JPH03263401A - 新規糖鎖 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な糖鎖に関し、更に詳細には癌の診断及び
治療に有用な新規癌関連糖鎖に関する。

〔従来の技術〕

細胞膜上に存在する糖鎖は蛋白質、脂質等と結合し、糖
蛋白質、糖脂質として生体に広く存在する。このように
糖鎖の結合した糖蛋白質は酵素やホルモンとして、また
、浸透圧などの調節因子として生理機能の調節にあずか
っている。また薬物等の生理活性物質を標的臓器に運ぶ
役割を有する糖蛋白質も存在する。このように糖蛋白質
は生体にとって重要な物質であり、血漿蛋白質のほとん
どは糖蛋白質であるといわれている。

細胞表面の糖鎖抗原として重要なものに、血液型抗原が
知られている。血液型抗原としてよく知られているＡＢ
○（Ｈ）式血液型抗原のほか、ルイス式血液型抗原、Ｉ
ｉ式血液型抗原、Ｐ式血液型抗原なども糖鎖抗原である
（Ｊ、　Ｍ、　ＭｃＫｉｂｂｉｎ。

ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　　２
５７（２）＋　７５５〜７６０゜１９Ｂ２；　　Ｋ、　
　０．　　Ｌｌｏｙｄ、　　ｅｔ　　ａｌ、　Ｉｍｍｕ
ｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ。

１７、５３７〜５４１．１９８３）。

さらに、糖脂質は細胞の癌化に伴ってさまざまに変化し
、これら糖脂質は癌細胞膜関連抗原として、癌の診断、
治療で幅広く利用が試みられてい１− る（Ａ、　Ｂｒｏｗｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅ　Ｉｔｅｐｏｒｔｓ、　’Ａ。

１６３”４７０．　１９８３　　：Ｓ、Ｈａｋｏｍｏｒ
ｉ、　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、、　１１３（３）、　７９１
〜７９８．　］、９８３）。

一方、自己免疫疾患ｉ、出現する自己抗体１、゛は、自
己の糖鎖抗原を認識するものがル・なくない。枦１釦抗
原はこの場合、自己抗原と１７°Ｃ′重要な働きろ一゛
４る。

ところで、ピーＪ−ツツ凝集素（ＰＮＡ、）に対するレ
セプタ・〜は、シトのい（＝：、）かの癌細胞１・ご発
現されでおり、本発明者ら（よこの１．／　（ｒブタ−
（２）発現機構を探る研究の一１ｉ３としで、その糖鎖
構造σ）解析を行っＣきた。そして、先にこのレセプタ
ーをアルカリ分解し２．０−結合型糖鎖の主成分の２糖
と４糖の描Ｂｇを決宗し７だ（Ｎ、Ｓｈｉｍｏｄａ、　
ａｔ　ａｌ、、　Ｊ。

Ｂｉｏｃｈ１′！ｍ、、　１．０２．６５７〜６６４．
１．９８７）。

〔発明が解決しようとする課題〕

このようｊ、゛生体（コ゛おいて、糖鎖は蛋白質や、脂
質と結合して生命の維持に重要な働きを批５）てし）る
。従って、その本体を解明することは糖鎖の機能を明ら
かにすると具！：、病態との係わり′明らかにし、診断
、治療１、“栖用なもの“Ｃ・あるｘ：：、　（！から
、斯界で（よ５Ｌり多くの糖鎖の出現が望まれでいる。

従って、本発明の目的は病気の診断及び治療１、有用な
籾規糖鎖を提供ず−る。°、さＩＪある。３〔課題を解
決４るための下段、１ 本発明者等は癌細胞上（、゛表現きれ−ＣいるＰＮＡレ
セプターについでさらに（、、ｌＩ究を重ねてきた結果
、今般単離精製された次式（１）”Ｃ示される糖鎖が癌
細胞等の種々の疾患に関連しでいる、ことを見出し、本
発明を完成した。

すなわち、本発明は次の式（１） ％式％： （１） で示される新規な糖鎖に係るものＣ′ある。１本発明に
係る糖鎖（丁）は、例えば式（Ｉ）の糖鎖を認識するレ
クチンを用いで、細胞膜成分より式（Ｉ）の糖鎖を含有
する糖蛋白質及び／又は糖脂質を分離ｊ７、次いでその
糖蛋白質及び／又は糖脂質より糖鎖構６　’ｆ刊ｉ猟ｆ
　−１ｕ−Ｌ、め、ｆｌ’（製す−るこ）により製造さ
れる。

