JPH03173830A - ワクチン組成物 - Google Patents
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、宿主に病原体に対する強力な防御免疫応答を
惹起させる新規組成物、および該組成物を含有するワク
チンに関する。
惹起させる新規組成物、および該組成物を含有するワク
チンに関する。
［従来の技術］
ある種の抗原は体液性免疫応答を生成させるにはＴヘル
パー細胞とＢ細胞の協力を必要とすることが知られてい
る。このような抗原はＴ細胞エピドープおよびＢ細胞エ
ピドープを含有する。
パー細胞とＢ細胞の協力を必要とすることが知られてい
る。このような抗原はＴ細胞エピドープおよびＢ細胞エ
ピドープを含有する。
Ｔヘルパー細胞エピドープはタンパク質または複合炭水
化物のような抗原のサブパートであり、このサブパート
が抗原提示細胞（ＡＰＣ）によってＴヘルパー細胞に提
示され、次にこのＴヘルパー細胞が活性化されて、Ｂ細
胞がヘルパーＴ細胞依存性免疫応答により問題の抗原に
対する特異的抗体を生産するのを“補助する” （Ｓｃ
ｈｗａｒｔｚ、 Ａｎｎ。
化物のような抗原のサブパートであり、このサブパート
が抗原提示細胞（ＡＰＣ）によってＴヘルパー細胞に提
示され、次にこのＴヘルパー細胞が活性化されて、Ｂ細
胞がヘルパーＴ細胞依存性免疫応答により問題の抗原に
対する特異的抗体を生産するのを“補助する” （Ｓｃ
ｈｗａｒｔｚ、 Ａｎｎ。
Ｒｅｖ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ３ ： ２３７−２６１
［１９８５］） 、 Ｔ細胞エピドープは当業者に数
多く知られている（例えば、Ｇｏｏｄら、Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ ８５：１
１９９−１２０３［１９８８］およびＦｒａｎｃｉｓら
、Ｎａｔｕｒｅ ３３０： １６８−１７０（１９８７
］を参照されたい）。Ｔヘルパー細胞エピドープはＤｅ
Ｌｉｓｉ ら、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ、 ＵＳＡ ８２ニア０４８−７０５２ ［１９
８５］およびＲＯｔｈｂａｒｄら、ＥＭＢＯＪ、 ７：
９３−１００ ［１９８８］に記載される方法を用い
て予測できる。
［１９８５］） 、 Ｔ細胞エピドープは当業者に数
多く知られている（例えば、Ｇｏｏｄら、Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ ８５：１
１９９−１２０３［１９８８］およびＦｒａｎｃｉｓら
、Ｎａｔｕｒｅ ３３０： １６８−１７０（１９８７
］を参照されたい）。Ｔヘルパー細胞エピドープはＤｅ
Ｌｉｓｉ ら、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ、 ＵＳＡ ８２ニア０４８−７０５２ ［１９
８５］およびＲＯｔｈｂａｒｄら、ＥＭＢＯＪ、 ７：
９３−１００ ［１９８８］に記載される方法を用い
て予測できる。
多形性クラスＩＩＭＨＣ遺伝子による個々のＴ細胞エピ
ドープに対する応答性の厳格な遺伝子コントロールによ
り、単一子細胞エビトーブを含有するワクチンの有用性
が限定される。しかしながら、最近、ある種のＴ細胞エ
ピドープは多数のＤＲハブロタイブによって認識され、
それ故に普遍的なＴ細胞エピドープとして使用しうろこ
とが判明している（ Ｓ ｉｎ ｉｇａｇ ｌ ｉａら
、 Ｎａｔｕｒｅ ３３６： ７７８−７８０［１９８
８］）。
ドープに対する応答性の厳格な遺伝子コントロールによ
り、単一子細胞エビトーブを含有するワクチンの有用性
が限定される。しかしながら、最近、ある種のＴ細胞エ
ピドープは多数のＤＲハブロタイブによって認識され、
それ故に普遍的なＴ細胞エピドープとして使用しうろこ
とが判明している（ Ｓ ｉｎ ｉｇａｇ ｌ ｉａら
、 Ｎａｔｕｒｅ ３３６： ７７８−７８０［１９８
８］）。
Ｂ細胞エピドープは抗体によって認識されうるペプチド
、ポリペプチド、ハブテンまたは炭水化物のような抗原
領域である。Ｂ細胞エピドープを形成する抗原の台底サ
ブパートは宿主に防御免疫応答を誘導しうることが見い
だされている。従って、例えば、Ｂ細胞エピドープを提
示する化学合成ペプチドは、宿主内で天然分子に結合す
る抗体の形成を誘導することができる（Ａｒｎｏｎら、
Ｐｒｏｃ。
、ポリペプチド、ハブテンまたは炭水化物のような抗原
領域である。Ｂ細胞エピドープを形成する抗原の台底サ
ブパートは宿主に防御免疫応答を誘導しうることが見い
だされている。従って、例えば、Ｂ細胞エピドープを提
示する化学合成ペプチドは、宿主内で天然分子に結合す
る抗体の形成を誘導することができる（Ａｒｎｏｎら、
Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ ６８： １４５
０−１４５５ ［１９７１］） 、 Ｂ細胞エピドープ
を提示するかかるペプチドが宿主内で免疫応答を惹起す
るためには、そのペプチドはキャリヤーに結合されてい
なければならないことに留意すべきである。この種のキ
ャリヤーは通常タンパク質である。かかるキャリヤータ
ンパク質は当業者に多数知られている。また、キャリヤ
ータンパク質は先に述べたＴ細胞エピドープ機能をも提
供することができる。
０−１４５５ ［１９７１］） 、 Ｂ細胞エピドープ
を提示するかかるペプチドが宿主内で免疫応答を惹起す
るためには、そのペプチドはキャリヤーに結合されてい
なければならないことに留意すべきである。この種のキ
ャリヤーは通常タンパク質である。かかるキャリヤータ
ンパク質は当業者に多数知られている。また、キャリヤ
ータンパク質は先に述べたＴ細胞エピドープ機能をも提
供することができる。
ワクチンにおいて、単一Ｂ細胞エピドープのキャリヤー
タンパク質として現在使用されているタンパク質の一部
は、それら自体がワクチン中で抗原として用いられてい
る。ワクチン中でキャリヤータンパク質として使用され
るタンパク質の例は、破傷風を起こす病原体であるクロ
ストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅ
ｔａｍｉ）の破傷風毒素、およびジフテリアを起こす病
原体であるコリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（
クレープス−レフラー桿菌（Ｋｌｅｂｓ−Ｌｏｅｆ ｆ
１ｅｒｂａｃｉｌｌｕｓ） ）のジフテリア毒素であ
る。これらの毒素はトキソイド形態、すなわち毒性を失
った形態、でキャリヤータンパク質として使用されるこ
とに留意し？、Ｃければならない。
タンパク質として現在使用されているタンパク質の一部
は、それら自体がワクチン中で抗原として用いられてい
る。ワクチン中でキャリヤータンパク質として使用され
るタンパク質の例は、破傷風を起こす病原体であるクロ
ストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅ
ｔａｍｉ）の破傷風毒素、およびジフテリアを起こす病
原体であるコリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（
クレープス−レフラー桿菌（Ｋｌｅｂｓ−Ｌｏｅｆ ｆ
１ｅｒｂａｃｉｌｌｕｓ） ）のジフテリア毒素であ
る。これらの毒素はトキソイド形態、すなわち毒性を失
った形態、でキャリヤータンパク質として使用されるこ
とに留意し？、Ｃければならない。
以下の第■表（完全なものではない）には数種の病原体
が示してあり、これらの病原体に対するワクチンは現在
市販されているか又は予見可能な将来において市販され
る見込みがあり、そして本発明のＴ細胞エピドープおよ
び／またはＢ細胞エピドープはこれらの病原体に由来す
ることができる： 第 Ｉ 表 集団 病原体 疾病ヒ ト
コリネバクテリウム・ジフテリア
ジフテリア（クレープス−レフラー桿菌） クロストリジウム・テタニ 破傷風 第 ■ 表（続き） （Ｒａｔ）ｉｅｓ Ｖｉｒｕｓ） 集団 ヒト 第 Ｉ 表（続き） 病原体 ｎ−１ ＩＶ−２ ＴＬＶ 疾病 エイズ エイズ 白血病 ポックスウィルス （Ｐｏｘ ｖｉｒｕｓ） 天然痘 上記の病原体に対するワクチンは、集団の実質的にすべ
ての構成員に防御免疫を賦与するのに使用できる。予防
接種に対する個体の反応性が可変的であるために、その
集団の全員に防御免疫を賦与することはほとんど不可能
である。しかしながら、通常、病原体は感染症を引き起
こすことに関して病原体の保有者と免疫性のない宿主と
の間の密接な相互作用に依存するので、所定の集団に免
疫性のない個体が少数存在することは、予防接種計画の
成功を危うくするものではない。
が示してあり、これらの病原体に対するワクチンは現在
市販されているか又は予見可能な将来において市販され
る見込みがあり、そして本発明のＴ細胞エピドープおよ
び／またはＢ細胞エピドープはこれらの病原体に由来す
ることができる： 第 Ｉ 表 集団 病原体 疾病ヒ ト
コリネバクテリウム・ジフテリア
ジフテリア（クレープス−レフラー桿菌） クロストリジウム・テタニ 破傷風 第 ■ 表（続き） （Ｒａｔ）ｉｅｓ Ｖｉｒｕｓ） 集団 ヒト 第 Ｉ 表（続き） 病原体 ｎ−１ ＩＶ−２ ＴＬＶ 疾病 エイズ エイズ 白血病 ポックスウィルス （Ｐｏｘ ｖｉｒｕｓ） 天然痘 上記の病原体に対するワクチンは、集団の実質的にすべ
ての構成員に防御免疫を賦与するのに使用できる。予防
接種に対する個体の反応性が可変的であるために、その
集団の全員に防御免疫を賦与することはほとんど不可能
である。しかしながら、通常、病原体は感染症を引き起
こすことに関して病原体の保有者と免疫性のない宿主と
の間の密接な相互作用に依存するので、所定の集団に免
疫性のない個体が少数存在することは、予防接種計画の
成功を危うくするものではない。
先に述べたように、第工表に列挙した病原体からのタン
パク質はＢ細胞エピドープを提示するサブユニットワク
チンのキャリヤーとして使用できる。集団の実質的にす
べての構成員に防御免疫を賦与するためにワクチン中で
現在使用され、かつ新たに開発されたワクチン中でかか
るＢ細胞エピドープのキャリヤーとして使用されている
タンパク質の例は、コリネバクテリウム・ジフテリアか
らのジフテリア毒素およびクロストリジウム・テタニか
らの破傷風毒素である。Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏｎら、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３２８ ： ２５７−２５９ ［１９８７］
は、プラスモジウム・ファルシパルムのサーカムスボロ
ゾイト（Ｃ８）タンパク質の免疫優性Ｂ細胞エピドープ
を含有する１２アミノ酸合成ペプチド（ＮＡＮＰ）、を
破傷風トキソイド（ＴＴ）に接合させた。この方法によ
り得られた組成物は、水酸化アルミニウムアジュバント
の添加後、マラリアワクチンとして３５人の健康なヒト
ボランティアに１力月の間隔で３回筋肉内投与された。
パク質はＢ細胞エピドープを提示するサブユニットワク
チンのキャリヤーとして使用できる。集団の実質的にす
べての構成員に防御免疫を賦与するためにワクチン中で
現在使用され、かつ新たに開発されたワクチン中でかか
るＢ細胞エピドープのキャリヤーとして使用されている
タンパク質の例は、コリネバクテリウム・ジフテリアか
らのジフテリア毒素およびクロストリジウム・テタニか
らの破傷風毒素である。Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏｎら、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３２８ ： ２５７−２５９ ［１９８７］
は、プラスモジウム・ファルシパルムのサーカムスボロ
ゾイト（Ｃ８）タンパク質の免疫優性Ｂ細胞エピドープ
を含有する１２アミノ酸合成ペプチド（ＮＡＮＰ）、を
破傷風トキソイド（ＴＴ）に接合させた。この方法によ
り得られた組成物は、水酸化アルミニウムアジュバント
の添加後、マラリアワクチンとして３５人の健康なヒト
ボランティアに１力月の間隔で３回筋肉内投与された。
このマラリアワクチンはほんの２．３人の個体において
のみ防御免疫応答を生ずることが観察された。過去に、
免疫感作としてボランティアに投与された破傷風トキソ
イドは、接合体（ｃｏｎ ｊｕｇａｔｅ）の合成ペプチ
ド成分（Ｂ細胞エピドープ）に対する免疫応答を低下さ
せると提唱された。
のみ防御免疫応答を生ずることが観察された。過去に、
免疫感作としてボランティアに投与された破傷風トキソ
イドは、接合体（ｃｏｎ ｊｕｇａｔｅ）の合成ペプチ
ド成分（Ｂ細胞エピドープ）に対する免疫応答を低下さ
せると提唱された。
その間に、この観察は一般化されうろことが明らかにな
った。タンパク質のような抗原を注入された動物は、２
回目の抗原注入に対して、著しく増強された抗体反応を
生ずることによって応答することが知られている。例え
ば、ハプテンまたはペプチドの付加により修飾したもと
の抗原を用いて２回目の注射を行うと、抗原への応答は
同様に増強されるが、ペプチドまたはハブテンへの応答
は一般に抑制される。“エピドープ抑制”と呼ばれるこ
の抑制はＴおよびＢ細胞により媒介される。
った。タンパク質のような抗原を注入された動物は、２
回目の抗原注入に対して、著しく増強された抗体反応を
生ずることによって応答することが知られている。例え
ば、ハプテンまたはペプチドの付加により修飾したもと
の抗原を用いて２回目の注射を行うと、抗原への応答は
同様に増強されるが、ペプチドまたはハブテンへの応答
は一般に抑制される。“エピドープ抑制”と呼ばれるこ
の抑制はＴおよびＢ細胞により媒介される。
エピドープ抑制はもとの抗原のエピドープと反応するＢ
細胞の存在により引き起こされると考えられる。もとの
抗原の１回目の注射の結果として増殖したこれらのＢ細
胞は、その抗原の修飾部分に対するＢ細胞と競合するこ
とができ、結果的に該修飾部分に対する免疫応答の低下
を招来する（Ｓｃｈｕｔｚｅら、Ｃｅ１ｌ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、 １０４： ７９−９０ ［１９８７］）。
細胞の存在により引き起こされると考えられる。もとの
抗原の１回目の注射の結果として増殖したこれらのＢ細
胞は、その抗原の修飾部分に対するＢ細胞と競合するこ
とができ、結果的に該修飾部分に対する免疫応答の低下
を招来する（Ｓｃｈｕｔｚｅら、Ｃｅ１ｌ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、 １０４： ７９−９０ ［１９８７］）。
さらに、抗原の未修飾部分と反応すると思われるＴサプ
レッサー細胞は、抗原の該修飾部分により提示されるＢ
細胞エピドープへの抗体応答の抑制にある種の役割を演
することが示されている（ Ｔａｇａｗａら、Ｃｅ１ｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ８６： ３２７−３３６［１９
８４］）。
レッサー細胞は、抗原の該修飾部分により提示されるＢ
細胞エピドープへの抗体応答の抑制にある種の役割を演
することが示されている（ Ｔａｇａｗａら、Ｃｅ１ｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ８６： ３２７−３３６［１９
８４］）。
Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏｎら、（同上）により観察された（
ＮＡＮＰ ） ｚに対する貧弱な免疫応答では、もとの
抗原がキャリヤータンパク質（すなわち、ＴＴ）に相当
し、そして修飾部分がＢ細胞エピドープを提示する化合
物（すなわち、（ＮＡＮＰ） 、決定基）に相当するで
あろう。
ＮＡＮＰ ） ｚに対する貧弱な免疫応答では、もとの
抗原がキャリヤータンパク質（すなわち、ＴＴ）に相当
し、そして修飾部分がＢ細胞エピドープを提示する化合
物（すなわち、（ＮＡＮＰ） 、決定基）に相当するで
あろう。
抗原のサブパートから成るサブユニットワクチンは、特
に病原体の残留毒性が無視できない場合に、不活化また
は弱毒化病原体を含有するワクチンに代わるべき安全な
ワクチンである。こうして、一方ではサブユニットワク
チンは上記理由のために望ましく、他方ではエピドープ
抑制が効果のない単一Ｂ細胞エピドープワクチンを招来
しうることが知られている（Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏｎら、
同上）。従って、サブユニットワクチンを設計するため
の新しい方法が考え出されねばならなかった。
に病原体の残留毒性が無視できない場合に、不活化また
は弱毒化病原体を含有するワクチンに代わるべき安全な
ワクチンである。こうして、一方ではサブユニットワク
チンは上記理由のために望ましく、他方ではエピドープ
抑制が効果のない単一Ｂ細胞エピドープワクチンを招来
しうることが知られている（Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏｎら、
同上）。従って、サブユニットワクチンを設計するため
の新しい方法が考え出されねばならなかった。
ヘルパーＴ細胞とサプレッサーＴ細胞によって認識され
る配列は区別しうることが知られている（Ａｄｏｒｉｎ
ｉら、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、 １５０：２９３−３０
６ ［１９７９］）。
る配列は区別しうることが知られている（Ａｄｏｒｉｎ
ｉら、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、 １５０：２９３−３０
６ ［１９７９］）。
それゆえ、所定の抗原において、キャリヤー機能に関す
る情報を含むが、エピドープ抑制機能に関する情報を含
まないＴ細胞エピドープを提示する領域またはサブパー
トは識別可能であると提案された。上記識別を可能にす
る新しい試験方法が考案されねばならなかった。この試
験方法を使ってこの度、本発明によりキャリヤー機能に
ついての情報は抗原のエピドープ抑制機能についての情
報から分離できることが見いだされた。従って、本発明
によりＴヘルパー細胞成分として、キャリヤー機能に関
する情報を含むがエピドープ抑制機能に関する情報を含
まないＴ細胞エピドープを提示する化合物を含有するワ
クチンの製造が可能となった。
る情報を含むが、エピドープ抑制機能に関する情報を含
まないＴ細胞エピドープを提示する領域またはサブパー
トは識別可能であると提案された。上記識別を可能にす
る新しい試験方法が考案されねばならなかった。この試
験方法を使ってこの度、本発明によりキャリヤー機能に
ついての情報は抗原のエピドープ抑制機能についての情
報から分離できることが見いだされた。従って、本発明
によりＴヘルパー細胞成分として、キャリヤー機能に関
する情報を含むがエピドープ抑制機能に関する情報を含
まないＴ細胞エピドープを提示する化合物を含有するワ
クチンの製造が可能となった。
本発明は、病原体からの抗原またはその抗原性サブパー
トであるＢ細胞エピドープを提示する化合物、および病
原体からの抗原のサブパートであるＴヘルパー細胞エピ
ドープを提示する化合物を含んで成り、該Ｔヘルパー細
胞エピドープを提示する化合物がキャリヤー機能に関す
る情報を含むが、エピドープ抑制機能に関する情報を含
まない点に特徴がある組成物を提供する。前記化合物は
同一の病原体に由来しても、異なる病原体に由来しても
よい。それらはまた同一のタンパク質に由来するもので
あってもよい。後者の場合、抑制機能に関する情報を含
有する配列を除くか、あるいはそれらがもはや抑制機能
を示さなくなるような方法でそれらの配列を変えること
が必要であろう。
トであるＢ細胞エピドープを提示する化合物、および病
原体からの抗原のサブパートであるＴヘルパー細胞エピ
ドープを提示する化合物を含んで成り、該Ｔヘルパー細
胞エピドープを提示する化合物がキャリヤー機能に関す
る情報を含むが、エピドープ抑制機能に関する情報を含
まない点に特徴がある組成物を提供する。前記化合物は
同一の病原体に由来しても、異なる病原体に由来しても
よい。それらはまた同一のタンパク質に由来するもので
あってもよい。後者の場合、抑制機能に関する情報を含
有する配列を除くか、あるいはそれらがもはや抑制機能
を示さなくなるような方法でそれらの配列を変えること
が必要であろう。
また、本発明は、これらの組成物の製法、それを含有す
るワクチン、並びに病原体に対する防御免疫を賦与する
ためのこれらの組成物およびワクチンの使用にも関する
。前記組成物は先に述べた個々の化合物の混合物であっ
ても、単一の化学単位であってもよい。
るワクチン、並びに病原体に対する防御免疫を賦与する
ためのこれらの組成物およびワクチンの使用にも関する
。前記組成物は先に述べた個々の化合物の混合物であっ
ても、単一の化学単位であってもよい。
本明細書において、Ｂ細胞エピドープを提示する化合物
は、病気を起こす細菌、ウィルス、真菌または寄生虫の
ような病原体に由来するペプチド、ポリペプチド、ハブ
テンもしくは炭水化物であると定義される。このような
病原体の例は第１表に示してあり、Ｄａｖｉｓら、”Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ 、第３版、Ｈａｒｐｅｒ
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎに記載さ
れている。
は、病気を起こす細菌、ウィルス、真菌または寄生虫の
ような病原体に由来するペプチド、ポリペプチド、ハブ
テンもしくは炭水化物であると定義される。このような
病原体の例は第１表に示してあり、Ｄａｖｉｓら、”Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ 、第３版、Ｈａｒｐｅｒ
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎに記載さ
れている。
Ｂ細胞エピドープを提示する好適な化合物はこのような
病原体からのペプチドおよびポリペプチドである。組換
えＤＮＡ技術の出現により、病原体からの多数の抗原の
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を決定することが
可能となった。これらの抗原の既知アミノ酸配列により
、組換えポリペプチドおよび合成ペプチドのような合成
抗原の生成が可能となった。このような合成抗原は多数
知られている（”Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８９： Ｍｏｄｅ
ｒｎ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓｔｏ ｎｅｗ ｖａｃｃｉ
ｎｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ
ｏｆ ＡＩＤＳ−。
病原体からのペプチドおよびポリペプチドである。組換
えＤＮＡ技術の出現により、病原体からの多数の抗原の
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を決定することが
可能となった。これらの抗原の既知アミノ酸配列により
、組換えポリペプチドおよび合成ペプチドのような合成
抗原の生成が可能となった。このような合成抗原は多数
知られている（”Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８９： Ｍｏｄｅ
ｒｎ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓｔｏ ｎｅｗ ｖａｃｃｉ
ｎｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ
ｏｆ ＡＩＤＳ−。
Ｒ，Ａ、Ｌｅｒｎｅｒ、 Ｈ，Ｇｌｎｓｂｅｒｇ、 Ｒ
，Ｍ、ＣｈａｎｏｃｋおよびＦ、 Ｂｒｏｗｎ編、Ｃｏ
１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ［１９８９］、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 Ｕ、Ｓ、Ａ。
，Ｍ、ＣｈａｎｏｃｋおよびＦ、 Ｂｒｏｗｎ編、Ｃｏ
１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ［１９８９］、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 Ｕ、Ｓ、Ａ。
を参照されたい）。Ｂ細胞エピドープを提示する好適な
化合物はマラリア原虫からの抗原のサブパートである。
化合物はマラリア原虫からの抗原のサブパートである。
この種の抗原の例はサーカムスボロゾイト（ＣＳ）タン
パク質である。最も好ましくは、Ｂ細胞エピドープを提
示する化合物はＣＳタンパク質の反復領域の配列（ＮＡ
ＮＰ） 、 （ｎは約３〜５０である）を含有するペプ
チドである。
パク質である。最も好ましくは、Ｂ細胞エピドープを提
示する化合物はＣＳタンパク質の反復領域の配列（ＮＡ
ＮＰ） 、 （ｎは約３〜５０である）を含有するペプ
チドである。
Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物はタンパク
質または複合炭水化物のような抗原のサブパートであり
、Ｔヘルパー細胞エピドープを提示するサブパートはＤ
ｅ Ｌｉ５ｉら（同上）および／またはＲＯｔｈｂａｒ
ｄら（同上）の方法を用いて定義することができる。Ｔ
ヘルパー細胞エピドープを提示する前記化合物がキャリ
ヤー機能は付与するが、エピドープ抑制機能は付与しな
いかどぅがは、次の試験方法（これも本発明の一部であ
る）を用いて調べることができる： （ａ）抗原（Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合
物はそのサブパートである）に対する抗体を、前記の推
定上のＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合物との
反応性について試験する。これらの抗体は推定上のＴヘ
ルパー細胞エピドープを提示する前記化合物と反応すべ
きでない。
質または複合炭水化物のような抗原のサブパートであり
、Ｔヘルパー細胞エピドープを提示するサブパートはＤ
ｅ Ｌｉ５ｉら（同上）および／またはＲＯｔｈｂａｒ
ｄら（同上）の方法を用いて定義することができる。Ｔ
ヘルパー細胞エピドープを提示する前記化合物がキャリ
ヤー機能は付与するが、エピドープ抑制機能は付与しな
いかどぅがは、次の試験方法（これも本発明の一部であ
る）を用いて調べることができる： （ａ）抗原（Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合
物はそのサブパートである）に対する抗体を、前記の推
定上のＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合物との
反応性について試験する。これらの抗体は推定上のＴヘ
ルパー細胞エピドープを提示する前記化合物と反応すべ
きでない。
（ｂ）段階（ａ）で定義した推定上のＴヘルパー細胞エ
ピドープを提示する化合物を次にＢ細胞エピドープを提
示する化合物に結合させる。この方法により形成された
組成物（組成物Ａと呼ぶ）を次に非免疫処置宿主および
抗原（Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物はそ
のサブパートである）を予め注射した宿主に抗体の形成
を誘導するその活性について試験する。次いで、これら
の活性を、非免疫処置宿主および上記抗原を予め注射し
た宿主において、上記抗原に結合させた同一のＢ細胞エ
ピドープを提示する化合物を含んで成る組成物（組成物
Ｂと呼ぶ）の活性と比較する。
ピドープを提示する化合物を次にＢ細胞エピドープを提
示する化合物に結合させる。この方法により形成された
組成物（組成物Ａと呼ぶ）を次に非免疫処置宿主および
抗原（Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物はそ
のサブパートである）を予め注射した宿主に抗体の形成
を誘導するその活性について試験する。次いで、これら
の活性を、非免疫処置宿主および上記抗原を予め注射し
た宿主において、上記抗原に結合させた同一のＢ細胞エ
ピドープを提示する化合物を含んで成る組成物（組成物
Ｂと呼ぶ）の活性と比較する。
組成物Ａおよび組成物Ｂが
（Ｉ）非免疫処置宿主において抗体の形成を誘導するほ
ぼ等しい能力を有し；かつ （Ｉ［）組成物Ａでは、組成物Ｂ（抗体応答が抑制され
る）と比較して、上記抗原を予め注射（予備免疫化）し
た宿主において抗体応答の増強が観察される 場合に、Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物は
キャリヤー機能に関する情報を含むが、エピドープ抑制
機能に関する情報を含まない。
ぼ等しい能力を有し；かつ （Ｉ［）組成物Ａでは、組成物Ｂ（抗体応答が抑制され
る）と比較して、上記抗原を予め注射（予備免疫化）し
た宿主において抗体応答の増強が観察される 場合に、Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物は
キャリヤー機能に関する情報を含むが、エピドープ抑制
機能に関する情報を含まない。
先に概説したように、Ｂ細胞エピドープを提示する化合
物のキャリヤーとして抗原を含有する組成物を、前記抗
原を予め注射した宿主に注射すると、エピドープ抑制ゆ
えに抗体応答の低下が起こる。この度、本発明により、
サブユニットワクチン用のキャリヤーとして免疫処置に
すでに使用した抗原を用いることのありうる欠点が、エ
ピドープ抑制機能の情報を含まないもとの抗原の一部分
をキャリヤーとして用いることによって、利点に変換し
うろことが観察された。従って、例えば、Ｔ細胞エピド
ープを提示する化合物（この化合物は宿主を予備免疫化
するために用いた抗原からのサブパートであり、キャリ
ヤー機能の情報を含むが、エピドープ抑制機能の情報を
含まない）を含む本発明組成物が宿主の予防接種に使用
される場合、前記組成物またはそれを含有するワクチン
の一次注射は二次注射と同様な免疫系によって行われる
。これは予備免疫処置により引き起こされたＴヘルパー
細胞初回抗原投与のせいである。従って、予備免疫処置
した宿主における本発明化合物を含有するワクチンの一
次注射は、抗原（組成物中のＴヘルパー細胞エピドープ
を提示する化合物はそのサブパートである）を用いた予
備免疫処置によるＴヘルパー細胞初回抗原投与のない宿
主への一次注射と比較して、非常に増強される。−次注
射後のこの増強された免疫応答は、個体が予防接種のす
ぐ後にさらされる恐れのある毒性の強い病原体の作用を
中和するために、高力価の防御抗体を速やかに得ねばな
らない場合に特に重要である。
物のキャリヤーとして抗原を含有する組成物を、前記抗
原を予め注射した宿主に注射すると、エピドープ抑制ゆ
えに抗体応答の低下が起こる。この度、本発明により、
サブユニットワクチン用のキャリヤーとして免疫処置に
すでに使用した抗原を用いることのありうる欠点が、エ
ピドープ抑制機能の情報を含まないもとの抗原の一部分
をキャリヤーとして用いることによって、利点に変換し
うろことが観察された。従って、例えば、Ｔ細胞エピド
ープを提示する化合物（この化合物は宿主を予備免疫化
するために用いた抗原からのサブパートであり、キャリ
ヤー機能の情報を含むが、エピドープ抑制機能の情報を
含まない）を含む本発明組成物が宿主の予防接種に使用
される場合、前記組成物またはそれを含有するワクチン
の一次注射は二次注射と同様な免疫系によって行われる
。これは予備免疫処置により引き起こされたＴヘルパー
細胞初回抗原投与のせいである。従って、予備免疫処置
した宿主における本発明化合物を含有するワクチンの一
次注射は、抗原（組成物中のＴヘルパー細胞エピドープ
を提示する化合物はそのサブパートである）を用いた予
備免疫処置によるＴヘルパー細胞初回抗原投与のない宿
主への一次注射と比較して、非常に増強される。−次注
射後のこの増強された免疫応答は、個体が予防接種のす
ぐ後にさらされる恐れのある毒性の強い病原体の作用を
中和するために、高力価の防御抗体を速やかに得ねばな
らない場合に特に重要である。
それゆえ、本発明はまた、免疫量の本発明組成物または
ワクチンを用いて宿主の免疫系を刺激することから成る
病原体に対する防御免疫応答を惹起する方法に関し、好
ましくは、宿主を抗原（本発明組成物中のＴヘルパー細
胞エピドープを提示する化合物はそのサブパートである
）で予備免疫処置する方法に関する。予備免疫処置と免
疫処置間で選ばれた間隔は限定的でなく、数日間、例え
ば約５日以上１０日まで、敗退、数カ月さらには数年の
間で変化しつる。当業者は適切な間隔を選択できるしま
たはこれらの間隔について最適化された免疫処置プロト
コールを本発明に従って設計できる。
ワクチンを用いて宿主の免疫系を刺激することから成る
病原体に対する防御免疫応答を惹起する方法に関し、好
ましくは、宿主を抗原（本発明組成物中のＴヘルパー細
胞エピドープを提示する化合物はそのサブパートである
）で予備免疫処置する方法に関する。予備免疫処置と免
疫処置間で選ばれた間隔は限定的でなく、数日間、例え
ば約５日以上１０日まで、敗退、数カ月さらには数年の
間で変化しつる。当業者は適切な間隔を選択できるしま
たはこれらの間隔について最適化された免疫処置プロト
コールを本発明に従って設計できる。
さらに、上記の防御免疫応答を惹起する方法により処置
した宿主を再び本発明の組成物またはワクチン（ただし
、該組成物は初期の免疫感作において存在していたもの
と異なるＢ細胞エピドープを提示する化合物を含有）で
免疫処置する場合、前記の新しいＢ細胞エピドープに対
して増強された免疫応答が得られることも判明している
。この新しいＢ細胞エピドープは先の免疫処置で使用し
たＢ細胞エピドープが由来する宿主と異なる宿主に由来
するのが好ましい。
した宿主を再び本発明の組成物またはワクチン（ただし
、該組成物は初期の免疫感作において存在していたもの
と異なるＢ細胞エピドープを提示する化合物を含有）で
免疫処置する場合、前記の新しいＢ細胞エピドープに対
して増強された免疫応答が得られることも判明している
。この新しいＢ細胞エピドープは先の免疫処置で使用し
たＢ細胞エピドープが由来する宿主と異なる宿主に由来
するのが好ましい。
従って、本発明はさらに、
（ａ） 初めに病原体Ｐ、からの抗原で、次に少なく
とも１回、好ましくは１回または２回、病原体Ｐ２から
の抗原またはその抗原性サブパートであるＢ細胞エピド
ープを提示する化合物、および病原体Ｐ＋からの抗原の
サブパートであるＴヘルパー細胞エピドープを提示する
化合物（このＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合
物はキャリヤー機能の情報を含むが、エピドープ抑制機
能の情報を含まない点に特徴がある）を含んで成る組成
物Ｃで、あるいは （ｂ） 少なくとも１回、好ましくは２回、上記の組
成物Ｃで、 予備免疫処置された宿主（例、ヒトまたは動物）におい
て病原体Ｐ０に対して防御免疫応答を惹起する方法にも
関するものであり、この方法は、病原体Ｐ０からの抗原
またはその抗原性サブパートであるＢ細胞エピドープを
提示する化合物および病原体Ｐ、からの抗原のサブパー
トであるＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合物（
このＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合物はキャ
リヤー機能の情報を含むが、エピドープ抑制機能の情報
を含まない点に特徴がある）を含んで成る組成物Ｃの免
疫量を用いて宿主の免疫系を刺激することから成る。
とも１回、好ましくは１回または２回、病原体Ｐ２から
の抗原またはその抗原性サブパートであるＢ細胞エピド
ープを提示する化合物、および病原体Ｐ＋からの抗原の
サブパートであるＴヘルパー細胞エピドープを提示する
化合物（このＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合
物はキャリヤー機能の情報を含むが、エピドープ抑制機
能の情報を含まない点に特徴がある）を含んで成る組成
物Ｃで、あるいは （ｂ） 少なくとも１回、好ましくは２回、上記の組
成物Ｃで、 予備免疫処置された宿主（例、ヒトまたは動物）におい
て病原体Ｐ０に対して防御免疫応答を惹起する方法にも
関するものであり、この方法は、病原体Ｐ０からの抗原
またはその抗原性サブパートであるＢ細胞エピドープを
提示する化合物および病原体Ｐ、からの抗原のサブパー
トであるＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合物（
このＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合物はキャ
リヤー機能の情報を含むが、エピドープ抑制機能の情報
を含まない点に特徴がある）を含んで成る組成物Ｃの免
疫量を用いて宿主の免疫系を刺激することから成る。
病原体Ｐ０に対する免疫応答の増強は上記の免疫処置方
法の結果である。当業者は、上記の予備免疫処置がむし
ろ免疫応答の抑制を生ずると予測したであろうから、こ
の発見は驚くべきことである。
法の結果である。当業者は、上記の予備免疫処置がむし
ろ免疫応答の抑制を生ずると予測したであろうから、こ
の発見は驚くべきことである。
この驚くべき発見は、新しい防御Ｂ細胞エピドープが同
定されると、上記のように（ａ）または（ｂ）で予備免
疫処置した宿主が、前記新しい防御Ｂ細胞エピドープを
提示する化合物を含有する本発明組成物による免疫処置
に対して、増強された免疫応答でもって応答するであろ
うことを意味する。
定されると、上記のように（ａ）または（ｂ）で予備免
疫処置した宿主が、前記新しい防御Ｂ細胞エピドープを
提示する化合物を含有する本発明組成物による免疫処置
に対して、増強された免疫応答でもって応答するであろ
うことを意味する。
予防接種計画において広く使用され、それ故に上記の予
備免疫処置においてキャリヤー機能の情報を含むがエピ
ドープ抑制機能の情報を含まないＴヘルパー配列の供給
源として使用しつる抗原の例は、コリネバクテリウム・
ジフテリア（クレープス−レフラー桿菌）、クロストリ
ジウム・テタニ、ボルデテラ・パーツシス、ビブリオ・
コレラ、流行性耳下腺炎ウィルス、麻疹ウィルス、風疹
ウィルス、ポリオウィルス、ロタウィルス、肝炎ウィル
ス、インフルエンザウィルス、およびポックスウィルス
等のような第１表に示される病原体群から選ばれる病原
体に由来する抗原である。
備免疫処置においてキャリヤー機能の情報を含むがエピ
ドープ抑制機能の情報を含まないＴヘルパー配列の供給
源として使用しつる抗原の例は、コリネバクテリウム・
ジフテリア（クレープス−レフラー桿菌）、クロストリ
ジウム・テタニ、ボルデテラ・パーツシス、ビブリオ・
コレラ、流行性耳下腺炎ウィルス、麻疹ウィルス、風疹
ウィルス、ポリオウィルス、ロタウィルス、肝炎ウィル
ス、インフルエンザウィルス、およびポックスウィルス
等のような第１表に示される病原体群から選ばれる病原
体に由来する抗原である。
従って、好ましくは本発明はＴ細胞エピドープを提示す
る化合物が上記の病原体からの抗原のサブパートである
か、または核抗原に由来する組成物に関する。より好ま
しくは、前記化合物は破傷風毒素またはジフテリア毒素
のサブパートであり、最も好ましくは、次のアミノ酸配
列： Ｔｙｒ−Ａｓ ｐ−Ｐｒｏ−Ａｓ ｎ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓ ｐ−３ｅｒ−Ａｓ ｐ−Ｌｙ
ｓ−Ａｓ ｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇ Ｉｎ−Ｔ
ｈｒ−Ｍｅ ｔ −Ｖａ ｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ
−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ
（Ｉ ）を有するポリペプチドＴＴ７３−９９ま
たはその同等物である破傷風毒素のサブパートである。
る化合物が上記の病原体からの抗原のサブパートである
か、または核抗原に由来する組成物に関する。より好ま
しくは、前記化合物は破傷風毒素またはジフテリア毒素
のサブパートであり、最も好ましくは、次のアミノ酸配
列： Ｔｙｒ−Ａｓ ｐ−Ｐｒｏ−Ａｓ ｎ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓ ｐ−３ｅｒ−Ａｓ ｐ−Ｌｙ
ｓ−Ａｓ ｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇ Ｉｎ−Ｔ
ｈｒ−Ｍｅ ｔ −Ｖａ ｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ
−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ
（Ｉ ）を有するポリペプチドＴＴ７３−９９ま
たはその同等物である破傷風毒素のサブパートである。
上記ポリペプチドの同等物は、欠失、挿入および／また
はアミノ酸置換によりアミノ酸配列（Ｄとと異なるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドと定義される。このよう
な同等物ポリペプチドの例は、アミノ酸配列（Ｉ）に相
当するアミノ酸配列を有するが、Ｎ末端および／または
Ｃ末端で約１５個まで、好ましくは１．２．３．４また
は５個のアミノ酸が欠失したポリペプチド、例えば次の
アミノ酸配列： Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌ
ｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ
（ＩＩ ）を有するポリペプ
チドＴＴ８８−９９もしくはその同等物である。
はアミノ酸置換によりアミノ酸配列（Ｄとと異なるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドと定義される。このよう
な同等物ポリペプチドの例は、アミノ酸配列（Ｉ）に相
当するアミノ酸配列を有するが、Ｎ末端および／または
Ｃ末端で約１５個まで、好ましくは１．２．３．４また
は５個のアミノ酸が欠失したポリペプチド、例えば次の
アミノ酸配列： Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌ
ｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ
（ＩＩ ）を有するポリペプ
チドＴＴ８８−９９もしくはその同等物である。
ペプチドの二次または三次構造を変えないアミノ酸置換
は“Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”、 Ｖｏｌ、ＩＶ、
Ｎｅｕｒａｔｈ、Ｈ。
は“Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”、 Ｖｏｌ、ＩＶ、
Ｎｅｕｒａｔｈ、Ｈ。
およびＨｉｌｌ Ｒ，Ｌ」ＬＡｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
ｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
１）、１−１１９． ［１９７９］中のＲ，Ｆ、 Ｄｏ
ｏｌｉｔｔｌｅ による論文から知られている。
ｏｌｉｔｔｌｅ による論文から知られている。
ペプチドまたはポリペプチド中の抗原決定基は一般に少
なくとも６個のアミノ酸残基を含有しており、従って前
記ペプチド、つまり上記の化合物は少なくともほぼこの
大きさをもつべきであることに留意しなければならない
。上記化合物が大きい場合、例えば６個より多いアミノ
酸残基を含有するペプチドの形態である場合、その化合
物は実際に１より多いエピドープを提示でき、それによ
りこれらのエピドープは重複する可能性もあることが理
解される。従って、本発明において単一エピドープにつ
いて言及する場合はいつでも複数のエピドープが包含さ
れることを意味する。
なくとも６個のアミノ酸残基を含有しており、従って前
記ペプチド、つまり上記の化合物は少なくともほぼこの
大きさをもつべきであることに留意しなければならない
。上記化合物が大きい場合、例えば６個より多いアミノ
酸残基を含有するペプチドの形態である場合、その化合
物は実際に１より多いエピドープを提示でき、それによ
りこれらのエピドープは重複する可能性もあることが理
解される。従って、本発明において単一エピドープにつ
いて言及する場合はいつでも複数のエピドープが包含さ
れることを意味する。
Ｂ細胞エピドープまたはＴ細胞エピドープを提示するペ
プチドまたはポリペプチドは、通常のペプチド合成法を
用いて、溶液中で、または好ましくはＭｅｒｒｉｆｉｅ
ｌｄ （Ｊ、 Ａｍ、 Ｃｈｅｍ、 Ｓａｃ、 ８５：
２１４９−２１５４［１９６３］）の固相法により、も
しくは当分針で知られた任意の他の方法により製造する
ことができる。
プチドまたはポリペプチドは、通常のペプチド合成法を
用いて、溶液中で、または好ましくはＭｅｒｒｉｆｉｅ
ｌｄ （Ｊ、 Ａｍ、 Ｃｈｅｍ、 Ｓａｃ、 ８５：
２１４９−２１５４［１９６３］）の固相法により、も
しくは当分針で知られた任意の他の方法により製造する
ことができる。
固相合成は適当な樹脂への保護アミノ酸をカップリング
することによってペプチドのＣ末端から開始される。出
発物質はクロロメチル化樹脂またはヒドロキシメチル樹
脂へのベンジルエステル結合を介して、あるいはベンズ
ヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂、メチルベンズヒドリル
アミン（ＭＢＨＡ）樹脂またはベンジルオキシベンジル
アルコール樹脂へのアミド結合を介して、アミノ保護ア
ミノ酸を結合させることにより製造できる。これらの樹
脂は市販されており、それらの製造および使用はよく知
られている。
することによってペプチドのＣ末端から開始される。出
発物質はクロロメチル化樹脂またはヒドロキシメチル樹
脂へのベンジルエステル結合を介して、あるいはベンズ
ヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂、メチルベンズヒドリル
アミン（ＭＢＨＡ）樹脂またはベンジルオキシベンジル
アルコール樹脂へのアミド結合を介して、アミノ保護ア
ミノ酸を結合させることにより製造できる。これらの樹
脂は市販されており、それらの製造および使用はよく知
られている。
本発明において使用しつるアミノ酸の保護方法およびア
ミノ酸からの保護基の除去方法は“ＴｈｅＰｅｐｔｉｄ
ｅｓ： Ａｎａｌｙｓｉｓ、 ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、
Ｂｉｏｌｏｇｙ 。
ミノ酸からの保護基の除去方法は“ＴｈｅＰｅｐｔｉｄ
ｅｓ： Ａｎａｌｙｓｉｓ、 ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、
Ｂｉｏｌｏｇｙ 。
Ｖｏｌ、 ２． （Ｅ、 ＧｒｏｓｓおよびＪ、 Ｍｅ
ｉｅｎｈｏｆｅｒ編、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 ｐ、１−２８４［１９７９］）お
よびＡｔｈｅｒｔｏｎらのＴｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：
Ａｎａｌｙｓｉｓ、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ 。
ｉｅｎｈｏｆｅｒ編、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 ｐ、１−２８４［１９７９］）お
よびＡｔｈｅｒｔｏｎらのＴｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：
Ａｎａｌｙｓｉｓ、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ 。
ｐ、 １−３８． Ｖｏｌ、 ９． （Ｓ、 Ｕｄｅｎ
ｆｒｉｅｄおよびＪ１Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ［１９８
７］）に記載されている。保護基には例えば９−フルオ
レニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチ
ルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、
ｔ−ブチル（Ｂｕｔ） 、２−クロロベンジルオキシカ
ルボニル（２ＣＩ−Ｚ）、ジクロロベンジル（Ｄｃｂ
）および３゜４−ジメチルベンジル（Ｄｍｂ）基が包含
される。
ｆｒｉｅｄおよびＪ１Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ［１９８
７］）に記載されている。保護基には例えば９−フルオ
レニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチ
ルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、
ｔ−ブチル（Ｂｕｔ） 、２−クロロベンジルオキシカ
ルボニル（２ＣＩ−Ｚ）、ジクロロベンジル（Ｄｃｂ
）および３゜４−ジメチルベンジル（Ｄｍｂ）基が包含
される。
最初の（Ｃ末端）アミノ酸からα−アミノ保護基を除去
した後、残りの保護アミノ酸を希望する順序で段階的に
カップリングさせる。この方法により全ペプチドが合成
できる。別法として、小型のポリペプチドを構築し、あ
とでそれらを連結して最終的なペプチド生成物となすこ
ともできる。
した後、残りの保護アミノ酸を希望する順序で段階的に
カップリングさせる。この方法により全ペプチドが合成
できる。別法として、小型のポリペプチドを構築し、あ
とでそれらを連結して最終的なペプチド生成物となすこ
ともできる。
適当なカップリング方法は当分野で知られており、特に
１．３−ジシクロへキシルカルボジイミド／１−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール（ＤＣＣ／ＨＯＢｔ）を使用） するＫｏｎｉｇら（Ｃｈｅｍ、 Ｂｅｒ、 １０３ニア
８８−７９８ ［１９７０１）の方法、または０−ベン
ゾトリアゾリル−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェ−ト（ＨＢＴＵ）を使
用するＤｏｕｒｔｏｇｌｏｕら（Ｓｙｎ ｔｈｅｓ １
ｓ１９８４、９．５７２−５７４）およびＫｎｏｒｒら
（Ｔｅｔｒａ−ｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ、 ３０：
１９２７−１９３０［１９８９］）の方法が適する。
１．３−ジシクロへキシルカルボジイミド／１−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール（ＤＣＣ／ＨＯＢｔ）を使用） するＫｏｎｉｇら（Ｃｈｅｍ、 Ｂｅｒ、 １０３ニア
８８−７９８ ［１９７０１）の方法、または０−ベン
ゾトリアゾリル−Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェ−ト（ＨＢＴＵ）を使
用するＤｏｕｒｔｏｇｌｏｕら（Ｓｙｎ ｔｈｅｓ １
ｓ１９８４、９．５７２−５７４）およびＫｎｏｒｒら
（Ｔｅｔｒａ−ｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ、 ３０：
１９２７−１９３０［１９８９］）の方法が適する。
それぞれの保護アミノ酸またはペプチドは固相反応器に
過剰量で導入され、カップリングはジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）または塩化メチレン（ＣＨＩＣＩり、もし
くはこれらの混合物の媒体中で実施できる。
過剰量で導入され、カップリングはジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）または塩化メチレン（ＣＨＩＣＩり、もし
くはこれらの混合物の媒体中で実施できる。
不完全なカップリングが起こる場合は、そのカップリン
グ方法を次のアミノ酸のカップリングに先立ってＮａ−
アミノ保護基を除去する前に繰り返し行う。各合成段階
でのカップリング反応の成功は監視できる。好適な監視
方法はニンヒドリン反応によるものである。カップリン
グ反応および洗浄段階は自動装置を用いて行うことがで
きる。
グ方法を次のアミノ酸のカップリングに先立ってＮａ−
アミノ保護基を除去する前に繰り返し行う。各合成段階
でのカップリング反応の成功は監視できる。好適な監視
方法はニンヒドリン反応によるものである。カップリン
グ反応および洗浄段階は自動装置を用いて行うことがで
きる。
樹脂からのペプチドの切断はペプチド化学でよく知られ
た方法を用いて実施できる。例えば、ｐ−クレゾールお
よび硫化ジメチルの存在下にフッ化水素（ＨＦ）と０℃
で１時間反応させ、続いてｐ−クレゾールの存在下にフ
ッ化水素と０℃で２時間反応させるか、あるいはトリフ
ルオロ酢酸／塩化メチレン／アニソールと反応させる。
た方法を用いて実施できる。例えば、ｐ−クレゾールお
よび硫化ジメチルの存在下にフッ化水素（ＨＦ）と０℃
で１時間反応させ、続いてｐ−クレゾールの存在下にフ
ッ化水素と０℃で２時間反応させるか、あるいはトリフ
ルオロ酢酸／塩化メチレン／アニソールと反応させる。
クロロメチル化またはｐ−ベンジルオキシベンジルアル
コール樹脂支持体からのペプチドの切断により、Ｃ末端
にカルボキシル基を有する完成ペプチドが生成される。
コール樹脂支持体からのペプチドの切断により、Ｃ末端
にカルボキシル基を有する完成ペプチドが生成される。
ベンズヒドリルアミンまたはメチルベンズヒドリルアミ
ン樹脂からのペプチドの切断により、Ｃ末端アミド基を
有するペプチドが生成される。
ン樹脂からのペプチドの切断により、Ｃ末端アミド基を
有するペプチドが生成される。
これとは別に、Ｂ細胞エピドープを提示するペプチドま
たはポリペプチドは、組換えＤＮＡ技術の手法を用いて
も製造できる。組換えＤＮＡ技術によるポリペプチドの
製法は当分野でよく知られている。かかるポリペプチド
をコードするＤＮＡ断片は病原体からのゲノムライブラ
リーまたはｃＤＮＡライブラリーから単離できるし、あ
るいは当分野でよく知られた方法、例えばホスホトリエ
ステル法（Ｎａｒａｎｇら、 Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ、６８： ９０−９８［１９７９］）またはホスホジ
エステル法（Ｂｒｏｗｎら、Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏｌ
、 ６８： １０９−１５１ ［１９７９］）により製
造できる。次にＤＮＡ断片をＭａｎｉａｔｉＳら、 “
ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ −Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ ＭａｎｉａｔｉＳ、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇＨａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ［１９８２
］に記載されるように発現ベクターにクローニングする
。
たはポリペプチドは、組換えＤＮＡ技術の手法を用いて
も製造できる。組換えＤＮＡ技術によるポリペプチドの
製法は当分野でよく知られている。かかるポリペプチド
をコードするＤＮＡ断片は病原体からのゲノムライブラ
リーまたはｃＤＮＡライブラリーから単離できるし、あ
るいは当分野でよく知られた方法、例えばホスホトリエ
ステル法（Ｎａｒａｎｇら、 Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ、６８： ９０−９８［１９７９］）またはホスホジ
エステル法（Ｂｒｏｗｎら、Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏｌ
、 ６８： １０９−１５１ ［１９７９］）により製
造できる。次にＤＮＡ断片をＭａｎｉａｔｉＳら、 “
ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ −Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ ＭａｎｉａｔｉＳ、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇＨａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ［１９８２
］に記載されるように発現ベクターにクローニングする
。
Ｂ細胞エピドープを提示するハブテンおよび炭水化物は
当業者に多数知られている。これらのハブテンおよび炭
水化物は既知方法により製造することができる。また、
Ｂ細胞エピドープを提示する化合物は、前記病原体を断
片化して、生化学的方法で前記化合物を単離することに
よっても調整できる。
当業者に多数知られている。これらのハブテンおよび炭
水化物は既知方法により製造することができる。また、
Ｂ細胞エピドープを提示する化合物は、前記病原体を断
片化して、生化学的方法で前記化合物を単離することに
よっても調整できる。
Ｔ細胞エピドープを提示する化合物は病原体に由来する
ペプチド、ポリペプチドまたは炭水化物である。前記化
合物はＢ細胞エピドープを提示する化合物について上述
したようにして調整することができる。
ペプチド、ポリペプチドまたは炭水化物である。前記化
合物はＢ細胞エピドープを提示する化合物について上述
したようにして調整することができる。
さらに、Ｂ細胞エピドープを提示するペプチド、ポリペ
プチド、ハブテンまたは炭水化物および／またはＴ細胞
エピドープを提示するペプチドまたはポリペプチドは多
重抗原性ペプチド（ＭＡＰ）であることもできる。この
ようなＭＡＰはＰｏ５ｎｅｔｔら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈ
ｅｍ、 ２６３： １７１９−１７２５ ［１９８８］
に記載されるようにして調整できる。この種のＭＡＰの
例はプラスモジウム・ファルシパルムのＣＳタンパク中
に存在する反復配列（ＮＡＮＰ）のマルチマーを含んで
成る多重抗原性ペプチド系（ＭＡＰＳ） Ｂ細胞エピド
ープ［（ＮＡＮＰ） ｓ ］ ｓ −Ｌｙｓ ｔ−Ａｃ
ａ−Ｃｙｓ−ＮＨｚである（国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ
８５１０１４１６、公ＮＷＯ３６１００９１１） 、
、：（７）ＭＡＰＳは通常の固相法により合成できる。
プチド、ハブテンまたは炭水化物および／またはＴ細胞
エピドープを提示するペプチドまたはポリペプチドは多
重抗原性ペプチド（ＭＡＰ）であることもできる。この
ようなＭＡＰはＰｏ５ｎｅｔｔら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈ
ｅｍ、 ２６３： １７１９−１７２５ ［１９８８］
に記載されるようにして調整できる。この種のＭＡＰの
例はプラスモジウム・ファルシパルムのＣＳタンパク中
に存在する反復配列（ＮＡＮＰ）のマルチマーを含んで
成る多重抗原性ペプチド系（ＭＡＰＳ） Ｂ細胞エピド
ープ［（ＮＡＮＰ） ｓ ］ ｓ −Ｌｙｓ ｔ−Ａｃ
ａ−Ｃｙｓ−ＮＨｚである（国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ
８５１０１４１６、公ＮＷＯ３６１００９１１） 、
、：（７）ＭＡＰＳは通常の固相法により合成できる。
リジンはＭＡＰの樹状構造中の好適なコア分子であるが
、オルニチンやノルリジンのような他のリジン様分子を
使用してもよい。
、オルニチンやノルリジンのような他のリジン様分子を
使用してもよい。
（本頁以下余白）
本発明組成物はＢ細胞エピドープを提供する化合物をＴ
細胞エピドープを提示する化合物と共有結合でカップリ
ングさせることにより製造しつる。
細胞エピドープを提示する化合物と共有結合でカップリ
ングさせることにより製造しつる。
このカップリングはＴ細胞エピドープを提示するペプチ
ド、ポリペプチドまたは炭水化物上の遊離カルボキシル
、アミノまたはヒドロキシル基とＢ細胞エピドープを提
示するペプチド、ポリペプチド、ハブテンまたは炭水化
物上の相当する基との間のペプチド結合もしくはエステ
ル結合の形成により直接的に行われるか、あるいは慣用
の二官能性結合基を介して間接的に行うことができる。
ド、ポリペプチドまたは炭水化物上の遊離カルボキシル
、アミノまたはヒドロキシル基とＢ細胞エピドープを提
示するペプチド、ポリペプチド、ハブテンまたは炭水化
物上の相当する基との間のペプチド結合もしくはエステ
ル結合の形成により直接的に行われるか、あるいは慣用
の二官能性結合基を介して間接的に行うことができる。
このような結合基の形成に使用される慣用の二官能性結
合試薬の例はスルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイ
ミドフェニル）ブチレート（スルホ−ＳＭＰＢ）、スル
ホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベン
ゾエート（スルホ−３ＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル
（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ
）、２−イミノチオラン−ＨＣＩ（）ラウド（Ｔｒａｕ
ｔ）試薬）、ジメチルビメルイミデート・２ＨＣ１（Ｄ
ＭＰ）、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニ
ル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ−スクシンイミジル３
−（２−ピリジルジチオ〉プロピオネート（ＳＰＤＰ）
、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）およびｍ−マレイ
ミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ル（ＭＢＳ）である。これらおよびその他の二官能性結
合試薬は米国イリノイ州ＲｏｃｋｆｏｒｄのＰｉｅｒｃ
ｅ ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙから市販されてい
る。また、グルタルアルデヒドのようなＣ８−、ジアル
ヵナール（Ａｖｒａｍｅａｓ。
合試薬の例はスルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイ
ミドフェニル）ブチレート（スルホ−ＳＭＰＢ）、スル
ホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベン
ゾエート（スルホ−３ＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル
（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ
）、２−イミノチオラン−ＨＣＩ（）ラウド（Ｔｒａｕ
ｔ）試薬）、ジメチルビメルイミデート・２ＨＣ１（Ｄ
ＭＰ）、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニ
ル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ−スクシンイミジル３
−（２−ピリジルジチオ〉プロピオネート（ＳＰＤＰ）
、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）およびｍ−マレイ
ミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ル（ＭＢＳ）である。これらおよびその他の二官能性結
合試薬は米国イリノイ州ＲｏｃｋｆｏｒｄのＰｉｅｒｃ
ｅ ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙから市販されてい
る。また、グルタルアルデヒドのようなＣ８−、ジアル
ヵナール（Ａｖｒａｍｅａｓ。
ｒｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、６： ４３−５２ ［１９６９
］）も使用できる。
］）も使用できる。
本発明組成物はまた、組換えＤＮＡ技術または慣用のペ
プチド合成法を使って、１分子中にＢ細胞エピドープ機
能とＴ細胞エピドープ機能を含有する線状ペプチドの形
態で直接製造することもできる。しかしながら、Ｔ細胞
エピドープを提示する化合物がＢ細胞エピドープを提示
する化合物に共有結合される必要はなく、これらの化合
物が免疫系細胞への同時提示を招来するような方法で会
合されるだけでよい。
プチド合成法を使って、１分子中にＢ細胞エピドープ機
能とＴ細胞エピドープ機能を含有する線状ペプチドの形
態で直接製造することもできる。しかしながら、Ｔ細胞
エピドープを提示する化合物がＢ細胞エピドープを提示
する化合物に共有結合される必要はなく、これらの化合
物が免疫系細胞への同時提示を招来するような方法で会
合されるだけでよい。
本発明による組成物および化合物は、分画遠心、硫酸ア
ンモニウム沈澱、（常圧または減圧下で）塩を除くため
の透析、分離用等電点電気泳動、分離用ゲル電気泳動、
または種々のクロマトグラフ法、例えばゲル濾過、高性
能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イオン交換ク
ロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーもしくはア
フィニティークロマトグラフィーのような既知方法によ
り精製できる。
ンモニウム沈澱、（常圧または減圧下で）塩を除くため
の透析、分離用等電点電気泳動、分離用ゲル電気泳動、
または種々のクロマトグラフ法、例えばゲル濾過、高性
能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イオン交換ク
ロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーもしくはア
フィニティークロマトグラフィーのような既知方法によ
り精製できる。
また、本発明は本発明組成物および医薬上許容されるア
ジュバントを含有するワクチンにも関する。
ジュバントを含有するワクチンにも関する。
前記ワクチンは組成物中のＢ！ｍ胞エピドープと免疫学
的に交差反応性のＢ細胞エピドープを有する病原体に対
して防御免疫応答を誘発させるのに使用できる。用語“
医薬上許容されるアジュバント”はヒト投与に適する標
準組成物（例、水酸化アルミニウム）、または動物の予
防接種に用いられる代表的なアジュバントおよび賦形剤
（例、血清アルブミンまたは血漿製剤）を意味する。動
物の予防接種に適するアジュバントにはフロイント完全
または不完全アジュバント（ヒトや家畜への使用に適さ
ない）、アジュバント６５（ビーナツツ油、マンニドモ
ノオレエートおよびアルミニウムモノステアレートを含
有）、無機物ゲル（例、水酸化アルミニウム、リン酸ア
ルミニウムおよびミョウバン）、界面活性剤（例、ヘキ
サデシルアミン、オクタデシルアミン、リゾレシチン、
ジメチル−ジオクチルデシルアンモニウムプロミド、Ｎ
。
的に交差反応性のＢ細胞エピドープを有する病原体に対
して防御免疫応答を誘発させるのに使用できる。用語“
医薬上許容されるアジュバント”はヒト投与に適する標
準組成物（例、水酸化アルミニウム）、または動物の予
防接種に用いられる代表的なアジュバントおよび賦形剤
（例、血清アルブミンまたは血漿製剤）を意味する。動
物の予防接種に適するアジュバントにはフロイント完全
または不完全アジュバント（ヒトや家畜への使用に適さ
ない）、アジュバント６５（ビーナツツ油、マンニドモ
ノオレエートおよびアルミニウムモノステアレートを含
有）、無機物ゲル（例、水酸化アルミニウム、リン酸ア
ルミニウムおよびミョウバン）、界面活性剤（例、ヘキ
サデシルアミン、オクタデシルアミン、リゾレシチン、
ジメチル−ジオクチルデシルアンモニウムプロミド、Ｎ
。
Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ’ 、 Ｎ’−ビス（２−ヒド
ロキシエチル）プロパンジアミン、メトキシヘキシデシ
ルグリセロールおよびプルロニックポリオール）、ポリ
アニオン類（例、ビラン、硫酸デキストラン、ポリＩＣ
，ポリアクリル酸およびカルボボール）、ペプチドおよ
びアミノ酸類（例、ムラミルジペプチド、ジメチルグリ
シン、タフトシン）および油エマルジョンが包含される
が、これらに限定されない。本発明組成物はまた、リポ
ソームまたは他のマイクロキャリヤー内にとり込ませた
後で、または多糖類、他のタンパク質もしくは他のポリ
マーに結合させた後で、あるいはＱｕｉｌ−Ａと組み合
わせて”Ｉｓｃｏｍｓ” （ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌ
ａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅＸｅｓ：免疫刺激性複合体）
を形成させた後で、投与することもできる（Ａｌｌｉｓ
ｏｎら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈ、 ９５：１５
７−１６８ ［１９８６］； Ｍｏｒｅｉｎら、 Ｎａ
ｔｕｒｅ ３０８： ４５７−４６０［１９８４］ ）
。さらに、Ｔ細胞エピドープとＢ細胞エピドープを提示
するペプチドまたはポリペプチド（つまり、本発明組成
物）をコードするヌクレオチド配列を発現しうるワクシ
ニアまたはサルモネラのような遺伝子工学的に操作され
た微生物も、ワクチンデリバリ−システムとして使用で
きる（Ｍａｃｋｅｔｔ、 （ｍｍｕｎｏｌ、Ｌｅｔｔｅ
ｒｓ １６： ２４３−２４８ ［１９８７］）ワクチ
ンは本発明組成物を医薬上許容されるアジュバントと組
み合わせることにより製造される。
ロキシエチル）プロパンジアミン、メトキシヘキシデシ
ルグリセロールおよびプルロニックポリオール）、ポリ
アニオン類（例、ビラン、硫酸デキストラン、ポリＩＣ
，ポリアクリル酸およびカルボボール）、ペプチドおよ
びアミノ酸類（例、ムラミルジペプチド、ジメチルグリ
シン、タフトシン）および油エマルジョンが包含される
が、これらに限定されない。本発明組成物はまた、リポ
ソームまたは他のマイクロキャリヤー内にとり込ませた
後で、または多糖類、他のタンパク質もしくは他のポリ
マーに結合させた後で、あるいはＱｕｉｌ−Ａと組み合
わせて”Ｉｓｃｏｍｓ” （ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌ
ａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅＸｅｓ：免疫刺激性複合体）
を形成させた後で、投与することもできる（Ａｌｌｉｓ
ｏｎら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈ、 ９５：１５
７−１６８ ［１９８６］； Ｍｏｒｅｉｎら、 Ｎａ
ｔｕｒｅ ３０８： ４５７−４６０［１９８４］ ）
。さらに、Ｔ細胞エピドープとＢ細胞エピドープを提示
するペプチドまたはポリペプチド（つまり、本発明組成
物）をコードするヌクレオチド配列を発現しうるワクシ
ニアまたはサルモネラのような遺伝子工学的に操作され
た微生物も、ワクチンデリバリ−システムとして使用で
きる（Ｍａｃｋｅｔｔ、 （ｍｍｕｎｏｌ、Ｌｅｔｔｅ
ｒｓ １６： ２４３−２４８ ［１９８７］）ワクチ
ンは本発明組成物を医薬上許容されるアジュバントと組
み合わせることにより製造される。
好ましくは、ワクチンは単位用量形態をしている。
予防接種または医薬として１回で又はある期間にわたっ
て投与される活性化合物の量は、処置すべき患者、投与
方法および投与形態、並びに主治医の判断の如何によろ
う。しかしながら、本発明組成物の有効量は約１ｎｇ〜
約１ｍｇの範囲、好ましくは約１００μｇ〜約５００μ
ｇである；それより少量または多量も使用できることが
理解されるであろう。ワクチンはいろいろな形態をとる
ことができる。これらには例えば固体、半固体および液
体投薬形態が含まれる。単位用量は好ましくはｌ−バイ
アルに充填され、このバイアルは０．９ｗ／ｖ％ＮＡＣ
！無菌溶液中における懸濁物の形のワクチンを含有する
。最も好適なワクチンは、８５０μｇ／ｍｌのＡＩ（Ｏ
Ｈ）、および１００μｇ／−のメルチオレート（Ｍｅｒ
ｔｈｉｏｌａｔｅ：商標名、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ社）に
吸着させた０、 ４ｍｇ／−のタンパク質（ＴおよびＢ
細胞エビトーブペブチド）である。バイアルは好ましく
はワクチンの正しい使用についての説明書と共に容器に
包装される。従って、本発明は、最も好ましくは適切な
説明書と共に、容器に充填されたかかる単位用量のワク
チンにも関する。さらに、本発明は前記ワクチンまたは
その単位用量物の製法、およびかかるワクチンを用いて
ヒトまたは動物を免疫処置する方法にも関する。
て投与される活性化合物の量は、処置すべき患者、投与
方法および投与形態、並びに主治医の判断の如何によろ
う。しかしながら、本発明組成物の有効量は約１ｎｇ〜
約１ｍｇの範囲、好ましくは約１００μｇ〜約５００μ
ｇである；それより少量または多量も使用できることが
理解されるであろう。ワクチンはいろいろな形態をとる
ことができる。これらには例えば固体、半固体および液
体投薬形態が含まれる。単位用量は好ましくはｌ−バイ
アルに充填され、このバイアルは０．９ｗ／ｖ％ＮＡＣ
！無菌溶液中における懸濁物の形のワクチンを含有する
。最も好適なワクチンは、８５０μｇ／ｍｌのＡＩ（Ｏ
Ｈ）、および１００μｇ／−のメルチオレート（Ｍｅｒ
ｔｈｉｏｌａｔｅ：商標名、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ社）に
吸着させた０、 ４ｍｇ／−のタンパク質（ＴおよびＢ
細胞エビトーブペブチド）である。バイアルは好ましく
はワクチンの正しい使用についての説明書と共に容器に
包装される。従って、本発明は、最も好ましくは適切な
説明書と共に、容器に充填されたかかる単位用量のワク
チンにも関する。さらに、本発明は前記ワクチンまたは
その単位用量物の製法、およびかかるワクチンを用いて
ヒトまたは動物を免疫処置する方法にも関する。
ワクチンの投与形態および投与経路、並びに注射回数は
すべて当分野の通常の知識を用いて最適化しつる要素で
ある。代表的には、免疫学的に有効な量のワクチンの一
次接種後、数週間して、ｌまたは２回以上の“追加免疫
”処置が行われ、その最終的な結果は特定の病原体に対
する高力価の抗体が生産される。
すべて当分野の通常の知識を用いて最適化しつる要素で
ある。代表的には、免疫学的に有効な量のワクチンの一
次接種後、数週間して、ｌまたは２回以上の“追加免疫
”処置が行われ、その最終的な結果は特定の病原体に対
する高力価の抗体が生産される。
本発明について一般的に説明してきたが、本発明は以下
の実施例を参照することにより一層容易に理解されるで
あろう。この実施例は単なる例示であって、いかなる場
合もここに示した特定の実施態様に本発明を限定するも
のとして解釈されるべきではない。
の実施例を参照することにより一層容易に理解されるで
あろう。この実施例は単なる例示であって、いかなる場
合もここに示した特定の実施態様に本発明を限定するも
のとして解釈されるべきではない。
実施例
ＴＴからのＴ細胞エピドープを提示する化合物の選択
ＴＴ由来のＴヘルパー細胞配列を提示する化合物は、Ｔ
Ｔの化学的および酵素的処理により得られた。
Ｔの化学的および酵素的処理により得られた。
５０ｍｇのＴＴを５．５ｍｌの４Ｍグアニジン、０．４
Ｍ）リス緩衝液ｐＨ８および１５ｍｇジチオトレイトー
ル中で還元した。この混合物を室温で１．５時間インキ
ュベートした。次に、この混合物を６０ｍｇのヨードア
セトアミドの添加および室温での０．５時間インキュベ
ートによりアルキル化した。氷酢酸でｐＨ７に調整した
Ｏ、 ＩＭ ＮＨ４ＨＣＯ□で一晩透析した後、１、Ｂ
ｍｇのトリプシン（２０／ｍｇ）を加え、この混合物を
３７”Ｃで一晩インキユベートした。得られた消化物中
のペプチドは、１００ｍＭ炭酸アンモニウムｐＨ７で透
析後、ゲル濾過ＦＰＬＣ（セファロース７Ｍ１２カラム
、ＨＲｌ ６１５０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）を用いて
分離した。カラムからの両分を、ＴＴで免疫処置したヒ
ト提供者からの末梢血白血球またはＴＴで免疫処置した
マウスからのリンパ球を用いるＴ細胞増殖検定（以下参
照）を用いてその活性について調べた。活性画分をトリ
フルオロ酢酸（ＴＦＡ）で１＝１に希釈し、０．１％Ｔ
ＦＡで平衡化した逆相ＦＰＬＣカラム（ＰｅｐＲＰＣ５
／２． Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）にかけてさらに分離し
た。イソプロパツールの直線濃度勾配を用いてペプチド
を溶離した。ここでもまた、一部分をインビトロＴ細胞
増殖検定でその活性について試験した。活性部分をＴＦ
Ａでｌ：ｌに希釈後、０．１％ＴＦＡで平衡化した逆相
ＨＰＬＣカラム（Ｖｙｄａｃ Ｃ１ｍ Ｎｏ、２１８Ｔ
Ｐ５４４ ）にかけてさらに分離した。ペプチドはアセ
トニトリルの直線濃度勾配を用いて溶離した。画分をイ
ンビトロＴ細胞増殖検定で活性について試験した。活性
画分をＮ末端配列決定およびアミノ酸分析により特性決
定した。ひとたび特性が決定されたら、ペプチドの１種
、すなわちＴＴ７３−９９およびその誘導体（例えば、
ＴＴ８８−９９ ”）を合成して、Ｔ細胞増殖試験、ヘ
ルパーＴ細胞試験、および代表的組成物（ＮＡＮＰ）。
Ｍ）リス緩衝液ｐＨ８および１５ｍｇジチオトレイトー
ル中で還元した。この混合物を室温で１．５時間インキ
ュベートした。次に、この混合物を６０ｍｇのヨードア
セトアミドの添加および室温での０．５時間インキュベ
ートによりアルキル化した。氷酢酸でｐＨ７に調整した
Ｏ、 ＩＭ ＮＨ４ＨＣＯ□で一晩透析した後、１、Ｂ
ｍｇのトリプシン（２０／ｍｇ）を加え、この混合物を
３７”Ｃで一晩インキユベートした。得られた消化物中
のペプチドは、１００ｍＭ炭酸アンモニウムｐＨ７で透
析後、ゲル濾過ＦＰＬＣ（セファロース７Ｍ１２カラム
、ＨＲｌ ６１５０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）を用いて
分離した。カラムからの両分を、ＴＴで免疫処置したヒ
ト提供者からの末梢血白血球またはＴＴで免疫処置した
マウスからのリンパ球を用いるＴ細胞増殖検定（以下参
照）を用いてその活性について調べた。活性画分をトリ
フルオロ酢酸（ＴＦＡ）で１＝１に希釈し、０．１％Ｔ
ＦＡで平衡化した逆相ＦＰＬＣカラム（ＰｅｐＲＰＣ５
／２． Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）にかけてさらに分離し
た。イソプロパツールの直線濃度勾配を用いてペプチド
を溶離した。ここでもまた、一部分をインビトロＴ細胞
増殖検定でその活性について試験した。活性部分をＴＦ
Ａでｌ：ｌに希釈後、０．１％ＴＦＡで平衡化した逆相
ＨＰＬＣカラム（Ｖｙｄａｃ Ｃ１ｍ Ｎｏ、２１８Ｔ
Ｐ５４４ ）にかけてさらに分離した。ペプチドはアセ
トニトリルの直線濃度勾配を用いて溶離した。画分をイ
ンビトロＴ細胞増殖検定で活性について試験した。活性
画分をＮ末端配列決定およびアミノ酸分析により特性決
定した。ひとたび特性が決定されたら、ペプチドの１種
、すなわちＴＴ７３−９９およびその誘導体（例えば、
ＴＴ８８−９９ ”）を合成して、Ｔ細胞増殖試験、ヘ
ルパーＴ細胞試験、および代表的組成物（ＮＡＮＰ）。
ＴＴ７３−９９について以下で述べるエピドープ抑制試
験で活性を調べた。
験で活性を調べた。
（ＮＡＮＰ）４ ＴＴ７３−９９およびＴＴ７３−９９
の合成および精製 アミノ酸配列（１）を有するポリペプチドＴＴ７３−９
９は破傷風トキソイドのアミノ酸残基７３−９９に対応
する。このポリペプチドＴＴ７３−９９を“ＴｈｅＰｅ
ｐｔｉｄｅｓ： Ａｎａｌｙｓｉｓ、 ５ｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ、 Ｂｉｏｌｏｇｙｐ、１−３８． Ｖｏｌ、９
． Ｓ、ＵｄｅｎｆｒｉｅｎｄおよびＪ、 Ｍｅｉｅｎ
ｈｏｆｅｒ（編）、 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）中にＡｔｈｅｒｔＯｎ
および５ｈｅｐｐａｒｄにより記載されるようにして、
塩基不安定なＮ−フルオレニルメトキシカルボニル−ア
ミノ酸、ｔ−ブチルをベースとした側鎖保護基およびｐ
−ベンジルオキシベンジルアルコールポリスチレン樹脂
を用いる固相法により合成した。最初の合成は手動振ど
う束中でＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−０−ＣＨｚＣｉ
Ｈ４０−ＣＨｚＣｓＨｉ−樹脂から開始した。代表的な
合成サイクルのプロトコールは次の通りであった： 段階 試薬 Ｉ Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
２ ２０％ ピペリジン／ＤＭＦ３ Ｄ
ＭＦ ４ ２．５当量 Ｆｍｏｃ−アミノ酸／ＤＭＦ＋２
．５当量ＨＢＴ（Ｊ ＋２．５当ｊｌ Ｎ−エチルシイツブｕビルアミン
１ ｘ ９０分ＤＭＦ
３ Ｘ １分イソプロピルアルコール（ｉ
−ＰｒＯＨ） ２ ｘ １
分生成した保護ＴＴ７３−９９ポリペプチド樹脂を、ト
リフルオロ酢酸−塩化メチレン−アニソール（４９：４
９：２）で処理して遊離ＴＴ７３−９９ポリペプチドを
得た。このポリペプチドを Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ Ｒ
Ｐ１８ （１０時間 ２Ｍ１分 １ｍ７分 ５ｍ１分 μ）カラム（Ｍｅｒｃｋ、 Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、 Ｆ
ＲＧ）を用いた高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）にかけ、０．１％トリフルオロ酢酸−エタノール濃
度勾配系で溶離して精製した。このポリペプチドは分析
用ＨＰＬＣによれば均質であり、酸加水分解後に予測さ
れたアミノ酸組成を示した。
の合成および精製 アミノ酸配列（１）を有するポリペプチドＴＴ７３−９
９は破傷風トキソイドのアミノ酸残基７３−９９に対応
する。このポリペプチドＴＴ７３−９９を“ＴｈｅＰｅ
ｐｔｉｄｅｓ： Ａｎａｌｙｓｉｓ、 ５ｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ、 Ｂｉｏｌｏｇｙｐ、１−３８． Ｖｏｌ、９
． Ｓ、ＵｄｅｎｆｒｉｅｎｄおよびＪ、 Ｍｅｉｅｎ
ｈｏｆｅｒ（編）、 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）中にＡｔｈｅｒｔＯｎ
および５ｈｅｐｐａｒｄにより記載されるようにして、
塩基不安定なＮ−フルオレニルメトキシカルボニル−ア
ミノ酸、ｔ−ブチルをベースとした側鎖保護基およびｐ
−ベンジルオキシベンジルアルコールポリスチレン樹脂
を用いる固相法により合成した。最初の合成は手動振ど
う束中でＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−０−ＣＨｚＣｉ
Ｈ４０−ＣＨｚＣｓＨｉ−樹脂から開始した。代表的な
合成サイクルのプロトコールは次の通りであった： 段階 試薬 Ｉ Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
２ ２０％ ピペリジン／ＤＭＦ３ Ｄ
ＭＦ ４ ２．５当量 Ｆｍｏｃ−アミノ酸／ＤＭＦ＋２
．５当量ＨＢＴ（Ｊ ＋２．５当ｊｌ Ｎ−エチルシイツブｕビルアミン
１ ｘ ９０分ＤＭＦ
３ Ｘ １分イソプロピルアルコール（ｉ
−ＰｒＯＨ） ２ ｘ １
分生成した保護ＴＴ７３−９９ポリペプチド樹脂を、ト
リフルオロ酢酸−塩化メチレン−アニソール（４９：４
９：２）で処理して遊離ＴＴ７３−９９ポリペプチドを
得た。このポリペプチドを Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ Ｒ
Ｐ１８ （１０時間 ２Ｍ１分 １ｍ７分 ５ｍ１分 μ）カラム（Ｍｅｒｃｋ、 Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、 Ｆ
ＲＧ）を用いた高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）にかけ、０．１％トリフルオロ酢酸−エタノール濃
度勾配系で溶離して精製した。このポリペプチドは分析
用ＨＰＬＣによれば均質であり、酸加水分解後に予測さ
れたアミノ酸組成を示した。
ポリペプチド（ＮＡＮＰ）、 ＴＴ７３−９９は古典的
な溶液法と固相ペプチド合成法の併用により合成した。
な溶液法と固相ペプチド合成法の併用により合成した。
保護テトラペプチドＦｍｏｃ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｓｎ
−Ｐｒｏ−ＯＨを次の式に従って合成した： Ａｓｎ Ａｌａ Ａｓｎ Ｐｒ。
−Ｐｒｏ−ＯＨを次の式に従って合成した： Ａｓｎ Ａｌａ Ａｓｎ Ｐｒ。
−
一未保護ＴＴ７３−９９
ポリペプチド樹脂へのＨＢＴＵ
法を介したＮα−保護テトラペプチドの４回の反復カッ
プリングにより保護（ＮＡＮＰ）４ ＴＴ７３−９９ポ
リペプチド樹脂が得られた。これをトリフルオロ酢酸（
ＴＦＡ）／塩化メチレン／アニソールで処理して遊離ポ
リペプチドを得た。精製は上記の勾配系を使ってＨＰＬ
Ｃにより行った。分析用ＨＰＬＣによれば、このポリペ
プチドは均質であった。
プリングにより保護（ＮＡＮＰ）４ ＴＴ７３−９９ポ
リペプチド樹脂が得られた。これをトリフルオロ酢酸（
ＴＦＡ）／塩化メチレン／アニソールで処理して遊離ポ
リペプチドを得た。精製は上記の勾配系を使ってＨＰＬ
Ｃにより行った。分析用ＨＰＬＣによれば、このポリペ
プチドは均質であった。
（ＮＡＮＰ）、 ＴＴ７３−９９の活性試験Ｔ細胞エピ
ドープを提示する化合物としてのポリペプチドＴＴ７３
−９９を、アミノ酸の一文字コードで（ＮＡＮＰ）＠で
表されるＢ細胞エピドープ配列（Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｓ
ｎ−Ｐｒｏ）ｎのためのキャリヤーペプチドのモデルと
して試験した。サーカムスボロゾイト（Ｃ３）タンパク
質の反復配列（ＮＡＮＰ）は、Ｐ、 ｆａｌｃｉｐａｒ
ｕｍスポロゾイトの主要表面タンパク質の免疫優性配列
である（Ｄａｍｅら、５ｃｉｅｎｃｅ ２２５： ５９
３−５９９ ［１９８４］；Ｚａｖａｌａら、５ｃｉｅ
ｎｃｅ ２２８： １４３６−１４４０ ［１９８５］
）。
ドープを提示する化合物としてのポリペプチドＴＴ７３
−９９を、アミノ酸の一文字コードで（ＮＡＮＰ）＠で
表されるＢ細胞エピドープ配列（Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｓ
ｎ−Ｐｒｏ）ｎのためのキャリヤーペプチドのモデルと
して試験した。サーカムスボロゾイト（Ｃ３）タンパク
質の反復配列（ＮＡＮＰ）は、Ｐ、 ｆａｌｃｉｐａｒ
ｕｍスポロゾイトの主要表面タンパク質の免疫優性配列
である（Ｄａｍｅら、５ｃｉｅｎｃｅ ２２５： ５９
３−５９９ ［１９８４］；Ｚａｖａｌａら、５ｃｉｅ
ｎｃｅ ２２８： １４３６−１４４０ ［１９８５］
）。
この配列を含有するワクチンを用いる臨床実験では、こ
の寄生虫で攻撃されたボランティアの幾人かに強い（ｓ
ｔｅｒｉｌｅ）免疫が賦与された（Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏ
ｎら、同上；Ｂａ１ｌｏｕら、Ｌａｎｃｅｔ ｉ １２
７７−１２８１［１９８７］）。
の寄生虫で攻撃されたボランティアの幾人かに強い（ｓ
ｔｅｒｉｌｅ）免疫が賦与された（Ｈｅｒｒｉｎｇｔｏ
ｎら、同上；Ｂａ１ｌｏｕら、Ｌａｎｃｅｔ ｉ １２
７７−１２８１［１９８７］）。
本実施例では、ペプチド（ＮＡＮＰ）、がＢ細胞エピド
ープを提示する化合物として選択された。
ープを提示する化合物として選択された。
第一の実験において、フロインド不完全アジュバント（
ＦＩＡ）中のＴＴ７３−９９の１５μｇを皮下注射する
ことにより、５５匹のＢＡＬＢ／ｃマウスを予備免疫処
置した。５４日後、この予備免疫処置マウスにＦＩＡ中
の（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｚ ） ａｓＴＴの２
５μｇを皮下注射した。［アセチル−Ｃｙｓ−（Ａｓｎ
ＡｌａＡｓｎＰｒｏ） ｓ Ｉ２ｓ −破傷風トキソイ
ドを表す組成物（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）＊）ａｓ
ＴＴは既知方法に従って製造した（Ｅｔｌｉｎｇｅｒら
、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６４： ５５１−５５８ ［
１９８８］ ） 、同じ日に、５匹の正常ＢＡＬＢ／ｃ
マウス（ＴＴ７３−９９で予備免疫処置していないもの
）のそれぞれにＦＩＡ中の（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ
）ｓ ） ａｓＴＴ２５μｇまたはＦＩＡ中のＴＴの２
５μｇを皮下注射した。マウス血漿の抗体力価は、（Ｎ
ＡＮＰ）。、ＴＴまたはＴＴ７３−９９を被覆したマイ
クロタイタープレートを用いて、予備免疫処置後５４日
目から７０日目までの間毎週ＥＬＩＳＡ （Ｅｔｌｉ
ｎｇｅｒら、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇＹ ６４ ： ５５１
−５５８ ［１９８８］）により測定した。第π表は各
免疫処置プロトコールのピーク応答を示す。値は幾何平
均抗体価（係数変動幾何平均）として示され、その際力
価は波長４５５ｎｍでの光学濃度（ＯＤｓｓｓ）が≧０
．１および≦０．２４である場合の血漿の最終希釈度の
逆数として定義される。
ＦＩＡ）中のＴＴ７３−９９の１５μｇを皮下注射する
ことにより、５５匹のＢＡＬＢ／ｃマウスを予備免疫処
置した。５４日後、この予備免疫処置マウスにＦＩＡ中
の（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｚ ） ａｓＴＴの２
５μｇを皮下注射した。［アセチル−Ｃｙｓ−（Ａｓｎ
ＡｌａＡｓｎＰｒｏ） ｓ Ｉ２ｓ −破傷風トキソイ
ドを表す組成物（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）＊）ａｓ
ＴＴは既知方法に従って製造した（Ｅｔｌｉｎｇｅｒら
、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６４： ５５１−５５８ ［
１９８８］ ） 、同じ日に、５匹の正常ＢＡＬＢ／ｃ
マウス（ＴＴ７３−９９で予備免疫処置していないもの
）のそれぞれにＦＩＡ中の（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ
）ｓ ） ａｓＴＴ２５μｇまたはＦＩＡ中のＴＴの２
５μｇを皮下注射した。マウス血漿の抗体力価は、（Ｎ
ＡＮＰ）。、ＴＴまたはＴＴ７３−９９を被覆したマイ
クロタイタープレートを用いて、予備免疫処置後５４日
目から７０日目までの間毎週ＥＬＩＳＡ （Ｅｔｌｉ
ｎｇｅｒら、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇＹ ６４ ： ５５１
−５５８ ［１９８８］）により測定した。第π表は各
免疫処置プロトコールのピーク応答を示す。値は幾何平
均抗体価（係数変動幾何平均）として示され、その際力
価は波長４５５ｎｍでの光学濃度（ＯＤｓｓｓ）が≧０
．１および≦０．２４である場合の血漿の最終希釈度の
逆数として定義される。
第■表
免疫感作プロトコール
（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｓ）＊５ＴＴ１．４（１
，４） １．９（１，２） ０．１５（０）ＴＴ７
３−９９（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｔ）ｓｓＴＴ
１８（１，４） ２６（１，５） ０．５４（０
）−ＴＴ ０．１５（０） ５１（１，
２） ０．１５（０）第■表は、接合体すなわち（Ａ
Ｃ−ＣＹＳ−（ＮＡＮＰ）＊）２ｓＴＴで攻撃した場合
、ＴＴ７３−９９による予備免疫処置が抗（ＮＡＮＰ）
および抗ＴＴ抗体応答の増強をもたらすので、ＴＴ７３
−９９がＴヘルパー細胞により認識されることを示して
いる。ＴＴ７３−９９ 、（ＮＡＮＰ）ｓａおよび７７
間の抗体交差反応性の不在、並びにＴ細胞レベルでＮＡ
ＮＰに遺伝学的に応答しないマウス株（Ｇｏｏｄら、Ｊ
、 Ｂｘｐ、 Ｍｅｄ、 １６０ ： ６５５−６６０
［１９８６］ ；Ｄｅｌ Ｇｕｉｄｉｃｅら、Ｊ、 Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、 １３７ ： ２９５２−２９５５ ［
１９８６］）の使用は、初回抗原刺激がヘルパーＴ細胞
レベルで起こったことを示している。
，４） １．９（１，２） ０．１５（０）ＴＴ７
３−９９（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｔ）ｓｓＴＴ
１８（１，４） ２６（１，５） ０．５４（０
）−ＴＴ ０．１５（０） ５１（１，
２） ０．１５（０）第■表は、接合体すなわち（Ａ
Ｃ−ＣＹＳ−（ＮＡＮＰ）＊）２ｓＴＴで攻撃した場合
、ＴＴ７３−９９による予備免疫処置が抗（ＮＡＮＰ）
および抗ＴＴ抗体応答の増強をもたらすので、ＴＴ７３
−９９がＴヘルパー細胞により認識されることを示して
いる。ＴＴ７３−９９ 、（ＮＡＮＰ）ｓａおよび７７
間の抗体交差反応性の不在、並びにＴ細胞レベルでＮＡ
ＮＰに遺伝学的に応答しないマウス株（Ｇｏｏｄら、Ｊ
、 Ｂｘｐ、 Ｍｅｄ、 １６０ ： ６５５−６６０
［１９８６］ ；Ｄｅｌ Ｇｕｉｄｉｃｅら、Ｊ、 Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、 １３７ ： ２９５２−２９５５ ［
１９８６］）の使用は、初回抗原刺激がヘルパーＴ細胞
レベルで起こったことを示している。
第二の実験では１．ｕ（ｏＨ）ｓ中のＴＴ５０μｇを皮
下注射することにより１群５匹のＢＡＬＢ／ｃマウス２
群を予備免疫処置した。３６日および１６８日後、これ
らのマウスと１群５匹からある正常マウス２群に（Ａｃ
−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）２） ｚｓＴＴ２５μｇまたは
ＦＩＡ中の（ＮＡＮＰ）、 ＴＴ７３−９９を皮下注射
した。抗体価は、−次ピーク応答（こついては３６日目
と７０日目の間、二次応答については１６８６８日目１
８９８９日目の間毎週ＥＬＩＳＡにより測定した。第■
表は各免疫感作プロトコールのピーク応答を示す。値は
第■表と同様に幾何平均力価として示される。
下注射することにより１群５匹のＢＡＬＢ／ｃマウス２
群を予備免疫処置した。３６日および１６８日後、これ
らのマウスと１群５匹からある正常マウス２群に（Ａｃ
−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）２） ｚｓＴＴ２５μｇまたは
ＦＩＡ中の（ＮＡＮＰ）、 ＴＴ７３−９９を皮下注射
した。抗体価は、−次ピーク応答（こついては３６日目
と７０日目の間、二次応答については１６８６８日目１
８９８９日目の間毎週ＥＬＩＳＡにより測定した。第■
表は各免疫感作プロトコールのピーク応答を示す。値は
第■表と同様に幾何平均力価として示される。
（本頁以下余白）
第■表
免疫感作プロトコール
ＴＴ
ＴＴ
（ＮＡＮＰ） ４ＴＴ７３−９９
（ＮＡＮＰ）４ＴＴ７３−９９
（ＡＣ−ＣＶＳ−（ＮＡＮＰ） 、 ）、 、ＴＴ（Ａ
ｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｚ）ｚｓＴＴ３、４（１，５
） ０．３７（１，１）１５（１，７） ９８（１
，２） ２１（１，１） １５Ｉ（１，２） ０．９（１，９） ４５４（１，２）１、１（１，９
） ４、１（１，５） ０．１５（０） ０．１５（０） 第■表 免疫感作プロトコール （ＮＡＮＰ）４ＴＴ７３−９９ ＴＴ （ＮＡＮＰ）４ＴＴ７３−９９（Ａｃ−Ｃｙ
ｓ−（ＮＡＮＰ）＊）＊５ＴＴＴＴ （Ａｃ−Ｃｙｓ
−、（ＮＡＮＰ）ｓ）ｓｓＴＴ１１６（１，３） ４２２（１，２） １７９（１，３） １０（１，３） ０．１５（０） １７３（１，２） ８７８（１，３） ８７８（１，４） １、３（１，８） ２、３（１，７） ０、１５（０） ０．１５（０） 第■表および■表は、全キャリヤータンパク質ＴＴを含
有する接合体（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｚ）ｚｓＴ
Ｔへの応答と、キャリヤータンパク質↑Ｔのサブパート
すなわちＴＴ７３−９９のみを含有するペプチド（ＮＡ
ＮＰ）４ ＴＴ７３−９９への応答に対するＴＴによる
予備免疫感作の影響の比較を示す。これらの実験では、
Ｔ細胞レベルでＮＡＮＰに遺伝学的に応答しないマウス
株が使用された。（ＮＡＮＰ）含有抗原による１回の攻
撃については第■表に、（ＮＡＮＰ）含有抗原による２
回の攻撃については第■表に示しであるように、ＴＴ初
回抗原投与は、たとえ抗ＴＴ応答が予備処置マウスにお
いて高まるとしても、（ＡＣ−ＣＹＳ−（ＮＡＮＰ）２
）２ＳＴＴに対する抗（ＮＡＮＰ）応答を抑制した（＝
エピドープ抑制）。他方、ＴＴ初回抗原投与は（ＮＡＮ
Ｐ）４ ＴＴ７３−９９に対する抗（ＮＡＮＰ）応答の
抑制をもたらさず、実際にはＴＴによる予備免疫処置後
に抗（ＮＡＮＰ）応答の増強をもたらした。
ｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｚ）ｚｓＴＴ３、４（１，５
） ０．３７（１，１）１５（１，７） ９８（１
，２） ２１（１，１） １５Ｉ（１，２） ０．９（１，９） ４５４（１，２）１、１（１，９
） ４、１（１，５） ０．１５（０） ０．１５（０） 第■表 免疫感作プロトコール （ＮＡＮＰ）４ＴＴ７３−９９ ＴＴ （ＮＡＮＰ）４ＴＴ７３−９９（Ａｃ−Ｃｙ
ｓ−（ＮＡＮＰ）＊）＊５ＴＴＴＴ （Ａｃ−Ｃｙｓ
−、（ＮＡＮＰ）ｓ）ｓｓＴＴ１１６（１，３） ４２２（１，２） １７９（１，３） １０（１，３） ０．１５（０） １７３（１，２） ８７８（１，３） ８７８（１，４） １、３（１，８） ２、３（１，７） ０、１５（０） ０．１５（０） 第■表および■表は、全キャリヤータンパク質ＴＴを含
有する接合体（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｚ）ｚｓＴ
Ｔへの応答と、キャリヤータンパク質↑Ｔのサブパート
すなわちＴＴ７３−９９のみを含有するペプチド（ＮＡ
ＮＰ）４ ＴＴ７３−９９への応答に対するＴＴによる
予備免疫感作の影響の比較を示す。これらの実験では、
Ｔ細胞レベルでＮＡＮＰに遺伝学的に応答しないマウス
株が使用された。（ＮＡＮＰ）含有抗原による１回の攻
撃については第■表に、（ＮＡＮＰ）含有抗原による２
回の攻撃については第■表に示しであるように、ＴＴ初
回抗原投与は、たとえ抗ＴＴ応答が予備処置マウスにお
いて高まるとしても、（ＡＣ−ＣＹＳ−（ＮＡＮＰ）２
）２ＳＴＴに対する抗（ＮＡＮＰ）応答を抑制した（＝
エピドープ抑制）。他方、ＴＴ初回抗原投与は（ＮＡＮ
Ｐ）４ ＴＴ７３−９９に対する抗（ＮＡＮＰ）応答の
抑制をもたらさず、実際にはＴＴによる予備免疫処置後
に抗（ＮＡＮＰ）応答の増強をもたらした。
上記の結果は、ＴＴによる予備免疫処置が原因で起こる
エピドープ抑制を、もとのタンパク質（ＴＴ）に由来す
る、エピドープ抑制機能の情報を含まないペプチド（こ
こではＴＴ７３−９９ ）の形でキャリヤー情報を供給
することにより回避できることを証明している。
エピドープ抑制を、もとのタンパク質（ＴＴ）に由来す
る、エピドープ抑制機能の情報を含まないペプチド（こ
こではＴＴ７３−９９ ）の形でキャリヤー情報を供給
することにより回避できることを証明している。
実際的な見地から、ワクチン用のキャリヤー配列は大部
分のヒトのＴ細胞によって認識されるべきである。ある
種のペプチドは多種多様のヒト・クラス■対立遺伝子に
よって制限されることが知られている（Ｓｉｎｉｇａｇ
ｌ ｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３３６ ： ７７８−７８
０［１９８８］； Ｐａｎ１ｎａら、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ。
分のヒトのＴ細胞によって認識されるべきである。ある
種のペプチドは多種多様のヒト・クラス■対立遺伝子に
よって制限されることが知られている（Ｓｉｎｉｇａｇ
ｌ ｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３３６ ： ７７８−７８
０［１９８８］； Ｐａｎ１ｎａら、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ。
Ｑｕａｎｔ、Ｂｉｏｌ、 Ｖｏｌ、ＬＩＶ、 Ｃｏ
１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ［１９８９
］）。ＴＴ７３−９９が一般的に認識されるキャリヤー
として役に立つかゲうかを判定するには、第Ｖ表に示さ
れる各系統のマウス２または３匹に、フロイント完全ア
ジュバント中の（ＮＡＮＰ）、 ＴＴ７３−９９を皮下
注射した。
１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ［１９８９
］）。ＴＴ７３−９９が一般的に認識されるキャリヤー
として役に立つかゲうかを判定するには、第Ｖ表に示さ
れる各系統のマウス２または３匹に、フロイント完全ア
ジュバント中の（ＮＡＮＰ）、 ＴＴ７３−９９を皮下
注射した。
３２日後、これらのマウスにＦＩＡ中の（ＮＡＮＰ）、
ＴＴ７３−９９の２５μｇを注射した（追加免疫）。
ＴＴ７３−９９の２５μｇを注射した（追加免疫）。
抗体応答は追加免疫後３週間にわたって毎週検定した。
第Ｖ表は生産された抗体のピーク幾何平均力価を示す。
抗（ＮＡＮＰ）力価は第π表で説明したようにして測定
した。抗スポロゾイトカ価はＥｔｌｉｎｇｅｒら、Ｊ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １４０ ： ６２６−６３３ ［
１９８８］に記載される間接免疫蛍光法により測定した
。正常なマウス血清は抗（ＮＡＮＰ）力価≦１５０およ
び抗スボロゾイトカ価＜１０を有していた。応答は可変
的であったが、第ｖ表は試験した７種類のマウス系統の
それぞれが抗（ＮＡＮＰ）抗体および抗スポロゾイト抗
体を生産したことを示している。Ｈ−２”マウスだけが
Ｔ細胞レベルでＮＡＮＰ配列に応答するので（Ｇｏｏｄ
ら、Ｊ。
した。抗スポロゾイトカ価はＥｔｌｉｎｇｅｒら、Ｊ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １４０ ： ６２６−６３３ ［
１９８８］に記載される間接免疫蛍光法により測定した
。正常なマウス血清は抗（ＮＡＮＰ）力価≦１５０およ
び抗スボロゾイトカ価＜１０を有していた。応答は可変
的であったが、第ｖ表は試験した７種類のマウス系統の
それぞれが抗（ＮＡＮＰ）抗体および抗スポロゾイト抗
体を生産したことを示している。Ｈ−２”マウスだけが
Ｔ細胞レベルでＮＡＮＰ配列に応答するので（Ｇｏｏｄ
ら、Ｊ。
Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、 １６０ ： ６５５−６６０ ［
１９８６］； Ｄｅｌ Ｇｕｉｄｉｃｅら、Ｊ、 Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、 １３７ ： ２９５２−２９５５ ［１
９８６］）、第Ｖ表に示される結果は、すべての非Ｈ−
２ｂ系統がＴＴ７３−９９により提示されるＴヘルパー
細胞エピドープを認識できることを示している。Ｈ−２
ｂマウスの場合には、ヘルパーＴ細胞機能はＮＡＮＰ配
列の認識を介して生じたと思われる。
１９８６］； Ｄｅｌ Ｇｕｉｄｉｃｅら、Ｊ、 Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、 １３７ ： ２９５２−２９５５ ［１
９８６］）、第Ｖ表に示される結果は、すべての非Ｈ−
２ｂ系統がＴＴ７３−９９により提示されるＴヘルパー
細胞エピドープを認識できることを示している。Ｈ−２
ｂマウスの場合には、ヘルパーＴ細胞機能はＮＡＮＰ配
列の認識を介して生じたと思われる。
（本頁以下余白）
第Ｖ表
（ＮＡＮＰ） ４ＴＴ７３−９９は遺伝学的に多様なマ
ウスにおいて抗スポロゾイト抗体を惹起する。
ウスにおいて抗スポロゾイト抗体を惹起する。
Ｂ１０．ＲＩＩＩ ｒ ５９
２８Ｃ５７Ｂ１／１０ ｂ
１４３０５ １１５８５２ＢＩＯ，ｓ
ｓ ３６６ １２８０Ｂ１
０．ＢＲｋ ９１５ ２０４８０
ＢＩＯ，Ｍ ｆ ９
１０ＢＩＯ，Ｇ ｑ ２２
８８ ４０９６０Ｂ１０．Ｄ２
ｄ １４４８ ２０４８０Ｓ２Ｏ
４８０Ｓｉｎｉら、（同上）により示されるデータに基
づくと、ＴＴ７３−９９は遺伝学的に多様なヒト集団の
大多数の構成員のＴ細胞によって一般的に認識されるこ
とが示唆された。この点を明らかにするために、２０人
のボランティアから末梢血白血球（ＰＢＬ）を採取し、
ＴＴ７３−９９またはＴＴとの反応性についてインビト
ロＴ細胞増殖検定で試験した。
２８Ｃ５７Ｂ１／１０ ｂ
１４３０５ １１５８５２ＢＩＯ，ｓ
ｓ ３６６ １２８０Ｂ１
０．ＢＲｋ ９１５ ２０４８０
ＢＩＯ，Ｍ ｆ ９
１０ＢＩＯ，Ｇ ｑ ２２
８８ ４０９６０Ｂ１０．Ｄ２
ｄ １４４８ ２０４８０Ｓ２Ｏ
４８０Ｓｉｎｉら、（同上）により示されるデータに基
づくと、ＴＴ７３−９９は遺伝学的に多様なヒト集団の
大多数の構成員のＴ細胞によって一般的に認識されるこ
とが示唆された。この点を明らかにするために、２０人
のボランティアから末梢血白血球（ＰＢＬ）を採取し、
ＴＴ７３−９９またはＴＴとの反応性についてインビト
ロＴ細胞増殖検定で試験した。
ＰＢＬは全血から得た。培養物は予め０．１５Ｍ Ｎａ
Ｃ１中の１００μｇ／ ｍｌのＴＴ７３−９９ 、また
は０．１５Ｍ Ｎａ１ｌ中の１００ ｔｔ ｇ／ １ｎ
ｉＴＴ、もしくは０．１５Ｍ ＮａＣ１のみをそれぞれ
２０μｌ入れたマイクロタイタープレートのウェルに２
通りずつ用意した。各ウェルは培地（１０％熱不活性化
ヒトＡＢ血清、１００単位／ｒＩＬｌペニシリン、１０
０μｇ／ｒｒｄｌストレプトマイシンおよび２ｍＭグル
タミンを含有するＲＰＭＩ） ０．２ ｍｌに４ｘｌＯ
５細胞を含有した。次にマイクロタイタープレートを３
７°Ｃでインキュベートした。Ｔ細胞増殖の程度は、４
日間のインキュベーション後、各ウェルに１μＣｉ ［
２Ｈ］−チミジンを加えて、２４時間後に［３Ｈ］−チ
ミジン取り込みを測定することにより測定した。［３Ｈ
１−チミジン取り込みはＤＮＡ合成の程度を表す尺度で
ある。刺激指数はＴＴ７３−９９またはＴＴをそれぞれ
含有する培養物における［３Ｈ１−チミジン取り込み（
カウント数／分として測定；ｃｐｍと略記する）の量を
、ＴＴ７３−９９もＴＴも含まない培養物における［３
旧−チミジン取り込みの量で割った値である。２０人の
ボランティアのうち１２人はＴＴ７３−９９に応答した
（刺激指数≧２）（第■表）。
Ｃ１中の１００μｇ／ ｍｌのＴＴ７３−９９ 、また
は０．１５Ｍ Ｎａ１ｌ中の１００ ｔｔ ｇ／ １ｎ
ｉＴＴ、もしくは０．１５Ｍ ＮａＣ１のみをそれぞれ
２０μｌ入れたマイクロタイタープレートのウェルに２
通りずつ用意した。各ウェルは培地（１０％熱不活性化
ヒトＡＢ血清、１００単位／ｒＩＬｌペニシリン、１０
０μｇ／ｒｒｄｌストレプトマイシンおよび２ｍＭグル
タミンを含有するＲＰＭＩ） ０．２ ｍｌに４ｘｌＯ
５細胞を含有した。次にマイクロタイタープレートを３
７°Ｃでインキュベートした。Ｔ細胞増殖の程度は、４
日間のインキュベーション後、各ウェルに１μＣｉ ［
２Ｈ］−チミジンを加えて、２４時間後に［３Ｈ］−チ
ミジン取り込みを測定することにより測定した。［３Ｈ
１−チミジン取り込みはＤＮＡ合成の程度を表す尺度で
ある。刺激指数はＴＴ７３−９９またはＴＴをそれぞれ
含有する培養物における［３Ｈ１−チミジン取り込み（
カウント数／分として測定；ｃｐｍと略記する）の量を
、ＴＴ７３−９９もＴＴも含まない培養物における［３
旧−チミジン取り込みの量で割った値である。２０人の
ボランティアのうち１２人はＴＴ７３−９９に応答した
（刺激指数≧２）（第■表）。
さらに、より制限された実験においては、Ｔ細胞は（Ｎ
ＡＮＰ）４ ＴＴ７３−９９に応答して増殖するが、（
ＮＡＮＰ） Ｓ。
ＡＮＰ）４ ＴＴ７３−９９に応答して増殖するが、（
ＮＡＮＰ） Ｓ。
または（ＮＡＮＰ） ｓには応答しないことが判明した
。
。
このことは、ＴＴ７３−９９部分がＴ細胞によって認識
されうる、すなわちＢ細胞エピドープを提示する化合物
（（ＮＡＮＰ）、部分）の存在がＴ細胞エピドープを提
示する化合物（ＴＴ７３−９９部分）のＴヘルパー細胞
機能の情報を遮蔽しないことを示している。
されうる、すなわちＢ細胞エピドープを提示する化合物
（（ＮＡＮＰ）、部分）の存在がＴ細胞エピドープを提
示する化合物（ＴＴ７３−９９部分）のＴヘルパー細胞
機能の情報を遮蔽しないことを示している。
第■表
ヒトにおけるＴＴおよびＴＴ７３−９９への細胞反応性
ＴＴ７３−９９ ８３ ２３ １ １ １
１ＴＴ ＜２ ３ １０−３０ ４０
−６０ ７０−１００＞１００１５５４４ 別の実験に、おいて、（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｓ
）ｚｓＴＴへの応答性に対するインターフェロン−αお
よび−γのアジュバント活性を分析する１期臨床実験に
参加した５５人のボランティアからの血清を、（Ａｃ−
Ｃｙｓ（ＮＡＮＰ） ３） −５ＴＴによる免疫処置前
と後にＴＴおよびＴＴ７３−９９との反応性について試
験した。抗体価はペルオキシダーゼ結合抗１ｇＭおよび
ＩｇＧ抗体を使ってＥｔｌｉｎｇｅｒら、Ｊ、 Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、 １４０ ： ６２６−６３３［１９８８
］に記載されるようにして測定した。値は５５人のボラ
ンティアの幾何平均（係数変動幾何平均）である。臨床
前抗体価は（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ａ）ｓｓＴＴ
を注射する以前のものである。ウシ血清アルブミン（Ｅ
ＬＩＳＡにおいてブロッカ−として使用）を被覆したプ
レート中の臨床部血清および臨床後血清の幾何平均抗体
価（係数変動幾何平均）は１０’ （１，１）であるこ
とが分かった。先に述べたように、ＴＴ７３−９９に対
するＴ細胞反応性は試験した２０人のほぼ半数において
証明できたが、別の５５人のボランティアからの抗血清
はどれもこのペプチドと反応しなかった（第■表）。
ＴＴ７３−９９ ８３ ２３ １ １ １
１ＴＴ ＜２ ３ １０−３０ ４０
−６０ ７０−１００＞１００１５５４４ 別の実験に、おいて、（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ｓ
）ｚｓＴＴへの応答性に対するインターフェロン−αお
よび−γのアジュバント活性を分析する１期臨床実験に
参加した５５人のボランティアからの血清を、（Ａｃ−
Ｃｙｓ（ＮＡＮＰ） ３） −５ＴＴによる免疫処置前
と後にＴＴおよびＴＴ７３−９９との反応性について試
験した。抗体価はペルオキシダーゼ結合抗１ｇＭおよび
ＩｇＧ抗体を使ってＥｔｌｉｎｇｅｒら、Ｊ、 Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、 １４０ ： ６２６−６３３［１９８８
］に記載されるようにして測定した。値は５５人のボラ
ンティアの幾何平均（係数変動幾何平均）である。臨床
前抗体価は（Ａｃ−Ｃｙｓ−（ＮＡＮＰ）ａ）ｓｓＴＴ
を注射する以前のものである。ウシ血清アルブミン（Ｅ
ＬＩＳＡにおいてブロッカ−として使用）を被覆したプ
レート中の臨床部血清および臨床後血清の幾何平均抗体
価（係数変動幾何平均）は１０’ （１，１）であるこ
とが分かった。先に述べたように、ＴＴ７３−９９に対
するＴ細胞反応性は試験した２０人のほぼ半数において
証明できたが、別の５５人のボランティアからの抗血清
はどれもこのペプチドと反応しなかった（第■表）。
（本頁以下余白）
第■表
ヒトにおけるＴＴおよびＴＴ７３−９９への体液反応性
臨床前血清 臨床後胤 （抗体価ｘｌＯ’） （抗体価ｘ １０３）ＴＴ７
３−９９ １．２（１，１） １．３（１
，１）ＴＴ ４４（１，３） １
４１（１，２）上に示したＴＴまたは（Ａｃ−Ｃｙｓ−
（ＮＡＮＰ） ｓ ） ２５ＴＴ免疫処置後のＴＴ７３
−９９に対するヒト抗体反応性の欠如はマウスで得られ
た結果と類似している（第■表および第■表参照）。そ
こでは、Ｂ細胞エピドープ、すなわち組成物（ＮＡＮＰ
） 、ＴＴ７３−９９の（ＮＡＮＰ）４部分、への抗体
応答の抑制は、恐らく幾分かはキャリヤータンパク質Ｔ
Ｔによる予備免疫処置が原因で起こる（なぜならば、予
備免疫処置により組成物中のキャリヤータンパク質ＴＴ
の未修飾部分を認識するキャリヤー特異的初回抗原刺激
ずみＢ細胞の存在を生ずるからである）ことが示された
。この抑制はエピドープ抑制と呼ばれている（Ｓｃｈｕ
ｔｚｅら、Ｃｅ１１．Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １０４： ７
７−９０ ［１９８７］） 、上記結果は、もとのタン
パク質とキャリヤーペプチド間の抗体交差反応性の不在
が、キャリヤー機能の情報を含むがエピドープ抑制機能
の情報を含まない候補ペプチドの妥協な必要条件である
ことを意味している。
臨床前血清 臨床後胤 （抗体価ｘｌＯ’） （抗体価ｘ １０３）ＴＴ７
３−９９ １．２（１，１） １．３（１
，１）ＴＴ ４４（１，３） １
４１（１，２）上に示したＴＴまたは（Ａｃ−Ｃｙｓ−
（ＮＡＮＰ） ｓ ） ２５ＴＴ免疫処置後のＴＴ７３
−９９に対するヒト抗体反応性の欠如はマウスで得られ
た結果と類似している（第■表および第■表参照）。そ
こでは、Ｂ細胞エピドープ、すなわち組成物（ＮＡＮＰ
） 、ＴＴ７３−９９の（ＮＡＮＰ）４部分、への抗体
応答の抑制は、恐らく幾分かはキャリヤータンパク質Ｔ
Ｔによる予備免疫処置が原因で起こる（なぜならば、予
備免疫処置により組成物中のキャリヤータンパク質ＴＴ
の未修飾部分を認識するキャリヤー特異的初回抗原刺激
ずみＢ細胞の存在を生ずるからである）ことが示された
。この抑制はエピドープ抑制と呼ばれている（Ｓｃｈｕ
ｔｚｅら、Ｃｅ１１．Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １０４： ７
７−９０ ［１９８７］） 、上記結果は、もとのタン
パク質とキャリヤーペプチド間の抗体交差反応性の不在
が、キャリヤー機能の情報を含むがエピドープ抑制機能
の情報を含まない候補ペプチドの妥協な必要条件である
ことを意味している。
次の実験は、
（ａ） 初めに病原体Ｐ１からの抗原（例、破傷風ト
キソイド（ＴＴ））で、次に病原体Ｐ、からの抗原（例
、マラリア原虫からの抗原）またはその抗原性サブパー
ト（例、 Ｐ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのＣＳタンパク質
からのＢ細胞エピドープ（ＮＡＮＰ）４）であるＢ細胞
エピドープを提示する化合物、および病原体Ｐ１からの
抗原（例、 ＴＴ）のサブパートであるＴヘルパー細胞
エピドープを提示する化合物（このＴヘルパー細胞エピ
ドープを提示する化合物はキャリヤー機能の情報を含む
が、エピドープ抑制機能の情報を含まない点に特徴があ
る）（例、化合物ＴＴ８８−９９またはＴＴ７３−９９
）を含んでなる組成物Ｃ（例９組成物（ＮＡＮＰ）４
ＴＴ８８−９９）で、あるいは （ｂ） １回または２回、上記の組成物Ｃで、予備免
疫処置された宿主を、抗原（例、病原体Ｐ０からの抗原
）またはその抗原性サブパートのモデルとしてＢ細胞エ
ピドープを提示する化合物、（例、ニワトリの卵白リゾ
チームのアミノ酸残基４６−６１から成る化合物Ｈｅｌ
４６−６１ （Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １３５： ３
６８−３７３ ［１９８５］））および上記病原体ＰＩ
からの抗原のサブパートであるＴヘルパー細胞エピドー
プを提示する化合物（このＴヘルパー細胞エピドープを
提示する化合物はキャリヤー機能の情報を含むが、エピ
ドープ抑制機能の情報を含まない点に特徴がある）（例
、化合物ＴＴ８８−９９またはＴＴ７３−９９）を含ん
で成る組成物Ｃ’（例９組成物Ｈｅｌ ４６６１ＴＴ８
８−９９）で免疫処置することの効果を調べるために設
計された。
キソイド（ＴＴ））で、次に病原体Ｐ、からの抗原（例
、マラリア原虫からの抗原）またはその抗原性サブパー
ト（例、 Ｐ、ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのＣＳタンパク質
からのＢ細胞エピドープ（ＮＡＮＰ）４）であるＢ細胞
エピドープを提示する化合物、および病原体Ｐ１からの
抗原（例、 ＴＴ）のサブパートであるＴヘルパー細胞
エピドープを提示する化合物（このＴヘルパー細胞エピ
ドープを提示する化合物はキャリヤー機能の情報を含む
が、エピドープ抑制機能の情報を含まない点に特徴があ
る）（例、化合物ＴＴ８８−９９またはＴＴ７３−９９
）を含んでなる組成物Ｃ（例９組成物（ＮＡＮＰ）４
ＴＴ８８−９９）で、あるいは （ｂ） １回または２回、上記の組成物Ｃで、予備免
疫処置された宿主を、抗原（例、病原体Ｐ０からの抗原
）またはその抗原性サブパートのモデルとしてＢ細胞エ
ピドープを提示する化合物、（例、ニワトリの卵白リゾ
チームのアミノ酸残基４６−６１から成る化合物Ｈｅｌ
４６−６１ （Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １３５： ３
６８−３７３ ［１９８５］））および上記病原体ＰＩ
からの抗原のサブパートであるＴヘルパー細胞エピドー
プを提示する化合物（このＴヘルパー細胞エピドープを
提示する化合物はキャリヤー機能の情報を含むが、エピ
ドープ抑制機能の情報を含まない点に特徴がある）（例
、化合物ＴＴ８８−９９またはＴＴ７３−９９）を含ん
で成る組成物Ｃ’（例９組成物Ｈｅｌ ４６６１ＴＴ８
８−９９）で免疫処置することの効果を調べるために設
計された。
（ＮＡＮＰ） 、ＴＴ８８−９９およびＨｅ１４６−６
１ＴＴ８８−９９は、連続フローペプチド合成機（９０
５０ＰｅｐＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、米国マサチューセ
ッツ州ベツドフォード、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ社、Ｍｉｌｌ
ｉｐｏｒｅ部門）を使って合成した。この合成機は、Ｍ
ｉｌｌｉｇｅｎ ９０５０ペプチド合成操作マニュアル
に記載されるように、固相ペプチド合成のＦｍｏｃ−ポ
リアミド法を自動化したものである。免疫応答における
Ｂ細胞エピドープの効果とＴ細胞エピドープの効果をは
っきり区別するためには、その主要組織適性複合体（Ｍ
ＭＣ） ／）プロタイプゆえにＴ細胞レベルで（ＮＡＮ
Ｐ）の反復または（Ｈｅｌ ４６−６１）に応答しない
マウス系統が使用された。１群５匹のＢＡＬＢ／ｃマウ
ス３群を使用し、第１群の各動物に、０日日（こＡｔ（
ＯＨ）ｊ中のＴＴ５０μｇ、続いて３２日目にフロイン
ト完全アジュバント（ＦＣＡ）中の（ＮＡＮＰ）４ＴＴ
８８−９９の２５μｇ１そして７５日目にＦＩＡ中の（
ＮＡＮＰ） ４ＴＴ８８−９９の２５μｇを皮下注射し
た：１０７日目とｌ３８３８日目マウス（二ＦＩＡ中の
Ｈｅ１４６−６１ＴＴ８８−９９の２５μｇを与えた。
１ＴＴ８８−９９は、連続フローペプチド合成機（９０
５０ＰｅｐＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、米国マサチューセ
ッツ州ベツドフォード、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ社、Ｍｉｌｌ
ｉｐｏｒｅ部門）を使って合成した。この合成機は、Ｍ
ｉｌｌｉｇｅｎ ９０５０ペプチド合成操作マニュアル
に記載されるように、固相ペプチド合成のＦｍｏｃ−ポ
リアミド法を自動化したものである。免疫応答における
Ｂ細胞エピドープの効果とＴ細胞エピドープの効果をは
っきり区別するためには、その主要組織適性複合体（Ｍ
ＭＣ） ／）プロタイプゆえにＴ細胞レベルで（ＮＡＮ
Ｐ）の反復または（Ｈｅｌ ４６−６１）に応答しない
マウス系統が使用された。１群５匹のＢＡＬＢ／ｃマウ
ス３群を使用し、第１群の各動物に、０日日（こＡｔ（
ＯＨ）ｊ中のＴＴ５０μｇ、続いて３２日目にフロイン
ト完全アジュバント（ＦＣＡ）中の（ＮＡＮＰ）４ＴＴ
８８−９９の２５μｇ１そして７５日目にＦＩＡ中の（
ＮＡＮＰ） ４ＴＴ８８−９９の２５μｇを皮下注射し
た：１０７日目とｌ３８３８日目マウス（二ＦＩＡ中の
Ｈｅ１４６−６１ＴＴ８８−９９の２５μｇを与えた。
第２群の各マウスには第１群と同じ注射を与えたが、こ
の第２群のマウスはＴＴによる予備免疫処置を受けなか
った。第３群の各動物は予備免疫処置を受けず、３２日
の間隔をおいて２回ＦｒＡ中のＨｅ１４６−６１ＴＴ８
８−９９を２５．ｃｚｇ与えられた。上記実験の結果を
第■表、パートＣに示してあり、方対照実験の結果およ
びこれらの対照実験で使用した免疫処置プロトコールは
第■表、パートＡおよびＢに示しである。ピーク力価は
第■表、パートＡに示した対照実験Ａでは（ＮＡＮＰ）
４ＴＴ８８−９９の第１回注射後４３日目に、第■表
、パートＢに示した対照実験Ｂでは（ＮＡＮＰ）４ Ｔ
Ｔ８８−９９の第２回注射後３２日目に、そして第■表
、パートＣに示した実験ＣではＨｅ１４６−６１ＴＴ８
８−９９の第２回注射後１４日目に測定した（括弧内は
幾何平均の変動係数）。
の第２群のマウスはＴＴによる予備免疫処置を受けなか
った。第３群の各動物は予備免疫処置を受けず、３２日
の間隔をおいて２回ＦｒＡ中のＨｅ１４６−６１ＴＴ８
８−９９を２５．ｃｚｇ与えられた。上記実験の結果を
第■表、パートＣに示してあり、方対照実験の結果およ
びこれらの対照実験で使用した免疫処置プロトコールは
第■表、パートＡおよびＢに示しである。ピーク力価は
第■表、パートＡに示した対照実験Ａでは（ＮＡＮＰ）
４ＴＴ８８−９９の第１回注射後４３日目に、第■表
、パートＢに示した対照実験Ｂでは（ＮＡＮＰ）４ Ｔ
Ｔ８８−９９の第２回注射後３２日目に、そして第■表
、パートＣに示した実験ＣではＨｅ１４６−６１ＴＴ８
８−９９の第２回注射後１４日目に測定した（括弧内は
幾何平均の変動係数）。
免疫処置と予備免疫処置の時間間隔は特に重要な意味を
有さず、個々の情況に応じてかなり変化しうるにもかか
わらず、同じ防御免疫応答を生ずることができる。当業
者は適切な時間間隔を選択して、最適化できる。
有さず、個々の情況に応じてかなり変化しうるにもかか
わらず、同じ防御免疫応答を生ずることができる。当業
者は適切な時間間隔を選択して、最適化できる。
（本頁以下余白）
第■表
Ａ １回目 ２回目
Ｔｒ （ＮＡＮＰ）、ＴＩ’８８−９９（ＮＡＮＰ
）４Ｔｌ’８８−９９ Ｂ１回目 ２回目と３回目 Ｔｒ （ＮＡＮＰ）４Ｔｒ８８−９９（ＮＡＮＰ）、
ＴＩ’８８−９９ Ｃ１回目 ２回目と３回目 ＴＴ （ＮＡＮＰ）、ＴＴ８８−９９（ＮＡＮＰ）４
Ｔｒ８８−９９ ４回目と５回目 １（ｅｌ ４６−６１Ｔｆ’８８−９９Ｈｅ１４６−６
１Ｔｒ’８８−９９ Ｈｅ１４６−６１Ｔｒ８８−９９ ５９（１，７） １［１，１） １０２（１，２） ４９（１，６） ２１１（１，２） ２１１（１，５） ８５（１，６） （本頁以下余白） 第■表のパートＡおよびＢは、キャリヤータンパク質Ｔ
Ｔのサブパート（すなわち、ＴＴ８８−９９ ）のみを
含有するペプチド（ＮＡＮＰ）４ ＴＴ８８−９９を用
いる１回（実験Ａ）または２回（実験Ｂ）の攻撃後のＴ
Ｔによる予備免疫処置の効果の比較を示す。（ＮＡＮＰ
）、 ＴＴ７３−９９について第■表および第■表です
でに示したように、ＴＴ初回抗原投与は（ＮＡＮＰ）、
ＴＴ８８９９に対する抗ＮＡＮＰ応答を増強させた。
）４Ｔｌ’８８−９９ Ｂ１回目 ２回目と３回目 Ｔｒ （ＮＡＮＰ）４Ｔｒ８８−９９（ＮＡＮＰ）、
ＴＩ’８８−９９ Ｃ１回目 ２回目と３回目 ＴＴ （ＮＡＮＰ）、ＴＴ８８−９９（ＮＡＮＰ）４
Ｔｒ８８−９９ ４回目と５回目 １（ｅｌ ４６−６１Ｔｆ’８８−９９Ｈｅ１４６−６
１Ｔｒ’８８−９９ Ｈｅ１４６−６１Ｔｒ８８−９９ ５９（１，７） １［１，１） １０２（１，２） ４９（１，６） ２１１（１，２） ２１１（１，５） ８５（１，６） （本頁以下余白） 第■表のパートＡおよびＢは、キャリヤータンパク質Ｔ
Ｔのサブパート（すなわち、ＴＴ８８−９９ ）のみを
含有するペプチド（ＮＡＮＰ）４ ＴＴ８８−９９を用
いる１回（実験Ａ）または２回（実験Ｂ）の攻撃後のＴ
Ｔによる予備免疫処置の効果の比較を示す。（ＮＡＮＰ
）、 ＴＴ７３−９９について第■表および第■表です
でに示したように、ＴＴ初回抗原投与は（ＮＡＮＰ）、
ＴＴ８８９９に対する抗ＮＡＮＰ応答を増強させた。
実験Ｃは、Ｈｅ１４６−６１ＴＴ８８−９９Ｇ＝よる免
疫処置後の宿主の免疫応答に及ぼす、 （ａ） 初めにＴＴで、次に（ＮＡＮＰ）、 ＴＴ８
８−９９で２回、または、 （ｂ） （ＮＡＮＰ）４ ＴＴ８８−９９で２回、予
備免疫処置することの効果を示している。Ｂ細胞エピド
ープを提示する化合物ＨｅＬ ４６−６１と反応する抗
体の力価は、既知方法（Ｅｔｌｉｎｇｅｒら、Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ ６４： ５５１−５５８ ［１９８８
］）に従って製造した、ウシ血清アルブミンに結合させ
たＣｙｓ−Ｈｅ１４６−６１から成る接合体（Ｈｅｌ
４６−６ｌ−ＢＳＡ）を使って測定した。第■表、パー
トＣに示すように、Ｂ細胞エピドープＨｅｌ ４６−６
１に対して惹起された抗体応答は、予備免疫処置されな
かった動物に比べて予備免疫処置されたマウスでは増強
された。予備免疫処置プロトコール（ａ）と（ｂ）間に
は効果の点で差が見られなかった。実験Ｃは、本発明組
成物による予備免疫処置が、新しいＢ細胞エピドープを
提示する化合物およびもとのＴ細胞エピドープを提示す
る化合物を含んで成る本発明の第二の組成物に対する免
疫応答の抑制を引き起こさないばかりか、実際に新しい
Ｂ細胞エピドープに対する応答を増強させることを示す
。このことは、新しい防御Ｂ細胞エピドープが同定され
ると、それらを以前に使用されたＴ細胞エピドープ（例
、 ＴＴ７３−９９またはＴＴ８８−９９ ＞ と組
み合わせて、以前に用いられた前記Ｔ細胞エピドープを
提示する化合物を含んで成る本発明組成物で予備免疫処
置した宿主の免疫処置に使用することができることを意
味し、それにより免疫化された宿主は増強された免疫応
答でもって前記の新しい防御Ｂ細胞エピドープに応答す
るであろう。
疫処置後の宿主の免疫応答に及ぼす、 （ａ） 初めにＴＴで、次に（ＮＡＮＰ）、 ＴＴ８
８−９９で２回、または、 （ｂ） （ＮＡＮＰ）４ ＴＴ８８−９９で２回、予
備免疫処置することの効果を示している。Ｂ細胞エピド
ープを提示する化合物ＨｅＬ ４６−６１と反応する抗
体の力価は、既知方法（Ｅｔｌｉｎｇｅｒら、Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ ６４： ５５１−５５８ ［１９８８
］）に従って製造した、ウシ血清アルブミンに結合させ
たＣｙｓ−Ｈｅ１４６−６１から成る接合体（Ｈｅｌ
４６−６ｌ−ＢＳＡ）を使って測定した。第■表、パー
トＣに示すように、Ｂ細胞エピドープＨｅｌ ４６−６
１に対して惹起された抗体応答は、予備免疫処置されな
かった動物に比べて予備免疫処置されたマウスでは増強
された。予備免疫処置プロトコール（ａ）と（ｂ）間に
は効果の点で差が見られなかった。実験Ｃは、本発明組
成物による予備免疫処置が、新しいＢ細胞エピドープを
提示する化合物およびもとのＴ細胞エピドープを提示す
る化合物を含んで成る本発明の第二の組成物に対する免
疫応答の抑制を引き起こさないばかりか、実際に新しい
Ｂ細胞エピドープに対する応答を増強させることを示す
。このことは、新しい防御Ｂ細胞エピドープが同定され
ると、それらを以前に使用されたＴ細胞エピドープ（例
、 ＴＴ７３−９９またはＴＴ８８−９９ ＞ と組
み合わせて、以前に用いられた前記Ｔ細胞エピドープを
提示する化合物を含んで成る本発明組成物で予備免疫処
置した宿主の免疫処置に使用することができることを意
味し、それにより免疫化された宿主は増強された免疫応
答でもって前記の新しい防御Ｂ細胞エピドープに応答す
るであろう。
別の実験においては、組成物（ＮＡＮＰ）４ＴＴ７３−
９９のような本発明組成物による宿主の免疫処置の効果
が試験された。その際、宿主は（Ｔヘルパー細胞エピド
ープが由来する完全抗原での予備免疫処置の代わりに）
前記組成物のＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合
物のみで予備免疫処置された。
９９のような本発明組成物による宿主の免疫処置の効果
が試験された。その際、宿主は（Ｔヘルパー細胞エピド
ープが由来する完全抗原での予備免疫処置の代わりに）
前記組成物のＴヘルパー細胞エピドープを提示する化合
物のみで予備免疫処置された。
この免疫処置プロトコールにより、組成物中のＢ細胞エ
ピドープ、すなわち（ＮＡＮＰ）、に対する免疫応答の
強い抑制を生ずることが判明した。しかしながら、実際
には、宿主はＴヘルパー細胞エピドープのみを提示する
化合物で予備免疫処置されるわけではないので、上記免
疫処置プロトコールは単に理論的興味をそそるにすぎな
いことに注意すべきである。先に明確に示したように、
Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物がキャリヤ
ー機能を提供するが、エピドープ抑制機能を提供しない
かどうかを判定する方法は明らかに完全抗原による予備
免疫処置を必要とし、それ故に本発明は、宿主がＴヘル
パー細胞エピドープのみを提示する化合物で予備免疫処
置される場合に関するのではなく、宿主が抗原（Ｔヘル
パー細胞エピドープはそのサブパートである）または本
発明組成物で予備免疫処置される場合に関することが理
解される。
ピドープ、すなわち（ＮＡＮＰ）、に対する免疫応答の
強い抑制を生ずることが判明した。しかしながら、実際
には、宿主はＴヘルパー細胞エピドープのみを提示する
化合物で予備免疫処置されるわけではないので、上記免
疫処置プロトコールは単に理論的興味をそそるにすぎな
いことに注意すべきである。先に明確に示したように、
Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物がキャリヤ
ー機能を提供するが、エピドープ抑制機能を提供しない
かどうかを判定する方法は明らかに完全抗原による予備
免疫処置を必要とし、それ故に本発明は、宿主がＴヘル
パー細胞エピドープのみを提示する化合物で予備免疫処
置される場合に関するのではなく、宿主が抗原（Ｔヘル
パー細胞エピドープはそのサブパートである）または本
発明組成物で予備免疫処置される場合に関することが理
解される。
上記結果は、現在使用されているタンパク質含有ワクチ
ンからＴヘルパー細胞エピドープを同定し、これらのＴ
細胞エピドープを単独でまたは他の抗原と組み合わせて
、種々の病原体のＢ細胞エピドープを提示する化合物の
キャリヤーとして使用することにより、Ｔヘルパー細胞
初回抗原投与を利用し、かつキャリヤー予備免疫処置に
由来するエピドープ抑制の欠点を排除することができる
ことを立証している。本発明は“遺伝子工学的に操作さ
れた”ワクチンの開発においてさらに進んだ段階である
改良されたサブユニットワクチンを提・供する。これら
の改良されたサブユニットワクチンは、特にマラリアの
予防のように体液性免疫が重要なエフェクター機構を構
成する場合に重要である。
ンからＴヘルパー細胞エピドープを同定し、これらのＴ
細胞エピドープを単独でまたは他の抗原と組み合わせて
、種々の病原体のＢ細胞エピドープを提示する化合物の
キャリヤーとして使用することにより、Ｔヘルパー細胞
初回抗原投与を利用し、かつキャリヤー予備免疫処置に
由来するエピドープ抑制の欠点を排除することができる
ことを立証している。本発明は“遺伝子工学的に操作さ
れた”ワクチンの開発においてさらに進んだ段階である
改良されたサブユニットワクチンを提・供する。これら
の改良されたサブユニットワクチンは、特にマラリアの
予防のように体液性免疫が重要なエフェクター機構を構
成する場合に重要である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、病原体からの抗原またはその抗原性サブパートであ
るＢ細胞エピドープを提示する化合物、および病原体か
らの抗原のサブパートであるＴヘルパー細胞エピドープ
を提示する化合物を含んで成り、該Ｔヘルパー細胞エピ
ドープを提示する化合物がキャリヤー機能に関する情報
を含むが、エピドープ抑制機能に関する情報を含まない
点に特徴がある組成物。 ２、Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物がコリ
ネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅ−ｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（クレープス−
レフラー桿菌：Ｋｌｅｂｓ−Ｌｏｅｆｆｌｅｒ ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ）、ストレフトコッカス・ニューモニア（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ク
ロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔ
ｅｔａｎｉ）、バチルス・カルメット−ゲラン（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓＣａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕ■ｒｉｎ）、ボルデ
テラ・パーツシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕ
ｓｓｉｓ）、ビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏ
ｌｅｒａｅ）、流行性耳下腺炎ウィルス、麻疹ウィルス
、風疹ウィルス、アデノウィルス、ポリオウイルス、バ
チルス・アンスラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒ
ａｃｉｓ）、ロタウイルス、肝炎ウィルス、狂犬病ウィ
ルス、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ、インフルエ
ンザウイルス、ポッスウイルス、エルジニア・ペスチス
（Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓ）、プラスモジウム・
ファルシパルム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐ
ａｒｕｍ）、口蹄疫ウィルス、アイメリア・テネラ（Ｅ
ｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）、およびアイメリア・
アセルブリナ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ
）からなる群から選ばれる病原体からの抗原のサブパー
トである、請求項１記載の組成物。 ３、Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物が破傷
風毒素またはジフテリア毒素のサブパートである、請求
項１記載の組成物。 ４、Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物が次の
アミノ酸配列： Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａ
ｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓ
ｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−
Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（ I ）を有するポリペプチドまたはそ
の同等物である、請求項１記載の組成物。 ５、Ｔヘルパー細胞エピドープを提示する化合物が次の
アミノ酸配列： Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌ
ｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（II） を有するポリペプチドまたはその同等物である、請求項
１記載の組成物。 ６、Ｂ細胞エピドープを提示する化合物がマラリア原虫
からの抗原のサブパートである、請求項１〜５のいずれ
か１項記載の組成物。 ７、Ｂ細胞エピドープを提示する化合物がプラスモジウ
ム・ファルシパルムのサーカムスポロゾイトタンパク質
のサブパートである、請求項１〜５のいずれか１項記載
の組成物。 ８、病原体に対して宿主を防御免疫するための、請求項
１〜７のいずれか１項記載の組成物。 ９、病原体からの抗原またはその抗原性サブパートであ
るＢ細胞エピドープを提示する化合物を、病原体からの
抗原のサブパートであるＴヘルパー細胞エピドープを提
示する化合物（ただし、該サブパートはキャリヤー機能
に関する情報を含むが、エピドープ抑制機能に関する情
報を含まない）に結合させることから成る、請求項１〜
７のいずれか１項記載の組成物の製法。 １０、通常のペプチド合成法または組換えＤＮＡ技術が
使用される、請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物
の製法。 １１、免疫量の請求項１〜７のいずれか１項記載の組成
物および医薬上許容されるアジュバントを含有するワク
チン。 １２、病原体に対して防御免疫を賦与するための、請求
項１〜７のいずれか１項記載の組成物または請求項１１
記載のワクチンの使用。 １３、請求項９または１０記載の方法により製造された
、請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB898924438A GB8924438D0 (en) | 1989-10-31 | 1989-10-31 | Vaccine composition |
| GB8924438.8 | 1989-10-31 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03173830A true JPH03173830A (ja) | 1991-07-29 |
Family
ID=10665428
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2295159A Pending JPH03173830A (ja) | 1989-10-31 | 1990-10-31 | ワクチン組成物 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0429816A1 (ja) |
| JP (1) | JPH03173830A (ja) |
| AU (1) | AU637841B2 (ja) |
| CA (1) | CA2027317A1 (ja) |
| GB (1) | GB8924438D0 (ja) |
| IE (1) | IE903899A1 (ja) |
| NZ (1) | NZ235780A (ja) |
| ZA (1) | ZA908521B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008200047A (ja) * | 1997-05-28 | 2008-09-04 | Chiron Srl | アミノ酸源として酵母または大豆抽出物を含み、動物起源のタンパク質複合体を含まない培養培地 |
Families Citing this family (34)
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| US6043057A (en) * | 1988-09-16 | 2000-03-28 | Vitec Aktiebolag | Recombinant systems for expression of the cholera B-sub-unit with the aid of foreign promoters and/or leader peptides |
| US6322789B1 (en) | 1991-08-26 | 2001-11-27 | Epimmune, Inc. | HLA-restricted hepatitis B virus CTL epitopes |
| US6419931B1 (en) | 1991-08-26 | 2002-07-16 | Epimmune Inc. | Compositions and methods for eliciting CTL immunity |
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| AU3065892A (en) * | 1991-11-14 | 1993-06-15 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Pneumococcal fimbrial protein a vaccines |
| US6312944B1 (en) | 1991-11-14 | 2001-11-06 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Pneumococcal fimbrial protein A |
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1989
- 1989-10-31 GB GB898924438A patent/GB8924438D0/en active Pending
-
1990
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- 1990-10-12 EP EP90119582A patent/EP0429816A1/en not_active Withdrawn
- 1990-10-23 NZ NZ235780A patent/NZ235780A/xx unknown
- 1990-10-24 ZA ZA908521A patent/ZA908521B/xx unknown
- 1990-10-26 AU AU65571/90A patent/AU637841B2/en not_active Ceased
- 1990-10-30 IE IE389990A patent/IE903899A1/en unknown
- 1990-10-31 JP JP2295159A patent/JPH03173830A/ja active Pending
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| AU637841B2 (en) | 1993-06-10 |
| ZA908521B (en) | 1991-07-31 |
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