JPH03135920A - 抗凝血物質含有試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗凝結物質またはその類似体に加え二価カチオ
ンを含む医薬組成物に関する。

凝血メカニズムは酵素反応のカスケードの形をとり、そ
の最終ステップで最終的にフィブリノーゲンをフィブリ
ンに転換するトロンビンを生成する。たとえばＸａおよ
びＶａ因子によるプロトロンビンの活性化などの種々の
前凝血反応は凝血因子が結合するリン脂質表面により触
媒される。あらゆる種類のリン脂質が凝結を刺激できる
わけではない。リン脂質表面の荷電がその効果の程度を
決定するようである。ホスファチジルセリンのように負
に荷電したリン脂質が高い前凝血効果を有している。

リン脂質に結合し、かつリン脂質表面に依存するプロセ
スを妨害するたん白質の中にはそれらのリン脂質への結
合がＣａ２゛に依存するものがある。

アネキシンとしても知られているこのカテゴリーにはり
ポコルチン１１カルバクチン１１ブレティン■、リポコ
ルチンＩＩＩ、ｐ６７−カレレクトリンばかりでなく血
管抗凝血たん白質（ＶＡＣ）およびＩＢＣ，ＰＡＰ、Ｐ
ＡＰ　Ｉ、ＰＰ４、エンドネキシン■およびリポコルチ
ンＶも含まれる。全てのアネキシンに共通する構造的特
徴はおそらくそれらの同様なＣａ２＋およびリン脂質結
合性に基づいている。この−船釣性質は全てのアネキシ
ンに関して云えるがそれらのＣａ　３　゛および種々の
タイプのリン脂質に対するアフィニティーに明確な個性
がある。アネキシンの生理的機能は膜会合プロセスと関
係している。ＶＡＣの凝血阻害効果の基本的メカニズム
はＶＡＣがリン脂質表面に結合し、それにより、その表
面上での凝血促進複合体の形成を妨害することによるリ
ン脂質の触媒能の阻害として理解されている。

また別のアネキシンも凝血を阻害し得るが、ＶＡＣが最
も効果的なインヒビターであるようである。

本発明の目的は純粋なＶＡＣよりも効果的なＶＡＣ調製
物を提供することである。

ＶＡＣはカルシウム依存で可逆的に前凝血性リン脂質と
会合することが結合実験で示された。

また、Ｃｄ”−１Ｚｎ２″″、Ｍｎ２．およびＣ０２゛
を含むシリーズからの別の二価、カチオンも会合に正の
効果を存しているがそれはＣａ”と程度が違う。

それゆえ本発明はアネキシンおよび天然のもしくは化学
合成的または遺伝子工学的に製造したその誘導体または
類似体からなる群から選ばれる血管抗凝血物質およびＣ
ａ　３　＊、Ｃｄ”、２ｎ”、Ｍｎ”およびＣ０２′−
からなる群から選ばれる少なくとも１つの二価カチオン
および場合によっては賦形剤および、またはキャリヤー
および、または安定剤を含む医薬組成物に関する。

さらに驚くべきことにＣａ”およびＺｎ　”イオン存在
下でのＶＡＣのリン脂質への吸着は異常な正の効果を生
じ、このことがＶＡＣの抗凝血効果を改善することが分
った。

それゆえ本発明はアネキシンおよび天然の、もしくは化
学合成的または遺伝子工学的に製造したその誘導体また
は類似体からなる群から選ばれる血管抗凝血物質とＣａ
”およびＺｎ　２＊との組合せ、および場合によっては
賦形剤および、またはキャリヤーおよび、または安定剤
を含む医薬組成物にも関する。

本発明で用いられるＣ　ａ　２　＊、Ｃｄ”、Ｚｎ　２
　＋、Ｉ　ｎ　３　＜−およびＣ０２゛からなる群に由
来する二価カチオンの濃度は０．０１〜１００ｍＭ、好
ましくは０．０３〜１０ｍＭの範囲である。

ｌ　ｎ　２＊イオンの相乗効果を出すための亜鉛濃度は
０．１〜１００μＭ１好ましくは１８〜３０μＭ１より
好ましくは通常の血漿亜鉛濃度である。カルシウムおよ
び、または亜鉛欠乏症の場合、カルシウムおよび、また
は亜鉛濃度は少なくとも通常の血漿レベルに調整される
。

