JPH03246466A - クロマトグラフの転写方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）やペーパーク
ロマトグラフィにおいて、ＷＩ／ｉ５クロマトグラフィ
のプレートやペーパークロマトグラフィのペーパー（こ
れらを総称して薄層プレートという）に展開された試料
スポットを赤外分光分析法により分析するのに好都合な
媒体に転写する方法に関するものである。

（従来の技術） 薄層クロマトグラフィーで用いるプレートとしては、一
般にガラス基板やアルミニウムシート上にシリカゲルを
塗布したものが用いられている。

ペーパークロマトグラフィーでは濾紙が用いられる。試
料は溶離液によってシリカゲル層や濾紙の面内方向に展
開され、試料スポットを形成する。

薄層プレートに展開された成分をフーリエ変換赤外分光
分析法（ＦＴＩＲ）によって分析する試みもなされてい
る。ＦＴＩＲで分析するには、展開した試料スポットに
そのまま赤外線を絞って照射し、拡散反射スペクトルを
測定する方法（Ａｎａｌ。

Ｃｈｅｍ、１９ｇ９，６１，６１５−６１８参照）、分
画部分をかき取って抽出した後、ＫＢｒやＫＣＱの粉末
ペレット上に滴下し、乾燥させた後にＦＴＩＲで測定す
る方法（Ａｎａｌ、Ｃｈｅｍ、　１９８７，５９，４１
５−４１８参照）、５１層プレートの端部に赤外非吸収
物質の粉末を置いて薄層プレートからその粉末へガラス
ファイバを経てスポット成分を転写させる方法（Ａｎａ
ｌ、Ｃｈｅｍ、１９８６．５８．２７０８−２７１４参
照）などが試みられている。

（発明が解決しようとする課題） ＦＴＩＲ測定のために、薄層プレートに赤外線を直接当
てる方法は、薄層プレートの固定相のシリカゲルやペー
パーでの赤外吸収が大きいため、実用性に乏しい。

試料スポットをかき取って抽出し、ＫＢｒやＫＣＱの粉
末ペレット上に滴下してＦＴＩＲ測定する方法は、試料
が損失したり、分解したり、汚染されるなど、不正確で
あるうえに手間がかかって面倒である。

薄層プレートの端部でガラスファイバを用いて分画成分
を転写する方法では、端部に設けられるガラスファイバ
のピッチによって展開方向の分解能が決まるうえ、−次
元に展開された薄層プレートにしか適用することができ
ない。

本発明者らは、試料スポットの赤外分光分析を行なう際
に、試料スポットのかき取りを行なわず、薄層プレート
に展開された試料スポットを赤外非吸収物質層に転写す
ることにより、正確な赤外分光分析を行なうことができ
るようにする方法を既に提案している（特願平１−１９
９７０６号）。

その提案中の方法では、試料スポットをもち支持材を用
いない薄層プレートを多孔質物質板上に置き、その薄層
プレート上に赤外非吸収物質層を密着させ、溶離液を前
記多孔質物質板から薄層プレートを経て赤外非吸収物質
層方向へ毛管現象で上昇させ、赤外非吸収物質層表面か
ら揮散させて薄層プレート中の試料を赤外非吸収物質層
に転写させる。

薄層プレートに展開された試料が可視光に対して吸収を
もつものであれば、薄層プレートから赤外非吸収物質層
に転写されたことを目視で確認することができる。しか
し、試料によっては可視域で吸収をもたず、転写された
ことを目視で確認することができないことがある。その
ときは、転写時間を決めて半ば勘に頼って転写操作を行
なっているため、転写の程度が一定にならない恐れがあ
る。

そこで、本発明は薄層プレートに展開された試料スポッ
トを赤外非吸収物質層に転写するための本発明者らによ
る上記特許出願の転写方法において、試料が可視域に吸
収をもたない物質の場合でも転写を再現性よく行なうこ
とのできる方法を提供することを目的とするものである
。

