JPH02502095A - オルニチン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 オルニチン誘導体 本発明はメトトレキセート耐性細胞の生長に対し高い抑制活性を示すＮ　−（４ −アミノ−４−デオキシブチδ ロイル）−Ｌ−オルニチンの所定のＮ　−アシル誘導体及びそれらを含有する薬 剤組成物に関する。

Ｎ−（４−アミノ−４−デオキシプテロイル）−Ｌ−オルニチン（本明細書中以 降で時にはＡＰＡ−Ｌ−Ｏｒｎと呼ぶ）は下記の構造を有する：（式中、Ｒは水 素である）、それは、ジヒドロホレートリダクターゼ（ＤＨＦＲ）及びホリポリ グルタメートシンセターゼ（ＦＰＧＳ）の効力ある抑制剤であるが、培養におけ る細胞生長の抑制剤としては相対的に不活性であることが報告され、それのアミ ノ置換されたプロドラッグ誘導体は細胞吸収が増大される可能性があることから 、感心のあることが提案された。ロゾウスキー（Ｒｏｓｏｗｓｋｙ）等、Ｊ、　 Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｗ、　、２９巻、６５５−６６０頁（１９８６年）。

本発明は上記構造Ｉを有し、式中Ｒは−ＱＣ−Ａｒ−ＣＯＯＲ＋（Ａｒは芳香族 基であり、Ｒ３は水素或は低級アルキル（炭素原子１〜５）である）であるＡＰ Ａ−Ｌ−ＯｒｎのＮ６−アシル誘導体に関する。かかる化合物はメトトレキセー ト耐性腫瘍細胞、例えばヒト細胞系統５ＣＣ１５／Ｒ１及び５ＣＣ２５／Ｒ１の 生長に対して著しく高い抑制活性を示し、その活性はＡＰＡ−Ｌ−Ｏｒｎの他の Ｎ６−アシル誘導体の活性よりも予期されない程に高い０本発明の化合物はＡｒ が単環式或は二環式芳香族、好ましくは単環式であるもの、並びに追加の置換基 、例えば塩素ヒドロキシ或は低級アルコキシ（炭素原子１〜５）が、芳香族基中 に存在するものを含み、好ましい化合物はＲが下記： であるものである、好ましい化合物では、−ＣＯＯＲｌ基が本発明の化合物はＮ −（４−アミノ−４−デオキシ−Ｎ　ＩＯ−ホルミルプテロイル）−Ｌ−オルニ チン或はそのトリフルオロアセテート塩を適当な無水カルボン酸と反応させてＮ ６−アシル−Ｎ　−（４−アミノ−４−デオキシ−Ｎ”−ホルミルプテロイル） −Ｌ−オルニチンを形成した後、後者を温和なアルカリ性条件下で処理してＮ” −ホルミル基を選択的に開裂させて作ることができる。開裂反応はロゾウスキー 等がＪ、Ｍａｄ、　ＣｈｅＩｌｌ、　、　２９＠、１７０３−１７０９頁（１９ ８６年）に記載した。ＡＰＡ−Ｌ−Ｏｒｎのへミーフタロイル誘導体もまた４− アミノ−４−ゾオキシーＮ１°−ホルミルプテロイル酸セスキ水和物（ロゾウス キー等、Ｊ、Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｗｓ、　、　２９巻、６５５−６６０頁δ （１９８６年））とベルシリル化Ｎ　−フタリル−し−オルニチン（ボダンスツ キ−（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ　）等、　Ｊ、Ａ、Ｃ，Ｓ、、８６＠、４４５２−４ ４５９頁（１９６４年））とを反応させてＮ”−ホルミルＮ６−フタルイミド誘 導体を形成した後に同時にイミド環をアルカリ性条件下で脱ホルミル化及び開い て作ることができる。

化合物を慣用の製薬上許容しつる非毒性キャリヤーに混合或は溶解して治療組成 物とすることができる。有効剤の有効投与量は簡単な試験によって容易にめるこ とができる。

信 Ｎ’−（４−アミノ−４−デオキシ−Ｎ１°−ホルミルブδ テロイル）−Ｎ　−フタリル−し−オルニチンδ Ｎ　−フタリル−し−オルニチンハイドロクロリド（１，１９ｇ、４ミリモル） をＣＨ富Ｃ１ｔ　（２５ｍ　Ｌ　）に懸濁させた液に、ＥｔＪ　（０，８９ｇ％ ８．８ミリモル）及びＭｅｓＳｉＣｌ　（０，９６ｇ　、　８．８ミリモル）を 連続して加えた。混合物を２５℃で１８時間攪拌し、減圧下で蒸発乾固させ、残 分なジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に還流温度で再溶解した。溶液（溶液Ａ ）を下記に説明する操作中ずっと暖め続けた。

