JPH032567A

JPH032567A - 腺癌抗原結合方法及び試薬

Info

Publication number: JPH032567A
Application number: JP1190691A
Authority: JP
Inventors: Lloyd H Smith; ロイド・エイチ・スミス; Nelson N H Teng; ネルソン・エヌ・エイチ・テン
Original assignee: ASPEN DIAGNOSTICS CORP
Current assignee: ASPEN DIAGNOSTICS CORP
Priority date: 1988-07-25
Filing date: 1989-07-25
Publication date: 1991-01-08

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［発明の分野］本発明は診断、画像化及び治療方法、及び関連する癌マ
ーカー用試薬に関する。特に、本発明は新たに発見され
た腺癌抗原マーカー（ＡＤＣＡ）、及び該マーカーとの
優先的な抗体結合相互作用を含む診断、画像化及び治療
方法に関する。

［発明の背景］腫瘍マーカーは腫瘍の存在の生化学的インデイケータ−
である。本発明で「腫瘍マーカー」は腫瘍組織、血漿ま
たは他の体液中に検出し得る腫瘍由来分子をいう。

腫瘍マーカーは癌の診断及び地図化（ｍａｐｐｉｎｇ）
における臨床医薬において、治療に対する反応を求める
ため及びフォロー期間中の再発の表示として、用いられ
る。癌の組織病理学診断は組織バイオプシー（ｂｉｏｐ
ｓｉｅｓ）中の腫瘍マーカーを検出するために開発され
た、該マーカーと優先的に結合する抗体を使用する免疫
化学技術を包含する。放射免疫画像化及び放射線療法に
おいては、転移の場所を突き止め、地図化するため、ま
たは腫瘍に対し局所的に致死放射線照射を与えるため放
射標識したもしくはレッテルを付した抗体を用いる。

これらの方法は抗体と腫瘍マーカーとの選択的結合に依
存する。

癌について臨床的に有用であることか証明された腫瘍マ
ーカーはα−フエ］・プロティン、ガン胎芽抗原（ｃａ
ｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ）　、
ヒト絣毛膜ゴナドトロピン、ノノルシトニン、前立腺酸
ホスファターゼ、ＣＡ−１２５及び免疫グロブリンを包
含する。各マーカーはある特定の癌について有用である
ことが見い出された。新たに発見されたタンパク質腫瘍
マーツノ−は前立腺特異的抗原（前立腺癌）及び腫瘍結
合抗原（ＴＡ、−４）（子宮頚）を包含する。加えて発
癌遺伝子によって生産される癌マーカーの研究調査が進
展した。データに見い出されるマーカーの１つの制限は
非腫瘍組織におけるあるレベルでのそれらの存在である
。結果として、血清腫瘍マーカーパネル（ｐａｎｅｌｓ
）はある種の癌のより信頼し得る診断に対し示唆される
。

最近の技術の別の制限は腺癌のようなある一船釣タイブ
の癌に対する信頼し得るマーカーのないことである。

改良された癌の診断及び治療のためのモノクロナル抗体
（ＭＡｂｓ）の有用性は、血清学的診断、画像化及び治
療のための試薬としての癌結合抗原に対するマウスＭＡ
ｂｓを用いる増加する数の試行によって実証されている
。Ｍ　Ａ’　ｌ）可変領域は、常用形式の癌診断及び治
療と比較して高められた選択的容量を与える可能性があ
る多くの情報内容を有している。しかしながら、マウス
ＭＡｂＳの生体内での臨床的使用は、非経口マウスＭＡ
ｂｓを受けた実質的比率の患者が抗マウスＩｇ’反応を
起こすことから制限を受ける。かかる反応は多重度の投
与後によりしばしば起こり、免疫抑制治療にもかかわら
ず生じ得、また目的とする診断または治療効果の廃棄の
みならず好ましくない臨床的後遺症に帰結する恐れがあ
る。マウスＭＡｂＳの免疫原性を減じる試みは抗体断片
の利用または遺伝子操作したキメラヒト−マウスＭＡｂ
ｓの創造を包含する。

ＭＡｂ免疫原性問題に対してはヒトＭＡｂｓ（ｈ　Ｍ　
Ａ　ｂ　ｓ　）が魅力的であると考えられる。

ｈＭＡｂｓはマウスＭＡｂｓより生産がより困難で費用
がかかると考えられており、比較的少数例の、癌結合抗
原に対してよく特徴づけられたｈＭａｂｓが報告されて
きた。ヒ１への血清学的研究から、（１）高度に特異的
であるが、個々の腫瘍にしか見い出されない（「クラス
■」、（例えばＢ−細胞リンパ腫のイディオタイプ）、
（ｉｊ　）多くの正常組織にも見い出される高度に非特
異的な（「クラス■」、例えば血液グループ抗原）また
は（■１）同様な組織発生の腫瘍細胞によって発現され
るが正常細胞中の限定されたもしくは痕跡の分布におい
ては発現されない（「クラス■」、例えば分化（ｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）抗原）抗原の例を包含する
、スペクトルのタイプのヒトガン結合抗原は免疫原性を
有することが分った。ガン患者のリンパ球から得られた
ｈＭＡｂｓの反応性はこのスペクトルの特異性を概括し
、中間的（クラス■）特異性のｈＭＡｂｓが癌細胞によ
って所有され、正常細胞によっては殆ど発現されない抗
原を検出するために生産し用いることができることを示
唆しているように思われる。

［先行技術の開示］癌の診断及び予後における最近の技術の一般的調査はＶ
ｉｒｊｉら、ＣＡ−Ａ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｆｏｒＣ１１ｎｉｃｉａｎｓ、　　３８．１０４−１
２６　　（＋９８８）及びそこに引用された発表によっ
て提供される。

そこには、ある癌（Ｖｉｒｊｉ、１１６−１２０頁）に
おいて検出された発癌遺伝子の生産物の調査、及び血漿
や他の体液中の発癌遺伝子産物の検出は高度リスク群に
おける発癌遺伝子産物癌の検出のために有用である可能
性があるという示唆を含んでいる。

いくつかの研究所が癌結合抗原に対するｈＭＡｂｓの成
功的生成を報じた。Ｃｏｔｅ、　Ｒ，ら、Ｐｒｏｃ。

Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、米国、８３．２９
５９−２９６３（＋９８６）は種々の病気の患者からの
あるスペクＩ・ルの特異性を有する標的抗原を認識する
ｈＭＡｂｓの生成を報告した。正常組織の間で限られた
分布を有するが多重（ｍｕｌｔｉｐｌｅ）ヒト癌細胞系
による発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を有する分化型抗
原（クラス■）に対するｈＭＡｂｓの例、が明確に回収
された。他の人々はメラノーマ（Ｋａｎ−Ｍｉｌｅｈｅ
ｌｌ、　Ｊ、　　ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４６
．２４９０−２４９６（１，９８６）、白血病（Ｏｌ、
５ｓｏｎ、　Ｌ、ら、ＪＥｘｐ、　Ｍｅｄ、　　ｌ　５
９．５３７−５５０　（１９８４）、または胸（Ｓｃｈ
ｌｏｍ、　Ｊ、　　ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃ
ａｄＳｃｉ、、米国、７７．６８４１−６８４５　（１
９８０））、結腸（Ｈａｓｐｏｌ、　Ｍ、ら、Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｒｅｓ。

±１．３９５１．−３９６１．（１，９８５））及びＢ
ｏｒｕｐ−Ｃｈｒｉｓｔｅｎｃｅｎ、　Ｐ、　ら、＋ｎ
Ｌ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ、　　３７．６８３−６８８
　（１９８６））　、前立腺（１−ｏｍｅ。

Ｄ、ら、Ｊ、　Ｕｒｏｌ、上３２，７８０−７８５　（
１，９８４）　）　、頚（Ｈａｇｉｗａｒａ、　Ｈら、
Ｍｏ１．　ＢｉｏｌＭｅｄ、　　ｌ、２４５−２５２　
（１９８３）及び外陰（Ｇｌａｓｓｙ、　Ｍ、　Ｃａｎ
ｃｅｒ　Ｒｃｓ、±７，５１８１−５１８８　（１９８
７））の癌と結合した抗原を選択的に認識するヒトＭＡ
ｂｓの生成を報告した。

Ｇｌａｓｓｙは外陰の類表皮癌を含む多くのヒト癌細胞
系に存在する抗原を認識する、外陰癌患者から回収した
ヒｔ−ＩｇＧＭＡｂ　（ｖｔ、Ｎ５Ｇ２）を記述してい
る。免疫沈殿において、Ｖ　Ｌ　Ｎ　３　Ｇ　２は４８
ｋＤのポリペプチドを認識する。この抗原は本発明のＡ
ＤＣＡ抗原の分子量と同様な範囲の分子量を有するが、
ＡＤＣＡは外陰の３つの異なる鱗状の細胞癌と反応しな
いことが見い出された。

Ｂｏｒｕｐ−Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ、　Ｐ、　　ら、
　”ＩＪｃＬＡ　ｓｙｍｐｏｓｉａｏｎ　ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ　＆　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ、”　
（分子及び細胞生物学についてのＵ　ＣＬ　Ａシンポジ
ウム）、Ｊ、　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｂｉｏｃｂｅｍｉｓ
Ｌ＋ｙｏＳｕｐｐ、　　ｌ　２　Ｅ、　　ｌ　９８８．
１３６頁（Ｔ２０４）　（Ａｐｒｉｌ　１７　３０、＋
９８８）及びＥｒｂ、　Ｋ、ら「分子及び細胞生物学に
ついてのＵ　ＣＬ　Ａシンポジウム」、Ｊ、　Ｃｅｌｌ
ｕｌａｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　５ｕｐｐ−］　
２　Ｅ％　　Ｉ　９８８．１３７頁（Ｔ２０４）　（Ａ
ｐｒｉｌ　１７　３０．１９８８）は癌結合抗原に結合
する結腸直腸の癌を弱らせる（Ｊｒａｉｎ）　、リンパ
節からの３つのｈＭＡｂｓ。

ずなわち５９ｋＤ及び６１ｋＤの結腸癌細胞の２つの成
分に結合するＧ　４１．４６．４３　ｋ　Ｄの１つの成
分に結合するＢ９１６５及び３０〜３００ｋＤの数個の
成分に結合するＦ］１３４８を報告している。Ｂ９１６
５ＬＭＡｂｓは腺癌、優先的に内胚葉的に導かれた上皮
組織、例えば結腸直腸癌、乳房癌及び卵巣癌に結合した
抗原と反応するＴｇＭ抗体であったカベ正常組織結合は
乳房及び前立腺上皮に限定された。

Ｌ、　Ｈ−Ｓｍ１ｔｈＳＡ、　Ｙｉｎ、　Ｍ、　Ｂｉｅ
ｂｅｒ及びＮ、Ｎ、　ＨＴｅｎｇ、　Ｊ、　１ｍｍｕｎ
、　Ｍｅｔｈｏｄｓ、　　Ｉ　Ｏ５％　２６３　２７３
（１９８７）は患者のリンパ球及びヘテロミエローマ融
合パートナ−（ｈｅＬｅｒｏ＋ｎｙｅｌｏｍａ　ｆｕｓ
ｉｏｎｐａｒｔｎｅｒ）　Ｓ　ＨＭ　−Ｄ　３３を用い
ての卵巣癌結合抗原に対するｈＭＡｂｓの生成を報告し
た（米国特許４５７４１１６）。リストされたｈＭＡｂ
ｓの中で我々がＡＤＣＡ抗原と結合するのを見い出した
のはＭＳ２Ｂ６であった。

報告された癌結合抗原に対する何ダースものマウスＭＡ
ｂｓのうち、多くのものも卵巣癌に結合した抗原を認識
し、これらの抗原のうちいくつかはＡＤＣＡ抗原とある
種の特徴を共有する。癌結合抗原Ｃａ　Ｉ　　２５　（
Ｄａｖｉｓ、　Ｉｆ、ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ。

４６．６１４３−６１４８　（１９８６））、ＴＡＧ　
−７２（Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｖ、　　ら、Ｃａｎｃｅｒ
　Ｒｅｓ、　　４６．８５０−８５７　（１９８６））
、ＤＦ３抗原（Ｆｒｉｅｄｍａｎ、　Ｅ、　　ら、Ｃａ
ｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４６．５１８９−５１９４　（
１９８６））　、Ｉ−ＩＭＦＧ−２（Ｂｕｒｃｈｅｌｌ
、　Ｊ、　　ら、Ｊ、　Ｉｍｍｏｌ、１３１．５０８−
５１３　（１９８３））、Ｆ　３６／２２抗原（Ｃｒｏ
ｇ）＋ａｎ　、　Ｇ　　ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　
　４４．１９５４−１９６２　　（１９８４））、５Ｇ
Ａ（ｄｅＫｒｅｓｔｅｒ、Ｔら、Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｃａ
ｎｃｅｒ、３７．７０５−７１２（１９８６））　、Ｍ
Ｏｖ２抗原　（ＭｉｏＬｔｉ、　Ｓ、ら、Ｃａｎｃｅｒ
　Ｒｅｓ、　４５、８２６−８３２　　（＋９８５））
、ＩＤ、抗原（ＧａｎｇｏｐａｄｈｙａＶ、　Ａ、ら、
Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ。

４５．１７４４−１７５２　（１９８５））及びＤｕ−
Ｐａｎ−２抗原（Ｌａｎ、　Ｍ、ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒ
ｅｓ、　４５．３０５−３１０　（１９８５）は殆ど常
に上皮卵巣癌と共に見い出される。しかしながら、これ
らの抗原はすべて高分子量の糖タンパクまたはムチンで
あり、ＡＤＣＡ構造とは異なる。上記のごとく、ＡＤＣ
ＡはＣａｌ　　２５エピドープとは競合しないことが示
された。

ＡＤＣＡ抗原と同様な分子サイズ特性を有さないマウス
モノクローナル抗体によって、いくつかの卵巣癌結合抗
原が検出された。ＢｈａｔＬａｃｈａｒｙａＭ、ら、Ｃ
ａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４４．４５２８−４５３４（
１，９８４）は卵巣上皮癌及びその他の腺癌と結合し、
また正常類及び結腸に存在する抗Ｋ　ｇ　ｐ　４８（４
８ｋＤの糖タンパク）を記述した。ＡＤＣＡ抗原と異な
り、ｇｐ４８はホルマリン−サイズの脱パラフイン化組
織切片にも検出できた。同じグループ（ＢｈａｔＬａｃ
ｈａｒｙａ、　Ｍ、　　ら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、　　
４．１５３−１６２　（１９８５））は卵巣癌と結合し
た、脱パラフイン化切片に検出され、肝臓のみならず正
常肺胞にも存在する６　０　ｋ　Ｄの糖タンパクを記述
している。

Ｍｉｏｔｔｉ、　Ｓ　　ら、Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃ
ｅｒ、　　３９．２９７−３０３　（１９８７）は４８
−５０ｋＤ及び３８４０ｋＤの２つの、卵巣癌結合抗原
を特徴付けした。これらの抗原は免疫組織分析について
凍結切片を要するＡＤＣＡと同様脱パラフイン化組織で
は検出できなかった。４８−５０ｋＤの種は正常な胸、
膵臓、腎臓及び前立腺で検出されたが、３８−４０ｋＤ
抗原は正常組織では検出されなかった。しかしながら、
ＡＤＣＡ抗原と異なり、これらの抗原は検査されたムチ
ン卵巣癌には存在せず、また免疫沈殿によってのみ分析
でき、さらにＳＤＳサンプルバッファー中での煮沸によ
って抗原活性を失った。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、米国
８１．５６８５７２　（１９８４）　、Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａ、　２．２５３２６４（１，９８３）及びＣａｎｃ
ｅｒ　Ｒｅｓ、　　４７．６７４１−６７５０　（１９
８７）においてＭａｔｔｅｓ、　Ｍ。

