BRPI0708451A2 - adsorventes para purificação de proteìnas - Google Patents

Abstract

ADSORVENTES PARA PURIFICAçAO DE PROTEìNA. Uso de um adsorvente de afinidade para separação, remoção, isolamento, purificação, caracterização, identificação ou quantificação de um material proteináceo, em que o adsorvente de afinidade é um composto da fórmula (III) em que R~ 1~ é H, alquila, arila, hidroxialquila, ciclohexila, amino ou um grupo heterocíclico, que é opcionalmente substituído com um ou mais entre alquila, arila, alcóxi, arilóxi, acilóxi, acilamino, amino, OH, CO~2~H, sulfonila, carbamonila, sulfamoíla, alquilsulfonila e halogênio; um X é N e o outro é N, C-Cl ou C-CN; Y é O, S ou NR~2~; Z é O, S ou NR~ 3~; R~ 2~ e R~ 3~ são cada um H, alquila, hidroxialquila, benzila ou <225>-feniletila; Q é benzeno, naftaleno, benzotiazol, benzoxazol, 1-fenilpirazol, indazol ou benzimidazol; R~ 4~, R~ 5~ e R~ 6~ são cada um H, OH, alquíla, arila, heterocíclico, alcóxi, arílóxi, amíno, acilóxi, acílamino, CO~ 2~H, ácido sulfónico, carbamoila, sulfamoila, alquilsulfonila ou halogênio, ou dois ou mais de R~ 4~, R~ 5~ e R~ 6~ são ligados para formar uma estxctura cíclica; U e V são grupos alquileno de cadeia reta C~ 1-10~ iguais ou diferentes, opcíonalmente substituidos por um ou mais entre hidroxíla, alquíla, arila, hidroxialquila, <225>-feniletiia e halogênio; e A é uma matriz de suporte opcíonaimente ligada ao anel contendo X por um espaçador.

Description

ADSORVENTES PARA PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNA

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a compostos e seuuso como ligantes de afinidade para purificação deproteína.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Anticorpos são glicoproteínas de imunoglobuliriatendo uma unidade básica de uma estrutura de monômero. Omonômero é uma proteína no formato de Y que consiste emquatro cadeias de polipeptídeos, duas das quais são cadeiaspesadas idênticas e duas são cadeias leves idênticasconectadas por pontes de dissulfeto. Há cinco tiposdiferentes de cadeia pesada (γ, μ, α, ε e δ) que distinguemas classes de imunoglobulina (IgG, IgM, IgA, IgD e IgE,respectivamente). Há também dois tipos diferentes de cadeialeve (λ e κ) que resultam de produtos de gene diferentes.

IgG (uma imunoglobulina monomérica deaproximadamente 150 kD em tamanho) provê imunidade baseadaem anticorpo contra patógenos de invasão e, devido àelevada especificidade que IgG tem em direção a antígenosespecíficos dentro do corpo, é o reagente mais comumenteutilizado em diagnóstico clínico e de pesquisa imunológica.

Anticorpos monoclonais (aqui denominados Mabs)são anticorpos que têm especificidade idêntica em direção aum antígeno único e são gerados a partir de uma linhagem decélulas que foi produzida a partir de uma célula clonadaúnica. Mabs constituem o setor de crescimento mais rápidona indústria biofarmacêutica onde se estima que as vendasatingirão $30 bilhões (US) até 2010. Os títulos deanticorpo a partir de cultura de células mamíferascontinuaram a se aperfeiçoar nos últimos 20 anos eprocessos posteriores alternativos e adsorventes decromatografia são necessários para resolver os obstáculosde processo no processamento de Mabs.