原料とし、て用いる細胞としでは、式（Ｉ）の糖鎖構造
を含イイする細胞で゛あればい４″れの細ｊ１←１でも
よいが、より好−Ｊｌ：Ｌ＜は細胞を大（ａｔご必要と
づるため株化細胞がよく、さらに好ましくは株化癌細胞
、よ（ツバ体向に（よＫ　Ａ、　Ｔ　Ｏ−ＩＩｆ胃癌細
胞等が例示できる。この細胞より細胞膜成分を取得４″
る１１．゛は、例えばホモノーイズ後超遠心分離すれば
よい。

具体的にｌｅｔ、細胞を適当な緩挿「液、例えばリン酸
緩衝液を含む生理食塩水等を細ボ・１隼煽θ）２〜・１
（）倍′！ｉ加えで、゛、細＋ｉａをホ士ジｊイザ”−
１超音波破砕機等ｉ：、＋、り低温の下で砂枠□Ｙ−る
９、破砕液を低温テパ超遠心分離を行えば細胞膜画分が
得られる１、なお、当該細胞膜両分は、次の糖蛋白質等
の分’ｉ’Ａ［ｍ　イｌｆ　ｉｚ先立−１ＣＳ可溶化後
再度超遠心分離（、より精製；７Ｃおくのが好ま１．い
。

得られた細胞膜両分により式（１）の糖鎖を含有する糖
蛋白質及び／又は糖脂質を分離するに（よ、適当な１ツ
クチンを用いで行なわれる。

糖蛋白質及び／又は塘ｌ指質を結合さｌるＩ、−めのレ
クラ゛ンとし、−Ｃはガフクト・−ス、あるし）は６Ｆ
１５１−３ＧａｌＮＡｃ　、Ｓａ’＋ルイハ７、−、Ｊ
　−７スを、Ｊ　Ｍ＠　ｉ−ルものであればなんでもよ
いが、５上り好よし７くはビーナツツ１ノクブン（ＰＮ
Ａ）　、Ｅマｌツクチン（ＲＣＡ）　、ミヤ」グリレク
チン（Ｌｏｔｕｓ）　、１：イエ１ヂ？’フンタゲレク
Ｊン（ＡＡ、１．、）が側車できる。

当該ｌ／クグンを用いて糖蛋白質等を分離−４る）、二
は、常法例えばｌ／クーｆンをリガンドとし、たアノイ
ー“−ラ゛イクｓｖ　−ｖ　）−グシソイーに、上−っ
て実施される。。

このレクチンを担持する抗体としては通常Ｂｒ［’：Ｎ
−７活性化セファＹ１−スやアガ１］−ス等の重合体が
使用できる。

１］　ｒ　ＣＮ　　活性化（・ソアロー又る用い℃、Ｌ
−クチンをカップリングさせるには、例えばＢｒＣＮ−
活性化セファロース４Ｂの適当量を取り、１ｍＭ−１１
Ｃｆｌによって膨潤させた後、同ＨＣＡ溶液で十分洗浄
して、カップリング緩衝液でさらに洗浄する。カップリ
ング緩衝液としては一般に０，５Ｍ塩化ナトリウムを含
む０．１　Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ８，３）が使用される。

カップリング緩衝液で洗浄したゲルをすばやくレクチン
溶液（２■／ｍ１ｌ）に加えて、ゲル溶液をシェイカー
により、室温で軽く４〜５時間振盪する。カップリング
の進行度合いはカップリングの前後に適当量をサンプリ
ングして、７００ｒｐｍで遠心分離後の上清の２８０ｎ
ｍにおける吸光度を測定することにより確認した。吸光
度が２８０　＜０．０１を示せば上清を捨て、ゲルにグ
リシン緩衝液を加えて洗浄し、さらにグリシン緩衝液の
存在下、４℃で一晩振盪した後、カップリング緩衝液４
００＋＋＋Ｉｌと酢酸緩衝液４００ｍｊ！で交互に３回
洗浄し、レクチンカップリング−セファロースを得るこ
とができる。

アフィニティクロマトグラフィー操作は常法に従って行
なわれる。なお、目的画分の検出は、蛋白を指標とする
のが好適である。

分離された糖蛋白質及び／又は糖脂質より糖鎖構造を脱
離させるには、例えばヒドラジン分解、プロテアーゼ消
化後のグリコペプチダーゼなどによる分解等が好ましい
。ヒドラジン分解は、例えば１００℃前後の温度で５〜
２０時間程度行うのが好ましい。

