応させたものを
用いる。 マウス混合血球吸着試験〔Ｍ−MHA〕： Ｍ−MHAはEspmarkとFagreusの原法
（Acta.Pathol.Microbiol.Scond.Suppl.154 258−
262，1962）を改良して行う。 指示赤血球の作製法は以下の通りである。 洗滌羊赤血球２％浮遊液と等量の1000倍希釈マ
ウス抗羊赤血球抗体（BALB／ｃマウスに羊赤
血球を過免疫して作製）とを24℃にて45分間反応
させ洗滌後再び２％浮遊液として等量の200倍稀
釈家兎抗マウスイムノブロブリン （cappel社，米国）を24℃にて45分間反応させた
後、２回洗滌後再び２％浮遊液としたものを、い
わゆるＭ−MHAの指示赤血球として用いる。 Ｍ−MHA検査法の手法としては、被検索細胞
は、ハイブリドーマ細胞、培養上清またはハイブ
リドーマ細胞接種BALB／ｃマウスもしくは
BALB／ｃ由来ヌードマウス腹水と24℃にて45
分間反応させ、抗体を洗滌除去後、0.2％指示羊
赤血球と24℃にて45分間反応させ、軽く一度リン
酸緩衝液生理食塩水（PBS）で洗滌後光学的顕
微鏡下、指示赤血球のロゼツト形成の有無にて判
定する。 また実施例中において用いた間接螢光抗体法
〔細胞質螢光抗体法（Cy−IF）または膜螢光抗体
法（MIF）は下記方法で行つた。 細胞質螢光抗体法： １〜５×104の標的細胞を、スライドグラス上
に95％アセトンで10分間固定し、−70℃に保存し
ておいたものを標的細胞として用いる。 第１次抗体として、ハイブリドーマ細胞培養上
清またはハイブリドーマ細胞接種BALB／ｃマ
ウスもしくはBALB／ｃ由来ヌードマウス腹水
25μを用いて４℃または25℃にて30分間反応さ
せる。PBSで洗滌後２次抗体として、20〜40倍
稀釈螢光標識家兎マウスイムノグロブリンGAM
（GAM−FITC，コール・ター社，米国）を25℃
にて30分間反応させる。反応は螢光顕微鏡下で螢
光の有無にて判定する。 膜螢光抗体法： ５×105／m1の標的細胞50μと、第１次抗体
としてハイブリドーマ細胞培養上清またはハイブ
リドーマ細胞接種BALB／ｃマウスもしくは
BALB／ｃ由来ヌードマウス腹水50μとを用い
て、４℃または25℃にて30分間反応させる。
PBSで洗滌後、２次抗体として20〜40倍稀釈螢
光標識家兎マウスイムノグロブリンCAM（GAM
−FITC，コール・ター社，米国）を25℃にて30
分間反応させる。反応は螢光顕微鏡下で螢光の有
無にて判定する。 本発明のモノクローナル抗体はマウスをATL
細胞，ATLV産性株MT−２細胞またはMT−２
より分離したATLウイルス（ATLV）、混合培養
リンパ球，プロテインＡ（PA）活性化リンパ球な
どで免疫し、脾細胞を取り出し、これとマウスミ
エローマ細胞とを融合して得たハイブリドーマを
培養することによつて製造することができる。 このハイブリドーマ製造に際してはKohlerと
Milsteinの方法〔Nature 256，495−497（1975）〕
を改良したUedaらの方法〔Proc.Natl.Acad.Sci.
USA 78，5122−5126（1981）〕に従つて行えばよ
い。 免疫用マウスとしては、BALB／Ｃ系マウス、
BALB／Ｃ系マウスと他系マウスとのF1マウス
などが用いられる。 免疫はマウス１匹（４〜８週令，20〜30ｇ）に
対して細胞107〜8個またはウイルス50〜500μｇを
用いて２〜５週間ごとに２〜３回行う。マウスの
飼育および、脾細胞の採取は常法に従う。 ミエローマ細胞としては、MOPC−21NS／１
〔Nature，256，495−497（1975）〕、SP2／０−
Ag14〔Nature，277，131−133（1979）〕、S194／
５，XXO.BU.1〔J.Exp.Med.148，313−328
（1978）〕などが用いられる。脾細胞とミエローマ
細胞は１対１〜10対１の割合で混合し、融合は、
NaC（約0.85％）、ジメチルスルホキシド〔10
〜20％（Ｖ／Ｖ）〕および分子量1000〜6000のポ
リエチレングリコールを含むリン酸緩衝液（PH
7.2〜7.4）中で行う。 融合は両細胞35〜37℃で１〜３分間インキユベー
トすることによつて行う。 融合細胞（ハイブリドーマ）の選択は、ヒポキ
サンチン（1.3〜1.4mg／dl）、アミノプテリン
（18〜20μｇ／dl）、チミジン（375〜400μｇ／
dl）、ストレプトマイシン（50〜100μｇ／ｍ１）、
ペニシリン（50〜100単位）、グルタミン（3.5〜
4.0ｇ／）、牛胎児血清（10〜20％）を含む基礎
培地を用い、生育してくる細胞として選択する。 基礎培地としては、動物細胞の培養に一般に使
用されているRPMI1640培地、EagleのMEM培
地などが用いられる。 融合細胞（ハイブリドーマ）のクローン化は限
界希釈法にて少なくとも３回繰返して行う。 ハイブリドーマを通常の動物細胞の培養と同様
にして培養すれば、培地中に本発明の抗体が生産
される。例えば２〜５×106のハイブリドーマ細
胞をストレプトマイシン（50〜100μｇ／ｍ１、
ペニシリン（50〜100単位／ｍ１）、グルタミン
（3.5〜4.0ｇ／）、牛胎児血清（10〜20％）を含
むRPMI1640培地10〜20ｍ１を用い、フラスコ内
で95％CO2−５％O2存在下、35〜37℃、３〜７間
培養することによつて培養液中に抗体が分泌、蓄
積される。 またハイブリドーマ細胞をプリスタン
（Pristane）処理のヌードマウスまたはBALB／
Ｃマウスの腹腔内に移植して増殖することにより
腹水中に本発明の抗体を蓄積させることができ
る。すなわち、これらのマウス腹腔内にプリスタ
ン（Pristane，２，６，10，14 tetramethyl
pentadecane，米国アルドリツチ社製）0.5〜１ｍ
１注射し、その後２〜３週間目に腹腔に５〜10×
106個のハイブリドーマ細胞を移植する。通常７
〜10日後に腹水が貯溜し、これを採取する。 本発明においては、ATL由来細胞株MT−２
を免疫原として用いてモノクローナル抗体
Ta60b，Ta60cおよびTs60を得、ATLVを免疫
原として用いてモノクローナル抗体Ta60a，
ATV19aおよびATV19bを得た。 ATL細胞を免疫原としてTsAを得、混合リン
パ球培養細胞を免疫原としてTpw40，Tp120，
Tsw32，Lp95，Ls70，LsAを得、PA活性化リン
パ球を免疫原としてTsBおよびTs145を得た。 これらモノクローナル抗体の抗原特異性は実施
例６〜13に示した方法により確認した。 本発明のモノクローナル抗体の抗体クラスは、
Tp120およびLp95がIgG2a，TsAがIgMで、他は
すべてIgG1に分類される。また〔3H〕グルコサ
ミン標識による下記免疫沈降反応による分子量測
定では、Ta60a，Ta60b，Ta60cおよびTs60抗
原はMT−２またはMT−１細胞において60000
ダルトン（gp60 MT−２）を示し、HUT102細
胞においては53000ダルトン（gp53 HUT102）
であり、これら４抗原はほぼ同一分子量を示し
た。 また、Tp120抗原は、HUT102細胞においては
120000ダルトンであつた。また125I標識による免
疫沈降反応による分子量測定では、Ts145抗原お
よびLs70抗原はNK3.3細胞においてそれぞれ
145000ダルトン，70000ダルトンであつた。 35Sメチオニン標識による分子量測定では、
Lp95抗原は、HUT102細胞において95000ダルト
ンを示した。 イムノブロツテイング法による分子量測定で
は、ATV19aおよびATV19bは、ともにATLV
の19000ダルトンのウイルス粒子構成分と同じ分
子量を示した。 他の５つの抗原（Tpw40，Tsw32，TsA，
TsB，LsA）の分子量は、現在のところ不明であ
る。 免疫沈降反応： 標的細胞（MT−２，MT−１および
HUT102）は〔3H〕−グルコサミンを用いて標識
する。15μC／ｍ13H−グルコサミン（38Curies／
mmo1，Amersham 米国）を含んだRPMI1640
培養液（日水製薬社製）にて35〜40時間培養して