らは卵巣癌細胞系及び腹水腫瘍細胞に対して生したマウ
スＭＡｂｓの組織的研究を行った。分析した多くのＭＡ
ｂｓ中、ＭＨ９９及びＭＷ２０７はＡＤＣＡ抗原と特徴
を共有する標的抗原を認識する。構造的に、ＭＨ９９抗
原は免疫プロットにおいて３８ｋＤ及び２９ｋＤのバン
ドとして現れる２つの明らかにジスルフィド結合したザ
ブユニットを有する。ＭＷ２０７抗原は３７ｋＤのハン
ドしか有さない。ＭＷ２０７抗原は気管支、肺、腎臓、
膵臓、甲状線、子宮内膜、ファロピアス管（ｆａｌｌｏ
ｐｉａｎ　ｔｕｂｅ）　、子宮頚内膜及び胸の正常上皮
中に検出されるが、中皮細胞には存在しなかった。しか
しながら、ＡＤＣＡ抗原と異なり、ＭＷ２０７の抗原活
性は還元条件下で破壊された。

Ｍｏ１ｄｅｎｈａｕｅｒ　　Ｇ、　ら、Ｂｒ１ｔｉｓｈ
、　Ｊ、　　Ｃａｎｃｅｒ。

５６．７１４−７２１　　（１９８７）はマウスＭＡｂ
ＨＥＡ１２５で免疫沈殿する３４ｋＤの癌でカーの上皮
特異的表面糖タンパクを報告した。

該抗体が異なる組織タイプの癌との間で十分には識別せ
ず、器官特異性を示さなかったという報告に基いて、該
エピト−プは広く分布し、この発明のＡＤＣＡＶｃＪＪ
Ｆ’とは非常に異なる分布を有するものと解される。

Ｔｓｕｊｉ、　ｙ、　　ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　
　４５．２３５８２３６２　（１９８５ａ）はヒト卵巣
上皮癌の２つの異なる表面エピドープと結合する。ムチ
ン癌細胞系０ＶＡ−］から導いたマウスＭＡｂｓ４Ｃ７
及び血清癌細胞系ｌ０Ｃ−２１から得た３Ｃ２を報告し
ている。これらのＭＡｂｓによる結合の分布はＡＤＣＡ
エピドープ分布と対応しない。

米国特許４１４５３３６は異性体積の癌胎芽抗ｇ（ＣＥ
Ａ）を記述している。このものは１８０２００ｋＤの分
子量を有し、３８　ｋ　Ｄの主成分分子量を有するＡＤ
ＣＡ構造とは明らかに異なっている。

米国特許４５８４２７８は卵巣組織から単離したＮＢ／
７０Ｋを精製する方法を記述し、それが５ＤＳ−ＰＡＧ
Ｅにおいて７０ｋＤで単一バンドとして存在することを
示している。米国特許４７１３３５１は抗原ＮＢ／７０
Ｋについてのアッセイ及びＭＡｂｓを記述している。分
子構造からＮＢ／７０にはＡＤＣＡと異なる。

米国特許４６６６８４５はいくつかの癌抗原を記述して
いる。卵巣癌細胞系２７７４のクロロホルムニメタノー
ル抽出物中に存在する脂質抗原ＭＤＩ４４はアクリルア
ミドゲルにおいて染料先端で移動した。ＡＤＣＡはＡＤ
ＣＡの５ＤＳ−ＰＡＧＥウェスタンプロット分析による
と非常に異なっており、ＭＳ２Ｂ６　　ＭＡｂは脂質抽
出物に結合しなかった。ＭＡ５５は組織切片中で反応せ
ず、明らかにＡＤＣＡと異なっている。ＭＦ６１も脂質
抗原であり、ＡＤＣＡと異なり甲状腺コロイドにも存在
する。ＭＦ　ｌ　１６はｌ　０５　ｋ　Ｄの糖タンパク
であり、１００℃での加熱で失活する。ＡＤＣＡとさら
に異なることに、この抗原は組織標本の免疫パーオキシ
ダーゼ検査で検出されなかった。

ＭＨ９４は皮膚の脂肪線に存在したが、ＡＤＣＡは皮膚
中の汗管上皮にしか存在が見い出されなかつｌこ。

ヨーロッパ特許出願ＥＰ８６３０９５１５．４及びＥＰ
８６３０９５１６．２はＭＡｂｓ２Ｇ３．１２０Ｈ７，
２００Ｆ９．２０４Ｆ４．２４５Ｅ７．３６９　Ｆ　＋
、　０．７８８Ｇ６及び８７１Ｅ３を開示するが、これ
らはすべて高分子量のムチン抗原を認識し、従ってＡＤ
ＣＡと異なる。同様に、ＭＡｂｓ　　９Ｃ６（７５ｋＤ
）、３３Ｆ８　（６６ｋＤ）、２６０Ｆ９　（５５ｋＤ
）　、２６６Ｂ２（５５ｋＤ）、４５１ｃ３　（９５ｋ
Ｄ）、４５４Ａ１２（９５ｋＤ）及び４５４Ｃ］　Ｉ　
（２００ｋＤ）はＡＤＣＡとは非常に異なる抗原構造を
有していた。ＭＡｂ　　４４Ｆ４は３９ｋＤの抗原をは
じめとするいくつかの抗原に結合したが、表２に示すよ
うに、ＡＤＣＡと異なり正常顆粒球に結合した。ＭＡｂ
ｓ３１７Ｇ５及び６５０Ｅ２は共にＡＤＣＡ抗原とサイ
ズで近似した４２ｋＤの抗原を認識するが、これらのＭ
ＡｂｓはＡＤＣＡと異なり正常肝臓に存在する抗原と結
合する（表１）。ＭＡｂ　　６５０Ｅ２も肺アス／＝　
（ａｓｃｉｎｉ）にも結合したが、ＭＳ２Ｂ６　　ＭＡ
ｂは気管支上皮にのみ結合した。ＭＡｂｓ４４Ｂ２．２
１９Ｆ３．２８０Ｄｌｌ　３８８Ｄ４及び４２１Ｅ８は
抗原分子量割り当て（ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ）をもたな
いが、組織分布に基いてＡＤＣＡから区別される。

組織分布の違いは次の通りである：４４Ｂ２Ｃ食道、肝
臓）、２１９Ｆ３（リンパ腫、食道、髪小胞、リンパ球
）、２８０Ｄ１１（リンパ腫、顆粒球、食道、肝臓、髪
小胞、皮膚上皮、リンパ球）及び３８８Ｄ４　（メラノ
ーマ、食道、皮膚上皮、皮脂腺）。

［発明の概要］患者中のＡＤＣＡ抗原エピドープを有する腺癌の存在を
決定する本発明方法は、患者からのサンプルをＡＤＣＡ
結合抗体とを接触させ、抗体とサンプル成分との結合を
測定することよりなる。サンプルは血液血清サンプル等
の流体サンプルまたは組織サンプルであることができる
。抗体はＭＳ２Ｂ６　１ｇＭ抗体等のヒトモノクローナ
ル抗体であることができる。

患者中のＡＤＣＡ抗原エピドープを有する腺癌の存在を
決定する本発明の方法は、患者からの血液血清サンプル
とＡＤＣ：Ａ抗原またはＡＤＣＡ抗イディオタイプ抗体
とを接触させ、ＡＤＣＡ抗原またはＡＤＣＡ抗イディオ
タイプ抗体とサンプル中の抗体との結合を測定すること
よりなる。

患者中のＡＤＣＡ抗原エピドープを有する腺癌の存在を
決定する本発明の方法は患者からの血液血清サンプルと
ＡＤＣＡ結合抗体とを接触させ、ＡＤＣＡ結合抗体とサ
ンプル中のＡＤＣＡ抗原との結合を測定することよりな
る。

腺癌を画像化する本発明の方法は腺癌であると疑われる
体組織に、それから画像が誘導される明瞭な性質を有す
るラベルに結合したＡＤＣＡ結合抗体を供給し、ついで
該組織を有する身体領域から画像を得ることよりなる。

この方法において、抗体はＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭ等のヒ
トモノクローナル抗体であることができる。該組織はＡ
ＤＣＡ抗原エピドープを有する卵巣もしくは非卵巣組織
であることができる。ラベルは放射ラベルであることが
でき、画像は腺癌であると疑われる組織を有する身体領
域からの放射能の検出から得ることができる。または、
ラベルは常磁性対比（ｃｏｎｔｒａｓｔ）ラベルである
ことができ、画像は腺癌であると疑われる組織を有する
身体領域のＮＭＲ測定によって得ることができる。

ＡＤＣＡ抗原エピドープを有する腺癌の放射線療法のた
めの本発明の方法は、腺癌組織に単独もしくは第２の処
理と共同で腺癌細胞の生殖（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
）を減じるのに有用な治療成分に結合したＡＤＣＡ結合
抗体を供給することよりなる。この方法の一面において
は治療成分はこれが結合する腺癌細胞に放射線を照射す
る。別の面においては、治療成分は細胞毒性もしくは細
胞活動停止剤であるか、または治療成分は第二の剤また
は放射線による作用を受けたとき細胞毒性もしくは細胞
活動停止剤を生成するよう働く。

本発明にはまたＭＳ２Ｂ６ハイブリドーマ、ＡＤＣＡ抗
原と優先的に結合する抗体（ＭＳ２Ｂ６ＩｇＭ抗体等の
ヒトモノクローナル抗体を含む）、及びＡＤＣＡ抗原か
含まれる。本発明はまた放射襟識もしくはＮＭＲ対比標
識等の画像化成分、細胞毒性もしくは細胞活動停止剤等
の治療成分、また！：Ｉ第二の剤もしくは放射線による
作用を受けたときに細胞毒性もしくは細胞活動停止剤を
生成するよう働く剤に複合化させたＡＤＣＡ結合抗体を
包含する。本発明はまた１以上の剤がバイアルまたは他
の包装に入れられた診断、画像化及び治療用キット理学
療法における」二記剤及び試薬を包含する。

Ｅ本発明の詳細な説明１本発明においてｒ　、Ａ　Ｄ　ＣΔ抗原」はＭ　Ｓ　２
　Ｂ　６ｈＭＡｂと優先的に結合する、腺癌エピドープ
または該エピドープを含有する組織断片を意味する。

この定義中には不均質（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｏｕｓ）　
ｉ織断片、精製均質断片組成物、及びユピト−プのＭＳ
２Ｂ５ｈＭＡｂとの結合性に本質的でない組織成分がな
い、単離されたエピドープが含まれる。

ｒＡＤＣＡ結合抗体」はＡＤＣＡ抗原と優先的に結合す
る、いずれかの種から得たモノクローナル及びポリクロ
ーナル抗体を包含するよう定義される。

本発明で用いる「抗体」はクラスＩｇＧ、ＴｇＭ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＤ及びＩｇＥ、及び断片、半抗体、及びＦａｂ
をはじめとする抗体のハイブリッド誘導体、及び抗体の
Ｆ（ａｂ’）２断片を包含するものとして定義される。

抗体はポリクロルナルまたはモノクローナルであること
ができる。一般に、モノクローナル抗体が本発明方法で
の使用に好適である。Ｍ　Ｓ　２　Ｂ　６　　ｈ　Ｍ　
Ａ　ｌ）はＩｇＭクラス抗体である。

本発明で用いるｒＡ　Ｄ　ＣＡ抗イディオタイプ抗体」
はＡ、　Ｄ　ＣＡ抗体と特異的に結合し、ＡＤＣＡ抗体
との結合についてＡＤＣＡ抗原と競合する抗イデイオタ
イプ抗体であるとして定義される。

ハイブリドーマＭＳ２Ｂ６　　（ＡＴＣＣＨＢ９７６５
）の誘導はＳｍ１ｔｈ、　Ｌ、ら、Ｊ、　１ｍｍｕｎｏ
１Ｍｅｔｈｏｄｓ、　　１０５−１２６３−２７３　　
（１９８７）に記述されており、この全内容を参考にこ
こに加入する。ＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭ抗体はこのハイブ
リドーマから血清フリー培地中で生産され、Ｇｏ　ｄ　
ｉ　ｎ　ｇ　＋Ｊ、　ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ　ＡＮＴＩ
ＢＯＤＩＥＳ　：　ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ　ＡＮＤＰＲ
ＡＣＴＩＣＥ、ニューヨーク：　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ
ｒｅｓｓ　９８１１８頁（１，９８３）に記述されたよ
うな常法によって精製される。この本の全内容及びそこ
で引用された文献をその全部において参考にここに加入
する。

抗体断片は常法により製造することができる。

ＭＳ２Ｂ６　　ｈＭＡｂはＧｏｄｉｎｇ、　Ｊ−（同上
、１２３−１２４頁）に記述されたようなタンパク分解
性断片化操作によって断片化してＦａｂ断片を生産する
ことができる。ＡＤＣＡ抗原から生産されるＭＡｂｓの
断片化はＧｏｄｉｎｇ、　Ｊ、　（同上、１１８−１２
３頁）に記述されたタンパク質分解方法によってＦａｂ
及びＦ（ａｂ’）２断片を生産するこどによって行うこ
とができる。

ＡＤＣＡ抗原は初め５ＤＳ−ＰＡＧＥ操作を用いるゲル
電気泳動によって単離した。より多くの量の抗原は中性
洗清で抽出した卵巣癌組織抽出物の、常用のアフィニテ
ィーカラム物質に結合したＭＳ　２　Ｂ　６を用いるア
フィニティークロマトグラフィーによって得ることがで
きる。組織抽出物のカラム地理及びカラムからのＡＤＣ
Ａ抗原の溶出は常法により行うことができる。タンパク
質を抽出し精製する適当な方法はＤａｖｉｓ、　Ｈ，ら
（同上）、Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｖ、ら（同−Ｌ）及びＦ
ｒｉｅｄｍａｎ、　Ｅ、　（同一に）に記述されており
、それらの全内容を参考にここに加入する。

ボリクＩ７−ナル抗体はポリクローナル抗体生産に用い
られる哺乳類を用いて常法によって製造することができ
る。一般にウサギ、モルモットまたまヤギが十分である
。抗体の生産において、予め定めた量のＡＤＣＡ抗原を
生理食塩溶液で適当な濃度に希釈する。この希釈溶液を
完全７０インドアシユパンｌ゛（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ　ａ
ｄｊｕｖａｎｔ）と混合してさらに希釈してエマルジョ
ンとする。ついで懸濁液を哺乳類に投与する。例えば、
懸乳液を腹腔内、筋肉内または皮下ルートからウサギ（
ｒａｂｂｉｔ）に１回につき０．０５ｍｇから最大非致
死用量（抗原の５ｍｇはとの高い量であることができる
）の量投与することかでき、投与は２〜１０ケ月間隔週
続することができる。抗体力価か十分に高められたとき
、一般に懸濁液の最後のチャレンジ投与後１〜２週間目
に哺乳類から採血する。動物から取り出した血液を遠心
分離に付して抗体を含有する血清を分離する。

ついでポリクローナル抗体血清をＭｉｓｈｅｌｌ及びＳ
ｈｉｌｇｉ、５ＥＬＥＣＴＥＤ　ＭＥＴＨＯＤＳ　ＩＮ
　ＣＥＬＬＵＬＡＲＩＭＭＵＮＯＬｏｃｙ、ザンフラン
シスコ、Ｆｒｅｅｍａｎ　（１９８０）に記述されたよ
うな常用のアフィニティークロマトグラフィー技術を用
いてアフィニティー精製する（この文献の全内容を参考
にここに加入する）。