脱離した糖鎖よりの本発明糖鎖（Ｉ＞の単離は例えば次
の如くして行なわれる。すなわち、まず、遊離した糖鎖
をＮ−アセチル化後、イオン交換樹脂を用いて中性糖鎖
画分く８０％）と酸性糖鎖画分く２０％）に分離する。

次に中性糖鎖画分をゲル濾過、イオン交換クロマト等に
付せば、本発明糖鎖（Ｉ）が得られる。好ましい単離手
段は、中性糖鎖画分につき、■ゲル濾過、■２−アミノ
ピリジル化、■ゲル濾過、■陽イオン交換クロマト、■
ゲル濾過、■逆相クロマト、■順相クロマト及び■ゲル
濾過を順次行うことである。

なお、本発明糖６ｍ（Ｉ）の構造解析は、２次元糖鎖マ
ツプ法及びＩＨ−ＮＭＲスペクトルによって行った。

〔実施例〕 次に実施例を挙げて、本発明を更に詳細に説明する。

実施例 （１）細胞膜画分の分離 ＫＡＴ〇−■（ヒト印環癌細胞、胃癌）は３６ｋｉｇｕ
ｃｈｉ等の方法（Ｓｅｋｉｇｕｃｈｉ、　Ｍ、、　ｅｔ
　ａｌ、。

Ｊａｐ、　Ｊ、　Ｂｘｐ、　ＩＡｅｄ、、　４８．６１
〜６８．１９７８）にしたがって５％牛脂児血清を含む
ＲＰＭＩ−１６４０培地を用いて培養した。培養癌細胞
１２０ｇに対して４８０ｍｆｌのリン酸緩衝液を含む生
理食塩水（ＰＢＳ）を加えてテフロンホモジナイザー（
ブラウン社製）により細胞を破砕した。次いでこの細胞
破砕液を４℃、１００，０００　ｇで１時間遠心分離を
行った後、この沈渣２０ｇに対して１８０ｍＡの２％Ｔ
ｒｉｔｏｎＸ−１００を含むＥ緩衝液（０，８５％塩化
すｌ−ＩＪウム、２ｍＭ塩化マグネシウム、及び２ｍＭ
塩化カルシウムを含む１０ｍＭ）！Ｊス塩酸緩衝液、ｐ
Ｈ７，６）を加え、スターラーで１５分間撹拌した後、
氷水浴中で超音波処理により可溶化した。この溶液をス
イング型超遠心用遠心管に分注し、４℃、８０．０００
ｇ　（ＳＲＰ２８−ＳＡスイング型ローター日立製作所
製）で１時間３０分超遠心し、最上層の脂肪層を吸引除
去した後、上滑を得た。

（２）細胞膜画分より本発明糖鎖含有糖蛋白質の分離 ａ）　ＰＮＡ　−３ｅｐｈａｒｏｓｅ　４Ｂの調整Ｂｒ
ＣＮ−１性化セフアロース４Ｂ（ファルマシア社製）約
２０ｇに１ｍＭ　　ｔｌｃＩ１４００　ｍｊ２を加えて
室温で１５分間膨潤させた後、同溶液で洗浄し、次いで
カップリング緩衝液（０，５Ｍ塩化ナトリウムを含む０
．１Ｍ炭酸緩衝液、ｐ）１８．３）４００ｍｌで洗浄す
る。このゲルをすばや＜２ｍｇ／ｍｊ？ＰＮＡ　（生化
学工業製）溶液に加え、への字シェイカー（東京理科器
械製５Ｓ−８０）を用いて室温で約４〜５時間軽←振盪
する。ゲル溶液を７０Ｏｒｐｍで３分間遠心し、２８０
ｎｍで測定して上滑の吸光度が０，０１以下になれば上
滑を除去する。

０ ゲルにグリシン緩衛液を加λ、７００ｒｐ＋＋＋　、　
：３分間遠心洗浄後、ｆザ（、Ｆグリシン緩衝液２００
ｍＡを加えで、４℃で−・晩振盪する。ゲル溶液をガラ
スフィルター１ご移シ、５、吸引濾通［７ながらカップ
リング緩衝波線４００ｍＡで洗浄し、次いで０．５Ｍ塩
化ナトリウム４−含む０，１Ｍ酊酸緩衝液約４００ｍ１
で洗浄する３１．二の操作を交互に３囲枠０返１、た後
、２％　Ｔｒｉｔｏｎ　　Ｘ−１１００Ｅｔ＆衝液で平
衡化する。

