JPH031290B2

JPH031290B2 -

Info

Publication number: JPH031290B2
Application number: JP55148902A
Authority: JP
Inventors: Jee Makuaree Uiriamu; Zetsuto Maakasu Henrii
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1979-10-29
Filing date: 1980-10-25
Publication date: 1991-01-10
Also published as: JPS57114527A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は液体のウイルスワクチンに関するもの
である。より詳細には本発明は液体のウイルスワ
クチン用の安定剤に関するものである。ワクチンは全世界にわたつて配布されており、
またその環境の温度は広範囲にわたつているので
これらワクチン調製物の輸送、及び使用のために
ワクチンを安定化させる必要があつた。過去に於
ていくつかの安定化のための方法が用いられてき
た。ａ低温（−10℃から−70℃）必らずしも利用できるわけではない低温貯蔵設
備が必要とされるので、この方法の実用性は制限
される。ｂ凍結乾燥凍結乾燥法は金がかかる操作を必要とする欠点
があるが、倒結乾燥したワクチンはかなり安定で
あり、必要とされるまで４−８℃で貯蔵される。
しかし、この貯蔵期間中ワクチンは徐々に劣化
し、約12−24ケ月後には免疫を授与するのに十分
な力価を有さなくなる。更に、凍結乾燥したワク
チンは使用前に再構成しなければならないので、
再構成した液体のワクチンは室温に放置しておく
とその活性を失つてしまう。この結果免疫を授与
する力価が不足し、免疫計画が失敗してしまう。ｃ安定剤安定剤はワクチンに添加する化学物質であり、
低温貯蔵法又は凍結乾燥法と組み合せて使用され
る。化学的安定剤、例えばSPGA〔Bovarnick等，
J.Bact，59巻509−522頁（1950年）によつて記述
されている安定剤であり、その開示は茲に引用文
献として取り入れられている〕及び類似物は先行
技術に既に記載されている。Bovarnick等によつ
て記載されているように1lのSPGAは0.218Mの砂
糖（74.62g）0.00376MのKH₂PO₄（0.52g）、
K₂HPO₄ 0.0071M（1.25g）、グルタミン酸カリウ
ム0.0049M（0.912g）及び１％の血清アルブミン
（10g）を含有する。SPGAの前述した成分の量を
いろいろに変化させたものは当業界の専門家によ
く知られており、しばしばグルタミン酸カリウム
の代りにグルタミン酸ナトリウムが使われるが、
これらの組成を変えたものもSPGAと呼ばれる。
例えば米国特許第3783098号はグルタミン酸１カ
リウム塩の代りにグルタミン酸１ナトリウム塩を
有するSPGAについて言及している（６欄，５−
11行）。米国特許第4002256号は滅菌蒸溜水１あ
たり74.62gの砂糖、0.45gのKH₂PO₄，1.35gの
K₂HPO₄，0.956gのＬ−グルタミン酸１ナトリウ
ム塩及びアルブミノソール（ヒトアルブミン）の
25％溶液の40mlを含有するSPGA安定剤を記載し
ている。一般にSPGA安定剤は約２から10％の
糖、例えば砂糖、約0.05から約0.3％のリン酸の
一又は二アルカリ金属塩、又はその混合物、例え
ば、KH₂PO₄，K₂HPO₄，NaH₂PO₄，又は
Na₂HPO₄、約0.05から約0.2％のグルタミン酸ア
ルカリ金属塩、例えばグルタミン酸のナトリウム
又はカリウム塩、及び約0.5％から約２％の血清
アルブミン、例えばウシ血清アルブミン、ヒトア
ルブミンを含有する。SPGA安定剤の組成中の成
分を種々置換することが可能である。例えば米国
特許第3783098号（３欄、59−61行）に記載され
ているように砂糖の一部又は全部を澱粉水解物例
えばグルコース又はデキストランで置換すること
が可能であり、米国特許第3783098号（３欄、８
行）及び米国特許第3915794号中にそれぞれ記載
されているようにアルブミンの一部又は全部カゼ
イン又はポリビニルピロリドン（PVP）で置換
することが可能である。しかしながらこれまで知
られている安定剤のうちで、所望する水準にまで
安定性をたかめたものはない。従つて、液体のウイルスワクチン用の改良され
た化学安定剤を供給するのが本発明の一目的であ
る。他の一つの目的は液体のウイルスワクチンを