アフィニティークロマトグラフィーに使用するのに適当
な吸着拐はＭＳ２Ｂ６１ｇＭ抗体が共有結合する架橋ア
ガロース及び架橋ボリアクリルア２；３ミドを包含する。

これらの方法においては、抗体溶液をリン酸塩で緩衝化
した食塩溶液中でカラムに適用し、抗体を２．５ＭＮａ
５ＣＮ溶液、ｐＨ８、０で溶出することができる。抗体
濃縮は、必要に応じ、減圧透析もしくは超遠心によって
行うことができる。抗体溶液は４°Ｃ以下の温度で安定
である。

本発明の非ヒトモノクローナル抗体はＡＤＣＡ抗原から
製造し、上記と同様にして精製することができるが、こ
れらの抗体は常法に従って、−船釣にＫｏｈｌｅｒ及び
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、　Ｎａｔｕｒｅ　２５６　、　４９
５−４９７　（１９７５）の方法に従って製造する。

より最近の発展はＧｏｌｄｉｎｇ、　Ｊ、　（既出、５
６−９７頁）に概説されている。一般に７１イブリド−
マはマウスまたはラットをＡＤＣＡで免疫化して製造す
る。雌性Ａ／Ｊマウス（Ｈ−２８／％プロタイプ、Ｊａ
ｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｓｓ、Ｂａｒ　Ｈａ
ｒｂｏｒ、Ｍ　Ｅ　）が好ましいが、他のマウスもしく
はラット株の使用も意図するものである。免疫化スケジ
ュール及び懸濁液中の抗原の濃度は有用量の適度にプラ
イムされた牌細胞（ｐｒｉｍｅｄ　ｓｐ＋ｅｎｏｃｙｔ
ｅｓ）及び／またはリンパ球を生産するようなものでな
ければならない。懸濁した牌細胞を適当な融合促進剤を
用いて適当な細胞系からのマウスもしくはラットミ不ロ
ーマ細胞と融合さセる。かかる促進剤はセンダイウィル
ス、ポリエチレングリコールまたは電場であることがで
きる。多くのミエローマ細胞系が公知であり、一般に学
術団体のメンバーやアメリカンタイプカルチャーコレク
ション、ロックビル、Ｍｄ等の種々の寄託バンクから入
手し得る。

Ｂａ１ｂ／Ｃミエローマ細胞系か好ましい。用いられる
ミエローマ細胞系は非融合細胞が選択培地で生残せず、
ハイブリドーマが生残するようにするため中程度の感受
性を有することか好ましい。

もつとも通常のクラスは酵素ヒポキザンチノグアニノホ
スホリボンルトランス７エラ−ゼを欠き、従ってＨＡＴ
（ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン）によ
って支持されない８−アザグアニン抵抗性細胞系である
。用いるミエローマ細胞系は抗体を産生じないという意
味でいわゆる「非分泌ｊ型であることが一般に好ましい
が、分泌型も用いることができる。好ましい融合促進剤
は平均分子量約１０００〜４０００のポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ　　１０００等として市販されている）
であるか、この分野で既知の他の融合促進剤も用いるこ
とができる。

ついでハイブリドーマを含有する各容器（穴）中の上溝
をＡＤＣＡと選択的に結合する抗体の存在について検査
する。スクリーニングに適した方法はＧｏｄｉｎｇ、　
Ｊ、　Ｗ、　（既出、７：２−８４頁）に記述されてい
る。１つの特に適した方法は微量力価］・シー穴等の不
活性支持体に結合した抗マウス免疫グロブリンと、ラベ
ル化ＡＤＣＡと培養上清の混合物との間の競争、または
不溶化した抗マウス免疫グロブリンと、ラベル化ＡＤＣ
Ａと培養上清の混合物との間の競争を包含し、不溶性支
持体に結合したラベルの量を読んで上清と培養上清中の
抗体との結合を測定する。別の適当な方法は、滴中の培
養上清を選ばれた同位元素が付着した二゛トロセルロー
ス紙の層に適用し、紙屑をすすぎ、紙層を紙屑に結合し
た抗体のＦｃ部分に結合する色素標識した抗体もしくは
蛍光標識した抗体とを接触させ、紙層をすすいで未結合
標識抗体を除去し、紙層を検査して滴を適用した場合の
結合色素また蛍光発生素（ｆ　ｌｕｏｒｏｇｅｎ）がは
っきり表われているかどうかを決定することよりなる。

自動トレリーダー（ｒ６ａｄｅｒｓ）を、不溶性表面に
付着したタンパク質に結合する抗体を生成するハイブリ
ドマを有する穴を迅速に同定するために用いることがで
きる。

目的とするハイブリドーマを選択し、クローン化した後
、それを適当な培地中での生体外培養に付し、ついで上
清から抗体を回収することによって抗体を生産すること
ができる。別法として、ハイブリドーマをマウス、好ま
しくは有性生殖（ｓｙｎｇｅｎ　ｉｃ）または生育性生
殖（ｓｅｍｉｓｙｎｇｅｎｉｃ）マウスに注入する。ハ
イブリドーマは適当なインキュベーション時間後抗体産
生腫瘍を形成する。

これらの腫瘍は宿主マウスの腹腔滲出液（腹水）に高濃
度の目的抗体（約５　２０　ｍＢ／　＋ｎＱ＞を生産す
る。宿主マウスは血液及び腹水に正常抗体も有している
が、正常抗体の濃度は目的とするモノクローナル抗体の
濃度の約５％にしかすぎない。

本発明の抗体及び抗原は診断、画像化及び治療方法に有
用な多くの成分（ｍｏｉｃｔｉｅｓ）と結合させる（ｃ
ｏｕｐｌｅ）ことができる。一般にかかる診断用ラベル
成分を抗体に結合させるのに適した手法（以下に述へる
）は該成分を免疫診断の目的でＡＤＣＡ抗原に結合する
ためにも用いることができる。

ＡＤＣＡ抗イディオタイプ抗体はＡＤＣＡ抗原からＣｈ
ｅｍ、　Ｐ、　　ら、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　　ｌ
　６２．４８７−５００　（１９８５）及びＰＴＣ出願
第８５０２９０９号及びＥＰ出願第１４１７８３号に記
述した如き方法によって製造することができる。ＡＤＣ
Ａ抗原に対するモノクローナル抗イデイオタイプ抗体は
米国特許４５１３０８８に記述した手法により製造する
ことができる。

ポリクローナル抗イデイオタイプ抗体はＡＤＣＡで免疫
化して得た動物血清を、当分野で周知の常法によってＭ
６２Ｂ６　　ｈＭＡｂ抗体を共有結合させたカラムに通
塔することにより製造することができる。残余の血清を
すすぎ流した後、カラムを酢酸すｌ・リウムバツ７ア−
等の適当なバッファーで溶出して分離した抗イデイオタ
イプ抗体を流し出し、溶出液を透析して常法により小さ
な分子を除去する。

モノクローナル抗イデイオタイプ抗体は精製したＡＤＣ
Ａ抗原またはＭ６２Ｂ６　　ｈＭＡｂ抗体で免疫化した
マウスのハイブリッド化した１Ｂ胞からクローンをスク
リーニングし、Ｍ６２Ｂ６ｈＭＡｂと結合する抗体を生
産するクローンに対する穴をスクリーニングすることに
よって製造することができる。微量穴（ｍｉｃｒｏｗｅ
ｌｌ）に結合したＭ６２Ｂ６をハイブリッドーマ上清と
共に抗体抗原結合が起こるに十分な時間インキュベート
し、上溝を穴から除去し、穴をすすぐ。ついて穴を酵素
ラベル化ヤギもしくはウサギ抗１ｇもしくは抗１ｇＭ抗
体と共に抗体抗原結合が起こるに十分な時間インキュベ
−１−Ｌ、残りをすすぎによって穴から除去する。つい
で酵素の存在下に発色団もしくは蛍光団（ｆ　１ｕｏｒ
ｏｐｈｏｒｅ）を生ずる物質を穴に加え、発色団もしく
は蛍光団の存在をクロン選択の目安として用いる。無関
係の（ｉｒｒｅｌｅｖａｎｔ）ＩｇＭを有するコントロ
ール穴もテストする必要がある。ＭＳ２Ｂ６　　ｈＭＡ
ｂに対して活性を有するか無関係のヒトＭＡｂには活性
を有しない抗体のみが抗イデイオタイプ候補者である。

好ましくはこれらはＭＳ２Ｂ６　　ＭＡｂのＡＤＣＡ抗
原どの結合を阻害するか競合するよう選ぶべきである。

本発明の放射ラベル化抗体は生体外診断テストに用いる
ことができる。標的抗体の特異的活性は放射性ラベルの
半減期、同位体純度及びラベルの抗体への移入方法に依
存する。表Ａはいくつかの通常用いらｔ’する同位元素
、それらの比活性及び半減期を示す。免疫アッセイテス
トにおいては一般Ｑこ比活性が高くなるはと感度がよく
なる。

表Ａ１４Ｃ６，２５Ｘ　１０’　　　　　　５７２０年３　
Ｈ２，９１Ｘ　１０’　　　　　　１２．５年３５Ｓ　
　　　　　　　　］、、５０Ｘ　１０’　　　　　　　
　８７日１２５　Ｉ２．１８Ｘ　１０６６０日３２、　　　　　　　　３．１６Ｘ　１０’　　　　　
　　１４．３日１３１　、　　　　　　　　１．６２Ｘ
　１０’　　　　　　　８．１日表Ａにリストした放射
性同位元素による抗体のラベル化方法は当分野で一般に
知られている。トリチウムラベル化方法は例えは米国特
許４３０２４３８に記述されている。不ズミのモノクロ
ーナル抗体に特に適するヨード化、トリチウムラベル化
及び３５３ラベル化操作はＧｏｄｉｎｇ、　Ｊ、　Ｗ、
　（既出、１２４−１２６頁）及びその引用文献に記述
されでいる。抗体をヨード化する他の手法はＨｕｎＬｅ
ｒ及びＧｒｅｅｎｗｏｏｄＸＮａｔｕｒ七↓１．９４５
　（１９６２）及びＤａｖｉｄ　ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　Ｉ　３．１０１４１０２１　（１９７４）及
び米国特許３８６７５１７及び４３７６１１０に記述さ
れている。

放射ラベル抗体は画像化及び放射線療法にも用いること
ができる。画像化で有用な放射ラベル化元素は例えは　
＋２Ｊ、＋３１１、ＩＩＩ　（ｎ及び９９”Ｔｃを包含
する。抗体をヨード化する手法はＧｒｅｅｎｗｏｏｄ、
　Ｆ、　　ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　　８９、ｌ　
］、　Ｉ４２３　（］　Ｉ９６３　）　；　Ｍａｒｃｈ
ａｌｏｎｉｓ、　Ｊ、　ＢｉｏｃｈｅｍＪ、追上ｌ、２
９９−３０５　（１９６９）及びＭｏｒｒｉｓｏｎ、　
Ｍ、らＩｍｍｕｎｏｃｂｅｍｉｓｔｒｙ　８．２８９２
９７（１９７１）に記述されている。９９”Ｔｃラベル
化の手法はＢｕｒｃｂｉｅｌ、　Ｓ、ら編、ＴＵＭＯＲ
ＩＭＡＧＩＮＧ　：　ＴＨＥ　ＲＡＤＩＯＩＭＭＵＮＯ
ＣＨＥＭＩＣＡＩ、ＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦ　ＣＡＮＣ
ＥＲ（腫瘍画像化：癌の放射免疫化学的検出）、ニュー
ヨーク：Ｍａｓｓｏｎ　　１１１−１２３（Ｒｈｏｄｅ
ｓら）、（１９ｇ２）及びその引用文献に記述されてい
る。　１目Ｉｎラベル化抗体に適した手法はＨｎａｔｏ
ｗｉｃｈ、　Ｄ、　Ｊ、ら、Ｊ、　Ｉｍｍｕｌ、　Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ６５．１４７−１５７（１９８３）、）ｌｎ
ａＬｏｗｉｃｈ　　ＤＪ、ら、５ｃｉｅｎｃｅ　２２０
．　６１３　６１５（１９８３）、Ｈｎａｔｏｗｉｃｈ
、　Ｄ、　　ら、Ｊ、　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｒａｄｉａｔ
ｉｏｎ３５．５５４．−５５７　（１９８４）及びＢｕ
ｃｋ　Ｉｅｙ　。

Ｒ，Ｇ　　ら、Ｆ、　Ｅ、　Ｂ、　Ｓ、１旦１．２０２
−２０４（１９８４）に記述されている。

卵巣癌を処理する細胞毒性を有する放射薬剤は高線型エ
ネルギー移送放出同位元素（ｈｉｇｈ　ｌｉｎｅａｒｅ
ｎｅｒｇｙ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｅｍｉｔｔｉｎｇ　１
ｓｏｔｏｐｅｓ）　　（例えば、Ｙ、　Ｐｒ）を抗体に
結合することにより製造することができる。これらの物
質のイオンは抗体に結合させたＤＴＰＡまたは他のキレ
ートを用いるキレトとして移入することができる。

酵素でラベル化した抗体は生体外診断テストに有用であ
る。適当な系の例、結合操作及びそれらとの基質反応は
例えば米国特許Ｒｅ、、３１００６．３６５４０９０．
４２１４０４８．４２Ｂ９７４７．４３０２４３８．４
３１２９４３．４３７６１１０及びそれらの引用文献に
記述されている。

他の適当な系の例はＰｅ５ｃｅら、ｃｌｉｎ、　Ｃｈｅ
ｎ、　２０．３５３−３５９　（１９７４）及びＷｉｓ
ｄｏｍ、　Ｇ。

Ｃｌ１ｎ、　ｃｈｅｍ、　２２．　１２４３　（１９７
６）に記述されている。

適当な酵素クラス及び各クラスの具体例のリストを表Ｂ
に示す。

クラスヒドロラーゼヌクレア−ゼアミダーセプリンデアミナーゼペプチダーゼブロテイナーゼエステラーゼ鉄酵素銅酵素補酵素含有酵素ヂトクロームを還元する酵素黄色酵素（ｙｅｌｌｏｗ　ｅｎｚｙｍｅｓ）表　　Ｂ酵素例アミラーゼポリヌクレオチダーゼアルギナーゼアデナーゼアミノポリペプチダーゼペブンンリパーゼカタラーゼチロシナ−ゼアルコールデヒドロゲナゼコハク酸デヒドロゲナゼジアホラーゼ表Ｂ　（続き）クラス酵素例ムターゼグリオキザラーゼデスモラーゼアルドラーゼｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）ホスファターゼアルカリホスファターゼ酸性ホスファターゼデヒ１！ロゲナーゼ　　　　Ｃ；６ＰＤＨ（グルコース
６ポスポデヒドロゲナーゼ）適当す酵素（７１）　’Ｊ　ストハＨａｗｋ　　ら、Ｐ
　ＲＡ　ＣＴ　Ｉ　ＣＡ　Ｉ−円＋ＹＳＩ０１．０ＧＩ
ＣＡＬ　ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　（実用物理化学）、ニー
ヨーク、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ　３０６−３９７頁（
１９５４）に記述されている。

蛍光素（ｆ　ｌｕｏｇｅｎｉｃ）及び色素酵素（その存
在下である選はれた基質が蛍光もしくは色素生成物を生
成する酵素）はラベル化成分として有用である。抗体の
抗原への結合能を損うことなく抗体に；）６酵素を選択的に複合化する（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）方法
及び酵素をタンパク性試薬に複合化する方法は当分骨で
周知である。