Fragmentos de anticorpo (partes de moléculas deanticorpo inteiras) oferecem várias vantagens em relação aanticorpos inteiros. São mais fáceis e mais produtivos emtermos de custo para fabricar, têm menos efeitos colateraisem pacientes, por reduzir o risco de liberação de citocinae sua toxicidade associada, devido à ausência da região Fc(cadeia pesada), e podem ser modificados para incluircargas úteis terapêuticas. Há vários tipos de fragmentos deanticorpo que são domínios de IgG preparados por digestãode enzima endopeptidase específica ou que foramgeneticamente construídos em linhagens de células. Essesincluem fragmentos monovalentes como Fab', Fab e scFv;fragmentos bivalentes como diacorpos e minicorpos deF(ab')2; e fragmentos multivalentes como triacorpos etetracorpos.

Muitos produtos de fragmento de anticorpo estãoem desenvolvimento para uso como produtos terapêuticos oude diagnóstico. Espera-se que fragmentos de anticorporecombinantes tenham uma fatia significativa do mercado dediagnóstico de $6 bilhões (US) por ano, a partir deimunoensaios in vitro para aplicações em imagiologia decoágulo e tumor in vivo (Holliger, P. & Hudson P.J., Nat.Biotech. 23 (9,·; 2005) 1126-1136).

Muitos produtos de fragmento, de anticorpo não têmum sítio de ligação-Α de proteína e, portanto, ao contráriode anticorpos de cadeia completa, não podem ser purificadospor cromatografia de afinidade de proteína A. Na maioriados casos, técnicas de cromatografia convencionais sãoutilizadas paira purificar fragmentos de anticorpo. AProteína L, uma proteína com um peso molecular de 35000Daltons derivada de uma espécie bacteriana dePeptostreptococcus magnus, é conhecida por ligar-se acadeias leves de anticorpo e foi pesquisada em relação àpurificação de alguns fragmentos de anticorpo, porém não éconsiderada como sendo produtiva em termos de custo e nãoestá disponível em quantidades comerciais.

0 WO 97/10887 revela compostos baseados emtriazina, úteis como adsorventes de afinidade, da fórmula I

<formula>formula see original document page 4</formula>

em que R1 é H, alquila, hidroxialquila, ciclohexila, NH2,fenila, naftila, 1-fenilpirazol, indazol, benzotiazol,benzoxazol ou benzimidazol, qualquer um desses gruposaromáticos pode ser substituído com um ou mais entrealquila, alcóxi, acilóxi, acilamino, amino, NH2, OH, CO2H,sulfonila, carbamoíla, sulfamoíla, alquil sulfonila ehalogênio;

um X é N e o outro é N, C-Cl ou C-CN;

Y é 0, S ou NR2;

Z é O, S ou NR3;

R2 e R3 são cada um H, alquila, hidroxialquila,benzila ou β-feniletila;

Q é benzeno, naftaleno, benzotiazol, benzoxazol,1-fenilpirazol, indazol ou benzimidazol;

R4, R5 e R6 são cada um Η, 0H, alquila, alcóxi,amino, NH2, acilóxi, acilamino, CO2H, ácido sulfônico,carbamoíla, sulfamoíla, alquilsulfonila ou halogênio;

η é 0 a 6 ;

ρ é 0 a 20; e

A é uma matriz de suporte opcionalmente ligada aoanel contendo X por um espaçador.Os compostos da fórmula I são revelados comotendo afinidade para proteínas como imunoglobulinas,insulina, hormônio de crescimento humano ou fator VII.

Os compostos de estrutura relacionada sãorevelados em WO 00/67900 e WO 03/097112. Eles possuemafinidades por endotoxinas.

Certos compostos baseados em triazina reveladosem WO 97/10887 têm afinidade por imunoglobulinas. Umexemplo de um composto que mostra tal afinidade é umcomposto da estrutura II

<formula>formula see original document page 5</formula>

Compostos como II são capazes de removerimunoglobulinas especificamente a partir de misturascomplexas ou insumo como plasma humano.

