JPH03117490A - 疾患モデルおよびワクチンに使用するプロトタイプＦｅＬＶの分離体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野〕 この発明は、一般には、ＦｅＬＶの様々なりローン、お
よびそれらのワクチンとしての使用ならびに疾患モデル
における使用に関する。

〔従来の技術〕

レトロウィルスは、エンベロープを持っＲＮＡウィルス
の大きな一群であって、これらは数多くの特異的な宿主
哺乳動物に侵入する。これらのウィルスは、さまざまな
機構によって感染し、しばしば重篤な疾患を引き起こし
、それらの構造中に共通のエレメントを有する。レトロ
ウィルス群は、十１ｌＮＡダイマー（ｓｓＲＮＡ　）か
ら成り、それらフ。

ロウィルスのＤＮＡ中間体の中に長鎖の同方向末端反復
配列構造（ＬＴＲ）ならびにキャプシドタンパクをコー
ドするゲノム（ｇａｇ遺伝子）、逆転写酵素ならびにイ
ンテグラーゼ機能（ｐｏ　１遺伝子）、および膜エンベ
ロープ遺伝子（ｅｎｖ）を有する。一定のウィルスでは
、オーブンリーディングフレームがあって、特異的な機
能のタンパク質および共通遺伝子の機能をコードするこ
とが示されている。

ネコ科の白血病ウィルス（ＦｅＬＶ）は、異型交配ネコ
の一連のリンパ性網内疾患を引き起こす。それらの疾患
には、リンパ肉腫、白血病、再生不良性貧血、を髄形成
異常、およびネコの後天性免疫不全症候群などが挙げら
れる（Ｈａｒｄｙら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、　３６：５
８２．１９７６：　Ｈａｒｄｙ　ｒネコ白血病ウィルス
（Ｆｅｌｉｎｅ　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｖｉｒｕｓ）　Ｊ
　Ｈａｒｄｙ＋　Ｅｓ５ｅｘ。

ＭｃＣｅｌｌａｎｄ編（Ｅｌｓｅｖｉｒ／Ｎｏｒｔｈ　
ｌ１ｏｌｌａｎｄ、　１９８０）＋３−３１ページ；　
Ｈｏｏｖｅｒ、　Ｒｏｊｋｏ、　０１ｓｅｎ　ｒネコ白
血病」０１ｓｅｎ編（ＣＲＣＰｒｅｓｓ＋　Ｂｏｃａ　
Ｒａｔｏｎ、　Ｆ１ａ−＋　１９８０）。

３２−５１ページ；　　１ａｒｄｙおよびＥｓ５ｅｘ、
　Ｐｒｏｇ、　Ａｌｌｅｒｇｙ＋３７：３５３．１９８
６）　、　ＦｅＬＶゲノムは、キャプシドタンパクをコ
ードするｇａｇ遺伝子、プロテアーゼの逆転写酵素なら
びにインテグラーゼをコードするｐｏｌ遺伝子、および
ｇｐ７０ならびに［）１５Ｅウイルスのエンベロープタ
ンパクをコードするｅｎｖ遺伝子から成る１本鎖ＲＮＡ
の２量体（６０−７０５）である。その他のレトロウィ
ルスでは、感受性細胞をＦ　ｅ　！−Ｖで感染させた場
合（ｉｎ　ｖｉｖｏおよびｉｎ　ｖｉｔｒｏ）、上記の
ゲノムが２本鎖ＤＮＡコピー中に転写されてから、その
コピーが細胞のＤＮＡに運ばれ、５’ｌ、ＴＲ（長鎖の
同方向末端反復配列）ｇ　ａ　Ｂ−ｐ　ｏ　Ｉ　−ｅ　
ｎ　ｖ　−Ｌ　Ｔ　Ｒ−３’領域に組み込まれたプロウ
ィルスとなる。そして、この挿入壁プロウィルスは、Ｆ
ｅＬＶＲＮＡおよび最終的に感染性のヴイリオンを産生
ずる鋳型として機能する。

Ｆ　ｅ　Ｌ　Ｖは、ウィルスの干渉作用ならびに中和能
、およびネコの母集団間で著しく異なる亜群の分布に基
づいて、Ａ、ＢならびにＣの各亜群に分類されている。

亜群Ａのウィルスは、天然に存在するすべての感染物を
検査すると、そこに、単独または亜群ＢならびにＣと共
に見い出されている。亜群Ｂは、全感染物の約４０％に
見い出され、感染物の約１％に見い出される亜群Ｃは、
亜群ＡならびにＢ、亜群ＡならびにＣ２または亜群Ａ、
ＢならびにＣの混合感染物として存在する。決定された
亜群は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの感染宿主域、およびネコ
の病原性において相関関係がある。例えば、ＦｅＬＶ−
Ａ分離物は、ネコの細胞増殖を抑制することがあり、そ
の病原性は最も低い、　ＦｅＬＶ−Ｂ分離物は、ヒトお
よびイヌの線維芽様細胞などの異種細胞中で成長し、増
殖性の疾患に高頻度で見い出される。また、ＦｅＬＶ−
Ｃ分離物は、まれにしか見られないが、その宿主域が、
ヒト、イヌならびにモルモット細胞を含む広い範囲に広
がっており、再生不良性貧血を誘発し得る。

〔発明が解決しようとする課題〕

室ネコにおけるＦｅＬＶ誘発疾邑の細胞障害効果の観点
では、感受性動物へのワクチン投与によってＦ　ｅ　Ｌ
　Ｖの感染を予防することが、獣医学の研究者にとって
最優先の課題である。こういったワクチンを産生ずるた
めの数々の試みは、はとんど失敗であった。実際、その
ワクチンは、１種類（１，ｅｕｋｏｃｅ目１゜Ｎｏｒｄ
ｅｎ　ｌ、ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｌｉｎｃｏｌｎ
、　Ｎｅｂｒａｓｋａ）だけ市販されているが、効果が
疑わしいために厳しい批判を受けている（Ｐｅｒｄｅｒ
ｓｏｎら、Ｆｅ１ｉｎｅ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　１５ニア
−２０，１９８５）。この発明は、適切なＦｅＬＶワク
チン産生の技術面での要求を満たし、その他の関連する
利点を提供する。すなわち、高い感染性を有するＦｅＬ
Ｖ−Ａの原型ウィルス、分子レベルのクロニングによる
免疫不全症誘発性の原型ＦｅＬＶ、およびネコならびに
ヒトを対象としてレトロウィルス誘発性免疫不全症候群
ならびに白血病の研究に使用される疾患モデルを定義す
ることなどが含まれる。