本発明に従って使用される抗凝血物質特にＶＡＣは遊離
形ばかりでなく塩の形、特に医薬的に許容しうる塩の形
もとりうる。これらは遊離したアミノ基をもつ多くのア
ミノ酸を含んでいるので、本発明の化合物は、たとえば
酸付加塩の形で存在する。これらの酸付加塩は特に従来
の治療に使用可能な酸との生理学的に許容可能な塩であ
る。無機酸の例には塩酸などのハロゲン化水素酸、硫酸
、リン酸またはビロリン酸があり、有機酸には基本的に
ベンゼンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸、ま
たはメタンスルホン酸などの低級アルカンスルホン酸な
どのスルホン酸類、酢酸、乳酸、パルミチン酸、ステア
リン酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸およびクエ
ン酸などのカルボン酸などが含まれる。またこの化合物
は遊離カルボキシル基を含むアミノ酸基を含んでいるの
で、金属塩、特にたとえばナトリウム、カルシウムまた
はマグネシウム塩などのアルカリおよびアルカリ土類金
属塩または生理的に許容可能な有機窒素塩基またはアン
モニア由来のアンモニウム塩として存在し得る。しかし
、それらはまた遊離カルボキシル基および遊離アミノ基
を含んでいるので分子内塩を形成するこもある。

本発明の新しい医薬組成物はＶＡＣと同様に急性ショッ
ク療法（たとえば敗血性ショックまたは外傷性ショック
Ｌにおける血栓症術後の予防を含む血栓症および塞栓症
の予防および治療、特に血液透析、血液分離、保存血液
および体外循環におけるカルシウムおよび、または亜鉛
欠乏症がある場合の凝血異常症の治療に使用される。

また本発明の医薬組成物は血管壁に損傷がある場合や、
種々の原因でクロットが生じてしまった場合の全ての血
管内処置に予防的または治療的に使用される。これらの
血管内処置にはたとえば気球カテーテル挿入法、動脈／
静脈補綴、およびたとえばレーザー光線などによる動脈
硬化症プラークの除去が含まれる。

たとえば本組成物は静脈、皮内、皮下または筋肉注射ま
たは局所的経路を通じて非経口的に投与される。

投与量は治療や予防処置の目的に応じて異なる。

個々の投与量や投与計画は個々の場合の評価により決定
される。関連する因子の決定に必要な方法は当業者によ
く知られているものである。通常、注射する場合の本薬
剤の治療効果量は体重ｋｇ当り約０．００５〜０．１■
の範囲にある。体重ｋｇ当り約０、Ｏ１〜約０．０５　
ｍｇの範囲が好ましい。この物質は静脈、筋肉または皮
下注射で投与される。したがって単位投与形の非経口投
与に適した医薬製剤は投与法に応じ投与物当り約０．４
〜７．５　ｍｇの抗凝血物質を含んでいる。本発明に従
う組合せ物と同様に、これらの医薬組成物は場合により
、ｐＨを３．５〜８に保持する目的のバッファ、例えば
リン酸塩バッファ、およびこの溶液の等慢性を調節する
ことを目的とする塩化ナトリウム、マニトールまたはソ
ルビトールを含んでもよい。これらは凍結乾燥形または
溶液の形で存在するが、この溶液にはたとえば０．２〜
０．３％のメチルまたはエチル４−ヒドロキシベンゾエ
ートなどの抗菌性安定剤が含まれている。局所的使用の
ための製剤は水性溶液、ローションまたはゲノペ油性溶
液またはサスペンションまたはグリースまたはより特殊
にはエマルジョン比軟こうの形をとる。水性溶液形の製
剤は、たとえば本発明の組合せ物をｐＨ４〜６．５の水
性バッファ溶液に溶解し、さらに必要な場合はたとえば
抗炎症剤、および、またはポリビニルピロリドンなどの
高分子バインダーおよび、または防腐剤などを添加する
ことにより調製する。活性物質の濃度は溶液１０−また
はゲル１０ｇ当り約０゜１〜約１．５　ｍｇ、好ましく
は０．２５〜０．１　ｍｇである。

