JPH0331390B2

JPH0331390B2 -

Info

Publication number: JPH0331390B2
Application number: JP14933383A
Authority: JP
Inventors: Hirosuke Fukuda; Masao Kawamura; Seiichi Akutsu; Koichi Saga; Taiko Seo; Yasuto Ookubo
Original assignee: Sumitomo Seika Chemicals Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Seika Chemicals Co Ltd
Priority date: 1983-08-15
Filing date: 1983-08-15
Publication date: 1991-05-02
Also published as: JPS6040958A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、粒子表面に血液型物質を担持せしめ
た血液型物質感作ゼオライトに関する。さらに詳しくは、各種動物の胃粘膜、あるいは
人尿より調製したABO式血液型物質をゼオライ
ト粒子に担持せしめた血液型物質感作ゼオライト
粒子に関する。 ABO式血液型検査は、輸血など臨床面のみな
らず法医学や遺伝学においても重要な位置を占め
るものである。 ABO式血液型を判定するには、被験赤血球に
Ａ、Ｂいずれの型抗原が存在するかを抗Ａ、抗Ｂ
標準血清を用いて判定する「オモテ試験」と、被
験血清中の抗Ａ又は、抗Ｂ凝集素の有無を標準Ａ
型血球、Ｂ型血球を用いて判定する「ウラ試験」
の両方法があり、この両試験結果の一致から血液
型を決めるのが常法である。これら血液型判定に
用いる試薬に関しては、「オモテ試験」に用いる
標準血清には、国家検定の制度があり、標準化さ
れているが、「ウラ試験」に用いられる赤血球に
ついては、特に何らの規定も設けられていない。
通常は血液型のはつきりした人の赤血球を用いる
か、市販の血球試薬が用いられている。しかしな
がらこれらは、生きた細胞である赤血球を使用す
るため保存性が極めて悪く、又コスト的にも高く
つくなど難点が多い。ABO式の血液型判定にお
いては、オモテ、ウラ両試験を行なうのが常法で
あるが、上述の理由もあつて必ずしもウラ試験が
完全に行なわれていない。「従来、これに関連して血液型抗原を種々の担
体に担持させる試みも検討されてきた。実繁は酵
母Saccharomyces cerevisiaeをホルマリン及び
タンニン酸で固定化し、このものに血液型物質を
感作させたものがウラ試験に利用できると報告し
ている。（第27回日本輸血学会要旨集）、又、萩原
はポリスチレンラテツクスに血液型物質を感作す
る試みを報告しているが、（総合臨床14 445
（1965））抗血清との凝集は弱く実用に至つていな
い。本発明者らは、ABO式血液型判定におけるウ
ラ試験に赤血球を用いる従来法の難点を解決し、
被験血清中の抗Ａ、抗Ｂ凝集素を簡便に検出でき
る安定かつ安価な試薬を開発すべく鋭意研究を行
なつた結果、粒子表面に血液型物質を担持させた
血液型物質感作ゼオライト粒子を製造することに
成功し、これが抗Ａあるいは、抗Ｂ凝集素と特異
的に凝集することを見出し、本発明を完成するに
至つた。すなわち、本発明は人のABO式血液型物質を
担持せしめたゼオライト粒子に関するものであ
り、その目的とするところは、ABO式血液型判
定におけるウラ検査用の標準試薬を提供すること
にある。以下本発明をさらに詳細に説明する。ヒトのABO式血液型は、赤血球膜上の糖脂質
の糖鎖構造の相違によつて決定されることが知ら
れており、その構造及び生合成機構も明らかにさ
れている。一方、血液型活性を有する抗原物質す
なわち血液型物質は、単に赤血球だけに存在する
のではなく、各種の分泌液や種々の動物（豚、
牛、馬など）にも見出されている。例えば、Ａ型
の血液型物質はＡ型人の赤血球はもちろん、Ａ型
人の尿中や豚、山羊などの動物の胃粘膜にも存在
し、又、Ｂ型物質は馬、蛙、亀の胃粘膜やＢ型人
の尿中に存在する。本発明に用いるABO式血液型物質は、これら
適当な起源から従来より知られている方法で分離
精製することによつて容易に得られるものである
が、その目的から理解されるように、Ａ及びＢ型
物質が混在するようなものであつてはならないの
は言うまでもない。本発明の血液型物質感作ゼオライト粒子を製造
するために用いるゼオライトは、いわゆる結晶性
のアルミノ・シリケート含水塩であり、天然品で
も、合成品でもよいが、本発明のゼオライト粒子
の性能を効果的に発揮させるためには、粒径が
0.05〜100ミクロン好ましくは、0.1〜20ミクロン
の範囲で、粒径の揃つているものすなわち粒度分
布の巾の狭いものがよい。本発明に用いるゼオライトとしては、前述の粒
径の範囲のものを用いることが望ましく、通常Ａ
型ゼオライト、Ｚ型ゼオライト、Ｙ型ゼオライ
ト、モルデナイト、Ｌ型ゼオライト、Erionite、
