JPH03135997A - 心房ナトリウム排泄因子拮抗体 - Google Patents

Abstract

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め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は哺乳類心房ナトリウム排泄因子の拮抗体、その
生理学的に適合しうる塩、該拮抗体を含有する微生物、
該拮抗体およびその塩の製法、かかる拮抗体またはその
塩を含有する医薬製剤、および、特に血圧調節が関与す
る疾病の治療のためのそれらの使用に関する。

心房ナトリウム排泄因子（ＡＮＦ）それ自体はプレプロ
ホルモンとして哺乳類心房で合成され、１２６アミノ酸
のプレホルモンとして顆粒中に貯蔵される。特定の刺激
、例えば心耳の拡張の結果として、その蛋白質は２８ア
ミノ酸（９９−１２６）よりなる生物活性ペプチドにプ
ロセシングされそして血液循環中に分泌される。

ＡＮＦの好ましい標的臓器は腎臓であって、そこでこの
ものは糸球体濾過速度、腎血流およびナトリウム排泄を
増大させ尿量を増加させる。さらに、ＡＮＦはまた血圧
低下に繋がる血管拡張作用も有する。一般的にＡＮＦは
血圧調節機構に影響を与えると考えられている［Ｎｅｅ
ｄｌｅｉｎａｎ、　ＰおよびＧｒｅｅｎｗａｌｄ。

Ｊ、　Ｅ、、　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ　３
１４　：　８２８　（１９８６）］。

他方ＡＮＰは、種々のレベルで、即ち、レニン分泌低下
、アンギオテンシンにより予め収縮された血管の弛緩、
アンギオテンシン誘導アルドステロン合成の遮断、およ
び、アルドステロン誘導ナトリウム保持に対抗するナト
リウム排泄作用および利尿作用により、レニンーアンギ
オテンシン系の生理学的作用に拮抗する。

今、例えばショック状態のような重症の低血圧および脱
水症状の急性調節に使用できるＡＮＦ拮抗体が発見され
た。

本発明によるＡＮＦ拮抗体はストレプトミセス属、好ま
しくはブラウンシュバイクの西独微生物標本所に１９８
８年８月３０日にブダペスト条約の下ＤＳＭ番号４７７
７および４７７８で寄託されているストレプトミセス科
の微生物から、並びに、そのＡＮＦ拮抗体含有継代培養
物、突然変異体および変種から、これを単離することに
より生産できる。

前記した微生物は、例えば炭素源として澱粉、デキスト
リン、グルコース、Ｄ−マンニトール、リボースまたは
グリセロール、そして窒素源として大豆粉、酵母エキス
またはペプトンを含有する液体培地中で、知られた発酵
方法に従って培養できる（例えばＲｅｈｍ、　Ｈ，Ｊ、
のｒ　ＩｎｄｕｓｔｒｉｅｌｌｅＭｉｋｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｉｅＪ　、　　Ｓｐｒｒｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、　
Ｂｅｒｌｉｎ。

Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８
０を参照）。上記した培地のための塩としては、好まし
くはアンモニウム、マグネシウムまたはカルシウムの塩
、またはこれらの混合物が考えられる。他の発酵条件と
しては、約２０〜３７℃の温度範囲、好気的条件下での
１〜６日間のインキュベーション期間および例えばポリ
プロピレン系のもののような適当な知られた消泡剤があ
げられる。

ＡＮＦ拮抗体は、粗製抽出物、即ち細胞および培地の抽
出物から、または、細胞塊から、または培養濾波から、
当業者の知るペプチド精製法の組合せにより、所定の条
件下で培養された前記微生物から単離できる。ヒト、ウ
シまたはラットのような哺乳類においてかかるＡＮＦ拮
抗体を検出するには、実施例４および５に詳述する方法
の組合せ、または、環状グアノシン−燐酸合成速度低下
の測定またはその他の当業者の知る拮抗体検出方法を使
用できる。