（課題を解決するための手段） 本発明では、試料スポットをもち支持材を用いない第１
の薄層プレートと、色素マーカを担持させた第２の薄層
プレートとを多孔質物質板上に並べて置き、第１の薄層
プレート及び第２の薄層プレート上に赤外非吸収物質層
を密着させ、溶離液を前記多孔質物質板から前記各薄層
プレートを経て赤外非吸収物質層方向へ毛管現象で上昇
させ、赤外非吸収物質層表面から揮散させて薄層プレー
ト中の試料を赤外非吸収物質層に転写させる。

本発明ではまた。転写が行われたことを自動的に検出す
るために、前記色素マーカの位置の赤外非吸収物質層上
に光照射を行ない、その光照射位置からの反射光を受光
し、その受光信号から転写状態を監視するようにする。

第１の薄層プレート及び第２の薄層プレートとしては、
ＥｍｐｏｒｅＴ　Ｌ　Ｃシート（Ａｎａｌｙｔｉｃｈｅ
ｍＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、　Ｉｎｃ、社の商品）
、ガラス焼結プレート、セラミックプレート、ペーパー
クロマトグラフィー用ペーパーなどを用いることができ
る。

多孔質物質板としては、例えばガラスフィルタ材、セラ
ミック基板、高分子材料、ペーパー又は布のような溶液
浸透性のある材質のものを用いることができる。

赤外非吸収物質としてはＫＢｒやＫＣＱなどの粉末状の
ものを用いることができる。

溶離液としては種々の溶媒を用いることができるが、溶
出力が強く、低沸点のものが好ましい。

そのような溶媒としては、薄層プレートが順相系の場合
には極性の強いもの、例えばメタノールなどを用いるこ
とができ、薄層プレートが逆相系の場合には極性の弱い
もの、例えばアセ（−二トリルなどを用いることができ
る。

（作用） 試料が展開され分離された第１の薄層プレートと、色素
マーカを担持させた第２の薄層プレートとを並べ１両薄
層プレートの一方の面に赤外非吸収物質層を密着させ、
両薄層プレートの他方の面から溶離液を毛管現象で赤外
非吸収物質層のある側へ移動させると、第１の薄層プレ
ートでは試料成分が赤外非吸収物質層へ移動して転写さ
れるとともに、第２の薄層プレートではマーカの色素が
赤外非吸収物質層へ移動して転写される。仮りに、試料
成分が可視域に吸収をもたず、試料部分だけでは目視で
転写を認識できない場合にも、同時に色素が赤外非吸収
物質層に転写されるので、転写を目視で確認することが
できる。

もし１色素マーカの位置の赤外非吸収物質層に光を照射
し、その反射光を受光部で検出すれば、その受光信号に
より転写を自動的に監視することができる。

（実施例） 第１図は一実施例を表わす分解斜視図、第２図は第１図
のＸ−Ｘ線位置での断面図を多孔質物質板とともに表わ
したものである。

４は容器に入れられた溶離液であり、メタノールを用い
る。溶離液４には多孔質物質板６がその一部が浸るよう
に入れられている。多孔質物質板４としてはセラミック
基板を用いる。

８は転写枠であり、転写枠８にはスリット状の穴９が開
けられ、その穴９には赤外非吸収物質層１０が高密度に
、かつ、均一に充填されている。

赤外非吸収物質層１０としてはＫＢｒ層を用いる。

転写枠８の穴９は第１の薄層プレート１２ａに展開され
た試料スポット１８ａの大きさよりも少し小さ目の幅を
もち、複数個の試料スポット１８ａと第２の薄層プレー
ト１２ｂの色素スポット１８ｂを含む長さに形成されて
いる。試料スポット１８ａの大きさは５〜１０ｍｍ程度
であるので、転写枠８の穴９の幅は数ｍｍ程度が適当で
ある。１４は支持枠であり、支持枠１４には転写枠８の
穴９より少し太き目の穴が開けられている。転写枠８と
支持枠１４の間には第１の薄層プレート１２ａと第２の
薄層プレート１２ｂが並べて挾まれ。

転写枠８と支持枠１４は両端部がねし１６．１６で互い
に固定されることにより、薄層プレート１２ａ、１２ｂ
が並んで転写枠８と支持枠１４の間に挾み込まれて固定
され、転写枠８の穴９に充填された赤外非吸収物質層１
０と薄層プレート１２ａ及び１２ｂが密着する。

薄層プレート１２ａ、１２ｂは薄層クロマトグラフィー
の順相系薄層プレートであって、支持材を用いない薄層
プレートであり、ＥｍｐｏｒｅＴ　Ｌ　Ｃシート（Ａｎ
ａｌｙｔｉｃｈｅｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、　
Ｉｎｃ、社の商品）を用いる。薄層プレート１２ａには
すでに試料が展開されて試料スポット１８ａが存在して
いる。薄層プレート１２ｂには転写マーカとして色素が
担持されて色素スポット１８ｂが形成されている。

薄層プレート１２ａ、１２ｂを転写枠８と支持枠１４で
挾み込んだ状態で多孔質物質板６と薄層プレート１２ａ
、１２ｂとを接触させるために、多孔質物質板６の表面
には支持枠１４の穴に入ってｗｔＭプレート１２ａ、１
２ｂと接触する隆起部６ａが形成されている。

溶離液４が赤外非吸収物質層１０の表面から揮散するの
を促すために、赤外非吸収物質層１ｏの上方にファンヒ
ータを設けて温風を吹きつけてもよい。

次に、本実施例の動作について説明する。

試料としては風邪薬の成分である無水カフェイン、ツェ
ナセチン及びノスカピンの混合物を用い、この試料を薄
層クロマトグラフィーにより薄層プレート１２ａに展開
させる。これらの試料成分は可視域に吸収をもたず、紫
外域に吸収をもっている。そのため、目視で試料スポッ
ト１８ａを認識することができず、転写させたときにも
転写状態を確認することはできない。一方、色素マーカ
の色素としてＦａｓｔ　Ｇｒｅｅｎ　Ｆ　ＣＦを用いる
。ｗＩ層プレート１２ｂにはこの色素のスポット１８ｂ
を形成しておく。

試料が展開された薄層プレート１２ａと色素スポット１
８ｂをもつ薄層プレート１２ｂとを第１図のように、赤
外非吸収物質１０が充填された転写枠８と穴の開いてい
る支持枠１４とで挾み込んで固定する。これを、第２図
に示されるように薄層プレート１２ａ、１２ｂが多孔質
物質板６の表面と接触する状態に置く。この状態で矢印
で示されるように溶離液４が多孔質物質板６を通り、薄
層プレート１２ａ、１２ｂ中を上昇して赤外非吸収物質
層１０に至り、その表面から揮散する。このとき、薄層
プレート１２ａ中の試料成分は溶離液４の移動にともな
って上方に移動し、赤外非吸収物質層１０に転写され、
薄層プレート１２ｂの色素も溶離液４の移動にともなっ
て赤外非吸収物質層１ｏに転写される。転写溶媒である
溶離液４は溶出力の強いものを用いているので、試料ス
ポット１８ａの転写とマーカの色素スポット１８ｂの転
写が同時に行なわれる。

赤外非吸収物質層１０が転写枠８のスリット状の穴９に
充填されているので、展開方向に沿って並んだ複数個の
試料スポット１８ａを同時に赤外非吸収物質層１０に転
写することができ、その転写後の赤外非吸収物質層１０
を試料として拡散反射法でＦＴＩＲ測定を行なえば、ク
ロマトグラムを得ることができる。このとき、スリット
状穴９の幅が試料スポット１８ａの大きさに対応した大
きさであるので、転写の際に試料がスリット幅方向に拡
がるのが防止される。