Offretite、Ferrierite、ペンタシル型ゼオライト
（シリカ／アルミナモル比20−100又は100以上）
などが容易に入手でき、経済的である。その他の
合成ゼオライトとして、Anacline、
Gismondine、Bikitaite、Clinoptilolite、
Chabazite、Wairakite、Heulandite、Sodalite、
Thompsonite、Epistilbite、Harmotome、
Losod、Omega、ZK−５、Phillipsite、
Yagawaralite、Gemelinite、Faujasite、
Levyniteなどの他、構造系が未決定なゼオライ
トとして、ZSM−10、ZSM−８、ZSM−４など
も用いることができる。次に本発明の実施態様について説明する。ゼオライト粒子に血液型物質を担持させるに
は、PH４〜10の緩衝液中、分散濃度0.01〜１％の
ゼオライト粒子と、0.001〜１％の血液型物質と
を４〜60℃で15分〜６時間程度ゆるやかに撹拌し
ながら接触させることにより行なう。緩衝液とし
ては、例えは酢酸緩衝液、リン酸緩衝液又はグリ
シン緩衝液を用いればよい。反応終了後は、リン
酸緩衝液など中性付近の緩衝液で数回洗浄し、最
後に懸濁液にゼオライト粒子を懸濁し保存する。
懸濁液としては、リン酸緩衝液などに牛血清アル
ブミン（以下BSAと略記する）約0.1％、窒化ナ
トリウム（NaN₃）0.01〜0.5％添加したものを用
いる。これら感作ゼオライトは１年以上安定であ
る。このようにして得られた血液型物質感作ゼオラ
イトを用いてスライド法により、血清中の抗Ａ、
抗Ｂ凝集素を容易に判定することができる。すな
わち、スライドガラス板上の２カ所に被験血清を
各一滴ずつ滴下する。一方にＡ型物質感作ゼオラ
イトを他方にＢ型物質感作ゼオライトを一定量滴
下し、ゆるやかに撹拌する。凝集の有無を判定す
ることにより数分以内に容易に血液型を判定する
ことができる。これまでゼオライト粒子に血液型物質を感作し
た前例はなく、全く新規なものである。従来のラ
テツクスのような他の担体に担持させたものに比
し、凝集像が見やすい点、原料のゼオライトが安
価であり、経済性に優れた点、天然の赤血球を用
いる試薬の有効期間が３〜４週間であるのに対
し、１年以上安定で保存性がよい点など優れた点
が多い。本発明で得られる血液型物質感作ゼオライト
は、このように血液型検査のウラ検査用試薬とし
て用いられるばかりでなく、抗体中和剤や免疫吸
着剤としても利用することができる。すなわち、
抗体スクリーニングの際、被験血清中に血液型物
質感作ゼオライトを添加することにより、抗Ａ及
び／又は抗Ｂ抗体を吸着、除去することができ
る。又血漿中に含まれる抗Ａ又は／及び抗Ｂ抗体
を除去することにより、血液型に無関係に血漿成
分の輸血も可能となるものである。次に本発明を調製例及び実施例によつて、さら
に詳細に説明するが、これらによつて本発明が限
定されるものではない。調製例１豚Ａ型物質の調製豚の胃粘膜260ｇを蒸留水400mlに懸濁し、ミキ
サーにてホモジナイズする。ホモジネートを遠心
分離し、塩酸を用いて上清のPHを２に調整した
後、ペプシンを添加し、37℃にて４日間処理す
る。ペプシン消化後、遠心分離により沈殿を除い
た上清に、エタノールを加え70％飽和とする。生
成した沈殿を集め、エタノール及びエーテルで洗
浄、乾燥することにより粗Ａ型物質2.7ｇを得る。
得られた粗型物質を10ｍＭのリン酸緩衝液（PH
7.0）に溶解し、セフアロース4B樹脂を用いゲル
過を行なうことにより、精製Ａ型物質を得た。調製例２馬Ｂ型物質の調製馬の胃粘膜170ｇより、調製例１と同様にして
粗Ｂ型物質1.4ｇを得、さらにセフアロース4Bに
よるゲル過により精製Ｂ型物質を得た。実施例１Ａ型物質担持ゼオライトの調製ゼオライト（東洋ソーダ(株)製ゼオラムＦ−
９）を遠心沈降により20ミクロン以下の粒径のも
のを分取し、その分散濃度が0.25％になるよう
に、酢酸緩衝液に溶解したＡ型物質を添加する。
37℃２時間ゆるやかに撹拌しながら接触させた
後、遠心分離してゼオライト粒子を分取し、懸濁
液で洗浄後、同液を用いて0.25％になるように懸
濁してＡ型物質感作ゼオライトを得た。この感作
ゼオライトに抗Ａ血清を加えると凝集を起した
が、抗Ｂ血清では、凝集は認められなかつた。実施例２Ｂ型物質担持ゼオライトの調製実施例１と同様にしてＢ型物質をゼオライト粒
子に感作させた。得られたＢ型物質感作ゼオライ
トは、抗Ｂ血清とのみ凝集を起し、抗Ａ血清との
凝集は認められなかつた。実施例３各種ゼオライトを用いた型物質担持ゼオライト
の調製ゼオライトとして、第１表に示す各種のゼオラ
イト粒子（何れも、東洋ソーダ(株)製）を用い、実
施例１及び２の方法に従つて各種のＡ型及びＢ型
担持ゼオライトを調製した。これらＡ型及びＢ型
担持ゼオライトは、それぞれ抗Ａ及び抗Ｂ血清と
の特異的な凝集を起したが、ゼオライトの種類に
よる差は認められず、担体として広い範囲のゼオ
ライトが利用可能であることを示している。