［課題を解決するための手段］ 要約すると、この発明は、（ａ）感染性が高く、病原性
が最低の原型ウィルス、（ｂ）複製能を欠き、ネコにＡ
ＩＤＳと類似した致死的な免疫不全症を引き起こす変異
体ゲノム（Ｈｏｏｖｅｒ、　Ｂｌｏｏｄ　７０：１８８
０−１８９２．１９８７ＨＯｖｅｒｂａｕｇｈら、５ｃ
ｉｅｎｃｅ　２３９：９０６−９１０．１９８８）　、
および（Ｃ）複製能があり、上記の免疫不全症候群を誘
発するキメラゲノムをコードするネコ白血病ウィルス分
離物のクローンを開示する。さらに詳述すると、これら
のクローンを使って、感染ウィルスを産生ずる細胞系の
確立を開示するが、この際に生じたウィルスは、ワクチ
ンの製造もしくはウィルス血症の発症、または疾、愚モ
デルに有用である。

この発明の１態様では、ＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生
物学的誘導物のプロウィルスゲノムをコードする単離Ｄ
ＮＡ配列を開示する。この発明には、ＦｅＬＶー八亜へ
または「生物学的誘導物」として、亜型間での相同性が
少なくとも９２％ある突然変異体が含まれる。実施態様
の中には、ＤＮＡ配列が、プロウィルスのクローン６１
Ｃ１またはクローン６１ＥもしくはＥＥＣＣと掛は離れ
たものも含まれる。

前者は、複製能を欠き、各種のネコ（Ｆｅｌｉｓ　ｄｏ
ｍｅｓｔｉｃａ）におけるウィルス血症を誘発し得ない
。後者の２つは、各種のネコで、持続性のウィルス血症
を誘発し得る。

ＦｅＬＶー八亜へまたはその生物学的誘導物の発現を規
定し得るＭｉ換えプラスミド、およびこのような組換え
プラスミドを移入しだ哺乳動物細胞も開示される。これ
に適した初物細胞には、Ａ１１９２７　。

ＣＲＦＫ　、　ＦＣＷＦ　、　Ｆｃ９、ネコ胚線維芽細
胞などのネコの細胞、またはネコ細胞の初代培養物、お
よびミンクの肺細胞が挙げられる。

この発明のも・うひとつの態様では、Ｆｅｌ、シーへ亜
をまたはその生物学的誘導物の産生法が開示される。

この方法は、一般に以下の工程から成る。（ａ）哺乳動
物の宿主細胞に、ＦｅＬＶーＡ亜型またはその生物学的
誘導物のプロウィルスゲノムの発現を規定し得る組換え
プラスミドであって、ＦｅＬＶ−＾亜型またはその生物
学的誘導物のプロウィルスゲノムをコードするＤＮＡ配
列を含むプラスミドを移入すること、（ｂ）適当な培地
中で宿主細胞を増殖させること、および（ｃ　）　Ｆｅ
ＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物を宿主細胞から
分離すること、適当なりＮＡ配列には、クローン６１Ｃ
およびＥＥＣＣ由来のものが挙げられる。さらに別の態
様では、哺乳動物の宿主細胞に、上記のような組換えプ
ラスミド、クローン６１Ｃ由来のＤＮＡ配列を含むプラ
スミド、およびクローン６１Ｅ由来のＤＮＡ配列などの
複製能を有するプロウィルスゲノムをコードするＤＮＡ
配列を共移入する。この方法には、分離］［程のあとに
、当該分野で知られている、ＦｅＬＶ−Ａ亜型または生
物学的誘導物の精製を含めてもよい。

この発明に関連する態様では、ＦｅＬＶのワクチン製造
法を開示する。この方法は、一般に以下の工程を含む６
　（ａ）哺乳動物の宿主細胞に、ＦｅＬＶ−Ａ亜型また
はその生物学的誘導物のプロウィルスゲノムの発現含規
定し得る紐換えプラスミドを移入すること、（ｂ）適当
な培地で宿主細胞を増殖させること、（Ｃ）このＦｅＬ
Ｖ−Δ亜型またはその生物学的誘導物の免疫原を回収す
ること、および（ｄ）このＦｅＬＶ−Ａおよびまたはそ
の生物学的誘導物を不活化すること。別の態様では、上
記のようにして、哺乳動物の宿主細胞を共移入する。こ
のＦ　ｅ　１．、シー八またはその生物学的誘導物は、
不活化を起こす条件およびそれに足る時間で、ホルマリ
ン、ベータプ１：′２プリオラクトンまたは２成分のエ
ヂレンイミン（ＢＥＩ）への浸漬といった様々な方法で
不活化することもできる。この方法には、不活化工程の
あとで、そのＦ　ｃ　Ｌ　Ｖ−＾亜型を濃縮して臨床的
投すに適した抗原量が得られるよ・うな工程も含めても
よい。

そうすることによって、各種のネコで発病を防ぐことが
できる。

さらに、この発明は、宿主のネコにおいてＦｅＬＶＡ感
染を予防する方法を開示する。このよ・うな方法の中に
は、不活化されたＦｅ１．シーＡ亜型またはその４Ｆ物
学的誘導物から成る組成物を、生理学的許容性のある担
体または希釈液と共に宿主のネコに投与する一つの方法
がある。適切な担体または希釈液には、滅菌水およびリ
ン酸緩衝液の生理食塩水が挙げられる。組成物には、完
全もしくは不完全フロインドアジュバント、ＲＩＢＩ、
油性アジュバントなどの適当なアジュバント、水酸化ア
ルミニウムならびにリン酸化アルミニウムなどの粒状ア
ジュバント、またはアブリジンならびにａｍａ３１−９
１などの一般的な免疫刺激アジュバントを含めてもよい
。この発明のひとつの態様では、生理学的許容性担体ま
たは希釈液として、ＦｅＬＶ−Ａ亜型産生細胞に由来す
る無細胞ト清が挙げられる。ここで、生理学的許容性担
体または希釈液に、Ｆｅｉ、シー八亜型産生細胞の全細
胞溶解物を含めることもある。関連の方法では、Ｆｅｌ
、ν、Ａ亜型のｅｎｖ遺伝子産物から成る、免疫原とし
て有効量の組成物を、生理学的許容性のある担体または
希釈液と共に投与する。

