JPH03251195A - Ａｔｐ測定方法 - Google Patents
Ａｔｐ測定方法Info
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- JPH03251195A JPH03251195A JP4773290A JP4773290A JPH03251195A JP H03251195 A JPH03251195 A JP H03251195A JP 4773290 A JP4773290 A JP 4773290A JP 4773290 A JP4773290 A JP 4773290A JP H03251195 A JPH03251195 A JP H03251195A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
Ａ、産業上の利用分野
本発明は、試料中のＡＴＰ濃度を測定する方法に関する
。
。
Ｂ１発明の概要
本発明は、試料に抽出剤を混合した溶液を、キャリア液
により、所定の流路にて流通させ、有機溶媒混合コイル
にて溶液に有機溶媒を混合し、セパレータにて溶液を水
相および有機相に分離し、試薬混合コイルにて、分離し
た水相の溶液にＡＴＰ試薬を混合し、光量検出器にて溶
液の発光量を検出することとし、 簡素な操作により、感度の優れた測定を行えるようにし
たものである。
により、所定の流路にて流通させ、有機溶媒混合コイル
にて溶液に有機溶媒を混合し、セパレータにて溶液を水
相および有機相に分離し、試薬混合コイルにて、分離し
た水相の溶液にＡＴＰ試薬を混合し、光量検出器にて溶
液の発光量を検出することとし、 簡素な操作により、感度の優れた測定を行えるようにし
たものである。
Ｃ０従来の技術
アデノノン３リン酸（ＡＴＰ）は生物が生活するために
必要な代謝活性物質である。ＡＴＰは生きている微生物
すべてに存在し、死んでいる微生物には存在しない。
必要な代謝活性物質である。ＡＴＰは生きている微生物
すべてに存在し、死んでいる微生物には存在しない。
この特徴により、ＡＴＰは次の２点て重要とされている
。
。
■ 代謝・生理学的研究において、細胞内ＡＴＰレベル
は細胞のエネルキー状態（活性）の指標となる点。
は細胞のエネルキー状態（活性）の指標となる点。
■ 細胞当たりのＡＴＰ量が一定であると仮定すれば、
微生物あるいは組織培養中の細胞数の測定を行える点。
微生物あるいは組織培養中の細胞数の測定を行える点。
細胞あるいは微生物中のＡＴＰを測定するためには、Ａ
ＴＰを細胞の外へ取り出す抽出操作が必要であり、抽出
剤を使用して抽出を行う方法が主流となっている。ただ
し、この方法の場合、蛍ルンフェリン・ルンフエラーゼ
反応を利用し１こＡＴＰ測定に抽出剤が影響を与えるの
で、抽出・操作の後に抽出剤を除去する等の処理が必要
となる。
ＴＰを細胞の外へ取り出す抽出操作が必要であり、抽出
剤を使用して抽出を行う方法が主流となっている。ただ
し、この方法の場合、蛍ルンフェリン・ルンフエラーゼ
反応を利用し１こＡＴＰ測定に抽出剤が影響を与えるの
で、抽出・操作の後に抽出剤を除去する等の処理が必要
となる。
抽出剤を除去する場合は、有機溶媒による抽出除去を行
う。この方法は、トリクロロ酢酸のような有機酸を抽出
剤として使用した場合に適用できる。
う。この方法は、トリクロロ酢酸のような有機酸を抽出
剤として使用した場合に適用できる。
また、ツメチルスルホキサイド（ＤＭＳＯ） のような
有機溶媒を抽出剤として使用した場合は、一般に希釈に
よって抽出剤の測定への影響を小さくする方法がとられ
る。
有機溶媒を抽出剤として使用した場合は、一般に希釈に
よって抽出剤の測定への影響を小さくする方法がとられ
る。
Ｄ１発明が解決しようとする課題
しかしながら、上記の抽出剤を除去する方法では、分液
ロードなどの特殊機器を使用して煩雑な操作を行わなけ
ればならないという問題かあっｆ二。
ロードなどの特殊機器を使用して煩雑な操作を行わなけ
ればならないという問題かあっｆ二。
また、希釈によって抽出剤の影響を抑える方法では、検
出限界が悪化するという問題があった。
出限界が悪化するという問題があった。
本発明は、このような問題点に鑑み、抽出剤を除去する
方法において、簡素な操作により実行でき、しかも希釈
倍率を抑えて検出感度を確保したものを提供することを
目的とする。
方法において、簡素な操作により実行でき、しかも希釈
倍率を抑えて検出感度を確保したものを提供することを
目的とする。
８１課題を解決するための手段および作用本発明は、試
料に抽出剤を混合してＡＴＰを抽出し、この溶液を所定
の流路に流通させる。
料に抽出剤を混合してＡＴＰを抽出し、この溶液を所定
の流路に流通させる。
この流路において溶液は、まず、有機溶媒混合コイルを
通り、ここで有機溶媒か混合撹拌される。
通り、ここで有機溶媒か混合撹拌される。
次に溶液は、セパレータにて、ＡＴＰを含む水相と、抽
出剤を含む有機相に分離される。この後、分離した水相
は、試薬混合コイルに搬送され、ＡＴＰ試薬が混合撹拌
される。この後、この溶液は、光量検出器に搬送され、
ここで発光量が測定される。この発光量から溶液中のＡ
ＴＰ１度か演算される。
出剤を含む有機相に分離される。この後、分離した水相
は、試薬混合コイルに搬送され、ＡＴＰ試薬が混合撹拌
される。この後、この溶液は、光量検出器に搬送され、
ここで発光量が測定される。この発光量から溶液中のＡ
ＴＰ１度か演算される。
Ｆ 実施例
以下、図面を用いて、本発明の詳細な説明する。
微生物懸濁液０．５ｍｇに、ＡＴＰ抽出剤としてトリク
ロロ酢酸溶液（５Ｗ／Ｖ％）０．５ｍｇを添加して混合
する。これにより、溶液中の微生物からＡＴＰが抽出さ
れる。
ロロ酢酸溶液（５Ｗ／Ｖ％）０．５ｍｇを添加して混合
する。これにより、溶液中の微生物からＡＴＰが抽出さ
れる。
第１図は、本実施例で使用するフローインノエクション
（Ｆ Ｉ Ａ）分析装置を示す。
（Ｆ Ｉ Ａ）分析装置を示す。
上記の処理を行った後、その溶液０ 、１ ｍＱをＰＩ