Outro tipo de insumo comumente encontrado ésobrenadante de cultura de célula produzidaindustrialmente, no qual anticorpos monoclonais estãopresentes em concentrações de até 5 g/l de sobrenadante.Compostos como II também podem ser úteis para remoçãoespecífica de anticorpo monoclonal.' a partir dessasmisturas, embora seu desempenho seja conhecido como estandocomprometido pela presença de aditivos de cultura decélulas como Pluronic F-68.

O Pluronic F-68 é um agente anti-espumaçãocomumente utilizado em cultura de células de mamíferos. Eleé um copolímero em blocos de polioxietileno epolioxipropileno, e tem um peso molecular deaproximadamente 8000 Da. O Pluronic F-68 é utilizado paraproteger células contra cisalhamento e dano por bolha dear, e é tipicamente utilizado em uma quantidade de 1 g/L emsobrenadantes de cultura de célula. Sua presença podereduzir ou abolir a capacidade de compostos, como II, deremover imunoglobulinas a partir de insumos, que representaum obstáculo considerável para o uso de tais ligantes paracaptura direta de anticorpos monoclonais a partir de meiosde cultura de células de mamíferos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Surpreendentemente, verificou-se que certoscompostos, muitos dos quais são novos, são úteis parapurificação de imunoglobulinas baseada em afinidade,incluindo, porém não limitado a, anticorpos monoclonais efragmentos de anticorpo, mesmo na presença de compostoscomo Pluronic F-68. Os compostos para uso na invenção sãoda fórmula III:

<formula>formula see original document page 6</formula>

em que R1 é H, alquila, arila, hidroxialquila, ciclohexila,amino ou um grupo heterocíclico, por exemplo, naftila, 1-fenilpirazol, indazol, benzotiazcl, benzoxazol oubenzimidazol, qualquer um desses grupos aromáticos podecompreender um anel fundido adicional e pode sersubstituído com um ou mais entre alquila, arila, alcóxi,arilóxi, acilóxi, acilamino, amino, OH, CO2H, sulfonila,carbamoíla, sulfamoíla, alquilsulfonila e halogênio;

um X é N e o outro é N, C-Cl ou C-CN;

Y é 0, S ou NR2;

Z é 0, S ou NR3;

R2 e R3 são cada um H, alquila, hidroxialquila,benzila ou β-feniletila;

Q é benzeno, naftaleno, benzotiazol, benzoxazol,1-fenilpirazol, indazol ou benzimidazol;

R4, R5 e R6 são cada um Η, OH, alquila, arila,heterociclico, alcóxi, arilóxi, amino, acilóxi, acilamino,CO2H, ácido sulfônico, carbamoila, sulfamoíla, alquilsulfonila ou halogênio, ou dois ou mais de R4, R5 e R6 sãoligados para formar uma estrutura cíclica;

UeV são grupos de alquileno de cadeia reta C1-10iguais ou diferentes, opcionalmente substituídos por um oumais entre hidroxila, alquila, arila, hidroxialquila, β-feniletila e halogênio, como CHOH; e

A é uma matriz de suporte opcionalmente ligada aoanel contendo X por um espaçador.

Além disso, os compostos da invenção incluem osligantes correspondentes, nos quais A é substituído por umgrupo funcional, ligado direta ou indiretamente ao aneltriazina, que ' pode ser imobilizado em uma matriz desuporte. Os termos "ligante" e "adsorvente" podem serutilizados de forma intercambiável, abaixo.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Os WO 97/10887, WO 00/67900 e WO 03/097112revelam como bibliotecas de combinação de ligantes podemser construídas em um suporte sólido. Suas revelações,incluindo exemplos de modalidades e procedimentos comuns àpresente invenção, são incorporadas aqui por referência.

Durante a classificação de um conjunto dessas bibliotecasde combinação com um insumo contendo albumina,imunoglobulinas e Pluronic F-68, um número de ligantes foiidentificado como sendo capaz de se ligar seletivamente eeluir imunoglobulinas.

Os compostos da fórmula III, para uso nainvenção, podem ser preparados por procedimentos conhecidospor aqueles versados na técnica. Tais procedimentos sãodescritos nas 3 publicações PCT identificadas acima; podemser facilmente adaptadas à preparação de novos compostos.