上記のように、この発明は、ＦｅＬＶ誘発性の疾患に対
するワクチンに開示する。この発明の１態様では、この
ワクチンは、適切なアジュバントと共に不活化したＦｅ
ＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物から成る。好ま
しい態様では、ＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的誘
導物がクローンＥＥＣＣまたはクローン６１Ｅ由来のＤ
ＮＡ配列によってコードされている。

この発明のもうひとつの態様では、ワクチンは、クロー
ン６１Ｅといった、複製成分のＦｅＬＶクローン由来の
ＤＮＡ配列によってコードされたＦｅＬＶー＾亜型、ク
ローン６１Ｃ由来のＤＮＡ配列によってコードされたＦ
ｅＬＶ−Ａの生物学的誘導物、および生理学的許容性の
ある担体または希釈液から成る。

この発明のさらに別の態様は、ＦｅＬＶ−＾亜型または
その生物学的誘導物の接種によって誘発した致死的免疫
不全疾患が表れるネコ宿主を開示する。

こ・ういったネコ宿主は、ネコ科とその他の哺乳動物の
両方に対して、疾患モデルとして有用である。

この発明のこれらの態様は、以下の詳細な説明および添
付した図を参照にすれば、明らかになるつ。

〔具体的な説明〕

上記のように、この発明は、特にはＡ亜型のＦｅｄ、ν
またはその生物学的誘導物をコードする感染性プロウィ
ルスのクローンを提供することによって、宿主のネコを
ＦｅＬＶｉ染から保護するための方法および組成物に関
する。クローン６１Ｅのようなある種のクローンがｉｎ
　ｖｉｔｒｏでのネコの細胞に対する移入に使われた場
合、こういった移入細胞は、ネコのＴリンパ球または線
維芽様細胞に細胞変性効果のない感染性ウィルスを産生
ずる。このウィルスの増殖は、ネコの細胞に限られてい
る（従って、捕食性）。ネコの細胞に由来するウィルス
は、離乳期から成長期にかけて特異的病原体のないネコ
に感染させるため、以下に示す、これらのネコは、持続
性のウィルス感染に罹患するが、接種後１年を越えて疾
、世に冒される場合はない。従って、ＦｅＬＶ−Ａのプ
ロウィルスゲノムは、原型で、捕食性、垂直感染性であ
って病原性が最低のネコ白血病ウィルスをコードする。

このウィルスは、新生児期以外のネコでのウィルス血症
の持続的誘発力によっても、その他のネコ白血病ウィル
スと区別でき、今まで開示されたいかなるウィルス株よ
りも天然で一般に見い出されるＦｅＬＶｆｉ似している
。このエンベロープ遺伝子のヌクレオチド配列は、易感
染性でもあるＦｅＬＶの他の株とＤＮＡの保存性が極め
て高く、天然のすべてのＦ　ｅ　Ｉ、Ｖ悪筆ネコに見い
出される。従って、この発明のＦｅＬＶ−Ａによるワク
チンに対して生じる免疫応答は、自然界で垂直感染可能
な、はとんどすべてのネコ白血病ウィルスを予防するこ
とが期待される。さらに、クローン６１ＥまたはＥＥＣ
Ｃ由来のＤＮＡ配列をコードしたウィルスには特殊な能
力があって、それが６１ＥまたはＨＥＣＣを接種したネ
コで高頻度のウィルス血症を誘発させるので、相同ウィ
ルスの感染に対して予防効果のある有効な感染系が提供
される。

この発明は、また、各種のネコの重大な疾患モデルをつ
くる方法および組成物に関する。それらは、効果的なワ
クチン（すなわち、疾患に対する予防）の再試験に使う
か、他の種に見られる関連の免疫不全症（すなわち、人
間におけるヒト免疫不全ウィルスの感染）の予防および
治療の可能性を調べることができる。ＦｅＬＶプロウィ
ルスのクローン６１Ｃは、感染性がないが、ネコの細胞
に移入した場合、クローン６１Ｈの連続移入または６１
Ｅウイルスでの感染によって修復することができる。

その結果得られた、クローン６１Ｅとクローン６１Ｃと
の混合物は、これを感受性のある８週令のネコに接種し
た場合、もとのＦｅＬＶ−ＦＡＩＤＳ分離物を接種した
ネコに見られるものと同一の致死的免疫不全症を４力月
以内に誘発する（Ｈｏｏｖｅｒ、　Ｂｌｏｏｉｉ　７０
　：１８８−１９８２．１９８７；　Ｏｖｅｒｂａｕｇ
ｈ、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３Ｑ：９０６９１０、１９８
８）。さらに、キメラＦｅＬＶのプロウィルスクローン
を、６１Ｅと６１Ｃゲノムの部分的交換によって構成（
ＥＢＣＣ）することもできる。そうい、った構成体を感
受性のネコの細胞に移入すると、得られたウィルス（Ｆ
ｅＬＶ−ＥＥＣＣ）は、複製能があり、免疫不全症を誘
発する。

複製能のあるウィルスを産生ずる好ましい態様では、プ
ロウィルスＦｅＬＶ−６１Ｅ−ＡおよびＦｅＬＶ−ＥＨ
ＣＣを、培養中の適当な細胞宿主、例えば、ＣＲＦＫ（
ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ９４　ＪまたはＡＨ９２７細胞系（Ｏ
ｖｅｒｂａｕｇｂ。

５ｃｉｅｎｃｅ　２３９：９０６−９１０．１９８８）
に移入する。この際、プロウィルスプラスミドとして適
宜、選択マーカーを使用しても使用しなくてもよい。移
入法には、ＤＥＡＥデキス１ヘラン沈澱法、リン酸カル
シウム沈澱法、または電気泳動が挙げられる。プロうイ
ルスＤＮＡを導入した結果、そのプロウィルスゲノムが
、細胞のゲノムに取り込まれることになる。移入細胞は
、選択、増殖させて、逆転写酵素、ウィルス産生、ウィ
ルスタンパク抗原の放出レベル、およびワクチンとして
のウィルスの使用に関連したその他のあらゆる特徴につ
いてスクリーニングする。

