JPH03118397A - フイブリノーゲン受容体拮抗物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は一般に細胞付６を調節すること、及び血液血
小板へのフィブリノジン及びその他のタンパク質の結合
な阻害すること、及びＩＩ　ｂ　／　ＩＩＩ　ａフィブ
リノゲン受容体部位への特異的な血液血小板の凝集を阻
害することに関する。フィブリノジンは血漿中に存在す
る糖タンパク管であり、血小板凝集とフィブリノジン形
成とに関りする。血小板はすべての０１Ｍ乳動物の血液
り弓ごみられる細胞様無核断片であり、血液凝固に関与
する。Ｉｌｂ／ＩＩ　ａ受容体部位とフィブリノジンと
の相１１作用は正常な血小板機能に必須であることが知
られている。

血管が損傷を受けると、血小板は崩壊した内皮下層表面
に付着する。付着性の血小板は、次に生物学的活性成分
を放出し、そして凝集する。凝集はトロンビン、エピネ
フリン、又はＡＤＰのようなアゴニストが特異的な血小
板膜受容体に結合することにより始まる。アゴニストに
よる刺激が潜在的なフィブリノジン受容体の血小板表面
での露出をもたらし、フィブリノジンと結合して糖タン
パク質ＩＩ　ｂ　／　ＩＩＩ　ａ複合体を形成する。

血小板凝集と付着の機作を研究するために、天然生成物
および合成ペプチドを使用する試みがなされた。

ルースラーティ（Ｒｏｕｓｌａｈｔｉｌ及びビールシュ
バッハ−（Ｐｉ（！ｒＳｃ＋＋ｈａｃｈｅｒｌ、　ｒ→
ノ°イエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　Ｊ　（１９８７年）
、第２３８巻、第４９１−４９７ページは細胞外基質及
び血液中に存在するフィブロネクチン、ビトロネクチン
、オステオポンヂン、コラーゲン、トロンポスボンジン
、フィブリノジン、及びフオンビレブランド（Ｖｏ口Ｗ
ｉ　ｌ　Ｉｅｂｒａｎｄｌ因子のような付着性タンパク
質についで記述している。これらのタンパク質は、トリ
ペプチドのアルＶニンークリシンーアスパラギン酸をそ
れらの細胞認識部位として含む７このトリペプチドは、
二つの膜に結合したサブユニットを持つペテロタイマー
性タンパク質である構造的に関連する受容体インテグリ
ンに属する少なくとも一つのタンパク質により認識され
る。斤イは、個々のタンパク質におけるトリペプチド配
列の１″ｊ体配座は認識特異性にとって重要であろうと
述べている。

ヂエレシュ（Ｃｈｅｒｅｓｈｌ　、　　ｒプロシーデイ
ンゲス・Ａブ・プショリル・アカデミ−・Ａブ・サイエ
ンス・オプ・ザ・ニー・ニス・ニー（１’　ｒ　Ｏ（：
ＮａＬ’１．八ｃａｄ、ｓｃｉ、１ＩｓＡ）Ｉ　　（１
９８７年）　、　第８４巻、第６４７１〜６４７５ペー
ジはヒト内皮細胞により表されるＡｒｇ−Ｇｌｙ−ΔＳ
　ｐを指向する付着受容体について記述しており、この
ものは血小板１−のＩｌ　ｂ　／　ＩＩＩ　ａ複合体と
構造的に類似するが、抗ｊｉｉ的及び機能的には明らか
に１．１．ｊなる。この受容体はフィブリノゲン、フィ
ンビレブランド因子、及びビトロ？、クチン番こ対ずろ
内皮細胞付着に直接包含される。。

ビールシコバッハー及びルースシー−＞−（。

［ジャーナル・オブ・バーイオロジカル・ケミストリー
（、Ｊ、ｏｆ、旧ｎ１．ｃｈｅｍ、Ｎ　（１９８７年）
、第２ＬＨ２巻（３６号）、第１７２９４〜１７２９８
ページは配列Ａ　ｒ　ｇ−Ｇ　Ｉ　ｙ　−Ａ　ｓ　ｐ　
−Ｘ　ａ　ａ　０）　Ｉγ体化学的影響を記述しており
、ここにおいてＸａａはトリペプチド配列Ａｒｇ−Ｇｌ
ｙ−Ａｓｐを含むペプチドの結合特異性−ヒにあるＭｅ
ｊ、Ｃｙｓ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ又はＧ　ｌ　ｙ以外の２０
の天然り一アミノ酸の一つである。著者は、Ｐ　ｃ　ｎ
とＣｙｓとの間のジスルフィド架橋の形成による配列Ｇ
ｌｙ−Ｐｅｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＡｓｐＳｅｒ
−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ａｌａ　（Ｐｅｎはペニシラミンで
ある）の環化は、フィブロネクチンへの付着を阻害する
このペプチドの効力を失わせることを示した。［プロシ
ーデインゲス・才ブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・
サイエンス・オブ・ザ・ニー・ニス・ニー］　（１９８
４年）、第８１巻、第５９８５〜５９８８ページにおい
て、同し著者は付着促進活性を保持するフィブロネクチ
ンの細胞認識部位の変形について記述している。テトラ
ペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−ＡｓｐＳｅｒは、大きな付着
性糖タンパク質のフィブロネクチンにおける細胞によっ
て認工される最小の構造として説明されている。−Δｒ
ｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−３ｅｒ一部分を持つペプチドが米
国特許第４，５８９，８８１号及び第４．６１４．５１
７１’。

に記述されている。、−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ΔＳρＲＣ式
中、ＲはＴｈｒ又はＣｙｓ叉は他のアミノ酸から選択さ
れる）部分を持ら、かつフィブロネクチンと同じ細胞付
着活性を持つペブグードが米国特許第４，５７８，０７
９号に記述されている。

ラゲリ（Ｒｕｇｇｅｒ　ｉ　）等、［プロシーデインゲ
ス・オブ・ナショプル・アカデミ−・オブ・サイエンス
・オブ・ザ・ニー・ニス・ニーＪ（＋９８６年）、第８
３巻、第５７０８〜５７１２ページは配列Ａｒｇ−ＧＪ
ｙ−ＡＳＴＩ−Ｖａｌを含み、血小板へのフィブリノグ
ン結合をＩＩｌ、１害する１０残Ｊ、【の長さに設計さ
れた一連の合成ペプチドについて記述している。

トリペプチド配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ΔＳ　ｐが、フィブ
ロネクチンとビトロネクチンの細胞付着促進効果を倍増
するか又は阻害することができるある種のポリベブヂド
中に存在することは公知である。しかしながら、このト
リベブＪ−ドＡｒ・ｇ１ Ｇ　ｌ　ｙ−八Ｓｐは低い活性のみを持つ、、ボリベブ
ヂド中におけるその他のアミノ酸の結合特異性に対する
影響については、はとんど解明されていない。本出願人
は活性のある血小板凝集阻害剤であるトリペプチド配列
Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを含む小さな環状ペンタペプチ
ドを作り出した。

本発明は、次の構造式 １式中、 ＡはＩＩ、）２シルアミド基、アミノアシルアミドＪ、
（叉はＮ−メグルアミノアシルアミド浩であり、ＲとＲ
１とは独立的にＨ、メチル基、エチル基又は炭素数３〜
４の低級アルキル基であり、Ｘ−ＹはＳ−５，ＣＨ２−
５，５−ＣＨ２、ＣＩ（２ＣＨ２、ＣＨ、ＣＦ（２ＣＨ
２、ＣＨ、−５−８、ＣＩ＋　、−３−５−Ｃ１１、、
Ｓ−呂−ＣＩＩ　。

０ であり、 ■〕はアルギニン、ホモアルギニン、グアニドアミノ醋
酸又はグアニドアミノプロピオン酸の■。

異性体であり、 ＥはＨ，ＣＯＯ１ｌ、ＣＯＮ　１１２、ＣＯＮ　Ｉｔ　
Ｒ２ＣＯＮＲ３Ｒ’（式中、Ｒ２１；ｉ炭素原子Ｗ９１
−４のアルキル基であり、Ｒ４Ｒ’は炭桑原ｒ数１〜４
のアルＶル基であるか、もしくはＮ　ｌ　３１＋　’は
第二級アミノ酸又は である）である］のノイブリノーグン受容体拮抗物質で
ある。。

より好ましい化合物は、Δがアシルアミド括であり、Ｉ
＜が１１又はメチル基であり、Ｈ’が１１又はメチル基
であり、Ｘ−ＹがＳ−５，ＣＩ＋２−５−８又はＣＩ　
、　ＣＩ−１２であり、１：、力筒１、ＣＯＯＩＩであ
り、Ｉ〕が１、−アルギニンである化合物である。

１ より好ましい化合物は ｊ　ｉｌ Ａｃ−ｐｅｎ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ Ａｓｐ ｖｉｉｉ） Ｃ Ｃ”、　、ｙ　ｓ 　ｒ　ｇ １ 　ｓ　ｐ ｊｘ） ｉｌ Ａｃ− （Ｎ−ｍｅ　Ｌｈｙ　Ｉ−Ｃｙｓ）− Ａｒｇ−Ｇｌ　　ｙ Ａｓｐ Ｃｙ　ｓ　−０１１、 ｘｌｌ） Ａｃ−Ｃｙｓ Ａｘ・ｇ−Ｇ　　Ｉ　　ｙ △Ｓ　　ｐ −（Ｄ−Ｃｙｓ） Ｎ］］　２、 ｘｉｉｉ） △ｃ−Ｃｙｓ−Ａｒ　ｇ Ｐ　ｅ　ｎ　−ＯＨｌ Ｇｌｙ−へ５ｐ ｘｉｖ） ＶＩ Ａｃ　−Ｐ　ｃｎ−Δｒ’　ｇ −Ｐ　ｅ　ｎ　−Ｎ　Ｈ２、 Ａｃ−（＋）−Ｐｅｎ） Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｏｌｌ。

に　１　ｙ Ａ　ｓ　　ｒ） Ａ　ｒ　ｇ　−Ｇ　　Ｉ　　ｙ ｖｉｌ △ｃ−Ｃｙ　ｓ Ａ　ｒ・ｇ−Ｇ　ｌ、ｙ ΔＳ　　ｒｌ ：３ ｘｖｉｉｌ　　　Ａｃ−Ｃｙｓ−（Ｄ−Ａｒｇ）−Ｇｌ
ｙ−Δ５ｐ−Ｃｙｓ−Ｎ１１．である。。

別記しない限り、すべてのアミノ酸はＩ４−異性体であ
る。

もっとも好ましい蝉状ベブＪドは酸Ｉ［ニ態、特に化合
物ｖｉ、ｖｉｉ、ｘ、ｘｉ、ｘｉｉｉ及びＸＶである。

Ｐ　Ｃｎは で表されるペニシラミンである。

ホー〔シスデｆンは １１ で表される。

また本発明は、本発明のフィブリノゲン受容体拮抗物質
と一つ又はそれ以上の丈理″ｙ゛的に受容１１）能な担
体、例λ−ば薬理ｉ゛的に受Ｈｌ’Ｉ能な［）１１例え
ば７４の食ｌム水とを含む組成物をも含み、前記食ｔｌ
水は血小板凝集の阻害を促進するだめの連続的な静脈内
叉は絆１ｊ叉は静脈内ポラスｆｂｏｌｕｓｌ投すに適し
ている。。

本発明は、本発明の組成物のイ１°効晴を連続的な静脈
内又は経口又は静脈内ポラス法のいずれかにより患古に
投与することを含む血小板凝集の阻害ツノ法にも関する
。

本発明の化合物は、フィブリノゲン誘導曲小扱凝集なハ
１］害する血小板受容体拮抗物質である。、　ｃこれら
の化合物は当該技術分野で公知の同相合成、又は゛ｊｊ
該技術分野で公知の液体法により製造される〔ニューラ
ス（Ｎｅｕｒａｊｈ）　、　ヒル（Ｉｌｉｌｌ）及びベ
ーター（Ｂｏｅｄｅｒ１編集「ザ・プロテインスｆｉ’
ｔ＋ｅＰｒｏＬｅｒｉｎｓｌ　Ｊ　　（１９７６年第３
版、第２巻、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ
　Ｐｒｅｓｓｌ刊１゜これ　５ らの化合物は活性の持続が比較的短（、このことにＪ：
り短かい！す１間の血小板凝集の予防が望まれる場合の
治療に使用するのが望ましい。また、これらの化合物は
血小板計数な杆しく消耗しないことにより特に有利であ
る。

本発明の化合物はメリフィールド （Ｍｅｒｒｉｒｉｃｌｄ）、［ジャーナル・オブ・アメ
リカン・ケミカル・ソザエティー（Ｊ、　Ａｍ、　（：
ｈｅｍ、　Ｓａｃ、　ｌ　Ｊ（１９６４年）、第８５巻
、第２１４９ページに記述されているような同相ペプチ
ド合成法を使用して製造することができるが、ホーテン
（Ｉｌｏｕｇｌ＋１．ｅｎｌ、「ブローシーデインダス
・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・ザイエンス・
オブ・ザ・ニー・ニス・ニー」　（１９８５年）、第８
２在、第５　］　３２ページに記述されているようｔｒ
当該技術分野で公知のその（１１！の同等な化′？合成
法も使用することができる。同相合成法は、リビア（Ｒ
ｉｖｉｅｒｌ等に１９８２年１月２１日発行された米国
特許第４，２４４，４１４６号に一般的に記述されてい
るように、保護されたアミノ酸を適当１　　［ｉ な樹脂に結合することによりペプチドのＣ末端から開始
される。この開示は参各としてここに絹み入れる。液体
法はニューＬ１ス等、第２？；１、第１０６〜２５：９
ページに記述されているように使用することができる。

この−・収約な種類の合成法の例は、米国特許第４，３
０５，８７２吋および第４．　、’ｌ　ｌ　（５，Ｒ！
Ｊ　１号に記述されている。。

これらのポリペプチドを合成する場合、そのα−アミノ
基が適当に保護されたカルボキシル末端アミノ酸をクロ
ロメチル化されたポリスチレン樹脂などに結合する。塩
化メチレン中でトリフルオＬ１酢酸を使用するようなツ
ノ法では、α−アミノ保保護金除去した後に、合成の次
上程に進むことができる。公開された文献に記述されて
いるように、特５°シ的アミノ保護〕１（の除去のため
に、その他の１５準的な分解用試薬および条件を使用・
ｊ−ることかできる。

次いで、残りのα−アミノ及び側鎖保護アミノ酸を所望
の順序で順次縮合により結合して樹脂に連結した中間体
化合物を（する。

　７ つのアミノ酸、又はアミノ酸とペプチド、又はペプチド
とペプチドとの縮合は、アジド法、混合酸無水物法、Ｉ
）ＣＣ（ジシクｔ」へキシル−カルボジイミド）法、Ｂ
ＯＰ　（ベンゾトリアゾールｌ−イルオキシトリス（ジ
メヂルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフＪ
−ト）法、活性化エステル法（ｐ−ニトロフェニルエス
テル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル法、シ
アノメチルエステル法等）、ウッドワード（Ｌｕ＋ｄｗ
ａｒｔＪ　ｌ試ｚＫ法、カルボニルシイミグゾール法、
酸化還元法のような通常の縮合方法により実行すること
ができる。同相法でペプチド！ｚｉｉを延長する場合に
は、ペプチドをその０末端アミノ酸で不溶性担体に付着
させる。不溶性担体としては、Ｃ末端アミノ酸のカルボ
キシ基と反応し、そしてその後に容易に分解される結合
を形成するような、例えばりｕ　［１メヂル樹脂および
ブＬノセエＪ−ル樹脂のようなへロメチル樹脂、ヒドロ
キシメチル樹脂、アミツメデル樹脂、ベンズヒドリルア
ミン樹脂、及び１．−アルキル才ギシカルポニルヒドラ
！８ シト樹脂を使用することができる。

ペプチドの化学的合成に共通していることは、種ノｌな
アミノ酸の反応ｆ１：側鎖を適゛１１な保護ノ、（を用
いて保護し、鎖が完全に組み立てられた後にＩＩ！後に
保護基を除くことである。同しく、アミノ酸又は断片の
ａ−アミノ基を前記本体がそのカルボキシ基において反
応する間保護し、次いで（Ｉ−アミノ保護基を選択的に
除いてその位置で以後の反応を実行できるようにする。

従って、合成の一段階としで、側鎖保護〕、Ｌ−を持つ
谷ｆΦアミノ酸パノ９Ｌをイ１するペプチド鎖中の望ま
しいｉ列中に位置するアミノ酸残ノ１（を含も中間体化
合物を１１“成４゛ろのが１１１通である。次いで、こ
れらの保護騒を通ＨＩＨ，はぼ同特に除去して所望の！
１：成物を′１：成し、次いで精製する。

（１−及びω−側鎮アミノＪ、（の保、惠に使用できる
保護Ｊ、ｌｉの例は、ペンシルオギンカルボールＪ、Ｉ
；　（以後Ｘと略称する）、イソニコＪ−ニルオギシ力
ルポニルノ＋’：　（ｉ　Ｎ０Ｃ）、ｏ−り冒ｌＩベン
シルＡｒジカルボニルＪ、ｔ、　［Ｚ　（２−Ｃ，Ｉ　
）　］　、　］ｐ−ニトロベ１ ンシルオキシ力ルボニル基［Ｚ　（ＮＯ２）　］　。

［）−メｌ−ｔ−シペンシルオギシカルボ；ル基［Ｚ　
（ＯＭｅ）］　、］ｔ−ブトキシカルボニル基ｌＪｏｅ
）、Ｌ−アミルオキシカルボニル基（Δｏｃ）、４ソボ
ルニルオギシ力ルボニル基、アダマンｆ゛ルオヤシ力ル
ボニルＪ、ｌ）、２−（４−ビフェニル）−２−プロピ
ルオキシカルボニル基（Ｂｐｏｃ）、９−フルオレニル
エｌ−キシカルボニルＭ（Ｆｍｏｃ）、メチルスルホニ
ルエトキシカルボニル基（ＩＬ４ｓｃ）　、　　ｌ−リ
フルオロアセチル基、フタリル基、ホルミルＪ５．２−
ニトロフェニルスルフェニル基（ＮＦＳ）、ジフェニル
ホスフィノヂオイル基（Ｐｐｔ）、ジメチルホスフィノ
ヂオイル基（Ｍｐ＋；）などである。

カルボキシ基の保護基の例としては、例えばペンシルエ
ステル（Ｏｆ３ｚｌ）、シクロヘキシルエステル（Ｃｈ
ｘ）、４−ニトロベンジルニスデル（ＯＮｂ）、ｔ；−
ブＪルエスデル（０１ＪｕＬ）。

４−ビリジルメＪ−ルエスデル（ＵＰｉｃ）などを）ト
げることができる。アミツノ、（およびカルボ−■シフ
　０ ル基以外の官能Ｊ、（を４１−４−る゛〕′ルＶ−ン、
シスメイン、及びセリンのような特殊なアミノ酸は、個
／／の場合の要求に応して適当な保護ノ１（で保護する
のが９１ましい。例λば、アルＶニン中のグアニジノ基
はニトロ基１．ｐ−トルエンスルホニル基、ベンシルＪ
’４シカＪレボ」−ル基、アグーンンＪ−ルＡキミ／カ
ルボニル基、ｐ−メトキシベンゼンスルホニル基、４−
メトキシ−２，６−ジメＪルベンゼンスルホニル基（Ｍ
ｄｓ）、ｌ、３．５−トリメデルフェニルスルホニル基
（Ｍ　＋：　ｓ　）などで保護することができる７シス
テインロのチオール鵡はベンジル基、ｐ−メトキシペン
シル基、トリフェニルメヂル基、アセチルアミツメデル
Ｊ山、エチルカルバモイル基、４−メチルベンシルノ、
（，２，４，＋５１〜リメＪ−ルペンシルＪ、Ｌ：（’
Ｉ’ｍｂ）などで保１８μすることができ、そしＣセリ
ン中のヒト［１＼−シルＪ、Ｉ−はベンジル基、言、−
ブヂルＪ、（、ｊ′セチＪしＪ、（、デトラヒドロビラ
ニル基などで保護することができる。

スヂュワート（ＳＬＩ！ｗａｒＬｌ及びヤング（Ｙｏｕ
ｎｇｌ　　’に１ ［ソリッド・フェース・ベブクーｒド・シンセシスｆｓ
ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎＬｈｅ
ｓｉｓｌＪ　［１９８４年、ピアス・ケミカル・コンパ
ニー（ｅＩｅｒｃｅＣＩ＋ｅｍｉｃａｌ　Ｃｎｍｐａｎ
ｙｌ　　（イリノ’−１１１゜）、ロックフォード（Ｒ
ｏｃｋｆｏｒｄ））　ｆす］はペプチド製造ノブ法に関
する詳細な知識を提供している。α−アミノ基の保護は
第１４〜１８ページに、側鎖封鎖は第１８〜２８ページ
に記載されでいる。アミン、ヒドロキシル及びスルフヒ
ドリル官能基の保護基の表は第１４９〜１５１ページに
記載されている。

これらの記載は参考としてここに組み入れる。

所９ノのアミノ酸配列を完ｒした後に、液体ＩＩ　Ｆの
ような試薬で処理して中間体ベブタイドを樹脂支持体か
ら除く。前記の液体ＨＦはレジンからペプチドを分離す
るだけでな（、すべての残りの保護基を側鎖から分解し
、叉このらのは環化反応に影響しない。潜在的に反応Ｖ
［の側鎖官能Ｊ２（は。

ＩＩ　Ｆに対して安定な封鎖基で保護される。このペプ
チドは幾つかの公知の方法の任意の一つによって〔シフ
１Ｉ−ダー　（Ｓｃｌ＋ｒｎｄｅｒｌ及びルブケ（Ｌｕ
ｈｋｃ１２ 著「ザ・ペブタイデス：メソッズ・オブ・ペブタイド　
シンセシス（Ｔｈｅ　Ｐｉｐｌ；１ｒｌｔ！ｓ：Ｍｃｌ
、ｂｏｄｓ　ｏｒ＋’１ｐＬｉｄｃ　５ｙｎＬｌ＋ｅｓ
ｉｓｌＪ　　（ｌ　！ｌ　（５Ｆ１年、第１へ、アカデ
ミツク・プレスにュ−・二１−り）　ｔｌｌ）　、第２
７１〜２８６ページ参照、前記文献の内容は参考とし゛
にこに組み入れる１、例えば、Δ（：０中においてＥｌ
ｆつ素を使用するか、叉は希Ｎ　１１４　（ｌ　Ａ　Ｃ
緩衝液中においてｐ　ＩＩ　８で空気酸化によりシス−
１イン残基の間にジスルフィド橋を形成させることによ
り環化される。次いで、ポリペプチドはリビア等著［ペ
プタイデス・ストラクチｙ−’ｉ’−アンド・バイオロ
ジカル・フッ・ンクシコンｆｌ’ｅｐＬｉｄｃ眠５ｔｒ
ｕｃｔｕｒｅ　　；ｕ＋＋Ｊ　　Ｉｌｉｎｌｏｇｉｔ：
ａｌ　　ＩゞｕｎｅＬｉｏｎｌ　Ｊ　（１’、）　７　
り年）、第１２５〜１２８ページに記述されでいるよう
にゲル透過と引き続く調製用目１〕１．Ｃにより精製す
ることができる。

実施例１ １１ｎｅ（ｌ置］「１．−ブＪルカルボールノ、０及び
１シコ３ ｐＭｌ）（ｐ−メトキシベンジル基）で保護したシステ
ィンを、ＮＩ＋、−Ｍｌｌσ０（４−メヂルベンズヒド
リルアミン架橋ポリスチレン樹脂）と結合して ＩＩ　Ｍ　＋１ ｆｌｏｅ　−Ｃｙｓ　　　　　　　　Ｎｉ１−Ｍ１ｌｌ
ｌ■を形成する。α−アミノｌ１ｏｃ保護基をトリフル
オロ酢酸と塩化メチレンとを使用して除＜（一方Ｃｙｓ
のＰＭＨによる保護は残る）。脱保護したシスナインを
ジメチルホルムアミド中においてジイソプロピルエチル
アミンで中和する。次いで、ＩＪ　ｏ　ｃ保護Ａｓｐ（
ペンシル）　　（Ａｓｐ　（ｌｌｚ］ｌ）をジシクロへ
キシルカルボジイミドを用いてシスティンにカップリン
グし、次いで１〜リノルオＬノ酢酸と塩化メチレンとで
脱保護する。次いで、Ａｓｐをジイソプロピルエチルア
ミンで中和する。このジシクロへキシルカルボジイミド
を用いるカップリング、トリフルオロ酢酸及び塩化メチ
レンによる脱保護、及びジイソプロピルエチルアミンに
よる中和の段階的方法により、１３０Ｃ保護４ に１ｙ、Δ＋ｇ及びＣ、ｙ　８残Ｊ、（が順次に結合さ
れる。川にＡｒｇを４−１−ルエンスルホニルノ、Ｉ−
で保護しくＡｒｇ（１’ｏｓ）ｌ　、最後のＣ０ｙｓ残
基を再度さらにｐ−メトキシベンジル基で保護する。

次いで、最後のＣ、ｙ　ｓを酢酸無水物でノ’　ｅ−ｆ
−塩化する。

アセ−１ル化の後に、次のペプチド樹脂が形成される。

樹脂からのペプチドの分解はＩＩ　Ｆ　／アニソール（
９・ｌ　　（ｖ／ｖ））を使用して達成され、が形成さ
れる。

環状構造は、シスライン残基の間のジスルフィド架橋の
形成により形成される。ペプチドを等イ温で５０〜８０
％　Ｉ（ＯＡｃ：Ｈ□０に溶解し、ＡＣＯＩＩ中で撹拌
しながら１２〜＋　５　”ｉ稙のヨウ素の溶液を速やか
に添加してヨウ素の２．２５５ ｍｇ／ｍｌの最終濃度とする。１〜２時間の反応の後に
、過剰の■２とＡ　ｃ　ＯＨとを真空下において回転蒸
発器で除き、環状ペプチドを含む水溶液をＯ１％Ｔ　Ｆ
　ＨＨ２０−ＣＨ１ＣＮグラジェントで溶離する調製用
ＨＩ）　Ｌ、Ｃを使用して精製する。最終のＴ　Ｆ　Ａ
塩生成物をＢｉｏＲａｄ　　ＡＧ３ｘ４Δ（酢酸サイク
ル）イオン交換カラムに通して）ｌ　ＯＡ　ｃ塩に変換
する。完成したペプチドは八にｃＬｙｌ−Ｃｙｓ−Ａｒ
Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｎｌｌ□・　１ＩＯＡｃ
塩である。

室温で５０〜８０％　ＨＯＡｃ　：　８２０に溶解する
代りに、遊離のＳ　ｆ（ペプチドを１〜５％ｔｌ　ＯＡ
　ｃに約２　Ｂ／ｍｌの濃度に溶解し、７１５Ｎ１１．
Ｏｌｌでｐ　Ｈ７〜８．５にする。環化は２５°でＩ〜
４時間活発に撹拌する間に達成される（反応を促進する
ため銅線の小片を添加するのが好ましい）。次いで反応
混合物を前述のように濃縮する。

　６ 東」Ｕ凱λ １１　ｎ　ｃ　−Ｇ　Ｉ　、ｙ−〇　−Ｐ　ａ　ｍσ◇
から出発し、（ｒアミノＩＪ　ｏ　ｃ保護）、（をトリ
ツル：ｔ　［Ｊ　ｔＹ＋１酸とｊ島化メヂレンとを使用
して除く。脱保護したグリシジをシイツブ１ノビルエチ
ルアミンとシメＪ−ルホルノ、アミドとで中和する。次
いで、ｌ（０（：　Ｉｉ　Ｊ△「・ｇ（１”０８）を１
−ヒト［Ｊヤシベンゾトリアゾールを用いてＧ　Ｉ　ｙ
にカップリンクし、次いでトリフルオロ酢酸と塩化メヂ
レンとで脱保護する。次いでＡｒｇをシイツブ１ノビル
エチルアミンとジメチルホルムアミドとで中和する１、
ジシクロヘ−“ジルカルボジイミドを用いてカップリン
グし、１−リフルオロ酢酸と塩化メヂレンとで脱保護し
、ジイソプロピル−「、−１ルアミンで中和１−る段階
的な方法により、Ａｒ・ｇにＡ　ｈ　ａ及び△ｈ　Ｆｌ
に△Ｓ　ｐの順序でｎｏｃ保Ａ　Ａ　ｈ　ａ及びＡｓ　
ｐ　（ＮＯ２ＩＩＺ）を順次結合して 　　７ を形成する。

レジンからのペプチドの分解は、ＨＦ／アニソール（９
：　ｌ　　（ｖ／ｖ）　）を使用して達成され、 を形成する。

次いで環状構造は次のようにして形成する。。

線状ペプチドをＮ−エヂルーＮ’　−（３−ジメヂルア
ミノプロビル）カルボジイミド、１−ヒドロキシベンゾ
トリアゾール、ジメチルホルムアミド及びＮ−メチルモ
ルホリンで処理してＮｌｌ／。

ｃｙｃｌｎ　（Ａｓｐ−Ａｈａ−八ｒｇ−Ｇｌｙｌを形
成し、最後にＺ　ｎ　／　ＨＯＡ　ｃ又はＨａ　／　Ｐ
　ｄ活性炭で脱保護して 　８ を得る。

環化されたペプチドを５０％　ｔｌ　ＯＡ　ｃ水溶液を
使用するゲル透過及び０．１％′１”１・′△　１１２
Ｏ−Ｃ１１３ＣＮグラジエントを使用ヂるＩＩ　Ｉ’　
１．　Ｃによって精製する。最終の’「Ｉ−’Δ塩１１
−成物を１ｌｉｎｌｌａ＋ＩＡ　Ｃ；　３−　Ｘ　４Δ
（耐酸リイクルｌｒＡン父換カラムに通過させて１１０
Δ０塩に変換する。。

治療的処理 本発明のペプチドは、細胞付着活性に関連するインテグ
リンタンパク質−複合体機能を阻害するために使用する
ことができる。それらはヒト又は哺乳動物の血小板凝集
又は付着の阻害が望まれる場合に患イに投Ｉｔすること
ができる。

本発明のポリペプチドは楯悩から速やｈ′１４に除かれ
、そして特に効力の持続が短い強抗ト［１ンビン作川が
必要とされる場合に血小板凝集を１１１１害する　９ のに有用である。従って、それらは末梢動脈の外科手術
（動脈移植、頚動脈管内膜切除術）及び動脈と器官の処
置、及び／又は血小板の人工表面との相互作用が血小板
の凝集と消費番こつながる心臓血管系外科手術に用途を
見出だすことができる。

凝集した血小板は血栓及び血栓塞栓を形成することがあ
る。本発明のポリペプチドは血栓及び血栓塞血栓の形成
を予防するためにこれらの外科的患者に投与することが
できる。

体外循環は血液に酸素添加するため心臓血管系手術にお
いて１１常的に使用される。血小板はこの体外循環の表
面に付着する。イ・１着は血小板股上のＧ　Ｉ”　ＩＩ
　ｂ　／　ｌ！ｌ　ａと循環の表面に吸着されたフィブ
リノゲンとの間の相互作用に依存する（グルツコ（ＧＩ
＋＋５Ｚｋｏ）等［アメリカン・ジャーナル・オブ・フ
ィジオロジ−（Ａｍｃｒ、Ｊ、Ｐｈｙｓｉｎｌ、１１　
（１９８７年）、第２５２巻（Ｈ号）、第６１５〜６２
１ベージ）。人工表面から放出される血小板は止血機能
が損われていることを示している。本発明のポリペプチ
ドはイ・１着を予防するために投与するこ０ とができる１゜ これらのポリペプチドのその伯の用途は、血栓溶解治療
の間及び治療後における血小板血栓ｆｉ’Ｎ、血栓塞栓
症及びＩｆｆ閉鎖の子１ｕｊ、並びに冠状及びその他の
動脈の血管形成術後ａ２びに冠状動脈バイパス処置後に
おける血小板血栓症、血栓塞栓症及び再閉鎖の予防を含
む。本発明のポリペプチドは心筋梗塞症の予防に使用す
ることもできる。

これらのポリペプチドは、連続的な静脈内又はポラス注
射法もしくは経１」法を含む血流中に相〕１１な社が供
給される仔、急の通常の方法で投１ｊすることができる
。本発明の組成物は血小板凝集の阻害な」ヱ成するため
器、二適゛１１な本発明のベブーｆド及び某理学的に受
容可能な担体、例えば７４の１）１１水準にある食塩水
を含む。それらは血小板凝集を１；［１害するためにプ
ラスミノゲンフ′クチベーター又はストレプトキナーゼ
のような血栓溶解剤と組み合わせることができる。それ
らはヘパリン、アスビノン叉はワルファリンのような抗
層ｉ口］剤と組み合わセることかできる。現在、静脈内
投ｌすは好よし１ い投与径路と考えられている。それらは水溶性であり、
従って溶液として有効に投与することかできる。