適当な酵素及びそれらを抗体に結合する操作は例えば１
ｃｈｉｒｏ　Ｃｈｉｂａｔａ、ＩＭＭＯＢＩＬＩＺＥＤ
　ＥＮＺＹＭＥＳ　（既出）　　；　Ａ、Ｃｕａｔｒｅ
ｃａｓａｓ、　Ｊ、　Ｂｉｏ、　Ｃｂｅｍ、　（既出）
：Ｗｉｌｓｏｎ、　Ｍ、　　ら、ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯ
ＮＡＬ　Ｃ０ＮＦＥＲＥＮＣＥ　ＩＮＩＭＭＬＩＮＯＦ
ＬＵＯＲＥＳＣＥＮＣＥ　ＡＮＤ　ＲＥＬＡＴＥＤ　５
ＴＡＩＮＩＮＧ　ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ　（免疫蛍光及
び関連染色技術に関する国際会議）　、Ｗ、Ｋｎａｐら
編集、アムステルダム、エルセビエル（Ｅｌｓｅｖｉｅ
ｒ）　、２１５　２４４頁（１９７８）　　；　５ｕｌ
ｌｉｖａｎ、　Ｍ、　　ら、Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｃ１
ｉｎｉｃＣ１１ｎｉｃａｌＢｉｏｃｂｅ　１６．２２１
−２４０（１９７９）；Ｎｙｇｒｅｎ、　Ｈ，ら、Ｍｅ
ｄｉｃａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　５７．１８７１９１　　
（１９７９）；Ｇａｄｋａｒｉ、　Ｄ、　　ら、Ｊｏｕ
’ｒｎａ１ｏｆ　Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　ｌ　Ｏ％　２１５−２２４（１９８５）　；　Ｔ
ｉｊｓｓｅｎ、　Ｐ、　　ら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　］　　３　６　　、　４
５１−４５７　　（１９８４）；ＴｓｕｒｕＬａ、　Ｊ
、ら、Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｉｓｔｏｃｈ
ｅｍｉｓＬｒｙａｎｄ　Ｃｙｔｏｃｌ＋ｅｍｉｓＬｒｙ
　３３．７６７−７７７　（１９８５）　；　ｌｓｈｉ
ｋａｗａ、　Ｅ、、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎ
ｏａｓｓａｙ４．２０９−３２７　（１９８３）；及び
米国特許４１９０４９０に記述されており、これらの文
献の全内容を参考に加入する。

それらに対応する好ましい酵素及び適当な基質はそれに
対する適当な基質が。−フェニレンジアミン、ｍ−フェ
ニレンジアミン、０−ジアニシジン及び４−クロロ−α
−ナフトールであるホースラディッシュパーオギシダー
ゼを包含する。それらはまたそれに対する適当な基質が
例えば４−メチルウンベリフェニルーβ−Ｄ−ガラクト
シド、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトース、ｐ
ニトロフェノール、０−二ｌ−ロフェニル〜β−Ｄ−ガ
ラクトース及び。−二トロフェノールであるβ−ガラク
トシダーゼを包含する。それらはその適当な基質が例え
ばｐ−ニトロフェニルホスフェート、インドリルホスフ
ェ−１・及び５−ブロモ３−クロロインドリルホスフェ
−１・であるアルカリホスファターゼを包含する。

抗体をラベル化する酵素のための適当な手法の例はカル
ボジイミド、ジアルデヒド及びグルタルアルデヒド三官
能性カップリング試薬の使用を包含する。アミン基を通
しての酵素の結合は該タンパク質をジメチルホルムアミ
ド、ジオキサン、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロ
フラン等の無水溶媒中塩化チオニノ１Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミドまたは同様な試薬で処理することにより達
せられる。別のカップリング試薬は例えばｌ−エチル−
３−（３−（Ｎ、＋ｖ′−ジメチルアミノ）プロピル）
ノノルボジイミド、１−シクロヘキ／ル３−（２−モル
ホリノエチル）カルポジイミドメヂルーｐ−トルエンス
ルホ不−１−、スフノンイミジル１−（Ｎ−マレイミド
エチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート及び
スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオ
ネ−１・等のカルボジイミドを包含する。

酵素の炭水化物部分（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　ｍｏ
ｉｅｔｙ）はアルデヒドに酸化し、免疫グロブリンのり
ジンアミノ基と反応させてシック塩基を形成させること
ができる。ソジウムボロハイドライドによる還元は酵素
と抗体との安定な結合を生ずる。抗体に対するホースラ
デイツシュパーオキシダーゼはＷｉｌｓｏｎ　（既出）
の方法によって免疫グロブリンに効率よく結合すること
ができる。

蛍光団及び発色団ラベル化抗体は当分野で既知の標準成
分から製造することができる。抗体及び他のタンパク質
は約３１０ｎｍまでの波長の光を吸収するので、３１０
ｎｍより上、好ましくは４００ｎｍより上の波長に実質
的な吸収を有する蛍光成分を選択ずへきである。種々の
適当なフルオレツサ（［１ｕｏｒｅｓｃｅｒｓ）及び発
色団が５ｔｒｙｅｒ、　５ｃｉｅｎｃｅ１６２．５２６
（１９６８）及びＢｒａｎｄ、　Ｌ、ら、Ａｎｎｕａｌ
　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　４
１．８４３８６８　（１９７２）に記述されている。抗
体は例えば米国特許３９４０４７５、／１２８９７４７
及び４３７６］　１０に開示された如き常法によって蛍
光発色団群によってラベル化することができる。

上述のいくつかの望ましい性質を有するフルオレセイン
の１つの群はキサンセン染料であり、例工Ｉｆ　３　、
６−　ジヒドロキン−９−フェニルキサントヒドロール
から得られるフルオレセイン類、及びレサミン類（ｒｅ
ｓａｍｉｎｅｓ）　、及び３．６−ジアミツー９−フェ
ニルキザントヒドロールから得られるローダミン類、及
びリサニム（Ｉｉｓｓａｎｉｍｅ）ロダニンＢを含む。

９−ｏ−カルポキンフェニルキザントヒドロールのロー
ダミン及びフルオレセイン誘導体は９−ｏ−力ルポキシ
フェニル基を有する。アミノ基、イソチオシアイード基
等の反応性カップリング基を有するフルオレセイン化合
物、例えばフルオレセインイソヂオシア不一ト及びフル
オレスカミン（ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）は容易に
入手し得る。蛍光化合物の別の群はσもしくはβ位にア
ミ７基を有するナフチルアミン類である。

抗体はＧｏｄｉｎｇ、　Ｊ、　（既出、２０８−２４９
頁）に記述された手法に従って蛍光色素（Ｉ　Ｉｕｏｒ
ｏｃｈｒ。

ｍｅｓ）または発色団でラベル化できる。

本発明に用いる抗体は、本発明の一態様においてアビジ
ンまたはビオチンに共有結合させることができる。適当
な結合方法は二官能性架橋剤による架橋を含む。適当な
二官能性化合物はＰｅＬｅｒｓ。

Ｋ、ら、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｉｍ、土１．
５２３（１９７７）に記述されている。

他の例において、結合は直接試薬それ自身の間で生じさ
せることができる。例えは、抗体をアビジンにそれぞれ
の物質上の官能基を通して結合することができる。具体
例として、アビジンを過ヨウ素酸塩で処理し、抗体と反
応させて、ビオチンのアビジンへの結合を阻害すること
なくまた抗体の免疫活性を損うことなく、シッフ塩基を
与えることができる。

二官能性架橋剤を用いる既知の技術は（ａ）　１工程グ
ルタルアルデヒド連結、Ａｖｒａｍｅａｓ、　Ｓｌｍｍ
ｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　６．４３　（１９６９）、
（ｂ）２工程グルタルアルデヒド連結、Ａｖｒａｍｅａ
ｓ、　ｉ。

ＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓＬｒｙ　８、］　１７５　（
＋９７１）及び（Ｃ）シマレイミド連結、Ｋａｔｏ、　
Ｋ、　ら、Ｅｕｒｏ、　Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　６２．２８５　（１９６６）を包含
する。

本発明の腫瘍特異的ＡＤＣＡ抗体はまた腺癌細胞に治療
化合物及び元素を配達するために用いることができる。

薬物は細胞毒成分、または細菌、！＋２カビまたは植物起源の酵素的活性毒素、またはかかる毒
素の酵素的に活性なポリペプチド鎖もしくは断片「Ａ鎖
」であることができる。酵素的活性毒素及びそれらの断
片は例えばジフテリア毒素Ａ断片、ジフテリア毒素の非
結合性活性断片、エキソトキ／ンＡ（ンユードモナス・
エルギノーザから）、リチン（ｒｉｃｉｎ）　Ａ鎖、ア
ブリン（ａｂｒｉｎ）Ａ鎖、モデンン（ｍｏｄｅｃｃｉ
ｎ）　Ａ鎖、α−ザルチン（σ−５ａｒｃｉｎ）　、あ
る種のアロイライテス・ホルディー（Ａ］ｅｕｒｉＬｅ
ｓ　ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ある種のジアンチン（
Ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラッカ０アメリ
カナ（ｐｈｙＬｏｌａｃｃａ　ａｍｅｒｉｃａｎａ）タ
ンパク質（ＰＡＰＸＰＡＰＩＩ及びＰＡＩ”Ｓ）、モモ
ルディカ・チャランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉａ　Ｃｈａ
ｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルチン（ｃｕｒｃｉｎ）、ク
ロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ザボナリア・オフィシナリス
（Ｓａｐｏｒａｒｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害
剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔ
ｏｇｅｌｉｎ）、レストリク１゛／ン（ｒｅｓＬｒｉｃ
ｔｏｃｉｎ）、フエノミンン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）
及びエノミシン（ｅｎｏｍｙｃ　ｉｎ）によって例示さ
れる。免疫毒素の酵素的に活性なポリペプチドを製造す
る方法はＰＣＴ　ＷＯ３４１０３５０８及びＰＣＴ　Ｗ
Ｏ３５１０３５０８に記述されている。ある種の細胞毒
成分は例えばアトリアマイノン、タロラムブシル、ダウ
ノマイシン、メトトレキセート、ネオカルジノスタチン
及び白金から誘導される。

抗体を細胞毒性剤と複合化する方法はすでに記述されて
いる。タロラムブンルを抗体と複合化する手法はＦｌｅ
ｃｈｎｅｒ、　１．、　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆＣａ、ｎｃｅｒ　９．７４１−７４５（１９
７３）；Ｇｈｏｓｅ。

Ｔ、ら、Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　　３．４９５４９９（１，９７２）；及び５ｚｅ
ｋｅｒｋｅ　Ｍ、　、　　ら、ＮｅｏｐＩａｓｍａ　ｌ
　９．２１　］、−２］５　（１９７２）に記述されて
いる。ダウノマイシン及びアドリアマイシンを抗体に複
合化する手法はＨｕｒｗｉｔｚ、　Ｅ　　ら、Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　３５．１１７５−１１８１　
　（１９７５）及びＡｒｎｏｎ、　Ｒ，ら、Ｃａｎｃｅ
ｒ　５ｕｒｖｅｙｓ　　］、４２９−４４９（１９８２
）に記述されている。抗体−ルチン複合体を調製する手
法は米国特許４／１１４１４８及びＯｓａｗａ、　Ｔ、
ら、Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖｅｙｓ４／１１．３５ｆ−３７２（１９８２）に記述されている。抗
体−毒素Ａ（ジフテリア毒素）複合体を調製する手法は
Ｍａｒｔｉｎｅｚ、　Ｏ，ら、Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖ
ｅｙｓ１．３７３−３８８　（１９８２）及びその引用
文献に記述されている。カップリング手法はＥＰ８６３
０９５１６．２にも記述されている。

抗体はポルフィリン類（例えはヘマトポルフィリン）等
の光細胞毒性剤等と、Ｍｅｗ、　Ｄ、ら、Ｊ。

１ｍｍｕｎｏ１．　　ｌ　３０．１４７３−１４７７　
（１９８３）及びＭｅｗ、　Ｄ　　ら、ｒＣａｎｃｅｒ
　Ｒｅｓ、　　４５．４３８０−４３８５　（］　９８
５）に記述された手法によって結合させることもできる
。これらの文献の全内容を参考にここに加入する。

本発明の試薬は生検または手術によって得られた組織の
免疫組織病理学的検査において、例えば腺癌の同定に用
いることができる、手術中に取り出した組織または生検
のサンプルを、Ｋｏｓｓ、Ｌ。

ＤＩＡＧＮＯ５ＴＩＣＣＹＴＯＬＯＧＹ　ＡＮＤ　ＩＴ
Ｓ　ＨＩＳＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＢＡＳＩＳ　（診
断細胞学及び組織病理学的基礎）、フィラデルフィア、
リピンコット（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ）　（１９７９）
　；　Ｌｕｎａ、　Ｌ、、　ｔＪＡＮＵＡｌ、ＯＦ　Ｈ
ＩＳＴＯＬＯＧＩＣ５ＴＡＩＮＩＮＣＭＥＴＨＯＤ　　
ＯＦ　　ＴＨＥ　　ＡＲＭＥＤ　　ＦＯＲＣＥＳ　　ｌ
Ｎ５ＴＩＴＵＴＥ　０ＦＰＡＴＨＯＬＯＧＹ　（病理学
のアームドホーシズインステイテユートの組織学的染色
方法のマニュアル）、第３版、ニューヨーク、ＭｃＧｒ
ａｗ−Ｈｉｌｌ（１９６８）；及びＢｏｒｏｗｉｔｚ、
　Ｍ、ら、Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｉｓｔｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ　３０．１７１１７４（１９８２）に記述された方
法等の標準的方法によって調製し、スライドにのせる。

一般に、組織を迅速凍結し、凍結切片を調製し、スライ
ドにのせる。

これらの染色操作においては、ＡＤＣＡ結合抗体をテス
トサンプルに適用する。ＡＤＣＡ結合抗体は水溶液中で
スライド上の組織切片に適用できる。反応物質を保存し
、結合反応を容易にするため溶液は好ましくは適当な塩
及び緩衝剤を含む。

例えば溶液はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等のタンパ
ク質、リン酸バッファー溶液（Ｐ　Ｂ　Ｓ）及び温和な
界面活性剤を含有することができる。下記に示すリンス
溶液も用いることができる。

緩衝化溶液はリン酸塩モル濃度０．００５〜０゜１ｐＨ
６，０〜８０のリン酸バッファー水溶液中に１次（Ｐｒ
ｉｍａｒｙ）抗体１　１００　ｐｇ／＋Ｊ好ましくはｌ
Ｏ〜２５μｇ／　１１１４＋を含むことができる。リン
酸塩モル濃度０．０１〜０，５及びＴ］Ｈ７、２〜７゜
６が好ましい。１次抗体溶液を抗原との結合が起こるま
で細胞塗抹と接触保持する。インキュベンヨン時間は温
度依存的である。１８〜４０°Ｃの温度で、３０〜１８
０分のインキュベーション時間を用いることができる。

室温ではインキュベノヨン時間は１〜６０分、好ましく
は５〜３０分であることができる。ついで過剰の１次抗
体溶液を除去し、スライドを適当なリンス溶液ですすぐ
。

リンス溶液はリン酸塩モル濃度０．１〜０．５、ｐＨ６
〜８のリン酸バッファー水溶液であることができる。

本発明の１つの好ましい方法においては、ビオチンでラ
ベルした１次抗体（ＡＤＣＡ結合抗体）を適用し、最初
の工程に続いて１次抗体をサンプル中に存在するそれぞ
れの抗原に結合させる。