上記した粗製抽出物からのＡＮＦ拮抗体の好ましい精製
方法として考えられるものは、限外濾過、液−液抽出例
えば水と２−ブタノールとの混合液を用いる液−液抽出
、好ましくはＤＥＡＥ−セファロースでの陰イオン交換
クロマトグラフィー−シリカゲルクロマトグラフィー（
逆相も含む）、例えばキレートアフィニティ樹脂、好ま
しくは銅キレート樹脂、特にイミノジ酢酸リガンドを有
する樹脂でのアフィニティークロマトグラフィー、およ
び例えばセファデックスＬ）Ｉ−２０のような変性デキ
ストランでのゲル浸透クロマトグラフィーである。

ＡＮＦ拮抗体は知られたペプチド精製方法を用いて、好
ましくは例えばメタノールのような低級アルコールで抽
出することにより、細胞塊から精製できる。

好ましい実施態様においては、ＡＮＦ拮抗体は、培養濾
波から単離する。このためには、例えば、好ましくはポ
リスチレンを基体とするマクロ細孔性吸着樹脂例えばア
ンバーライトで゛の吸着、好ましくはアガロースを基体
とする例えばＤＩＥＡＥ−セファロースでのイオン交換
クロマトグラフィー、逆相系を含むシリカゲルでのクロ
マトグラフィーおよび、好ましくは金属キレートマトリ
ックスでのアフィニティークロマトグラフィー、ならび
に、２−ブタノールを用いるのが特に好ましい抽出操作
のような、知られた蛋白質またはペプチド精製方法を同
様に用いることができる。

特に好ましい実施態様においては、ＡＮＦ拮抗体を以下
の方法で単離する。ＡＮＦ拮抗体をポリスチレンを基体
とするマクロ細孔性吸着樹脂を用いて培養濾波から分離
しそして水性イソプロパツールを用いてこの樹脂から溶
離させる。次に、このカラムから得られた生物活性溶出
液を、遠心分離、リン酸塩緩衝液での希釈および濾過の
後、ｐ１１７．０で平衡させたＤＥＡＥ−イオン交換カ
ラムに加える。

ＡＮＦ拮抗体の溶離は適当な濃度の塩化ナトリウムを用
いて行なう。このようにして得られた溶出液を、次に逆
相シリカゲルカラムにポンプで送り込む。ここからのＡ
ＮＦ拮抗体の溶離は適量のトリフルオロ酢酸を含有する
水／アセトニトリルの段階的グラジェントを用いて行な
う。この溶出液を水で希釈したものを次に、調製用Ｃ−
１８シリカゲルカラムに加える。このカラムからのＡＮ
Ｆ拮抗体の溶離は水／アセトニトリル直線状グラジェン
トを用いて行う。溶出液をイソプロパツールの存在下に
蒸発させる。残留物をイソプロパツールにとり、リン酸
塩緩衝液／塩化ナトリウムで平衡させた銅キレートゲル
カラム上で分離し、そしてＡＮＦ拮抗体を平衡緩衝液お
よび適当な濃度のイミダゾールを用いて溶離させる。こ
の溶出液を調製用Ｃ−１８ＨＰＬＣシリカゲルカラムに
添加する。適当な濃度のトリフルオロ酢酸の存在下、水
中アセトニトリルの直線状グラジェントを用いてこのカ
ラムからＡＮＦ拮抗体を純粋な形態で溶離できる。

本発明のＡＮＦ拮抗体の特性決定はペプチド化学で一般
的な物理化学的方法を用いて実施できる。

第１図〜第３図は実施例１〜５により単離されたＡＮＦ
拮抗体の詳細なデータを示すものである。

第１図：チオグリセロール中におけるＡＮＦ拮抗体の「
高速原子衝撃」質量スペクトル：　Ｉｌｌ／Ｚ＝１８７
０．９は、組成＋　ＩＣ，。Ｈｚ＋Ｎ＊＋Ｏｚ４＋Ｈ＋
の（Ｍ＋Ｈつピークである。計算された分子量は１８７
０．８であった。