ＦｅＬＶー６１Ｃのような複製能のないウィルスを産生
ずるには、プロウィルスゲノムを適当な培養宿主細胞に
移入し、得られた移入細胞系を、ＦｅＬＶー６１Ｆのよ
・うな複製能のあるプロウィルスゲノムまたはウィルス
で共移入または共感染させる。

安定な移入細胞系を、例えば、２５０ｄの細胞増殖用培
地を含む回転ビン当たり最低で５−６×ｌＯ７個の細胞
濃度となるように、１５０ｄの回転ビン中で１００％コ
ンフルエントが得られるまで増殖させる。細胞が３〜７
日でコンフルエント・δこ達した後、増殖培地を捨て、
その細胞に、例えば、２５０ｍβのウィルス用増殖培地
を添加する。さらに、細胞を通常３７゛Ｃで１ないし数
日間インキュベーションし、Ｆ　ｅ　Ｌ、Ｖ含有培地を
収穫する。収穫を何回か（好ましくは、最低５回）行っ
て、単層の細胞がビンからはがれ始めるまで、その収穫
物を静置する。　Ｆｅ１．Ｖの収穫物は、先のウィルス
液で記載したよ・うに、ウィルスの力価および／またば
抗原量に応じて１００倍まで濃縮することができる。細
胞系液の不活化、濃縮、およびアジュバン１−添加は、
ウィルス液の乏きと同様に行うが、これについて以下Ｖ
こ記載する。

適切なＦｅｌυ−へ亜型またはその生物学的誘導物を調
製し、宿主のネコに、クローン化プロウィルスＤＮＡか
ら生じる十分量の不活化ウィルス、または適当な免疫応
答を起こさせるウィルスと細胞基質の混合物を適当な方
法によって接種４−ることもできる。ウィルスの使用量
は、一般には約１０４ないし１０５の範囲であるが、約
１−５×ｌＯ５のフォカス形成単位／ｋｇ宿主（ｐｐｕ
／ｋｇ）とすることが多い。このウィルスは、生理学的
に許容性のある培地、例えば、滅閑水、リン酸緩衝液添
加生理食塩水、増殖培地などに入れることができる。こ
の発明のワクチンは、前取て感作した宿主へ投与するこ
とができる。１種類以ＪＴ、のブースターを、■ないし
６週、好まし２くは２ないし４週間隔で投与、してもよ
い。

以下の実施例を要約すると、Ｆ６Ａウィルスをコードす
るプロウィルスクローン６１Ｅは、特巽的病原体のない
ネコの小腸組織のＤＮＡから直接由来し２、続いて、天
然に存在するネコリンパ肉腫（Ｆｏｒｔ　Ｃｏ１１ｉｎ
ｓ、　Ｃｏ１ｏｒａｄｏ）にかかったペットのネコから
得られた無リンパ肉腫細胞上清の接種を行ったものであ
る。完全なプロウィルスを持ったクローンを得るために
、まず、ネコ１１６１からのＤＮＡはＥｃｏＲＩ　　（
ＦｅＬＶゲノム中では切断を生じない）で切断し、続い
て、ショ糖密度勾配をかけて分画した。全プロウィルス
を取り込むのに−１分な長さのＤＮＡを含む両分である
が、バクテリオファージベクターｇｔＷＥＳ　Ｂ（Ｐ、
　Ｌｅｄｅｒ、　Ｄ、　Ｔｉｅｍｅｉｅｒ。

Ｌ、　ｌ１ｎｑｕｉｓｔ、　５ｃｉｅｎｃｅ　１９６：
１７５．１９７７）活性のあるものをプールした。ＤＮ
Ａライブラリーをつくり、外来性のＩ−Ｔ　Ｒ特異的プ
ローブ（Ｍｕｌｆｉｎｓら、Ｎａｔｕｒｅ３１９：　３
３３−３３６．１９８４）を用いてスクリーニングした
。全Ｆ６ＡプロウィルスのＥｅｏＲＩ断片、および宿主
の隣接領域を、ｐｌＪｃ１８中にザブクローニングした
。続いて、欠失クローンを、エキソヌクレアーゼＢＡ１
３１を用いた消化によってつくり、Ｍ１３ｍｐ１８中に
連結して、ダ・イブオキシ法にょゲで配列決定を行った
。この完全な８．４４０塩基対（ｂｐ）のＦ６Ａプロカ
イルスを、２つの長鎖オーブンリーディングフレーム中
の還元型アミノ酸配列とともに第１図に示した。Ｆ６Ａ
配列中にｇａｇ（ヌクレオキャプシドタンパクをコード
）、ｐｏｔ　　（ブｒニー２テアーゼ、逆転写酵素なら
びにエンドヌクレアーゼをコード）、および（・ｎｖ（
細胞外（ｇｐ７０）ならびに膜貫通（ｐ１５１１エンベ
ロープタンパクをコード）に対応するオーブンリーディ
ングフレームの位置を記した制限酵素切断地図を第２図
に示す。ｇ　ａ　ｇおよびｅｎｖの開始位置と見られる
メチオニン（ＡＴＧ）は、それぞれ、９０６および５９
８１番目のヌクレオチドにあった。−・般に、ＦＧＡの
フ。

【１ウィルス配列は、典型的なＣ型のし１−ロウイルス
り一゛ノＪ、を表している。詳細な配列は、Ｄ　ｏ　ｎ
　ａ　ｈ　ＩＪ　ｅらＣコよって考察されている（Ｊ、
ν１ｒｏ１．１６２ニア２２７３１、１９８８）。この
発明に関連して、以下の点が有意である。ＦＧＡの還元
ｇｐ　７０部分を他の２つのＡ型分離物、Ｆ３Ａならび
にＦ　Ｇ　Ａ　（Ｇｌａｓｇｏｗ）のそれと比較した場
合、それらは、１３才未満の天然の感染ネＸＪから分離
されたり、面積の広い地域で分離されたにもかかわらず
、共に著し、く高い（９８％）相同性を有し５ている。