１））−Ｊ”フィニティクロマトによる分離上記のカラ
ムに上記（１）で得られた細胞膜画分７００ｍ、Ｃをヘ
リスタポンプ（ＡＴＴＯＳＪ−１２１５）を用いて約４
５〜５０時間かけて添加する。次いで２％　Ｔｒｉｔｏ
ｎ　　Ｘ−１００Ｅ緩衝液で２４〜３６時間かけて洗浄
後、０，５％　Ｔｒｉｔｏｎ　　Ｘ−１００Ｅ緩衝液で
２４〜３６時間、さらにＱ、　１％　Ｔｒｉｔｏｎ　　
Ｘ−１００Ｅ緩衝液で２４〜３６時間かけ℃”洗浄４″
る。溶出は、０，２Ｍラクトースを含む０．　］％　Ｔ
ｒｉｔｏｎ　　Ｘ−１００ＦＪＷｆｆｉ液約２５０波線
２で２０〜２４時間かけで溶出し、溶出液は２００滴ず
つフックシ亀ンニコｌノクタ・−Ｃ→取し・たＱ各フラ
クションは２８０ｎｍ−び１汲光Ｊ９苓泪１１定して、
蚤内のピークを′よとめて゛ミーザルッ（す１゛ルトリ
ウス製、ミニザルッ　Ｓ　Ｍ−１６５３４）で除菌し、
透析用全１１ノアン１．１・〜ブ（和光紬薬製）に入れ
、４℃で生理食塩水５０００　ｍＲｉ、＝、対し４〜・
５日間透析°４る。この間８回外液を交換１、た、。

Ｃ）糖缶白質の精製−１ 上記１））で得られた分画試料液から、蛋白幇、）・し
て２０〜２５ｍｇ相当量、約７５ｍ１に２．５　Ｍ　）
リス塩酸緩衝液２０ｍ、ｉ！を加え、さらにＳ　ｌ）　
Ｓ（ドデシル硫酸す）　Ｕつ７４　、平井化学社製）を
１ｇ加えて溶解し、２５℃の超？１゛波洗浄器（ｖＩＥ
ＬＶＯ社製、ＶＳ−１５０型）内”Ｃ１５分間放置ｉ５
た１゜ついでこれにＤＴＴ　（ジチオスレイトール、平
井化学社製）２００ｍｇを溶解し、た０、　５　Ｍ　）
　Ｕス緩術液５１ＴＩｌを加え、室ｓ置換し、密閉し′
Ｃ２５℃で１２時間放置した。さらにこの反応液にＩＡ
Ａ（ヨードＪ′セト″ｒミド、平井化学社製）４００■
を溶解した０、　５　Ｍ　）　ＩＪス塩酸緩衝液１０ｍ
Ｉ！、を加エエ ２ え、２５℃ｒ　＋、　−２時間放置後、１０％　Ｔｒｉ
ｌ、０１］Ｘ〜１．００溶液ｌ　ｍｊ？を加える。次に
室温′ＱＯ，１％　Ｔｒｉｔｏｎ　　χ−９−１００　
　ＰＢＳ　　５０００　ｍｊ！に対して：３日間透析を
行う、この間外液を３回交換４″る。これらの操作は全
て無菌的に行、た。

ｄ）糖蜜白質の精製−２ ４℃のコールドチャンバー内において０．１％Ｔｒｉｔ
ｏｎ　　Ｘ−１，００ＰＢＳ−ｒ平衡化したＰ　Ｎ　Ａ
セファロース４Ｂカラムにペリスタポンプを用いて、」
二記Ｃ）で処理した試料を約１１ｊ〜２４時間かけで添
加した。−〕いで０．１％　Ｔｒｉｔｏｎ　　Ｘ１００
　　ＰＢＳ約］、０００　ｍＡで４８時間かけて洗浄し
、さらに０００１％Ｔｗｅｅｎ　８０　　ＰＢＳ約５約
５用０ ラクトース０。０１％Ｔｗｅｅｎ　８　０　　ＰＢＳ　
］、　０　０〜１２０＋ｎＡを用し）２４時間かけて溶
出し、５（］滴ずつ分取した１、各フラクションは波長
２　８　０　ｎ　ＩＴＩにお！Ｊる吸光度を測定し、景
白のピークを集ｙ）た、。