Ｅｔ＊Ｎ（０，８０９ｇ、８ミリモル）を含有する乾燥Ｎ−メチルピロリジノン （３５ｍβ）中にＮ″ｌｌ−ホルミル−４−アミノ−４−デオキシプテロイル酸 セスキ水和物（０，７３２ｇ、２ミリモル）を懸濁させた液に、塩化を一ブチル オキシカルボニル（２７３ｍｇ、２ミリモル）を加え、周囲温度で１５分攪拌し た後に、溶液Ａを半分加えた。１０分後に、塩化ｔ−ブチルオキシカルボニルの 第２部分（１３７ｍｇ、１ミリモル）を加え、次いで２０分して溶液Ａを四分の −加えた。更に１０分した後に、同じ塩化カルボニルの第３部分（６８ｍｇ％０ ．５ミリモル）を加え、１５分して溶液Ａをへ分の−加えた。最後の順序を繰り 返した。１時間後にＭｅＯＨを加え。

全ての揮発性物質を減圧下で除いた。残分をＥｔｓＯ（１５０ｍｆｌ）と共に摩 砕しく　ｔｒｉｔｕｒａｔｅ　）　％不溶性物質を溶媒系（５：　４　：　Ｉ　 ＣＨＣＩｓ−ＭｅＯ）１−Ｎ）＋４０８）に吸収させ、充填したシリカゲルカラ ム（２９Ｘ３．Ｏｃｍ）にかけ、第２の溶媒系（１４：　６　：　ｌ　ＣＨＣＩ ｓ−ＭｅＯＨ−Ｎ）１４０Ｈ）で溶出した。　ＲｆＯ，４１（シリカゲル、１０ ：６：１ＣＨＣＩｓ−ＭｅＯ）１−ＮＨ４０）１）における主スポットを他の小 さいスポットと共に含有するフラクションをプールし、第２のカラム（３６Ｘ３ ．Ｏｃｍ）で再びクロマトグラフィーにかけ溶媒系（２８：　１２　：　Ｉ　Ｃ ＨＣＩｓ−ＭｅＯＨ−ＮＨ４０Ｈ）で溶離Ｌり、　Ｒｔ　Ｏ，３２（シリカゲル 、１０：６：　ＩＣＨＣＩｓ−ＭｅＯＨ−Ｎ）Ｉ４０）１）に単一スポットを含 有するプールシたフラクションを蒸発させて出発物質を生じた（１５５ｍｇ、回 収率２１％）、Ｒｒｏ、４１に単一スポットを含有するプールしたフラクション を蒸発させ、少量のＭｅＯＨに再溶解させ、それから静置して生成物の一部を晶 出させた。母液をＥｔｘＯに加えて生成物の残りを再沈殿させた； ４９４ｍ　ｇ　（４０％）：融点２３５℃（ｄｅｃ）；ＩＲ（ＫＢｒ）３４３０ ．１７１０　（イミドＣ＝Ｏ）、１６７０．１６４５　ｃ　ｍ　−’　６分析　 （Ｃａ、）ｌ＊５Ｎｓｏｓ・２Ｈ＊０）Ｃ％Ｈ％Ｎ。

Ｎ−（４−アミノ−４−デオキシプテロイル）−Ｎδα δ 一ヘミーフタロイルーし一オルニチン（Ｎ　−へミツタイルＡＰＡ−Ｌ−Ｏｒｎ ） 前述した生成物（４６９ｍｇ、０１７５７ミリモル）を０．２５Ｎ　ＮａＯＨに 溶解した溶液を２５℃に６．５時間保ち、ｐＨを１０％酢酸で４．３に１Ｉｉａ ｔ、た、生成したゲルを一晩攪拌し、遠心分離によって分離し、５：４：ＩＣＨ ＣＩｓ−ＭｅＯ）１−ＮＨ４０旧こ再溶解し、シリカゲルカラム（２６ｘ２．ｏ ｃｍ）にかけ、次いで１０　：　６　：　Ｉ　ＣＨＣＩｓ−ＭｅＯＨ−ＮＨ４Ｏ Ｈで溶離し、プールしたフラクションを蒸発乾固させ、残分をＥｔＯ）１から晶 出させた：１２２ｍｇ（収率２６％）０分析：　（ＣｓＪｘｔＮｅ−Ｏａ・Ｈ， Ｏ）　Ｃ％Ｈ％Ｎ、生成物は工大Ｃ式中、Ｒは下記： である）の構造を有する。