ＦＧＡは、１９７０年にスコツ１−ランドのグラスノー
で分離され、クローニングされる萌の数年間は培養され
ていたものである。

Ｉ”　３　Ａは、１９７７年にニューヨーク市で単節ｔ
され（１″、　Ｚｕｃｋｃｒｍａｎおよび一、　Ｄ、　
Ｈａｒｄｙ、　、、Ｉｒ、、私信）、クローニング前に
培養によって徹底的に増殖させたものである。また、Ｆ
ＧＡは、１９８３年にベットのネコから単離したウィル
スをｉ＋１νｉｖｏで継代培養した後、ネコの組１ＭＤ
ＮＡからクローニングしたものであるが、クローニング
前のｉｎνｉｔ、ｒｏでの増殖は行わなかった。３つの
プロウィルのスすべては、クローニングおよび配列決定
かなされた。

これに見られる顕著な配列の保存性から、偏在性、ウィ
ルス血症誘発性、および垂直感染性のＦｅ１．Ｖ型にお
ける抗原性の変化に対抗する強い選択圧がかかっている
ことが理解されよう。この配列データと以下のＦＧＡの
生物活性を比較することによって、ＦＧＡは高度の保存
性、垂直感染性、最低の病原性のＦｅＬＶ−Ａ亜群（こ
れは、おそらく自然界のあらゆる感染ネコに存在するで
あろう）の一つの原型を示すことが分かる。

ＦＧＡの生物活性を定義するために、ネコの胚線維芽細
胞系（ＡＨ９２７）に、クローン６１Ｐ、ＤＮＡを移入
した。逆転写酵素（ＲＴ）は、プロウィルスＩ）　ＮＡ
の場合と同様に、１２日までは培養物中に検出された。

続いて、８週齢の１６匹のＳＰＦネコに、移入細胞から
得られた、６１Ｅ由来のＦ６Ａウィルスの１０′フオ一
カス形成単位を接種した（クローン８１のアッセイによ
って力価を測定、以下参照）。

接種ネコのそれぞれは、２ないし４週以内にウィルス血
症を起こし、どれもそのままの状態が続いた。１０力月
から２年を上回る期間、免疫不全疾患はまったく認めら
れなかった。１匹のネコが′Ｆ細胞のリンパ肉腫に罹患
したが、その他のネコは正常であった。これは、ＦＧＡ
は、病原性が最低であっても感染性が極めて強く、他の
慢性し日］ウィルスと同様に、潜伏期間の長いリンパ肉
腫を誘発し得ることを示す。

以下の実施例もコよって２、この発明を詳述するが、限
定を加えるわけではない。

二；１口ＪＩ□１）！リ− 夫−旅路−↓ 感作ネコ　胞にりＩコーンの　　　　　による、Ｆ　ｅ
　１．、、Ｖ細則Ａの産生　　　のワクチンを装造する
ために、Ｆ　ｅ　１．、Ｖ　−６１Ｅ　−Ａプロウィル
スをＥｃｏＲＩ断片として単離し、（第３図）、ｐｔｌ
ｃ１８のＥｃｏＲ１部位にサブクローーーソゲした（第
４図）　、　Ｐｏｔｔｅｒらが記載した電気穿孔法（Ｉ
’　ｒ　ｏ　ｃ　。

Ｎａｔｌ、　Ａｒ、、１ｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１
ニア１７６−７１６５．１９８４）に基づく移入によっ
て、得られたプラスミド（ｐｌＪｃ１８６１１Ｅ）をＡ
ｌ１９２７ネコ胚線維芽細胞系へ導入した。

Ａｌ１９２７−６１Ｅから放出された感染性Ｆ６Ａウィ
ルスの力価は、４ないし８　Ｘ　１０６ｆ　ｆｕ　／　
ｒｒｒｌの範囲であることが分かった（Ｌｅｅら、Ｊ、
　Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、４９：５５−
６０．１９７２）。

実−施例−乙 以下の説明によって、この発明の範囲内で、１■胞系液
ならびにウィルス液の不活化、濃縮ならびにアジュバン
ト処理に適した方法が示される。

ウィルス　または　胞系　の２　　エチレンイミ４（β
上回）−不ｊ早化。

等Ｍの０．２．ブロモエチルアミン臭化水素酸塩）容：
夜すよび０，４．水酸化すトリウム）容ン夜を’ＩＨ合
し、ｋ４Ｊ　３７°Ｃで６０分間インキエベーションし
た。得られた環状不活性体が、容量比で０．５ないし４
％のウィルス液または細胞系液に添加する２成分エチレ
ンイミン（ＢＥｒ）である。この不活化ウィルスまたは
細胞系の液体は、４ないし３７°Ｃで周期的に撹拌しな
から２４ないし７２時間放置した。

不活化ウィルスまたは細胞系の液体は、細胞培養物に３
回継代して、不活化が完全であるか調べるために、特異
的ウィルスの増殖に関する試験を行った。

り／（火２」（ま−な、−は細−胞赤Ａ１ケ濃ｍウィル
ス液または細胞系液は、Ａｍ１ｃｏｎ、　ｐｅｌｌｉｃ
ｏｎ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）　？ａ縮器などによる利用
可能な技術、塩化アンモニウムまたはポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）などによる沈澱法、透析チーブを用い
たＣａｒｂｏｗａχ溶液もしくは蝋による濃縮、または
リン酸アンモニウムなどを用いたアジュバント濃縮法を
いくつか使って２ないし１０倍に′ａ縮することができ
る。ＰＥＧ沈澱法では、８０ｍ１の５０％ＰＥＧをＩＰ
のウィルス液または細胞系液に添加して、４゛Ｃで一晩
混合した。翌日、ＰＥＧ−ウィルス液を２５０Ｏｒｐｍ
以上で遠心分離し、上清を捨て、ＰＥＧ−ウィルスのベ
レットを目的の濃度になるように一定量の培地に再懸濁
した。

アジュバント　　のウィルス　　　　たは養−液− 以下のアジュバントは、動物での接種部位の硬結反応お
よびアジュバントの相溶性に従って、単独または２種類
以上を組み合わせて使・うことかできる。