局所的に使用する油状製剤はたとえば本発明の組合せ物
を油中にサスペンドし、場合によってはステアリン酸ア
ルミニウムなどの膨潤剤および、またはＨＬＢ値（親水
性・親油性バランス値）がたとえばグリセロールモノス
テアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモ
ノステアレートまたはソルビタンモノオレートなどの脂
肪酸モノエステルのような１０以下の界面活性剤を添加
して調製する。

グリース軟こうは、たとえば本発明の組合せ物を塗布可
能なグリースベースにサスペンションし、場合によって
はＨＬＢ値ｌＯ以下の界面活性剤を添加して調製する。

エマルジョン比軟こうは本発明の組合せ物の水性溶液を
ＨＬＢ値１０以下の界面活性剤とともに軟性の塗布可能
なグリースペースに乳化させることにより調製する。こ
れら全ての製剤も防腐剤を入れることがある。活性物質
濃度はベース１０ｇ当り０．１〜１．５　ｍｇ、好まし
くは０．２５〜１．０　ｍｇである。

ヒトまたは哺乳類への直接的医療を目的とした上述の医
薬組成物およびその類似体に加え、′本発明はヒトまた
は哺乳類の身体外での医療を目的とした医薬組成物およ
び医薬製剤（本出願では医薬組成物と呼んでいる）にも
関する。このような組成物および製剤は主に身体外での
循環または処理（たとえば対外循環や腎臓機械による透
析）、保存または修正（たえとば血液分離）にかけられ
る血液における凝血防止添加物として使用される。

これらの組梠物において、保存用溶液などの製剤または
単一投与形の製剤は上述の注射用製剤と同じである。し
かし活性物質の量または濃度は処理する血液の容積に基
づいている。

個々の目的に応じ適当な投与量は血液１’Ｊットル当り
活性物質０．０１〜１．０　ｍｇであるが、活性物質お
よび二価カチオン両方の上限を越えても全く安全である
。

（材料と方法） ＶＡＣはＥＰＡ　０１８１４６５　　もしくはＥＰＡ　
０２９３５６７に類似する方法で調製した。以下の実験
はＶＡＣαを用いて行ったがその結果は別のアネキシン
類、特にＶＡＣβにも転換し得る。

（脂質） ジオレオイル−ホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ。

ＮαＰ−１０１３）、ジオレオイル−ホスファチジルエ
タノールアミン（ＤＯＰＥ、ｋＰ−０５１０）、カルシ
オリピン（ＣＬＳＮ（ＬＣ−５６４６）　、ジオレオイ
ル−ホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ。

ｋＰ　　９６６４）、ホスファチジルイノシトール（Ｐ
　Ｉ、　Ｎ（ＬＰ−０６３９）　、ジオレオイル−ホス
７７チジル酸（ＤＯＰＡ、　ＮｃＬＰ−２７６７）　、
ステアリルアミン（ＳＡ、Ｓ−６７５５）および卵黄ス
フィンゴミエリン（Ｓ−０７５６）はシグマケミカル社
から人手した。

ＤＯＰＣおよびＤＯＰＥの純度は薄層クロマトグラフィ
ーでチエツクした。ジオレオイル−ホスファチジルセリ
ン（ＤＯＰＳ）は（Ｃｏｎｆｕｒｉｕｓ。

Ｐ　＆　２ｗａａｌ、　　Ｒ８Ｆ、　　Ａ、　　（１９
７７）　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ａｃｔａ　４８８、−４２．　）に従かイＤ　ＯＰ　Ｃ
の変換により調製した。１４Ｃ標識ＤＯＰＣ（比活性１
００．０００ｄｐｍ　／μｇ）　はアマージャム社から
入手した。

（シリコンシート上の二重リン脂質コートの調製）二重
リン脂質コートはコーセル（Ｃｏｒｓｅｔ）等（Ｃｏｒ
ｓｅｌ、　Ｊ、　Ｗ、、　Ｗｉｌｌｅｍｓ、　ＧｏＭ、
、　Ｋａｐ、ＪｌＭ、Ｍ、。