本発明の好ましい態様においては、ついで組織切片ヲア
ビジン（ラベル化ビオチン）複合体と接触させる。２次
（５ｅｃｏｎｄａｒｙ）抗体がビオチンでラベルされて
いる場合には大モル過剰のアビジンとビオチン化酵素を
混合して好ましいアビジンビオチン複合体を調製する。

ビオチンとアビジンは本発明の方法及び試薬において任
意的に交換し相互に置換することができるが、その場合
ビオチンとアビジン誘導体間のモル比における対応する
調節が必要となる。

アビジンまたはビオチンはリン光体もしくは蛍光体等の
発光物質、生物発光物質、化学発光物質、放射性物質、
酵素、発色団、色素、スピン（ｓｐｉｎ）ラベルまたは
金属含有物質等の常用のラベルでラベル化することがで
きる。これらのラベルはラベル上の化学基に適した常用
の手法でアビジンまたはビオチンに共有結合される。例
えは放射性同位元素、蛍光団及び酵素をアビジンまたは
ビオチンに共有結合する手法はそれぞれのラベルをＡＤ
ＣＡ結合抗体に結合する上記手法と同じでよい。

／Ｉ７アビジンビオチン複合体を、細胞塗抹を抗体に適用する
だめの上記したＰＢＳ溶液等の適当なバッファー水溶液
中で組織切片に適用する。複合体溶液はアビジン−ビオ
チン複合体と、２次抗体がある場合それに共有結合した
アビジンもしくはビオチンとの結合を可能にするに十分
な時間組織切片に適用する。この工程の後、過剰のアビ
ジンビオチン複合体溶液を除去し、好ましくは組織切片
を例えば上記したリンス溶液等の適当なリンス溶液でリ
ンスする。

ついでスライドを用いた特定のアビジン−ビオチン複合
体ラベルに対し適当な手法で検査する。

これらの手法は常用的である。例えば、放射性ラベルを
用いる場合には、スライド上の残留放射能レベルを測定
するためガイガーカウンターでスライドを検査すること
ができる。または、ラベルがリン光体または蛍光体であ
る場合には、蛍光顕微鏡下に検査することができる。ラ
ベルが発色団または色素である場合には、通常光を用い
て顕微鏡下にスライドを検査することができる。ＡＤＣ
Ａ結合抗体が顕著に結合する細胞（悪性細胞のみ）がラ
ベルされ、このことはそれらが悪性であることを示す。

本発明の好ましい態様においては、ビオチンアビジン複
合体は酵素ラベルを有する。適当な酵素及び基質系は米
国特許４＋９０４９６及び４２０８４７９及びＨａｗｋ
ら、ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ　ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＩＣＡＬ
　ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　（実用物理化学）、ニューヨー
ク、マツフグローヒル３０６−３０フ頁（１９５４）に
記述されており、これをここに参考に加入する。

目的とする識別特性を提供するようデザインされた系が
選ばれる。好ましい系はホースラディッシュパーオキン
ターゼ等のオキシドリダクターゼ及びジアミノベンジジ
ン等の基質を用いる。ホースラデイシュバーオキシダー
ゼ及びジアミノベンジジンは、得られる逆の染色（ａｖ
ａｉｌａｂｌｅ　ｃｏｕｎｔｅｒｓｔａｉｎｓ）と強く
対比する悪性細胞の著しい色素比もしくは染色を提供す
る。悪性及び正常細胞を明確に区別する基礎を与える他
の酵素−基質組合せも用いることかできる。

氾）別法においては、１次抗体はＡＤＣＡ結合非ヒ］・抗体
であり、ラベル化しない。最初の工程に続き、１次抗体
をサンプル中に存在するそれぞれの標的抗原に結合する
。次の工程では、結合抗体を、操作の増幅及び増加感度
を得るべく一連に増加させた試薬（Ｓｕｃｃｅｓｓｉｖ
ｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｙｉｎｇ　ｒｅａｇｅｎＬｓ）と結
合させる。次の工程で、それから１次抗体を選択するク
ラスの抗体と選択的に結合するヒオチンラベル化２次抗
体をサンプルに適用する。この２次抗体は適当な水溶液
中で２次抗体と細胞抗原に結合した１次抗体との結合を
可能にするに十分な時間組織切片に適用する。一般に、
好ましくは２次抗体は１次抗体か一員となっているクラ
スの免疫グロブリン、例えば１次抗体のＦｃ部分に結合
するモノクローナル抗体である。ＩｇＭ、ＩｇＧ、Ｉｇ
Ｇ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＡ及び他のクラスの１次抗体
については例えばそれぞれのＦｃ部分または１次抗体に
結合する２次抗体を選択する。

ビオチンはビオチンの１次抗体への結合について上記し
た手法の如き常用の手法によって、抗体に対して大過剰
のビオチンで、好ましくは少なくども１００：ｌのヒオ
チン：抗体モル比で、２次抗体に共有結合させる。ヒオ
チンラベル化２次抗体は、好ましくはもとの１次抗体に
対する媒体どして上述したリン酸緩衝化溶液である水溶
液中で組織切片に適用する。溶液をスライド上の細胞と
１次抗体と存在する場合の２次抗体との間の結合か起こ
るに十分な時間接触またはインキュベートする。好まし
いインキュベーション時間及び温度は１次工程における
塗抹の１次抗体溶液による処理について」二連したそれ
らに対応する。インキュベー／ヨン後、過剰の２次抗体
溶液を除去し、スライドを適当なリンス溶液でリンスす
る。」二連のリンス溶液が好ましい。

本発明の試薬は血液もしくは他の流体中のＡＤＣＡ抗原
エピト−プを有する物質を検出するためのザンドイツチ
及び競合免疫アッセイにおいて用いることができ、流体
中のかかる物質の存在は腺癌の指示となる。

本発明の競合免疫アッセイの態様は体液、例えば血漿中
のＡＤＣＡ抗原の存在及び量を求める方法である。この
方法では、サンプルを予め定めた量のラベル化ＡＤＣＡ
抗原またはラベル化ＡＤＣＡ抗イディオタイプ抗体と混
合し、混合物をＡＤＣＡ結合抗体が付着している不溶性
支持体ど接触させる。ＡＤＣＡ結合抗体の量はサンプル
分析物及びラベル化ＡＤＣＡ抗原もしくはＡＤＣＡ抗イ
ディオタイプ抗体のずべでに結合するには不十分である
。混合物を不溶性支持体と抗原−抗体結合が起こること
を可能にする十分な時間混合し、サンプルを支持体から
除去する。不溶性支持体上に残留した結合ラベルをつい
で測定する。ラベルは不溶性支持体上で直接測定できる
物理的に検出し得るラベルであることができる。別法と
して、ラベルは引き続いての処理により物理的に検出可
能なラベルを生ずる成分であってもよい。例えば、ラベ
ルが酵素ラベルである場合には、不溶性支持体を測定し
得る蛍光団または発色団を生成する酵素用基質と接触さ
せることができる。測定されるラベルの量は体液中のＡ
ＤＣＡ抗原の量の逆関数（ａｎ　１ｎｖｅｒｓｅ　ｆｕ
ｎｃｔｉｏｎ）である。

本発明のサンドインチ免疫アッセイ態様は体液サンプル
例えば血漿中のＡＤＣＡ結合抗体の存在及び量を決定す
る方法である。この方法においては、体液をＡＤＣＡ抗
原またはＡＤＣＡ抗イディオタイプ抗体が付着した不溶
性支持体と抗原−抗体結合が起こるに十分な時間接触さ
せ、サンプルを支持体から除去する。不溶性支持体をつ
いで不溶性支持体に結合したサンプル抗体と結合する抗
Ｉｇ抗体（例えば２次抗体）と接触させる。ついで不溶
性支持体上の２次抗体の存在を決定する。

２次抗体は不溶性支持体上で直接測定できる物理的に検
出可能なラベルを有することができる。別法として、２
次抗体はラベル化しないことができ、不溶性支持体を２
次抗体と選択的に結合するラベル化抗体（すなわち、３
次抗体）と接触させ、支持体から未結合ラベル化３次抗
体を除去し、不溶性支持体上のラベルの存在を決定する
ことによって２次抗体を決定することができる。

抗体及び抗原試薬は常法によって不溶性支持体に結合す
ることができる。抗体の不溶性支持体への結合方法は米
国特許３５５］５５５．３５５３３１０．４０４８２９
８及びＲＥ−２９４７４及び］’１ｊｓｓｅｎ、　Ｐ、
　１．ＡＢＯＲＡＴＯＲＹ　ＴＥＣＨＮＩＯＵＥＳ　Ｉ
Ｎ　ＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　ＡＮＤ　ＭＯＬＥＣＵ
ＬＡＲＢＩＯｌ、ＯＧＹ　：　ＰＲＡＣＴＩＣＥ　ＡＮ
ＤＴＩＩＥＯＲＩＥＳ　ＯＦ　ＥＮＺＹＭＥ　ＩＭＭＵ
ＮＯＡＳＳＡＹＳ　（生化学及び分子生物学における実
験技術：酵素免疫アッセイの実施と理論）、ニューヨー
ク、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　（１９８５）等に記述されてい
る。吸着による抗体のポリスチレンへの結合の手法は例
えば米国特許３６４６３４６及び４０９２４０８に記述
されている。

これらの同し手法がタンパク性抗原の不溶性支持体への
結合に適する。

不溶性支持体としては種々の材料を用いることかできる
が、第１の考慮はその表面への抗体または抗原の結合、
試薬結合反応または結合反応の存在及び程度を求めるた
めに用いることができる他の反応を妨害しないことであ
る。天然及び合成の有機及び無機ポリマーを不溶性支持
体として用いることかできる。適当なポリマーの例はポ
リエチレン、ポリプロピレン、ポリブチレン、ポリ（４
メチルブチレン）、ブチルゴム、シラスティック（ｓｉ
　Ｊａｓｔ　ｉｃ）ポリマ〜、ポリエステル、ポリアミ
ド、セルロース及びセルロース誘導体（例えば酢酸セル
ロース、ニトロセルロース等）、アクリレート、メタク
リレ−１・、ヒニルボリマー（酢酸ポリビニル、塩化ボ
リビニノ呟塩化ポリビニリデン、フッ化ポリヒニリデン
等）、ポリスチレン及びスヂレングラフトコボリマー、
レーヨン、ナイロン、ポリビニルブチレート、ポリホル
ムアルデヒド等を包含する。不溶性支持体として用いら
れる他の材料は上記ポリマーのラテックス、シリカケル
、ソリコンウェーハー、ガラス、紙、不溶性タンパク質
、金属、金属合金、金属酸化物、磁性材料、半導体材料
、ザーメット等である。加えて、ゼラチン等のタンパク
質、リポ多糖、シリケート、アカロース、ポリアクリル
アミド等のゲル形成物質；デキストラン、ポリアルキレ
ングリコール（炭素数２〜３のアルキレン）等のいくつ
かの水相を形成するポリマー；またはリン脂質、長鎖（
炭素数１２〜２４）アルキルアンモニウム塩等の両親和
性（ａｍｐｈｏｐｈｉｌｉｃ）化合物等の界面活性剤、
等も包含される。

好ましい支持体はナイロンもしくはニトロセルロース膜
を包含する。別の診断用支持体はポリスチレン、スヂレ
ンーアクリロニトリルコボリマ等のスチレンコポリマー
、またはポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフ
ィン、及びアクリレ−１−及びメタクリレートポリマー
及びコポリマからつくられる。抗体及び抗原試薬は吸着
、イオン結合、ファンデルワールス吸着、静電結合また
はその他の非共有結合によって不溶性支持体に結合させ
ることかでき、また共有結合によって結合させることが
できる。この手法のために特に有利な支持体は複数の穴
を有する微量力価プレートよりなる。大表面またはその
中へのプラスチックカップ挿入物は抗原もしくは抗体支
持体を構成する。測定に蛍光測定の使用を必要とする場
合には、穴に適用される励起光が回りの穴の内容物に到
達せずまた影響を与えないよう微量力価プレー］・また
は大神入物は光を通さないのが有利である。

非共有結合の操作は米国特許４５２８２６７に記述され
ている。抗体及び抗原を不溶性支持体に共有結合するた
めの手法はＩｃｈｉｒｏ　Ｃｈｉｂａｔａ。

ＩＭＭＯＢＩｌ、ＩＺＥＤ　ＥＮＺＹＭＥＳ　（固定化
酵素）、ハルステッド（Ｈａｌｓｃｅｄ）出版、ニュー
ヨーク（１９７８）及びＡ、　Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ
、　Ｊ、　Ｂｉｏ、　Ｃｂｅｍ、　２４５．３０５９　
（１９７０）に記述されており、それらの全内容を参考
としてここに加入する。表面をタンパク質で被覆し、例
えばカップリング剤としてグルタルアルデヒドを用い、
米国特許４２１０４１８に記述した手法に従って抗体ま
たは抗原と結合させることができる。さらなる手法にお
いては、穴ヲポリエーテルイソシア不−１・等の遊離イ
ソシアネート基を有する層で被覆し、これに水溶液中の
抗体または抗原を適用して必要な結合を行わせる。さら
に別の手法においては、米国特許３７２０７６０に記述
されている如く、抗体または抗原ヲ臭化シアンによって
、ヒドロキシル化された材料に結合させることができる
。

不溶性支持体は好ましくは非特異的結合を減するために
「ブロックコされている。適当なブロッキング剤の選択
は不溶性支持体のタイプによって決定する。例えば、ポ
リスチレン支持体については適当なブロッキング剤は水
溶性非免疫動物タンパク質及びポリアミノ酸を包含する
。適当な水溶性非免疫動物タンパク質はウシ（ＢＳＡ）
、ヒト、ウサギ、ヤギ、ヒツジ及びウマ血清アルブミン
等のアルブミン類：及びウシ胎児血清、オポアルブミン
、フィブリノーゲン、トロンビン、トランスフェリン、
糖タンパク質等の他の動物タンパク質１等を包含する。

適当な水溶性ポリアミノ酸はリジン、グルタミン酸、ア
ラニン、ヒスチジン、メヂオニン、プロリン等の１以上
のアミノ酸のポリマーを包含する。

同しブロッキング剤をナイロン及びニトロセルロース支
持体についても用いることができる。しかしながら、ニ
トロセルロースまたはナイロン膜支持体についての好ま
しいブロッキング剤は脱脂乳またはカゼインである。こ
れらの膜支持体について最適のブロッキング剤は５ｗｔ
％脱脂粉乳（ｎｏｎ−ｆａｔ　ｄｒｉｅｄ　ｍ１ｌｋ）
及びノニオン界面活性剤（例えばポリオキシエチレンソ
ルビクン誘導体及びポリオキシエチレンエーテル）を含
有する水溶液である。

腺癌に特異的なラベル化抗体を用いる腫瘍の位置測定及
び治療の方法は米国特許４４６０５６１に記述されたよ
うにして行うことができ、その全内容をここに参考に加
入する。

投与用診断媒体は当分野の熟練の十分な範囲内に入る方
法により生理的に許容される媒体を用いて調製される。

例えば任意的に医薬上許容される賦形剤を添加した、放
射ラベル化ＡＤＣＡ結合抗体もしくはその結合断片、好
ましくはＭＳ　２　Ｂ　６ｈＭＡｂを水性媒体に懸濁ま
たは溶解し、ついで溶液または懸濁液を殺菌する。適当
な添加剤は非免疫タンパク質、及び他の安定化のための
医薬上許容される非毒性添加剤を包含する。静脈内用溶
液は殺菌し、生理的に許容されない剤を除去し、ざらに
等張すなわち等浸透圧として投与に際しての刺激または
他の副作用を最小にすべきである。