標識する。 標的細胞HUT102は35Sメチオニンを用いて標
識した500μC／ｍ135Sメチオニンを含んだ
RPMI1640培養液にて８時間培養して標識する。
またNK3.3標的細胞は、５×107細胞を200μｇの
アイオドゲン存在下で0.5mCのNa125Iで標識す
る。 これら標識した細胞を0.1〜１％（ｖ／ｖ）NP
−40を用いて可溶化し、その細胞抽出物（１〜10
×105cpm）をモノクローナル抗体（１〜10μ）
と４℃にて６〜12時間反応させ、第２次抗体とし
て５〜20μの家兎抗マウスイムノグロブリン
（Cappel社，米国）と４℃で30分間反応させ、さ
らに４℃で１時間スタフイロコツカス・アウレウ
ス（CowanI株）と反応させ免疫沈降物を作製
し、SPS−ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動に
より解析する。 イムノブロツテイング法（Towin，H.ら，
Proc，Natl.Acad.Sci.USA 76，4350，1979）： ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動法により展
開し、ニトロセルロース膜に各ペプチドを転移さ
せ、その後モノクローナル抗体と反応させ、さら
に２次抗体である131I標識抗マウス免疫グロブリ
ン抗体と反応せしめ、その後、フルオログラフイ
ーで観察する。 なお、本発明のモノクローナル抗体は、昭和58
年９月25日発行の日本癌学会第42回総会記事〔日
本癌学会発行〕100頁の290番およびシンポジウム
23の２番に記載があり、該記事中、TA−53C，
TA−53b，TA−53a，TS−53，ATV−W26aお
よびATV−W26bは、それぞれ本明細書におけ
るTa−60a，Ta60b，Ta60c，Ts60，ATV19a
およびATV19bに相当する。またTP−W40，LP
−94，TP−W67およびTP−120はそれぞれ本明
細書におけるTpw40，Lp95，TsAおよびTp120
に相当する。 以下、本発明の実施例を示す。 実施例 １ Ta60a，Ta60c，ATV19aおよびATV19bモノ
クローナル抗体の製造： ATL由来培養株MT−２〔Gann71，155
（1980）〕の培養上清より採取分離した
〔Yoshida，H.et al：Primary and tertiary
structure of nucleic acids and cancer
research，M.Miwa et al.（EDS，Japan.Sci.
Soc.Press，Tokyo，pp 255−294，1982〕ウイ
ルス粒子蛋白分画を免疫原として用いた。 上記蛋白分画（蛋白量0.45mg）を免疫直前瞬時
にドライアイス含有エチルアルコール中にて凍結
し、再び37℃恒温槽にて融解せしめる凍結融解過
程を６回行つた後、完全フロイントアジユバント
0.02mlと混合し、BALB／Ｃマウス（８週令，24
ｇ）〔Charles River，Inc，Atsugi，Japan よ
り購入〕１匹の背面に皮下接種することにより免
疫した。この免疫を４週ごとに４回行い、最終免
疫４日目にマウスを殺し、脾臓を摘出し、常法に
より浮遊細胞を得た。 この脾臓浮遊細胞108個と、マウスミエローマ
MOPC−21NS／１細胞２×107個とを、42％
（Ｗ／Ｖ）ポリエチレングライコール（M.
W.4000，Koch−Light，Bucks，英国）および
15％（Ｖ／Ｖ）ジメチルスルホキシド（Merck，
Darmstadt，西独）をふくむリン酸緩衝液生理食
塩水（PBS）0.2ml中でUedaらの方法〔Proc.
Natl.Acad.Sci.USA 78，5122−5126（1981）〕に
従つて融合させた。 融合細胞は、HAT培地〔ヒポキサンチン1.36
mg／dl，アミノプテリン19.1μｇ／dl，チミジン
387μｇ／dl，ストレプトマイシン100μｇ／ml，
ペニシリン100単位／ml，グルタミン2mMおよ
び牛胎児血清10％を含むRPMI1640培地〔PH7.2〕
を用いて常法〔前記Uedaらの方法〕に従い選択
した。 得られた融合細胞３個を限界希釈法を３回繰返
すことによりクローン化した。得られたクローン
（３個）を、下記の方法で培養して、ATL関連抗
原に対して特異的に反応するモノクローナル抗体
を著量生産する株を得た。すなわち、５×106の
ハイブリドーマ細胞をストレプトマイシン100μ
ｇ／ml，ペニシリン100単位／ml，グルタミン
3.8ｇ／，牛胎児血清10％を含むRPMI1640培
地15mlを用い、150cm2のフラスコ内で95％CO2−
５％O2の存在下、37℃で７日間培養した。 得られた細胞株Ta60a，Ta60c，ATV19aおよ
びATV19bが生産するモノクローナル抗体をそ
れぞれTa60a，Ta−60c，ATV19aおよび
ATV19bとした。 この細胞株をマウスの腹腔内に投与する下記の
方法で培養するとTa60a，Ta60c，ATV19aおよ
びATV19bがそれぞれ３〜10mg／生成した。
すなわちマウス腹腔内にプリスタン0.5ml注射し、
その後３周目の腹腔に５×106個のハイブリドー
マ細胞を移植し、10日後に腹水を採取した。 実施例 ２ Ta60bおよびTs60モノクローナル抗体の製
造： ATL由来培養株MT−２〔Miyoshi、et、al：
Gann 71 155（1980）〕を107個マウス皮下に初回
免疫し、その３週後に２回目の免疫を同様に行
い、さらに３回目の免疫を107個腹腔内に注射し
た。その後４日目に、免疫マウスを殺し、脾臓細
胞を採取し、細胞融合を行つた。以下は実施例１
と同様に行い、Ta60bおよびTs60モノクローナ
ル抗体を得た。 実施例 ３ TsAモノクローナル抗体の製造： ATL患者末梢血より分離したATL細胞を107
個、マウス皮下に初回免疫し、その３週後に２回
目の免疫を同様に行い、さらに３回目の免疫を
107個腹腔内に注射した。その後４日目に免疫マ
ウスを殺し、脾臓細胞を採取し細胞融合を行つ
た。以下は実施例１と同様に行い、TsAモノク
ローナル抗体を得た。 実施例 ４ Tpw40，Tp120，Tsw32，Lp95，Ls70および
LsAモノクローナル抗体の製造： 混合培養４日目のリンパ球を採取し、洗滌後５
×106個の細胞をマウス皮下に初回免疫し、その
３週間後に２回目の免疫を同様に行い、さらに３
回目の免疫を107個腹腔内に注射した。その後４
日目に免疫マウスを殺し、脾臓細胞を採取し細胞
融合を行つた。以下は実施例１と同様に行い、標
記モノクローナル抗体を得た。 実施例 ５ TsBおよびTs145モノクローナル抗体の製造： プロテインＡ（PA）10μｇ／mlの存在下で、末
梢血リンパ球を３日間培養後、活性化リンパ球を
採取し、洗滌後５×106個の細胞をマウス皮下に
初回免疫し、その３週後に２回目の免疫を同様に
行い、さらに３回目の免疫を107個腹腔内に注射
した。その後４日目に免疫マウスを殺し、脾臓細
胞を採取し、細胞融合を行つた。以下は実施例１
と同様に行い、TsBおよびTs145モノクローナル
抗体を得た。 実施例 ６ モノクローナル抗体Ta60a，Ta60b，Ts60お
よびATV19aの各種培養株細胞ならびにヒト正
常血液細胞成分に対する反応性： 細胞表面抗原と標記モノクローナル抗体との反
応を調べる為に、マウス混合血球吸着試験〔Ｍ−
MHA〕〔前記〕および細胞質内抗原と抗体との
反応を検索する目的での間接螢光抗体法〔前記〕
を行つた。結果を第１表に示す。
モノクローナル抗体およびその製造法に関する。 ヒトリンパ球Ｔ細胞、Ｂ細胞および各々のサブ
セツトに対するモノクローナル抗体が最近の細胞
工学の手法を用いることにより作製可能となり、
各々の細胞群が次第に明確になつてきた
〔Reiherz，E.L.et al：Cell 19，821（1980），
Foon，K.A.et al：Blood60，１（1982）〕。 即ち、これらサブセツトを認識するモノクロー
ナル抗体を用いることにより、ヒトリンパ球の機
能的細胞亜群がより明確となり、各種疾患におけ
るこれらの異常が明らかにされつつある。 本発明者らは、各種造血器疾患の診断等に使用
できるモノクローナル抗体を見出すべく研究を重
ねた結果、白血球に存在する抗原および成人Ｔ細
胞白血病（以下ATLと略記する）に対するモノ
クローナル抗体を見出し、本発明を完成するに至
つた。 以下本発明を詳細に説明する。 本発明は、白血球に存在する抗原およびATL
ウイルス（以下ATLVと略記する）に対するモ
ノクローナル抗体を提供する。 本発明のモノクローナル抗体は、具体的には、
Tpw40，Tp120，Ta60a，Ta60b，Ta60c，
Ts60，Tsw32，TsA，TsB，Ts145，Lp95，
Ls70，LsA，ATV19a，ATV19bと命名された
ものがあげられる。 Ta60a，Ta60bおよびTa60cは正常人末梢血Ｔ
細胞分画、非Ｔ（Ｂ）細胞分画、単球、顆粒球、
胸腺細胞などの正常血液細胞とは反応せず、Ｔ細
胞群をインターロイキン２−〔IL−２，バイオテ
スト社（西独）〕、フイトヘマグルチニン〔PHA
デイフコ社（米国）〕、コンカナバリンＡ〔ConA
E.T.社（米国）〕、ポークウイードマイトジエン
〔PWM，ギブコ社（米国）〕などのマイトジエン
やアロＢ細胞などで刺激することにより得られた
いわゆる活性化Ｔ細胞に反応することを特徴とし
ている（実施例８参照）。すなわち、対照として
マイトジエンを含まない倍養液のみの倍養条件で
は発現してこないことを特徴としている。 本発明のモノクローナル抗体うちTa60a，
Ta60bは、固型腫瘍由来の細胞とは反応しない造
血器腫瘍細胞に対しては、Ｔ細胞由来のうちでも
ATLの全例に陽性を示し、ATL以外のＴ細胞由
来悪性疾患に関してほとんど全ての症例で陰性で
ある。このことは臨床上鑑別困難な症例群を明確
に区別するために本発明のモノクローナル抗体が
使用できることを示している。 また本発明のモノクローナル抗体は、Ｔ細胞由
来以外の腫瘍細胞として、Ｂ−CLL（Ｂ細胞性慢
性リンパ性白血病）やＢ−ML（Ｂ細胞性悪性リ
ンパ腫）の一部症例に弱陽性に反応し、骨髄性細
胞由来のAML（急性骨髄性白血病）の一部症例に
も弱陽性に反応することも特徴としている。 Tpw40およびTp120は、末梢血リンパ球Ｔ細
胞分画の大部分の細胞と反応し、いわゆるＴ細胞
（panT）抗原を検出する。 Ts60，Tsw32，TsA，TsBおよびTs145の５
抗体は、Ｔ細胞分画の一部分の細胞に存在する抗
原、Ｔ亜分画（サブセツト）抗原を検出する。
Ts60は、Ta60と同じ抗原分子量を示すが、血清
学的特異性は異なり、活性化Ｔ細胞とは反応せ
ず、Ｔ細胞株の一部とのみ反応を示す。 Lp95は、全ての白血球細胞と反応を示す白血
球（Pan leukocyte）抗原を検出し、一方Ls70お
よびLsAは、単球およびその他の白血球細胞の一
部と反応を示し、白血球亜分画
（leukocytesubset）抗原を認識する。 Tpw40，Tp120は、ともにpanT抗原を検出し
ているが、Tpw40は、Ｔ細胞腫瘍のうち比較的
未熟なＴ細胞型急性リンパ性白血病（Ｔ−ALL）
およびリンパ芽球腫（LL）に反応を示し、一方
Tp120は、成熟型Ｔ細胞腫であるT2リンパ腫お
よびATLに反応を示す。また、Tp120はＢ細胞
型慢性リンパ性白血病（Ｂ−CLL）にも反応を
示す。（第６表） Tsw32は、Ｔ−ALLおよびLLに反応を示し、
TsAはこの両Ｔ細胞腫瘍とともにT2リンパ腫、
ATL等の成熟型Ｔ細胞腫とも反応を示した。 TsBは、成熟型Ｔ細胞腫であるT2リンパ腫、
ATLに高率に反応した。TsBは、Ｂ−CLLとも
反応を示した。 これら、Ｔ細胞分化抗原を検出する抗体は、Ｔ
細胞腫瘍の鑑別診断に有用である。 Ts145は、末梢リンパ球にはほとんど反応を示
さず、IL−２存在下で長期培養されているＴ細
胞株に特異的に反応を示すという特徴を持つ。 Lp95は、白血球の大部分と反応を示し、また、
ほぼ全ての白血病およびリンパ腫とも反応を示
す。 Ls70は、単球および他の白血球の一部に存在
し、Ｔ細胞リンパ腫中T2リンパ腫およびATLに
反応し、またＢ−CLLとも反応する。 LsAは、単球およびＴ細胞と主に反応し、Ｔ細
胞リンパ腫とはまつたく反応を示さない。また、
単球性白血病には高率に反応を示す。 ATV19aおよびATV19b抗体は、ATLV構成蛋
白中のP19成分に対するモノクローナル抗体であ
り、MT−１、MT−２などのATL由来の培養株
ならびにATL白血病細胞のIL−２存在下の短期
培養した細胞にも存在する抗原を検出することを
特徴とする。 ATV19aおよびATV19bは、ウイルスの粒子
構成蛋白で、分子量19×103のペプチドを認識し
ており、ATLの診断に有用である。 本発明モノクローナル抗体の生物学的活性は実
施例６〜13に示した。実施例中に用いたマウス混
合血球吸着試験〔Mouse−mixed
hemadsorptionassay，Ｍ−MHA〕法は下記の
方法に従い、マイクロプレート〔Falcon社，
3040〕に単層細胞培養または浮遊細胞を付着させ
た標的細胞への指示細胞の付着の有無で観察す
る。指示細胞としては、ヒツジ赤血球とマウス抗
ヒツジ赤血球抗体を反応させた後、さらに家兎抗
マウスイムノグロブリン血清を反応させたものを
用いる。 マウス混合血球吸着試験〔Ｍ−MHA〕： Ｍ−MHAはEspmarkとFagreusの原法
（Acta.Pathol.Microbiol.Scond.Suppl.154 258−
262，1962）を改良して行う。 指示赤血球の作製法は以下の通りである。 洗滌羊赤血球２％浮遊液と等量の1000倍希釈マ
ウス抗羊赤血球抗体（BALB／ｃマウスに羊赤
血球を過免疫して作製）とを24℃にて45分間反応
させ洗滌後再び２％浮遊液として等量の200倍稀
釈家兎抗マウスイムノブロブリン （cappel社，米国）を24℃にて45分間反応させた
後、２回洗滌後再び２％浮遊液としたものを、い
わゆるＭ−MHAの指示赤血球として用いる。 Ｍ−MHA検査法の手法としては、被検索細胞
は、ハイブリドーマ細胞、培養上清またはハイブ
リドーマ細胞接種BALB／ｃマウスもしくは
BALB／ｃ由来ヌードマウス腹水と24℃にて45
分間反応させ、抗体を洗滌除去後、0.2％指示羊
赤血球と24℃にて45分間反応させ、軽く一度リン
酸緩衝液生理食塩水（PBS）で洗滌後光学的顕
微鏡下、指示赤血球のロゼツト形成の有無にて判
定する。 また実施例中において用いた間接螢光抗体法
〔細胞質螢光抗体法（Cy−IF）または膜螢光抗体
法（MIF）は下記方法で行つた。 細胞質螢光抗体法： １〜５×104の標的細胞を、スライドグラス上
に95％アセトンで10分間固定し、−70℃に保存し
ておいたものを標的細胞として用いる。 第１次抗体として、ハイブリドーマ細胞培養上
清またはハイブリドーマ細胞接種BALB／ｃマ
ウスもしくはBALB／ｃ由来ヌードマウス腹水
25μを用いて４℃または25℃にて30分間反応さ
せる。PBSで洗滌後２次抗体として、20〜40倍
稀釈螢光標識家兎マウスイムノグロブリンGAM
（GAM−FITC，コール・ター社，米国）を25℃
にて30分間反応させる。反応は螢光顕微鏡下で螢
光の有無にて判定する。 膜螢光抗体法： ５×105／m1の標的細胞50μと、第１次抗体
としてハイブリドーマ細胞培養上清またはハイブ
リドーマ細胞接種BALB／ｃマウスもしくは
BALB／ｃ由来ヌードマウス腹水50μとを用い
て、４℃または25℃にて30分間反応させる。
PBSで洗滌後、２次抗体として20〜40倍稀釈螢
光標識家兎マウスイムノグロブリンCAM（GAM
−FITC，コール・ター社，米国）を25℃にて30
分間反応させる。反応は螢光顕微鏡下で螢光の有
無にて判定する。 本発明のモノクローナル抗体はマウスをATL
細胞，ATLV産性株MT−２細胞またはMT−２
より分離したATLウイルス（ATLV）、混合培養
リンパ球，プロテインＡ（PA）活性化リンパ球な
どで免疫し、脾細胞を取り出し、これとマウスミ
エローマ細胞とを融合して得たハイブリドーマを
培養することによつて製造することができる。 このハイブリドーマ製造に際してはKohlerと
Milsteinの方法〔Nature 256，495−497（1975）〕
を改良したUedaらの方法〔Proc.Natl.Acad.Sci.
USA 78，5122−5126（1981）〕に従つて行えばよ
い。 免疫用マウスとしては、BALB／Ｃ系マウス、
BALB／Ｃ系マウスと他系マウスとのF1マウス
などが用いられる。 免疫はマウス１匹（４〜８週令，20〜30ｇ）に
対して細胞107〜8個またはウイルス50〜500μｇを
用いて２〜５週間ごとに２〜３回行う。マウスの
飼育および、脾細胞の採取は常法に従う。 ミエローマ細胞としては、MOPC−21NS／１
〔Nature，256，495−497（1975）〕、SP2／０−
Ag14〔Nature，277，131−133（1979）〕、S194／
５，XXO.BU.1〔J.Exp.Med.148，313−328
（1978）〕などが用いられる。脾細胞とミエローマ
細胞は１対１〜10対１の割合で混合し、融合は、
NaC（約0.85％）、ジメチルスルホキシド〔10
〜20％（Ｖ／Ｖ）〕および分子量1000〜6000のポ
リエチレングリコールを含むリン酸緩衝液（PH
7.2〜7.4）中で行う。 融合は両細胞35〜37℃で１〜３分間インキユベー
トすることによつて行う。 融合細胞（ハイブリドーマ）の選択は、ヒポキ
サンチン（1.3〜1.4mg／dl）、アミノプテリン
（18〜20μｇ／dl）、チミジン（375〜400μｇ／
dl）、ストレプトマイシン（50〜100μｇ／ｍ１）、
ペニシリン（50〜100単位）、グルタミン（3.5〜
4.0ｇ／）、牛胎児血清（10〜20％）を含む基礎
培地を用い、生育してくる細胞として選択する。 基礎培地としては、動物細胞の培養に一般に使
用されているRPMI1640培地、EagleのMEM培
地などが用いられる。 融合細胞（ハイブリドーマ）のクローン化は限
界希釈法にて少なくとも３回繰返して行う。 ハイブリドーマを通常の動物細胞の培養と同様
にして培養すれば、培地中に本発明の抗体が生産
される。例えば２〜５×106のハイブリドーマ細
胞をストレプトマイシン（50〜100μｇ／ｍ１、
ペニシリン（50〜100単位／ｍ１）、グルタミン
（3.5〜4.0ｇ／）、牛胎児血清（10〜20％）を含
むRPMI1640培地10〜20ｍ１を用い、フラスコ内
で95％CO2−５％O2存在下、35〜37℃、３〜７間
培養することによつて培養液中に抗体が分泌、蓄
積される。 またハイブリドーマ細胞をプリスタン
（Pristane）処理のヌードマウスまたはBALB／
Ｃマウスの腹腔内に移植して増殖することにより
腹水中に本発明の抗体を蓄積させることができ
る。すなわち、これらのマウス腹腔内にプリスタ
ン（Pristane，２，６，10，14 tetramethyl
pentadecane，米国アルドリツチ社製）0.5〜１ｍ
１注射し、その後２〜３週間目に腹腔に５〜10×
106個のハイブリドーマ細胞を移植する。通常７
〜10日後に腹水が貯溜し、これを採取する。 本発明においては、ATL由来細胞株MT−２
を免疫原として用いてモノクローナル抗体
Ta60b，Ta60cおよびTs60を得、ATLVを免疫
原として用いてモノクローナル抗体Ta60a，
ATV19aおよびATV19bを得た。 ATL細胞を免疫原としてTsAを得、混合リン
パ球培養細胞を免疫原としてTpw40，Tp120，
Tsw32，Lp95，Ls70，LsAを得、PA活性化リン
パ球を免疫原としてTsBおよびTs145を得た。 これらモノクローナル抗体の抗原特異性は実施
例６〜13に示した方法により確認した。 本発明のモノクローナル抗体の抗体クラスは、
Tp120およびLp95がIgG2a，TsAがIgMで、他は
すべてIgG1に分類される。また〔3H〕グルコサ
ミン標識による下記免疫沈降反応による分子量測
定では、Ta60a，Ta60b，Ta60cおよびTs60抗
原はMT−２またはMT−１細胞において60000
ダルトン（gp60 MT−２）を示し、HUT102細
胞においては53000ダルトン（gp53 HUT102）
であり、これら４抗原はほぼ同一分子量を示し
た。 また、Tp120抗原は、HUT102細胞においては
120000ダルトンであつた。また125I標識による免
疫沈降反応による分子量測定では、Ts145抗原お
よびLs70抗原はNK3.3細胞においてそれぞれ
145000ダルトン，70000ダルトンであつた。 35Sメチオニン標識による分子量測定では、
Lp95抗原は、HUT102細胞において95000ダルト
ンを示した。 イムノブロツテイング法による分子量測定で
は、ATV19aおよびATV19bは、ともにATLV
の19000ダルトンのウイルス粒子構成分と同じ分
子量を示した。 他の５つの抗原（Tpw40，Tsw32，TsA，
TsB，LsA）の分子量は、現在のところ不明であ
る。 免疫沈降反応： 標的細胞（MT−２，MT−１および
HUT102）は〔3H〕−グルコサミンを用いて標識
する。15μC／ｍ13H−グルコサミン（38Curies／
mmo1，Amersham 米国）を含んだRPMI1640
培養液（日水製薬社製）にて35〜40時間培養して
標識する。 標的細胞HUT102は35Sメチオニンを用いて標
識した500μC／ｍ135Sメチオニンを含んだ
RPMI1640培養液にて８時間培養して標識する。
またNK3.3標的細胞は、５×107細胞を200μｇの
アイオドゲン存在下で0.5mCのNa125Iで標識す
る。 これら標識した細胞を0.1〜１％（ｖ／ｖ）NP
−40を用いて可溶化し、その細胞抽出物（１〜10
×105cpm）をモノクローナル抗体（１〜10μ）
と４℃にて６〜12時間反応させ、第２次抗体とし
て５〜20μの家兎抗マウスイムノグロブリン
（Cappel社，米国）と４℃で30分間反応させ、さ
らに４℃で１時間スタフイロコツカス・アウレウ
ス（CowanI株）と反応させ免疫沈降物を作製
し、SPS−ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動に
より解析する。 イムノブロツテイング法（Towin，H.ら，
Proc，Natl.Acad.Sci.USA 76，4350，1979）： ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動法により展
開し、ニトロセルロース膜に各ペプチドを転移さ
せ、その後モノクローナル抗体と反応させ、さら
に２次抗体である131I標識抗マウス免疫グロブリ
ン抗体と反応せしめ、その後、フルオログラフイ
ーで観察する。 なお、本発明のモノクローナル抗体は、昭和58
年９月25日発行の日本癌学会第42回総会記事〔日
本癌学会発行〕100頁の290番およびシンポジウム
23の２番に記載があり、該記事中、TA−53C，
TA−53b，TA−53a，TS−53，ATV−W26aお
よびATV−W26bは、それぞれ本明細書におけ
るTa−60a，Ta60b，Ta60c，Ts60，ATV19a
およびATV19bに相当する。またTP−W40，LP
−94，TP−W67およびTP−120はそれぞれ本明
細書におけるTpw40，Lp95，TsAおよびTp120
に相当する。 以下、本発明の実施例を示す。 実施例 １ Ta60a，Ta60c，ATV19aおよびATV19bモノ
クローナル抗体の製造： ATL由来培養株MT−２〔Gann71，155
（1980）〕の培養上清より採取分離した
〔Yoshida，H.et al：Primary and tertiary
structure of nucleic acids and cancer
research，M.Miwa et al.（EDS，Japan.Sci.
Soc.Press，Tokyo，pp 255−294，1982〕ウイ
ルス粒子蛋白分画を免疫原として用いた。 上記蛋白分画（蛋白量0.45mg）を免疫直前瞬時
にドライアイス含有エチルアルコール中にて凍結
し、再び37℃恒温槽にて融解せしめる凍結融解過
程を６回行つた後、完全フロイントアジユバント
0.02mlと混合し、BALB／Ｃマウス（８週令，24
ｇ）〔Charles River，Inc，Atsugi，Japan よ
り購入〕１匹の背面に皮下接種することにより免
疫した。この免疫を４週ごとに４回行い、最終免
疫４日目にマウスを殺し、脾臓を摘出し、常法に
より浮遊細胞を得た。 この脾臓浮遊細胞108個と、マウスミエローマ
MOPC−21NS／１細胞２×107個とを、42％
（Ｗ／Ｖ）ポリエチレングライコール（M.
W.4000，Koch−Light，Bucks，英国）および
15％（Ｖ／Ｖ）ジメチルスルホキシド（Merck，
Darmstadt，西独）をふくむリン酸緩衝液生理食
塩水（PBS）0.2ml中でUedaらの方法〔Proc.
Natl.Acad.Sci.USA 78，5122−5126（1981）〕に
従つて融合させた。 融合細胞は、HAT培地〔ヒポキサンチン1.36
mg／dl，アミノプテリン19.1μｇ／dl，チミジン
387μｇ／dl，ストレプトマイシン100μｇ／ml，
ペニシリン100単位／ml，グルタミン2mMおよ
び牛胎児血清10％を含むRPMI1640培地〔PH7.2〕
を用いて常法〔前記Uedaらの方法〕に従い選択
した。 得られた融合細胞３個を限界希釈法を３回繰返
すことによりクローン化した。得られたクローン
（３個）を、下記の方法で培養して、ATL関連抗
原に対して特異的に反応するモノクローナル抗体
を著量生産する株を得た。すなわち、５×106の
ハイブリドーマ細胞をストレプトマイシン100μ
ｇ／ml，ペニシリン100単位／ml，グルタミン
3.8ｇ／，牛胎児血清10％を含むRPMI1640培
地15mlを用い、150cm2のフラスコ内で95％CO2−
５％O2の存在下、37℃で７日間培養した。 得られた細胞株Ta60a，Ta60c，ATV19aおよ
びATV19bが生産するモノクローナル抗体をそ
れぞれTa60a，Ta−60c，ATV19aおよび
ATV19bとした。 この細胞株をマウスの腹腔内に投与する下記の
方法で培養するとTa60a，Ta60c，ATV19aおよ
びATV19bがそれぞれ３〜10mg／生成した。
すなわちマウス腹腔内にプリスタン0.5ml注射し、
その後３周目の腹腔に５×106個のハイブリドー
マ細胞を移植し、10日後に腹水を採取した。 実施例 ２ Ta60bおよびTs60モノクローナル抗体の製
造： ATL由来培養株MT−２〔Miyoshi、et、al：
Gann 71 155（1980）〕を107個マウス皮下に初回
免疫し、その３週後に２回目の免疫を同様に行
い、さらに３回目の免疫を107個腹腔内に注射し
た。その後４日目に、免疫マウスを殺し、脾臓細
胞を採取し、細胞融合を行つた。以下は実施例１
と同様に行い、Ta60bおよびTs60モノクローナ
ル抗体を得た。 実施例 ３ TsAモノクローナル抗体の製造： ATL患者末梢血より分離したATL細胞を107
個、マウス皮下に初回免疫し、その３週後に２回
目の免疫を同様に行い、さらに３回目の免疫を
107個腹腔内に注射した。その後４日目に免疫マ
ウスを殺し、脾臓細胞を採取し細胞融合を行つ
た。以下は実施例１と同様に行い、TsAモノク
ローナル抗体を得た。 実施例 ４ Tpw40，Tp120，Tsw32，Lp95，Ls70および
LsAモノクローナル抗体の製造： 混合培養４日目のリンパ球を採取し、洗滌後５
×106個の細胞をマウス皮下に初回免疫し、その
３週間後に２回目の免疫を同様に行い、さらに３
回目の免疫を107個腹腔内に注射した。その後４
日目に免疫マウスを殺し、脾臓細胞を採取し細胞
融合を行つた。以下は実施例１と同様に行い、標
記モノクローナル抗体を得た。 実施例 ５ TsBおよびTs145モノクローナル抗体の製造： プロテインＡ（PA）10μｇ／mlの存在下で、末
梢血リンパ球を３日間培養後、活性化リンパ球を
採取し、洗滌後５×106個の細胞をマウス皮下に
初回免疫し、その３週後に２回目の免疫を同様に
行い、さらに３回目の免疫を107個腹腔内に注射
した。その後４日目に免疫マウスを殺し、脾臓細
胞を採取し、細胞融合を行つた。以下は実施例１
と同様に行い、TsBおよびTs145モノクローナル
抗体を得た。 実施例 ６ モノクローナル抗体Ta60a，Ta60b，Ts60お
よびATV19aの各種培養株細胞ならびにヒト正
常血液細胞成分に対する反応性： 細胞表面抗原と標記モノクローナル抗体との反
応を調べる為に、マウス混合血球吸着試験〔Ｍ−
MHA〕〔前記〕および細胞質内抗原と抗体との
反応を検索する目的での間接螢光抗体法〔前記〕
を行つた。結果を第１表に示す。
【表】
【表】
この結果、Ta60a，Ta60bは同一反応性を示
し、これら両抗原は特にＴ細胞由来株のうち
ATLVまたはHTLVに関係ある（ATL−関連）
細胞に存在するのみで他のＴ細胞には存在してお
らず、RPM18402，HPB−ALL，MOLT−３，
JurkatおよびIL−２依存性のNK3.3株細胞には
陰性であつた。但し、Ｂ細胞株に対しては、Ｍ−
MHAでRaji，RPMI1788の２細胞株に陽性であ
つた。固型腫瘍細胞由来株は第１表に示したメラ
ノーマ株（SK−MEL−37，SK−MEL−33）な
らびに、肺癌，腎癌，胃癌，脳腫瘍株などはすべ
て陰性であつた。正常血液細胞に関しては、胸
腺，末梢白血球，単球，顆粒球、骨髄細胞を含め
てすべて陰性であつた。 Ts60は、ATL関連細胞（MT−２，HUT102，
HUT78）に存在するほかは、例外的にＴ細胞由
来のJurkat細胞に存在したのみで、他の培養株
細胞，正常細胞には存在していない。興味あるこ
とに、細胞質内抗原に対する螢光抗体法による結
果からは、Jurkatは陰性で、固型腫瘍のSK−
MEL−37に陽性であり、細胞膜抗原と存在の様
式を異にしている。 ATV19aは、細胞質内抗原で、ATL−関連細
胞であるMT−２，MT−１，HUT102および
ATN−１に存在するが、他の細胞にはすべて陰
性であつた。 実施例 ７ Ta60b，Ts60抗体の各種細胞に対する抗体価
の比較（Ｍ−MHA法による）： TA60bの抗体価を50％陽性値で比較すると、
MT−２，HUT102，MT−１，RPMI1788，
Rajiの順で、HUT78， Jurkatは陰性であつた。 MT−２，HUT102 ： 107〜8 MT−１ ： 107 RPMI1788，Raji ： 106 Ts60は、MT−２，HUT78，Jurkat，
HUT102に陽性で、MT−１，RPMI1788，Raji
には陰性であつた。 MT−２ ： 107〜8 HUT78，Jurkat，HUT102 ： 106 MT−１，RPMI1788，Raji ： 陰性 実施例 ８ 本発明モノクローナル抗体の正常血液細胞に対
する反応性（Ｍ−MHA法による）： 第２表に示すごとくTa60a，Ta60bは、ともに
無処理の末梢血液成分には全く反応しないが、下
記のマイトージエンを含有する培養液で培養する
とこれら両抗原が陽性となる。 IL−２ 10〜25％（Biotest 社，西独） フイトヘムアグルチニン（PHA）20〜50μ
ｇ／ml（GIBCO 社） コンカナバリンＡ（ConA）20〜25μｇ／ml
（GIBCO 社）一方、Ts60は、いかなる条件
下でも陰性であつた。
し、これら両抗原は特にＴ細胞由来株のうち
ATLVまたはHTLVに関係ある（ATL−関連）
細胞に存在するのみで他のＴ細胞には存在してお
らず、RPM18402，HPB−ALL，MOLT−３，
JurkatおよびIL−２依存性のNK3.3株細胞には
陰性であつた。但し、Ｂ細胞株に対しては、Ｍ−
MHAでRaji，RPMI1788の２細胞株に陽性であ
つた。固型腫瘍細胞由来株は第１表に示したメラ
ノーマ株（SK−MEL−37，SK−MEL−33）な
らびに、肺癌，腎癌，胃癌，脳腫瘍株などはすべ
て陰性であつた。正常血液細胞に関しては、胸
腺，末梢白血球，単球，顆粒球、骨髄細胞を含め
てすべて陰性であつた。 Ts60は、ATL関連細胞（MT−２，HUT102，
HUT78）に存在するほかは、例外的にＴ細胞由
来のJurkat細胞に存在したのみで、他の培養株
細胞，正常細胞には存在していない。興味あるこ
とに、細胞質内抗原に対する螢光抗体法による結
果からは、Jurkatは陰性で、固型腫瘍のSK−
MEL−37に陽性であり、細胞膜抗原と存在の様
式を異にしている。 ATV19aは、細胞質内抗原で、ATL−関連細
胞であるMT−２，MT−１，HUT102および
ATN−１に存在するが、他の細胞にはすべて陰
性であつた。 実施例 ７ Ta60b，Ts60抗体の各種細胞に対する抗体価
の比較（Ｍ−MHA法による）： TA60bの抗体価を50％陽性値で比較すると、
MT−２，HUT102，MT−１，RPMI1788，
Rajiの順で、HUT78， Jurkatは陰性であつた。 MT−２，HUT102 ： 107〜8 MT−１ ： 107 RPMI1788，Raji ： 106 Ts60は、MT−２，HUT78，Jurkat，
HUT102に陽性で、MT−１，RPMI1788，Raji
には陰性であつた。 MT−２ ： 107〜8 HUT78，Jurkat，HUT102 ： 106 MT−１，RPMI1788，Raji ： 陰性 実施例 ８ 本発明モノクローナル抗体の正常血液細胞に対
する反応性（Ｍ−MHA法による）： 第２表に示すごとくTa60a，Ta60bは、ともに
無処理の末梢血液成分には全く反応しないが、下
記のマイトージエンを含有する培養液で培養する
とこれら両抗原が陽性となる。 IL−２ 10〜25％（Biotest 社，西独） フイトヘムアグルチニン（PHA）20〜50μ
ｇ／ml（GIBCO 社） コンカナバリンＡ（ConA）20〜25μｇ／ml
（GIBCO 社）一方、Ts60は、いかなる条件
下でも陰性であつた。
【表】
実施例 ９
本発明モノクローナル抗体の造血器腫瘍細胞に
対する反応性（Ｍ−MHA法）： 造血器腫瘍79症例検索の結果を第３表に示す。
対する反応性（Ｍ−MHA法）： 造血器腫瘍79症例検索の結果を第３表に示す。
【表】
第３表中カツコで示した抗体価105以下の弱陽
性例を含めると、Ta60a，Ta60b両抗体とも
ATL症例全例に陽性で、他の細胞由来症例には
全て陰性であつた。Ｔ−CLLの１例が陽性であ
るが、この症例は既にプロバイラル（proviral）
DNAを有しており、臨床診断はＴ−CLLである
が、ATLとも考えられる。即ち、この両抗原は
ATLと鑑別診断上問題となるＴ由来細胞の悪性
造血器疾患に陰性であり、これら抗体は診断上有
用である。なお、これらの抗体は、Ｂ細胞由来の
Ｂ−CLL，Ｂ−ML（Ｂ細胞悪性リンパ腫）の一
部症例とも反応し、また骨髄性白血病（AMC）
の一部症例にも弱陽性ながら反応を示した。 一方、Ts60はすべての造血器疾患に陰性であ
つた。 実施例 10 本発明モノクローナル抗体のIL−２依存性細
胞に対する反応性： IL−２依存細胞株であるクローン化Ｔ細胞4E8
〔ツベルクリン陽性健常者の末梢血とPPD（結核
菌細胞膜抗原の一種）抗原とを試験管内で反応さ
せ、長期培養したＴ細胞株〕を96穴平底培養用プ
レート〔Falcon 社製〕に、各ウエル宛２×
104／0.2ml培養液（10％FCS含有RPMI1640培
地）で播き、室温で30分間各種濃度の抗体で反応
させた。 その後IL−２を最終濃度５％（Ｖ／Ｖ）になる
ように加えて５％CO2−95％O2，37℃で72時間培
養後、0.4μCiの3H−メチルーチミジンの４時間
の取り込みを見て、IL−２依存性細胞増殖阻止
を観察した。 その結果、Ta60aは10-2〜10-4濃度まで75％〜
95％の阻止率をまたTa60bは10-2〜10-4まで60％
以上の阻止率を示した。一方Ts60は、なんら細
胞増殖阻止効果を有していなかつた。 実施例 11 本発明モノクローナル抗体ATV19aの正常お
よび悪性造血器細胞に対する反応性（Ｍ−MHA
法による）を調べた結果を第４表に示す。
性例を含めると、Ta60a，Ta60b両抗体とも
ATL症例全例に陽性で、他の細胞由来症例には
全て陰性であつた。Ｔ−CLLの１例が陽性であ
るが、この症例は既にプロバイラル（proviral）
DNAを有しており、臨床診断はＴ−CLLである
が、ATLとも考えられる。即ち、この両抗原は
ATLと鑑別診断上問題となるＴ由来細胞の悪性
造血器疾患に陰性であり、これら抗体は診断上有
用である。なお、これらの抗体は、Ｂ細胞由来の
Ｂ−CLL，Ｂ−ML（Ｂ細胞悪性リンパ腫）の一
部症例とも反応し、また骨髄性白血病（AMC）
の一部症例にも弱陽性ながら反応を示した。 一方、Ts60はすべての造血器疾患に陰性であ
つた。 実施例 10 本発明モノクローナル抗体のIL−２依存性細
胞に対する反応性： IL−２依存細胞株であるクローン化Ｔ細胞4E8
〔ツベルクリン陽性健常者の末梢血とPPD（結核
菌細胞膜抗原の一種）抗原とを試験管内で反応さ
せ、長期培養したＴ細胞株〕を96穴平底培養用プ
レート〔Falcon 社製〕に、各ウエル宛２×
104／0.2ml培養液（10％FCS含有RPMI1640培
地）で播き、室温で30分間各種濃度の抗体で反応
させた。 その後IL−２を最終濃度５％（Ｖ／Ｖ）になる
ように加えて５％CO2−95％O2，37℃で72時間培
養後、0.4μCiの3H−メチルーチミジンの４時間
の取り込みを見て、IL−２依存性細胞増殖阻止
を観察した。 その結果、Ta60aは10-2〜10-4濃度まで75％〜
95％の阻止率をまたTa60bは10-2〜10-4まで60％
以上の阻止率を示した。一方Ts60は、なんら細
胞増殖阻止効果を有していなかつた。 実施例 11 本発明モノクローナル抗体ATV19aの正常お
よび悪性造血器細胞に対する反応性（Ｍ−MHA
法による）を調べた結果を第４表に示す。
【表】
【表】
＊ ３日間培養
実施例 12 ヒト白血球分化抗原を検出する９抗体の正常造
血器細胞に対する反応性： 第５表に示すごとく、Tpw40，Tp120抗体は、
末梢血Ｔ細胞の60〜80％に反応を示すが、Ｂ細
胞，単球，課粒球等には反応を示さない。 Tpw40抗体は、胸線細胞の大部分と反応を示
すが、Tp120抗体は、胸線細胞の30〜40％のみと
反応を示し、ともにpanT細胞抗原を検出してい
るが、その特異性においては、差異が見られた。 Tsw32，TsA，TsBおよびTs145の４抗体は、
末梢血Ｔ細胞のある一分画に反応を示したが、Ｂ
細胞，単球，顆粒球には反応を示さず、いわゆ
る、Ｔ細胞サブセツト抗原を検出していた。胸腺
細胞に対する反応性は、抗体間で異なつており、
Tsw32は80〜90％の胸腺細胞に反応を示したが、
TsB，Ts145抗体は、ごく一部の細胞に反応を示
したのみであつた。 Lp95抗体は、ほぼすべての白血球細胞群と反
応を示し、pan白血球抗原を検出すると考えられ
た。 Ls70およびLsA抗体はともに単球およびその
他の白血球と反応を示し、白血球の一部の細胞に
存在する抗原を検出していた。
実施例 12 ヒト白血球分化抗原を検出する９抗体の正常造
血器細胞に対する反応性： 第５表に示すごとく、Tpw40，Tp120抗体は、
末梢血Ｔ細胞の60〜80％に反応を示すが、Ｂ細
胞，単球，課粒球等には反応を示さない。 Tpw40抗体は、胸線細胞の大部分と反応を示
すが、Tp120抗体は、胸線細胞の30〜40％のみと
反応を示し、ともにpanT細胞抗原を検出してい
るが、その特異性においては、差異が見られた。 Tsw32，TsA，TsBおよびTs145の４抗体は、
末梢血Ｔ細胞のある一分画に反応を示したが、Ｂ
細胞，単球，顆粒球には反応を示さず、いわゆ
る、Ｔ細胞サブセツト抗原を検出していた。胸腺
細胞に対する反応性は、抗体間で異なつており、
Tsw32は80〜90％の胸腺細胞に反応を示したが、
TsB，Ts145抗体は、ごく一部の細胞に反応を示
したのみであつた。 Lp95抗体は、ほぼすべての白血球細胞群と反
応を示し、pan白血球抗原を検出すると考えられ
た。 Ls70およびLsA抗体はともに単球およびその
他の白血球と反応を示し、白血球の一部の細胞に
存在する抗原を検出していた。
【表】
期培養
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記第１〜６表に示される反応性を示し、
Ta60a，Ta60b，Ts60，ATV19a，Tpw40，
Tp120，TsA，TsB，Ts145，Lp95，Ls70およ
びLsAからなる群から選ばれ、ヒト白血球に存在
する抗原と反応するモノクローナル抗体。 【表】 【表】 【表】 【表】 【表】 【表】 【表】 ＊ ３日間培養
【表】 【表】 ２ ATL細胞、ATLV産生株、ATLV、混合培
養リンパ球、または活性化リンパ球で免疫して得
られたマウス脾細胞とマウスのミエローマ細胞と
を融合させ、得られたハイブリドーマを培養し、
倍養液中に、Ta60a，Ta60b，TS60，ATV19a，
Tpw40，Tp120，TsA，TsB，Ts145，Lp95，
Ls70およびLsAからなる群から選ばれ、ヒト白
血球に存在する抗原と反応するモノクローナル抗
体を分泌、蓄積せしめ、該倍養液から該モノクロ
ーナル抗体を採取することを特徴とする該ヒト白
血球に存在する抗原と反応するモノクローナル抗
体の製造法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58210381A JPS60231699A (ja) | 1983-11-09 | 1983-11-09 | 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗体 |
| US06/758,224 US4855235A (en) | 1983-11-09 | 1984-03-23 | Monoclonal antibodies to human leukocyte antigens |
| DE3490527A DE3490527C2 (ja) | 1983-11-09 | 1984-03-23 | |
| GB08517441A GB2163178B (en) | 1983-11-09 | 1984-03-23 | Novel monoclonal antibody |
| PCT/JP1984/000120 WO1985002188A1 (en) | 1983-11-09 | 1984-03-23 | Novel monoclonal antibody |
| DE19843490527 DE3490527T (de) | 1983-11-09 | 1984-03-23 | Neue monoklonale Antikörper |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58210381A JPS60231699A (ja) | 1983-11-09 | 1983-11-09 | 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60231699A JPS60231699A (ja) | 1985-11-18 |
| JPH0340B2 true JPH0340B2 (ja) | 1991-01-07 |
Family
ID=16588395
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58210381A Granted JPS60231699A (ja) | 1983-11-09 | 1983-11-09 | 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4855235A (ja) |
| JP (1) | JPS60231699A (ja) |
| DE (2) | DE3490527T (ja) |
| GB (1) | GB2163178B (ja) |
| WO (1) | WO1985002188A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0325489B1 (en) * | 1988-01-21 | 1994-01-19 | Becton, Dickinson and Company | Leu 23: Monoclonal antibody for monitoring leukocyte activation |
| FR2634126B1 (fr) * | 1988-07-13 | 1992-04-17 | Unicet Laboratoires | Anticorps monoclonal specifique pour un antigene de surface des cellules b activees et/ou des cellules t transformees par l'htlv-i, lignee de cellules d'hybridomes produisant cet anticorps, procede pour la detection de cellules t transformees par l'htlv-i et/ou de cellules b activees |
| US6342369B1 (en) * | 1997-05-15 | 2002-01-29 | Genentech, Inc. | Apo-2-receptor |
| DE69838249T3 (de) * | 1997-05-15 | 2012-01-19 | Genentech, Inc. | Anti-apo-2 antikörper |
| US20100152426A1 (en) * | 1997-05-15 | 2010-06-17 | Ashkenazi Avi J | Apo-2 receptor fusion proteins |
| JP2002517223A (ja) * | 1998-06-12 | 2002-06-18 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | モノクローナル抗体、交叉反応性抗体およびそれを生成する方法 |
| US6252050B1 (en) * | 1998-06-12 | 2001-06-26 | Genentech, Inc. | Method for making monoclonal antibodies and cross-reactive antibodies obtainable by the method |
| AUPR177400A0 (en) * | 2000-11-29 | 2000-12-21 | Cancerprobe Pty Ltd | Probes for identifying cancer-specific antigens |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55127321A (en) * | 1979-03-20 | 1980-10-02 | Ortho Pharma Corp | Crosssfertilization cell* antibody and method for manufacturing antibody against human t cell |
| JPS55145617A (en) * | 1979-04-26 | 1980-11-13 | Ortho Pharma Corp | Hybrid cell line* antibody and method for manufacturing complementtfixing monoclonal antibody against human t cell |
| JPS5695123A (en) * | 1979-12-04 | 1981-08-01 | Ortho Pharma Corp | Hybrid cell line* antibody and method for manufacturing monoclonal antibody to human prothymocyte cell |