重■／用￥比で１％の濃度に調製したエチレン無水マレ
イン酸（ＨＭＡ）を、不活化ウィルス液または細胞系液
に容積比０．０１％ないし６％で添加した（アジユバノ
ドとは別個または一緒に濃縮）。得られた液体のｐ）Ｉ
は、ＩＮ水酸化ナトリウム溶液の添加によって７．１な
いし７．７に調整した。

Ｎｅｏｃｒｙｌ　Ａ６４０は、共重合体のラテックスポ
リマー（スチレン、およびアクリル酸とメタクリル酸の
混合物）の商標である。　Ｎｅｏｃｒｙｌ　４６４０は
、非会合の水溶性アクリル酸ならびにスリテンの共重合
体であり、ｐｉが７．５、粘度が１００ｃｐｓ　（Ｂｒ
ｏｏｋｆｉｅｌｄ２５°Ｃ）であって、重量比で４０％
および容積比で３８％の固体を含む場合、１ガロン当た
りの重量が８．６１ｂｓである。八６４０という番号は
、そのグｌｚ−ドを示す。その他の有用なＮｅｏｅｒｙ
ｌのグレードは、５２．０　、６２５　、および９６６
である。ｒ　Ｃ３ＭＡ　Ｊという用語は、以下でスチレ
ン、およびアクリル酸ならびにメタクリル酸の共重合体
を示すために用いられる。水で容積比５０％に調整した
Ｃ３）ＩＡ懸濁液を、不活化ウィルス液または細胞系液
に、単独または他のアジュバントと組み合わせて添加し
、容積比を０，２ないし１０％とした。　Ｃ３ＭＡはｐ
Ｈが中性であるため、通常、ｐＨを調整する必要はない
。

Ｍｏｄｅｒｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ　（Ｏｍａｈａ、　Ｎｅｂｒ、）の小動物用Ｅｌｌｌ
ｉｕｌｓｉｇｅｎアジ１バントは、単独または他のアジ
ュバントと組み合わせてウィルス液または細胞系液に対
する容積比が１ないし２０％となるように使われる水中
油滴型の乳濁液である。

Ａｖｒｉｄｉｎｅは、単独または他のアジュバントと組
み合わせて５ないし３０１ｇの用量で使われる。２．４
ｇの＾νｒｉｄｉｔ＋ｅは、１８１ｄの無水エタノール
に溶解し、１、８　ｄの７ｗｅｅｎ−８０を添加して、
この混合物を０．２ミクロンのフィルターに通過させる
。続いて、２０．２ｄのＩｎｔｒａｌｉｐｉｄクイズ油
を、無菌的にＡｖｒｉｄｉｎｅに添加する。このアジュ
バントは、ウィルス液または細胞系液に対する体積比で
７ないし５０％でこれらの溶液に添加する。

サポニンは、原料または精契品を、単独または他のアジ
ュバントと組み合わせて０．０５■ないし５ｍｇの用量
で使われる。サポニンは、２００■／緘の濃度で調製し
、濾過滅菌してから、容積比０．５ないし２０％でウィ
ルス液または細胞系液に添加する。

用ＬｌＯ，０１ないし５■のリン酸アルミニウム、また
は用ｉ１０．５ないし２０ｍｇの水酸化アルミニウムを
、単独または他のアジュバントと組み合わせて添加する
こともできる。

胞およびウィルスの ワクチンの産生では、細胞は、ビタミン類、各種の非必
須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、１０〜２５ＩＩＩ
１．Ｉヘッペス緩衝液含有の重炭酸ナトリウム（Ｇｉｂ
ｃｏ、　Ｇｒａｎｄ　Ｉｓ　１ａｎｄ、　ＮＹ）、３０
ｇ／ｍｌポリミキシン、および３０ｇ／ｄネオマイシン
を添加し、濾過滅菌して４°Ｃで保存しておいた最小必
須培地（ＭＥＭ）中で増殖さ）！−る。細胞を加える前
に、２１１．−グルタミンおよびウシ血清を培地に添加
した。

細胞を増殖さ−ｔ！′るには、ウシ血清を１０％添加す
る。

平均的な収穫は、細胞濃度が１０４個／ｄを越えたもの
で行うことが好ましい。

実差−例−Ｊ フロインドアジュバント　　　したワクチンとして、Ａ
ｌ１９２７−６１Ｅ　　　、から　られたＦ６Ａウィル
２て刈支用−広 ワクチン製造の目的で、Ａｌ１９２７−６１Ｅを以下の
ように増殖させた。細胞懸濁液（２Ｘ１０’ｆｆｕ／ｉ
ｐ）を含むＦ６Ａウィルスを回収すると同時に、これを
濃縮して、０．１％〜２％のホルマリンまたば２成分工
千レンイミン（ＢＥＩ）で不活化した。不活化されたウ
ィルス調製物は、完全または不完全フロインドアジュバ
ントで製剤化し、ｌｄ（？）の筋肉内投与でＳＰＦネコ
乙こ数回接種した。第１表に記載した試験では、ワクチ
ン処理の開始時点、ネコの月齢は４ないし１０力月であ
った。２ないし３回ワクチン投与は、記載した時間間隔
で行った。

対照の免疫処理は、Ｎｏｒｄｅｎ　ＬＥｔｌＫＯＣＥＩ
、Ｌワクチンまたはアジエハン）−’Ｉｔ独で行った。

ネコに、ＡＨ９２７６１Ｅから得られたＦ６Ａウィルス
（１０５〜１０′″ｆ　ｆ　ＩＩ　／１ｒｔｌで腹腔内
注射）、またばＦｅＬＶ−Ｃ３［Ｊの野外分離ウィルス
１Ｉ０５８２１　（１０’ｆ　ｆｕ　／　ｒｒｄｌで腹
腔内注射）を投俟した。この投与には、第１表に示すよ
うなコルチコステロイドをネコに対して処理する場合も
、処理しない場合もあった。ネコは、投与後に頚静脈か
ら放血させ、血清中のｐ２７ＥＬＩｓΔ抗原の欠損およ
び血球の免疫蛍光測定によってＦｅｌ、シウイルス血症
の試験を実施した。持続性のウィルス血症に征っだネコ
は、この投与による感染が成功したものと見なされた。

持続性のウィルス血症に罹らないネコは、感染していな
い、すなわち、投与に抵抗性を示すものと見なされた。

ネコの免疫能が抑制された場合、対照動物の７５％へ・
８３％が投与後のウィルス血症に罹患した。免疫能の抑
制が起きない場合は、６０％の動物がウィルス血症に罹
患した。その後の試験では、対照動物に１００％のウィ
ルス血症を起こさせるために、ウィルスの投与量を増加
させた。６１Ｅで免疫処理した全動物のうち５％だけが
、持続性のウィルス血症に罹患した。ある試験（Ｃ３Ｉ
ＩＪＪ４）では、６１Ｅで処理したネコのすべてが、Ａ
Ｂサブタイプの異型ＦｅＬＶ分離物（０５８２１）投５
、によるウィルス血症に罹らなかったが、対照ネコでは
２５％だりが罹患しなかった。これは、自然界で生じる
ような、異物投与に対する、６１Ｆ、に基づいたワクチ
ン製剤の予防力に一致していた。試験Ｃ５叶旧では、１
００％の動物をウィルス血症がら予防するのに２回の接
種だけで十分であった（対照動物のウィルス血症罹患率
は６０％）。

実−施別−１ Ｆ　ｅ　ＬＶ１５′　　　　モデルの クローン６１Ｅが分離される小腸ＤＮＡ調製物では、コ
ピー数の等しい変異体ゲノノ、（制限酵素の多形による
定義と同し、第２図参照）に着目した。

６１Ｃと呼ばれる「変胃体ＡＪの原型に相当するりｌ］
−ンを、バクテリオフアージヘツタ−中で分離し、続い
て、プラスミドベクター中に挿入した（第４ｂ図）。こ
のプラスミドをネコの線維芽細胞および′ｒリンパ球培
養物をｉｎ　ｖｉｔｒｏで移入するために使用した。こ
の配列は、感染性ウィルスをｍ２−１’するものではな
かった。ｐＦｅＬＶ−６１Ｅで共感染した場合、ＦｅＬ
Ｖ−６１Ｃは、高い感染性を有しており、得られた混合
物は、感染性が非常に高い。そして、得られた混合物は
、Ｔリンパ球に対して細胞変性効果があった。

［Ｉ　Ｆ　ｅ　ｉ、シー６１ＥとｐＦｅＬＶ−６ＩＣと
のキメラウィルスをｉｎ　ｖｉｔｒｏで構成し、各プロ
ウィルスの５８１７番目のヌ・クレオチドに見られるユ
ニークなχｈｏｌ制限酵素切断部位のどちらかの側で配
列を交換した。５′末端の配列は、ｐＦｅＬＶ−６１Ｅ
に由来し、３′末端の配列は、ＦｅＬＶ−６１Ｃに由来
していた。ｐＦｅＬＶ−ＥＥＣＣと命名したこのプラス
ミド（第４Ｃ図）を、ｉｎ　ｖｉｔｒ。

でネコ下リンパ球１３養物を移入するために使用し、感
染性の細胞変性ウィルスをコードすることが示された。

ＦｅＬＶ−６１Ｅ／６１Ｃウィルス混合物とＦｅＬＶー
ＥＥＣＣの雨音は、接種して持続性のウィルス血症に侃
ったすべてのネコで、致死的な免疫不全症を誘発するこ
とが示された（Ｈｏｏｖｅｒ、　Ｂｌｏｏｄ　７０：　
１８８０−１８９２゜１９８７；　Ｏｖｅｒｂａｕｇｈ
、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３９：　９０６−９１０．１９
８８）。

複製能のあるＦｅＬＶーＥＥＣＣおよび類似のキメラは
、潜伏期の短い疾病を誘発し、その潜伏期間は、離乳期
ネコに対する接種後２０ないし７６０目であった。

ＦｅＬＶ−６１Ｅ／６１Ｃ混合物を接種した動物の潜伏
期間は、９０〜１２０日゛であった。

Ｆｅ！、Ｖ　−ＥＥＣＣキメラに見い出された６１Ｃゲ
ノム部分のヌクレオチド配列が決定され、ＦｅＬＶ−６
１Ｅに対して拡散する配列を同定した（第３図）。この
混合物およびキメラは、あらゆる生物に致死的な免疫不
全症を誘発することが示され、最初に完全に定義された
レトロウィルスである。従って、これらは、ネコでＡＩ
ＤＳの誘発原因になっているゲラ１１配列の同定、抗ウ
ィルス薬の効力の評価、投与ウィルスとしてウィルス血
症などの疾病の予防、およびにネコ白血病ウィルスに対
する免疫性を刺激するワクチンの開発に使うことができ
る。

