JPH03261723A - 抗腫瘍物質の採取法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は漢方生薬狠毒からの抗腫瘍性物質の採取法に関
するものである。

（従来の技術） 漢方生薬は古い歴史をもつ人類の英知が結集されたもの
と云え、中弱大辞典（江蘇新医学院編、上湯人民出版社
、１９７７年）には６０００種以上の生薬の臨床効果が
記載されている。然しなから、漢方では単一の生薬を使
用することは殆んどなく、複数の生薬の合剤、またはそ
の前側が使用されるので、合剤その前側としての効果が
臨床的に判定されていることになる。中弱大辞典に抗腫
瘍効果が臨床的に認められると記載されている生薬は１
００種を越すが、いずれも合剤として使用された結果で
あり、抗腫瘍活性の本体が解明されているものは約半分
にすぎず、残りはその本体が解明されずに放置されてい
る。狠毒は中弱大辞典に癌の漢方薬として各種の生薬と
の合剤、その煎剤、として使用する旨記載されているが
、狠毒単独が抗腫瘍物質を含有するかどうか明らかにさ
れていない。

（本発明が解決しようとする課１り 本発明は、漢方で抗癌剤として臨床的に古くから合剤成
分に使用されている狠毒が、抗腫瘍物質を含有している
かを検討し、その採取法を確立することを目的としてい
る。

（課題を解決するための手段及び作用）上記の目的に沿
って検討した結果、狠毒が抗腫瘍物質を含有すると確認
できたので、効率よく抗腫瘍物質を狠毒より採取する方
法を検討して、その方法を確立することができた。即ち
狠毒を低級アルコール、例えばメタノール、または酸性
低級アルコールによって抽出し、溶媒を留去して抽出エ
キスをえる。この抽出エキスを水または稀アルカリ水溶
液に溶解し、水に混和しない有機溶媒、例えばエーテル
、クロロホルム、ｎ−ブタノール、で震盪した後、有機
溶媒層を採取し、有機溶媒を留去して活性物質をえる。

この活性物質はクロマトグラフなどの常法により精製し
、純品をえることができる。また、低級アルコール、酸
性低級アルコールの抽出エキスをそのま＼クロマトグラ
フなどの常法によって精製することもできる。

このように、漢方狠毒を新規方法で処理してえられた物
質の化学構造は決定されていないが、えられた物質は機
器分析の結果、芳香環を有する化合物と推定され、安定
な＃ｙＪｔで、以下に示すように強い抗腫瘍活性を有し
ている。

以下実施例をあげて、本発明を具体的に説明する。

裏廉班上 漢方生薬１ｋｇをメタノール５１で加熱還流しながら３
時間抽出し、冷後溶媒を減圧下留去すると、粗抽出物６
１ｇを得る。本粗抽出２５ｇを水７００−に溶解し、エ
ーテル３００ｄで３回抽出する。

エーテル層は溶媒を留去すると、Ｍ−Ｅ１２ｇを得る。

水層は凍結乾燥して、Ｍ−Ｈｌｏ、５ｇを得る。Ｍ−Ｅ
は分取薄層クロマト（逆相薄層板メルク社製Ｎ１１１５
３８９　）で、メタノール：水（５：１）で展開して、
原点より、蛍光吸収を指標として、７分画して、各、Ｍ
−１，Ｍ−２，Ｍ−３，Ｍ−４、Ｍ−５，Ｍ−６，Ｍ−
７とする。Ｍ−２を○ＤＳを用いた高速液体クロマトに
かけて、メタノール：水（５：１）で溶出すると、ｌ１
分、１２分、１９分に活性物質が溶出する。

実施■１ 狠毒、１ｋｇを０．１規定塩酸３％を含むメタノール５
０００ｄで煮沸還流しながら、３時間抽出する。

冷後、減圧下溶媒を留去し、粗抽出エキス約７０ｇを得
る。本物質１０ｇを水５００ｍに溶解し、エーテル２０
０ｄで３回抽出し、エーテル層は溶媒を留去して、活性
物１ｔ７ｇ　（ＣＥ−２）を得る。

水層は、稀アンモニア水でｐＦＩ８に調整した後、ｎ−
ブタノール２００ｄで３回抽出する。ｎ−ブタノール層
は溶媒を減圧下留去し、活性物’ｆ２ｇ（ＣＥ−１）を
得る。

前記ＣＢ−２，２ｇを水５０１ｄに溶解して、セファデ
ックスＬＨ−２０のカラムクロマトグラフ（カラム、４
ｃｍｘ６０ｃｍ）にかけて、メタノールで溶出して、フ
ラクションコレクターで、各Ｉ５−づつ、ＵＶ２５４ｎ
ｍで検出して分画する。