これをミニザルツで除菌し，て透析用チューブ１．：入
れ、４℃で０，０１％Ｔｗｅｅｎ　８　０　　生理食塩
水５０００１Ｔｌｌに対し−ご４〜５［］間、こＯ）間
外液を８回交換しながら透析した。透析後、さらにミニ
ザルツで除菌後、精製朝市白質標品は４℃Ｑ保存し，た
。

ｅ）糖缶内質より本発明糖鎖の単離 タンパク量で約８０ｍｇの精製糖缶１勺質（約４６０ｍ
Ａ）を水で１０倍希釈し限界濾過器（アミｖンＭＪ，　
１００００カツトオフ）で約５ｍｇ／ｎ＋ｊ！になるま
で濃縮した。テフロンバッキング何ねじ１−」試験管（
φＩＸ１０ｃｍ）６本に分注し凍結乾燥し、これをさら
にＰ２０，およびに叶存在下デシケーター中減圧下で４
５℃に加温しながら数円間乾燥させた。

無水ヒドラジンを試験管あたり０．４ｍｊｉずつ加え、
しっかりふたを閉めてヒートブＬ】ツクで１００℃で１
０時間反応させた。試験管を室温にもどした後ふたを開
けｆｉｌ１２ｓＯ．存在下デシケータ−中域圧下で一晩
ヒドラジンを除去し，た。数滴のトルエン添加および減
圧乾固を内容物の蒸気のｐ＋＋が８になるまで（り返し
た。７ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液および０．３
５ｍｊ！の無水酢酸を撹拌させながら加える操作を１０
同くり返した後、陽イ３ ４ オン交換樹脂［：Ｄｏｗａｘ　５　ｏｗｘ　８　Ｈ”　
ｆｏｒｍ（１００−２００ｍｅｓｈ）　７０　ｍｌ〕で
の素通り画分および樹脂量の５倍量（３５０＋ｎｊりの
水を流した素通り画分を採取した後凍結乾燥を行なった
。

凍結乾燥物を約１０ｍｊ！の水で再溶解し、陰イオン交
換樹脂［：ＡＧ−ＩＸ２　八ｃｅｔａｔｅ−ｆｏｒｍ（
２００−４００ｍａｓｈ）　２５０　ｍｊりでの素通り
画分および樹脂量の１０倍４ｊｌ　（２５０Ｏｎ＋Ｊ！
　）の水を流した素通り画分を採取した後エバポレータ
ーで濃縮した。これを１．５ｍｊ！の水で再溶解しゲル
濾過ＣＢ１ｏ−Ｇｅ１　Ｐ−４（φ１．５Ｘ９３ｃｍ　
１６４ｍｊ２、−４００ｍｅｓｈ　、　５５℃）〕を行
ない４糖以上の大きさの画分を採取した後、エバポレー
ターで約１０ｍｊ！まで濃縮した。

これを３４本のテフロンバッキング付ねじ口試験管に分
注しデシケータ−中で減圧乾固した後５００μｌの２−
アミノピリジン溶液１を各試験管に加え、よく溶解させ
ふたを閉めヒートブロックで１００℃　１５分間加熱し
た後さらに還元溶液＊２を３０μｌずつ加えよく混和さ
せふたをして９０℃で１５時間ヒートブロックで加熱し
た。

７本分の試験管の内容物を集め水を加え約５ｍ１ｌとし
た後１０ｍＭ炭酸水素アンモニウムで平衡化済の５ｅｐ
ｈａｄｅｘ　Ｇ　−１０（φ１．５Ｘ５６ｃｍ。

１００ｍ１を用いて素通り付近の画分を採取した。なお
この操作を５回くり返して行ない３４本分の全ての画分
を採取した。これをエバポレーターで濃縮後陽イオン交
換樹脂［Ｄｏｗｅｘ　５０　ＷＸ　２Ｈ”　ｆｏｒｍ　
（１００−２００ｍｅｓｈ）　３２０　ｍｊ２〕での吸
着画分を樹脂量の６倍量の０．５Ｎ−水酸化アンモニウ
ム溶液（２０００ｍｌｌ　）で溶出させエバポレーター
で濃縮した後１０ｍＭ炭酸水素アンモニウムで平衡化済
の５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−１０（φ１．　Ｏｘ　４５　
ｃｍ。