Ｋｏｐ、　Ｊ、　Ｍ、　Ｍ、、　Ｃｕｙｐｅｒｓ、　Ｐ
、Ａ、＆　Ｈｅｒｍｅｎｓ、　Ｗ。

Ｔｈ、　（１９８６）　Ｊ、Ｃｏ１１ｏｉｄ　Ｉｎｔｅ
ｒｆａｃｅ　Ｓｃｉ、　１１１．５４４−５５５）の方
法に従がい、ラングミュア−フィルムバランス（ラウダ
型ＦＷ−１型）を用いて調製した。親水性シリコンシー
トを２４時間３０％のクロモ硫酸水溶液で処理し、つい
で５０％エタノール水溶液中に保存した。使用前それら
を洗剤と水できれいに洗浄した。フィルムバランスを脱
イオン水および５０μＭ　ＣａＣβ２で満たした。クロ
ロホルム巾約２ｇ／ｊ７のリン脂質を含む２０μｌの溶
液を上記の下相に設けた。二重層中のＤＯＰＳフラクシ
ョンをＤＯＰＣに混合したロＣ−標識ＤＯＰＳでチエツ
クした。形成した二重層をシチレーション洗浄剤（デュ
ポン社、９８９号〕で除去し、全放射能をシンチレーシ
ョンカウンタで測定した。

（円二色計による結合の測定） 二重リン脂質コートへのＶＡＣの吸着をコーセルら及び
クイパースらの文献（Ｃｏｒｓｅｌ、　Ｊ、Ｗ、。

Ｗｉｌｌｅｍｓ、　ＧｌＭ、、　Ｋｏｐ、　ＪｏＭ、　
Ｍ、、　Ｃｕｐｅｒｓ、　Ｐ、Ａ。

＆　Ｈｅｒｍｅｎｓ、　Ｗ、　Ｔｈ、　（１９８６）　
Ｊ、　Ｃｏ１１ｏｉｄ　Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ。

Ｓｃｉ、　　１１１．５４４−５５４、及びＣｕｙｐｅ
ｒｓ、　　Ｐ、Ａ、、Ｃｏｒｓｅｌ。

Ｊ、Ｗ、、　Ｊａｎｓｓｅｒ、　Ｍ、　Ｐ、、　Ｋｏｐ
、　Ｊ、Ｍ、Ｍ、、　Ｈｅｒｍｅｎｓ。

Ｗ、　Ｔ）Ｉ、　＆　Ｈｅｍｋｅｒ、　Ｈ，Ｃ，（１９
８３）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ。

２５８．２４２６−２４３１　）に述べられている自動
円二色計で測定した。

結合テストは撹拌する５−のバッファ（０，０５Ｍトリ
ス／ＨＣβ；　０．　Ｉ　Ｍ　ＮａＣ１；　ｐｔｌ＝　
７　；　Ｔ＝２０℃）を含む親水性の皿の中で行った。

二価カチオン塩化物を徐々に加えていった。

ＶＡＣ濃度が０．１μｇ／ｒｎ１以下のとき、ＶＡＣに
対し十分なバッファ能を維持するため特定のＶＡＣ濃度
のバッファを連続的に投与した。

偏光および分析データから吸着フィルムの屈折率および
厚さｄを測定した（ＭｃＣｒａｃｋｉｎ、　Ｆ、　Ｌ、
。

Ｐａｓｓａｇｌｉａ、　Ｅ、、　Ｓｔｒｏｎｂｅｒｇ、
　Ｒ，Ｒ，＆　Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ。

Ｈ，Ｌ（１９６３）　Ｊ、Ｒｅｓ、Ｎａｔ、　Ｂｕｒ、
　５ｔａｎｄ、　５ｅｃｔ、Ａ６７．３−３７７）。吸
着したたん白質層の量Ｆは修正ローレンツ−ローレンツ
等式［１）　　（Ｃｕｙｐｅｒｓ、　Ｐ。

Ａ１．　Ｃｏｒｓｅｌ、　Ｊ、Ｗ、Ｊａｎｓｓｅｎ、　
Ｍ、ＰｌＫｏｐ、　Ｊ、　！、１゜Ｍ、、　Ｈｅｒｍｅ
ｎｓ、　Ｗ、　Ｔｈ、　＆　Ｈｅｍｋｅｒ、　ＨｌＣｏ
（１９８３）　Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ＋ｎ、２５８．２４２６−２４３１
及びＫｏｐ、　ＪｏＭｏＭ、。

Ｃｕｐｐｅｒｓ、　Ｐ、Ａ、、　Ｌｉｎｄｈｏｕｔ、　
Ｔｈ、、　Ｈｅｍｋｅｒ、　Ｈ０Ｃ１＆　Ｈｅｒｍｅｎ
ｓ、　Ｗ、Ｔｈ、（１９８４）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｃｈ
ｅｍ、　２５９．１３９９３−１３９９８）により屈折
率および厚さから算出した。

〔１〕 ｒ’３ｄ（ｎ２−ｎｂ”）　／　［：（ｎ”＋２）（ｒ
（ｎｂ２＋２）−Ｖ（ｎｂ”−１））　　Ｅ（式中ｎｂ
はバッファの屈折率） ｒ＝０．２５４およびＶ＝０．７１という値をモル比屈
折率および部分比容積に使用した（上述のＣｕｙｐｅｒ
ｓ　らの文献による〉。

〈結　果） （リン脂質に対するＶＡＣの結合に用いる二価カチオン
の効果） ＶＡＣはカルシウム濃度に応じて２０％ＤＯＰＳ／８０
％ＤＯＰＣからなるリン脂質膜に結合する。

つづいてＥＤＴＡを添加すると直ちに全ての脱離に起こ
した（第１図）。遊離（：　ａ　３　＋濃度を変えるこ
とにより吸着の量または速度を顕著に変えることなしに
数回の吸着の開始が可能となった。それゆえ、吸着また
は脱離の結果としてＶＡＣ分子または二重リン脂質コー
トの不可逆的変化はありそうにない。またこの皿を無Ｃ
ａ””バッファで洗ったときその結合は全く可逆的であ
った。

リン脂質に対するＶＡＣ結合の（ａ　３　＊依存性を第
２図に示す。Ｃａ２″″投与量−活性曲線は明確に最大
ＶＡＣ吸着の半値ｃａ”濃度１：ｃａ　２°〕１／２を
示している。（Ｃａ”］　ｌ／□値はリン脂質表面の組
成に依存する。１００％、２０％、５％および１％のＤ
ＯＰＳを含むリン脂質表面においては各々３６μＭ、２
２０μＭ、１．５．ｕＭおよび８．６ｍＭというＣＣａ
２＋）、、２値が測定されたく第１表）。これらの値は
ＰＳ／ＰＣベシクルの等モル混合物に対するエンドネキ
シンＩ［（＝ＶＡＣ）結合について測定された（Ｃａ”
）　ｌ／２値５３μＭとよく一致している（Ｓｃｈｌａ
ｅｐｆｅｒ、　Ｄ。

Ｄ、、　Ｍｅｈｌｍａｎ、　Ｔ、、　Ｂｕｒｇｅｓｓ、
　Ｗ、Ｈ，＆　Ｈｅ１ｇ１ｅｒ。

Ｈ，Ｔ、　（１９８７）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃ
ａｄ、Ｓｃｉ、　ＩＪｓＡ　８４．６０７８−６０８２
　）。たん白質の最高吸着量（ｒ’ｍａＸ）は膜のＤＯ
ＰＳフラクションとは独立しており、約０．２１７μｇ
　／　ｃｍ　”であった。Ｃａ２″″以外のカチオンを
用いたテストによりリン脂質に対するＶＡＣの結合は著
しくＣａ”″″特異的であることが分った（第３図）　
。Ｃｄ”、Ｚｎ　２　＊、Ｍｎ”およびＣｏ”は結合の
わずかな促進を示した。８ｓ２＋およびＭｇ２−は何ら
影響をもたなかった。カチオンのこの性質はそのイオン
半径とある程度関連づけることができる。

（亜鉛相乗効果） 高濃度の亜鉛イオン（１ｍＭ）は上限はあるがＶＡＣ吸
着を促進する（第３図）。５０μＭでは吸着に全く効果
がない、驚くべきことにこの濃度は（’　ａ　３　＊存
在下では結合に影響する。すなわち相乗効果が観察され
る。わずか１％ＤＯＰＳを含む二重層に対する（（：　
ａ　２　゛）　、　、２値は８．６から２．７ｍＭに減
少する（　（Ｚｎ”〕＝　５０　μＭ）　　（第４図）
。

５０μＭ　（Ｚｎ”）は通常の血漿亜鉛濃度の範囲内に
ある。

第１表 種々のリン脂質表面に対するＶＡＣの最高結合量の半値
脂質（ｍｏ　ｆ！％／ｍｏ　４７％）　　　ｒ’ｍａｘ
±Ｓ、０．　　　　（Ｃａ”〕１７２±８．０゜（μｇ
／ｃが）　　　　　　ｍＭ ＤＯＰＳ　　（１００） ＤＯＰＳ／口ＯＰＣ（２０（８０） ＤＯＰＳ／ＤＯＰＣ（５／９５） ００ＰＳ／ＤＯＰＣ（１／９９） カルシオリビン／ＤＯＰＣ（２０／８０）ロロＰＧ／Ｄ
ＯＰＣ（２０／８０） ＰＩ／ＤＯＰＣ（２０／８０） ００Ｐ＾／ＤＯＰＣ（２０／８０） ＤＯＰＢ／ＤＯＰＣ（２０／８０） スフィンゴミエリン／ＤＯＰＣ（２０／８０）００ＰＣ
（１００） ０、１９５±０．０２５ ０、２２２±０．０１４ ０、２２９±０．００４ ０、２３４±０．００７ ０、２０９±０．０１１ ０．２１２±０．００３ ０．２２１±０．００５ ０、２０？±０．００６ ０．２１３±０．００３ ０、２２５±０．０１４ ｎ、ｄ。

０、０３６±０．０１３ ０．２２　　±０．０ １．５　　±０．５ ８．６　　±２．５ ０、０３９±０．０２２ ０、１５５±０．０２７ ０．４７　　±０．０ ０．７５　　±０．２ ０．８６　　±０．２ ７　　　±３ ＞３０　ｍＭ 最高ＶＡＣ結合量半値を与えるカルシウム濃度（（Ｃａ
”〕Ｉ／２で特定されるリン脂質表面に関する最高ＶＡ
Ｃ吸着量（ｒｍａｘ）は少なくとも３回の実験の平均値
とその標準偏差として示されている。