安定化させる方法を供給することである。更にも
う一つの目的は、力価が減少することなく長期間
の保存に耐える液体のウイルスワクチンを供給す
ることである。本発明のこれら及び他の目的は以
下の記載から明らかになるであろう。改良され安定化した液体の生ウイルスワクチン
は生きたウイルス、部分水解したゼラチン、単糖
又二糖類、細胞培養培地、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ
−アルギニン及びPHを約6.0から約6.5に維持する
ための十分な量の生理学的に許容される酸性緩衝
液を含有する。本発明は、生ウイルス、部分水解したゼラチ
ン、単糖又は二糖類、細胞培養培地、Ｌ−グルタ
ミン酸、Ｌ−アルギニン及びPHを約6.0から約6.5
に調節するための十分な量の生理学的に許容され
る酸性緩衝液を含有する液体の安定化したワクチ
ン組成物を目的とするものである。液体ワクチン
は凍結ワクチンを融かす、或いは凍結乾燥したワ
クチンを再構成することによつて入手することが
できる。生ウイルスの例としては、はしか、おた
ふくかぜ、風疹、水痘、ポリオ、又は肝炎等或は
これらの２又はそれ以上組合せたものがあげられ
る。本発明は、重量部基準で、本質的に1.5乃至2.1
部の部分水解した約3000の分子量を有するゼラチ
ン、7.0乃至13.0部の単糖類又は二糖類、0.4乃至
0.6部のインビトロ細胞培養培地、0.35乃至0.7部
のＬ−グルタミン酸、0.75乃至1.3部のＬ−アル
ギニン、及びPHを6.0乃至6.5に維持するのに有効
な量の生理学的に許容される酸性緩衝液から成る
ことを特徴とする液体ワクチン用の安定剤であ
る。水解したゼラチンは、発熱原又は抗原を殆ん
ど、或は全く含まず、かつ可溶性でゲル化しない
蛋白質様のマトリツクスを供給するために用い
る。部分水解したゼラチンは、約3000の分子量を有
する部分的に加水分解されたゼラチンを生産する
ために、分的に加水分解を受けたゼラチンを意味
する。このゼラチンの水解産物はゼラチンとほぼ
同じアミノ酸組成を有する。ゲルを形成するのが
冷水に不溶であるゼラチンと異なり、水解したゼ
ラチンはゲル化しないが、冷水及びミルクやオレ
ンジジユースのような他の通常の液体に溶解す
る。約10％の濃度までの水解ゼラチンを含有する
水溶液は、粘度の増加が殆んどない。約10％以上
の濃度では、粘度は徐々に増加する。約50％の濃
度に於ては、溶液は完全に粘稠となる。水解した
ゼラチンの典型的なアミノ酸組成は次の通りであ
る。アラニン 8.5％アルギニン 7.9％アスパラギン酸 5.7％シスチン 0.08％グルタミン酸 9.5％グリシン 22.8％ヒスチジン 0.77％ヒドロキシプロリン 13−14％イソロイシン 1.3％ロイシン 2.9％リジン 4.2％メチオニン 0.78％フエニルアラニン 2.0％プロリン 13.8％セリン 3.3％スレオニン 1.9％チロシン 0.40％バリン 2.4％部分水解したゼラチンは、ゼラチンを蛋白分解
酵素、例えばパパイン、キモパパイン及びブロメ
リンで酵素的に加水分解することによつて得るこ
とができるが、他の既知の方法、例えば酸加水分
解等を採用することも可能である。適当な水解ゼ
ラチンは、イリノイ州カルメツト市のウイルソン
社からSOL−Ｕ−PROという商品名で入手でき
る。安定剤には単糖、例えばソルビトール又は二糖
類、例えば砂糖、乳糖又はマルトース、が含有さ
れる。砂糖が好ましいものである。Ｌ−グルタミン酸はそのまま又はそのナトリウ
ム塩、グルタミン酸−ナトリウム塩として使用で
きる。Ｌ−アルギニンはそのまま、又はその塩酸塩と
して使用できる。酸性緩衝液は約６から約6.5の所望するPHを維
持する生理学的に許容される緩衝液、例えばリン
酸緩衝液、クエン酸緩衝液であればよい。リン酸
緩衝液が好ましい。安定剤は使用する前に蒸溜水
を用いて重量で約３倍から約８倍、好ましくは約
5.5倍にうすめる。細胞培養培地とは、試験管内に於て細胞の生育
を可能にする栄養培地を意味する。若干の特定の
栄養培地は次にあげるようなものである。培地
199，Morgan等、Proc.Soc.Exp.Biol＆Med.73
巻、１−８頁、1950年；In Vitro、６巻、２号、
1970年；Dulbecco氏の修飾イーグル培地、
Duobecco等、Virology、８巻、396頁、1959
年；スミス等、J.Virol.，12巻、185−196頁、
1960年；In Vitro，６巻，２号、1970年；最低必
須培地（イーグル）、Science130巻432頁、1959
年，RPMI培地，Moore等199巻，519−524頁、
1967年；In Vitro，６巻２号，1970年。本発明の安定剤は、例えばはしか、おたふくか
ぜ、風疹、呼吸合胞体ウイルス（respiratory
syncytial）、パラインフルエンザ１，２及び３
型、巨大細胞封入体ウイルス
（cytomegalovirus）、のような種々の液体のウイ
ルスワクチンに応用し得る。本発明の安定剤組成物は、以下の成分をほゞ指
示した量を含有する。成分重量部／50ml 部分水解したゼラチン 1.5 − 2.1 単糖又は二糖類 7.0 −13.0 栄養培地（固体） 0.4 − 0.6 Ｌ−グルタミン酸 0.35− 0.7 Ｌ−アルギニン 0.75− 1.3 PHを6.0−6.5に調節するための生理学的に許容さ
れる緩衝液 0.05−0.2M 本発明の液体のウイルスワクチンの安定剤の特
に好ましい組成は次の通りである。部分水解したゼラチン 1.8ｇ砂糖又はソルビトール 10.0ｇ倍地 199 0.55ｇグルタミン酸二ナトリウム塩0.5ｇＬ−アルギニン HCl 1.0ｇリン酸ナトリウム緩衝液５ml 1M，PH6.2 水 q.s.（十分量） 50.0ml 更に安定剤は、少量のNaHCO₃及びフエノー
ルレツドを随意に含有するが、含有している方が
好ましい。この場合、NaHCO₃の組成物中の存
在量は約1.2ｇであり、フエノールレツドは約
0.01ｇである。これまでに特定の組成物を記述し
たが、個々の成分の濃度及び比率の変更を意図す
ることができるということが理解されなければな
らない。ワクチンの１容量は、通常約２から約12
容量の安定剤で稀釈される。以下の実施例は本発明を例示するものである
が、それらだけに制限することを意図していな
い。実施例１ −70℃に於て貯蔵しておいた40mlのはしかウイ
ルスワクチンを水浴中25℃で融解し、次いで４−
８℃に保つ。この液体ウイルス濃縮物を各16.5ml
づつの２つの区分に分ける。Ａこのウイルス液体からの16.5mlの区分の１つ
を、予め0.2μmのメンブランを通して滅菌して
おいた以下の安定剤50mlで稀釈する。 1M リン酸緩衝液、PH6.2 5.0ml ソルビトール、25％水溶液 7.1ml 水解ゼラチン、25％水溶液 7.1ml 培地 199 30.7ml 無菌的条件下、及びラミナーフローフード条
件下で組成物の調製を行う。微生物の生育を阻
止するために、ネオマイシン（0.1ml、2500単
位）をこの調製物に添加する。稀釈したワクチ
ンを２mlのガラスアンプル（各アンプルにワク
チン0.7mlづつ）に入れ、即ち炎で封管し、
37℃で保存する。Ｂ第２の16.5mlの区分を第１の例と同様に取扱
うが、安定剤組成物は0.5ｇのグルタミン酸一
ナトリウム塩、1.0ｇのＬ−アルギニンHCl及
びソルビトールの代りに10ｇの砂糖を含有す
る。ワクチンの貯蔵安定性は以下の表に記してあ
る。【表】実施例２ −70℃で貯蔵しておいた25mlのはしかウイルス
濃縮物を、水浴中25℃で融解し、次いで４−８℃
に保つ。この液体ウイルス濃縮物をＢ安定剤組成
物の75mlでうすめ、２mlのガラスアンプルに入れ
る。このアンプルを加熱封管し、２−８℃で保存
する。このワクチンの貯蔵安定性は以下の表に示
してある。２−８℃で貯蔵した液体ワクチンの安定性時間力価（月）（TCID₅₀／0.1ml）０ 3.7 １ 4.1 ２ 3.1 ４ 3.5 ６ 3.3 実施例３以下の表は、実施例１で記述したように組成分
Ａ又はＢの安定剤を用いて、異なる時に調製した
液体はしかワクチンの４個のロツトの安性性を比
較したものである。【表】

Claims

【特許請求の範囲】１重量部基準で、本質的に1.5乃至2.1部の部分
水解した約3000の分子量を有するゼラチン、7.0
乃至13.0部の単糖類又は二糖類、0.4乃至0.6部の
インビトロ細胞培養培地、0.35乃至0.7部のＬ−
グルタミン酸、0.75乃至1.3部のＬ−アルギニン、
及びPHを6.0乃至6.5に維持するのに有効な量の生
理学的に許容される酸性緩衝液から成ることを特
徴とする液体ワクチン用の安定剤。２二糖類がシヨ糖である特許請求の範囲第１項
記載の安定剤。３重量部基準で、本質的に1.8部の部分水解し
た約3000の分子量を有するゼラチン、10部の単糖
又は二糖類、0.5部のインビトロ細胞培養培地、
0.5部のＬ−グルタミン酸、10部のＬ−アルギニ
ン、及びPHを、6.0乃至6.5に維持するのに有効な
量の生理学的に許容される酸性緩衝液から成る特
許請求の範囲第１項記載の安定剤。４二糖類がシヨ糖である特許請求の範囲第３項
記載の安定剤。