適当な媒体は塩化ナトリウム注射液、リンガ−注射液、
デキストロース注射液、デキストロース及び塩化すトリ
ウム注射液、ラクテート化リンガ注射液、及びＲＥＭＩ
ＮＧＴＯＮ’Ｓ　　ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＣ
ＩＥＮＣＥＳ　（レミングトンの医薬科学）、１５版、
Ｅａｓｔｏｎ編、Ｍａｃｋ出版社、１４０５’−１４１
２頁及び１４６１−１４８７頁（１，９７５）、及びＴ
ＨＥ　ＮＡＴＩＯＮＡＬ　ＦＯＲＭＩＩＬＡＲＹ　Ｘ　
ＩＶ（国家処方束ＸＩＶ）、１４版、ワシントン、Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ　ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏ
ｃｉａｔｉｏｎ　（アメリカ医薬協会）（１９７５）に
記述されたような他の溶液等の非経口溶液を投与するた
めに通常用いられる水性媒体であり、これらの文献の内
容をここに参考に加入する。溶液は非経口溶液で常用さ
れる保存剤、抗菌剤、緩衝剤及び抗酸化剤、選別（ｓｅ
ｌｅｃＬｉｎｇ）　、賦形剤、及び抗体と適合性を有す
るが生産物の製造、貯蔵及び使用に干渉しない他の添加
剤を含有していてもよい。

本発明の放射ラベル化抗体は画像化のため患者に目的と
する画像を与えるに十分な量投与する。

般に、患者体重に、あたり画像化剤０．Ｏ１〜Ｑ　、　
ｌ　ｍＣｉの用量が大抵の器官の画像を得るのに有効で
ある。

画像化用の放射化学剤を適用する方法、及び画像化のた
めの装置及び方法はＡｌａｒｒａｋｉ、　Ｎ　　ら、Ｆ
ＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬＳ　ＯＦ　ＮＵＣＬＥＡＲＭＥＤ
ＩＣＩＮＥ　（核医薬の基礎）、ニューヨーク、Ｔｈｅ
　５ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　ＮｕｃｌｅａｒＭｅｄｉｃｉ
ｎｅ社（１９８４）　；　ＴＨＥ　ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ
　ＯＦＲＡＤＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ（放
射医薬の化学）、Ｈｅ１ｄｅｌ。

Ｎ、ら編、シカゴ、Ｍａｓｓｏｎ出版（１９７８）；及
びＲＡＤＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＳ　：　ＰＲ
ＯＧＲＥＳＳ　ＡＮＤ　ＣＬＩＮＩＣＡＬＰＥＲ５ＰＥ
ＣＴＩＵＥＳ（放射医薬：方法及び臨床透視画法）、Ｆ
ｒｉｔｚｂｅｒｇ、　Ａ、編、Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、
　ＣＲＣ出版（１９８６）及びそれらの中で引用された
刊行物に記述されており、これらの刊行物及びそれらに
含まれる引用文献の全内容をここに参考に加入する。

放射線療法については用量及び放射性剤濃度は有効な治
療効果をあげるように選択し、腫瘍の位置及びタイプ、
患者及び投与される合計治療養生法に合わせなけれはな
らない。一般に剤の５０〜１５０ｍＣ１の投与量が用い
られる。注射は静脈内、動脈内、腹腔内または鞘内であ
り得る。皮膚及び／または特定の体腔領域に近い部分に
限られた腫瘍については皮肉及び体腔内（１ｎｔｒａｃ
ａｖ已ａｒｙ）投与か有利である。放射線療法のだめの
組成物は放射画像化について上記したと同しでよい。

免疫前療法については、免疫毒素を治療上有効な量（す
なわち、患者の腫瘍重荷を除去しまたは減じまたはこの
増加を遅らせる量）溶液中において患者に投与する。そ
れらは通常非経口的に、好ましくは腹腔内に投与する。

用量及び投薬養生法は癌の性質（１次または転移）及び
その個体数、免疫毒素の特性（例えばその治療指数）、
患者、及び患者の歴史に対応して選択しなければならな
い。投与される免疫毒素の量（Ｉ　Ｐ’）は代表的には
約０．０１−約１００ｍｇ／ｋＨ，好ましくは０．０１
〜１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。

ＡＤＣＡ抗原はいくつかの胎児組織で発現され、ファロ
ピウス管（ｆａｌｌｏｐｉａｎ　［ｕｂｅ）　、子宮内
膜子宮頚内膜、結腸、気管支、胸、汗腺（ｓｗｅａｔ　
ｄｕｃｔ）及び大腎管（ｌａｒｇｅ　ｒｅｎａｌ　ｄｕ
ｃｔｓ）の成人上皮に存続する」１皮分化の抗原である
。注目されることにそれは腹腔中皮細胞、造血細胞（ｂ
ｌｏｏｄ−ｂｏｒｎｅ細胞）または組織ストロマ（ｓｔ
ｒｏｍａ）細胞には存在しない。ＡＤＣＡ抗原は上皮卵
巣癌細胞及び大きな比率の非卵巣腺癌で発現されるか、
鱗状細胞癌、ザルコーマ、メラノーマ、リンパ腫または
悪性胚芽（ｇｅｒｍ）細胞腫瘍とは結合しないことが見
い出された。標的エピドープＡＤＣＡは３８．４４及び
６０ｋＤのポリペプチド上に存在し、恐らくシアリン酸
残基または糖脂質構造を含まない。

免疫パーオキンダーゼ研究によって明らかにされた。Ｍ
Ｓ２Ｂ６　　ＩｇＭの生存卵巣癌細胞への結合、かかる
結合のプロテアーゼ感受性の性質、及び抗原の分布はＡ
ＤＣＡ抗原のかなりの部分が細胞表面上に位置している
ことを示唆している。起源の患者においては少なくとも
、ヒトＭＡｂＭ３２Ｂ６１ｇＭの存在はその標的抗原が
ヒトにおいて免疫原性であり得ることを確立している。

本発明をさらに以下の具体的しかも非制限的実施例によ
って説明する。他に注記ない場合、温度はセラ氏の度を
表し、パーセントは重量％として与えられる。以前に行
われた方法は過去時制で表し、本出願で建設的に（ｃｏ
ｎｓＬｒｕｃｔｉｖｅｌｙ）に実行されている（ｂｅｉ
ｎｇ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｏ　ｐｒａｃｔｉｃｅ）方法
を現在時制で表す。

実施例１Ｍ５２Ｂ６　　ＩｇＭ抗体ヒトハイブリドーマＭＳ２Ｂ６　（アメリカンタイプ力
ルヂャーコレクション寄託ＡＴＣＣＨＢ９７６５）を無
血清培地（１％ニュトリドーマ（Ｎｕｔｒｉｄｏｍａ）
　−Ｎ　Ｓ添加アイスコブ（ｌ５ｃｏｖｅｓ）、ベーり
ンカーマンハイム）中で増殖させ、３２ｐ　ｇ／　Ｉ　
Ｏ’ｃｅｌｌｓ／日の割合でＩｇＭを生産した。

約６０μｇ／　ｍＡ　　Ｉ　ｇ　Ｍを含有する上清流体
を３０ｏ、ｏｏｏダルトン分子分子量カットノオフ（ア
ミコン）を用いて限外濾過によって１００倍に濃縮した
。ＭＳ２Ｂ６ＩｇＭをモデル１０８４８液体クロマトグ
ラフ（ＨｅｗｌｅＬＬ　ｐａｃｋａｒｄ）及び０．７５
　Ｘ　７　、５　ｃｍ　Ｔ　Ｓ　Ｋ　−Ｄ　Ｅ　Ａ　Ｅ
　　５　Ｐ　Ｗカラム（バイオランド社）を用いるＨＰ
　Ｉ　ＥＣによって精製した。バッファーＡは０．０２
Ｍ）リス、０゜１Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ８、５よりな
っていた。

バッファーＢは０．０２Ｍ）リス、０．６Ｍ塩化すｌ・
リウム、ｐＨ７，０よりなっていた。カラムをバッファ
ーＡ中１０　（ｖ／ｖ）％バッファーＢで平衡化し、サ
ンプルを供給した。カラムをバッファＡ中の２５　（ｖ
／ｖ）％バッファーＢで溶出した。溶出したＩｇＭを濃
縮し、液体窒素中に凍結保存した。最終生成物の純度は
５ＤＳ−ＰＡＧＥによると約９５％ＩｇＭであった。

実施例２ビオチンラベル化ＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭ抗体ビオチンラ
ベル化は修飾を加えたＨａｓｐｅｌ、Ｍ。

ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４５　、　３９５１−
３９６１　　（］９８５）の方法によって行った。Ｉｍ
ｇ／ｍＡの実施例１のＨＰ　Ｉ　Ｅ　Ｃ精製産物を０．
０１Ｍリン酸カリウム及び０．１Ｍ塩化ナトリウム、ｐ
Ｈ７，８に対して透析した。ＤＭＳＯ中にＩ　Ｉｎｇ　
／　＋ｏρで溶解したビオチン　Ｎ−ヒドロキンスクシ
ンイミド（シグマ社）を加えてビオヂン対ＴｇＭのモル
比を３０＝１　（分子量１８０，００　（Ｊｔ７）モｙ
−ｙ−１ｇＭｔ−使用）とした。室温で１５分撹拌後、
Ｚ容量の１Ｍ塩化アンモニウムを加え、溶液を０．０２
％アジ化ナトリウム含有ＰＢＳに対して透析した。

実施例３＋２５１−ラベル化ＭＳ２Ｂ６　１ｇＭ抗体＋２５７−
ラベル化はＢｏｌｔｏｎ−１（ｕｎｔｅｒ試薬（Ｂｏｌ
ｔｏｎ。

Ａ、ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、上３３．５２９−１０
８３（１９７４））を用いて行った。２５０ｐＣｉの試
薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を蒸発し、Ｏ，１Ｍポウ酸すト
リウムバッファーｐＨ８、５に対して透析した実施例１
０ＨＰ　Ｉ　Ｆ　Ｃ精製産物を加えた。０℃で２０分後
、ホウ酸バッファー中の０．２Ｍグリシン０５「１βを
加えて反応を停止させた。移入されなかった１２５■を
セファデックスＧ−２５（ファーマシア社）上の排出ク
ロマトグラフィーによって１２５７−ラベル化ＭＳ２Ｂ
６　１　ｇＭから分離した。

１〜５　／／　Ｃｉ　／μｇの範囲の比活性が得られた
。

実施例４放射性ヨウ素ラベル化ＭＳ２Ｂ６　　ｒｇｒｖｒ抗体２
５Ｉ試薬を対応する１２３■及び１３１■試薬に代える
以外実施例３の手法を繰り返して対応する２３１−ラベ
ル化ＭＳ２Ｂ６　１ｇＭ及び＋３１　■ラベル化ＭＳ２
Ｂ６１ｇＭを得る。

実施例５放射性金属ラベル化ＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭ抗体この方法
においては抗体を金属放射性核種（ｍｅｔａｌｌｉｃ　
ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ）どキレートを形成すること
ができるジエチレントリアミンペンタ酢酸等のキレート
剤と複合化させる。ＤＴＰＡ　（ジエチレントリアミン
ペンタ酢酸）の二環無水物０゜Ｉ　ｍＢ’／　ｍβの懸
濁液をクロロホルム、エーテルまたは乾燥ＤＭＳＯ等の
乾燥溶媒中で調製する。既知少量をＤＴＰＡ、：免疫グ
ロブリン１：１を与えるに十分な清潔な乾燥管に移しチ
素下に蒸発さセる。

生理的食塩水（ｓａｌｉｎｅ）中の０．０５Ｍ重炭酸塩
バッファーｐＨ７，０−７，５中の用いられた抗体溶液
のｌ　０−２０微量力価部分を乾燥ＤＴＰＡに加え、内
容物を０．５−Ｊ、０分撹拌する。カップリングさせた
タンパク質調製物を同しバッファー溶液で０．２１１Ｉ
Ｐに希釈し、生理的食塩水溶出剤を用いるセファデック
スＧ−５０ゲルの５　ｃｍゲル濾過カラム上で精製する
。０．５Ｍ酢酸バッファー溶液、ｐＨ６，０中の「キレ
ート等級」の１１１１０の添加による精製前にカップリ
ング効率を測定する。

カップリング効率の計算のため薄層クロマトグラフィー
を用いてＤＴＰＡカップル化抗体全抗体する。ＤＴＰＡ
カップル化抗体全抗体ｌｉｎ＋３”’Ｂ　ｉ　”３９９
″Ｔ　ｃ及び”Ｇａ”’等の金属放射性核種と結合させ
て対応するキレートを形成させる必要が生ずるまで４０
°Ｃで貯蔵する。

実施例６免疫パーオキシダーゼ研究ヒ［・組織の獲得はスタンフォード大学ヒト被検者委員
会（ｔｈｅ　Ｈｕｍａｎ　５ｕｂｊｅｃｔ　Ｃｏｍｍ１
ｔｔｅｅ）の承認を得、外科病理学部（ｔｈｅ　Ｄｅｐ
ａｒＬｍｅｎＬ　ｏｆりＢｒｇｉｃａｌ　Ｐａｔｈｏｌ
ｏｇｙ）による手術または剖検後に得た。各悪性組織に
ついての病理学レボ−１・を吟味した。新鮮組織を小片
に刻み、ホイルに包み、包理媒体に移す直前まで液体窒
素中に貯蔵した。

６ミクロンの低温槽切片（ｃｒｙｏｓｔａｔ　５ｅｃｔ
ｉｏｎ）を風乾し、４°Ｃに貯蔵し、Ｍｃｈｅａｎ　　
１．ら、Ｊ、　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ、　Ｃｙｔ、ｏｃｈ
ｅｍ、　２２．１０７７−１０８３　（１９７４ａ）の
方法に従いＰＬＰを用いて使用直前に迅速に固定化した
（０５％パラホルムアルデヒド、０．０７５Ｍムーリジ
ン及び０．０１Ｍ過ヨウ素酸すｌ・リウム）。切片を４
°Ｃで１０分固定化し、ＰＢＳで洗浄した。いくつかの
組織はｗｏｏｄＧ、ら、Ｊ、　ＨｉｓＬｏｃｈｅ、　Ｃ
ｙＬｏｃｈｅｍ、　　２９．１１９６１２０４　（１９
８１）の方法を用いる内因性ビオチンのブロッキングを
必要とした。内因性パオキンターゼ活性の抑制は　Ｋｅ
ｌｌｅｙ、　Ｊ、ら、Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、　　９６　、　　Ｉ　２
７−１３２　（１９８７）の方法によって行った。ビオ
チンラベル化ＭＳ２Ｂ６　　ＴｇＭまたはコンＩ・ロー
ルＩｇＭを用いる免疫パーオキシダーゼ染色はＨａ、ｎ
ｃｏｃｋ、　Ｗ、ら、Ｍｅｓｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ。１
２↓、８２８−８４８　（１９８６）の方法に従って行
った（以下、簡単に説明する）。切片をついて１０％ウ
シ胎児血清でインキュベ−１−（ＰＢＳ洗浄の間で）し
て、０．０３％過酸化水素を用いて３０μｇ／ｍβのビ
オチンラベル化抗体、０．５μｇ／ｍβのストレプトア
ビジン（ｓＬｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）　−ＨＲＰ　（シ
グマ社）及びｌ　ｍＨ／ｍβのジアミノベンジジン（シ
グマ社）でブロックした。１５分後、スライドを水洗し
、ヘマトキザリンで逆染色し、カバーガラスを付した。