ｎ、ｄ、＝測定せず。

【図面の簡単な説明】

第１図：Ｃａ”″″濃度増減させることにより誘導され
るリン脂質表面上のＶＡＣの吸着および脱着。 ２０％ＤＯＰＳ／８０％Ｄ　ＯＰ　Ｃ！Ｊ　ン脂質二重
層に関するＶＡＣの吸着（１１’　ｇ　／　ｒｎＩｌ）
　ｏ　Ｃａ”の添加（３，４，６ｍＭ）は↑またはで示
しである。 第２図ニリン脂質表面上のＶＡＣの吸着に関するリン脂
質組成および（ａ　３　＊濃度の影響。 ０１００％ＤＯＰＳ；・２０％ＤＯＰＳ、Δ５％ＤＯＰ
Ｓ：ロ１％ＤＯＰＳ；◇１００％ＤＯＰＣ。 全ての混合物はＤＯＰＣで補なわれる。〔ｖＡＣ〕＝ｌ
μｇ／ｍｌ！。 第３図：ＶＡＣ吸着に関する二価イオンの効果。 特定のイオン存在下（１または３ｍＭ）での２０％ＤＯ
ＰＳおよび８０％ＤＯＰＣ二重層に関するＶＡＣの吸着
。〔ＶＡＣ）＝１μｇ／ｍｊ２゜第４図ニリン脂質表面
におけるＶＡＣのＣａ　２＊依存吸着に関するＺｎ”°
の相乗効果。５０μＭ２ｎ””存在下での１％ＤＯＰＳ
および９９％ＤＯＰＣリン脂質表面上のＶＡＣ吸着に関
するＣａ”の効果を測定した。ＣＶＡＣ）＝ｌ　μｇ／
ｍｌ。 ｌ０１ Ｃａ２°１ｍＭ１ ＦＩＧ、３ （方式） ％式％ １、事件の表示 平成２年特許願第１８６９７０号 ２、発明の名称 抗凝血物質含有試薬 ３、補正をする者 事件との関係 輸入 ＦＩＧ　４ ４、代 ５、補正命令の日付 平成２年９月２５日 Ｃａ２°（ｍａｌ 乙 Ｌ＝　ｔ （・・、−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アネキシンおよび天然のまたは化学合成的もしくは
   遺伝子工学的に製造されたその誘導体または類似体から
   なる群から選ばれた抗凝血物質およびＣａ＾２＾＋、Ｃ
   ｄ＾２＾＋、Ｚｎ＾２＾＋、Ｍｎ＾２＾＋およびＣｏ＾
   ２＾＋からなる群から選ばれた少なくとも１つの二価カ
   チオンを含み、また場合によっては賦形剤および、また
   はキャリヤーおよび、または安定剤を含むことを特徴と
   する医薬組成物。 ２、前記血管抗凝血物質が、式 【遺伝子配列があります。】 【遺伝子配列があります。】 【遺伝子配列があります。】 （式中、ＸＸは、ＧｌｕまたはＡｓｐを示し、また場合
   によっては部位１のメチオニンが切断されており、また
   場合によっては部位２のアラニンがブロックされており
   、および、または場合によってはたとえば部位３１６の
   システイン残基間などの分子間ジスルフィド結合によっ
   て引き起こされる凝固が存在する。） で表される物質であるか、またはその生物学的に活性な
   変異体または誘導体であるか、もしくは式 【遺伝子配列があります。】 【遺伝子配列があります。】 【遺伝子配列があります。】 （式中、部位１のメチオニンが切断されており、また場
   合によっては部位２のアラニンがブロックされており、
   および、または部位１６１および、または２０６および
   、または２５０および、または２９３のシステイン間の
   分子内ジスルフィド結合が存在し、および、または上述
   の部位における分子間ジスルフィド結合によって引き起
   こされる凝固が存在する。） で表わされる物質、またはその生物学的に活性な変異体
   または誘導体であることを特徴とする請求項１記載の医
   薬組成物。 ３、二価カチオンとしてＣａ＾２＾＋を含むことを特徴
   とする請求項１もしくは２記載の医薬組成物。 ４、二価カチオンとしてＺｎ＾２＾＋を含むことを特徴
   とする請求項１もしくは２記載の医薬組成物。 ５、Ｃａ＾２＾＋及びＺｎ＾２＾＋を含むことを特徴と
   する請求項１もしくは２記載の医薬組成物。 ６、０．０１から１００ｍＭ、好ましくは０．０３から
   １０ｍＭのＣａ＾２＾＋を含むことを特徴とする請求項
   １乃至３および５のいずれか１項記載の医薬組成物。 ７、０．１から１００μＭ、好ましくは１８から３０μ
   ＭのＺｎ＾２＾＋を含むことを特徴とする請求項１、２
   、４、５または６のいずれか１項記載の医薬組成物。 ８、Ｚｎ＾２＾＋濃度が通常の血漿亜鉛濃度の範囲内に
   あることを特徴とする請求項７記載の医薬組成物。 ９、０．０１から１００ｍＭ、好ましくは０．０３から
   １０ｍＭのＣａ＾２＾＋かつ０．１から１００μＭ、好
   ましくは１．８から３０μＭのＺｎ＾２＾＋、特に好ま
   しくは通常の血漿亜鉛濃度の範囲の亜鉛を含むことを特
   徴とする請求項５記載の医薬組成物。 １０、アネキシンおよび天然のもしくは化学合成的また
   は遺伝子工学的に製造したその誘導体または類似体から
   なる群から選ばれる血管抗凝血物質を好ましくは請求項
   ６乃至８のいずれか１項で特定される濃度の、Ｃａ＾２
   ＾＋、Ｃｄ＾２＾＋、Ｚｎ＾２＾＋、Ｍｎ＾２＾＋およ
   びＣｏ＾２＾＋からなる群から選ばれる少なくとも１つ
   の二価カチオンと混合し、また場合によっては賦形剤お
   よび、またはキャリヤーおよび、または安定剤と混合し
   、また場合によっては凍結乾燥することを特徴とする請
   求項１記載の医薬組成物の製造法。 １１、血栓症または塞栓症の治療および、または予防を
   目的とした請求項１乃至９のいずれか１項記載の医薬組
   成物の使用。 １２、身体外部の医薬を目的とした請求項１乃至９のい
   ずれか１項記載の医薬組成物の使用。