この発明は、理解を助けるように例示によっていくふん
詳細に記述したが、ある種の変更および修飾を行うこと
は、添付した請求の範囲中で実施してもよい。

【図面の簡単な説明】

第１図−１〜第１−７は、クローン６１Ｆ、の完全なヌ
クレオチド配列を示す図である。この配列は、５’Ｌ、
ＴＲに始まり、第２図に模式的に示す８４４０の塩基対
に相当する３’　　ＬＴＲに伸長する。２つの大きなオ
ーブンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の還元型アミノ
酸配列を、ＤＮＡ配列の下に１字のコードで示す。ＤＮ
Ａ配列上に示す。第２図に示す制限酵素切断部位が示さ
れる。 第２図において、Ａはオープンリーディングフレームの
配置を伴うクローン６１Ｈの制限酵素切断地図である。 フレーム１ないし３を上から下に示す。縦線は、終止コ
ドンの位置を示す。ボックスは、ウィルスタンパクをコ
ードすることが知られているＯＲＦ、およびｇ　ａ　ｇ
　（ｇａｇ−ｐｏｔ）ならびにｅｎｖ翻訳産物に関する
開始部位のメチオニンの位置を示す。制限酵素切断部位
は、ＩｌａｍＨＩ　　（Ｂ　）Ｂｇｌｌｌ　（Ｂ　２）
、ＥｅｏＲＩ　、　ＨｉｎｄｌｌＩ（Ｉ（３）、　Ｋｐ
ｎ　１（Ｋ）、　Ｐｓｔｌ　　（Ｐ）、　Ｓｍａｌ　　
（Ｓ）、　５ｓｔｌｌ　（、Ｓ）、およびＸｈｏｌ（Ｘ
）に相当する。クローン６１Ｃの制限酵素切断地図はＢ
に示す。拡散部位だけを変異体クローンの地図に示す。 第３−１図及び３−２図は、６１ＣのＣｎｖ−３′Ｌ　
Ｔ　Ｒのヌクレオチド配列を示す図であって、クローン
６１Ｅの相当領域と比較される。６１Ｅのヌクレオチド
配列部分は、ｅｎｖタンパクの１文字翻訳とともに示す
。クローン６１Ｃの相当配列を決定し、ヌクレオチドの
異なるアミノ酸のみを示す。 ２本の完全なヌクレオチド配列は、同定されていないが
２．　、７．　、　、で示される。差が還元型アミノ酸
配列での変化となる場合、３文字のアミノ酸コードを示
す、ダンシュは、ｇａｐを示す。 第４ａ図は、プラスミドｐＵｃ１８−６１Ｂを示す。 第４ｂ図は、プラスミド１８−６ＩＣを示す。 第４Ｃ図は、プラスミドｐＵｃ１８−６１Ｃを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物のプロ
   ウィルスゲノムをコードする単離ＤＮＡ配列。 ２、ウィルスが各種のネコでウィルス血症を誘発し得る
   、請求項１記載のＤＮＡ配列。 ３、前記ＤＮＡ配列がクローン６１ＥおよびクローンＥ
   ＥＣＣから成る群より選ばれたクローンに由来する、請
   求項２記載のＤＮＡ配列。 ４、前記ウィルスが複製能を持たず、各種のネコでウィ
   ルス血症を誘発し得ない、請求項１記載のＤＮＡ配列。 ５、前記ＤＮＡ配列がクローン６１Ｃに由来する、請求
   項４記載のＤＮＡ配列。 ６、第１図において塩基対１ないし塩基対８４４０で示
   されるような配列であって、各種のネコでウィルス血症
   を誘発し得るウィルスをコードするＤＮＡ配列。 ７、第３図の上側に塩基対５９５８ないし塩基対８３５
   ８で示される配列であって、複製能を持たず、各種のネ
   コでウィルス血症を誘発し得ないウィルスをコードする
   ＤＮＡ配列。 ８、ＦｅＬＶ−Ａの亜型プロウィルスゲノムまたはその
   生物学的誘導物の発現を規定し得るプラスミドであって
   、請求項１ないし５のいずれか１項に記載のＤＮＡ配列
   から成る組換えプラスミド。 ９、ＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物のプロ
   ウィルスゲノムの発現を規定し得るプラスミドであって
   、クローン６１Ｃ由来のＤＮＡ配列および複製成分であ
   るＦｅＬＶクローン由来のＤＮＡ配列から成るプラスミ
   ドを共移入した哺乳動物細胞。 １０、哺乳動物の宿主細胞に請求項８記載の組換えプラ
   スミドを移入すること、 前記宿主細胞を適当な培地中で増殖させること、および 前記宿主細胞からＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的
   誘導物を分離することから成る、ＦｅＬＶ−Ａ亜型また
   はその生物学的誘導物の産生法。 １１、哺乳動物の宿主細胞に、ＦｅＬＶ−Ａ亜型または
   その生物学的誘導物のプロウィルスゲノムの発現を規定
   し得る組換えプラスミドであって、クローン６１Ｃ由来
   のＤＮＡ配列および複製可能なＦｅＬＶクローン由来の
   ＤＮＡ配列から成るプラスミドを共移入すること、 前記宿主細胞を適当な培地中で増殖させること、および 前記宿主細胞からＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的
   誘導物を分離することから成る、ＦｅＬＶ−Ａ亜型また
   はその生物学的誘導物の産生法。 １２、哺乳動物の宿主細胞に、ＦｅＬＶ−Ａ亜型または
   その生物学的誘導物のプロウィルスゲノムの発現を規定
   し得る組換えプラスミドであって、ＦｅＬＶ−Ａ亜型プ
   ロウィルスゲノムまたはその生物学的誘導物をコードす
   るＤＮＡ配列から成るプラスミドを共移入すること、 前記宿主細胞を適当な培地中で増殖させること、ＦｅＬ
   Ｖ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物の免疫原を収穫す
   ること、および ＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物を不活化す
   ることから成る、ＦｅＬＶワクチンの産生法。 １３、哺乳動物の宿主細胞にＦｅＬＶ−Ａ亜型またはそ
   の生物学的誘導物のプロウィルスゲノムの発現を規定し
   得る組換えプラスミドであって、クローン６１Ｃ由来の
   ＤＮＡ配列および複製成分であるＦｅＬＶクローン由来
   のＤＮＡ配列から成るプラスミドを共移入すること、 前記宿主細胞を適当な培地中で増殖させること、ＦｅＬ
   Ｖ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物の免疫原を収穫す
   ること、および ＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物を不活化す
   ることから成る、ＦｅＬＶワクチンの産生法。 １４、哺乳動物の宿主細胞に、ＦｅＬＶ−Ａ亜型または
   その生物学的誘導物であって、複製能を有するウィルス
   を移入すること、 前記宿主細胞を適当な培地中で増殖させること、ＦｅＬ
   Ｖ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物の免疫原を収穫す
   ること、および ＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学的誘導物を不活化す
   ることから成る、ＦｅＬＶワクチンの産生法。 １５、不活化されたＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学
   的誘導物と、生理学的許容性のある担体または希釈液と
   から成る組成物。 １６、前記組成物に適切なアジュバントが含まれる、請
   求項３０記載の組成物。 １７、不活化されたＦｅＬＶ−Ａ亜型またはその生物学
   的誘導物と、適切なアジュバントとから成る、ＦｅＬＶ
   誘発疾患に対するワクチン。 １８、クローン６１Ｅ由来のＤＮＡ配列をコードするＦ
   ｅＬＶ−Ａ亜型、クローン６１Ｅ由来のＤＮＡ配列をコ
   ードするＦｅＬＶ−Ａ亜型、および生理学的許容性のあ
   る担体または希釈液から成る、ＦｅＬＶ誘発疾患に対す
   るワクチン。