Ａ装置に注入する。
Ａ装置に注入する。
この装置の流路には、ポンプ１により、キャリア１（０
，１Ｍｈリスバッファ）および有機溶媒（エーテル）か
送出されている。弁２から注入された溶液は、キャリア
液によって流路を移動し、Ａ点にて有機溶媒が混合され
る。
，１Ｍｈリスバッファ）および有機溶媒（エーテル）か
送出されている。弁２から注入された溶液は、キャリア
液によって流路を移動し、Ａ点にて有機溶媒が混合され
る。
この後、この混合溶液は抽出コイル３を通って撹拌され
る。この際、トリクロロ酢酸が有機相に移動する。
る。この際、トリクロロ酢酸が有機相に移動する。
この後、混合溶液は、セパレータ４に注入される。セパ
レータ４は、テフロン膜により水相と有機相とを分離さ
せるものてあり、ここて、トリクロロ酢酸を含む有機溶
媒が分離される。
レータ４は、テフロン膜により水相と有機相とを分離さ
せるものてあり、ここて、トリクロロ酢酸を含む有機溶
媒が分離される。
分離しｆコ有機相は外部に排出され、水相はＢ点に移動
する。
する。
ポンプ５により送出されｊ二Ａ Ｔ Ｐ測定試薬（蛍ル
ンフェリン・ルシフェラーゼ）は、Ｂ点において、上記
の溶液（分離した水相）に混合される。
ンフェリン・ルシフェラーゼ）は、Ｂ点において、上記
の溶液（分離した水相）に混合される。
この後、この溶液は、混合コイル６を通って撹拌された
うえで、検出器７に注入される。
うえで、検出器７に注入される。
検出器７は、溶液の発光量を測定する。この発光量は、
ＡＴＰ濃度に比例しているので、発光量測定結果からＡ
ＴＰ濃度を演算することができる。
ＡＴＰ濃度に比例しているので、発光量測定結果からＡ
ＴＰ濃度を演算することができる。
Ｇ９発明の詳細
な説明したように、本発明によれば、抽出剤を添加した
試料を所定の流路に注入するだけの簡素な操作により、
ＡＴＰ測定を行うことができる。
試料を所定の流路に注入するだけの簡素な操作により、
ＡＴＰ測定を行うことができる。
しかも、試料の希釈倍率を低く抑えなから、抽出剤の除
去を行うことかできるので、良好な検出感度が得られる
。
去を行うことかできるので、良好な検出感度が得られる
。
第１図は、本発明の一実施例に係るＰＴＡ装置の概略を
示す構成図である。 ２・・弁、３・・・抽出コイル、４・・・セパレータ、
６・混合コイル、７・検出器。 第１図 実施例に係る装置 ５ポツプ １ポツプ ３抽出コイル
示す構成図である。 ２・・弁、３・・・抽出コイル、４・・・セパレータ、
６・混合コイル、７・検出器。 第１図 実施例に係る装置 ５ポツプ １ポツプ ３抽出コイル
Claims (1)
- （１）試料に抽出剤を混合してＡＴＰを抽出し、ＡＴＰ
の濃度を測定する方法において、 試料に抽出剤を混合した溶液を、キャリア液により、抽
出コイル、セパレータ、試薬混合コイルおよび光量検出
器からなる所定の流路にて流通させ、 まず、抽出コイルにて、注入された溶液および有機溶媒
を混合撹拌し、 次に、セパレータにて溶液を水相および有機相に分離し
、 次に、試薬混合コイルにて、分離した水相の溶液にＡＴ
Ｐ試薬を混合撹拌し、 次に、光量検出器にて溶液の発光量を検出すること を特徴とするＡＴＰ測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4773290A JPH03251195A (ja) | 1990-02-28 | 1990-02-28 | Ａｔｐ測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4773290A JPH03251195A (ja) | 1990-02-28 | 1990-02-28 | Ａｔｐ測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03251195A true JPH03251195A (ja) | 1991-11-08 |
Family
ID=12783516
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4773290A Pending JPH03251195A (ja) | 1990-02-28 | 1990-02-28 | Ａｔｐ測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03251195A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002025262A1 (fr) * | 2000-09-25 | 2002-03-28 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Electrode a enzyme |
-
1990
- 1990-02-28 JP JP4773290A patent/JPH03251195A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002025262A1 (fr) * | 2000-09-25 | 2002-03-28 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Electrode a enzyme |
| JPWO2002025262A1 (ja) * | 2000-09-25 | 2004-01-29 | 旭化成株式会社 | 酵素電極 |
| US7169273B2 (en) | 2000-09-25 | 2007-01-30 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Enzyme electrode |
| JP4721618B2 (ja) * | 2000-09-25 | 2011-07-13 | 旭化成株式会社 | 酵素電極 |
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