３５−）で再び素通り付近の画分を採取し、エバポレー
ターで濃縮した後０ＤＳ−８ｉｌｉｃａカラムの初期緩
衝液０を加え１．５ｎ＋ｊ！にした。

０ＤＳ−３ｉｌｉｃａのカラムを用いて、下記に示す条
件１３でサンプルを約３０回に分けてカラムに注入しく
図１）、グルコース単位で２８糖付近のピーク（図１中
、矢印のピーク）を分取しエバボレー５ ６ ターで濃縮した後、へｍ１ｄｅ−３ｉｌｉｃａカラムの
初期緩衝液１を加え２００μｌにした。続いてＡｍ１ｄ
ｅＳｉｌｉｃａカラムを用いて、下記に示す条件１でサ
ンプルを数回に分けてカラムに注入し、グルコース単位
で１０．６糖付近のピークを分取しエバポレーターで濃
縮した。１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム溶液２００μｌ
で再溶解し１０ｍＭ炭酸水素アンモニウムで平衡化済の
５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−１５（φ１．ＯＸ４５ｃｍ　　
３５＋ｒ＋ｊりでの素通り画分を採取し、エバポレータ
ーで乾固し本発明糖鎖を得た。

なお、上記実施例中で使用した試薬カラム条件は次の通
りである。

＊１２−アミノピリジン溶液； ２−アミノピリジン１ｇを１２　Ｎ−ＨＣｌ１０．７６
ｍ１に溶解したもの ＊２　還元溶液； ＮａＢ）ｌｓｃＮ　１０　ｍｇ−２−アミノピリジン溶
液２０μｌおよび水２５μｌの混合溶液（用時調製）＊
　３　０ＤＳ−３ｉｌｉｃａカラム　ＩＩＰＬｃ条件カ
ラム：　Ｓｈｉｍｐａｃｋ　ＣＬＣ−ＯＤＳ（０，６ｃ
ｍ　Ｘ　１５ｃｍ）島津流速：　１．０　＋＋＋１／＋
ｎｉｎ。

カラム温度：５５℃ Ａ　液：１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ３，８）Ｂ　液：
０．５％１−ブタノールを含むＡ液グラジェント条件：
　　Ｏｍｉｎ、−＋　１００ｍ１ｎ。

Ａ液　　８０％　　３０％ Ｂ液　　２０％　　７０％ ＊　４　　Ａｍ１ｄｅ−Ｓｉｌｉｃａカラム　ＨＰＬＣ
条件カラム：　ＴＳＫ−ＧＢＬ　Ａｍ１ｄｅ−８０（０
，４６ｃｍ　Ｘ　２５ｃｍ＞東ソー 流速：　１．　ＯｍＡ　／ｍｉｎ。

カラム温度＝４０℃ Ｃ液ニトリエチルアミンにてｐ）１７．３に調整した３
％酢酸水溶液とアセトニトリルの 混合液（混合比　３５：６５） Ｄ　液：上記Ｃ液組成の混合比の異なる混合液（混合比
　５０：５０） グラジェント条件：　　Ｏｍｉｎ　−＋　５０ｍ１ｎＣ
液　１００％　　　０％ Ｂ液　　　０％　１００％ ７ ８ なお各カラムで分離きれソ、−、ビーク（Ｄ検出は虫光
Ｅ−’ター（励起’ｌＪＪｉｍ　３２　［）　ｎｍ、測
定減反４００ｎｍ）で行ない各カラムの溶出位置の表示
は、デー１−ストランの加水分解物（／１−・：３１糖
）の２−　’ｊ”。

ノビリジル化物の溶出位置を基準に１２、その糖鎖数で
、コく　しノこ。

得られた本発明糖鎖ＯＪ）　Ｉ　Ｈ−Ｎ　Ｍ　Ｒ測ｆ結
果をンゴく”づ”。

ｉ　　Ｈ−、、、、、、−Ｎ　Ｍ　Ｒ測スｉ二条イノＩ
】Ｈ ＮＭＲ化学シフト値 （八ｎｏｍｅｒｉｃ−１１（＞ 注） 測定温度は３０℃、 但し。

０ （ ） は６０℃０ １Ｈ−ＮＭＲ化学シフト値 （Ｍｅｔｈｙｌ １１１） 注〉測定温度は３０℃、但しく　〉は６０℃。

〔発明の効果〕

本発明糖鎖は癌、リウマチ等の治療剤ああいは免疫賦活
剤として有用である。さらに本発明糖鎖に対する抗体を
用いれば癌、リウ°７チ等ω診断・治療にイｊ゛用であ
る。

２

【図面の簡単な説明】

図１は実施例ｅ）において、糖鎖画分を０ＤＳ−３ｉｌ
ｉｃａカラムを用いて分離した液体クロマクトゲラフイ
ーのパターンを示す図面である。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ）で示される糖鎖。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ）