JPH03169899A - 高分子に抗体を結合させる方法 - Google Patents
高分子に抗体を結合させる方法Info
- Publication number
- JPH03169899A JPH03169899A JP1307510A JP30751089A JPH03169899A JP H03169899 A JPH03169899 A JP H03169899A JP 1307510 A JP1307510 A JP 1307510A JP 30751089 A JP30751089 A JP 30751089A JP H03169899 A JPH03169899 A JP H03169899A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- polymer
- activated
- binding
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 9
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 4
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims abstract description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 abstract description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 abstract description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 abstract description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 abstract 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 abstract 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 abstract 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonyl chloride Chemical compound FC(F)(F)CS(Cl)(=O)=O CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XENVCRGQTABGKY-ZHACJKMWSA-N chlorohydrin Chemical compound CC#CC#CC#CC#C\C=C\C(Cl)CO XENVCRGQTABGKY-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- -1 cyanogen halide Chemical class 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N glycolonitrile Natural products N#CC#N JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、アフィニティクロマトグラフイーイムノラテ
ックス等、免疫学的反応を利用することのできる抗体と
高分子の結合方法に関するものである。
ックス等、免疫学的反応を利用することのできる抗体と
高分子の結合方法に関するものである。
（従来の技術）
抗体は、生化学及び免疫学において極めて広範に利用さ
れる生体物質である。一般に抗体は、アミノ酸残基が約
４３０個からなるＨ鎖（ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ）２
本と、２１４個のアミノ酸残基からなるＬ鎖（ｌｉｇｈ
ｔ ｃｈａｉｎ）２本からなっていて、Ｈ鎖，Ｌ鎖は
それぞれジスルフィド結合で橋かけされてＹ字型の構造
となっている。二つのＦａｂ部分と一つのＦｃ部分に分
かれており、Ｆａｂ部分は、抗原一抗体反応に、Ｆｃ部
分は、補体やＦｃリセプターを持つ細胞との反応に関与
し、生体の巧妙な免疫反応で重要な役割を演じている。
れる生体物質である。一般に抗体は、アミノ酸残基が約
４３０個からなるＨ鎖（ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ）２
本と、２１４個のアミノ酸残基からなるＬ鎖（ｌｉｇｈ
ｔ ｃｈａｉｎ）２本からなっていて、Ｈ鎖，Ｌ鎖は
それぞれジスルフィド結合で橋かけされてＹ字型の構造
となっている。二つのＦａｂ部分と一つのＦｃ部分に分
かれており、Ｆａｂ部分は、抗原一抗体反応に、Ｆｃ部
分は、補体やＦｃリセプターを持つ細胞との反応に関与
し、生体の巧妙な免疫反応で重要な役割を演じている。
この抗体を高分゛子に結合させることにより、抗体の有
する免疫反応を利用し抗原の検出あるいは、精製等に広
く用いられている。
する免疫反応を利用し抗原の検出あるいは、精製等に広
く用いられている。
従来、抗体と高分子との結合は、ＣＮＢｒ， トレシ
ルクロライド，ビスエポキシド，エビクロルヒドリン，
カルボニルジイミダゾール，グルタルアルデヒド等で活
性化された高分子と抗体を、０．１〜０．２Ｍのリン酸
，炭酸，ホウ酸等の緩衝液にＯ〜０．５ＭのＮａＣ１を
含む溶液中（ｐＨ６〜９）で行なわれていた。この方法
では、抗体のＦａｂ部分が選択的に高分子に結合し、結
合された抗体の抗原に対する結合量は理論値のわずか
１０〜３０％にすぎなかった。
ルクロライド，ビスエポキシド，エビクロルヒドリン，
カルボニルジイミダゾール，グルタルアルデヒド等で活
性化された高分子と抗体を、０．１〜０．２Ｍのリン酸
，炭酸，ホウ酸等の緩衝液にＯ〜０．５ＭのＮａＣ１を
含む溶液中（ｐＨ６〜９）で行なわれていた。この方法
では、抗体のＦａｂ部分が選択的に高分子に結合し、結
合された抗体の抗原に対する結合量は理論値のわずか
１０〜３０％にすぎなかった。
（本発明が解決しようとしている課題）本発明の目的は
、前記従来の高分子と抗体の結合方法の欠点を克服して
抗原に対する結合能を充分に有する高分子と抗体の結合
方法を提供することにある。
、前記従来の高分子と抗体の結合方法の欠点を克服して
抗原に対する結合能を充分に有する高分子と抗体の結合
方法を提供することにある。
（課題を解決するための手段及び作用）本発明者らは、
これらの課題を解決すべく鋭意検討した結果、活性化さ
れた高分子と抗体とを特定の溶液中で反応させることに
より、抗原に対する結合能を充分に有する高分子と抗体
の結合がなされることを見出し、本発明を完成させるに
至った。
これらの課題を解決すべく鋭意検討した結果、活性化さ
れた高分子と抗体とを特定の溶液中で反応させることに
より、抗原に対する結合能を充分に有する高分子と抗体
の結合がなされることを見出し、本発明を完成させるに
至った。
すなわち、本発明は、抗体中のアミノ基又はチオール基
と共有結合するように活性化された高分子と抗体とを０
．５Ｍ以上のリン酸ナトリウム，リン酸カリウム，硫酸
ナトリウム又は硫酸アンモニウム溶液中で反応させるこ
とを要旨とする抗体の結合方法である。
と共有結合するように活性化された高分子と抗体とを０
．５Ｍ以上のリン酸ナトリウム，リン酸カリウム，硫酸
ナトリウム又は硫酸アンモニウム溶液中で反応させるこ
とを要旨とする抗体の結合方法である。
以下本発明をさらに説明する。
本発明の高分子としては、水酸基，カルボキシル基，ア
ミノ基等の官能性化学基を有する重合体（ポリビニルア
ルコール，ポリヒドロキシアルキルメタクリレート，セ
ルロース，アガロース．ポリアクリルアミド，シリカゲ
ル，ガラス等）を用い、活性化する。
ミノ基等の官能性化学基を有する重合体（ポリビニルア
ルコール，ポリヒドロキシアルキルメタクリレート，セ
ルロース，アガロース．ポリアクリルアミド，シリカゲ
ル，ガラス等）を用い、活性化する。
活性化方法はシアノゲンハライド活性化２ トレシルク
ロライド活性化，ビスエボキシド活性化，エビクロルヒ
ドリン活性化，カルボニルジイミダゾール活性化，グル
タルアルデヒド活性化等抗体中のアミノ基又はチオール
基と反応すればいずれの方法でもよい。
ロライド活性化，ビスエボキシド活性化，エビクロルヒ
ドリン活性化，カルボニルジイミダゾール活性化，グル
タルアルデヒド活性化等抗体中のアミノ基又はチオール
基と反応すればいずれの方法でもよい。
活性化された高分子と抗体との反応は、０． ５Ｍ以
上のリン酸カリウム，リン酸ナトリウム，硫酸ナトリウ
ム又は硫酸アンモニウム溶液中で行わなければならない
。溶液濃度の好ましい範囲は０．５Ｍ以上２，ＯＭ以下
である。
上のリン酸カリウム，リン酸ナトリウム，硫酸ナトリウ
ム又は硫酸アンモニウム溶液中で行わなければならない
。溶液濃度の好ましい範囲は０．５Ｍ以上２，ＯＭ以下
である。
結合される抗体は、モノクローナル抗体，ポリクロナー
ル抗体（抗血清，ＩｇＧ画分，アフィニティ精製品）等
いずれでもよい。
ル抗体（抗血清，ＩｇＧ画分，アフィニティ精製品）等
いずれでもよい。
反応温度は４〜２５℃で反応時間は４〜２４時間である
。
。
（発明の効果）
本発明方法によれば、従来法の如く、結合された抗体の
抗原に対する結合量の理論値を１０〜３０％から５０〜
８０％へと大巾に増加させることができる効果を奏する
ものである。
抗原に対する結合量の理論値を１０〜３０％から５０〜
８０％へと大巾に増加させることができる効果を奏する
ものである。
（実施例）
以下本発明を実施例により説明するが、本発明はこれら
にのみ限定されるものではない。
にのみ限定されるものではない。
実施例Ｉ
ＴＳＫｇｅｌ Ｔｒｅｓｙｌ−５Ｐｗ（｝レシルクロ
ライドで活性化された多孔質樹脂、東ソー側）０．５ｇ
に抗ヒトアルブミン抗体（ヤギ）２．５■を含む１．０
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を４ ｍｌ加え
、４℃でａｌ６時間反応させ抗ヒトアルブミン抗体を結
合させた樹脂を得た。得られた樹脂を内径５ｍ＋ｅ，長
さ１ ｃｍのステンレスカラムに充てんし０．１Ｍリン
酸緩衝液中（ｐＨ７．４）でヒトアルブミンに対する結
合容量を調べた。ヒトアルブミンの結合量は、１．７ｓ
＋ｇ／ｍｌｇｅｌの，値が得られたが、これは加えた抗
体の７６％が有効に樹脂と結合していることを示す。
ライドで活性化された多孔質樹脂、東ソー側）０．５ｇ
に抗ヒトアルブミン抗体（ヤギ）２．５■を含む１．０
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を４ ｍｌ加え
、４℃でａｌ６時間反応させ抗ヒトアルブミン抗体を結
合させた樹脂を得た。得られた樹脂を内径５ｍ＋ｅ，長
さ１ ｃｍのステンレスカラムに充てんし０．１Ｍリン
酸緩衝液中（ｐＨ７．４）でヒトアルブミンに対する結
合容量を調べた。ヒトアルブミンの結合量は、１．７ｓ
＋ｇ／ｍｌｇｅｌの，値が得られたが、これは加えた抗
体の７６％が有効に樹脂と結合していることを示す。
実施例２
Ｔｒｅｓｙｌ−５Ｐｗ Ｏ．５ｇに抗ヒトアルブミン
抗体５．０■を、１．０Ｍ硫酸アンモニウムを含む５０
ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）４ｍｌ中で
２５℃，８時間反応させた。抗体の固定化量は、ゲル１
ｍｌ当り１．８ｍｇでヒトアルブミンの結合量は、ゲル
１ｍｌ当り１．４Ｉａｇであった。この値は、固定化さ
れた抗体の８８％が有効であることを示す。
抗体５．０■を、１．０Ｍ硫酸アンモニウムを含む５０
ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）４ｍｌ中で
２５℃，８時間反応させた。抗体の固定化量は、ゲル１
ｍｌ当り１．８ｍｇでヒトアルブミンの結合量は、ゲル
１ｍｌ当り１．４Ｉａｇであった。この値は、固定化さ
れた抗体の８８％が有効であることを示す。
比較例Ｉ
Ｔｒｅｓｙｌ−５Ｐｗ Ｏ．５ｇに抗ヒトアルブミン
抗体５．０■を、５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（
ｐ Ｈ ８ ． ０ ） ４ ｍｌ中で２５℃，８時
間反応させた。抗体の固定化量は、ゲル１ ｍｌ当り１
． ２■でヒトアルブミンの結合量は、 ゲル１ ｍｌ 当りＯ． ３■であった。
抗体５．０■を、５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（
ｐ Ｈ ８ ． ０ ） ４ ｍｌ中で２５℃，８時
間反応させた。抗体の固定化量は、ゲル１ ｍｌ当り１
． ２■でヒトアルブミンの結合量は、 ゲル１ ｍｌ 当りＯ． ３■であった。
この値は、
固定化された
抗体の
３
０
％が有効であることを示す。
Claims (1)
- 抗体中のアミノ基又はチオール基と共有結合するよう活
性化された高分子と抗体とを０．５Ｍ以上のリン酸カリ
ウム、リン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム又はアンモニ
ウム溶液中で反応させることを特徴とする抗体の結合方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1307510A JPH03169899A (ja) | 1989-11-29 | 1989-11-29 | 高分子に抗体を結合させる方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1307510A JPH03169899A (ja) | 1989-11-29 | 1989-11-29 | 高分子に抗体を結合させる方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03169899A true JPH03169899A (ja) | 1991-07-23 |
Family
ID=17969945
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1307510A Pending JPH03169899A (ja) | 1989-11-29 | 1989-11-29 | 高分子に抗体を結合させる方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03169899A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009229351A (ja) * | 2008-03-25 | 2009-10-08 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 生理活性物質の検出方法および測定キット |
-
1989
- 1989-11-29 JP JP1307510A patent/JPH03169899A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009229351A (ja) * | 2008-03-25 | 2009-10-08 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 生理活性物質の検出方法および測定キット |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4704366A (en) | Process for binding IgG to protein A | |
| JP2554848B2 (ja) | Ｖｉｉｉ：ｃ製剤 | |
| US20210047430A1 (en) | Novel affinity chromatography media for removal of anti-a and/or anti-b antibodies | |
| US5147537A (en) | Carrier for affinity chromatography immobilized with antibodies | |
| US4088746A (en) | Radioimmunoassay for thyroid-stimulating hormone (TSH) | |
| JPH04505857A (ja) | Ｃ反応性蛋白質に対するモノクローナル抗体 | |
| JPH01114758A (ja) | パパインを含まない抗体フラグメント調製物の製造方法 | |
| JPS5853757A (ja) | 免疫アフイニテイクロマトグラフイ−用吸着体及びその製法 | |
| US5112952A (en) | Composition and method for isolation and purification of Immunoglobulin M | |
| BRPI0708451A2 (pt) | adsorventes para purificação de proteìnas | |
| JPH0521510B2 (ja) | ||
| Babashak et al. | Use of avidin-coated glass beads as a support for high-performance immunoaffinity chromatography | |
| US4264449A (en) | Antibody-specific solid phase immunoadsorbent, preparation thereof, and antibody purification therewith | |
| US4232004A (en) | Antibody-specific solid phase immunoadsorbent, preparation thereof, and antibody purification therewith | |
| JPH03169899A (ja) | 高分子に抗体を結合させる方法 | |
| Catty et al. | The application of cellulose carbonate to the preparation of water-insoluble immunoadsorbents used in the purification of antibodies to immunoglobulins | |
| JP2961986B2 (ja) | ポリクローナル抗体の分離精製方法 | |
| Margel | Affinity separation with polyaldehyde microsphere beads | |
| JP3237923B2 (ja) | 人工標準及び対照血清およびその製法 | |
| US4762787A (en) | Anti-human IGM immunoadsorbent and process for producing said immunoadsorbent | |
| JPS6155415B2 (ja) | ||
| US4942136A (en) | Method for production of fluorescence-labeled Fab' | |
| JP2826965B2 (ja) | 免疫吸着体とその製造法 | |
| RU2027192C1 (ru) | Способ очистки крови от ревматоидного фактора | |
| SU1158029A3 (ru) | Способ количественного определени трийодтиронина |