【表】注＊分取、＋：凝集、−：非凝集
実施例４スライド法による血液型の判定実施例１及び２で調製したＡ型及びＢ型感作ゼ
オライトを用いて血液型の判定を行なつた。スライドガラス板上の２カ所に被験血清を各１
滴ずつ滴下する。ついで一方にＡ型感作ゼオライ
トを、他方にＢ型感作ゼオライトを１滴滴下し、
数分間ゆるやかに撹拌した後、凝集の有無を判定
する。このようにして、被験血清20例について得
られた結果は、第２表の通りであり、オモテ試験
の結果と完全に一致した。

【表】

Claims

【特許請求の範囲】１血液型物質をゼオライト粒子の表面に担持さ
せることを特徴とする血液型物質感作ゼオライト
粒子。２血液型物質が、豚胃粘膜に由来するＡ型物質
である特許請求の範囲１記載のゼオライト粒子。３血液型物質が、馬胃粘膜に由来するＢ型物質
である特許請求の範囲１記載のゼオライト粒子。４ゼオライト粒子が、粒径0.1〜20ミクロンの
天然又は合成ゼオライトである特許請求の範囲１
記載のゼオライト粒子。５ ABO血液型判定法におけるウラ試験用試薬
とする特許請求の範囲１記載のゼオライト粒子。