第２図：　ＫＢｒ中のＡＮＦ拮抗体の赤外線スペクトル
第３図：紫外線スペクトル［メタノール中で測定；λ、
、、　□２８０ｎｍ　（ｅ　＝６９２３）］更に、この
ＡＮＦ拮抗体は［ｃＺ］”ｏ＝　＋１２°（ｃ＝０．９
％、メタノール中）の旋光度であることが解った。この
ＡＮＦ拮抗体の分解は約２００°Ｃで起こった。薄層ク
ロマトグラフィー、分析用高圧液体クロマトグラフィー
およびアミノ酸分析による特性決定を既知方法で、そし
て好ましくは実施例３に記載したようにして実施できる
。これらの分析で得られる詳細なデータも実施例３に示
す。

測定されたデータに基づけば、本発明のＡＮＦ拮抗体は
環状ペプチドである。

環状ペプチドは、ペプチド化学で知られた方法、例えば
、溶液中における古典的なペプチド合成法、フラグメン
トの縮合、部分的または完全な固相合成例えばＭｅｒｒ
ｉｆｉｅｌｄのＪ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　
８５：２１４９　（１９６３）記載の方法、そしてその
後の環化により、化学的に合成できる。さらに、かかる
環状ペプチドの直鎖状類似体もまた例えばＭａｎｉａｔ
ｒｉｓ等、　１９８２．　”Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌ
ｏｎｉｎｇ　、　Ｃｏ１ｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ
に記載されるような当業者に知られた組み換えＤＮＡ技
術を用いても調製でき、そして、その後に環化できる。

本発明の別の目的は、ＡＮＦ拮抗活性を有するストレプ
トミセス科より得られるＡＮＦ拮抗体の類似体である。

類似体とは、環状ペプチドの１つまたはそれ以上のアミ
ノ酸が知られた方法で側鎖基上で化学的に修飾されてい
る化金物または、１つまたはそれ以上のアミノ酸がＡＮ
Ｆ拮抗活性を損なうことなく置き換えられるか不在であ
る化合物を指すことが理解されるべきである。かかる類
似体は既に記載のあるペプチド化学の方法または組み換
えＤＮＡ技術、例えば、計画的突然変異誘発により調製
できる。

本発明によるＡＮＦ拮抗体およびその類似体、ならびに
それらの生理学的に適合しうる塩は、医学製剤、主に、
血圧の調節が関与する疾病の治療のための製剤の製造に
使用できる。更に、本発明によるＡＮＦ拮抗体は、その
他の薬学的活性物質と組合せることが望ましいかその必
要がある場合は、知られた方法で慣用の固体または液体
の担体物質を用いて製剤化できる。かかる製剤の投与は
同様の活性および構造を有する既知製剤と同様の通常の
基準を考慮して行なうことができる。

以上、一般的用語を用いて本発明を記載したため、以下
の実施例により本発明をより詳しく説明する、これによ
り本発明が限定されることは全く無い。

実施例１ 発酵 それぞれ、培地６４４（２％全脂大豆粉、２％Ｄ−マン
ニトール；ｐＨを水酸化ナトリウムで７．４に調整後培
地を２０分間１２１　”Ｃで滅菌：１ｍｌ／ｌの濃度の
ポリプロピレングリコールも滅菌前に培地に添加）１０
０ｙｄの入った振盪フラスコ１０本にＤＳＭ番号４７７
８を有するストレプトミセス科の菌の胞子または菌糸体
を接種しそして４８時間３０°Ｃで好気的にインキュベ
ートした。次にこれらの培養物を培地６４４の１０１を
含有する発酵器に植え継ぎ、０．４ｖｖｍで通気、３６
０ｒｐｍで攪拌しながら３０℃で２４時間操作した。