−・つの使用例として、ペプチドの適当量を血管形成術
を受ける心臓発作患者に静脈内投与する。投与は血管形
成術前数分の間に行い、血小板凝集を阻害する充分量、
例えばｋｇ当たり約０．０５〜３０　ｔｒ　Ｍ、好まし
くはｋｇ当たり約Ｏ３：３〜３０μＭの安定状態の血漿
濃度を達成する量を投与する。この量が達成されると、
１分間当たりｋｇ当たり約１〜１００ηＭ、好ましくは
１分間当たりｋｇ当たり約１０〜３０７７Ｍの注入を血
小板凝集を阻害するために維持する。患者がバイパス外
科毛調を受ける必要がある場合には、投５を直ちに中口
−してもよく、これによりその影響が投与中＋ｈ後の数
時間持続するアスピリン又はモノクローナル抗体のよう
な他の薬剤により引き起こされるｏｆ能性のある外科り
術中の混乱を起こさないこととなる。

本発明は本発明のベブグードと組織型プラスミノ２ ゲンアクチベーター又はストレプトキナーゼとを含む医
薬組成物をも含む。又、本発明は本発明の組成物の有効
量を患者に投与することを含む患者における血栓溶解の
促進及びｉｌＴ封鎖の予防のための方法をも含む。

本発明はその思想又はその木で１的な属性から離れるこ
となく他の特別な形態で具体化することができる。従っ
て、前述の特別な実施例は本発明の範囲を限定するもの
と解釈されるべきではない。

；１３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．次の構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 ＡはＨ、アシルアミド基、アミノアシルアミド基又はＮ
   −メチルアミノアシルアミド基であり、 ＲとＲ＾１とは独立的にＨ、メチル基、エチル基又は炭
   素数３〜４の低級アルキル基であり、 Ｘ−ＹはＳ−Ｓ、ＣＨ＿２−Ｓ、Ｓ−ＣＨ＿２、ＣＨ＿
   ２ＣＨ＿２、ＣＨ＿２ＣＨ＿２ＣＨ＿２、ＣＨ＿２−Ｓ
   −Ｓ、ＣＨ＿２−Ｓ−Ｓ−ＣＨ＿２、Ｓ−Ｓ−ＣＨ＿２
   であり、 Ｄはアルギニン、ホモアルギニン、グアニ ドアミノ酪酸又はグアニドアミノプロピオン酸のＬ−異
   性体であり、 ＥはＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ＿２、ＣＯＮＨＲ＾２、Ｃ
   ＯＮＲ＾３Ｒ＾４（式中、Ｒ＾２は炭素原子数１〜４の
   アルキル基であり、Ｒ＾３Ｒ＾４は炭素原子数１〜４の
   アルキル基であるか、もしくは ＮＲ＾３Ｒ＾４は第二級アミノ酸又は ▲数式、化学式、表等があります▼ である）である〕のフィブリノゲン受容体拮抗物質化合
   物。 ２、Ａがアシルアミド基であり、ＲがＨ又はメチル基で
   あり、Ｒ＾１がＨ又はメチル基であり、Ｘ−ＹがＳ−Ｓ
   、ＣＨ＿２−Ｓ−Ｓ又はＣＨ＿２ＣＨ＿２であり、Ｅが
   Ｈ、ＣＯＯＨであり、ＤがＬ−アルギニンである請求項
   １記載の化合物。 ３．▲数式、化学式、表等があります▼である請求項１
   記載の化合 物。 ４．▲数式、化学式、表等があります▼である請求項１
   記載の化合物。 ５．▲数式、化学式、表等があります▼である請求 項１記載の化合物。 ６．▲数式、化学式、表等があります▼である請求項１
   記載の化合物。 ７．▲数式、化学式、表等があります▼である請求項１
   記 載の化合物。 ８．▲数式、化学式、表等があります▼である請求項１
   記載の化合 物。 ９．▲数式、化学式、表等があります▼である請求項１
   記載の化合物。 １０．▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項１記載の化合物。 １１．▲数式、化学式、表等があります▼である請求項
   １記載の 化合物。 １２．▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項１記載の化合物。 １３．請求項１記載のペプチドと医薬的に受容可能な担
   体とを含む哺乳動物におけるフィブリノゲン誘導血小板
   凝集の阻害用組成物。 １４．請求項１３記載の組成物を患者に投与することを
   含む哺乳動物血小板へのフィブリノゲン結合の阻害方法
   。