Em compostos para uso na invenção, prefere-se queRi e/ou QR4R5R6 seja ou inclua uma estrutura cíclica;qualquer uma ou cada estrutura cíclica terft,preferivelmente, um substituinte OH ou SO3H.

Preferivelmente, cada X é N. Além disso, prefere-se que Ue/ou V seja substituído, por exemplo, é CHOH. Taiscompostos substituídos são novos.

Adsorventes ou ligantes de ligação deimunoglobulina preferidos da invenção são das fórmulas IV-XIII:

<formula>formula see original document page 8</formula><formula>formula see original document page 9</formula><formula>formula see original document page 10</formula>

Os ligantes de ligação de imunoglobulinadescritos aqui são úteis para a purificação deimunoglobulinas a partir de misturas complexas incluindo,porém não limitadas a, plasma humano e sobrenadantes defermentação recombinante. Essa utilidade é demonstradaabaixo no exemplo 2, por experimentos de cromatografiautilizando vários insumos.

O termo "imunoglobulina" é utilizado aqui paradescrever as próprias imunoglobulinas intactas, incluindoIgG, IgA, IgM e IgE, e também análogos que têm ascaracterísticas funcionais ou estruturais deimunoglobulinas, por exemplo, em termos de afinidade com umcomposto dado descrito aqui. Desse modo, o analito pode seruma proteína que é um fragmento funcional de umaimunoglobulina, ou um análogo estrutural tendo um, mais outodos dos mesmos sítios de ligação, ou uma proteína defusão.

O agente de ligação opcional pode compreenderqualquer meio de fixar ligantes da invenção a matrizes desuporte e fornecer um meio de espaçar o ligante a partir ciasuperfície da matriz de suporte. A matriz de suporte podecompreender qualquer material, solúvel ou insolúvel,particulado ou não, incluindo fibras e membranas, poroso ounão. Provê um meio conveniente de separar ligantes dainvenção a partir de solutos em uma solução de contato. Osexemplos de matriz de suporte e agente de ligação opcional

A incluem matrizes de carboidrato como agarose, celulose,dextrano, amido, alginato ou carragenana; matrizes depolímero sintético como poliestireno, copolímeros deestireno-divinilbenzeno, polimetacrilatos, (por exemplo,poli(hidroxietilmetacrilato), álcool polivinílico,poliamidas ou perfluorocarbonos; matrizes inorgânicas comovidro, sílica ou óxidos de metal; e materiais compósitos).

Os exemplos que se seguem ilustram a invenção.Exemplo 1 - síntese de adsorventes

A síntese de adsorventes do tipo descrito éexplicada em WO 97/10887, WO 00/67900 e WO 03/097112. Asíntese de Adsorvente XI é descrita e é típica.

6% de gel de agarose PuraBead reticulado (650 gassentado em água RO) foi formado em pasta com água RO(650 mL), 10 M de hidróxido de sódio (NaOH) (88 mL) eepiclorohidrina (124 mL). A pasta foi agitada durante 19horas. Além disso, 10 M de hidróxido de sódio (NaOH)(22 mL), e epiclorohidrina (37 mL) foram, então,adicionados e a pasta agitada durante 1,5 hora. Após umaamostra ser tirada para análise, a pasta foi filtrada, aseguir lavada cjom água RO (12 χ 1 L).. A análise em relaçãoa grupos de epóxi mostrou que o gel foi derivatizado ccm21,6 μmol de grupos de epóxi por g de gel assentado.

O gel foi drenado antes gue água RO (780 mL) e0,88 solução de amônia de gravidade especifica (200 mL)fossem adicionados. A mistura foi agitada e aguecida a40°C, a seguir agitada nessa temperatura durante 16 horas,.Após uma amostra ser tirada para análise, a pasta foifiltrada e, então, lavada com 12 χ 1 L de água RO(12 χ 1 L). A análise de TNBS em relação a grupos de aminamostrou que o gel foi derivatizado com 20,8 μmol de gruposde amina por g de gel assentado.