次にこの発酵器から培地６４４の２００１を含有する２
００１生産発酵器に植菌した。これを、通気０．３ｖｖ
ｍ、攪拌６００ｒｐｍで３０℃で９６時間操作した。

この方法で操作した各２００１の発酵物５つを合わせて
、培養濾波からＡＮＦ拮抗体６．１ｇ（実施例４の結合
試験から測定）を得た。

実施例２ ＡＮＦ拮抗体の単離 工程ｌ： 実施例１記載の２００１発酵器発酵器ブロスを吸引濾過
し、培養濾波１３０１を得た。

工　程２： 工程ｌの濾波をサーバクロム（Ｓｅｒｖａｃｈｒｏｍ）
ＸＡＤ　−２（Ｓｅｒｖａ、　Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、
西独、粒径０．３〜０．９　ｒｎｍ）を充填したクロマ
トグラフィーカラム（カラム寸法１５Ｘ５０ａｎ）に毎
時２０１でポンプ送りし、次に水２０ｊ’および１０％
水性イソプロパツール２０１で洗浄した。５０％イソプ
ロパツール２５ｆを用いてＡＮＦ拮抗体を樹脂から溶離
した。溶出液を２０℃で真空下に濃縮し、ＩＩｌの生物
活性濃縮物を得た。次にイソプロパツール１０１’、５
０％イソプロパツールｌＯ１および水３０１で洗浄する
ことにより吸着樹脂を再生させた。

工　程３： 更に精製するために、クロマトグラフィーカラム（カラ
ム寸法１４Ｘ２６ｃｍ）にＤＥＡＥ−セファロースＦＦ
　（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、　Ｌｌｐｐｓａｌａ、スエー
デ：／）４１を充填し、１００ｍＭリン酸ナトリウム緩
衝液（ｐｌ（７，０）１２ｆ、次に、１０ｍＭリン酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ７，０）８１で洗浄した。カラム
は流量毎時４〜５１で操作した。工程２の濃縮物１１を
１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）７１で
希釈し、遠心分離しく３０分、　１０．００Ｏｒｐｍ）
、濾過しくヒダ折り濾紙）そしてカラムにポンプで送っ
た。次にカラムを１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）１６１で洗浄しそしてＡＮＦ拮抗体を１０ｍ
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）、１００ｍＭ
塩化ナトリウム１６１で溶離した。

カラムを１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０
）、１Ｍ塩化ナトリウム８１、次に０．１Ｍ水酸化ナト
リウム溶液８１で洗浄してイオン交換体を再生させた。

工程ｌ〜３にわたる操作を５回行ない、ＡＮＦ拮抗体を
含有する溶出液６２１を得た。

工　程４： 工程３の溶出液６２１をＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
ｓ（Ｅｓｃｈｗｅｇｅ。

西独）製の５ｉｌｉｃａ　ＲＰ−１８を充填したクロマ
トグラフィーカラム（粒径二３２〜６３μｍ；カラム寸
法：３．７Ｘ５８（２）：流量：毎時３．６ｉ７）にポ
ンプで送り込んだ。次にカラムを順次、水１１．Ｏ，１
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（１））１３．０）　８．５
１！および水４１で洗浄した。次にカラムを水／アセト
ニトリルの段階的グラジェント、５　ｍＭ　）リフルオ
ロ酢酸、で洗浄すると、ＡＮＦ拮抗体が４０〜６０％ア
セトニトリルで溶離され、５．７１の溶出液が収集され
た。

工　程５： 工程４の溶出液を水で希釈してｌＯＩ！とし、Ｐｒｅｐ
Ｃ−１８（Ｗａｔｅｒｓ、　Ｍｉｌｆｏｒｄ、米国）を
充填した鋼製カラム（粒径：５０〜１０５μｍ；カラム
寸法：５Ｘ３０ｃｍ；流量毎分８０−）にポンプで送り
込んだ。次に、５　ｍＭ　）リフルオロ酢酸を含有する
水／アセトニトリル混合物をカラムにポンプで送り込ん
だ。アセトニトリルの量は、２５分間は２０％、３０分
間は２０〜４０％（直線状グラジェント）、そして最初
に７５分間は４０％とし、それによりＡＮＦ拮抗体が溶
離された。溶出液１．２１１を回収し、真空下４０℃で
蒸発させ、その際イソプロパツールを少しずつ添加して
生成物を溶液中に保った。蒸発残留物３．９９ｇが得ら
れ、これはＡＮＦ拮抗体２．４４ｇに相当した（アミノ
酸分析により測定）。