溶離剤としてアセトニトリル８％を含有する０、１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐ　Ｈ ７，８）を用いた分取ＨＰＬＣによって更に精製した生成物４０ｍｇ分から生物 検定サンプルを得た。

δ 本発明の範囲内でない他のＮ　−アシル−ＡＰＡ−Ｌ−Ｏｒｎ化合物を、Ｎ”− ホルミルＡＰＡ−Ｌ−Ｏｒｎに種々のカルボン酸無水物を縮合させ、次いでアル カリ性脱ホルミル化して調製した。該化合物は上記１式の構造において、Ｒが下 記を表わすものを示した：仁−丘−ＩＲ ２Ｃ０ＣＨ！ ３　Ｃ０ＣＨｉＣＨｚＣＯＯＨ ４ｃｏｃｓｏｓ ５　Ｃ０ＣｓＨ４Ｃ１４ ６Ｃ０Ｃ５ＨｓＣ１ｔ−３，４ Ｌ　１２１０／Ｒ８１ネズミ白血病細胞からＭＴＸアフイニテイクロマトグラフ ィーによって精製したＤＨＦＲの抑制をめた。ケンブトン（Ｋｅｍｐｔｏｎ）等 、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅａ＋、　、２５巻、４７５−４７７頁（１９８２年） の分光光度アセイ手順を用いてメトトレキセート、アミノプテリン及びＡＰＡ− Ｌ−ＯｒｎのＩＣｓ。を標準或は対照としてめ、かつまた該手順を用いて上記の 化合物２〜６、並びに下記の表におδ　′ いて化合物７として同定したＮ　−へミーフタロイルＡＰＡ−Ｌ−ＯｒｎのＩＣ ５ｏもめた。また、化合物の内のいくつかを、ネズミの肝臓から部分精製したＦ ＰＧＳの抑制剤としても試験した。結果を下記の表１にまとめる。

老ニー」− 酵素抑制 御Ｃｓ。

化合物　ＤＨＰＲ”　ＦＰＧＳ’ メトトレキセート （ＭＴＸ）　０．０２５　ｃ アミノプテリン （ＡＭＴ）　０．０３５　ｃ Ｉ　ＡＰＡ−Ｌ−Ｏｒｎ　Ｏ，０７２０，１５２０、０２８６８ ３０、０３２４４ ４０、０２７＞１００ ５　０、０２８　− ６　０、０４５　− ７　０、０５２ ａ　ジヒドロホレートレダクターゼ、Ｉｃｅ。濃度（μＭ）を３４０ｎｍにおい て分光光度法によって、ロゾウスキー等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏ ｌ、３５巻、３３２７−３３３３頁（１９８６年）に記載する通りにしてめた。

４および７についてのデータは具なる日における６つの具なる実験の平均である 。値の範囲は４について、０．０００５６−０．００１５ｇＭ１’あり、７につ いて、０．０００１１−０．００１４μＭであった。

ｂ　ホリルポリグルタメートシンセ・ターゼ、Ｋｉ値（μＭ）は、ネズミの肝臓 からの部分精製した酵素を用い、モーラン（Ｍｏｒａｎ　）等、Ｍｏ１．　Ｐｈ ａｒｍａｃｏｌ、、２７巻、１５６−１６６頁（１９８５年）に記載する通りに して、不変基質として５００μＭの葉酸或はＡＭＴの存在においてめた。ＡＰＡ −Ｌ−Ｏｒｎについて掲記するＫｉはロゾウスキー等、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅ ｍ、　、　２９巻、６５５−６６０頁（１９８６年）から引用する。

ｃＭＴＸ及びＡＭＴはネズミ肝臓ＦＰＧＳについての基質である：上記モーラン 等参照。

モスマン（Ｍｏｓｍａｎ）　、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈ、、６５巻、５５ −６３頁（１９８３年）の手順を用いて、牛（ｂｏｖｉｎｅ）胎児血清１０％を 含有するＲＰＭＩ　１６４０培地中で４８時間培養したＬ１２１０及びＬ１２１ ０／Ｒ８１ネズミ白血病細胞に対し同じ化合物群について細胞毒性アセイを行っ た。