第３図は他の実施例を表わしている。

転写枠８には試料スポット１８ａを転写する領域のスリ
ット状の穴９ａと、マーカの色素スポット１８ｂを転写
する領域の穴９ｂとが別に設けられており、穴９ａ、９
ｂにはそれぞれ赤外非吸収物質層１０ａ、１０ｂである
ＫＢｒｌが充填されている。このように、試料スポット
１８ａの部分と色素スポット１８ｂの部分の転写用の穴
を別にすることにより、転写されたことをより容易に認
識することができる。

第４図は転写を自動的に検出する方法を表わしている。

色素スポット１，８ｂの色素が転写される位置の赤外非
吸収物質層１０ｂに光照射を行なう光源２０が設けられ
、その光源からの光による赤外非吸収物質層１０ｂから
の反射光を受光するために光検出器２２が設けられてい
る。２４は光検出器２２の検出信号から色素が赤外非吸
収物質層１０ｂの表面に現われたことを判定するデータ
処理部であり、データ処理部２４の信号により転写が終
了したことを知らせるためにランプ２６とブザー２８が
設けられている。

第４図の本実施例によれば、転写枠８と支持枠１４に薄
層プレート１２ａ、１２ｂを挾んで多孔質物質板６上に
置き、溶離液４を上昇させて転写を行なわせると、転写
される前の赤外非吸収物質層１０ｂからの反射光の検出
強度と、転写されて赤外非吸収物質層１０ｂ上に色素が
現われたときの反射光の検出強度との間には差が生じ、
データ処理部２４によりこの差が検出される。

マーカの色素の濃度や量を一定にして薄層プレート１２
ｂに担持させることにより、再現性よく転写することが
できる。

（発明の効果） 本発明では転写しようとする試料スポットをもつ薄層プ
レートと、マーカとして色素を担持させた薄層プレート
とを並べて配置し１色素を試料と同時に赤外非吸収物質
層に転写させるようにしたので、試料が可視域に吸収を
もたない場合でも、転写されたことを容易に確認するこ
とができる。

色素マーカの位置の赤外非吸収物質層上にその色素を光
学的に検出する監視装置を備えると、転写を自動的に検
出することができ、転写操作の再現性を向上させること
ができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は一実施例を示す分解斜視図、第２図は第１図の
Ｘ−Ｘ線位置での断面図を多孔質物質板とともに示す断
面図、第３図は他の実施例を示す分解斜視図、第４図は
第３図のＹ−Ｙ線位置での断面図を多孔質物質板及び光
学的監視装置とともに示す断面図である。 ４・・・・・・溶離液、６・・・・・・多孔質物質板、
８・・・・転写枠、９，９ａ、９ｂ・・・・・・転写枠
の穴、１０，１０ａ、１０ｂ・・・・・・赤外非吸収物
質層、１２ａ・・・・・第１の薄層プレート、１２ｂ・
・・・・・第２の薄層プレート、１８ａ・・・・・試料
スポット、１８ｂ・・・マーカの色素スポット、２０・
・・・・・光源、２２・・・光検出器、２４・・・・・
データ処理部。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）試料スポットをもち支持材を用いない第１の薄層
   プレートと、色素マーカを担持させた第２の薄層プレー
   トとを多孔質物質板上に並べて置き、第１の薄層プレー
   ト及び第２の薄層プレート上に赤外非吸収物質層を密着
   させ、溶離液を前記多孔質物質板から前記各薄層プレー
   トを経て赤外非吸収物質層方向へ毛管現象で上昇させ、
   赤外非吸収物質層表面から揮散させて薄層プレート中の
   試料を赤外非吸収物質層に転写させる転写方法。
2. （２）前記色素マーカの位置の赤外非吸収物質層上に光
   照射を行ない、その光照射位置からの反射光を受光し、
   その受光信号から転写状態を監視する請求項１に記載の
   クロマトグラフの転写方法。