Gel aminado assentado (475 g) foi formado empasta em 1 M de fosfato de potássio (475 mL) e deixadoassentar. 1 M de fosfato de potássio (140 mL) foi, então,adicionado, a mistura agitada vigorosamente e acetona(70 mL) adicionada. A mistura foi resfriada a 0°C em umbanho de sal de gelo, antes de cloreto cianúrico (11,9 g)em acetona fria (120 mL) ser adicionado em uma porção. Apasta foi agitada durante 1 hora a 0-4°C, antes de serdrenada, a seguir lavada com 50% v/v de acetona aquosa(5 χ 500 mL) , água RO (5 χ 500 mL) com 50% v/v de acetonaaquosa (5 χ 500 mL) , e água RO (10 χ 500 mL) . A análiserevelou a fixação de 25 μmol de grupos de diclorotriazinapor g de gel assentado.

A agarose diclorotirazinila (50 g) foi formada empasta em água RO (55 mL). Cloridrato de norfenilefrina(1,99 g) foi dissolvido em água RO (15 mL) , 10 M NaOH(0,95 mL) foi adicionado, e a mistura foi resfriada emgelo, antes da adição à agarose diclorotriazinila. Amistura foi reagida a 60°C durante 19 horas. O gel foilavado com 50% DMF (5 χ 100 mL) , água RO (5 χ 100 mL) ,0,1 M HCl (5 χ 100 mL), 30% de IPA/0,2 M NaOH (5 χ 100 mL) ,água RO (10 χ 100 mL) e etanol aquoso a 20% (3 χ 100 mL)antes da armazenagem na sala fria em 20% de etanol aquoso.

Exemplo 2- cromatografia

Experimentos de cromatografia foram realizados comcada um dos adsorventes tabulados na Tabela 1. Para todos osexperimentos uma coluna com 1 cm de diâmetro foi utilizadacom uma altura de leito de 5,5 cm e volume de coluna (CV) de4,3 mL com uma taxa de fluxo linear de 300 cm/h. 0adsorvente foi inicialmente equilibrado com 10 CV desolução salina tamponada com fosfato (PBS) , pH 7,4 e, então,carregado com IgG puro, insumo de IgG 1 (1 g/L de IgG, 1 g/Lde Pluronic F-68 e outras proteínas para simular sobrenadantede cultura de células) ou 2 (1 g/L de IgG, 1 g/L de

Pluronic F-68 com 5% de soro de bezerro fetal) ou insumo deIgGi de murino até uma concentração de 30 g/L de adsorvente. 0adsorvente foi, então, lavado com 10 CV de PBS, pH 7,4, antesdo IgG ser eluído com 5 CV de 50 mM de ácido cítrico, pH 3,5.0 adsorvente, então, foi submetido a uma limpeza no local(CIP) com 5 CV de 0.5 M de hidróxido de sódio seguido porreequilíbrio do.adsorvente com 7 CV de PBS, pH 7,4.

Subseqüente ao experimento de cromatografia, o teorde IgG da carga, lavagem pós-carga, eluição e frações de CIPforam avaliados por nefelometria, A280, HPLC ou GPC, paraavaliar as capacidades de ligação e eluição e análise PAGESDS para avaliar a pureza. As capacidades de eluição eligação são resumidas na tabela 1.