工　程６： 下記構造のキレートゲルを）Ｉｏｃｈｕｌｉ、　Ｅ［Ｃ
ｈｉｍｉｃａ４０　：　４０８　（１９８６）］に従っ
てセファロースＣＬ　６Ｂ　ＦＦから調製した。

（本質以下余白） その０．８１をクロマトグラフィーカラム（カラム寸法
：　７　Ｘ２１ａｎ）に充填した。流量毎時５１で、５
０ｍＭ硫酸鋼溶液２１水２１　：　　５０ｍＭ酢酸ナト
リウム溶液（ｐＨ３，５）、１Ｍ塩化ナトリウム２！；
水２１および５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７
，５）、０．５Ｍ塩化ナトリウム（平衡緩衝液）２１で
順次洗浄することによりゲルを調製した。工程５で得ら
れた物質２ｇをイソプロパツール７５ｍ／に溶解し、平
衡緩衝液１１で希釈しそして流量毎時２１でキレートゲ
ルカラムにポンプで送り込んだ。

次に、カラムを平衡緩衝液４Ｉｌで洗浄した。次にＡＮ
Ｆ拮抗体を３ｍＭイミダゾール含有平衡緩衝液４．４１
１次に釦Ｍイミダゾール含有平衡緩衝液２．６１を用い
て、流量毎時２Ｉｌで溶離させた。工程５の物質全体３
．９９ｇから、キレートカラムでの２回の操作で溶出液
３．４１が得られ、これにはＡＮＦ拮抗体のみが含有さ
れることがＨＰＬＣ分析により分った（実施例３参照）
。キレートゲルを再生させるには、流量毎時５１で、５
０ｍＭ　ＥＤＴＡ溶液（ｐｆ（８，０）２１；水２ｒ！
：０．２Ｍ水酸化ナトリウム溶液２１水５１で洗浄した
。

工　程７： 工程６の溶出液（３，１）をＰｒｅｐ　Ｃ−１８（Ｗａ
ｔｅｒｓ）を充填した鋼製カラム（工程５におけると同
様の実験パラメーター）にポンプで送り込んだ。次に、
カラムを溶出液のｐＨが酸性となるまで５ｍＭ　トリフ
ルオロ酢酸で洗浄した。次にＡＮＦ拮抗体を、０〜８０
％アセトニトリル１５ｍＭ　トリフルオロ酢酸の直線状
グラジェントで６０分間カラムから溶離させた。

溶出液２５０ｍ１が得られ、これを真空下４０°Ｃで濃
縮し、凍結乾燥後、ＡＮＦ拮抗体１．２５ｇが白色粉末
として得られた。

実施例３ ＡＮＦ拮抗体の特性決定 薄層クロマトグラフィー：塩素／トリジンで脱色される
スポットが、シリカゲル６０Ｆ□、　（Ｍｅｒｃｋ）上
、ｎ−ブタノール／酢酸／水８０／２０／２０（ｖ／ｖ
／ｖ）を溶離剤としてＲｆ＝０．６６の位置で得られた
。

高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）　：　Ｗａｔ
ｅｒ製のμＢｏｎｄａｐａｋ　Ｃ−１８カラム（３，９
Ｘ　３００ｍｍ）上、アセトニトリル／水にｌ、　５ｍ
Ｍ　トリフルオロ酢酸、の溶離剤混合物を用い、流量毎
分１−１および検出波長２２８ｎｍで、保持時間４．４
６分を有するシグナルを得た。

アミノ酸分析はＳｐａｃｋｍａｎ−Ｄ、　！（、等［Ａ
ｎａｌｙｔ。

Ｃｈｅｍ、　３０　：　１１９０　（１９５８）］の方
法に従って実施した。

加水分解は６Ｎ塩酸を用いて１１０℃で２４時間、また
は４Ｎメタンスルホン酸を用いて実施した。加水分解物
のアミノ酸組成はＬｉｑｕｉｍａｔｌｌｌアミノ酸分析
器（Ｋｏｎｔｒｏｎ　ＡＧ）で分析したところ以下の結
果が得られた。