ビオヂンラベル化ＭＳ２Ｂ６１ｇＭによる陽性染色をビ
オチンラベル化コントロールＩｇＭによっては染色され
ない細胞上の褐色染色の析出として顕微鏡的に視覚化し
た。

パラホルムアルデヒド−リジン−過ヨウ素酸塩による切
片の固定化は十分な組織の保存及び抗原染色を可能にし
た。グルタルアルデヒド（ｇｌｕｃｅｒａｌｄｅｈｙｄ
ｅ）　　（０，１％）及び中性ホルマリン（２％）をあ
る抗原染色を保存したが、メタノール固定化は有効でな
く、抗原染色を破壊した。

４１の異なる卵巣上皮癌組織をヒオチンラベル化ＭＳ２
Ｂ６　１ｇＭ結合について染色した。結果を表Ｃに示す
。

表Ｃに示されるごとく、３０の重症の乳頭腫瘍、４のム
チン腫瘍、６のエントメトリオイド腫瘍及び１のクリア
ー細胞腫瘍よりなる４１中４１の検体が陽性に染色した
。偽性粘腫ベリトニ−（ｐｅｒｉｔｏｎ　ｉ　ｉ　）を
有する患者からのボーダーラインムチン腫瘍の唯一の例
は弱いむらのある（ｐａ［ｃｈｙ）染色による標的抗原
の発現の著しい異質性を実証した。抗原の不均質発現は
検査されたその他の組織で存在しないか最小であり、こ
のことは染色における著しい均一性を示した。抗原が明
らかに細胞質中に分布していた高等板ムチン癌の１つの
例を除き、染色パターンは殆ど常に細胞末梢の回りのリ
ング状または格子分布であった。重篤な癌の中では陽性
の染色は腫瘍等級とは無関係であった。

４５の異なる非卵巣及び非上皮卵巣悪性組織をＡＤＣＡ
抗原染色について検査した。結果を表Ｄ１こ示す。

表　　ＤＭＳ２Ｂ６ ■ ｇＭ免疫バ他の癌オキシダゼ研究腫瘍タイプ鱗状細胞癌鱗状細胞癌鱗状細胞癌腺癌腺癌腺癌腺癌腺癌腺癌腺癌起源頚子宮卵巣奇形腫頚子宮内膜胸肺結腸膵臓卵巣タルケンベルブ（Ｋｒｕｋｅｎｂｅｒｇ）鱗状細胞癌の８つの例、５つの肉腫及び３つの卵巣胚芽
（ｇｅｒｍ）細胞癌はＡＤＣＡ抗原発現について陰性で
あった。１つの卵巣未成熟奇形腫が陽性染色を有してい
たか成熟した良性上皮領域においてのみであった。２０
の非卵巣性腺癌の大部分が１０の子宮内膜腺癌中の５つ
及び５の結腸腺癌中の５つを含むＡＤＣＡ抗原について
陽性に染色した。加えて、３の未分化癌（１次未知（ｕ
ｎｋｎｏｗｎｐｒｉｍａｒｙ）　）の１つ、中皮腫（腹
膜）及び転移性細胞肉腫（腎臓）が陽に染色した。悪性
メラノマ及びリンパ腫の例は陰性であった。

７３の異なる正常成人及び胎児組織検体をＡＤＣＡ抗原
染色について検査した。その結果を表Ｅに示す。

表ＭＳ２Ｂ６１ｇＭ免疫バーオキシダゼ研究卵巣子宮筋層子宮内膜子宮頚内膜腟腹膜膀胱腎臓前立腺唾液腺食道胃小腸ガル（Ｇａｌｌ）膀胱正常と］・組織上皮のみ上皮のみ上皮のみ大管状上皮のみ上皮のみ上皮のみ弱い染色、上皮のみ結腸肝臓肺胸皮膚腺腫胸腺胸上皮のみ１検体、弱い染色細気管支上皮のみ管上皮汗腺上皮のみ胎児腸胎児肝臓胎児皮膚胎児腎臓胎児膀胱 ■検体、弱い染色陽性染色はファロピアス管（ｒａｌｌｏｐｉａｎ　ｔｕ
ｂｅ）、子宮頚内膜、子宮内膜、気管支、結腸、乳房管
（ｍａｍｍａｒｙ　ｄｕｃｔｓ）　、大腎管、唾液腺、
汗腺管及び膀胱を含むある種の正常非鱗状」１皮中に思
い出された。弱いむらのある染色が肝臓、甲状腺及び小
腸上皮の単一例で認められた。もつとも強くもつとも均
一な染色はファロピウス管、子宮内膜及び気管支の上皮
についてであった。

腎臓、肝臓及び結腸をはじめとするいくつかの組織は、
ビオチンラベル化陰性コン１〜ロールＴ上皮染色を示し
た。肝臓の場合、このバックグランド結合の大部分は内
因性ビオヂン活性のブロッキングによって除去された。

内因性ビオチンのブロッキング後でも、結腸上皮のいく
つかの検体は、ビオチンラベル化ＭＳ２Ｂ６　　１ｇＭ
の結合は常により強力ではあったが、陰性コントロール
ビオチンのラベル化ＴｇＭのかなりの結合を示した。

この結腸上皮のバックグランドコントロールＩｇＭ染色
のすべてではないが大部分は内因性パーオフキ／ダ−セのブロッキングによって除去できた。

同様の現象が腎上皮のいくつかの検体について観察され
た。ＭＳ２Ｂ６　１ｇＭ染色は弱く、一般に大管（ｌａ
ｒｇｅ　ｄｕｃｔｓ）の上皮に限られ、糸球体は全体的
に陰性であった。肝臓のコントロールＴｇＭ染色は内因
性ビオチンのブロック後も同様のしかし一層弱い強度パ
ターンであった。

腹膜上皮及び卵巣上皮からのＡＤＣＡ抗原の不存在は興
味深かった。加えて、皮膚の汗腺管の場合を除き、類表
皮上皮（ｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄ　ｅｐｉＬｈｅｌｉａ）
中では抗原は検出されなかった。胎児組織中では胎児腸
、肝臓及び腎臓上皮においてのみならず合胞体層上皮の
例において抗原が強度に発現された。２つの良性卵巣の
う腫、２つの子宮平滑筋腫（Ｉｅｉｏｍｙｏｍａｔａ）
、１つの卵巣線維腫及び１つの水泡形黒あざを含む良性
病巣をＡＤＣＡ抗原についてテストした。これらは染色
を示さなかった。

正常肺臓及び胸腺のＭＳ２Ｂ６１ｇＭ染色の不在に加え
、他のリンパ様収集物（例えば腸粘膜下組織に位置する
もの）も染色について陰性であつた。検査したすべての
組織中、脈管内要素は常にＭＳ２Ｂ６１ｇＭ染色につい
て陰性であった。

血液要素（例えば、ＲＢＣ，リンパ球、顆粒球、血小板
）へのＭＳ２Ｂ６　１ｇＭ結合について独立にテストす
るため、さらなるテスＩ・を行った。

５０μｇ／ｍβでのＭＳ２Ｂ６を標準的な血球凝集技術
を用いスタンフォード輸血ザーヒス（Ｔｒａ＋１ｓｆｕ
ｓｉｏｎ　　５ｅｒｖｉＣｅ）によってテストした。Ｍ
Ｓ２Ｂ６は以下の抗原を発現する一層の赤血球細胞と反
応しなかった・血液グループ抗原Ａ及びＢ、Ｒｈ抗及び
Ｊｓ　　；Ｄｕｆｆｙ抗原Ｆａｙ及びＶ　ｙ　；　Ｋ　
ｉ　ｄ　ｄ抗原Ｊａ　及びＪｂ；Ｌｅｗｉｓ抗原、Ｌｅ
”及びＬｅｂ　；ｋ　　　　　　　　ｋＭＮ抗原Ｍ、Ｎ、Ｓ及び５及びＬ　ｕ　ｔ　ｈ　ｅ　ｒ
　ａ　ｎ抗原Ｌｕａ及びＬｕｂ　；及びｘａ抗原。

ＭＳ　２　Ｂ　６　　Ｉ　ｇＭ　（５０／’ｇ／ｍＲ）
を顆粒球凝集について及びＬｉｚａｋ、Ｇ、ら、Ｈｕｍ
ａｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　。

８．２６５−２７３　（１９８３）に記述されたノノル
ボギンフレオレセインジアセテ−１・取込み手法に基い
た顆粒球、リンパ球及び血小板への細胞毒性についてス
タンフォード血液バンクによってテストした。４つの異
なる顆粒球検体がＭＳ２Ｂ６ＩｇＭ誘導凝集または細胞
毒性について陰性であった。４つの異なるリンパ球検体
及び６つの異なる血小板調製物がＭＳ２Ｂ６　１ｇＭ誘
導細胞毒性を示さなかった。

実施例７電気泳動及び免疫プロッティング４％積み重ね（ｓｔａｃｋｉｎｇ）ゲル及び１０％ラン
ニングゲルを用いるＬａｅｍｍｌｉ、　Ｕ、　ＮａＬｕ
ｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）。

２２７．６８０−６８５　（１９７０）の不連続ノくツ
ファー系に従って５ＤＳ−ＰＡＧＥを行った。

サンプルは精製卵巣癌腹水腫瘍細胞または卵巣癌細胞系
２７７４よりなっていた。腹水腫瘍の調製を以下に述べ
る。卵巣癌細胞系、２７７４はウシ胎児血清を加えたＤ
ｕｌｂｅｃｃｏ修飾Ｅａｇｌｅ培地にコンフルエンス（
ｃｏｎｆ　１ｕｅｎｃｅ）に増殖させ、フラスコから削
り取り、ＰＢＳで洗浄する。２−メルカプトエタノール
を含有するＳＤＳサンプルノくツフア−を加え（１０６
細胞あたり１００Ｉ！１）、サンプルを１００°Ｃで３
分加熱した。免疫プロッティング後の移動を確認するた
めヒｈ　ｌ　ｇ　Ｍ（２００ｎｇ）をコントロールレー
ンに使用した。

ニトロセルロース紙へのプロッティングはＴｏｗｂｉｎ
ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌｅ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、
　　（米国）７６．４５３０−４３５４に記述されたよ
うにして行った。プロットはＰＢＳ加４％脱脂ミルク中
室温で１時間培養してブロックした。間接免疫染色は５
ｉｄｂｅｒｒｙら、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｓｈ
、　　７５．２９９−３０５　（１９８５）によって修
飾された０′Ｃｏｎｎｏｒら、Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ
、　Ｍｅｔｂ、　　５４．２６７−２７１（１９８２）
によって行った。未ラベル化ＭＳ２Ｂ６　１ｇＭまたは
コントロールＴｇＭ（ヒト血清（ｇＭＸＣｅｐｅｌ）は
プロットと共に５〜１０μ／ｍβで４時間インキュベー
トし、ＰＢＳで洗浄した。ついでプロットをアルカリホ
スファターゼラベル化ヤギ抗ヒトＩｇＭ（１：１００、
／グマ）と共に２時間インキュベートし、ＰＢＳ洗浄し
、５０ｍＭ１〜リス、ｐＨ８，３中に入れた。新たに調
製したクロマゲン（Ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）溶液（すＩフトールＡ、Ｓ−ＭＸホスフェート、１　ｍｇ　／　＋
０１１　；ファーストレッド（Ｆａｓｔ　Ｒｅｄ）Ｔ　
Ｒ塩、２＋ｎｇ／ｍｎ；共にシグマ、５０ｍＭトリス、
ＴＩＨ８、３中）を加え、カラー展開が目的とするレベ
ルに達するまでインキュベーションを続けた。ついでプ
ロットを水洗し、風乾した。

放射免疫プロッティングは同様にして行った。

ブロッキング後、６×１０６′２５■ラベル化ＭＳ２Ｂ
６　１ｇＭを加え、室温で４時間インキュベションを続
けた。ＰＢＳ洗浄後、プロットを風乾し、コダックＡＲ
フィルムを用いて、オートラジオグラフィーに付した。

精製腹水細胞及び卵巣細胞系２７７４の全細胞抽出物の
免疫プロット分析は一貫して陰性コン１−ロールＩｇＭ
（ヒト血清１ｇＭ）を用いて染色したプロットでは見ら
れなかったいくつかのＭＳ２Ｂ６１ｇＭ染色バンドを示
した。主たる成分は３８ｋＤ、４４ｋＤ及び６０ｋＤの
バンドよりなっていた。いくつかの不均質（ｈｅｔｅｒ
ｏｇｅｎｅｉｔｙ）は明らかであったが、３８ｋＤ種か
腹水腫瘍細胞調製物中での顕著なバンドであった。これ
らのバンドのいずれもコントロールＩ　ｇ　Ｍ　結合に
ついての同じプロットの染色後に現われなかった。コン
トロール１ｇＭプロットに現われる低分子量バンドはＭ
Ｓ２Ｂ６プロツトでもか１−かに存在したが、強度にお
ける差異は恐らくコントロールＩｇＭプロットについて
の故意に長くした展開時間によるものと思われる。

実施例ＩＯの生体分布（ｂｉｏｄｉｓｉｒｉｂｕｔｉｏ
ｎ）研究に用いるに先立って抗原認識を確認するためプ
ロッティング実験で放射性ヨウ素化ＭＳ２Ｂ６１ｇＭを
用いた。精製卵巣癌腹水腫瘍細胞の全細胞抽出物の１２
５１ラベル化ＭＳ２Ｂ６　１ｇＭ放射免疫プロッティン
グの結果、主として３３　ｋ　Ｄバンドが同定された（
もつとも他の実験では４４ｋＤバンドもあるレベルで蓄
積した）。１２５■ラベル化コン］・ロールＩｇＭを用
いる同様なプロットのインキュベーンコン後にはハンド
は同定されなかった。

実施例８免疫濾過卵巣癌腹水腫瘍細胞をＳｍ１ｔｈ、　Ｌ、ら、Ｊ、１ｍ
ｍｕｎｏ。

Ｍｅｔｈ、　ｌ　０５．２６３−２７３　（１９８７）
に記述したようにして調製した。粗細胞懸濁液のカルボ
ニル鉄での処理及び３６％ＰＥＲＣＯＬ　（ファーマン
ア社）中でのボウヤンｔ−（ｂｏｕｙａｎｔ）遠心分離
による汚染赤血球、リンパ球及びマクロファージの除去
によって９０−９５％純度の腫瘍細胞懸濁液を得た。４
つの異なる卵巣癌腹水腫瘍細胞調製物のプールを用いた
。細胞をＰＢＳで洗浄し、ベレット化した細胞を以下の
如く酵素溶液もしくは固定液に懸濁した：　　（ｉ）Ｐ
ＢＳ　（カルシウム及びマグネンウム添加）、（ｉ）ト
リプシン、ＰＢＳ中５００　／’ｇ／Ｊ、　　（ｉｉｉ
）プロナーセ（Ｐｒｏｎａｓｅ）、ＰＢＳ中５００μｇ
／ｍｆｆ、（ｌｖ）ノイラミダーゼ（Ｎｅｕｒａｍｉｄ
ａｓｅ）　（Ｇｉｂｃｏ社）、ＰＢＳ中１０Ｕ／ｍｎ、
（ｖ　）　Ｍｃｈｅａｎ、　１．ら（既出）の方法を用
いるＰＬＰ固定液、０．５％パラホルムアルデヒド、０
゜０７５ＭＬ−リジン及び０．ＯＩＭ過ヨウ素酸すＩ・
リウム、（ｖｉ　）グルチルアルデヒド（ｇｌｕｔｅｒ
ａｌｄｅｈｙｄｅ）　、Ｐ　Ｂ　Ｓ中０．１％、（ｖｉ
ｉ）ＰＢＳ中４％ホルムアルデヒド、（ｖｉｉ）メタノ
ール１００％及び（ｉｘ）１００％エタノール。酵素懸
濁液は３７℃で１０分インキュベートした。固定液懸濁
液は室温で１０分インキュベートした。

処理した細胞の既知少量（２Ｘ　Ｉ　Ｏ’　ｃｅｌｌｓ
／ｗｅｌｌ）をファイバーガラスフィルターで組み立て
られた免疫濾過装置（Ｂｉｏｒａｄ社）の穴に入れた。

穴をＰＢＳで洗浄しＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭで染色した。

Ｏ、ｌ　＋ｎｊ２量のＭＳ２Ｂ６　１　ｇＭ　（ＰＢＳ
中２５μｇ／ｍＡ’）を大中に流し、ついで各溶液の間
のＰＢＳ洗浄でビオチンラベル化ヤギ抗ヒトＩｇＭ（１
：１０００、シグマ社）、ストレプトアビジン（ｓｔｒ
ｅｐｔａｖｉｄｉｎ）−パーオキシダーゼ（０，５μｇ
／ｍＬ　　シグマ社）０．１ｍｌ及びクロロナフトルー
過酸化水素溶液を流した。カラー展開終了後、穴を水洗
し、ファイバーガラスフィルターを乾燥し　ｌこ　。

２つのプロテアーゼによる腹水腫瘍細胞の処理は染色に
おける実質的減少に帰結し、羊ＲＢＣからのシアリン酸
残基を除去する既知の条件下でのノイラミニダーゼは結
合に影響を与えなかった。

ここに記述しなかった他の実験では、ＭＳ２Ｂ６１ｇＭ
結合は腹水細胞のホスホリパーゼＡ２、Ｃ及びＤまたは
キチナーゼ（Ｃｈ　ｉｔ　１ｎａｓｅ）による処理によ
って影響されなかった。

我々は、Ｍａｇｎａｎ　ｉ　ら、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ
ｂｅｍ、　２５ユ、１４３６５−１４３６９　（１９８
２）に記述されたと同様な方法を用いて腹水腫瘍細胞の
脂質抽出物の薄層クロマト分離によってＭＳ２Ｂ６　１
ｇＭを結合する糖脂質構造を同定することも試みた。

糖脂質結合は見い出されなかった。

グルチルアルデヒド固定液はホルマリンよりよす活性を
保持していた。メタノール処理は殆ど完全に抗原活性を
失わせ、エタノールは実質的減少を引き起こした。

実施例９Ｇａ１２５免疫アツセイ卵巣癌細胞系［Ｃａ１２５についての酵素結合免疫アッ
セイをテストキット（ｃａ１２５テストギツｌ−、アボ
ット社）への挿入に従って行った。

Ｃａ　］、　２５標準（１６８Ｕ／ｍｌ　１００μｍに
既知少量のＣａ１２５またはＭＳ２Ｂ６　　ｒｇＭを加
えた。ＯＣ］、２５ビーズ及び０Ｃ１２５−パーオキシ
ダーゼ複合体との引き続いてのインキュベション後、ビ
ーズを洗浄、展開し、４９５ｎｍで光学密度測定を得た
。

表　　　ＦＣａ１２５についての免疫アッセイに対するＭ３２Ｂ６
ＩｇＭの影響添加（Ｃａ１２５．０Ｃ１２５，０Ｃ１２５，０ＣＩ２５、ＭＳ２Ｂ６．０．５ｎｇｎｇ０ｎｇ００ｎｇ５μｇＯＤ４９５木０．２７０．２５０．２７わずか５０ｎｇの未ラベル化マウスモノクローナル抗体
ｏｃ１２５がＣａ１２５標準のテストビズに複合化させ
たＯＣ］２５への結合を阻害した。５μｇまでのＭＳ２
Ｂ６　１ｇＭを加えた場合のＣａ１２５アツセイにおい
ては競合は起こらなかったが、このことは０ＣＩ２５と
ＭＳ２Ｂ６１ｇＭとの間に顕著な交差反応性がないこと
を意味する。

実施例１０ヌードマウスにおける生体分布研究６−８週令の雌性無胸腺ｎｕ／ｎｕマウスをフィルタト
ップケージ（ｆｉｌｖｅｒ−ｔｏｐ　ｃａｇｅｓ）中で
無病原体環境下に保持した。適合化させた卵巣癌細胞系
２７７４の腹腔内増殖よりなる腹腔内卵巣癌モデルを用
いた。１ＯＸｌＯ’２７７４細胞の腹腔内投与は２０〜
４０日以内での受容体ヌードマウスのおしなべての死を
引き起こす。網、横隔膜及び脇士での腹水のみならず腹
水腫瘍細胞がきまって観察される。これらの実験におい
て、２７７４細胞をマウスに腹腔内移植し、２１日目に
各々に０．５ｍＰＰＢ５中の２　μｇ＋２５Ｉ−ラベル
化ＭＳ２Ｂ６１ｇＭを腹腔内投与した。７２時間後に、
マウスを殺し、各マウスの腫瘍及び正常組織から組織検
体を得た。検体をＰＢＳでリンスし、水を切って（ｄｒ
ａｉｎｅｄ）　、秤量し、ガンマカウンターで２Ｊをカ
ウントした。各マウスからの、腫瘍及び正常組織の対中
でのインプットｃｐｍ／ｇパーセントの差の統計的分析
を対（ｐａｉｒｅｄ）　ｔ−テストを用いて行った。

卵巣癌細胞系２７７４で腹腔内移植したヌードマウスか
らの腫瘍小結節は明らかにＡＤＣＡ抗原を発現したが、
このことはビオチンラベル化コントロールＩｇＭによっ
てでなく、ビオチンラベル化ＭＳ２８６ＴｇＭによる腫
瘍小結節の陽性染色を実証する。生体内生体分布研究は
抗原認識において活性であることが知られている腹腔内
１２５Ｉ−ラベル化ＭＳ２Ｂ６１ｇＭを用い、放射免疫
プロッティングに基づいて行った。各３匹のマウスを用
いる２つの別々の実験からの生体分布結果を合わせ表Ｇ
に要約する。

表　Ｇ（続き）表　　Ｇ１２５）−ラベル化ＭＳ２Ｂ６ＩｇＭ卵巣癌における生体分布ヌードマウスモデル腫瘍皮膚筋肉胃小腸大腸０．５４９土帆１２１０．１３７±０．１０００．０８４±０．０８１０．１１４±０．１３００．１７６　　±　０２１４０１７６　±　０．１３６４．８３．１３．１０．００４０．００３０　、　Ｏ１，２０，０１９０，０１３１２５■ ラベル化ＭＳ２Ｂ６　１ｇＭ卵巣癌中での生体分布ヌードマウスモデル％インプラ１− 〇ｐｍ／ｑｍａ組織肺臓　　０．０９８肝臓　　０．１７６腎臓　　０．２７５心臓　　０［００肺　　　　０．＋４０椎骨　　０−０９７（Ｖｅｒ＋、ａｂｒａ）脳　　　　０．０１２腫瘍／正常５組織比 ±　０．０３６　　　　５．６ ±　０．０９３　　　　３．１ ±　０．２２４　　　　２．０ ±　０．０６０　　　　５．５ ±　０．０６８　　　　３．９士帆０７６５．７Ｐ値ＣＯ，００９０，０１１０，０４８０，００４０，００９０，００３ ±０．００９４５．８０．００５１〕平均士標準偏差（大腸（ｎ　＝　５）の場合を除きｎ−６）平均インプ
ット％　ｃｐｍ／ｇデータから計算しｌこ各動物（大腸（ｎ−５）を除いてｎ−６）内の腫瘍を正
常組織と比較する対ｔ−テストを用いて計算した尾が２
つの（２−ｔａｉｌｅｄ）　Ｐ値実質的量の１２５Ｉ−
ラベル化ＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭが、腹腔内腫瘍増殖物を
有する動物における血液（０，５〜２％インプットｃｐ
ｍ／ｇ、平均０．６４７±０．４４５）及び腹水（２〜
６％インプットｃｐｍ／ｇ）中で７２時間後も存在して
いた。血液または腹水による腫瘍または正常組織検体の
汚染を放射能カウンティングに先立ちＰＢＳ中での注意
深いリンスによって最小化した。腫瘍検体は、大綱及び
横隔膜下の転移性増殖物から取り出した腫瘍検体につい
て平均パーセントインプットｃｐｍ／ｇ値０．５４９±
０．１２１であって、正常組織検体より１２６■−ラベ
ル化ＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭを有意に保持していた。正常
組織の間ではより低い値が賞して観察され、これらの差
異は統計的に有意であった。正常組織に対する腫瘍の比
は２．０（腎臓）から４５．８（脳）に亘っていた。各
動物内でのすべての正常組織についての平均取込みを対
し一テストによって腫瘍組織取込み（ｕｐｔａｋｅ）と
比較したところ、０．００４６の二層Ｐ値が得られＩこ
。

実施例１１ヌードマウスの１２Ｊ−ＭＳ２Ｂ６　　ＭＡｂ放射免疫
療法卵巣癌細胞系２７７４を腹腔内注射したヌードマウスの
死を防止する放射性ヨウ素ラベル化ＭＳ２Ｂ６の潜在能
力を示すパイロット研究を行った。

細胞系２７７４のマウス当りｌ　ＯＸＩ　Ｏ’細胞の腹
腔内注射を受けた３日後に６匹のヌードマウスの各々に
１０μＣ１の１２５■−ラベル化ＭＳ２８６を腹腔内注
射した以外実施例ＩＯに記述したと同し条件を用いた。

組織（ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ）コントロルは治療効果の
欠如においてすべてのマウスが４０日で腹腔内腫瘍増殖
に屈服することを示した。

この実験の６匹のマウス中いずれもが腫瘍を発展させな
かった。１匹のマウスは未知の原因で３週間で死んだが
腫瘍は存在しなかった。他の５匹のマウスは２７７４注
射後８４日以上腹腔内腫瘍の証拠なしに生き続けた。

本発明の特徴及び態様は以下の通りである。

１、患者からのザンプルをＡＤＣＡ結合抗体と接触させ
、抗体とサンプル成分との結合を測定することを特徴と
する患者中のＡＤＣＡ抗原エピドープを有する腺癌の存
在を決定する方法。

２　→ノーンプルが流体サンプルである請求項１の方法
。

３．１ノ“ンプルか血液血清サンプルである請求項２の
方法。

４、サンプルか組織サンプルである請求項Ｊの方法。

５、抗体がヒトモノクローナル抗体である請求項１の方
法。

６、抗体がＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭ抗体である請求項１の
方法。

７、患者からの血液血清サンプルをＡＤＣΔ抗原または
ＡＤＣＡ抗イディオタイプ抗体き接触させ、ＡＤＣＡ抗
原またはＡＤＣＡ抗イディオタイプ抗体どサンプル中の
抗体との結合を測定することを特徴どする患者中のＡＤ
ＣＡ抗原エピト−プを有する腺癌の存在を決定する方法
。

８゜患者からの血液血清サンプルをＡＤＣＡ結合抗体と
接触させ、ＡＤＣＡ結合抗体とサンプル中のＡＤＣＡ抗
原との結合を測定することを特徴とする患者中のＡＤＣ
Ａ抗原ユピ）・−プを有する腺癌の存在を決定する方法
。

９、それから画像を誘導できる明瞭な性質を有するラベ
ルに結合したＡＤＣＡ結合抗体を腺癌であると疑われる
身体内の組織に供給し、ついで該組織を有する身体領域
からの画像を得ることを特徴とする腺癌を画像化する方
法。

ｌＯ１抗体かヒトセックローナル抗体である請求項９の
方法。

１１、抗体がＭＳ２Ｂ６　　ＩｇＭである請求項１０の
方法。

１２　組織か卵巣である請求項９の方法。

１３、組織が非卵巣である請求項９の方法。

１４−ラベルか放射ラベルであり、腺癌であると疑われ
る組織を含む身体領域からの放射線の検出から画像を誘
導する請求項９の方法。

＋５．ラベルが常磁性対比ラベルであり、腺癌であると
疑われる組織を含む身体領域のＮＭＲ測定によって画像
を誘導する請求項９の方法。

１６−単独でもしくは二次処理と組み合わせて腺癌細胞
の生殖を減じるのに有用な治療成分に結合したＡＤＣＡ
結合抗体を腺癌組織に供給することを特徴とするＡＤＣ
Ａ抗５ｆ、エピドープを有する腺癌の放射線治療方法。

１７、治療成分がそれが結合する腺癌細胞に放射線を発
する請求項１６の方法。

１８、治療成分が細胞毒性もしくは細胞活動停止剤であ
る請求項１′６の方法。

１９、治療成分が第２の剤もしくは放射線の作用を受け
たときに細胞毒性もしくは細胞活動停止剤を生成する請
求項１６の方法。

２０、ＭＳ２Ｂ６ハイブリドーマ。

２１、優先的にＡＤＣＡ抗原と結合する抗体。

２２、ヒトモノクローナル抗体であるＭ次項２１の抗体
。

２３、Ｍ次項２２の抗体とＬテノＭＳ　２　Ｂ　６ｒｇ
Ｍ抗体。

２４、画像化成分に結合した請求項２１の抗体。

２５、画像化成分か放射ラベルまたはＮＭＲＵ比ラベル
である請求項２４の抗体。

２６、治療成分に結合した請求項２１の抗体。

２７、細胞毒性または細胞活動停止剤に結合した請求項
２６の抗体。

２８゜第２の剤または放射線の作用を受けたときに細胞
毒性もしくは細胞活動停止剤を生成する剤に結合した請
求項２６の抗体。

２９、ＡＤＣＡ抗原。

３０、ＡＤＣＡ抗イディオタイプ抗体。

特許出願人　アスパラ・ダイアグノステイツクス・コー
ポレーション

Claims

【特許請求の範囲】１、患者からのサンプルをＡＤＣＡ結合抗体と接触させ
、抗体とサンプル成分との結合を測定することを特徴と
する患者中のＡＤＣＡ抗原エピドープを有する腺癌の存
在を決定する方法。２、患者からの血液血清サンプルをＡＤＣＡ抗原または
ＡＤＣＡ抗イデイオタイプ抗体と接触させ、ＡＤＣＡ抗
原またはＡＤＣＡ抗イデイオタイプ抗体とサンプル中の
抗体との結合を測定することを特徴とする患者中のＡＤ
ＣＡ抗原エピドープを有する腺癌の存在を決定する方法
。３、患者からの血液血清サンプルをＡＤＣＡ結合抗体と
接触させ、ＡＤＣＡ結合抗体とサンプル中のＡＤＣＡ抗
原との結合を測定することを特徴とする患者中のＡＤＣ
Ａ抗原エピドープを有する腺癌の存在を決定する方法。４、それから画像を誘導できる明瞭な性質を有するラベ
ルに結合したＡＤＣＡ結合抗体を腺癌であると疑われる
身体内の組織に供給し、ついで該組織を有する身体領域
からの画像を得ることを特徴とする腺癌を画像化する方
法。５、単独でもしくは二次処理と組み合わせて腺癌細胞の
生殖を減じるのに有用な治療成分に結合したＡＤＣＡ結
合抗体を腺癌組織に供給することを特徴とするＡＤＣＡ
抗原エピドープを有する腺癌の放射線治療方法。６、ＭＳ２Ｂ６ハイブリドーマ。７、優先的にＡＤＣＡ抗原と結合する抗体。８、ＡＤＣＡ抗原。９、ＡＤＣＡ抗イデイオタイプ抗体。