加えて化合物の内の４つを、牛胎児血清１０％を含有するダルベツコの改質イー グル培地中で４８時間培養したヒトＣＥＭ及びＣＥＭ／ＭＴＸリンパ芽球に対し て試験した一ＩＣｉｏ（μＭ）値を表２の最後の２欄に報告し、ＭＴＸに対して 標準化した値をカッコ内に挙げる。

青−一旦 細胞生長抑制 （ＩＣ８゜（μＭ））ム 準化した値が１より小さい化合物はＭＴＸより効力があり、その逆は反対である 。

表２に示す化合物７の高い活性は、他の化合物がたとえ、全てが表１に示す通り に、ＤＨＦＲについて事実上同じ活性を示しても、全て活性が低かったことを考 えると、顕著であった。

また、化合物７がＣＥＭ／ＭＴＸ細胞に対してＭＴＸより１６倍効力があり、親 のＭＴＸ感応性細胞系統に対してＭＴＳに比べて１３倍効力が低いにすぎなかっ たことは注目するに足る。

標準或は対照としてのメトトレキセート及びメトトレキセートのγ−ｔ−ブチル エステル及びＮδ−へミーフタロイル−ＡＰＡ−Ｌ−Ｏｒｎを、ＭＴＸ感応性及 びＭＴＸ耐性ヒト鱗状癌細胞に対する生長抑制活性について・ロゾウスキー等、 　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４５巻、６２（１５−６２１２頁（１９８５年）に 記載されている手順に従って細胞単分子層を薬剤に連続して約２週間暴露させて 試験した。ＩＣｓ。

（対照に比べて細胞生長を５０％抑制するのに要するミクロ分子濃度）の結果を 、ＭＴＸの５ＣＣ１５細胞（１欄２及び２欄）或はＳＣＣ２５細胞（３欄及び４ 欄）に対するＩＣ５ｏに対して標準化した数（カッコ内）と共に表３に示す１Ｍ ＴＸ化合物及びＭＴＸのγ−ｔ−ブチルエステル化合物についての結果はロゾウ スキー等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４５巻、６２０５−６２１２頁（１９８５ 年）及びＪ、　Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、、２８巻、６６０−６６７頁（１９８５年） からそれぞれ引用する。

乏−一且 細胞及びＩＣ１ｏ（μＭ） 表３中の２つの細胞系統のＭＴＸ耐性のレベルはＬ１２１０／Ｒ８１細胞或はＣ ＥＭ／ＭＴＸ細胞のものよりも低いが、ヒトにおけるＭＴＸ服量反応の極めて高 い性質が、腫瘍が患者におけるこのレベルの耐性に達する際に、ＭＴＸ投与量の それ以上の増大が可能でないことから、これらの試験結果は意味がある０表３に 示す通りに化合物７は母のＳＣＣ１５及びＳＣＣ２５細胞に対してＭＴＸよりも １０〜３０倍効力があったが、ｔＢＭＴＸはＭＴＸに比べて少なくとも１０倍効 力が低かっり、ソノ上、ｔＢＭＴＸはＭＴＸ耐性Ｓ　ＣＣ１５／Ｒ１及びＳ　Ｃ Ｃ２５／Ｒ１サプラインに対してＭＴＸに比べて少なくとも３０倍効力が低かり たが、両方の耐性細胞に対する化合物７の効力は母細胞に対するＭＴＸの効力を 越える。

国際調査報告

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．下記の構造を有する化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで、Ｒは−ＯＣ−Ａｒ−ＣＯＯＲ１（Ａｒはフェニレン或は追加の置換基と して塩基、ヒドロキシ、或は炭素原子１〜５を有する低級アルコキシのみを含有 するフェニレンであり、Ｒ１は水素或は炭素原子１〜５を有する低級アルキルで ある）である。
2. ２．Ｒが下記： ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、Ｒ１が水素或は炭素原子１〜５を有する低級アルキルである請求の範囲 第１項記載の化合物。
3. ３．Ｒがヘミフタロイルである請求の範囲第２項記載の化合物。
4. ４．本質的に、製薬的に許容し得る非毒性キャリヤーと有効量の請求の範囲第１ 項記載の化合物とから成る、メトトレキセート耐性細胞の生長に対する活性を示 す治療組成物。
5. ５．本質的に、製薬的に許容し得る非毒性キャリヤーと有効量の請求の範囲第２ 項記載の化合物とから成る、メトトレキセート耐性細胞の生長に対する活性を示 す治療組成物。
6. ６．本質的に、製薬的に許容し得る非毒性キャリヤーと有効量の請求の範囲第３ 項記載の化合物とから成る、メトトレキセート耐性細胞の生長に対する活性を示 す治療組成物。