（本質以下余白） 理論値 ｌ アミノ酸　　　実測値 ｔ（ｉｓ　　　　　　Ｏ，９６ Ｎ８３　　　　　１．２３ Ａｓｘ　　　　　　３．００　　　　　３Ｓｅｒ　　　
　　　０．８５　　　　　１ｃｔｙ　　　　　　４．９
９　　　　　５１１ｅ　　　　　　１．９２　　　　　
２Ｔｙｒ　　　　　　１．０２　　　　　１Ｐｈｅ　　
　　　　２．９６　　　　　３Ｔｒｐ　　　　　　１．
　ｌ　　　　　　１Ａｓｘの値を３とした。やはりＳｐ
ａｃｋｍａｎ、　Ｄ、　Ｈ。

等の［Ａｎａｌｙｔ、　Ｃｈｅｍ、　３０　：　１１９
０　（１９５８）］の方法に従って実施した特殊分析に
より、Ａｓｘ・２Ａｓｐおよび１Ａｓｎであることが解
った。アミノ酸の配置は加水分解および続＜　　（＋）
−１−（９−フルオレニル）エチルクロロホルメートと
の誘導体形成により、Ｌ型であることが解った。

一次構造は、酵素的および化学的分解で得られたペプチ
ドの自動エドマン分解、ｒＲＯＥｓＹＪ　　ｒＮＯＥＳ
ＹＪおよびｒＲＥＬＡＹＥＤ　Ｃ０３ＹＪのような種々
の２Ｄパルス法を同時に使用する全分子のＮＭＲスペク
トル分析、および、「ＦＡＢ」質量スペクトル分析によ
り決定した。その構造をペプチド化学で慣用に、用いら
れるアミノ酸の略語を用いて第４図に示す。

これは置換１．４．７．１０．１３．１６．１９．２２
−オクタアザシクロペンタコサンである。

実施例４ ＡＮＦ拮抗体のインビトロ検出 ＡＮＦ拮抗体による、そのレセプターからの放射性標識
ＡＮＦの置換えをＢｕｒｇｉｓｓｅｒ等の結合試験［Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍ
ｍ、　１３３：１２０１（１９８５）］により測定した
。ウシ副腎線の脱調製物をレセプター調製物として用い
た。５０ｍＭ　トリスハ（Ｃ１，５００ｍＭ　ＭｇＣ１
ｔ、　　１　ｍＭ　ＥＤＴＡ、　０．５％ウシ血清アル
ブミンおよび１ｍＭ０−フェナントロリン、ｐＨ７，６
，中のこの調製物１００μｌに、この緩衝液１４５μ！
中の”Ｉ−ＡＮＦ（２０，０００ｃｐｍ、　１８．２＋
）Ｍ）およびジメチルスルホキシド５μｌ中のリガンド
を添加した。この混合物を４°Ｃで２４時間インキュベ
ートし、そしてＷｈａｔｍａｎ　ＧＦ／Ｃガラス繊維フ
ィルター上の急速濾過により結合ＡＮＦを遊離ＡＮＦか
ら分離した。上記緩衝液で３回（３Ｘ４ｍｌ）フィルタ
ーを洗浄した後、フィルターを破砕しそしてその放射能
をガンマカウンターで測定した。結合阻害をＩＣ，。と
じて定量的に示したが、これは”’Ｉ−ＡＮＦの結合が
半分阻害されるリガンドの濃度であることが理解される
べきである。

表：　ＩＣ５゜値 リガンド　　　　　　　　ｔＣＳ。（ｎＭ）ラットＡＮ
Ｆ　（９９−１２６）　　　　０．１１０ＡＮＦ拮抗体
　　　　　　　８６０ 実施例５ ＡＮＦ拮抗体のインビボ活性 自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ）または正常血圧病原体
不含（ＳＰＦ）ラットの２０週齢のものを用いてインビ
ボ試験を行った。ＡＮＦ２．５μｇ／ｋｇ／分を意識の
あるＳＨＲに注入すると、血圧が４５ｍｍ）１ｇ低下し
た。