そして、Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅの５画分を得る。

各画分の収量はＡ：６０■、Ｂ：３００■、Ｃ：４５０
■、Ｄ：１４０■、Ｅニア００■である。

このうちＢ画分を更に分取薄層クロマト（逆相薄層板メ
ルク社製に１５３８９　）実施例１と同様に蛍光吸収を
指標として、原点より、Ｂ−１，Ｂ−２゜Ｂ−３，Ｂ−
４，Ｂ−５に分画して抽出、採取する。Ｂ−３画分を高
速液体クロマトで、ＳｈｉｍｐａｃｋＰｒｅｐ−〇ＤＳ
カラムを用いて、メタノール：水（５：１）で溶出する
と、１９分に活性物質が溶出する。本物質は、ＵＶ２５
２ｎｉに極大吸収を有し、Ｂ−３−１９と名づけた。ま
た、２８分に溶出する物質をＢ−３−２８，４０分に溶
出する物質をＢ−３−４０とした。

裏施尉主 マウス白血病由来の培養株細胞（Ｌ−１２１０）に対す
る試験管内での殺細胞作用 本発明により採取された活性物質を生理食塩水に溶解し
、１０％牛脂児血清を含むＩ？ＰＭＩ−１６４０培地中
で継代培養されている白血病細胞Ｌ−１２１０１，０Ｘ
１０５個／Ｉｄニ添加して３７°Ｃで４８時間５％炭酸
ガス培養器中で培養した後、対照群と試料添加群につい
てその生細胞をトリパンブルー染色によって検鏡してそ
れぞれの活性物質について５０％阻止濃度（ＩＣｓ。）
を求めた。その結果を第１表に示す。

試　　　料 −Ｅ −Ｈ −Ｉ −２ −３ −４ −５ −６− ７ Ｅ−２ −Ｉ −２ −３ −４ −５ 第１表 ＩＣｓ。

（＋ｓｃｇ／ｄ） １１０４圭 動物実験腫瘍Ｐ−３　８　８を用いる抗腫瘍試験雌のＢ
ＤＦ．マウスの腹腔内に、１週間１回継代されているＰ
−３　８　８の腹水癌細胞１．ＯＸｌｏ”個／マウスを
腹腔内に移植し、移植後２４時間より本発明の活性物質
を腹腔内に投与した。投与回数は１日１回５日間とし、
その生存日数を無処理群のそれと比較して、延命率を算
出した。その結果を表−２に示す。

試料 −Ｅ −Ｈ −１ −２ −３ −４ −５ −６− ７ Ｅ−２ −１ −２ −３ −４ −５ −３−１９ −３−２８ −３−４０ 表２ 投与量 ｌＯ■／ｋｇＸ５回 ＩＱ　　　ｎ　　　Ｘ５／１ ５　　　＃　　　Ｘ５＃ ５　　ｓ　　　Ｘ５／１ ５／／ＸＦ）Ｎ ５　　　ｔｔ　　　Ｘ５／１ ５　　ｔｔ　　　Ｘ５／１ ５　　〃　　×５〃 ５　　　／／　　　Ｘ５／１ ５Ｑ　　／／　　　Ｘ５／１ ５Ｑ　　　／／　　　Ｘ４／１ ５　　　ｔｔ　　　Ｘ５／１ ５　　　／／　　　Ｘ５／１ ５　　　／／　　　Ｘ５／／ １００　　／／　　　Ｘ５’／ １００　　／ｌ　　　Ｘ５／／ ２０　　〃　　×５〃 ２　　ｓ　　　Ｘ５／／ ２　　ｓ　　　Ｘ５／／ ２　　／／　　　Ｘ５／／ ２０　　〃　　×５〃 ２＃Ｘ５／／ ２　　　＃　　　Ｘ５＃ ２　　ｓ　　　Ｘ５／／ 延命率 ６０％ ２ ２ ３ ８ ７ ０ ７ ８ ９ ７ ３ ４ ３ ５ ０ ７ ０ ７ ２ ６ （効　果） 本発明により、漢方生薬狠毒中の抗腫瘍物質が抽出でき
たとともに、新規の抗腫瘍剤の製造が可能となった。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例２に示したセファデックス溶出クロマト
グラム図である。 第２図は実施例２に示した高速液体クロマトグラム図で
ある。 第３図はＢ−３−１９の紫外吸収図である。 高速液体クロマトグラフィ−

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）狠毒の低級アルコールまたは酸性低級アルコール
   抽出物を分配法およびまたはクロマトグラフィー法で蛍
   光およびまたはＵＶ２５４ｎｍ吸収を有するフラクショ
   ンを分取することを特徴とする狠毒より抗腫瘍物質の採
   取法。
2. （２）狠毒のメタノール抽出物を水不溶性有機溶媒で抽
   出し、該抽出物を分取薄層クロマトグラフィーで処理し
   、蛍光吸収を有するフラクションを分取する狠毒より抗
   腫瘍物質の採取法。
3. （３）狠毒の塩酸メタノール抽出物を水不溶性有機溶媒
   で抽出し、該抽出物をセファデックス処理し、ＵＶ２５
   ４ｎｍの吸収を有するフラクションを分取する狠毒より
   抗腫瘍物質の採取法。