| JPS5695122A (en) * | 1979-12-04 | 1981-08-01 | Ortho Pharma Corp | Hybrid cell line* antibody and method for manufacturing monoclonal antibody to human early thymocyte cell |
| JPS56103115A (en) * | 1980-01-08 | 1981-08-18 | Ortho Pharma Corp | Hybrid cell line* antibody and method for manufacturing monoclonal antibody to human t cell antigen |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4515894A (en) * | 1979-03-20 | 1985-05-07 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to human T cells |
| US4515895A (en) * | 1979-04-26 | 1985-05-07 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to human helper T cells |
| US4515893A (en) * | 1979-04-26 | 1985-05-07 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to human T cells |
| US4381295A (en) * | 1979-04-26 | 1983-04-26 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Monoclonal antibody to human helper T cells and methods of preparing same |
| US4637983A (en) * | 1979-10-09 | 1987-01-20 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to human cytotoxic and suppressor T cells, antibody, and methods |
| US4364933A (en) * | 1979-12-04 | 1982-12-21 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Monoclonal antibody to a human thymocyte antigen and methods of preparing same |
| US4614720A (en) * | 1980-01-08 | 1986-09-30 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human T cell antigen, antibody, and methods |
| US4364936A (en) * | 1980-01-08 | 1982-12-21 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Monoclonal antibody to a human monocyte antigen and methods of preparing same |
| EP0050129B1 (en) * | 1980-04-11 | 1992-03-18 | Celltech Limited | Monoclonal antibody |
| IL62965A0 (en) * | 1980-07-17 | 1981-07-31 | Scripps Miles Lab Inc | Monoclonal antibodies to drugs and theri production |
| AU530649B2 (en) * | 1981-01-28 | 1983-07-21 | Coats Patons Plc | Method of manufacturing monoclonal antibodies and capable of manufacturing such antibodies |
| US4443427A (en) * | 1982-06-21 | 1984-04-17 | Sidney Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibody |
| US4550086A (en) * | 1983-02-16 | 1985-10-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibodies that recognize human T cells |
| US4642925A (en) * | 1985-11-22 | 1987-02-17 | International Radiology Systems, Inc. | X-ray film mount |
-
1983
- 1983-11-09 JP JP58210381A patent/JPS60231699A/ja active Granted
-
1984
- 1984-03-23 DE DE19843490527 patent/DE3490527T/de active Pending
- 1984-03-23 US US06/758,224 patent/US4855235A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-03-23 DE DE3490527A patent/DE3490527C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-03-23 WO PCT/JP1984/000120 patent/WO1985002188A1/ja active Application Filing
- 1984-03-23 GB GB08517441A patent/GB2163178B/en not_active Expired
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55127321A (en) * | 1979-03-20 | 1980-10-02 | Ortho Pharma Corp | Crosssfertilization cell* antibody and method for manufacturing antibody against human t cell |
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| JPS5695123A (en) * | 1979-12-04 | 1981-08-01 | Ortho Pharma Corp | Hybrid cell line* antibody and method for manufacturing monoclonal antibody to human prothymocyte cell |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4855235A (en) | 1989-08-08 |
| GB8517441D0 (en) | 1985-08-14 |
| GB2163178B (en) | 1987-10-14 |
| DE3490527C2 (ja) | 1993-08-26 |
| JPS60231699A (ja) | 1985-11-18 |
| GB2163178A (en) | 1986-02-19 |
| DE3490527T (de) | 1985-11-14 |
| WO1985002188A1 (en) | 1985-05-23 |
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