A alimentação de IgG puro continha 1 g/L de IgGpoliclonal em PBS, pH 7,4 na presença ou ausência de 1 g/L dePluronic F-68. Insumo de simulação 1 continha 1 g/L de IgGpoliclonal, 1 g/L de mioglobina esquelética de cavalo, 5 g/Lde albumina de .soro humano e 1 g/L de Pluronic F-68 em meiode cultura de células CHO. Insumo de simulação 2 continha 1g/L de IgG policlonal, 5% de soro bovino fetal e 1 g/L dePluronic F-68 em meio de cultura de célula CHO.<table>table see original document page 14</column></row><table>O desempenho cromatográfico de adsorvente XI foiadicionalmente investigado, para avaliar a capacidade depurificação do material. Os experimentos foram concluídosutilizando uma coluna com 1 cm de diâmetro com uma alturade leito de 2,5 cm e volume de coluna (CV) de 2,0 mL e umataxa de fluxo linear de 50 cm/h (3 minutos de tempo deresidência). O adsorvente foi inicialmente equilibrado com10 CV de solução salina tamponada com fosfato (PBS),pH 7,4. 60 mL de IgGi em um sobrenadante de cultura decélula CHO (ovário de hamster chinês) foi carregado sobre acoluna a uma concentração de 54 g/L de adsorvente. 0adsorvente foi, então, lavado com 10 CV de PBS, pH 7,4,antes do IgG ser eluído com 5 CV de 50 mM de citrato desódio em pH 3,0. O adsorvente, então, foi submetido a umalavagem no local (CIP) com 5 CV de 0,5 M de hidróxido desódio seguido por reequilíbrio do adsorvente com 7 CV c|ePBS, pH 7,4. Frações (2 mL) foram coletadas durante toda acromatografia e analisadas em relação ao teor de IgG (HPLCde proteína A) , teor de DNA (análise Picogreen) e proteínatotal (ensaio de proteína total Bradford). 0 perfil deruptura de IgGi para adsorvente XI mostra a capacidade deligação como sendo 21,6 g/L e a capacidade de eluição comosendo 20,9 g/L. Utilizando cromatografia de permeação degel, a pureza do IgG eluído foi determinada como sendo92, 8% e o adsorvente XI tem uma tolerância de Iog 2 de DNA.

Experimentos de cromatografia foram concluídoscom adsorvente XI utilizando fragmentos de anticorpopreparados por digestão de enzima (pepsina). A pepsina éuma endopeptidase não específica que é somente ativa em pHácido e é irreversivelmente desnaturada em pH alcalino ouneutro. A digestão de pepsina resulta na geração de umfragmento F(ab')2 e vários peptídeos pequenos do fragmentoFc. Fragmentos de anticorpos policlonais humano, ovino ebovino (população misturada de anticorpos) foram preparadospelo contato de IgG com pepsina por 1 hora a 37 0C em pH4,0. A digestão foi parada pelo ajuste do pH acima de 7,0,e os fragmentos F(ab')2 foram separados por filtração emgel.

0 desempenho cromatográfico do adsorvente XI foiinvestigado para avaliar a capacidade de purificação domaterial para fragmentos de anticorpo. Os experimentosforam concluídos utilizando uma coluna com 1 cm de diâmetrocom uma altura de leito de 2,5 cm e volume de coluna (CV)de 2,0 mL com uma taxa de fluxo linear de 50 cm/h (tempo deresidência de 3 minutos). 0 adsorvente foi inicialmenteequilibrado com 10 CV de solução salina tamponada comfosfato (PBS) , pH 7,4. Aproximadamente 20 mg de fragmentosde F(ab')2 foram carregados por irçL de adsorvente. Oadsorvente foi, então, lavado com 10 CV de PBS, pH 7,4,antes dos fragmentos serem eluídos com 5 CV de 50 mM decitrato de sódio em pH 3,0. O adsorvente foi submetidoentão a lavagem no local (CIP) com'. 5 CV de 0,5 M cjehidróxido de sódio seguido por reequilíbrio do adsorventecom 7 CV de PBS, pH 7,4. 0 controle para todos osexperimentos foi adsorvente de Proteína L (utilizando asmesmas condições experimentais como para adsorvente XI) .