次にＡＮＦ拮抗拮抗■／ｋｇの巨丸投与したところ血圧
が再び２２０ｍｍＨｇの初期値まで上昇した。血圧を１
００〜ｌ　ｌＯｍｍＨＨに上昇させるためにアンギオテ
ンシンＩＩ（０，１５μｇ／ｋｇ／分）を中枢反射の無
い麻酔下のＳＰＦラット（「を髄切断ラットＪ）に注入
した。

次にＡＮＦ　１０μｇ／ｋｇの巨丸投与を行うと、血圧
が２０ｍｍＨｇ低下した。続いてＡＮＦ拮抗拮抗■／ｋ
ｇを静脈内投与したところ、血圧が再び初期値まで上昇
した。この実験により、ＡＮＦ拮抗体の存在下における
血圧上昇は交感神経反射の活性化によるものではなく、
ＡＮＦ拮抗体の作用によるものであることが解る。

実施例６ ＡＮＦ拮抗体のジメチルエステル 実施例２に従って単離されたＡＮＦ拮抗体４０■を９６
％硫酸３０■を含有するメタノール４０ｍ１に溶解し、
室温で６５時間放置した。次に、この溶液を水１２０ｍ
１で希釈しそしてＮｕｃｌｅｏｓｉ　Ｃ−１８，１０μ
ｍ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ、　Ｄｔ）ｒｅｎ、
西独）を充填した鋼製カラム（２ｘ２５ｃｍ）に５ｍ１
１分の流速でポンプで送り込んだ。

次に、水中の３０％アセトニトリル、５ｍＭトリフルオ
ロ酢酸、でカラムを洗浄した。ジメチルエステルは水中
の５０％アセトニトリル、５ｍＭ　）リフルオロ酢酸、
で溶離させた。溶出液を凍結乾燥し、ジメチルエステル
３１■を無色粉末として得た。実施例４の方法で測定し
たジメチルエステルのＩＣ３゜値は２５００ｎＭであっ
た。

【図面の簡単な説明】

第１図はチオグリセロール中におけるＡＮＦ拮抗体の「
高速原子衝撃Ｊ質量スペクトルを示す図、第２図はＫＢ
ｒ中のＡＮＦ拮抗体の赤外線スペクトルを示す図、第３
図は紫外線スペクトルを示す図および第４図はＡＮＦ拮
抗体のアミノ酸配列を示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ＤＭＳ番号４７７７および４７７８を有するストレ
   プトミセス属の微生物から単離しうる、哺乳類心房ナト
   リウム排泄因子の拮抗体。 ２、分子量約１８７０を有する環状ペプチドまたはかか
   るペプチドの生理学的に適合しうる塩である請求項１記
   載の化合物。 ３、第４図に示すアミノ酸配列を有する請求項２記載の
   化合物。 ４、治療上活性な薬剤としての請求項１〜３の何れか１
   項記載の化合物。 ５、血圧の調節が関与する疾病の治療のための請求項１
   〜３の何れか１項記載の化合物。６、ＤＭＳ番号４７７
   ７および４７７８を有するストレプトミセス属の微生物
   を培養し、次に粗製培養抽出物、培養細胞塊または培養
   濾波から請求項１〜３の少なくとも１項に記載の化合物
   を単離し、そして所望によりその化合物を生理学的に適
   合しうる塩に変換することを包含する請求項１〜３の何
   れか１項記載の化合物の製法。 ７、所望により更に治療活性を有する物質および／また
   は無毒性で不活性な、治療上適合しうる担体物質の１種
   またはそれ以上と組合わせた、請求項１〜３の何れか１
   項記載の化合物を含有する医薬製剤。 ８、所望により付加的な治療活性物質および／または無
   毒性で不活性な、治療上適合しうる担体物質の１種また
   はそれ以上と組合わせた、請求項１〜３の何れか１項記
   載の化合物を含有する、血圧調節が関与する疾病の治療
   の為の医薬製剤。 ９、疾病の治療のための請求項１〜３の何れか１項に記
   載の化合物の使用。 １０、血圧調節が関与する疾病の治療のための請求項１
   〜３の何れか１項に記載の化合物の使用。 １１、請求項６記載の方法に従って製造された請求項１
   〜３の何れか１項記載の化合物。