Cada fração a partir da coluna de cromatografia foicoletada e analisada utilizando técnicas de Western blot.Essa técnica indicou que o adsorvente XI ligou tanto cadeialeve kappa e lambda humana, como fragmentosde F(ab')2 ovinoe bovino; a proteína L liga somente cadeia leve kappahumana e não liga fragmentos ovino e bovino.

Claims (23)

1. Uso de um adsorvente de afinidade paraseparação, remoção, isolamento, purificação,caracterização, identificação ou quantificação de ummaterial proteináceo, em que o adsorvente de afinidade é umcomposto da fórmula III:<formula>formula see original document page 17</formula>em que R1 é H, alquila, arila, hidroxialquila, ciclohexila,amino ou um grupo heterociclico, que é opcionalmentesubstituído com um ou mais entre alquila, arila, alcóxi,arilóxi, acilóxi, acilamino, amino, OH, CO2H, sulfonila,carbamoíla, sulfamoíla, alquil sulfonila e halogênio;um X é N e o outro é N, C-Cl ou C-CN;Y é 0, S ou NR2;Zé 0, S ou NR3;R2 e R3 são cada um H, alquila, hidroxialquila,benzila ou β-feniletila;Q é benzeno, naftaleno, benzotiazol, benzoxazol,-1-fenilpirazol, indazol ou benzimidazol;FU, R5 e R6 são cada um Η, OH, alquila, arila,heterociclico, alcóxi, arilóxi, amino, acilóxi, acilamino,CO2H, ácido sulfônico, carbamoíla, sulfamoíla, alquilsulfonila ou halogênio, ou dois ou mais de R4, R5 e R6 sãoligados para formar uma estrutura cíclica;U e V são grupos de alquileno de cadeia reta Ci_i0iguais ou diferentes, opcionalmente substituídos por um oumais entre hidroxila, alquila, arila, hidroxialquila, β-feniletila e halogênio; eA é uma matriz de suporte opcionalmente ligada aoanel contendo X por um espaçador.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em queR1 e/ou QR4R5R6 é ou inclui uma estrutura cíclica.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 2, em qúequalquer uma ou cada estrutura cíclica tem um substituinteOH ou SO3H.

4. Uso, de acordo com qualquer reivindicaçãoanterior, em que qualquer ou cada de U e V é CHOH.

5. Uso, de acordo com qualquer reivindicaçãoanterior, em que cada X é N.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em que oadsorvente é da fórmula III.

7. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em que oadsorvente é da fórmula IV.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em que oadsorvente é da fórmula V.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em que oadsorvente é da fórmula VI.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em queo adsorvente é da fórmula VII.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em queo adsorvente é da fórmula VIII.

12. U so, de acordo com a reivindicação 1, em queo adsorvente é da fórmula IX.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em queo adsorvente é da fórmula X.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 1, em queo adsorvente é da fórmula XI.

15. Uso, de acordo com qualquer reivindicaçãoanterior, em que o material proteináceo é umaimunoglobulina, um fragmento de imunoglobulina ou umaproteína.

16. Uso, de acordo com a reivindicação 15, em queo material é um anticorpo monoclonal.

17. Uso, de acordo com a reivindicação 15, em queo material é um fragmento de imunoglobulina selecionadoentre fragmentos de Fab, Fab', F(ab')2, scFV, diacorpo,minicorpo, tricorpo ou tetracorpo.

18. Uso, de acordo com qualquer reivindicaçãoanterior, em que o material proteináceo está em cultura decélula.

19. Uso, de acordo com qualquer reivindicaçãoanterior, em que o material proteináceo está em combinaçãocom um agente anti-espumação.

20. Uso, de acordo com a reivindicação 19, em queo agente anti-espumação é um copolimero em bloco depolioxietileno e polioxipropileno.

21. Composto da fórmula III como definido emqualquer uma das reivindicações 1 a 14, em que U e/ou V ésubstituído.

22. Composto, de acordo com a reivindicação 21,em que o substituinte é OH, arila ou halogênio.

23. Composto, de acordo com a reivindicação 21,em que U e/ou V é CHOH.